CN111321094B

CN111321094B - 一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂m1及其应用

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Publication number: CN111321094B
Application number: CN202010188730.4A
Authority: CN
Inventors: 沙月霞; 沈瑞清; 朱建祥; 杨卫东; 邹金科; 邢敏; 马惠兰; 王喜刚
Original assignee: Institute of Plant Protection of Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sicience
Current assignee: Institute of Plant Protection of Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sicience
Priority date: 2020-03-17
Filing date: 2020-03-17
Publication date: 2021-04-20
Anticipated expiration: 2040-03-17
Also published as: CN111321094A

Abstract

本发明公开了一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1及其应用，包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HR55三种菌株；三种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月6日；其中，枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCC NO.19451；贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。本发明的微生物菌剂M1对玉米茎基腐病的防治效果好，可以有效挽回由茎基腐病造成的产量损失，改善土壤营养状况，影响土壤中真菌和细菌群落多样性和结构。

Description

一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1及其应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种用于玉米茎基腐病防治的微生物菌剂M1及其应用。

背景技术

玉米是世界上重要的粮食作物，种植规模仅排在小麦之后。随着全球气候条件的变化、重茬连作、高密度栽培等，玉米田生态环境随之改变，土壤中病原菌的优势菌群结构发生改变，病残体的积累数量越来越大，有益微生物群落结构和数量也发生较大变化。这些因素导致玉米田土壤微生物群落结构失衡，玉米茎基腐病的发生日趋严重。

玉米茎基腐病是由多种病原菌复合侵染引起的典型土传病害，是危害世界玉米生产的主要病害之一。一般情况下产量损失在10～25％，严重年份可以达到75％。抗性品种、化学种衣剂和增施钾肥是目前生产上的主要措施，但是品种选育时间较长，化学种衣剂的残留易污染生态环境，也会威胁人类健康，加重土壤的盐渍化，病原菌易产生抗药性。降低土壤中的病原菌数量与干扰其生长的土壤微生态环境是防治玉米茎基腐病的关键手段。因此，研发用于玉米茎基腐病的微生物菌剂对于粮食安全和玉米产业可持续发展具有重要的科学意义和应用价值。

众所周知，土壤中存活着多种病原菌，其数量与活性影响着土壤微生物群落结构的稳定，土壤微生物生态环境的不平衡会会加重农作物土传病害的危害。研究表明，农艺措施和生物制剂对土壤微生物群落多样性以及种群组成的影响显著。微生物菌剂广泛用于改善土壤微生物的生态环境，达到防病、防虫、促生和增产效果。吕宁等研究发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)可湿性粉剂滴施后对棉花黄萎病防治效果明显，土壤真菌、细菌和放线菌的数量与物种丰度随着施药量的增加而显著增加。Chen等采用棘孢木霉菌(Trichoderma asperellum)颗粒剂在播种前与化肥混合施入土壤，对玉米茎腐病防效显著。但是目前可以用于玉米病害防治的微生物菌剂较少，有必要研发适用于玉米茎基腐病防治的微生物菌剂。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1及其应用，对玉米茎基腐病有较好防治效果。

根据本发明的一个方面，提供了一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1，包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HR55三种菌株；三种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月6日；其中，枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCC NO.19451；贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。

可选择地，枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55的比例为1:1:1；微生物菌剂M1中的芽孢杆菌的活菌数＞10亿CFU/g。

本发明的另一个方面，提供了一种微生物菌剂M1，微生物菌剂M1的功能菌为液体芽孢杆菌菌剂，由体积比为1:1:1的枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55混合配制的混合液。

本发明的再一个方面，提供了一种微生物菌剂M1，微生物菌剂M1包括混合菌液、载体、腐殖酸、调节剂以及微量元素，混合菌液为枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55按照体积比1:1:1比例配制的混合液。

