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CN111487411B - Ceacam1多肽的新应用 - Google Patents

Ceacam1多肽的新应用 Download PDF

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CN111487411B CN201910086727.9A CN201910086727A CN111487411B CN 111487411 B CN111487411 B CN 111487411B CN 201910086727 A CN201910086727 A CN 201910086727A CN 111487411 B CN111487411 B CN 111487411B
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Abstract

本发明提供一种CEACAM1多肽的新应用。CEACAM1多肽作为标准品在制备用于定量检测肝癌标志物的试剂盒中的用途，所述CEACAM1多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明的发明人经过长期研究及大量试验发现，CEACAM1的含量变化对肝癌的状态具有明显的相关性，将其作为标志物并用CEACAM1制备检测CEACAM1含量的试剂盒，能够准确辅助诊断肝癌的存在、分期和转移。

Description

CEACAM1多肽的新应用
技术领域
本发明涉及肝癌的检测领域，并具体涉及一种CEACAM1多肽的新应用。
背景技术
人们谈癌色变。21世纪以来，恶性肿瘤对人类健康的威胁已日趋严重。其致死率仅次于心脑血管疾病，位居第三。肿瘤患者死亡率高的主要原因是不能早期诊断，早期诊断与早期治疗是防治肿瘤与降低死亡率的最有效方法。
随着肿瘤细胞的发生，肿瘤患者体内某些蛋白质会发生变化，或产生新的与肿瘤关联的异常蛋白。这些能反应肿瘤存在的化学类物质人们总称为肿瘤标志物。由于肿瘤标志物或不存在于正常成人组织而仅见于肿瘤组织，或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量，它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质，因此通过对这些异常的蛋白质的检测不仅可以用来诊断肿瘤的发生也可以用来监控药物对肿瘤的治疗进展，对肿瘤的诊治将起到重要作用。用于临床诊断的肿瘤标志物包括癌胚抗原、酶、激素、糖蛋白、癌基因和细胞表面肿瘤抗原等6大类。美国FDA批准了以下血清肿瘤标志物用于肿瘤的辅助诊断：甲胎蛋白(AFP)，癌胚抗原(CEA)，癌抗原CA125，癌抗原CA19-9，癌抗原CA153，前列腺特异性抗原(fPSA,tPSA)，甲状腺球蛋白(Thyroglobulin)，β人绒毛膜促性腺激素(HCGb)，和人附睾分泌蛋白4(HE4)。另外其他常用于临床诊断的肿瘤标志物还包括神经原特异性烯醇化酶(NSE)，降钙素(PCT)，铁结合蛋白(Ferritin)，β2-微球蛋白(beta 2-Microglobin)，胃蛋白酶原(Pepsinogen 1,2)，和催乳素(Prolactin)等。
整体来讲，肿瘤标志物是肿瘤细胞在癌变过程中由于基因的表达水平的变化而生成或减少的抗原和其他生物活性物质，可用于肿瘤的早期诊断、分期、监测肿瘤进程，和评价药物的治疗效果(ASCO，1996)。它会对肿瘤的临床治疗带来巨大的影响，尤其当它能够在临床病症出现之前被检测到，或者可以用于治疗效果的实时检测时。目前，为了满足肿瘤的临床诊断和治疗的需求，肿瘤标志物的研发亟待加速。
但是，目前用于早期诊断的肿瘤标志物，大多由于缺乏灵敏度和特异性而不能在体检中广泛应用。对于肝癌，甲胎蛋白和超声波检查是普遍采用的诊断高危病人的方式，并且确实显著提高了肝癌病人的生存率，但灵敏度比较低；肿瘤抗原CA125有更高的灵敏度，但却缺乏特异性。同样地，用于乳腺癌检测的血液肿瘤标志物CA153因灵敏度低在早期诊断中几乎没用。因此，肿瘤的早期诊断、以及良性和恶性肿瘤的区分仍然是一个临床难题，需要新的技术和方法来发现新的肿瘤标志物和提高肿瘤标志物检测的灵敏度和可信度。
