[go: up one dir, main page]

CN111303297B - 一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用 - Google Patents

一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111303297B
CN111303297B CN202010092791.0A CN202010092791A CN111303297B CN 111303297 B CN111303297 B CN 111303297B CN 202010092791 A CN202010092791 A CN 202010092791A CN 111303297 B CN111303297 B CN 111303297B
Authority
CN
China
Prior art keywords
novel coronavirus
test strip
ncov
protein
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010092791.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111303297A (zh
Inventor
何昆仑
田亚平
张思兵
周建平
周裕军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chinese PLA General Hospital
Beijing Diagreat Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Chinese PLA General Hospital
Beijing Diagreat Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chinese PLA General Hospital, Beijing Diagreat Biotechnology Co Ltd filed Critical Chinese PLA General Hospital
Priority to CN202010092791.0A priority Critical patent/CN111303297B/zh
Publication of CN111303297A publication Critical patent/CN111303297A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111303297B publication Critical patent/CN111303297B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用，属于病毒检测技术领域。本发明所述双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述重组蛋白为2019‑nCoV多个优势表位的融合蛋白，能够制备得到抗原双夹心法2019‑nCoV病毒抗体检测试剂，可实现常温保存，且能够快速、高灵敏度、高通量、低仪器成本、单人份随时检测，操作简便，可大大提高临床使用简便性。

Description

一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、 试纸条及制备方法和应用
技术领域
本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒(2019-nCoV)抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用。
背景技术
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒、中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，2019-nCoV是人类分离的第七类冠状病毒。相关疾病监测，发现多起病毒性肺炎病例，均诊断为病毒性肺炎/肺部感染。
新型冠状病毒感染人体后一般有3～14天(有个别案例报道最长24天)的潜伏期，潜伏期内可无临床症状，不易发现。目前的证据表明，潜伏期感染者也有传染性，增大了阻断病毒传播的难度。新型冠状病毒感染临床症状主要表现为发热、咳嗽、乏力等非特异症状，与普通感冒难以区分，其确诊依赖实验室诊断技术。
目前新型冠状病毒感染诊断主要依赖基于聚合酶链式反应(PCR)或核酸测序检测病毒特异性基因序列来进行。但是核酸诊断需要有特殊的实验室(要求有4个在物理空间上完全相互独立的区域)和数十种配套设备以及专业操作人员(需认证)才能完成，且检测过程操作复杂，需要数小时才能完成；极易产生气溶胶污染，造成假阳性，也存在因为取样不合适造成漏检的情况，因此核酸检测不适合现场大规模开展。
免疫学诊断主要是通过抗原抗体免疫反应检测人体感染病毒以后产生的特异性抗体来诊断。免疫学诊断方法具有操作简单、检测速度快、无需特殊场地及(复杂)仪器设备，且敏感性高等优点，适用于现场大规模开展新型冠状病毒感染筛查及诊断工作。免疫学诊断已报道的方法学主要是胶体金法，ELISA等，检测血液中的病毒特异性IgM和IgG抗体，属于间接法，采用抗原和抗人免疫球蛋白二抗构建检测系统，受基质Ig影响比较大，特异性差，灵敏度也不理想。双抗原夹心法灵敏度高，特异性强，但是目前市面上和文献还未有比较理想的针对2019-nCoV的双抗原夹心的原料的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用。本发明所述重组蛋白为2019-nCoV多个优势表位的融合蛋白，能够制备得到抗原双夹心法2019-nCoV病毒抗体检测试剂，可实现常温保存，且能够快速、高灵敏度、高通量、低仪器成本、单人份随时检测，操作简便，可大大提高临床使用简便性。
