CN111500595B

CN111500595B - 一种木麻黄基因CeDREB1及其应用

Info

Publication number: CN111500595B
Application number: CN202010365496.8A
Authority: CN
Inventors: 张世柯; 刘楠; 罗鸣; 周雯雯; 吴海鹏
Original assignee: South China Botanical Garden of CAS
Current assignee: South China Botanical Garden of CAS
Priority date: 2020-04-30
Filing date: 2020-04-30
Publication date: 2020-12-25
Anticipated expiration: 2040-04-30
Also published as: CN111500595A

Abstract

本发明提供了一种木麻黄基因CeDREB1及其应用，所述木麻黄抗旱基因CeDREB1的cDNA序列如SEQ ID NO.1所示，或为与SEQ ID NO.1完全互补配对的序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的序列。通过基因克隆进行功能研究发现，上述CeDREB1基因能够提高生物体的抗旱能力，可广泛应用于提高生物体的性抗旱性，包括构建抗旱酿酒酵母工程菌株，培育抗旱的植物品种，提高植物的抗旱能力等，在微生物和农业领域具有广阔的应用价值。

Description

一种木麻黄基因CeDREB1及其应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种木麻黄基因CeDREB1及其应用。

背景技术

植物长期生长于固定位置，比较容易受到逆境胁迫。非生物逆境胁迫是影响植物和农作物的生长和生产力的有害因素，主要包括干旱胁迫、水分胁迫、盐胁迫和重金属胁迫等。干旱胁迫和盐胁迫是常见的胁迫类型，失水会造成植物细胞渗透压改变、质膜过氧化细胞结构被破坏，导致植物生理活动受影响，抑制植物的生长。全球气候变化导致极端天气频发，农作物将面临环境胁迫的潜在威胁，增加农作物产量对于保障粮食安全尤为重要。研发抗逆性强、产量高的农作物品种可以通过转基因育种的手段实现。极端环境具有丰富的植物资源，适生植物物种经过对逆境的长期适应与进化获得了较强的抗逆性。研究干旱、高盐环境中适生植物的抗逆功能基因，并进一步挖掘其应用潜力，对于培育抗旱的农作物新品种具有重要意义。

木麻黄是热带和亚热带的先锋物种，适应性强，能够在强光、干旱、风沙和盐碱环境下生长。木麻黄是热带珊瑚岛植被恢复的工具种，可用于防风固沙和绿地构建。木麻黄也是药用植物，其树皮和枝叶可作药材，具有一定的药用价值。目前，木麻黄重要抗逆基因还有待挖掘和开发。

DREB(Dehydration Responsive Element Binding)是一类重要的转录因子，主要参与低温和干旱信号转导途径，能够与下游基因的启动子结合从而调控其基因表达。多项研究表明，DREB基因的表达受低温、干旱和高盐胁迫诱导。

发明内容

基于此，本发明提供一种木麻黄基因CeDREB1及其应用，通过基因克隆进行功能研究发现所述CeDREB1基因能够提高生物体的抗旱能力，可用于提高植物的抗旱性能，培育抗旱的植物品种，以及提高酵母菌株的抗旱能力。

具体技术方案为：

一种木麻黄抗旱基因CeDREB1，所述木麻黄抗旱基因CeDREB1的cDNA序列如SEQ IDNO.1所示，或为与SEQ ID NO.1完全互补配对的序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的序列。

本发明还提供了一种木麻黄抗旱基因CeDREB1的表达蛋白，所述木麻黄抗旱基因CeDREB1的表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了上述木麻黄抗旱基因CeDREB1和上述木麻黄抗旱基因CeDREB1的表达蛋白在提高植物抗旱性能中的应用。