在恶性肿瘤的诊断中，癌胚抗原(CEA)是重要的指标之一，在人类部分肿瘤中均有明显的高表达，如结肠癌、乳腺癌、胃癌和肺癌等，尤其是在结肠癌患者血清学的检测已用于临床，并被证实CEA表达的升高是结直肠癌复发的重要标志。CEA家族成员均与黏附蛋白的功能相关，因此CEA家族又被学者们命名为癌胚抗原相关黏附分子。目前家族中人们主要关注的是CEACAM1和CEACAM6的作用。
癌胚抗原相关细胞黏附分子1(carcinoembryonic antigen-related celladhesion molecule 1，CEACAM1)是一种跨膜糖蛋白，与BGP1(一种胆汁糖蛋白，与癌胚抗原的抗体有交叉反应)高度同源，最初由Ocklind和Obrink在研究papainsolubilized质膜成分对细胞膜表面蛋白抗体细胞聚集抑制功能中和作用时发现。CEACAM1在一些肿瘤中能促进恶性肿瘤的进展和迁移，这提示其在不同肿瘤细胞类型中的作用完全不同。Hokari等研究显示了CEACAM1在HepG2细胞生长中的二元性作用：在悬浮液中其通过细胞间黏附加快肿瘤细胞生长，在单层细胞培养中则抑制肿瘤生长。目前，已有现有技术公开了CEACAM1作为肿瘤标志物的用途，例如：现有技术公开的一种快速检测膀胱癌的试纸，该技术方案公开了将CEACAM1作为膀胱癌标志物的用途。
但是，目前还未有报道CEACAM1用于肝癌检测。
发明内容
基于此，本发明的主要目的是提供CEACAM1多肽作为标准品在制备用于定量检测肝癌标志物的试剂盒中的用途。
本发明的主要目的是通过以下技术方案实现的：
CEACAM1多肽作为标准品在制备用于定量检测肝癌标志物的试剂盒中的用途，所述CEACAM1多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明的另一目的是提供一种用于CEACAM1检测的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
本发明的再一目的是提供上述的多肽作为标准品在检测待测样本所含CEACAM1中的应用。
在其中一个实施例中，所述的待测样本为血液样本。
在其中一个实施例中，所述的检测采用酶联免疫法检测。
在其中一个实施例中，所述的检测采用免疫印迹法检测。
本发明的又一目的是提供一种CEACAM1ELISA检测试剂盒，所述的试剂盒包含上述的多肽的标准品。
本发明的还一目的是提供一种CEACAM1的ELISA检测方法，所述检测方法包括包被、封闭、加抗原、加酶标二抗、加底物显色和终止的步骤；其中：所述的加抗原步骤包括：将待测样本、CEACAM1标准品溶液分别加入酶标板孔，所述的标准品包括上述的多肽。
与现有技术相比，本发明具备如下有益效果：
本发明的发明人经过长期研究及大量试验发现，CEACAM1的含量变化对肝癌的状态具有明显的相关性，将其作为标志物并用CEACAM1制备检测CEACAM1含量的试剂盒，能够准确辅助诊断肝癌的存在、分期和转移。
发明人发现传统的技术方案通常以CEACAM1原核重组蛋白作为标准品，该标准品不易与特异性抗体结合，导致检测的可信度受到负面影响。为克服该缺陷，发明人进一步提供一种SEQ ID No.2所示的多肽，该多肽是获取SEQ ID No.1的第497位氨基酸至第515位氨基酸的序列并将第506位脯氨酸(Pro)突变为赖氨酸(Lys)制备而成。以该SEQ ID No.2所示的多肽作为标准品用于CEACAM1检测时，很容易与CEACAM1的抗体发生特异性免疫结合，确保检测结果的准确度，提升检测可信度。并且，该SEQ ID No.2所示的多肽的肽链结构非常稳定，不易被降解，确保标准品质量，为获得可信度高的检测结果进一步提供了保障；并且该多肽的亲水性也比较好，克服了国内生产商研发的重组蛋白溶解性低导致不利于试剂盒的制备的缺陷。
附图说明
图1为实施例1筛选操作所得扫描图。
图2为实施例1筛选操作所得结果的聚类分析结果图。
图3为实施例1筛选操作所得结果的火山图。
图4、图5、图6为实施例2反向蛋白芯片操作所得结果图。
图7为实施例2筛选的CEACAM1、Nidogen1在健康人与肝癌患者中的含量比较图。
图8为实施例4分别采用本发明SEQ ID No.2所示的标准品与市购标准品进行样品检测的结果。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