本发明提供了一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的试纸条，包括底板以及依次搭接粘贴在底板上的样品吸收垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，所述质控区喷涂有抗N蛋白抗体；所述2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白为上述技术方案所述的重组蛋白。
优选的是，所述试纸条检测的样本包括唾液、尿液、血清、血浆和全血样本。
优选的是，所述试纸条还包括样本稀释液；所述样本稀释液包括PB溶液和Tween-20；所述PB溶液的浓度为0.008～0.012mol/L；所述样本稀释液中Tween-20的体积含量为0.4％～0.6％。
优选的是，所述荧光微球为聚苯乙烯包裹稀土离子Eu+的微球，所述荧光微球表面有羧基基团。
优选的是，所述荧光微球的直径为100～300nm。
本发明还提供了上述技术方案所述试纸条的制备方法，包括以下步骤：
1)将活化的荧光微球与上述技术方案所述重组蛋白混合偶联，获得荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白；
2)将所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白喷涂至玻璃纤维膜上获得荧光微球垫；
3)将2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白和抗N蛋白抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和质控区获得固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜；
4)在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、荧光微球垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜和吸水垫，获得试纸条。
优选的是，所述活化的荧光微球的制备方法包括以下步骤：将荧光微球与交联剂和活化缓冲液混合震荡20～40min，得到活化的荧光微球。
本发明还提供了上述技术方案所述重组蛋白或上述技术方案所述试纸条在制备2019新型冠状病毒检测试剂中的应用。
本发明提供了一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白。本发明中所述重组蛋白为多优势抗原表位融合蛋白，能够与新型冠状病毒2019-nCoV抗体特异性结合，能更好、更全的捕获抗体，通过检测样本中的抗病毒抗体含量可以在早期诊断是否感染新型冠状病毒。本发明所述重组蛋白制备得到的双抗原夹心试纸条能够快速、准确的检测新型冠状病毒2019-nCoV抗体，可用于唾液、尿液、血清、血浆、全血样本的检测，检测时间低于15min，特异性更高，能够更准确、更灵敏的检测抗病毒抗体，有利于新型冠状病毒的防控、治疗工作。
相比于现有方法，本发明采用了一种全新的方法学实现2019新型冠状病毒抗体的检测，具有检测仪器成本低，操作简便，快速，可常温储存运输，适用于多种类型样本(唾液、尿液、血清、血浆、全血)，稳定性好(核酸为冷藏试剂)，特异性高(双抗原夹心法相比于间接法测病毒抗体，不受样本中大量无关Ig的影响，因此特异性高)，灵敏度高(制备的2019nCoV蛋白多优势表位融合蛋白，相对于常规的采用N蛋白或者N+S蛋白的间接法，可以检测到针对2019-nCoV病毒的大部分抗体，因此灵敏度更高)，实现早期筛查(高灵敏度可以在早期检测到低浓度的2019-nCoV病毒抗体)。
对比RT-PCR法，本发明所述方法的优点为，检测环境要求低，检测仪器成本低，避免复杂前处理过程，检测快速15min，样本采集容错率高，可实现高通量检测，单人份包装，稳定性好，重复性高，操作简单无需专业人员。
对比测序法，本发明所述方法的优点为检测仪器成本低，试剂可常温储存，单人份包装，稳定性好，重复性高，操作简单无需专业人员，检测快速15min。
对比胶体金法，ELISA法方法学，本发明所述方法的优点：1)对比方法主要采用间接法测定，内源性大量无关Ig同特异性的Ig竞争抗人Ig二抗的结合位点，导致灵敏度下降，非特异性结合多，本发明采用双抗原夹心法，待测抗体必须同时结合两种抗原，因此特异性更高；对比方法只能检测IgM和IgG亚型的抗体，而本发明可检测到同病毒抗原结合的所有类型抗体(包括IgA，IgM，IgG，IgE)，灵敏度更高，更早检测到病毒抗体的存在；对比方法主要采用病毒的N蛋白或者N蛋白和S蛋白的混合，本发明制备了2019-nCoV病毒的多优势表位融合蛋白(来自于N蛋白，S蛋白，M蛋白)，避免了对比方法需要优化不同抗原蛋白的混合比例，并且覆盖更多的表位能够最大程度提高检测病毒抗体的灵敏度。
附图说明
图1为本发明提供双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体检测试剂参考值的确定。
具体实施方式
本发明提供了一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：
DQVILLNKHIDAYKTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDFSKQGGGSDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHAGGGSTLAILTALRLCAYCCNIVNVSLVKPSFYVYSRVKNLNSSRVPDLLV。本发明通过计算预测筛选新型冠状病毒2019-nCoVN蛋白、S蛋白、M蛋白的优势抗原表位，并通过柔性多肽(GGGS)连接到一起，组成2019-nCoV病毒多优势表位融合蛋白。本发明对所述重组病毒的制备方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的方法合成即可，如委托北京德奥平生物技术有限公司生产制备，纯度优选大于95％。当新型冠状病毒2019-nCoV入侵人体后，机体免疫系统会针对病毒蛋白的优势表位产生免疫反应。本发明所述重组蛋白(多优势表位融合蛋白)能够与新型冠状病毒2019-nCoV抗体特异性结合；因此，通过检测样本中的抗病毒抗体含量可以在早期诊断是否感染新型冠状病毒。