可选择地，载体为腐熟羊粪；调节剂为硫酸钙(CaSO₄·2H₂O)；微量元素包括硫酸锌(ZnSO₄)、硫酸亚铁(FeSO₄·7H2O)和硫酸钾(K₂SO₄)。

可选择地，微生物菌剂M1包括：混合菌液15L、腐殖酸2.75kg、硫酸钙160g、硫酸锌80g、硫酸亚铁80g、硫酸钾80g以及羊粪30kg。

本发明的又一个方面，提供了一种微生物菌剂M1用于防治玉米茎基腐病的应用。

本发明的有益效果是：本发明的微生物菌剂M1对玉米茎基腐病的防治效果好，可以有效挽回由茎基腐病造成的产量损失，影响土壤中真菌和细菌群落多样性和结构，降低土壤中的病原菌丰度；对玉米农田土壤理化性质有较好的改良作用，有效降低土壤pH，增加土壤有机碳、有机质、硝态氮、全磷和速效钾含量；对玉米有明显的促生作用，提高玉米出苗率44.03％，增加玉米株高9.79％、提高玉米茎粗8.78％；具有显著的增产效果，产量增产率达到39.6％，有效增加有效穗数、千粒重、穗粒数和降低秃头率。本发明的微生物菌剂M1不含致病菌，不含重金属和有毒害化学物质，适合用于种植玉米的土壤处理，且不会对土壤造成额外负担，属于环保型的绿色微生物菌剂，符合粮食安全和玉米产业可持续发展需求。

附图说明

构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1是土壤芽孢杆菌对玉米幼苗的促生作用。

图2是菌株HR15基于16S rDNA测序的系统发育进化树。

图3是菌株HR37基于16S rDNA测序的系统发育进化树。

图4是菌株HR55基于16S rDNA测序的系统发育进化树。

图5是微生物菌剂M1施用后玉米农田土壤细菌群落结构的影响。

图6是微生物菌剂M1施用后玉米农田土壤真菌群落结构的影响。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征向量可以相互任意组合。

本发明的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1，包括枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)HR55三种菌株；三种菌株保藏于均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月6日；其中，枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCC NO.19451；贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。

其中，枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55的比例为1:1:1；微生物菌剂M1中芽孢杆菌的活菌数＞10亿次。

一种微生物菌剂M1的功能菌为液体芽孢杆菌菌剂，由体积比为1:1:1的枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55混合配制的混合液。

一种微生物菌剂M1，微生物菌剂M1包括混合菌液、载体、腐殖酸、调节剂以及微量元素，混合菌液为枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55按照1:1:1比例配制的混合液。

具体的，微生物菌剂M1包括：混合菌液15L、腐殖酸2.75kg、硫酸钙160g、硫酸锌80g、硫酸亚铁80g、硫酸钾80g以及羊粪30kg。

下面详细说明本发明的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1的制备方法及其测试结果。

实施例1三种菌株的分离

(1)土壤芽孢杆菌的分离

土壤芽孢杆菌的分离：将10g马铃薯田土壤样品加入到90mL无菌水中，室温下振荡(180rpm/min)约30min制成混浊液，然后用无菌水将样品进行梯度稀释。将稀释好的10^-2、10^-3、10^-4、10^-5和10^-6浓度的样品各0.1mL涂布在肉汤培养培养基(NA)上，涂布后的平板倒置于37℃培养箱内培养，2d后从平板上挑取不同表型特征的单菌落，梯度划线分离获得纯菌株，挑取纯化菌株的单菌落，转移至40％甘油中，在-80℃超低温冰箱中保存备用。

肉汤培养基(NA)：蛋白胨10.0g，牛肉粉3.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g，pH 7.3±0.1，121℃灭菌20min。

(2)筛选对镰刀菌抑菌较明显的拮抗菌

在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平板上中央放置尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)N16-2-1、茄病镰刀菌(F.solani)N18-1-2和串珠镰刀菌(F.moniliforme)N19-2-2菌饼(直径1cm)，分别在病原菌菌落边缘两侧相距2cm处接种待测菌株菌饼(直径5mm)，置于培养箱25℃黑暗培养，4次重复。5天后测量病原菌菌落直径和抑菌带，结果见表1。