本发明还提供了上述木麻黄抗旱基因CeDREB1和上述木麻黄抗旱基因CeDREB1的表达蛋白在植物育种中提高植物性抗旱性中的应用。

在其中一些实施例中，所述植物为水稻、玉米、大豆。

本发明还提供了一种木麻黄抗旱基因CeDREB1重组表达载体。

具体技术方案为：

一种木麻黄抗旱基因CeDREB1重组表达载体，所述重组表达载体上插入有上述木麻黄抗旱基因CeDREB1。

上述木麻黄抗旱基因CeDREB1重组表达载体在提高植物抗旱性能中的应用。

在其中一些实施例中，所述重组表达载体为酿酒酵母重组表达载体。

在其中一些实施例中，优选所述重组表达载体为pYES-DEST52-CeDREB1。

上述酿酒酵母重组表达载体在提高酵母菌株抗旱性能中的应用。

在其中一些实施例中，所述重组表达载体为pCAMBIA1300-CeDREB1。

在其中一些实施例中，在所述pCAMBIA1300-CeDREB1重组表达载体中，控制所述CeDREB1基因表达的启动子为UBQ启动子。

上述pCAMBIA1300-CeDREB1重组表达载体在提高植物抗旱性能中的应用。

本发明还提供了一种提高植物抗旱性能的方法。

具体技术方案为：

一种提高植物抗旱性能的方法，所述方法为将上述木麻黄抗旱基因CeDREB1转入植物中，并使其表达，得到抗旱植物。

在其中一些实施例中，所述提高植物抗旱性能的方法包括以下步骤：

(1)将上述木麻黄抗旱基因CeDREB1的cDNA序列插入pCAMBIA1300载体中，得到pCAMBIA1300-CeDREB1重组表达载体；

(2)将步骤(1)中的pCAMBIA1300-CeDREB1重组表达载体转化农杆菌，筛选阳性农杆菌；

(3)将步骤(2)中的阳性农杆菌侵染植物，得到抗旱植物。

在其中一些实施例中，通过以下方法获得所述木麻黄抗旱基因CeDREB1的cDNA：

(1)取木麻黄新鲜根和叶片，提取得到RNA；

(2)将步骤(1)获得的RNA进行逆转录，得到cDNA；

(3)以步骤(2)获得的cDNA为模板，利用如SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ IDNO.4所示的下游引物进行PCR扩增，得到木麻黄抗旱基因CeDREB1的cDNA。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种木麻黄抗旱基因CeDREB1，并构建了所述CeDREB1基因的重组表达载体。发明人通过基因克隆进行功能研究发现所述CeDREB1基因能够提高生物体的抗旱能力。将上述CeDREB1基因的重组表达载体转化进入酿酒酵母中，通过半乳糖诱导该基因在酵母中的超表达，能够在高盐和过氧化氢胁迫处理下，提高酵母对氧化胁迫的耐受性；将上述CeDREB1基因的重组表达载体转入植物中，使其在植物中过表达，可以有效提高植物的抗旱能力。本发明提供的CeDREB1基因可广泛应用于提高生物体的抗旱能力，包括构建抗旱酿酒酵母工程菌株，培育抗旱的植物品种，提高植物的抗旱能力等，在微生物和农业领域具有广阔的应用价值。

附图说明

图1为CeDREB1基因PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果图。

图2为实施例2构建的pYES-DEST52-CeDREB1重组表达载体结构示意图。

图3为实施例3构建的pCAMBIA1300-CeDREB1重组表达载体的结构示意图。

图4为H₂O₂敏感型酵母菌株BY4741对氧化胁迫的耐受性实验结果。

图5为H₂O₂敏感型酵母菌株yap1对氧化胁迫的耐受性实验结果。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

本发明所述木麻黄抗旱基因CeDREB1的cDNA序列如SEQ ID NO.1所示，或为与SEQID NO.1完全互补配对的序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的序列。

SEQ ID NO.1：

ATGGAGTTCTCTCAGTATTCCTCGGAATCCGAGTGCGGCAGTGCTCGAGCTGTGCACTTGTCGGATGAGGAGATTCTACTCGCCTCTCGGAATCCCAAGAAACGGGCGGGAAGGAAGAAGTTCAAGGAGACCAGGCACCCGGTGTACCGAGGAGTGAGGAGGAGGAACTCCGACAAGTGGGTTTGCGAGGTGCGCGAGCCCAGCAAGCAGGCTAGGATATGGCTTGGGACGTTCCCAACTCCTGAGATGGCTGCCCGAGCTCACGACGTCGCAGCGATTGCACTGCGAGGCCGTTCCGCATGCCTCAACTTCGCAGAATCCGCGTGGCTGCAAGTGCCCACCTCGGGTGACCCCAAGGAGATTCAGCGAATGGCAGCCGAGGCAGCAGAGAAGTTTCGGCCAGAGGAAGCAAAGGTGGAGGAGAAGAGAGAATCGCCGGAAAGCGTGTTCTTCATGGACGAGGAGGCGGTCTTCGGCATGCCAGGGCTCCTTTCAAATATGGCGGAGGGGATGCTCCTGCCTCCTCCTTACTATATTGGAGATGATGGAAGTGGTGGAGATGACAAAGAAGCCAGCGCCGACGTTTCACTGTGGAGTTTTTCCATTTGA