从国外购买的CEACAM1重组蛋白价格昂贵，不利于进一步生产开发。而国内生产商研发的重组蛋白溶解性低，不利于试剂盒的制备。本发明的提供的CEACAM1多肽，包含SEQID No.1的氨基酸序列或由SEQ ID No.1的氨基酸序列组成，以及其衍生的氨基酸序列，可用于本试剂盒中的标准品。
在本申请中，术语“本发明的多肽”指的是血浆或血清中的CEACAM1，SEQ ID No.2的氨基酸序列或由SEQ ID No.1的氨基酸序列，以及其衍生的氨基酸序列组成。优选地，术语“本发明的多肽”在本申请中指的是由SEQ ID No.2序列衍生组成的多肽。在本申请中，术语“血浆或血清中的CEACAM1”等价地指存在于血液中的非细胞内和细胞表面的CEACAM1蛋白，它可单独游离存在，也可以与其他血液中的细胞外蛋白相结合的形式存在。在本申请中，术语“多肽”可与“蛋白质”互换使用。本发明人通过对来自近百名肝癌患者中的血液进行检测发现，血清中的CEACAM1水平与肿瘤的恶性程度，尤其是转移具有相关性。因此血清中的CEACAM1是一种新的肝癌标志物，可以用于肿瘤及其转移的诊断和预后。
本发明通过ELISA或免疫印迹方法检测血液中CEACAM1的含量。可使用以抗原抗体反应为原理的其他检测手段，以及其他原理的、可以直接或间接的反映CEACAM1的浓度的手段，比如通过化学发光法，时间分辨荧光免疫法反映CEACAM1的浓度。
“CEACAM1标准品”指的是纯度大于95％的CEACAM1蛋白、重组CEACAM1蛋白、片段以及衍生物样品，优先溶解较高的CEACAM1多肽。
反向蛋白芯片(RPPA)，能平行检测数以千计的病人样本中的单一或者有限的指标，所以RPPA已经用于检测疾病尤其是癌症等相关信号通路的因子。反向蛋白芯片的操作原理为：采用斑点杂交技术，同时检测上千个样本的蛋白表达水平，通过微孔固相载体探测高特导性的抗体。反向蛋白质检测芯片是用破碎的微量组织或者细胞样品点样制成的芯片，代表在某种状态下整个细胞的蛋白质,然后用特定抗体进行检测。样品中的待测蛋白质或多肽及其他生物分子通过化学键连接于固相载体上而被固定，固相载体表面经过封闭后，加入标记的探针，与固相生物分子进行杂交反应，洗去未结合的物质后，样品点的发光强度与样品中待测成分的浓度成正比。
实施例1、组织样本实验筛选出CEACAM1
(1)样本：25例肝癌病人，其中癌组织25例，癌旁组织25例。
(2)芯片：AAH-CYT-G4000antibody array(Raybiotech)，包括274个因子。
(3)数据分析：除背景，归一化(以阳性对照的强度比值作为归一化因子)，过滤掉强度<阴性对照mean+2SD的点，去掉信号值<200的因子后，剩余125个因子。
统计方法：Wilcoxon rank test(paired，SPSS)和SAM。
(4)结果分析：
本实施例中的AAH-CYT-G4000芯片是玻璃芯片，通过Cy3绿色荧光进行检测(图1为芯片的扫描图片)。本实施例中采用激光扫描仪InnoScan 300扫描信号，仪器型号：InnoScan 300Microarray Scanner，厂家：Innopsys，产地：Parc d'ActivitésActivestre，31 390Carbonne-France，扫描参数：WaveLengh为532nm、Resolution为10μm；采用Cy3绿色通道(激发频率＝532nm)。
1)聚类分析结果(参见图2)：从SAM分析得到的69个差异因子经聚类后因子合并选取27个因子86％的分类准确率(癌84％，癌旁88％)。
2)火山图分析(参见图3)：选取去掉信号值<200的剩余的125个蛋白用wilcoxon pvalue和fold change分析。火山图(蓝色点的条件|fold change|>2&p<0.05)。
通过本实施例，根据聚类分板得出这三个指标在肿瘤病人中表达高，根据火山图减小阳性率并具有统计学意义，直观得出在样品间的表达水平差异程度和其统计学显著性，最终确定筛选Nidogen-1、CEACAM-1、Acrp30。
实施例2、反向蛋白芯片操作步骤
反向蛋白芯片技术：样品中的待测蛋白质或多肽及其他生物分子通过化学键连接于固相载体上而被固定，固相载体表面经过封闭后，加入可溶的探针如抗体溶液，与固相生物分子进行杂交反应，洗去未结合的物质后，样品点的发光强度与样品中待测成分的浓度成正比，可用于大量组织样品，细胞样品的不同种类参数的检测。
RPPA(反向蛋白芯片)实验选择Nidogen-1、CEACAM-1、Acrp30做检测。
材料：抗体购自RD公司，HRP购自BD公司。