表1土壤芽孢杆菌对3种镰刀菌的拮抗作用

马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15～20克，蒸馏水1L，121℃灭菌20min。

(3)土壤芽孢杆菌预防玉米茎基腐病的温室试验

种子处理：将玉米种子丹玉3号置于1％的次氯酸钠溶液中表面消毒20min，然后用无菌水冲去种子表面残留的次氯酸钠，在超净工作台上吹干表面水分备用。

温室防效：采用芽孢杆菌HR15、HR37和HR55发酵液对无菌玉米丹玉3号种子进行浸种1h，将1L发酵液与玉米茎基腐病常年发病较重的农田土壤以1︰3拌土处理，对照处理组不施用供试菌剂。种植玉米品种丹玉3号，每个花盆3粒玉米种子，每个处理10个花盆。微生物菌剂对照和噁霉灵可湿性粉剂的处理方法与供试菌株相同。空白对照不施用药剂。种植60d调查玉米茎基腐病的发生情况，计算各处理的防效，结果见表2。试验设计包括：⑴病土CK对照：玉米茎基腐病病土对照；⑵HR55发酵液(1×10⁸CFU/mL)；⑶HR15(1×10⁸CFU/mL)；⑷HR37(1×10⁸CFU/mL)；⑸化学农药对照：噁霉灵可湿性粉剂；⑹微生物菌剂对照CK(40kg/667m²)：枯草芽孢杆菌为功能菌的微生物肥料(美国微生物总公司)。

发酵液的制备：超低温保持的菌株HR15、HR37和HR55梯度划线在NA固体培养基平板上，37℃培养48h，用接菌环挑取单菌落接种到100mL LB液体培养基中，37℃振荡(200rpm/min)培养12h制成种子发酵液，按照6％的比例接菌到发酵罐中，30℃振荡(200rpm/min)培养72h制成发酵培养液。

LB液体培养基：酵母提取物5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.4～7.6，121℃灭菌30min。LB固体培养基：在液体培养基基础上加入15g琼脂粉。

玉米茎基腐病病情分级标准：0级，整株无病；1级，地上部和地下部生长基本正常，根部可见少量病斑，病斑面积占根表总面积1/4以下，根群颜色白中有褐；2级，地上部和地下部生长明显受阻，叶色变淡，株高仅及对照的3/4，侧根少而短，无须根，病斑连片，病斑面积占根表总面积的1/4-1/2，根系颜色白、褐相当；3级，地上部和地下部生长极不正常，地上部可见青枯、黄枯状，株高仅及对照的1/2，侧根极小，病斑面积占根总面积的1/2-3/4，根系颜色褐中带白；4级，发芽但不出苗，几乎窒息而死，病斑面积占根表总面积的3/4以上，根为褐色。

计算公式：防效(％)＝[(空白对照区病株率－处理区病株率)/空白对照区发病率]×100；发病率(％)＝[Σ(每个病级的植株数×相对级数值)/(调查总植株数×最高级数值)]×100。

表2土壤芽孢杆菌对预防玉米茎基腐病的温室防效

菌株名称	病情指数	防效(％)
			菌株HR15	9.71	69.86
菌株HR37	7.09	77.95
			菌株HR55	5.56	82.46
微生物菌剂对照	11.11	65.52
			噁霉灵可湿性粉剂	5.56	82.46
病土CK	32.22	/

(4)土壤芽孢杆菌在温室条件下对玉米幼苗的促生效果

选取健康玉米种子丹玉3号，在1％次氯酸钠中浸泡20min，用无菌水冲洗3遍。采用芽孢杆菌HR15、HR37和HR55发酵液将无菌玉米种子浸泡1h，然后晾干。将1L发酵液与玉米茎基腐病常年发病较重的农田土壤以1︰3拌土处理，对照处理组的病土不施用供试菌剂。种植玉米品种丹玉3号，每个花盆3粒玉米种子，每个处理10个花盆。微生物菌剂CK和噁霉灵可湿性粉剂的处理方法与供试菌株相同。空白对照不施用药剂。种植30d时调查出苗率，测量株高，促生效果结果见表3和图1。

表3土壤芽孢杆菌在温室条件下对玉米的促生效果

(5)土壤芽孢杆菌的鉴定

形态学鉴定依据《常见细菌系统鉴定手册》，结合分子生物学技术16S rDNA测序对筛选出的拮抗菌进行种类鉴定，菌株HR15鉴定为枯草芽孢杆菌，结果见图2；HR37鉴定为萎缩芽孢杆菌，结果见图3；HR55鉴定为贝莱斯芽孢杆菌，结果见图4。

实施例二微生物菌剂的配制方法

①菌株之间的相容性

参考Barbosa的测定方法，在LB固体培养基平板上一半划线接种一种功能菌株，同时在其另一半垂直划线接种另一种功能菌株,每个处理重复3次。将平板放置在37℃的生化培养箱中培养，24h后观察和记录两菌株之间的相容性反应。两菌株之间不产生抑菌条带的为相容，反之为不相容。相容性结果表明3株菌之间不互相抑制，可以混合使用。