应当理解，考虑到密码子的简并性，在不改变氨基酸序列的前提下，对上述cDNA的碱基序列进行修改，也属于本发明的保护范围。

本发明所述木麻黄抗旱基因CeDREB1的表达蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：

MEFSQYSSESECGSARAVHLSDEEILLASRNPKKRAGRKKFKETRHPVYRGVRRRNSDKWVCEVREPSKQARIWLGTFPTPEMAARAHDVAAIALRGRSACLNFAESAWLQVPTSGDPKEIQRMAAEAAEKFRPEEAKVEEKRESPESVFFMDEEAVFGMPGLLSNMAEGMLLPPPYYIGDDGSGGDDKEASADVSLWSFSI*(*表示终止)

实施例1一种木麻黄抗旱基因CeDREB1及其表达蛋白

本实施例一种木麻黄抗旱基因CeDREB1，其cDNA序列如SEQ ID NO.1所示，或为与SEQ ID NO.1完全互补配对的序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的序列。

上述木麻黄抗旱基因CeDREB1的表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

上述木麻黄抗旱基因CeDREB1的cDNA通过以下方法获得：

1.木麻黄RNA的提取

使用北京华越洋生物科技有限公司的Plant RNA Kit，超快型植物RNA提取试剂盒提取木麻黄RNA。

(1)称取木麻黄新鲜根和叶片100mg后迅速放入研钵，加入液氮研磨法破碎。

(2)将研磨后的植物组织放入离心管并加入1mL细胞裂解液。将匀浆物转移至干净的1.5mL离心管中。

(3)在离心管中加入300μL去蛋白液和200μL氯仿，振荡器振荡30s混匀。室温12000g离心5min，将上清液转移至新的干净的1.5mL离心管。

(4)加入等体积的漂洗液，充分颠倒混匀。将混合物加入离心吸附柱中，12000g室温离心1min，弃穿透液。

(5)加500μL洗柱液，12000g室温离心1min，弃穿透液。加入500μL洗柱液，重复一边。然后再室温12000g离心1min除去残留液体。

(6)将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50μL RNA洗脱液，室温静置3-5min。

(7)12000g室温离心1min，离心管中即为木麻黄RNA样品，存放于-80℃待用。

2.将步骤1获得的RNA进行逆转录，得到cDNA

使用Diamond公司的Super M-MuLV逆转录酶对步骤1获得的木麻黄RNA进行逆转录。

(1)在无菌的RNase-free离心管中配置以下体系：2μL Oligo(dT)18 Primer，2μLdNTP Mixture(10mM)，1.5μL木麻黄总RNA，最后加RNase free ddH₂O定容至10μL。

(2)65℃保温5min后迅速置于冰上1min以上。

(3)离心数秒使RNA的变性溶液聚集于离心管底部。

(4)在上述离心管中配制反转录反应液：RNA变性溶液10μL，4μL的5×Super MMLVBuffer，2μL的10×Solution，1μL的RNase Inhibitor(40U/μL),1μL的Super M-MuLV(200U/μL)，加RNase free ddH₂O定容至20μL。

(5)轻弹离心管，37℃保温60min。

(6)80℃保温15min后冰上冷却，得到cDNA。

3.木麻黄DREB1 cDNA的获得

以步骤2获得的cDNA为模板，利用如SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物进行PCR扩增。

使用TOYOBO的高成功率PCR酶KOD FX进行PCR。

(1)设计引物：

SEQ ID NO.3：5’-GCTTGGTACCGAGCTCGGATGGAGTTCTCTCAGTATTCCTCGGAATC-3’

SEQ ID NO.4：5’-TGCAAAGTGACACCTCAAAAAGGTAAACTCTTAAGACGTCTATAGGT-3’

(2)PCR反应液的配制

在无菌的DNase-free离心管中配置以下体系：25μL的2×PCR buffer for KODFX,10μL的dNTPs(2mM)，1.5μL的引物1(10pmol/μL),1.5μL的引物2(10pmol/μL)，0.2μL的cDNA，1μL的KOD FX(1.0U/μL)，加distilled water定容至50μL。