本发明还提供了一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的试纸条，包括底板以及依次搭接粘贴在底板上的样品吸收垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，所述质控区喷涂有抗N蛋白抗体；所述2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白为上述技术方案所述的重组蛋白。本发明提供了能够快速、准确的检测新型冠状病毒2019-nCoV抗体的双抗原夹心法时间分辨免疫荧光试纸条，所述试纸条的检测时间低于15min，本发明所述试纸条采用新型冠状病毒多优势抗原表位，通过基因工程技术进行融合表达，能更好、更全的捕获抗体，并且双抗原夹心法特异性更高，因此能够更准确、更灵敏的检测抗病毒抗体，有利于新型冠状病毒的防控、治疗工作。
本发明所述试纸条的荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，即喷涂有上述技术方案所述重组蛋白。本发明所述荧光微球标记的重组蛋白(重组抗原)，用于捕获样本中的抗2019-nCoV抗体，重组抗原包含了病毒中的多种优势表位，并去除了无关序列，因此可以高效捕获样本中的抗病毒抗体，且避免了无关序列蛋白可能发生的非特异性反应。在本发明中，所述荧光微球优选为聚苯乙烯包裹稀土离子Eu+的微球，所述荧光微球表面有羧基基团。在本发明中，所述荧光微球的直径优选为100～300nm。本发明优选采用交联剂偶联重组蛋白和荧光微球，所述交联剂优选包括EDC、DCC或NHS，更优选为EDC。在本发明中，所述荧光微球标记的重组蛋白的喷涂浓度优选为5～15μg/mL，更优选为10μg/mL。在本发明中，所述喷涂优选的通过金标点膜喷金仪实现。本发明对所述荧光微球的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规荧光微球市售来源即可。
本发明所述试纸条的硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，所述质控区喷涂有抗N蛋白抗体。在本发明中，所述抗N蛋白抗体的来源为抗2019-nCoV病毒的NP蛋白兔血清，优选由北京德奥平生物技术有限公司生产。在本发明中，所述2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白的喷涂浓度优选为0.8～1.2mg/mL，更优选为1mg/mL；喷膜量优选为1.0～1.3μL/cm，更优选为1.2μL/cm。本发明所述N蛋白抗体的喷涂浓度优选为0.4～0.6mg/mL，更优选为0.5mg/mL；喷膜量优选为1.0～1.3μL/cm，更优选为1.2μL/cm。
本发明对所述底板、样品吸收垫和吸水垫没有特殊限定，采用本领域常规的试纸条使用的底板、样品吸收垫和吸水垫即可。
在本发明中，所述试纸条检测的样本优选包括唾液、尿液、血清、血浆和全血样本。
在本发明中，所述试纸条还包括样本稀释液；所述样本稀释液包括PB溶液和Tween-20；所述PB溶液的浓度为0.008～0.012mol/L，更优选为0.01mol/L；所述样本稀释液中Tween-20的体积含量为0.4％～0.6％，更优选为0.5％。本发明所述样本在检测前，优选使用样本稀释液进行稀释，所述稀释的倍数优选为8～12倍，更优选为10倍。
本发明还提供了上述技术方案所述试纸条的制备方法，包括以下步骤：
1)将活化的荧光微球与上述技术方案所述重组蛋白混合偶联，获得荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白；
2)将所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白喷涂至玻璃纤维膜上获得荧光微球垫；
3)将2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白和抗N蛋白抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和质控区获得固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜；
4)在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、荧光微球垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜和吸水垫，获得试纸条。