具体操作步骤如下：
表1
Figure BDA0001962010760000081
(1)标准品制备：
取表1中的Nidogen-1抗原(2570-ND，重组蛋白)，配制成浓度为100g/ml的原液。
梯度稀释所述Nidogen-1抗原的原液，起始浓度为5g/ml，接下来2/5倍稀释5次，以及0浓度，制备Nidogen-1标准曲线。
参照该步骤(1)分别取将表1中的CEACAM-1抗原和Acrp30抗原(重组蛋白)分别配制成浓度为100g/ml的原液。梯度稀释所述CEACAM-1抗原的原液，起始浓度为30g/ml，接下来1/3倍稀释5次以及0浓度，制备标准曲线。梯度稀释所述Acrp30抗原的原液，起始浓度为100g/ml，接下来1/3倍稀释5次，以及0浓度，制备标准曲线。
(2)膜的制备：
8cm×8cm NC膜(硝酸纤维素膜)，点240(16×15)个点，每个点0.2μl，具体如下：
标准曲线梯度点7×4个重复＝28；
肝细胞癌血清(原液)25×4个重复＝100；
正常体检血清(原液)5×4个重复＝100；
阳性对照(3个梯度4000×稀释、8000×稀释、16000×稀释)3×4重复＝12；阳性对照是800cw-Streptavidin(800cw标记的链霉亲和素)；
点样后，NC膜自然干燥，并储存于-80℃备用，记作膜Ⅰ。
参照步骤(2)制备点样有CEACAM-1抗原的NC膜(记作膜Ⅱ)、Acrp30抗原的NC膜(记作膜Ⅲ)，点样后，NC膜自然干燥，并储存于-80℃备用。
(3)将步骤(2)制备好的三张膜分别用封闭液(Thermo Fisher cat#37525)封闭，室温封闭30min后，弃液。
(4)用封闭液对生物素标记的抗体(表1中AMB2570)进行300倍稀释，获得捕获抗体溶液，取10ml该捕获抗体溶液加至膜Ⅰ，室温孵育2h后，弃液。参照该操作对膜Ⅱ、膜Ⅲ进行类似处理。
(5)取步骤(4)处理过的膜Ⅰ、膜Ⅱ、膜Ⅲ，洗膜，1×洗涤缓冲液I洗(含有0.1％Tween的0.01mol/L pH7.4PBS)涤5次，室温摇晃，每次5min。
(6)取步骤(5)处理过的膜Ⅰ、膜Ⅱ、膜Ⅲ，洗膜，1×洗涤缓冲液Ⅱ(含有0.5％Tween的0.01mol/L的pH7.4PBS,)洗涤4次，室温摇晃，每次5min。
(7)向步骤(6)处理过的膜Ⅰ、膜Ⅱ、膜Ⅲ加入1×800cw标记的链霉亲和素(用封闭液稀释8000倍)，室温孵育2h。
(8)按步骤(5)、步骤(6)洗膜。
(9)采用ImageQuant LAS4000化学发光成像分析系统对步骤(8)处理过的膜Ⅰ、膜Ⅱ、膜Ⅲ进行扫描：1)扫描仪器：ImageQuant LAS4000Scanner；2)品牌：美国GE公司(GEHealthcare Corporate)；3)产地：USA；4)扫描参数：high resolution(高分辨率)。采用仪器自带分析软件提取数据，采用IBM SPSS分析软件来进行数据分析。结果参见图4、图5、图6。具体地：
图4：反向蛋白芯片实验检测Nidogen-1、CEACAM-1，Acrp30在血清样本里面的表达。图4(第一行图)是检测信号图片，膜上点布局，点240(16×15)个点，每个点0.2μl：标曲梯度点7×4重复＝28，肝细胞癌血清(原液)25×4重复＝100，正常体检血清(原液)5×4重复＝100，阳性对照(3个梯度4000×、8000×、16000×稀释)3×4重复＝12。图4(第二行图)是根据RPPA检测的每个指标在肝癌患者血清和健康人血清检测的浓度值做的箱型图。
图5：ROC分析：通过RPPA检测25例肝癌患者和25例健康人血清中CEACAM-1的表达水平。检测结果通过ROC分析。结果发现AUC(Area Under Curve)值为0.957(95％CI:0.908-1.000，p<0.0001)，CEACAM-1的cut-off值为2.79时，检测灵敏度为84％，特异性为92％。
图6：通过RPPA检测CEACAM-1在25例肝癌患者和25例健康人血清中的表达。该图为散点图。在健康组中CEACAM-1的表达浓度中位值为2.01μg/ml，在肝癌组中值为4.31μg/ml。
采用反向蛋白芯片，针对164对肝细胞癌患者与健康人的血清样本中的癌胚抗原相关粘附分子CEACAM1进行了检测。如图7所示，肝细胞癌患者血清样品中的CEACAM-1蛋白的平均表达水平远远高于健康组(22.839ng/ml VS13.075ng/ml)。设置肝癌患者中两个蛋白的平均表达水平为切断值并结合在一起，55个肝癌患者得以分离，其中有9个患者为转移的肝癌。