(3)设置PCR程序

步骤1：预热，94℃，2min；

步骤2：变性，98℃，10sec；

步骤3：退火，55℃，30sec；

步骤4：延伸，68℃，2min；

步骤5：重复步骤2-4，40个循环。

对上述PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，包括具体包括以下步骤：

(1)配制琼脂糖凝胶：向50mL的TAE(1×)加入1g琼脂糖，放入微波炉加热溶解，向溶解后的溶液中加入2μL的溴化乙啶(EB)，倒入平板冷却30min。

(2)将冷却后的琼脂糖凝胶放入电泳槽，将PCR产物和DNA marker点入槽内，进行电泳。

(3)观察电泳结果，切条带后胶回收。

琼脂糖凝胶电泳检测结果如图1所示，成功扩增得到木麻黄抗旱基因CeDREB1。

使用生工生物工程股份有限公司胶回收试剂盒进行胶回收，具体步骤如下:

(1)从琼脂糖凝胶中切下含有CeDREB1片段的胶块，称重。

(2)每100mg胶块加入600μL的Buffer B2，50℃水浴至琼脂糖凝胶溶解。

(3)将溶胶液移入吸附柱中，8000g离心30s，倒掉收集管中的液体。

(4)加入500μL Wash Solution，9000g离心30s，倒掉收集管中液体。

(5)重复步骤4一次。

(6)空吸附柱于9000g离心1min。

(7)将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入25μL ElutionBuffer，室温静置1min后，离心1min，保存管中DNA溶液。

实施例2一种CeDREB1基因的重组表达载体pYES-DEST52-CeDREB1

本实施例一种CeDREB1基因的重组表达载体，其结构示意图如图2所示，通过将实施例1所述木麻黄抗旱基因CeDREB1插入pYES-DEST52酵母表达载体中获得，具体构建方法包括以下步骤：

1.pYES-DEST52酶切载体的获得

使用Thermo Scientific公司的内切酶和缓冲液

(1)配制pYES-DEST52酶切反应液：5.8μL的酵母质粒，1μL的BamHI，1μL的EcoRI，5μL的K buffer(1×)，加distilled water定容至50μL。

(2)将酶切反应液放置于37℃水浴锅，水浴3h。

2.木麻黄CeDREB1基因连接至酶切后的pYES-DEST52载体。

使用生工生物工程股份有限公司Ready-to-Use Seamless Cloning Kit连接。

(1)在冰上配制Infusion体系：1μL的实施例1胶回收获得的DNA溶液，1μL的pYES-DEST52载体，2.5μL的Seamless Cloning Master Mix(2x)。

(2)将配制的Infusion体系放入50℃水浴锅，水浴20min。

(3)水浴完成后，冰浴2min。

3.将步骤2获得的Infusion产物导入大肠杆菌(DH5α)。

使用大肠杆菌感受态菌株DH5α。

(1)将Infusion产物加入DH5α。

(2)冰浴30min。

(3)42℃，水浴1min。

(4)冰浴2min。

(5)在超净工作台内加LB液体培养基600μL。

(6)设置摇床温度37℃，振荡培养45min。

(7)取出培养完成的DH5α，离心机10000g，离心1min。

(8)在超净工作台中弃上清液(移液枪抽取，剩20-50μL)。

(9)重悬，用移液器吹打至底部无沉淀。

(10)全部涂于羧苄青霉素(cab)抗性(1μL/mL)培养基中。

(11)待培养基吹干后，于37℃培养箱过夜培养。

4.带有CeDREB1的酵母表达载体pYES-DEST52-CeDREB1质粒的获得。

从抗性培养基挑取单菌落，在1.5mL无菌离心管中加入600μL LB液体培养基和6μLcab抗生素，将单菌落加入离心管于37℃摇床过夜培养。

使用生工SanPrep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒提取质粒。

(1)将过夜培养的菌液于8000g离心2min，收集菌体弃尽培养基。

(2)向沉淀中加入250μL Buffer P1，彻底悬浮菌体。

(3)加入250μL Buffer P2，立即温和颠倒5-10次混匀，室温放置2-4min。

(4)加入350μL Buffer P3，立即温和颠倒5-10次混匀。

(5)12000g离心5-10min，将上清液移入吸附柱，8000g离心30s，倒掉收集管中液体。

(6)加入500μL Buffer DW1，9000g离心30s，倒掉收集管中液体。

(7)加入500μL Wash Solution，9000g离心30s，倒掉收集管中液体。

(8)重复步骤7一次。

(9)空吸附柱于9000g离心1min。

(10)将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入50μL ElutionBuffer，室温静置1min，9000g离心1min，保存管中DNA溶液。