本发明将活化的荧光微球与上述技术方案所述重组蛋白混合偶联，获得荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白。在本发明中，所述活化的荧光微球的制备方法优选包括以下步骤：将荧光微球与交联剂和活化缓冲液混合震荡20～40min，得到活化的荧光微球。在本发明中，所述活化缓冲液优选为20～200mmol/L，更优选为100mmol/L的MES，pH值为6.0。在本发明中，所述交联剂优选包括EDC、DCC或NHS，更优选为EDC。在本发明中，所述荧光微球、交联剂和活化缓冲液的比例优选为100μL:2mg:400μL。在本发明中，所述震荡的时间优选为30min。本发明对所述荧光微球活化的温度没有特殊限定，采用室温即可，如20～25℃。混合震荡后，本发明优选进行离心操作，弃上清，收集活化后的荧光微球；所述离心的转速优选为8000～11000rpm，更优选为10000rpm，所述离心的时间优选为7～12min，更优选为10min，所述离心的温度优选为2～5℃，更优选为4℃。在本发明中，所述偶联具体为将所述活化后的荧光微球、重组蛋白和偶联缓冲液混合，震荡偶联。在本发明中，以活化前荧光微球的体积计，所述荧光微球与重组蛋白的比例优选为90～110μL:2μg，更优选为100μL:2μg。在本发明中，所述震荡偶联的时间优选为25～35min，更优选为30min。本发明对所述震荡偶联的温度优选为22～27℃，更优选为25℃。在本发明中，所述偶联缓冲液优选为PB溶液，所述PB溶液的浓度优选为90～120mmol/L，更优选为100mmol/L；所述PB溶液的pH值优选为6.8～7.2，更优选为7.0。本发明在所述震荡偶联后，优选的还包括震荡封闭操作；所述震荡封闭优选的在所述震荡偶联体系中加入BSA溶液进行震荡封闭；所述BSA溶液的质量浓度优选为0.9％～1.3％，更优选为1.0％；所述BSA溶液与活化前荧光微球的体积比优选为(0.9～1.1):1，更优选等体积。在本发明中，所述震荡封闭的时间优选为10～14h，更优选为12h。本发明在所述震荡封闭后，优选的进行离心、重悬和保存。在本发明中，所述离心的转速优选为9000～12000rpm，更优选为10000rpm，所述离心的时间优选的为8～11min，更优选为10min，所述离心的温度优选为3～5℃，更优选为4℃。在本发明中，所述重悬用贮存缓冲液重悬液优选为包括质量分数0.01％NaN3和质量分数0.1％BSA的PB溶液，所述贮存缓冲液的pH值优选为7.2～7.6，更优选为7.4。在本发明中，优选的用所述贮存缓冲液洗涤后进行保存，所述洗涤的次数优选为1～2次。在本发明中，所述保存的温度优选为3～5℃，更优选为4℃；所述保存优选的避光进行。
得到荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白后，本发明将所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白喷涂至玻璃纤维膜上获得荧光微球垫。在本发明中，所述喷涂前优选将荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白进行稀释操作。本发明优选使用上述贮存缓冲液进行稀释，所述稀释后的浓度优选为5～15μg/mL，更优选为10μg/mL。本发明优选使用金标点膜喷金仪进行喷涂，所述喷涂的速度优选为0.8～1.2μL/mL，更优选为1μL/mL。在本发明中，喷涂后优选进行干燥，所述干燥的时间优选为35～39℃，更优选为37℃，所述干燥的时间优选为2.5～3.5h，更优选为3h。
将2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白和抗N蛋白抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和质控区获得固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜。本发明在喷涂前，优选对2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白进行稀释，优选稀释至0.8～1.2mg/mL，更优选为1mg/mL。本发明优选使用PB缓冲液进行稀释，所述PB缓冲液的浓度优选为0.03～0.06mol/L，更优选为0.05mol/L，pH值优选为7.0～7.3，更优选为7.2。本发明优选使用金标点膜喷金仪将2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白喷涂于NC膜上的检测区(T)，喷膜量优选为1.0～1.3μL/cm，更优选为1.2μL/cm。本发明优选使用相同的PB缓冲液在喷涂前对N蛋白抗体进行稀释，优选稀释到0.4～0.6mg/mL，更优选为0.5mg/mL。本发明优选使用金标点膜喷金仪将N蛋白抗体喷涂于NC膜上的检测区(C)，喷膜量优选为1.0～1.3μL/cm，更优选为1.2μL/cm。喷涂后，优选进行干燥，所述干燥的时间优选为35～39℃，更优选为37℃，所述干燥的时间优选为4～6h，更优选为5h。
在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、荧光微球垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜和吸水垫，获得试纸条。具体的，本发明优选将样品吸收垫、玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜、吸水垫从左至右依次搭接粘贴固定在底板上，样品吸收垫的末端与玻璃纤维垫始段相连，玻璃纤维垫的末端与硝酸纤维素膜的始端相连，硝酸纤维素膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐。本发明优选使用机器将试纸条进行切割，优选切成3.8～4.0mm，更优选3.96mm宽的小条，装在特制的塑料制卡中，形成试纸卡。
本发明的检测原理为：样本加入到检测孔后，样本在毛细作用下移动，样本中的新型冠状病毒抗体同荧光微球标记的新型冠状病毒多优势表位融合蛋白结合形成微球-抗原-抗体的复合物，该免疫复合物再沿着硝酸纤维素膜层析至检测区(T)，与预包被的新型冠状病毒多优势表位融合蛋白结合，其荧光强度与样本中的新型冠状病毒抗体含量成正比；未和T线结合的微球标记的新型冠状病毒多优势表位融合蛋白层析至质控区(C)，与预包被的兔抗N蛋白抗体结合。
在本发明中，所述试纸条的使用方法优选包括以下步骤：将待测样本加入试纸条的加样孔中，20～25℃作用15min，使用荧光检测仪进行检测。荧光检测仪根据测定得到的荧光信号强度，再通过软件处理计算获得对应的抗病毒抗体的含量。