实施例3、稳定的CEACAM-1标准品多肽
CEACAM-1是由526个氨基酸组成的蛋白，如SEQ ID No.1所示：
MGHLSAPLHR VRVPWQGLLL TASLLTFWNP PTTAQLTTES MPFNVAEGKE VLLLVHNLPQQLFGYSWYKG ERVDGNRQIV GYAIGTQQAT PGPANSGRET IYPNASLLIQ NVTQNDTGFY TLQVIKSDLVNEEATGQFHV YPELPKPSIS SNNSNPVEDK DAVAFTCEPE TQDTTYLWWI NNQSLPVSPR LQLSNGNRTLTLLSVTRNDT GPYECEIQNP VSANRSDPVT LNVTYGPDTP TISPSDTYYR PGANLSLSCY AASNPPAQYSWLINGTFQQS TQELFIPNIT VNNSGSYTCH ANNSVTGCNR TTVKTIIVTE LSPVVAKPQI KASKTTVTGDKDSVNLTCST NDTGISIRWF FKNQSLPSSE RMKLSQGNTT LSINPVKRED AGTYWCEVFN PISKNQSDPIMLNVNYNALP QENGLSPGAI AGIVIGVVAL VALIAVALAC FLHFGKTGRA SDQRDLTEHK PSVSNHTQDHSNDPPNKMNE VTYSTLNFEA QQPTQPTSAS PSLTATEIIY SEVKKQ
本发明经过大量的研究发现，采用CEACAM-1重组蛋白作为校准品检测样品中的CEACAM-1时，由于原核重组表达的蛋白缺乏糖基化，标准品的稳定性较天然蛋白更差。而且在纯化重组蛋白过程中得到不溶的包涵体，不易与特异性抗体结合。目前没有见到稳定性优良的CEACAM-1标准品。
本发明提供的CEACAM1多肽标准品(如SEQ ID No.2所示)由上海吉尔生化合成，序列如SEQ ID No.2所示：NFEAQQPTQKTSASPSLTA。
本发明经过抗原表位设计经验，通过突变掉CEACAM-1(SEQ ID No.1)第497位氨基酸至第515位氨基酸的序列中第506位脯氨酸为赖氨酸并以获得的SEQ ID No.2所示短多肽为标准品，使肽链结构相对稳定，具体地：突变前，CEACAM-1第497位氨基酸至第515位氨基酸的序列中含有3个脯氨酸，该情况下脯氨酸采用顺式酰胺键存在于多肽中，反而影响结构的稳定性及其在溶液中的可溶性。突变后的SEQ ID No.2所示的多肽序列不仅稳定性好，而且亲水性比SEQ ID No.1的重组蛋白的更好，更容易包被在酶标板上。
分别以纯度为95％的SEQ ID No.2所示的多肽为标准品、实施例2表1所示的CEACAM-1重组蛋白(R&D 2244-M)作为标准品，采用反向蛋白芯片技术(步骤参照实施例2)，对健康组实验志愿者和来自肝癌组实验志愿者提供的血清样本进行检测。检测结果如图8所示。图8中，左侧(即图中“多肽抗原”对应部分)为采用本实施例SEQ ID No.2所示的多肽为标准品所示结果，右侧(即图中“重组蛋白”对应部分)为采用市购重组蛋白R&D 2244-M作为标准品所示结果。通过图8可知，以本实施例SEQ ID No.2所示的多肽为标准品、以市购重组蛋白R&D 2244-M作为标准品都能够通过对CEACAM1的检测而显著区分健康组和肝癌组。
实施例4、CEACAM-1ELISA检测试剂盒
本实施例提供CEACAM-1的酶联免疫检测试剂盒，试剂盒的组成如下：
1、ELISA酶标板：采用吸附性能好，空白值低，批次稳定的聚苯乙烯板包被捕获抗体，预先用封闭液处理。
2、检测抗体：生物素化抗CEACAM-1单克隆抗体，最佳稀释浓度为0.1mg/L。
3、洗涤液：含0.1％Tween 20的20×浓缩洗涤液。
4、标准品：实施例3中SEQ ID No.2所示的多肽。
5、稀释液A：用于稀释样本的15ml 5×浓缩稀释液(0.02mol/LpH7.4的PBS，0.05wt％Tween-20)
6、稀释液B：用于稀释抗体和HRP-链亲和素的15ml 5×浓缩稀释液7.20μl300×浓缩HRP-链亲和素溶液。
7、底物：12ml TMB溶液。
8、终止液：8ml浓度为0.2M的硫酸溶液。
采用该CEACAM-1酶联免疫试检测剂盒进行待测样本检测的步骤包括：