②芽孢杆菌发酵液的制备

将活化24h的菌株HR15、HR37和HR55单菌落分别接种到的装有液体NA培养基的种子发酵液中，30℃条件下，180rpm/min振荡培养12h。分别将3种菌株种子发酵液按照6％的比例转移到发酵液中，30℃条件下，180rpm/min振荡培养48h。

③微生物菌剂M1的配制

微生物菌剂M1主要由以下成分组成：枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55作为功能菌(芽孢杆菌的活菌数＞10亿次)按照1:1:1(体积比)比例制备的混合液15L、腐殖酸2.75kg、硫酸钙160g、硫酸锌80g、硫酸亚铁80g、硫酸钾80g，载体为羊粪约30kg，以上组分混合均匀，低温保存。

测试例微生物菌剂生物活性的测定

测试例1微生物菌剂M1在玉米农田的拌土处理

在宁夏回族自治区石嘴山市惠农区种植玉米——品种为济玉901，种植前将微生物菌剂M1均匀撒施在农田土壤表面(40kg/亩)，然后用旋耕机采用旋耕(深度为30cm左右)方式将微生物菌剂与土壤均匀混合。设计6个处理：微生物菌剂M1拌土处理组；空白对照处理组：不施用任何农药和肥料；噁霉灵可湿性拌土处理组；微生物菌剂对照：枯草芽孢杆菌为主要成分的微生物肥料(美国微生物总公司)拌土处理组。试验小区面积为60m²，每个处理4个重复小区。以下研究均在此实验田进行。

测试例2微生物菌剂M1对玉米田土壤营养状况的改良效果

玉米乳熟期和蜡熟期采集农田土壤(距离植株15cm，深度为0～20cm)，土壤样本装入自封袋中，用冰盒带回实验室，检测土壤pH值、有机碳、有机质、全氮、全磷、硝态氮、有效磷、速效钾等理化指标，乳熟期结果见表4，蜡熟期结果见表5。

表4微生物菌剂M1对玉米农田土壤的改良作用(乳熟期)

表5微生物菌剂M1对玉米农田土壤的改良作用(蜡熟期)

测试例3微生物菌剂M1对玉米的促生作用

玉米种植30d后调查出苗率和测量株高，种植75d测量茎粗(第一节部位植株周长)，计算微生物菌剂M1对盐碱地玉米的促生效果，结果见表6。

表6微生物菌剂M1对玉米的促生效果

测试例4微生物菌剂M1对玉米的增产作用

玉米成熟期(种植约5个月)调查结穗率和有效穗数，采集成熟玉米穗，测量玉米穗长、千粒重、单粒重、秃头、穗粒数、行粒数、穗粗(穗中部位置的周长)和亩产，评价微生物菌剂M1对盐碱地玉米的增产效果，结果见表7和表8。

表7微生物菌剂M1对玉米穗的增产效果

表8微生物菌剂M1对玉米产量的增产效果

测试例5微生物菌剂M1对玉米茎基腐病的预防效果

在玉米乳熟期和蜡熟期调查玉米茎基腐病的病情指数，结果见表9。茎基腐病调查方法按《农药田间药效试验准则》，玉米茎基腐病分级标准(植株个体受害程度)：1级：全株生长正常，中下部叶片出现青枯/青黄枯症状，茎基生长正常，果穗生长正常；3级：全株叶片出现青枯症状，茎基生长正常，果穗生长正常；5级：全株叶片出现典型青枯症状，茎基部变色且稍有水浸状，果穗基本正常；7级：植株叶片出现典型青枯症状，茎基部明显变软但不倒状，果穗下垂，籽粒不饱满；9级：全株枯死且倒伏，茎基部维管束破裂，籽粒干瘪。