本发明还提供了上述技术方案所述重组蛋白或上述技术方案所述试纸条在制备2019新型冠状病毒检测试剂中的应用。
下面结合具体实施例对本发明所述的一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
双抗原夹心法新型冠状病毒2019-nCoV抗体检测试剂条的制备。
1.新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合重组蛋白的制备:
通过计算预测筛选新型冠状病毒2019-nCoV N蛋白、S蛋白、M蛋白的优势抗原表位，并通过柔性多肽(GGGS)连接到一起，组成了2019-nCoV病毒多优势表位融合蛋白，氨基酸序列如序列SEQ ID NO.1所示。委托北京德奥平生物技术有限公司生产制备，纯度大于95％。
DQVILLNKHIDAYKTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDFSKQGGGSDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHAGGGSTLAILTALRLCAYCCNIVNVSLVKPSFYVYSRVKNLNSSRVPDLLV
2.荧光微球标记新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合抗原的制备
(1)活化：取市售的内部包埋荧光染料、表面修饰有羧基官能团的微球悬液100μL混悬于400μL活化缓冲液中(100mmol/L MES pH6.0)，加入2mg EDC，混匀后室温震荡活化30min；
(2)偶联：将(1)所述混悬液于4℃，10000rpm离心10min后弃上清，重悬于偶联缓冲液(100mmol/L PB pH7.0)中，加入2μg新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白，混匀后25℃震荡偶联30min；
(3)封闭：将(2)所述混悬液加入1％的BSA溶液100μL，混匀后室温震荡封闭过夜；
(4)贮存：将(3)所述混悬液于4℃10000rpm离心10min后弃上清，重悬于贮存缓冲液中(0.01％NaN3、0.1％BSA的pH 7.4的PB缓冲液)，以此法洗涤微球1次，混匀后于4℃避光保存。
3.玻璃纤维垫的制备
将贮存的荧光微球标记的新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白以贮存缓冲液稀释到浓度为10μg/mL，用金标点膜喷金仪喷涂，喷涂速度为1μL/mL，37℃干燥3h，取出密封保存。
4.硝酸纤维素(NC)膜的制备
用0.05mol/L、pH 7.2的PB缓冲液将新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白稀释到1mg/mL，用金标点膜喷金仪将其喷涂于NC膜上的检测区(T)，喷膜量为1.2μL/cm；用0.05mol/L、pH7.2的PB缓冲液将兔抗2019-nCoVN蛋白抗体稀释到0.5mg/mL，用金标点膜喷金仪将其喷涂于NC膜上的检测区(C)，喷膜量为1.2μL/cm；37℃干燥5h，备用。
5.试纸条的组装
将样品吸收垫、玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜、吸水垫从左至右依次搭接粘贴固定在底板上，样品吸收垫的末端与玻璃纤维垫始段相连，玻璃纤维垫的末端与硝酸纤维素膜的始端相连，硝酸纤维素膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐，然后用机器切成3.96mm宽的小条，装在特制的塑料制卡中，形成试纸卡。
实施例2
双抗原夹心法新型冠状病毒2019-nCoV抗体检测试剂条的应用
1、样品前处理
吸取20μL全血样本加入到200μL样本稀释液，充分混匀。
2、用试纸条检测
用微量移液器准确吸取80μL待检样品溶液于试纸条加样孔中，室温(20～25℃)作用15min；将试纸卡插入荧光检测仪的承载器中，通过触摸显示屏选择待检项目，按下“开始检测”按键，荧光检测仪将自动对试纸卡进行扫描测试；通过仪器的显示屏幕上读取或打印检测结果。
3、检测结果分析
定量检测
测试完成后，仪器获得试纸卡上检测区时间分辨荧光强度与质控区时间分辨荧光强度的比值，基于预先内置的试纸卡上检测区时间分辨荧光强度与质控区时间分辨荧光强度的比值与新型冠状病毒2019-nCoV抗体的关系曲线，获得待测样品中新型冠状病毒2019-nCoV抗体的含量。
曲线方程采用四参数拟合:y＝(A-D)/[1+(x/C)^B]+D
其中：A＝2734.54812，B＝-0.83893，C＝113356.11891，D＝0-.0051
若质控区未检出荧光信号强度，表明不正确的操作过程或试纸卡已失效。
实施例3
抗干扰性检测
在正常人全血中添加1％(V/V)鼠抗2019-nCoV N蛋白血清，模拟制备阳性全血样本。在正常人全血和该模拟的阳性样本中添加不同浓度的人IgG，人IgM，测试添加前后数值，观测内源性无关IgG和IgM是否对测定结果有影响。
Figure GDA0002449599560000121
由表可见，添加干扰物质前后相对偏差小于5％，对测定结果几乎没有影响。表明双抗原夹心法不受样本中非病毒特异性抗体含量的影响，特异性高。
实施例4
临床样本的参考值(cutoff值)的确定
选取临床样本60例健康人(无2019新型冠状病毒感染)，结果如图1所示，本发明测定2019新型冠状病毒感染抗体的时间分辨免疫层析试纸条测定健康人群的cutoff值为0.1。