(11)将获得的质粒送测序公司测序。测序由广州擎科生物公司完成。

测序结果正确的质粒即为pYES-DEST52-CeDREB1重组表达载体。

实施例3一种CeDREB1基因的重组表达载体pCAMBIA1300-CeDREB1

本实施例一种CeDREB1基因的重组表达载体，其结构示意图如图3所示，通过将实施例1所述木麻黄抗旱基因CeDREB1插入pCAMBIA1300质粒中获得，具体包括以下步骤：将实施例1中胶回收获得的DNA溶液和pCAMBIA1300载体通过Infusion体系进行反应，然后将Infusion产物导入感受态细胞中，挑取阳性单菌落，扩大培养，提取质粒，将获得的质粒送测序公司测序，测序由广州擎科生物公司完成，测序结果正确的质粒即为CeDREB1基因的重组表达载体pCAMBIA1300-CeDREB1。

实施例4CeDREB1基因在酵母中超表达可提高酵母对氧化胁迫的耐受性

将测序结果正确的pYES-DEST52-CeDREB1重组质粒导入H₂O₂敏感型菌株BY4741和yap1，将空pYES-DEST52载体质粒导入野生型BY4741酵母株系作为对照。

(1)分别在加入20mL液体YPD培养基的小锥形瓶中摇BY4741和yap1单菌落，28℃摇过夜作为母液。

(2)取部分母液至装有20mL液体YPD培养基中，调节其初始OD₆₀₀值为02-0.3。28℃摇1.5-2h至OD₆₀₀为0.4-0.6。

(3)将锥形瓶中的酵母分装至15mL的离心管，6000g离心5min，弃掉上清液后用Li盐重悬。

(4)向重悬后的试管加入10μL的鲤鱼精DNA，4μL的空pYES-DEST52载体质粒(对照组)或pYES-DEST52-CeDREB1重组质粒(实验组)，100μL感受态细胞和600μL的PEG。混匀后在28℃摇床培养30min。

(5)42℃热激15min，4℃冷却2min，室温条件下6000g离心30s，弃上清液，吸干PEG,随后用70μL 1×TE重悬，涂至加入相应氨基酸的固体YNB培养基(每100mlYNB中加入组氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸各830μL)。

(6)将培养基放至28℃烘箱培养3天，挑取单菌落至装有1ml YNB液体培养基的离心管中。

(7)将装有菌的离心管放至28℃烘箱摇过夜，调至相同OD₆₀₀后。分别将菌液稀释为10×，100×和1000×，点至H₂O₂浓度为0.75mM，1mM和1.5mM的YNB固体培养基(每100mlYNB中加入组氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸各830μL)上，于37℃烘箱培养一周。

如图4所示，在无H₂O₂添加的YNB培养基上，含有pYES-DEST52-CeDREB1重组质粒(图4中用CeDREB1表示)与含有空载pYES-DEST52质粒(图4中用pYES2表示)的BY4741不同浓度菌液生长情况基本一致；0.75mM H₂O₂条件下，二者生长情况相近；但是在1mM和1.5mM H₂O₂浓度的YNB培养基上，导入pYES-DEST52-CeDREB1重组质粒的BY4741生长好于导入空载体pYES-DEST52质粒的BY4741。

如图5所示，将pYES-DEST52-CeDREB1重组质粒(图5中用CeDREB1表示)导入H₂O₂敏感型酵母yap 1中，将空载体pYES-DEST52质粒(图5中用pYES2表示)导入BY4741中。在不添加H₂O₂的YNB培养基上二者长势基本一致。在0.75mM H₂O₂条件下，含有pYES-DEST52-CeDREB1重组质粒的H₂O₂敏感型酵母yap 1低浓度菌液生长情况好于含有空载体pYES-DEST52质粒的BY4741。在1mM和1.5mM H₂O₂浓度的YNB培养基上，稀释后的含有pYES-DEST52-CeDREB1重组质粒的yap 1菌液生长好于含有空载体pYES-DEST52质粒的BY4741。

上述实验结果表明，pYES-DEST52-CeDREB1重组表达质粒能够提高酵母的抗氧化胁迫能力，说明pYES-DEST52-CeDREB1重组表达质粒能明显提高酵母的抗旱性能。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院华南植物园

<120> 一种木麻黄基因CeDREB1及其应用

<140> 202010365496.8

<141> 2020-04-30

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 609

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 1

atggagttct ctcagtattc ctcggaatcc gagtgcggca gtgctcgagc tgtgcacttg 60

tcggatgagg agattctact cgcctctcgg aatcccaaga aacgggcggg aaggaagaag 120

ttcaaggaga ccaggcaccc ggtgtaccga ggagtgagga ggaggaactc cgacaagtgg 180

gtttgcgagg tgcgcgagcc cagcaagcag gctaggatat ggcttgggac gttcccaact 240

cctgagatgg ctgcccgagc tcacgacgtc gcagcgattg cactgcgagg ccgttccgca 300

tgcctcaact tcgcagaatc cgcgtggctg caagtgccca cctcgggtga ccccaaggag 360

attcagcgaa tggcagccga ggcagcagag aagtttcggc cagaggaagc aaaggtggag 420

gagaagagag aatcgccgga aagcgtgttc ttcatggacg aggaggcggt cttcggcatg 480

ccagggctcc tttcaaatat ggcggagggg atgctcctgc ctcctcctta ctatattgga 540

gatgatggaa gtggtggaga tgacaaagaa gccagcgccg acgtttcact gtggagtttt 600

tccatttga 609

<210> 2

<211> 202

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 2

Met Glu Phe Ser Gln Tyr Ser Ser Glu Ser Glu Cys Gly Ser Ala Arg

1 5 10 15

Ala Val His Leu Ser Asp Glu Glu Ile Leu Leu Ala Ser Arg Asn Pro

20 25 30

Lys Lys Arg Ala Gly Arg Lys Lys Phe Lys Glu Thr Arg His Pro Val

35 40 45

Tyr Arg Gly Val Arg Arg Arg Asn Ser Asp Lys Trp Val Cys Glu Val

50 55 60

Arg Glu Pro Ser Lys Gln Ala Arg Ile Trp Leu Gly Thr Phe Pro Thr

65 70 75 80

Pro Glu Met Ala Ala Arg Ala His Asp Val Ala Ala Ile Ala Leu Arg

85 90 95

Gly Arg Ser Ala Cys Leu Asn Phe Ala Glu Ser Ala Trp Leu Gln Val

100 105 110

Pro Thr Ser Gly Asp Pro Lys Glu Ile Gln Arg Met Ala Ala Glu Ala

115 120 125

Ala Glu Lys Phe Arg Pro Glu Glu Ala Lys Val Glu Glu Lys Arg Glu

130 135 140

Ser Pro Glu Ser Val Phe Phe Met Asp Glu Glu Ala Val Phe Gly Met

145 150 155 160

Pro Gly Leu Leu Ser Asn Met Ala Glu Gly Met Leu Leu Pro Pro Pro

165 170 175

Tyr Tyr Ile Gly Asp Asp Gly Ser Gly Gly Asp Asp Lys Glu Ala Ser

180 185 190

Ala Asp Val Ser Leu Trp Ser Phe Ser Ile

195 200

<210> 3

<211> 47

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 3

gcttggtacc gagctcggat ggagttctct cagtattcct cggaatc 47

<210> 4

<211> 47

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 4

tggatatctg cagaattctc aaatggaaaa actccacagt gaaacgt 47

Claims

1.一种木麻黄基因CeDREB1，其特征在于，所述木麻黄基因CeDREB1的cDNA序列如SEQID NO.1所示，或所述木麻黄基因CeDREB1为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

2.一种木麻黄基因CeDREB1的表达蛋白，其特征在于，所述木麻黄基因CeDREB1的表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1所述木麻黄基因CeDREB1或权利要求2所述木麻黄基因CeDREB1的表达蛋白在提高酿酒酵母细胞抗氧化胁迫能力中的应用。

4.一种木麻黄基因CeDREB1重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体上插入有如权利要求1所述的木麻黄基因CeDREB1。

5.根据权利要求4所述的木麻黄基因CeDREB1重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为pCAMBIA1300-CeDREB1。

6.权利要求4或5所述的木麻黄基因CeDREB1重组表达载体在提高酿酒酵母菌株抗氧化胁迫能力中的应用。

7.一种酿酒酵母工程菌株，其特征在于，转入有权利要求4或5所述的木麻黄基因CeDREB1重组表达载体。