表9微生物菌剂M1对玉米茎基腐病的防治效果

测试例6微生物菌剂M1对玉米田土壤微生物群落结构的影响

玉米乳熟期采集农田土壤(距离植株15cm，深度为0～20cm)，土壤样本采用冰盒带回实验室。提取各个处理组的土壤样本基因组总DNA，然后利用1％琼脂糖凝胶电泳检测抽提的基因组DNA。细菌扩增引物为338F：5′-barcode-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′，806R：5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′，对细菌16S rRNA基因V3–V4可变区进行PCR扩增，引物由上海美吉生物医药科技有限公司设计合成，测序区域合成带有barcode的特异引物。PCR正式试验采用20μL反应体系：10×PCR Buffer 2μL，2.5mmol/L dNTPs 2μL，5μmol/L正向引物0.8μL，5μmol/L反向引物0.8μL，rTaq Polymerase 0.2μL，BSA 0.2μL，Template DNA10 ng，补ddH₂O至20μL。PCR扩增条件：95℃ 3min；循环数×(95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 45s)；72℃10min，10℃直到反应结束。对第二轮PCR扩增产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，切胶回收PCR产物，Tris_HCl洗脱；2％琼脂糖电泳检测。将PCR产物用QuantiFluor^TM-ST蓝色荧光定量系统(Promega公司)进行检测定量，之后进行相应比例的混合。混合后的产物用Illumina公司的Miseq 2×300平台测序。微生物菌剂M1对玉米田土壤细菌群落结构的影响见图5。

真菌扩增引物为ITS1F：5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGC-3'，ITS2R5′-CTCGGACGAGGATCCTCGCC-3′，ITS1-ITS2区进行PCR扩增。ITS扩增的聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction，PCR)体系(25μL)：ddH₂O17.25μL，Bufferl 2.5μL，dNTPs 2μL，引物ITS1F 1μL，引物ITS2R 1μL，HiFi酶0.25μL，模板DNA 1μL。PCR反应条件：93℃预变性3min，93℃变性45s，57℃复性45s，72℃延伸90s，35个循环。扩增产物回收后，由上海美吉生物医药科技有限公司完成测序。微生物菌剂M1对盐碱地玉米农田土壤微生物真菌群落结构的影响见图6。

测试例7微生物菌剂M1对玉米田土壤微生物群落多样性的影响

高通量测序得到的原始数据进行质量控制和软件拼接，过滤掉低质量的序列。将有效序列相似性在≥97％序列聚类成为分类单元(Operational Taxonomic Units)。再用QIIME软件进行单样品组成分析，计算样品的Coverage、Chao、Shannon指数等。Shannoneven值数值越大，说明群落均匀度越低。Shannon值越大，说明群落多样性越高。Coverage是覆盖度指数，表征微生物样本序列的检测概率，数值越高表明检测出的序列概率越高，能够反映样本中微生物的真实情况。Sobs指丰富度指数，数值越大丰富度越高。微生物菌剂M1对玉米农田土壤细菌群落多样性的影响见表10。微生物菌剂M1对玉米农田土壤微生物真菌群落多样性的影响见表11。

表10微生物菌剂M1对玉米农田土壤微生物细菌群落多样性的影响

表11微生物菌剂M1对玉米农田土壤微生物真菌群落多样性的影响

需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的物品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，仅仅参照较佳实施例对本发明进行了详细说明。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1，其特征在于，包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HR55三种菌株；所述三种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，所述枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；所述萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCC NO.19451；所述贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。

2.如权利要求1所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌HR15、所述萎缩芽孢杆菌HR37和所述贝莱斯芽孢杆菌HR55的体积比为1:1:1；所述微生物菌剂M1中芽孢杆菌的活菌数＞10亿CFU/g。

3.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1，其特征在于，所述微生物菌剂M1的功能菌为液体芽孢杆菌菌剂，由体积比为1:1:1的枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55混合配制的混合液，所述枯草芽孢杆菌HR15、所述萎缩芽孢杆菌HR37和所述贝莱斯芽孢杆菌HR55均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，所述枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；所述萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCC NO.19451；所述贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。

4.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1，其特征在于，所述微生物菌剂M1包括混合菌液、载体、腐殖酸、调节剂以及微量元素，所述混合菌液为枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55按照体积比1:1:1比例配制的混合液，所述枯草芽孢杆菌HR15、所述萎缩芽孢杆菌HR37和所述贝莱斯芽孢杆菌HR55均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，所述枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；所述萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCCNO.19451；所述贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。

5.如权利要求4所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1，其特征在于，所述载体为腐熟羊粪；所述调节剂为硫酸钙；所述微量元素包括硫酸锌、硫酸亚铁和硫酸钾。

6.如权利要求5所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M1，其特征在于，包括：混合菌液15L、腐殖酸2.75kg、硫酸钙160g、硫酸锌80g、硫酸亚铁80g、硫酸钾80g以及羊粪30kg。

7.如权利要求1-6任一项所述的微生物菌剂M1用于防治玉米茎基腐病的应用。