由上述实施例可知，本发明提供的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，即重组蛋白，通过融合新型冠状病毒结构蛋白的多个优势表位，实现了双抗原夹心检测抗病毒抗体，不受样本中无关Ig的干扰，因此检测的特异性，灵敏度更高。同时本发明所述试纸条适用于唾液、尿液、血液样本，灵活方便，有利于医疗机构尤其是基层医疗的推广，能够有效的辅助2019新型冠状病毒的防控工作。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国人民解放军总医院
北京丹大生物技术有限公司
<120> 一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 273
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe
1 5 10 15
Pro Pro Thr Glu Pro Lys Lys Asp Lys Lys Lys Lys Ala Asp Glu Thr
20 25 30
Gln Ala Leu Pro Gln Arg Gln Lys Lys Gln Gln Thr Val Thr Leu Leu
35 40 45
Pro Ala Ala Asp Leu Asp Asp Phe Ser Lys Gln Gly Gly Gly Ser Asp
50 55 60
Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val
65 70 75 80
Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro
85 90 95
Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe
100 105 110
Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr
115 120 125
Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr
130 135 140
Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln
145 150 155 160
Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro
165 170 175
Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val
180 185 190
Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala Val Leu
195 200 205
Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Thr Leu Ala Ile Leu Thr Ala Leu Arg Leu Cys Ala Tyr
225 230 235 240
Cys Cys Asn Ile Val Asn Val Ser Leu Val Lys Pro Ser Phe Tyr Val
245 250 255
Tyr Ser Arg Val Lys Asn Leu Asn Ser Ser Arg Val Pro Asp Leu Leu
260 265 270
Val

Claims (9)

1.一种双抗原夹心法检测新型冠状病毒2019-nCoV抗体的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种双抗原夹心法检测新型冠状病毒2019-nCoV抗体的试纸条，包括底板以及依次搭接粘贴在底板上的样品吸收垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白，所述质控区喷涂有抗N蛋白抗体；所述新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白为权利要求1所述的重组蛋白。
3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条检测的样本包括唾液、尿液、血清、血浆和全血样本。
4.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括样本稀释液；所述样本稀释液包括PB溶液和Tween-20；所述PB溶液的浓度为0.008～0.012mol/L；所述样本稀释液中Tween-20的体积含量为0.4％～0.6％。
5.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球为聚苯乙烯包裹稀土离子Eu+的微球，所述荧光微球表面有羧基基团。
6.根据权利要求2或5所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球的直径为100～300nm。
7.权利要求2～6任一项所述试纸条的制备方法，包括以下步骤：
1)将活化的荧光微球与权利要求1所述重组蛋白混合偶联，获得荧光微球标记的新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白；
2)将所述荧光微球标记的新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白喷涂至玻璃纤维膜上获得荧光微球垫；
3)将新型冠状病毒2019-nCoV多优势表位融合蛋白和抗N蛋白抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和质控区获得固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜；