(1)加入用稀释液A梯度稀释的标准品与待检测的血清样品，每个样品做两个重复，每孔加100μl，37℃反应40分钟。
(2)配置1×洗涤液于洗板机上洗板5次共10分钟。
(3)将稀释液B加入生物素化的检测抗体和HRP-链亲和素混匀，加入微孔板中孵育40分钟。
(4)再次洗涤并加入底物反应10分钟，加入终止液显色，于酶标板上读数。
根据读数计算标准曲线，可以得出读数与CEACAM-1标准品之间的线性关系，将样品的OD值代入线性公式得出样品的含量。整个过程不超过2个小时。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 广州瑞博奥生物科技有限公司
广州瀚普创展医学检验实验室有限公司
<120> CEACAM1多肽的新应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 526
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Gly His Leu Ser Ala Pro Leu His Arg Val Arg Val Pro Trp Gln
1 5 10 15
Gly Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr
20 25 30
Thr Ala Gln Leu Thr Thr Glu Ser Met Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly
35 40 45
Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln Gln Leu Phe Gly
50 55 60
Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Val
65 70 75 80
Gly Tyr Ala Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Asn Ser
85 90 95
Gly Arg Glu Thr Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Val
100 105 110
Thr Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu Gln Val Ile Lys Ser Asp
115 120 125
Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe His Val Tyr Pro Glu Leu
130 135 140
Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu Asp Lys
145 150 155 160
Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Thr Thr Tyr
165 170 175
Leu Trp Trp Ile Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr Arg Asn
195 200 205
Asp Thr Gly Pro Tyr Glu Cys Glu Ile Gln Asn Pro Val Ser Ala Asn
210 215 220
Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asn Val Thr Tyr Gly Pro Asp Thr Pro
225 230 235 240
Thr Ile Ser Pro Ser Asp Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Ala Asn Leu Ser
245 250 255
Leu Ser Cys Tyr Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Leu
260 265 270
Ile Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn
275 280 285
Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Thr Cys His Ala Asn Asn Ser
290 295 300
Val Thr Gly Cys Asn Arg Thr Thr Val Lys Thr Ile Ile Val Thr Glu
305 310 315 320
Leu Ser Pro Val Val Ala Lys Pro Gln Ile Lys Ala Ser Lys Thr Thr
325 330 335
Val Thr Gly Asp Lys Asp Ser Val Asn Leu Thr Cys Ser Thr Asn Asp
340 345 350
Thr Gly Ile Ser Ile Arg Trp Phe Phe Lys Asn Gln Ser Leu Pro Ser
355 360 365
Ser Glu Arg Met Lys Leu Ser Gln Gly Asn Thr Thr Leu Ser Ile Asn
370 375 380
Pro Val Lys Arg Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Trp Cys Glu Val Phe Asn
385 390 395 400
Pro Ile Ser Lys Asn Gln Ser Asp Pro Ile Met Leu Asn Val Asn Tyr
405 410 415
Asn Ala Leu Pro Gln Glu Asn Gly Leu Ser Pro Gly Ala Ile Ala Gly
420 425 430
Ile Val Ile Gly Val Val Ala Leu Val Ala Leu Ile Ala Val Ala Leu
435 440 445
Ala Cys Phe Leu His Phe Gly Lys Thr Gly Arg Ala Ser Asp Gln Arg
450 455 460
Asp Leu Thr Glu His Lys Pro Ser Val Ser Asn His Thr Gln Asp His
465 470 475 480
Ser Asn Asp Pro Pro Asn Lys Met Asn Glu Val Thr Tyr Ser Thr Leu
485 490 495
Asn Phe Glu Ala Gln Gln Pro Thr Gln Pro Thr Ser Ala Ser Pro Ser
500 505 510
Leu Thr Ala Thr Glu Ile Ile Tyr Ser Glu Val Lys Lys Gln
515 520 525
<210> 2
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Asn Phe Glu Ala Gln Gln Pro Thr Gln Lys Thr Ser Ala Ser Pro Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ala

Claims (6)

1.一种用于CEACAM1检测的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.权利要求1所述的多肽作为标准品在制备检测待测样本所含CEACAM1的试剂盒中的应用；
所述的待测样本为血液样本。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测采用酶联免疫法检测。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测采用免疫印迹法检测。
5.一种CEACAM1 ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含有权利要求1所述的多肽的标准品。
6.一种基于非诊断目的的CEACAM1的ELISA检测方法，其特征在于，所述检测方法包括包被、封闭、加抗原、加酶标二抗、加底物显色和终止的步骤；其中：所述的加抗原步骤包括：将待测样本、CEACAM1标准品溶液分别加入酶标板孔，所述的标准品包括权利要求1所述的多肽。
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