4)在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、荧光微球垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜和吸水垫，获得试纸条。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述活化的荧光微球的制备方法包括以下步骤：将荧光微球与交联剂和活化缓冲液混合震荡20～40min，得到活化的荧光微球。
9.权利要求1所述重组蛋白或权利要求2～6任一项所述试纸条在制备新型冠状病毒2019-nCoV检测试剂中的应用。
CN202010092791.0A 2020-02-14 2020-02-14 一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用 Active CN111303297B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010092791.0A CN111303297B (zh) 2020-02-14 2020-02-14 一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010092791.0A CN111303297B (zh) 2020-02-14 2020-02-14 一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111303297A CN111303297A (zh) 2020-06-19
CN111303297B true CN111303297B (zh) 2021-08-31

Family

ID=71152874

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010092791.0A Active CN111303297B (zh) 2020-02-14 2020-02-14 一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111303297B (zh)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111751527A (zh) * 2020-06-29 2020-10-09 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 新型冠状病毒IgG和IgM抗体检测试剂盒及其制备方法和应用
CN111518176B (zh) * 2020-07-06 2020-11-10 北京纳百生物科技有限公司 一种用于新型冠状病毒抗体双抗原夹心检测的配对抗原、检测试纸及其制备方法
CN111638332B (zh) * 2020-07-13 2023-12-19 浙江省人民医院 一种新型冠状病毒IgA/IgM/IgG抗体ELISA检测试剂盒
CN111896747A (zh) * 2020-08-02 2020-11-06 广州德成生物科技有限公司 检测新型冠状病毒IgM和IgG的免疫层析试纸
CN112067712B (zh) * 2020-08-18 2022-11-01 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 一种诊断新型冠状病毒的挥发性标志物及其应用
CN112028977A (zh) * 2020-08-18 2020-12-04 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 一种新型冠状病毒n蛋白抗原变体及其在新型冠状病毒抗体检测中的应用
CN111999496A (zh) * 2020-08-20 2020-11-27 必欧瀚生物技术（合肥）有限公司 一种SARS-CoV-2抗原抗体联合检测的试剂盒及其制备方法
CN112098656A (zh) * 2020-08-25 2020-12-18 广州优迪生物科技股份有限公司 用于检测人SARS-CoV-2的HRP免疫层析试剂条及其制备方法
CN112710844B (zh) * 2020-12-16 2023-07-07 北京开景基因技术有限公司 用于检测新型冠状病毒中和抗体的半定量试剂盒及方法
CN112321688B (zh) * 2021-01-06 2021-03-26 广东华南疫苗股份有限公司 稳定的冠状病毒重组蛋白二聚体及其表达载体
CN113621076A (zh) * 2021-08-31 2021-11-09 南华大学 一种针对新冠病毒变异毒株Delta的融合蛋白、喷鼻式疫苗及其制备方法和应用
CN116577503A (zh) * 2023-06-25 2023-08-11 杭州德同生物技术有限公司 新型冠状病毒融合表位抗原、尿液抗体测试装置及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109765384A (zh) * 2019-01-29 2019-05-17 北京勤邦生物技术有限公司 一种犬冠状病毒抗体荧光检测试纸条及其制备方法和应用
WO2019169120A1 (en) * 2018-02-28 2019-09-06 University Of Washington Self-asssembling nanostructure vaccines
CN110376386A (zh) * 2019-07-26 2019-10-25 北京丹大生物技术有限公司 一种检测霉酚酸的试纸条、试剂盒及试纸条的制备方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI303249B (en) * 2004-01-09 2008-11-21 Nat Health Research Institutes Receptor binding polypeptides

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019169120A1 (en) * 2018-02-28 2019-09-06 University Of Washington Self-asssembling nanostructure vaccines
CN109765384A (zh) * 2019-01-29 2019-05-17 北京勤邦生物技术有限公司 一种犬冠状病毒抗体荧光检测试纸条及其制备方法和应用
CN110376386A (zh) * 2019-07-26 2019-10-25 北京丹大生物技术有限公司 一种检测霉酚酸的试纸条、试剂盒及试纸条的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A novel coronavirus (2019-nCoV) causing pneumonia-associated respiratory syndrome;Shibo Jiang等;《Cell Mol Immunol.》;20200205;第17卷(第5期);554 *
Antibody-dependent SARS coronavirus infection is mediated by antibodies against spike proteins;Sheng-Fan Wang等;《Biochem Biophys Res Commun》;20140822;第451卷(第2期);208-214 *
新型冠状病毒实验室诊断方法学研究;李振勇;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 (博士) 医药卫生科技辑》;中国学术期刊（光盘版）电子杂志社;20051215(第08期);E060-2 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111303297A (zh) 2020-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111303297B (zh) 一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用
CN111233985A (zh) 一种新型冠状病毒IgA抗体快速检测试纸条的制备方法
EP4177265A1 (en) Iga antibody specifically recognizing rbd protein and testing kit
CN113215107B (zh) 一种检测新型冠状病毒的时间分辨荧光免疫试剂盒及其制备方法
JP4813471B2 (ja) ハンタウイルス感染の診断のための方法および試薬
Roggendorf et al. Comparison of solid phase test systems for demonstrating antibodies against hepatitis A virus (anti‐HAV) of the IgM‐class
US11693011B2 (en) Neutralizing antibody immunoassays
CN111537720A (zh) 一种新型冠状病毒2019-nCoV IgM/IgG抗体联合检测试剂盒的制备方法
CN112964884A (zh) 一种诊断标志物及其在covid-19诊断及冠状病毒既往感染检测中的应用
CN111423496B (zh) 检测新型冠状病毒的多肽或其组合
WO2021205228A1 (en) Assay device
CN112946260B (zh) 检测新冠肺炎病毒抗体的荧光免疫层析试剂及其制备方法
CN112305218A (zh) 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫侧向层析检测方法及其应用
CN110568178A (zh) 一种寨卡病毒ns1抗原及其在制备荧光免疫层析试剂中的应用
CN110568177A (zh) 一种寨卡病毒e抗原及其在荧光免疫层析试剂中的应用
CN105759028A (zh) 一种诺如病毒拉曼探针标记的免疫层析检测方法
Laing et al. A betacoronavirus multiplex microsphere immunoassay detects early SARS-CoV-2 seroconversion and controls for pre-existing seasonal human coronavirus antibody cross-reactivity
KR101814758B1 (ko) 돼지 콜레라 바이러스의 e2 단백질 및 이에 특이적인 단일클론항체를 이용한 돼지 콜레라 감염여부를 진단하는 방법 및 이를 구현하기 위한 진단키트
EP2856163B1 (en) Method for diagnosing and differentiating hiv-2 infections
EP4121765A1 (en) Coronavirus assay
CN101762703A (zh) 丙型肝炎病毒(hcv)抗体检验试剂盒及其制备方法和检测方法
Stern et al. A bead-based multiplex assay covering all coronaviruses pathogenic for humans for sensitive and specific surveillance of SARS-CoV-2 humoral immunity
CN114478716B (zh) 一种多肽组合及其在新型冠状病毒抗体检测中的应用
CN100425991C (zh) 一种用于检测sars抗体的免疫微球及其制备方法和用途
CN113912677B (zh) 丙肝病毒检测相关肽及其可视时间分辨荧光微球试纸条

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant