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CN111285875B - 一种杂环化合物、其应用及含其的药物组合物 - Google Patents

一种杂环化合物、其应用及含其的药物组合物 Download PDF

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CN111285875B
CN111285875B CN201911238227.9A CN201911238227A CN111285875B CN 111285875 B CN111285875 B CN 111285875B CN 201911238227 A CN201911238227 A CN 201911238227A CN 111285875 B CN111285875 B CN 111285875B
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黄彬
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吴予川
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Suzhou Sinoway Pharmaceutical Technology Co ltd
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Abstract

本发明公开了一种杂环化合物、其应用及含其的药物组合物。该化合物的结构如式I‑0所示，其对RET激酶的抑制效果较佳。

Description

一种杂环化合物、其应用及含其的药物组合物
技术领域
本发明涉及一种杂环化合物、其应用及含其的药物组合物。
背景技术
RET基因由Takahashi等(Takahashi M，Ritz J，Cooper GM.Activation of anovel human transforming gene，ret，by DNA rearrangement.Cell,1985,42(2)：581-588)在转化培养的小鼠NTH3T3细胞中发现，并被命名为RET基因。RET基因是位于10号染色体长臂上的原癌基因(10q11.2)，编码的RET蛋白是一种酪氨酸激酶受体，由富含半胱氨酸的钙黏素样胞外区、跨膜区以及具有酪氨酸激酶活性的胞内域三部分构成，与ALK激酶域有37％氨基酸相同。RET蛋白通过配体与受体的结合，刺激受体二聚化，胞内区域发生自身磷酸化和细胞内底物磷酸化，从而激活下游信号，在细胞的增殖、迁移和分化过程中起重要作用。
RET在正常生理状态下与肾的发育和胃肠神经系统发育有关，但是，RET基因的突变导致不依赖配体的，组成型的RET激酶异常激活，将导致肿瘤发生。RET激酶的激活主要有两种机制：1.RET基因点突变；2.RET基因重排。RET的错义突变可能发生在胞外的Cys残基上(如：C620R，C634R/W)，引起异常的激酶激活。突变也可能发生在胞内激酶活性域(如：V804L/M，M918T)，这种突变将促进不依赖配体的RET激酶激活(Romei C,Ciampi R,EliseiR.A comprehensive overview of the role of the RET proto-oncogene in thyroidcarcinoma.Nat Rev Endocrinol 2016；12:192-202.)。甲状腺髓样癌(MTC)中RET的点突变非常常见，存在于大约50％的散发性MTC及几乎所有的家族性MTC中。RET基因通过本身断裂与其他基因接合的方式发生重组，成为一个新的融合基因，使RET酪氨酸激酶的活化逃脱配体的调控，进一步自我磷酸化，从而增强信号转导功能，促使激酶活化，引发肿瘤生成。在10-20％的甲状腺乳头状癌(PTC)中，1-2％的非小细胞肺癌(NSCLC)和很多其他癌症，如结肠癌和乳腺癌中都存在RET融合。以上结果表明：RET信号通路的失调是很多肿瘤疾病的重要驱动原因。
目前尚无针对RET的特异性抑制剂上市，但是一些多靶点酪氨酸激酶抑制剂已被用于RET基因突变患者的临床研究，如：凡德他尼，卡博替尼和乐伐替尼等。目前多靶点酪氨酸激酶抑制剂治疗RET融合NSCLC患者，在有效率和生存数据上差于其他NSCLC驱动基因。另外患者长期暴露于RET TKIs中，因为对VEGFR激酶的抑制作用，产生3-4级毒性发生率高。因此，研发选择性更高，活性更强的RET特异性抑制剂，增加疗效并限制毒性，有望成为治疗甲状腺癌，NSCLC等多种恶性肿瘤的新手段。
Blueprint Medicines专利WO2017079140包含了正在临床的RET抑制剂化合物BLU-667
Figure BDA0002305458380000021
Blueprint Medicines专利WO2018017983公开了另一类化合物，化合物218结构如下：
Figure BDA0002305458380000022
发明内容
本发明所要解决的技术问题是现有的化合物的结构较为单一，为此，本发明提供了一种杂环化合物、其应用及含其的药物组合物。该化合物对RET激酶的抑制效果较佳。
本发明提供了一种如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐；
Figure BDA0002305458380000023
其中，R1为氢、氟、二氟甲基、甲氧基、环丙基或C1～C4烷基；
Y1为N或CH；
Y2为N、CH、C(F)、C(Cl)或C(CN)；
R9为氢、甲基或二氟甲基；
Figure BDA0002305458380000031
中的
Figure BDA0002305458380000032
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000033
为单键时，X1为N、CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)；当
Figure BDA0002305458380000034
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA0002305458380000035
中的
Figure BDA0002305458380000036
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000037
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA0002305458380000038
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA0002305458380000039
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为N或CR3；R3为氢、氰基、氨基、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A3为C(＝O)、NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A4为NR5、C(＝O)、C(＝S)或CH2；R5为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
n为0或1；
A5为NR10、CH2、O或S；R10为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure BDA00023054583800000310
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或C1～C4烷基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为N或CH；
R6为氢、卤素、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基；
R7为氢或卤素；
R8为氢、卤素、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I-0或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述，未注明基团的定义如前任一方案所述(以下简称“在某一技术方案中”)：R1为C1～C4烷基。
在某一技术方案中：R1为甲基。
在某一技术方案中：Y1为CH。
在某一技术方案中：Y2为N或CH。
在某一技术方案中：Y2为N。
在某一技术方案中：R9为氢或甲基。
在某一技术方案中：R9为甲基。
在某一技术方案中：
Figure BDA0002305458380000041
中的
Figure BDA0002305458380000042
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000043
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA0002305458380000044
为双键时，X1为C。
在某一技术方案中：
Figure BDA0002305458380000045
中的
Figure BDA0002305458380000046
为单键；当
Figure BDA0002305458380000047
为单键时，X1为N或CH。
在某一技术方案中：s为1；t为1。
在某一技术方案中：X4为
Figure BDA0002305458380000048
在某一技术方案中：X4为
Figure BDA0002305458380000049
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA00023054583800000410
时，A2为CR3；R3为氢、氨基或C1～C4烷基。
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA00023054583800000411
时，A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基。
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA00023054583800000412
时，A2为CR3；R3为氨基、甲基或异丙基。
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA0002305458380000051
时，A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基。
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA0002305458380000052
时，A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、-CH2CF3、环丙烷、-CH2-环丙烷。
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA0002305458380000053
时，A4为C(＝O)、C(＝S)或CH2。
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA0002305458380000054
时，A4为C(＝O)或CH2。
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA0002305458380000055
时，A4为C(＝O)。
在某一技术方案中：当X4为
Figure BDA0002305458380000056
时，A5为NR10、CH2、O或S；R10为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、-CH2CF3、环丙烷、-CH2-环丙烷。
在某一技术方案中：n为1。
在某一技术方案中：X6为CHR2。
在某一技术方案中：R2为C1～C4烷基。
在某一技术方案中：R2为氢或甲基。
在某一技术方案中：X5为CH。
在某一技术方案中：R6为氢。
在某一技术方案中：R7为卤素。
在某一技术方案中：R7为F。
在某一技术方案中：R8为氢。
在某一技术方案中：R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
R9为氢或甲基；
Figure BDA0002305458380000061
中的
Figure BDA0002305458380000062
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000063
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA0002305458380000064
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA0002305458380000065
中的
Figure BDA0002305458380000066
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000067
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA0002305458380000068
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA0002305458380000069
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为CR3；R3为氢、氨基或C1～C4烷基；
A3为C(＝O)、NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A4为C(＝O)、C(＝S)或CH2；
n为0或1；
A5为NR10、CH2、O或S；R10为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure BDA00023054583800000610
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或C1～C4烷基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢。
在某一技术方案中：R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
R9为氢或甲基；
Figure BDA0002305458380000071
中的
Figure BDA0002305458380000072
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000073
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA0002305458380000074
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA0002305458380000075
中的
Figure BDA0002305458380000076
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000077
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA0002305458380000078
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA0002305458380000079
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A4为C(＝O)或CH2；
n为0或1；
A5为NR10、CH2、O或S；R10为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure BDA00023054583800000710
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或C1～C4烷基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢。
在某一技术方案中：R1为甲基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
R9为氢或甲基；
Figure BDA0002305458380000081
中的
Figure BDA0002305458380000082
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000083
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA0002305458380000084
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA0002305458380000085
中的
Figure BDA0002305458380000086
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000087
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA0002305458380000088
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA0002305458380000089
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基、甲基或异丙基；
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、-CH2CF3、环丙烷、-CH2-环丙烷；
A4为C(＝O)或CH2；
n为0或1；
A5为NR10、CH2、O或S；R10为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、-CH2CF3、环丙烷、-CH2-环丙烷；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure BDA00023054583800000810
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或甲基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或甲基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为F；
R8为氢。
在某一技术方案中：R1为甲基；
Y1为CH；
Y2为N；
R9为甲基；
Figure BDA0002305458380000091
中的
Figure BDA0002305458380000092
为单键；当
Figure BDA0002305458380000093
为单键时，X1为N或CH；
s为1；t为1；
Figure BDA0002305458380000094
中的
Figure BDA0002305458380000095
为单键；当
Figure BDA0002305458380000096
为单键时，X3为N，X2为C(＝O)；
X4为
Figure BDA0002305458380000097
{其中，X4的b端与X3连接}
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A4为C(＝O)；
n为1；
X6为CHR2；
R2为C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢。
在某一技术方案中：R1为氢、氟、二氟甲基、甲氧基、环丙基或C1～C4烷基；
Y1为N或CH；
Y2为N、CH、C(F)、C(Cl)或C(CN)；
R9为氢、甲基或二氟甲基；
Figure BDA0002305458380000098
中的
Figure BDA0002305458380000099
为单键或双键；当
Figure BDA00023054583800000910
为单键时，X1为N、CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)；当
Figure BDA00023054583800000911
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA00023054583800000912
中的
Figure BDA00023054583800000913
为单键或双键；当
Figure BDA00023054583800000914
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA00023054583800000915
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA0002305458380000101
{其中，X4的b端与X3连接}
A5为NR10、CH2、O或S；R10为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure BDA0002305458380000102
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或C1～C4烷基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为N或CH；
R6为氢、卤素、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基；
R7为氢或卤素；
R8为氢、卤素、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基。
在某一技术方案中：当R1为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R1为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当
Figure BDA0002305458380000103
为双键时，
Figure BDA0002305458380000104
为
Figure BDA0002305458380000111
和/或
Figure BDA0002305458380000112
在某一技术方案中：当
Figure BDA0002305458380000113
为单键、X1为CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)时，
Figure BDA0002305458380000114
为
Figure BDA0002305458380000121
和/或
Figure BDA0002305458380000122
在某一技术方案中：当R3为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R3为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基或异丙基。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟取代的C1～C4烷基为三氟甲基。
在某一技术方案中：当R3为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R4为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R4为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基或正丁基。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟取代的C1～C4烷基为2,2,2-三氟乙基或2,2-二氟乙基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基的个数为1个。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基为环丙基甲基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R5为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R5为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟取代的C1～C4烷基为三氟甲基。
在某一技术方案中：当R5为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R10为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R10为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基或正丁基。
在某一技术方案中：当R10为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R10为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R10为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R10为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟取代的C1～C4烷基为2,2,2-三氟乙基或2,2-二氟乙基。
在某一技术方案中：当R10为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基的个数为1个。
在某一技术方案中：当R10为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R10为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R10为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基为环丙基甲基。
在某一技术方案中：当R10为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R10为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基。
在某一技术方案中：当R10为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R10为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R10为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R11为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R11为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基或正丁基。
在某一技术方案中：当R12为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R12为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基或正丁基。
在某一技术方案中：当X6为CHR2时，
Figure BDA0002305458380000161
为
Figure BDA0002305458380000162
和/或
Figure BDA0002305458380000163
在某一技术方案中：当X6为CHR2、
Figure BDA0002305458380000164
为双键时，
Figure BDA0002305458380000171
为
Figure BDA0002305458380000172
Figure BDA0002305458380000173
和
Figure BDA0002305458380000181
中的一种或多种。
在某一技术方案中：当X6为CHR2、
Figure BDA0002305458380000182
为单键、X1为CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)时，
Figure BDA0002305458380000183
为
Figure BDA0002305458380000184
Figure BDA0002305458380000191
和
Figure BDA0002305458380000192
中的一种或多种。
在某一技术方案中：当X6为CHR2、
Figure BDA0002305458380000193
为单键、X1为N时，
Figure BDA0002305458380000194
为
Figure BDA0002305458380000195
和/或
Figure BDA0002305458380000201
在某一技术方案中：当R2为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R2为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当R6为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R6为卤素时，所述的卤素为氟。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”独立地为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”为氟。
在某一技术方案中：当R6为未取代或卤素取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R6为未取代或卤素取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的卤素取代的C1～C4烷基为二氟甲基。
在某一技术方案中：当R7为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R7为卤素时，所述的卤素为氟。
在某一技术方案中：当R8为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R8为卤素时，所述的卤素为氟。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”独立地为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”为氟。
在某一技术方案中：当R8为未取代或卤素取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R8为未取代或卤素取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的卤素取代的C1～C4烷基为二氟甲基。
在某一技术方案中：除已确定立体构型的部分外，所述的杂环化合物I-0的其余部分均为各立体构型的混合。
在某一技术方案中：所述的杂环化合物I-0中所有原子均为天然同位素丰度的原子。
在某一技术方案中：R1为氢、氟、二氟甲基、甲氧基、环丙基或C1～C4烷基；
Y1为N或CH；
Y2为N、CH、C(F)、C(Cl)或C(CN)；
R9为氢、甲基或二氟甲基；
Figure BDA0002305458380000211
中的
Figure BDA0002305458380000212
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000213
为单键时，X1为N、CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)；当
Figure BDA0002305458380000214
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA0002305458380000215
中的
Figure BDA0002305458380000216
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000217
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA0002305458380000218
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA0002305458380000219
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为N或CR3；R3为氢、氰基、氨基、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A3为C(＝O)、NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A4为NR5、C(＝O)或CH2；R5为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
n为0或1；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为N或CH；
R6为氢、卤素、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基；
R7为氢或卤素；
R8为氢、卤素、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基。
在某一技术方案中：R1为氢、氟、二氟甲基、甲氧基、环丙基或C1～C4烷基；
Y1为N或CH；
Y2为N、CH、C(F)、C(Cl)或C(CN)；
R9为氢、甲基或二氟甲基；
Figure BDA0002305458380000221
中的
Figure BDA0002305458380000222
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000223
为单键时，X1为N、CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)；当
Figure BDA0002305458380000224
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA0002305458380000225
中的
Figure BDA0002305458380000226
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000227
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA0002305458380000228
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA0002305458380000229
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为N或CR3；R3为氢、氰基、氨基、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A3为C(＝O)、NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A4为NR5、C(＝O)或CH2；R5为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
n为0或1；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为N或CH；
R6为氢、卤素、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基；
R7为氢或卤素；
R8为氢、卤素。
在某一技术方案中：当R1为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R1为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当
Figure BDA0002305458380000231
为双键时，
Figure BDA0002305458380000232
为
Figure BDA0002305458380000233
和/或
Figure BDA0002305458380000241
在某一技术方案中：当
Figure BDA0002305458380000242
为单键、X1为CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)时，
Figure BDA0002305458380000243
为
Figure BDA0002305458380000244
和/或
Figure BDA0002305458380000251
在某一技术方案中：当R3为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R3为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基或异丙基。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟取代的C1～C4烷基为三氟甲基。
在某一技术方案中：当R3为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R3为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R4为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R4为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基或乙基。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟取代的C1～C4烷基为2,2,2-三氟乙基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基的个数为1个。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基为环丙基甲基。
在某一技术方案中：当R4为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R5为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R5为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟取代的C1～C4烷基为三氟甲基。
在某一技术方案中：当R5为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R5为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在某一技术方案中：当X6为CHR2时，
Figure BDA0002305458380000271
为
Figure BDA0002305458380000272
和/或
Figure BDA0002305458380000281
在某一技术方案中：当R2为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R2为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当R6为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R6为卤素时，所述的卤素为氟。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”独立地为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”为氟。
在某一技术方案中：当R6为未取代或卤素取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R6为未取代或卤素取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当R6为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的卤素取代的C1～C4烷基为二氟甲基。
在某一技术方案中：当R7为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R7为卤素时，所述的卤素为氟。
在某一技术方案中：当R8为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R8为卤素时，所述的卤素为氟。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”的个数为一个或多个。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”的个数为1个、2个或3个。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”独立地为氟、氯、溴或碘。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的“卤素”为氟。
在某一技术方案中：当R8为未取代或卤素取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
在某一技术方案中：当R8为未取代或卤素取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基。
在某一技术方案中：当R8为卤素取代的C1～C4烷基时，所述的卤素取代的C1～C4烷基为二氟甲基。
在某一技术方案中：R1为C1～C4烷基。
在某一技术方案中：Y1为CH。
在某一技术方案中：Y2为N。
在某一技术方案中：R9为甲基或二氟甲基。
在某一技术方案中：当
Figure BDA0002305458380000291
中的
Figure BDA0002305458380000292
为单键时，X1为N或CH。
在某一技术方案中：s为1；t为1。
在某一技术方案中：
Figure BDA0002305458380000293
中的
Figure BDA0002305458380000294
为单键。
在某一技术方案中：X4为
Figure BDA0002305458380000295
{其中，X4的b端与X3连接}。
在某一技术方案中：A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基。
在某一技术方案中：A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
A4为C(＝O)或CH2。
在某一技术方案中：A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；当A3为CH2、O或S时，A4为CH2。
在某一技术方案中：
Figure BDA0002305458380000301
中的
Figure BDA0002305458380000302
为单键；X3为N，X2为CH2或C(＝O)；
当X2为CH2时，A3为NR4，A4为C(＝O)；
当X2为C(＝O)时，A3为NR4，A4为C(＝O)或CH2，或者，A3为CH2、O或S时，A4为CH2。
在某一技术方案中：n为1。
在某一技术方案中：X6为CHR2。
在某一技术方案中：X5为CH。
在某一技术方案中：R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
在某一技术方案中：R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基或二氟甲基；
Figure BDA0002305458380000303
中的
Figure BDA0002305458380000304
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000305
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA0002305458380000306
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA0002305458380000307
中的
Figure BDA0002305458380000308
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000309
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA00023054583800003010
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA00023054583800003011
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
A4为C(＝O)或CH2；
n为0或1；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
在某一技术方案中：R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基或二氟甲基；
Figure BDA0002305458380000311
中的
Figure BDA0002305458380000312
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000313
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA0002305458380000314
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure BDA0002305458380000315
中的
Figure BDA0002305458380000316
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000317
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA0002305458380000318
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA0002305458380000319
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；当A3为CH2、O或S时，A4为CH2；
n为0或1；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
在某一技术方案中：R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基或二氟甲基；
Figure BDA00023054583800003110
中的
Figure BDA00023054583800003111
为单键或双键；当
Figure BDA00023054583800003112
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA00023054583800003113
为双键时，X1为C；
s为1；t为1；
Figure BDA00023054583800003114
中的
Figure BDA00023054583800003115
为单键；X3为N，X2为CH2或C(＝O)；
X4为
Figure BDA00023054583800003116
{其中，X4的b端与X3连接}
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
A4为C(＝O)或CH2；
n为1；
X6为CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
在某一技术方案中：R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基或二氟甲基；
Figure BDA0002305458380000321
中的
Figure BDA0002305458380000322
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000323
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA0002305458380000324
为双键时，X1为C；
s为1；t为1；
Figure BDA0002305458380000325
中的
Figure BDA0002305458380000326
为单键；X3为N，X2为CH2或C(＝O)；
X4为
Figure BDA0002305458380000327
{其中，X4的b端与X3连接}
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；当A3为CH2、O或S时，A4为CH2；
n为1；
X6为CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
在某一技术方案中：R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基或二氟甲基；
Figure BDA0002305458380000328
中的
Figure BDA0002305458380000329
为单键或双键；当
Figure BDA00023054583800003210
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA00023054583800003211
为双键时，X1为C；
s为1；t为1；
Figure BDA00023054583800003212
中的
Figure BDA00023054583800003213
为单键；X3为N，X2为CH2或C(＝O)；
X4为
Figure BDA00023054583800003214
{其中，X4的b端与X3连接}
当X2为CH2时，A3为NR4，A4为C(＝O)；
当X2为C(＝O)时，A3为NR4，A4为C(＝O)或CH2，或者，A3为CH2、O或S时，A4为CH2；
n为1；
X6为CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I-0为：
Figure BDA0002305458380000331
其中，R1为氢、氟、二氟甲基、甲氧基、环丙基或C1～C4烷基{例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，又例如甲基}；
Y1为N或CH；
Y2为N、CH、C(F)、C(Cl)或C(CN)；
Figure BDA0002305458380000332
中的
Figure BDA0002305458380000333
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000334
为单键时，X1为N、CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)；当
Figure BDA0002305458380000335
为双键时，X1为C；
Figure BDA0002305458380000336
中的
Figure BDA0002305458380000337
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000338
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure BDA0002305458380000339
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure BDA00023054583800003310
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为N或CR3；R3为氢、氰基、氨基、C1～C4烷基{例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，又例如甲基或异丙基}、氟取代的C1～C4烷基{所述的氟的个数为一个或多个[例如2个或3个]；所述的“C1～C4烷基”例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基}、C3～C6环烷基{例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基}、或、氟取代的C3～C6环烷基{所述的氟的个数为一个或多个[例如2个或3个]；所述的“C3～C6环烷基”例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基}；
A3为C(＝O)、NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基{例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，又例如甲基}、氟取代的C1～C4烷基{所述的氟的个数为一个或多个[例如2个或3个]；所述的“C1～C4烷基”例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基}、C3～C6环烷基{例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基}、或、氟取代的C3～C6环烷基{所述的氟的个数为一个或多个[例如2个或3个]；所述的“C3～C6环烷基”例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基}；
A4为NR5、C(＝O)或CH2；R5为氢、C1～C4烷基{例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，又例如甲基}、氟取代的C1～C4烷基{所述的氟的个数为一个或多个[例如2个或3个]；所述的“C1～C4烷基”例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基}、C3～C6环烷基{例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基}、或、氟取代的C3～C6环烷基{所述的氟的个数为一个或多个[例如2个或3个]；所述的“C3～C6环烷基”例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基}；
n为0或1；
R2为氢或C1～C4烷基{例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，又例如甲基}；
X5为N或CH；
R6为氢、卤素{例如氟、氯、溴或碘，又例如氟}、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基{所述的“卤素”的个数为一个或多个[所述的“多个”例如2个或3个]，当存在多个“卤素”时，所述的“卤素”相同或不同。所述的“卤素”可独立地为氟、氯、溴或碘，又可为氟。所述的“C1～C4烷基”例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，又例如甲基。所述的“卤素取代的C1～C4烷基”例如二氟甲基}；
R7为氢或卤素{例如氟、氯、溴或碘，又例如氟}；
R8为氢、卤素{例如氟、氯、溴或碘，又例如氟}、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基{所述的“卤素”的个数为一个或多个[所述的“多个”例如2个或3个]，当存在多个“卤素”时，所述的“卤素”相同或不同。所述的“卤素”可独立地为氟、氯、溴或碘，又可为氟。所述的“C1～C4烷基”例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，又例如甲基。所述的“卤素取代的C1～C4烷基”例如二氟甲基}；
R9为氢、甲基或二氟甲基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
Figure BDA0002305458380000351
为
Figure BDA0002305458380000352
和/或
Figure BDA0002305458380000353
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
当
Figure BDA0002305458380000354
中的
Figure BDA0002305458380000355
为单键，X1为CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)时；
Figure BDA0002305458380000356
为
Figure BDA0002305458380000361
和/或
Figure BDA0002305458380000362
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
当
Figure BDA0002305458380000363
中的
Figure BDA0002305458380000364
为双键，X1为C时；
Figure BDA0002305458380000365
为
Figure BDA0002305458380000366
和/或
Figure BDA0002305458380000371
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
Figure BDA0002305458380000372
为
Figure BDA0002305458380000373
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
Figure BDA0002305458380000374
为
Figure BDA0002305458380000375
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
Figure BDA0002305458380000376
为
Figure BDA0002305458380000377
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N；
Figure BDA0002305458380000378
中的
Figure BDA0002305458380000379
为单键或双键；当
Figure BDA00023054583800003710
为单键时，X1为N或CH；当
Figure BDA00023054583800003711
为双键时，X1为C；
Figure BDA00023054583800003712
中的
Figure BDA00023054583800003713
为单键；当
Figure BDA00023054583800003714
为单键时，X3为N，X2为C(＝O)；
X4为
Figure BDA00023054583800003715
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢或C1～C4烷基；
A4为C(＝O)或CH2；
n为0；
R2为C1～C4烷基；
X5为N或CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢；
R9为甲基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R1为氟、二氟甲基、甲氧基、环丙基或C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N、CH、C(F)、C(Cl)或C(CN)。
Figure BDA0002305458380000381
中的
Figure BDA0002305458380000382
为单键或双键；当
Figure BDA0002305458380000383
为单键时，X1为N、CH、C(OH)、C(F)或C(OCH3)；当
Figure BDA0002305458380000384
为双键时，X1为C；
Figure BDA0002305458380000385
中的
Figure BDA0002305458380000386
为单键；当
Figure BDA0002305458380000387
为单键时，X3为N，X2为C(＝O)；
X4为
Figure BDA0002305458380000388
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A4为NR5、C(＝O)或CH2；R5为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
n为0；
R2为C1～C4烷基；
X5为N或CH；
R6为氢、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基；
R7为卤素；
R8为氢、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基；
R9为氢、甲基或二氟甲基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R1为氟、二氟甲基、甲氧基、环丙基或C1～C4烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R1为C1～C4烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
Y1为CH。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
Y2为N。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
Figure BDA0002305458380000391
中的
Figure BDA0002305458380000392
为单键；当
Figure BDA0002305458380000393
为单键时，X3为N，X2为C(＝O)。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
X4的b端与X3连接。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
A2为CR3；R3为氨基、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
A3为NR4、CH2、O或S；R4为氢或C1～C4烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
A4为C(＝O)或CH2。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
n为0。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R2为C1～C4烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
X5为N或CH。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R6为氢、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R6为氢。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R7为卤素。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R8为氢、环丙基、或、未取代或卤素取代的C1～C4烷基。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R8为氢。
在某一技术方案中，所述的杂环化合物I或其药学上可接受的盐里某些基团的定义可如下所述(未注明基团的定义如前任一方案所述)：
R9为甲基。
在某一技术方案中，在所述的杂环化合物I-0或其药学上可接受的盐里，所述的杂环化合物I-0可为如下任一化合物：
Figure BDA0002305458380000411
Figure BDA0002305458380000421
Figure BDA0002305458380000431
Figure BDA0002305458380000441
Figure BDA0002305458380000451
在某一技术方案中，在所述的杂环化合物I-0或其药学上可接受的盐里，所述的杂环化合物I-0还可为如下任一化合物：
Figure BDA0002305458380000452
在下述HPLC条件下保留时间为5.79min的
Figure BDA0002305458380000453
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 2.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
在下述HPLC条件下保留时间为6.24min的
Figure BDA0002305458380000461
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：Xselect CSHTM C18 2.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
Figure BDA0002305458380000471
在下述HPLC条件下保留时间为6.07min的
Figure BDA0002305458380000472
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：Xselect CSHTM C18 2.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％甲酸水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：290nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
10 55 45
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
在下述HPLC条件下保留时间为6.35min的
Figure BDA0002305458380000473
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：Xselect CSHTM C18 2.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％甲酸水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：290nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
Figure BDA0002305458380000474
Figure BDA0002305458380000481
Figure BDA0002305458380000482
在下述HPLC条件下保留时间为6.49min的
Figure BDA0002305458380000483
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 2.5um 4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：254nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
Figure BDA0002305458380000484
在下述HPLC条件下保留时间为5.68min的
Figure BDA0002305458380000485
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 2.5um 4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：254nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
在下述HPLC条件下保留时间为6.32min的
Figure BDA0002305458380000491
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 2.5um 4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：254nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
Figure BDA0002305458380000492
在下述HPLC条件下保留时间为7.53min的
Figure BDA0002305458380000501
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5um 4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1.0ml/min；波长：287nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22um滤膜过滤，梯度洗脱：
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
10 37.5 62.5
15 20 80
15.1 75 25
18 75 25
在下述HPLC条件下保留时间为8.45min的
Figure BDA0002305458380000502
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5um 4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1.0ml/min；波长：287nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22um滤膜过滤，梯度洗脱：
Figure BDA0002305458380000503
Figure BDA0002305458380000511
Figure BDA0002305458380000512
在下述HPLC条件下保留时间为5.95min的
Figure BDA0002305458380000513
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 2.5um 4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1.0ml/min；波长：PDA全波长，254nm，220nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22um滤膜过滤，梯度洗脱：
Figure BDA0002305458380000514
在下述HPLC条件下保留时间为6.43min的
Figure BDA0002305458380000521
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 2.5um 4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1.0ml/min；波长：PDA全波长，254nm，220nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22um滤膜过滤，梯度洗脱：
Figure BDA0002305458380000522
Figure BDA0002305458380000523
在下述HPLC条件下保留时间为5.574min的
Figure BDA0002305458380000524
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
Figure BDA0002305458380000525
Figure BDA0002305458380000531
在下述HPLC条件下保留时间为5.363min的
Figure BDA0002305458380000532
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
Figure BDA0002305458380000533
在下述HPLC条件下保留时间为8.737min的
Figure BDA0002305458380000534
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
15 20 80
18 20 80
18.1 75 25
23 75 25
在下述HPLC条件下保留时间为9.444min的
Figure BDA0002305458380000541
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
15 20 80
18 20 80
18.1 75 25
23 75 25
Figure BDA0002305458380000542
在下述HPLC条件下保留时间为5.21min的
Figure BDA0002305458380000551
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
在下述HPLC条件下保留时间为6.066min的
Figure BDA0002305458380000552
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
本发明还提供了一种上述的杂环化合物I-0或其药学上可接受的盐在制备RET抑制剂中的应用。
本发明还提供了一种上述的杂环化合物I-0或其药学上可接受的盐在制备药物中的应用，所述的药物用于预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病。
所述的“由RET异常表达介导的疾病”例如癌症，又例如甲状腺乳头状癌(PTC)、甲状腺髓样癌(MTC)、嗜铬细胞瘤(PC)、胰腺导管腺癌、多发性内分泌瘤(MEN2A或MEN2B)、乳腺癌(还例如转移性乳腺癌)、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、慢性骨髓单核细胞性白血病、结肠癌、直肠癌、卵巢癌或唾液腺癌。
本发明还提供了一种上述的杂环化合物I-0或其药学上可接受的盐在制备药物中的应用，所述的药物用于预防和/或治疗癌症。
所述的“癌症”例如甲状腺乳头状癌(PTC)、甲状腺髓样癌(MTC)、嗜铬细胞瘤(PC)、胰腺导管腺癌、多发性内分泌瘤(MEN2A或MEN2B)、乳腺癌(还例如转移性乳腺癌)、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、慢性骨髓单核细胞性白血病、结肠癌、直肠癌、卵巢癌或唾液腺癌。
本发明还提供了一种药物组合物，其包括上述的杂环化合物I-0或其药学上可接受的盐、以及、药用辅料。
除非特别说明，本发明中的术语具有以下含义：
术语“烷基”是指具有指定的碳原子数的直链或支链烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基及其类似烷基。
术语“环烷基”是指具有指出的环原子数(例如C3-C6环烷基)且完全饱和的烃环。“环烷基”也意指双环及多环烃环，诸如，例如螺[2.3]己烷等。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘原子。
术语“一个或多个”指的是一至四个。在一个实施方案中，其指的是一至三个。在进一步的实施方案中，其指的是一个或两个。在更进一步的实施方案中，其指的是一个。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物与药学上可接受的、相对无毒的酸或碱制备得到的化合物的盐。
当本发明的化合物含有相对酸性官能团时，可通过使此类化合物的原型与足量的所需碱在无溶剂下或在合适的惰性溶剂中接触来获得碱加成盐。与药学上可接受的无机碱衍生的盐的实例包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐及其类似盐。与药学上可接受的有机碱衍生的盐包括伯、仲及叔胺的盐，所述伯、仲及叔胺包括经取代的胺、环状胺、天然存在的胺及其类似物，诸如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N,N'-二苯甲基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、氨基葡萄糖(glucosamine)、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇及其类似物。
当本发明的化合物含有相对碱性官能团时，可通过使此类化合物的原型与足量的所需酸在无溶剂下或在合适的惰性溶剂中接触来获得酸加成盐。所述的酸可为无机酸，例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸及其类似无机酸。所述的酸可为有机酸，例如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、丁二酸、辛二酸、反丁烯二酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯基磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸及其类似有机酸。
本发明中的某些化合物具有手性碳原子、双键、碳环或杂环，由此产生的各构型异构体{旋光异构体(例如对映体、非对映体等)、顺反异构体等}以及它们的混合物(例如外消旋体)均在本发明的保护范围内。当本发明中的某些化合物表明特定构型时，是指该构型异构体存在且基本上不含其他异构体的化合物。
本发明的化合物中的原子可为天然同位素丰度的原子，也可为非天然同位素丰度的原子。也即，本发明的化合物中的一个或多个原子可为非天然同位素丰度的原子。由此产生的各同位素变体均在本发明的保护范围内。非天然同位素丰度的原子中，任一同位素的量可在0％和100％之间。以氢(H)为例，其可以为天然同位素丰度的氢原子(99.985％1H+0.015％2H+低于0.001％3H)，也可以为非天然同位素丰度的原子(例如大于95％2H)。
当任意变量(例如卤素)在化合物的定义中多次出现时，该变量每一位置出现的定义与其余位置出现的定义无关，它们的含义互相独立、互不影响。因此，若某基团被1个、2个或3个卤素取代，也就是说，该基团可能会被最多3个卤素取代，某一位置的卤素的定义与其余位置的卤素的定义是互相独立的。另外，取代基及/或变量的组合只有在该组合产生稳定的化合物时才被允许。
术语“抑制剂”是指为减少、阻断、防止、延迟活化、灭活、脱敏或下调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。
术语“RET异常表达”即由通过RET的信号传导引起的RET活性增加。
术语“预防”是指获得或发生疾病或障碍的风险降低。
术语“治疗”任意疾病或障碍在一个实施方案中是指改善疾病或障碍(即阻止疾病、或、减少表现其临床症状的程度或严重性)。在另一个实施方案中，“治疗”是指改善至少一种身体参数，其可能不被受试者察觉。在另一个实施方案中，“治疗”是指从身体上(例如稳定可分辨的症状)、生理上(例如稳定身体参数)调节疾病或障碍或它们两者。在另一个实施方案中，“治疗”是指减缓疾病进展。
术语“癌症”是指皮肤或身体器官中的细胞恶性或良性生长，例如但不限于乳腺、前列腺、肺、肾、胰腺、胃或肠。癌症倾向于浸润相邻组织和扩散(转移)至远端器官，例如骨、肝、肺或脑。本文所用的术语癌症包括转移性肿瘤细胞类型(例如但不限于黑素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和肥大细胞瘤)和组织癌类型(例如但不限于结肠直肠癌、前列腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、卵巢癌、前列腺癌和子宫平滑肌肉瘤)。特别地，术语“癌症”是指急性成淋巴细胞性白血病、急性髓样白血病、肾上腺皮质癌、肛门癌症、阑尾肿瘤、星形细胞瘤、非典型畸胎样/横纹肌样瘤(atypical teratoid/rhabdoid tumor)、基底细胞癌、胆管癌症、膀胱癌、骨癌(骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤)、脑干胶质瘤、脑瘤、脑和脊髓肿瘤、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤、宫颈癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤(craniopharyngioma)、皮肤T-细胞淋巴瘤、胚胎瘤、子宫内膜癌症、室管膜母细胞瘤(ependymoblastoma)、室管膜瘤、食管癌、肿瘤的尤因肉瘤家族、眼癌、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃(胃)癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、胃肠道基质细胞瘤、胚细胞瘤、神经胶质瘤、多毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞(肝)癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌(hypopharyngealcancer)、眼内黑素瘤、胰岛细胞瘤(内分泌胰腺)、卡波西肉瘤、肾癌、郎格罕细胞增生症、喉癌、白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、多毛细胞白血病、肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、伯基特淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症、髓母细胞瘤(medulloblastoma)、髓上皮瘤(medulloepithelioma)、黑素瘤、间皮瘤、口腔癌、慢性髓性白血病、髓样白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌(asopharyngeal cancer)、成神经细胞瘤、非小细胞肺癌、口癌、口咽癌、骨肉瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低度潜在恶性肿瘤、胰腺癌、乳头状瘤病、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、中间分化的松果体瘤(pineal parenchymal tumors of intermediate differentiation)、成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚瘤(supratentorial primitive neuroectodermaltumors)、垂体瘤、浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞(肾)癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、涎腺癌、肉瘤、肿瘤尤因肉瘤家族、肉瘤、卡波西氏、塞扎里综合征、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃(胃)癌、幕上原始神经外胚瘤、T-细胞淋巴瘤、睾丸癌症、喉癌、胸腺瘤(thymoma)和胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌症、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌症、外阴癌、Waldenstrom巨球蛋白血症和Wilms瘤。
术语“药用辅料”系指生产药品和调配处方时使用的赋形剂和附加剂；是除活性成分或前体以外，在安全性方面已进行了合理的评估，并且包含在药物制剂中的物质。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：该化合物对RET激酶的抑制效果较佳。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
本发明各实施例的LCMS分析方法参数如下：
色谱柱：CORTECS C18 2.7μm、4.6*50mm Column；
流动相A:0.1％甲酸水溶液；
流动相B:0.1％甲酸乙腈溶液；
时间(min) A(％) B(％)
0 90 10
0.7 90 10
2.5 10 90
4 10 90
4.1 90 10
6.5 90 10
流速：1ml/min；
波长：PDA全波长，220nm，254nm；
柱温：30℃；
样品盘：不控温；
MS:正离子模式，ESI(scan from 100to 800)。
实施例1SZ-9312：(S)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-(1-苯基乙基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-4-酮
Figure BDA0002305458380000601
第1步：
反应瓶中加入化合物1(17g,69.6mmol)和无水二氯甲烷(500ml)，搅拌，再加入N,N-异丙基乙胺(22.5g,174mmol)，室温条件下搅拌30分钟，缓慢滴加三甲基氯硅烷(15.1g,140mmol)，然后加热至回流反应3h，期间每30分钟氩气鼓泡30秒，以去除反应产生的氯化氢气体。将反应冷却至-10℃，加入Fmoc-Cl(16.7g，64.6mmol)、EDCI·HCl(21.1g,0.11mol)，继续搅拌3h，期间每30分钟氩气鼓泡30秒，以去除反应产生的氯化氢气体。反应液加入2.5％Na2CO3水溶液(1000ml)，用乙醚(100ml x 2)萃取，水相用2N盐酸调整pH到2，用乙酸乙酯(300ml x 3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物9307A1(24.4g，85％，白色泡沫状固体)，不纯化直接进行下一步反应。LCMS:[M+H]+367.08(De-Boc)。
第2步：
反应瓶中加入9307A1(4.5g,9.6mmol)和DMF(30ml)，搅拌，再加入S-(-)-苯乙胺(1.17g,9.6mmol)、DIPEA(2.5g,19.3mmol)，最后加入HATU(4.4g,11.6mmol)，20℃反应2小时。反应液加水(400ml)，用EA(50ml x 3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到9307A2(4.5g，82％，白色泡沫固体)。LCMS:[M+Na]+592.18。
第3步：
反应瓶中加入9307A2(4.5g,7.9mmol)和甲醇(30ml)，搅拌，再加入乙二胺(30ml)，20℃反应2小时。反应液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到9307A3(2.5g，91％，无色油状液体)。LCMS:[M+H]+348.12。
第4步：
化合物9307A3(2.5g,7.2mmol)溶解在乙酸(3ml)和原甲酸三乙酯(6ml)中并在微波下100度搅拌1小时，浓缩除去溶剂，残留物用快速硅胶柱色谱法(PE/EA 50％-100％)纯化，得到化合物9307A4(2.3g，89％，无色油状液体)。LCMS:[M+H]+358.09。
第5步：
化合物9307A4(1g，2.8mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(1ml)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到9307A5粗品，未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+258.07。
第6步：
化合物9307A5(178mg,0.5mol)、化合物2(112mg,0.5mmol)和碳酸钾(276mg,2mmol)加入到DMSO(5ml)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(10mlx 3)萃取，有机相减压浓缩得到粗品，并用中压反相柱色谱法(ACN-0.1％HCO2H水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-9312(18.6mg，9％，白色固体)。LCMS:[M+H]+445.14。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,1H),8.31(s,1H),8.15(s,1H),7.38(dd,J＝9.9,4.9Hz,2H),7.34–7.27(m,3H),6.24(s,1H),6.08(s,1H),5.10(q,J＝7.3Hz,1H),4.50(t,J＝12.3Hz,2H),3.46–3.34(m,1H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),1.75–1.57(m,5H),1.40(d,J＝13.2Hz,1H),1.29(d,J＝13.4Hz,1H).
实施例2SZ-9315：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-4-酮
Figure BDA0002305458380000621
第1步：
反应瓶中加入9307A1(932mg,1mmol)和DMF(5ml)，搅拌，再加入(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(根据WO2017079140制备)(412mg,1mmol)、DIPEA(516mg,2mmol)，最后加入HATU(912mg,2mmol)，20℃反应1小时。反应液加水(40ml)，用EA(10ml x3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到9315A0(900mg，69％，白色泡沫)。LCMS:[M+H]+654.20。
第2步：
反应瓶中加入9315A0(900mg,7.9mmol)和甲醇(3ml)，搅拌，再加入乙二胺(3ml)，20℃反应2小时。反应液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到9315A1(500mg，85％，无色油状液体)。LCMS:De-Boc[M+H]+333.10。
第3步：叔丁基(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-甲基-4-羰基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-8-羧酸酯(9315A2)
化合物9315A1(330mg,0.76mmol)溶解在乙酸(3ml)和原乙酸三乙酯(6ml)中并在微波下100度搅拌1小时，浓缩除去溶剂，残留物用快速硅胶柱色谱法(PE/EA 50％-100％)纯化，得到化合物9315A2(230mg，66％，无色油状液体)。LCMS:[M+H]+457.12@3.60min。
第4步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-甲基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-4-酮(9315A3)
化合物9315A2(230mg，0.50mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(1ml)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂，得到9315A3粗品，未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+357.08@2.70min。
第5步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-4-酮(SZ-9315)
化合物9315A3(170mg,0.50mol)、化合物3(110mg,0.50mmol)(根据WO2017079140制备)和碳酸钾(207mg,1.50mmol)加入到DMSO(5ml)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入水(50ml)，用乙酸乙酯(20mlx3)萃取，有机相减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(DCM/EA 50％-100％)纯化，产物以乙腈与水溶解，冷冻干燥，得到SZ-9315(160mg,58％，淡黄色固体)。LCMS:[M+H]+544.16@3.03min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.84(s,1H),9.21(s,1H),8.68(d,J＝4.5Hz,1H),8.43(d,J＝2.1Hz,1H),7.97-7.89(m,3H),6.24(brs,1H),6.08(brs,1H),5.30(q,J＝7.0Hz,1H),4.55-4.45(m,2H),3.48-3.38(m,2H),2.18(s,6H),2.13(s,3H),1.77(d,J＝7.0Hz,3H),1.73-1.58(m,2H),1.44-1.30(m,2H)。
实施例3SZ-9316：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-异丙基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-4-酮
Figure BDA0002305458380000631
Figure BDA0002305458380000641
第1步：叔丁基(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-异丙基-4-羰基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-8-羧酸酯(9316A1)
化合物9315A1(330mg,0.76mmol)溶解在乙酸(3ml)和异丁酸三乙酯(6ml)中，并在微波下100度搅拌1小时，浓缩除去溶剂，残留物用快速硅胶柱色谱法(PE/EA 50％-100％)纯化，得到化合物9316A1(240mg，65％，无色油状液体)。LCMS:[M+H]+485.13@4.05min。
第2步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-异丙基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-4-酮(9316A2)
化合物9316A1(240mg，0.50mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(1ml)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂，得到9316A2粗品，未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+385.13@2.82min。
第3步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-异丙基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-4-酮(SZ-9316)
化合物9316A2(190mg,0.50mol)、化合物3(110mg,0.50mmol)和碳酸钾(207mg,1.50mmol)加入到DMSO(5ml)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入水(50ml)，用乙酸乙酯(20ml x 3)萃取，有机相减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(DCM/EA50％-100％)纯化，产物以乙腈与水溶解，冷冻干燥，得到SZ-9316(160mg,58％，淡黄色固体)。LCMS:[M+H]+572.18@3.40min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.83(s,1H),9.22(s,1H),8.68(d,J＝4.4Hz,1H),8.40(d,J＝1.6Hz,1H),7.95-7.90(m,3H),6.23(brs,1H),6.11(brs,1H),5.33(q,J＝7.0Hz,1H),4.50-4.40(m,2H),3.50-3.40(m,2H),2.96-2.88(m,1H),2.19(s,3H),2.13(s,3H),1.78(d,J＝7.0Hz,3H),1.71-1.56(m,2H),1.40-1.23(m,2H),1.17(d,J＝6.7Hz,3H),1.13(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例4SZ-9336(SZ-9336A和SZ-9336B)：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸烷-2,4-二酮
Figure BDA0002305458380000651
SZ-9367(9305A12)；3-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-7-烯-2,4-二酮
Figure BDA0002305458380000652
Figure BDA0002305458380000661
第1步：二乙基1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8,8-二羧酸酯(9305A2)
化合物9305A1(50g,0.2mol)溶解在无水甲苯(400ml)中，依次加入乙二醇(13.6ml)和对甲苯磺酸单水合物(400mg,2mmol),然后回流分水器分水2小时，体系冷却至室温并加入饱和碳酸氢钠直至pH＝8左右，将水相分离，有机相经过硫酸钠干燥后，浓缩后得到9305A2(70g，无色油状物)。
第2步：8-(乙酯基<乙氧羰基>)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸(9305A3)
9305A2(70g,0.2mol)溶解在甲醇(400ml)中，加入1N氢氧化钠(250ml)后室温搅拌16小时，然后浓缩除去甲醇，用1N盐酸调节体系的pH＝4-5，随后用乙酸乙酯(300ml)萃取，有机相经过硫酸钠干燥后浓缩得到9305A3(50g,二步94％，无色油状物)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.22(q,J＝8.5Hz,2H),3.94(s,4H),2.18-2.22(m,4H),1.68-1.73(m,4H),1.27(t,J＝8.5Hz,3H)。
第3步：乙基8-(((苄氧基)羰基)氨基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯(9305A4)
9305A3(45g,0.17mol)溶解在甲苯(200ml)中，加入三乙胺(52g,0.51mol)和DPPA(0.17mol)，控制反应温度不超过30度搅拌1小时，随后在100度下搅拌2小时，最后加入苯甲醇(17.6g,0.17mol)并在此温度下搅拌过夜。反应体系冷却，用快速硅胶柱色谱法(PE/EA20％-30％)纯化得到9305A4(19g,53％，无色油状物)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26-7.35(m,5H),5.08(s,2H),4.97(s,1H),4.14(q,J＝5.5Hz,2H),3.94(s,4H),2.11-2.19(m,4H),1.69-1.72(m,4H),1.20(t,J＝5.5Hz,3H)。
第4步：乙基1-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-羰基环己羧酸酯(9305A5)
9305A4(19g,62.9mmol)溶解在二氧六环(200ml)中，室温下加入6N盐酸(100ml)并在此温度下搅拌16小时。反应完毕后加入乙酸乙酯(300ml)提取，有机相经过硫酸钠干燥后浓缩得9305A5(16g,97％，无色油状物)。
第5步：乙基1-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-(((三氟甲基)磺酰)氧代)环己-3-烯羧酸酯(9305A6)
9305A5(2.0g,6.26mol)溶解在无水四氢呋喃(20ml)中，氩气保护下将体系冷却到-70度并将LiHMDS(7.5ml,1mol/L)缓慢滴入，然后再此温度下搅拌1小时，随后将苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(3.3g,9.3mmol)的四氢呋喃(10ml)快速加入体系并升温到0度搅拌3小时。反应完毕后加入饱和氯化铵(20ml)淬灭，用乙酸乙酯(50ml)提取，有机相经过硫酸钠干燥后浓缩并用快速硅胶柱色谱法(PE/EA 10％-20％)纯化得9305A6(1.6g,57％，无色油状物)。
第6步：乙基1-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)环己-3-烯羧酸酯(9305A7)
9305A6(1.6g,3.5mmol)和联硼酸频哪醇(0.9,3.5mmol)、Pd(dppf)2Cl2.DCM(144mg,5％)、乙酸钾(1.0g,10.6mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(30ml)中并加热到80度搅拌4小时。反应完毕后冷却，浓缩除去溶剂，用快速硅胶柱色谱法(PE/EA 10％-20％)纯化得9305A7(1.0g,62％，无色油状物)。LCMS:[M+H]+430.13。
第7步：乙基1-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)环己-3-烯羧酸酯(9305A9)
9305A7(0.5g,1.2mmol)和3(259mg,1.2mmol)、Pd(PPh3)4(100mg,5％)、碳酸钾(400mg,3.0mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(6ml)和水(2ml)中，在125度微波下搅拌5小时，所得反应液浓缩用快速硅胶柱色谱法(PE/EA 50％-70％)纯化得9305A9(500mg,85％，无色油状物)。LCMS:[M+H]+491.10。
第8步：1-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)环己-3-烯羧酸(9305A10)
9305A9(0.5g,1.0mmol)和氢氧化锂单水合物(125mg,3.1mmol)溶解在四氢呋喃(2ml)、甲醇(2ml)和水(2ml)中，体系加热到60度搅拌3小时，反应完毕后冷却并浓缩，所得9305A10未做进一步纯化。LCMS:[M+H]+463.07。
第9步：3-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-7-烯-2,4-二酮(9305A12；SZ-9367)
9305A10和(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(270mg,0.97mmol)、HATU(555mg,1.46mmol)、DIPEA(0.46ml,2.91mmol)混合在DMF(4ml)中室温搅拌16小时。反应完毕后减压浓缩除去DMF，然后用快速硅胶柱色谱法(EA)纯化，得到9305A12(SZ-9367)(60mg，白色固体)。LCMS:[M+H]+543.10，HPLC:tR＝6.49min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.90(s,1H),9.54(s,1H),8.72(s,1H),8.68(d,J＝5.5Hz,1H),8.43(d,J＝2.0Hz,1H),7.90-8.01(m,3H),7.08(s,1H),6.83(s,1H),6.22(s,1H),5.33(q,J＝9.0Hz,1H),2.86-2.90(m,1H),2.64-2.73(m,1H),2.50-2.50(m,1H),2.32-2.35(m,1H),2.27(s,3H),2.20(s,3H),1.83-1.89(m,2H),1.78(d,J＝9.0Hz,3H)。
SZ-9367HPLC分析方法
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)
色谱柱：XSelect CSHTM C18 2.5um 4.6*150mm Column XP
流动相A:0.1％氨水水溶液
流动相B:乙腈
梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
流速：1ml/min
波长：254nm
柱温：30℃
空白溶剂:甲醇
样品溶液:用甲醇溶解适量SZ-9367,用0.22um滤膜过滤，进入液相色谱进行分析。
第10步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸烷-2,4-二酮(SZ-9336:SZ-9336A和SZ-9336B)
9305A12(20mg)混悬在乙醇(2ml)中，滴入2滴乙酸使其溶解，在氢气氛围下60度搅拌过夜。反应完毕后用饱和碳酸钠调节体系pH＝9左右，二氯甲烷萃取，有机相浓缩并用制备板分离纯化得到两个异构体SZ-9336A(6mg)和SZ-9336B(1.2mg)。
SZ-9336A:LCMS:[M+H]+545.10，HPLC tR＝5.79min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.40(dd.J1＝0.5Hz,J2＝5.0Hz,1H),8.36(d,J＝2.5Hz,1H),7.93(d,J＝10.0Hz,1H),7.82(d,J＝10.5Hz,1H),7.56(d,J＝5.0Hz,1H),6.54(s,1H),6.42(s,1H),5.26-5.36(m,1H),2.62-2.66(m,1H),2.34-2.44(m,1H),2.22(s,3H),2.17(s,3H),1.90-1.97(m,2H),1.76-1.77(m,2H),1.77(d,J＝9.0Hz,3H),1.58-1.66(m,2H)。
SZ-9336B:LCMS:[M+H]+545.10，HPLC：tR＝6.24min.1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.40(d,J＝5.0Hz,1H),8.35(d,J＝3.0Hz,1H),7.92(dd,J1＝3.5Hz,J2＝10.5Hz,1H),7.81(d,J＝10.5Hz,1H),7.58(d,J＝5.5Hz,1H),6.61(s,1H),6.04(s,1H),5.30(q,J＝9.5Hz,1H),2.65-2.70(m,2H),2.23(s,3H),2.18(s,3H),1.79-1.92(m,6H),1.73(d,J＝9.0Hz,1H),1.57-1.65(m,2H)。
SZ-9336A和SZ-9336B HPLC分析条件如下：
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 2.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
实施例5SZ-9384：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-硫基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮
Figure BDA0002305458380000701
第1步：
化合物9315A1(1g,2.3mmol)溶解在THF(20ml)中，分别加入三乙胺(1g,10mmol)、硫羰基二咪唑(1.78g,10mmol)60℃搅拌16小时。往体系中加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50mlx 2)萃取，有机相减压浓缩，得到的残留物用制备板分离纯化(DCM:CH3OH＝20:1)，得到化合物9384A1(200mg，18％，黄色固体)。LCMS:[M+H]+475.03。
第2步：
化合物9384A1(100mg,0.21mmol)溶解在二氯甲烷(2ml)中，加入三氟乙酸(0.5ml)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到9384A2，未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+ 375.05。
第3步：
化合物9384A2(100mg,0.27mol)、化合物3(60mg,0.27mmol)和碳酸钾(186mg,1.35mmol)加入到DMSO(5ml)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入水(50ml)，用乙酸乙酯(20ml x 3)萃取，有机相减压浓缩得到粗品，用高压反相柱色谱法(ACN-0.1％HCO2H水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-9384(23.5mg，16％，白色固体)。LCMS:[M+H]+562.08。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53–8.49(m,2H),8.05(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.92(d,J＝8.6Hz,1H),7.70(d,J＝4.0Hz,1H),6.26(s,1H),6.23–6.10(m,2H),4.45–4.25(m,2H),3.78–3.59(m,2H),2.29(s,3H),2.28(s,3H),2.08–1.98(m,1H),1.89(d,J＝7.3Hz,3H),1.87–1.76(m,1H),1.73–1.63(m,1H),1.39–1.28(m,1H).
实施例6SZ-9333：(S)-2-氨基-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-烯-4-酮
Figure BDA0002305458380000711
第1步：
化合物SZ-9384(50mg,0.089mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入7M氨甲醇溶液(0.1ml)、70％叔丁基过氧化氢(0.1ml)。往体系中加入水(10ml)，用乙酸乙酯(10ml x3)萃取，有机相减压浓缩得到粗品，并用高压反相柱色谱法(ACN-0.1％HCO2H水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-9333(3.2mg，6％，白色固体)。LCMS:[M+H]+545.12。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(d,J＝4.4Hz,1H),8.50(d,J＝2.3Hz,1H),8.04(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.98(d,J＝8.6Hz,1H),7.73(d,J＝4.4Hz,1H),6.15(d,J＝12.9Hz,2H),5.47–5.39(m,1H),4.42–4.22(m,2H),3.79–3.61(m,2H),2.28(s,3H),2.24(s,3H),2.09–1.98(m,1H),1.95(d,J＝7.1Hz,3H),1.89–1.85(m,1H),1.82–1.75(m,1H),1.71–1.59(m,1H).
实施例7SZ-9334：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2,4-二酮
Figure BDA0002305458380000712
Figure BDA0002305458380000721
第1步：
反应瓶中加入9307A1(1g,2.13mmol)，(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(根据WO2017079140制备)(0.3g,2.13mmol)和DIPEA(0.9ml,4.26mmol)，搅拌使其溶解。最后加入HATU(0.91g,1.1mmol)，23-26℃反应16小时。反应液加水(30ml)，用EA(30mlx3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水洗涤(30mlx3)，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝3:1～EA,DCM:MeOH＝10:1；Rf＝0.3)纯化得到9334A0(860mg，61.9％，类白色固体)。LCMS:[M+H]+655.19@4.19min。
第2步：
反应瓶中加入9334A0(730mg,1.11mmol)和甲醇(6ml)，搅拌使其溶解。然后分批加入二乙胺(6ml)，26℃反应3小时。反应液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝1:1～EA，DCM:MeOH＝10:1；Rf＝0.3)纯化得到9334A1(0.426g，53.3％，淡黄色油状物放置过夜变成固体)。LCMS:De-Boc[M+H]+333.08@2.85min。
第3步：叔丁基(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2，4-二羰基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-8-羧酸酯(9334A2)
反应瓶中加入化合物9334A1(399mg,0.91mmol)，羰基二咪唑(1.8g)和二氧六环(9ml)，所得反应混合物加热到110摄氏度并且继续搅拌16小时。反应液冷却到室温后加水淬灭(30ml),然后使用乙酸乙酯萃取(30mlx3)。合并有机相后用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩除去溶剂，残留物用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝3:1～EA，DCM:MeOH＝10:1；Rf＝0.3)纯化，得到化合物9334A2(0.3g，71.6％，白色固体)。LCMS:[M+H]+459.07@3.72min。
第4步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-甲基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2，4-二酮；三氟乙酸盐(9334A3)
化合物9334A2(91mg，0.19mmol)溶解在二氯甲烷(3ml)中，加入三氟乙酸(3ml)，23摄氏度搅拌1小时，减压浓缩除去溶剂,得到粗品9334A3，直接用于下一步反应。LCMS:[M+H]+359.06@2.72min。
第5步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2，4-二酮(SZ-9334)
化合物9334A3(91mg,0.19mol)、化合物3(133mg,0.60mmol)(根据WO2017079140制备)和碳酸钾(0.26g,1.8mmol)加入到DMSO(6ml)中，110℃搅拌39小时。往体系中加入水(30ml)，用乙酸乙酯萃取(30mlx3)。合并有机相后用饱和食盐水洗涤(30mlx3)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。用制备薄层层析色谱板(EA；Rf＝0.5)纯化得粗品SZ-9334(0.1g)。然后使用柱层析纯化[(PE：EA＝3:1～EA，DCM:MeOH＝10:1(3V/V％ammoniaadded))]得到粗品SZ-9334(30mg)。接着使用高压制备色谱纯化得到SZ-9334(14mg,14.29％，白色固体)。LCMS:[M+H]+546.10@3.16min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.50(s,1H),8.46(d,J＝4.0Hz,1H),8.04-8.01(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.93-7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.69-7.68(d,J＝4.0Hz,1H),5.43-5.36(q,J＝8.0Hz,1H),4.46-4.43(m,2H),3.56-3.43(m,2H),2.26(s,3H),2.21(s,3H),1.98-1.91(m,2H),1.87-1.85(d,J＝8.0Hz,3H),1.68-1.63(m,2H)。
实施例8SZ-9335：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2，4-二酮
Figure BDA0002305458380000731
Figure BDA0002305458380000741
第1步：叔丁基(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-2，4-二羰基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-8-羧酸酯(9335A1)
在23摄氏度下把NaH(0.16g，60Wt％)分批加入到化合物9334A2(190mg,0.39mmol)的DMF溶液中，所得反应混合物在23摄氏度继续搅拌1小时。然后把碘甲烷(0.6g)滴加到上述反应液内。所得反应混合物继续搅拌半小时。接着滴加饱和氯化铵水溶液(3ml)淬灭反应，然后加水稀释(30ml)，乙酸乙酯萃取(30mlx3)。合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩除去有机溶剂，粗产物使用制备薄层层析色谱法(PE：EA＝1:1；Rf＝0.6)得到化合物9335A1(0.13g，69.8％，白色固体)。LCMS:[M+H]+473.07@3.91min。
第2步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2,4-二酮；三氟乙酸盐(9335A2)
化合物9335A1(119mg，26umol)溶解在二氯甲烷(3.3ml)中，加入三氟乙酸(3.6ml)，23摄氏度搅拌1小时，水泵浓缩除去溶剂，然后使用油泵抽三分钟。所得粗产品(9335A2)直接用于下一步反应。LCMS:[M+H]+373.08@2.73min。
第3步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-2，4-二酮(SZ-9335)
化合物9335A2(136mg,0.29mol)、化合物3(130mg,0.60mmol)和碳酸钾(0.39g,0.3mmol)加入到DMSO(6ml)中，180℃搅拌1.5小时。所得反应混合物冷却到达室温后，往体系中加入水(30ml)，用乙酸乙酯(30mlx3)萃取。合并有机相后用饱和食盐水洗涤(30mlx3)，无水硫酸镁干燥，过滤。有机相减压浓缩得到粗品，用中压制备色谱分离一次得到粗品，然后使用高压制备色谱纯化得到SZ-9335(2.1mg,1.3％，白色固体)。LCMS:[M+H]+560.1 0@3.33min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51-8.50(d,J＝4.0Hz 1H),8.47-8.46(d,J＝4.0Hz1H),8.05-8.02(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.93-7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.69-7.68(d,4.0Hz 1H),6.12-6.10(d,J＝8.0Hz,2H),5.46-5.41(q,J＝8.0Hz,1H),4.69-4.60(m,2H),3.6-3.46(m,2H),2.25(s,3H),2.19(s,3H),2.03-1.96(m,2H),1.88-1.86(d,J＝8.0Hz,3H),1.69-1.61(m,2H)。
实施例9SZ-9306(SZ-9306A和SZ-9306B)：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸烷-2,4-二酮
Figure BDA0002305458380000751
Figure BDA0002305458380000761
第1步：
反应瓶中加入化合物9306A0(8g,40mmol)、NaOH(3.2g,80mmol)和THF(100ml)、水(100ml)搅拌，再加入二碳酸二叔丁酯(13g,60mmol)，室温条件下搅拌过夜，反应液用1N盐酸调整pH到2，用乙酸乙酯(300ml x 3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物9306A1(10.8g，85％，白色泡沫状固体)，不纯化直接进行下一步反应。LCMS:De-Boc[M+H]+201.06。
第2步：
反应瓶中加入9306A1(9g,30mmol)，(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(根据WO2017079140制备)(6.18g,30mmol)和DIPEA(10ml,60mmol)，搅拌使其溶解。最后加入HATU(13.68g,36mmol)，23-26℃反应16小时。反应液加水(300ml)，用EA(100mlx3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水洗涤(100mlx3)，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法纯化得到9306A2(12g，81％，白色泡沫状固体)。LCMS:[M+H]+490.07
第3步：
反应瓶中加入9306A2(9.78g,20mmol)，NaOH(4.8g,120mmol)和DMF(100ml)，加热至60℃搅拌反应3小时。反应液加水(300ml)，过滤得到粗品9306A3(7g，84％，白色粉末状固体)。LCMS:[M+H]+416.02
第4步：
反应瓶中加入9306A3(4.15g,10mmol)和DMF(30ml)，在0℃条件下分批加入NaH(480mg,20mmol)，搅拌1小时，再滴加碘甲烷(2.82g，20mmol)26℃搅拌反应过夜。反应液加水(300ml)，过滤得到粗品9306A4(3.9g，90％，白色粉末状固体)。LCMS:M+H]+430.04
第5步：
反应瓶中加入9306A4(3.5g,8.16mmol)和Dioxane(100ml)，在0℃条件下加入6N盐酸(100ml)，26℃条件下搅拌过夜，反应液用碳酸钠饱和溶液调整pH,＝9，用EA(100mlx3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水洗涤(100mlx3)，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法纯化得到9306A5(2.9g，92％，白色泡沫状固体)。LCMS:De-Boc[M+H]+386.01
第6步：
9306A5(2.9g,7.53mol)溶解在无水四氢呋喃(50ml)中，氩气保护下将体系冷却到-70℃并将LiHMDS(15ml,1mol/L)缓慢滴入，然后再次温度下搅拌1小时，随后将苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(5.4g,15mmol)的四氢呋喃(30ml)快速加入体系并升温到0℃搅拌3小时。反应完毕后加入20ml饱和氯化铵淬灭，用50ml乙酸乙酯提取，有机相经过硫酸钠干燥后浓缩并用快速硅胶柱色谱法纯化得无色油状物9305A6(2.9g,75％，白色泡沫状固体)。LCMS:De-Boc[M+H]+517.94
第7步：
9306A6(2.9g,5.6mmol)和联硼酸频哪醇(1.7g,36.72mmol)、Pd(dppf)2Cl2.DCM(228mg,5％)、乙酸钾(1.65g,16.8mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(50ml)中并加热到80度搅拌4小时。反应完毕后冷却旋去溶剂，用快速硅胶柱色谱法纯化得无色油状物9305A7(2.0g,72％，白色泡沫状固体)。LCMS:[M+H]+496.06。
第8步：
9306A7(0.5g,1mmol)和9305A8(237mg,1mmol)、Pd(PPh3)4(100mg,5％)、碳酸钾(345mg,2.5mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(6ml)和水(2ml)中，在125℃微波下搅拌5小时，所得反应液浓缩，用快速硅胶柱色谱法(PE/EA 50％-70％)纯化得无色油状物9306A8(370mg,66％)。LCMS:[M+H]+557.07。
第9步：
9306A8(330mg)混悬在乙醇(10ml)中，滴入乙酸(5ml)使其溶解，在氢气氛围下60度搅拌过夜。反应完毕后用饱和碳酸钠调节体系pH＝9左右，EA提取，有机相浓缩并用有机相减压浓缩得到粗品，用高压反相柱色谱法(ACN-0.1％碳酸铵水溶液)纯化，冷冻干燥，得到两个异构体SZ-9306A(60mg)和SZ-9306B(12mg)。LCMS:[M+H]+559.04
SZ-9306A：HPLC tR＝6.07min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),9.55(s,1H),8.68(d,J＝4.4Hz,1H),8.43(d,J＝1.9Hz,1H),7.95(ddd,J＝18.9,11.7,5.4Hz,3H),6.67(s,2H),5.34(q,J＝7.1Hz,1H),2.81(s,3H),2.64(t,J＝12.3Hz,1H),2.38–2.26(m,2H),2.21(d,J＝22.5Hz,6H),1.95(dd,J＝18.0,8.8Hz,2H),1.89–1.64(m,7H)。
SZ-9306B：HPLC tR＝6.35min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.93(s,1H),9.55(s,1H),8.68(d,J＝4.4Hz,1H),8.41(s,1H),8.13–7.69(m,3H),6.85(s,1H),6.15(s,1H),5.35(q,J＝6.9Hz,1H),2.99–2.76(m,4H)2.36–1.90(m,12H),1.83–1.56(m,5H).
SZ-9306A和SZ-9306B HPLC分析方法
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)
色谱柱:XSelect CSHTM C18 2.5um 4.6*150mm Column XP
Mobile phase A:0.1％甲酸水溶液
Mobile phase B:乙腈
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
10 55 45
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
流速：1ml/min
波长：290nm
柱温：30℃
空白溶剂:甲醇
样品溶液:用甲醇溶解适量SZ-9306A或SZ-9306B，用0.22um滤膜过滤，进入液相色谱进行分析。
实施例10SZ-9386：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮
Figure BDA0002305458380000791
第1步：
LiHMDS(69ml，69mmol)在-78摄氏度滴加到化合物1(11g,42.6mmol)的THF(160ml)溶液中。所得反应混合物在-78-23摄氏度继续搅拌半小时。然后冷却到达-78摄氏度，接着把烯丙基溴(6.9g，60mmol)滴加到上述反应液内。所得反应混合物在-78-23摄氏度继续搅拌16小时。把得到的反应混合物加饱和NH4Cl水溶液(160ml)淬灭并且加水稀释(30ml)。分出有机相后水相使用乙酸乙酯萃取(0.1Lx3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，浓缩除去有机溶剂。所得粗产物用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝10:1；Rf＝0.1)纯化得到黄色液体产物9386A0(11g，87.3％)。
第2步：
把9334A0(6.3g,21mmol)在23摄氏度加入到水(80ml)和乙腈(80ml)的混合溶液中，接着依次加入NaIO4(14.6g)和RuCl3固体(0.13g)。所得反应混合物在23摄氏度继续搅拌3小时。所得黑棕色悬浊液加水稀释(110ml)后使用乙酸乙酯萃取(0.3Lx3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，浓缩除去有机溶剂。所得粗产物用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝10:1～1:1；Rf＝0.3)纯化得到9386A1(1.8g，28.6％，淡黄色液体)。
第3步：叔丁基(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-羰基-2,8-三氮杂螺[4.5]癸-8-羧酸酯(9386A2)
把NaBH(OAc)3(3.9g)在23摄氏度分批加入到化合物9386A1(1.8g,0.59mmol)和化合物2的1,2-二氯乙烷溶液中，所得反应混合物在16-23摄氏度继续搅拌16小时。然后把所得反应混合物加热到110摄氏度并且继续搅拌1小时。把所得反应混合物浓缩除去有机溶剂，残余物加饱和NH4Cl水溶液淬灭(30ml)，接着乙酸乙酯萃取(30mx3)。合并有机相后用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩除去溶剂，残留物用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝3:1～1:3；Rf＝0.3)纯化，得到偏白色固体化合物9386A2(1.6g，67.8％)。LCMS:[M+Na]+466.01@3.79min。
第4步：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,8-三氮杂螺[4.5]癸-1-酮；三氟乙酸盐(9386A3)
化合物9386A2(0.6g，1.39mmol)溶解在二氯甲烷(3ml)中，加入三氟乙酸(3ml)，21摄氏度搅拌1小时，水泵浓缩除去溶剂，然后使用油泵抽三分钟。所得粗产品9386A3(0.6g)直接下一步反应。LCMS:[M+H]+344.06@2.683min。
第5步：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(SZ-9386)
化合物9386A3(0.6g,1.39mol)、化合物3(0.58g,2.58mmol)和碳酸钾(1.1g,7.8mmol)依次加入到DMSO(6ml)中，110℃搅拌3小时。往体系中加入水(30ml)，用乙酸乙酯萃取(30mlx3)。合并有机相后用饱和食盐水洗涤(30mlx3)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用高压制备色谱纯化得到SZ-9386(110mg,14.9％，白色固体)。LCMS:[M+H]+531.10@3.103min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(d,J＝4.0Hz,1H),8.35(s,1H),7.93(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),6.15(br,,1H),6.07(br,1H),5.41(q,J＝4.0Hz,1H),4.69-4.39(m,2H),3.56-3.39(m,2H),3.16-3.09(m,3H),2.25(s,3H)，2.19(s,3H)，2.13-2.09(m,1H)，2.09-2.01(m,1H),,1.89-1.73(m,2H),1.61(d,J＝4.0Hz,3H),1.5(d,J＝12.0Hz,1H)，1.41(d,J＝12.0Hz,1H)。
实施例11SZ-013004：(S)-2-(2(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2，8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-胺
Figure BDA0002305458380000811
第1步：叔丁基(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-羧酸酯(013004A1)
在23摄氏度下把LAH(0.16g，4.19mmol)分批加入到化合物9386A2(0.3g,0.67mmol)的THF溶液中，然后另外加入THF(3ml)稀释反应体系。所得反应混合物在23摄氏度继续搅拌30分钟。所得反应混合物冷却到1-3摄氏度，加入THF(13ml)稀释反应体系。然后依次加入水(0.16ml),NaOH水溶液(0.16ml；16Wt％)，水(0.5ml)淬灭反应体系。所得反应混合物继续搅拌半小时。接着过滤并且使用THF(6mlx3)洗涤固体。合并滤液，减压浓缩，得到的粗产物使用制备薄层层析色谱法(PE：EA＝1:1；Rf＝0.6)得到淡黄色油状物013004A1(30mg，10.3％)。LCMS:[M+H+]430.12@2.98min。
第2步：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷；三氟乙酸盐(013004A2)
化合物013004A1(30mg，69.8umol)溶解在二氯甲烷(3ml)中，加入三氟乙酸(3ml)，21摄氏度搅拌1小时，水泵浓缩除去溶剂，然后使用油泵抽三分钟。所得粗产品013004A2(31mg，98％)直接下一步反应。LCMS:[M+H]+330.07@0.873min。
第3步：(S)-2-(2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-甲基-N-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-胺(SZ-013004)
化合物013004A2(31mg,69umol)、化合物3(31mg,0.13mmol)和碳酸钾(0.126g,0.9mmol)加入到DMSO(3ml)中，110℃搅拌16小时。所得反应混合物冷却到达室温后，往体系中加入水(30ml)，用乙酸乙酯(30mlx3)萃取。合并有机相后用饱和食盐水洗涤(30mlx3)，无水硫酸镁干燥，过滤。有机相减压浓缩得到粗品，用高压制备色谱分离纯化得到SZ-013004(6.3mg,18％，白色固体)。LCMS:[M+H]+517.10@2.23min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.49(d,J＝4.0Hz 1H),8.37(d,J＝4.0Hz 1H),7.95(dd,J1＝16.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.91(d,J＝16.0Hz,1H),7.68(d,J＝4.0Hz,1H),3.79-3.73(m,2H),3.69-3.63(m,3H),3.43-3.36(m,1H),2.81-2.75(m,1H),2.58(d,J＝8.0Hz,1H),2.56-2.51(m,1H),2.32(d,J＝8.0Hz,1H),2.25(s,3H),2.17(s,3H),1.76-1.69(m,2H),1.63-1.53(m,4H),1.37(d,J＝4.0Hz,3H)。
实施例12SZ-9391:(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380000821
第1步：叔丁基-(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-2,5-二羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入013002A4(560mg,1.2mmol)和THF(20ml)，搅拌下冷至0℃，再慢慢加入NaH(95mg,2.4mmol),加完升至室温搅拌20分钟。最后加入MeI(185mg,1.3mmol)，20℃反应12小时。反应液以饱和氯化铵溶液淬灭，而后加水(100ml)，用EA(50ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到9391A1(270mg，46％，白色固体)。LCMS:[M+H]+487.03。
第2步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物9391A1(270mg，0.55mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品9391A2,未做纯化直接下一步反应。
第3步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物9391A2(214mg,0.55mol)、中间体2(122mg,0.55mmol)和碳酸钾(303mg,2.2mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-9391(100mg,32％，白色固体)。LCMS:[M+H]+574.5。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.70(d,J＝4.5Hz,1H),8.40(s,1H),7.99-7.89(m,3H),6.29-6.01(m,2H),5.77(q,J＝7.0Hz,1H),4.55-4.45(m,2H),4.14(d,J＝17.8Hz,1H),3.69(d,J＝17.8Hz,1H),3.58-3.33(m,2H),2.84(s,3H),2.20(s,3H),2.13(s,3H),2.10-2.01(m,2H),1.98-1.85(s,2H),1.58(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例13SZ-9380：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮
Figure BDA0002305458380000831
Figure BDA0002305458380000841
第1步：叔丁基-4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-甲酰基哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入化合物9380A0(1.4g,3.1mmol)、PCC(1.34g,6.2mmol)和DCM(40ml)搅拌，25℃条件下搅拌反应12小时，硅藻过滤，滤液减压浓缩粗品，用快速硅胶柱色谱法纯化得到9380A1(1.1g，79％，白色泡沫状固体)。LCMS:De-Boc[M+H]+451.48。
第2步：叔丁基-(S)-4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入9380A1(1.1g,2.4mmol)，(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(根据WO2017079140制备)(0.5g,2.4mmol)和乙酸(0.1mL)、DCM(20mL)，搅拌使其溶解。最后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.56g,7.3mmol)，23-26℃反应6小时。反应液加饱和氯化铵溶液(100ml)，用EA(30ml*3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水洗涤(30ml*3)，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法纯化得到9380A2(800mg，52％，白色泡沫状固体)。LCMS:[M+H]+641.28。
第3步：叔丁基-(S)-4-氨基-4-(((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入9380A2(0.8g,1.25mmol)，二乙胺(5mL)和甲醇(20mL)，25℃搅拌反应3小时。反应液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法纯化得到9380A3(400mg，78％，白色泡沫状固体)。LCMS:[M+H]+348.19。
第四步：叔丁基-(S)-4-((叔-丁氧基羰基)氨基)-4-(((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入9380A3(0.4g,1.15mmol)和二碳酸二叔丁酯(0.3g，1.38mmol)和DCM(20mL)，在25℃条件下搅拌1小时，反应液加饱和氯化铵溶液(50ml)，用EA(15ml*3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水洗涤(15ml*3)，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法纯化得到9380A4(460mg，77％，白色泡沫状固体)。LCMS:[M+H]+519.33。
第五步：叔丁基-(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-羰基-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯
反应瓶中加入9380A4(460mg,0.89mmol)、NaOH(213mg，5.32mmol)和DMF(5mL)，在60℃条件下搅拌反应3小时，反应液用加入水(60mL)，用EA(15ml*3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水洗涤(15ml*3)，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法纯化得到9380A5(330mg，84％，白色泡沫状固体)。LCMS:[M+H]+445.16。
第六步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮
反应瓶中加入9380A5(330mg,0.74mmol)，溶解在二氯甲烷(5mL)中，缓慢滴加三氟乙酸(1mL)，25℃搅拌2小时，旋干溶剂未做纯化得到9380A6(360mg，粗品)，直接下一步。LCMS:[M+H]+345.23。
第七步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮
化合物9380A6(256mg,0.74mol)、9305A8(165mg,0.74mmol)和碳酸钾(410mg,3mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(10*3ml)萃取，有机相减压浓缩得到粗品，并用中压反相柱色谱法(ACN-0.1％HCO2H水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-9380(180mg，46％，白色固体)。LCMS:[M+H+]532.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.83(s,1H),9.19(s,1H),8.69(dd,J＝4.6,0.7Hz,1H),8.39(s,1H),8.02–7.78(m,3H),7.04(s,1H),6.13(d,J＝43.1Hz,2H),5.10(q,J＝7.1Hz,1H),3.91–3.74(m,2H),3.74–3.55(m,2H),3.28(d,J＝9.0Hz,1H),2.89(d,J＝9.0Hz,1H),2.18(s,3H),2.09(s,3H),1.59(dd,J＝11.0,6.5Hz,2H),1.51(d,J＝7.2Hz,5H)。
实施例14SZ-013011：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮
Figure BDA0002305458380000861
第1步：甲基-8-氨基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯
化合物013011A0(18g,90mmol)溶解在盐酸甲醇溶液(400mL)中，然后回流条件下反应6小时，体系冷却至室温，反应液减压旋干，得到013011A1粗品(25g，无色油状物)，不需纯化,直接进行下一步反应。LCMS:[M+H]+216.08。
第2步：甲基-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯
013011A1(15g,40mmol)溶解在四氢呋喃(100mL)和水(100mL)中，加入碳酸钾(11g,80mmol)后室温搅拌16小时，然后加入水(400mL)，随后用乙酸乙酯(300mL)提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干得到粗品，用快速硅胶柱色谱法得到013011A2(8g,63％，无色油状物)。LCMS:[M+H]+316.06。
第3步：叔丁基(8-羟甲基)-1,4-二氧杂环螺[4.5]癸-8-基)氨基甲酸酯
013011A2(8g,0.025mol)溶解在THF(100ml)中，分批加入LiAlH4(1g,0.025mol)，控制反应温度不超过25度搅拌1小时，TLC监测原料消失，加入饱和氯化铵淬灭，随后用乙酸乙酯(300mL)提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干得到粗品，用快速硅胶柱色谱法得到013011A3(3.3g,46％，无色油状液体)。LCMS:[M+H]+288.08。
第4步：叔丁基(8-甲酰-1,4-二氧硅[4.5]癸-8-基)氨基甲酸酯
013011A3(2.87g,0.01mol)溶解在DCM(30ml)中，加入PCC(6.46g,0.03mol)，25℃条件下搅拌4小时，反应液加入硅胶拌样，用快速硅胶柱色谱法得到013011A4(2g,70％，白色固体)。LCMS:[M+H]+285.99。
第5步：叔丁基-(8-(((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)氨基)甲基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)氨基甲酸酯
013011A4(2g,7mmol)溶解在DCE(30ml)中，加入冰乙酸(1mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(4.45g,21mmol)，25℃条件下搅拌4小时，反应液加入硅胶拌样，用快速硅胶柱色谱法得到013011A5(2.3g,70％，白色固体)。LCMS:[M+H]+476.12。
第6步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9,12-二氧杂-1,3-二氮杂二螺[4.2.48.25]十四烷-2-酮
013011A5(2.3g,4.84mmol)溶解在DMF(30ml)中，加入氢氧化钠(1.16g，29mmol)，60℃条件下搅拌4小时，然后加入水(100mL)，随后用乙酸乙酯(30*3mL)提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干得到粗品，用快速硅胶柱色谱法得到013011A6(1.6g,82％，白色固体)。LCMS:[M+H]+402.07。
第7步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9,12-二氧杂-1,3-二氮杂二螺[4.2.48.25]十四烷-2-酮
013011A6(1.6g,4mmol)溶解在DMF(20ml)中，加入氢化钠(0.16g，4mmol)，0℃条件下搅拌1小时，然后加入碘甲烷(0.85g，6mmol)，40℃条件下搅拌4小时，然后加入水(100mL)，随后用乙酸乙酯(30*3mL)提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干得到粗品，用快速硅胶柱色谱法得到013011A7(1.45g,87％，白色固体)。LCMS:[M+H]+416.10。
第8步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-1,3-二氮杂螺[4.5]癸烷-2,8-二酮
013011A7(1.45g,3.5mmol)溶解在Dioxane(30ml)中，加入4N盐酸(9mL)，40℃条件下搅拌6小时，然后加入水(100mL)，随后用乙酸乙酯(30*3mL)提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干得到粗品，用快速硅胶柱色谱法得到013011A8(1g,77％，白色固体)。LCMS:[M+H]+372.12。
第9步：3-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-2-羰基-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基三氟甲磺酸酯
013011A8(1.0g,2.7mmol)溶解在无水四氢呋喃(20mL)中，氩气保护下将体系冷却到-70℃并将LiHMDS(3mL,1mol/L)缓慢滴入，然后再此温度下搅拌1小时，随后将苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(1g,2.7mmol)的四氢呋喃(10mL)快速加入体系并升温到0℃搅拌3小时。反应完毕后加入100mL饱和氯化铵淬灭，用50mL乙酸乙酯提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干并用快速硅胶柱色谱法纯化得013011A9(0.8g,59％，白色固体)。LCMS:[M+H]+504.02。
第10步：3-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-7-烯-2-酮
013011A9(0.8g，1.6mmol)和联硼酸频哪醇(0.4g，1.6mmol)、Pd(dppf)2Cl2.DCM(65mg，5％)、乙酸钾(0.47g，4.8mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(30mL)中并加热到80度搅拌4小时。反应完毕后冷却旋去溶剂，用快速硅胶柱色谱法纯化得013011A10(0.6g，78％，白色固体)。LCMS:[M+H]+482.16。
第11步：3-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-7-烯-2-酮
013011A10(0.6g,1.25mmol)和9305A8(279mg,1.25mmol)、Pd(PPh3)4(72mg,5％)、碳酸钾(518mg,3.75mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(6mL)和水(2mL)中，在125℃微波下搅拌5小时，所得反应液旋干用快速硅胶柱色谱法纯化得013011A11(600mg,89％，白色固体)。LCMS:[M+H]+542.16。
第12步：(S)-3-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,3-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮
013011A11(0.6g，1.1mmol)溶解在甲醇(10mL)中，加入甲酸铵(0.7g,11mmol)和氢氧化钯/C(100mg)，在60℃条件下搅拌3小时，过滤，有机相减压旋干得到粗品，并用中压反相柱色谱法(ACN-0.1％HCO2H水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-013011A(150mg，白色固体)和SZ-013011B(50mg，白色固体)。LCMS:[M+H]+545.7。
SZ-013011A:LCMS tR＝2.059min，HPLC tR＝5.68min，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.89(s,1H),9.50(s,1H),8.69(d,J＝4.1Hz,1H),8.40(d,J＝2.0Hz,1H),8.05–7.80(m,3H),6.81(s,1H),6.13(s,1H),5.14(q,J＝7.0Hz,1H),3.27(d,J＝8.8Hz,1H),2.90(d,J＝8.8Hz,1H),2.63(s,3H),2.55(d,J＝11.3Hz,1H),2.21(s,3H),2.14(s,3H),1.86(dt,J＝28.4,13.2Hz,4H),1.71–1.48(m,6H),1.40(d,J＝12.1Hz,1H)。
SZ-013011B:LCMS tR＝2.100min，HPLC tR＝6.32min，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.92(s,1H),9.51(s,1H),8.76–8.62(m,1H),8.39(s,1H),7.97–7.85(m,3H),6.87(s,1H),6.87(s,1H),6.14(s,1H),6.14(s,1H),5.11(q,J＝7.1Hz,1H),5.11(q,J＝7.1Hz,1H),3.31(d,J＝9.0Hz,1H),2.93–2.77(m,2H),2.47–2.28(m,5H),2.26(s,3H),2.18(s,3H),1.99–1.57(m,4H),1.52(d,J＝7.2Hz,3H),1.32(d,J＝11.9Hz,1H),1.15(d,J＝12.4Hz,1H)。
SZ-013011A和SZ-013011B的HPLC分析方法如下：
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTMC18 2.5um4.6*150mmColumn XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：PDA全波长，254nm，220nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
Figure BDA0002305458380000891
实施例15SZ-013002：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380000892
Figure BDA0002305458380000901
第1步：叔-丁基(S)-4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯(013002A1)
反应瓶中加入9307A1(2.3g,5mmol)和DMF(20ml)，搅拌，再加入(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(根据WO2017079140制备)(1.0g,5mmol)、DIPEA(1.9g,15mmol)，最后加入HATU(2.3g,6mmol)，20℃反应1小时。反应液加水(100ml)，用EA(50mlx3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到013002A1(2.0g，61％，白色固体)。LCMS:[M+H]+655.06。
第2步：叔-丁基(S)-4-氨基-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯(013002A2)
化合物013002A1(2.0g，3.0mmol)和甲醇(5ml)，搅拌，再加入乙二胺(10ml)，20℃反应2小时。反应液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013002A2(1.1g，85％，无色油状液体)。LCMS:[M+H]+433.08。
第3步：叔-丁基(S)-4-(2-氯乙酰氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯(013002A3)
反应瓶中加入013002A2(1.1g,2.5mmol)和无水THF(20ml)，搅拌，再加入三乙胺(500mg,5mmol)，冷却至0℃，滴加氯乙酰氯(316mg,2.8mmol)，滴完升温至20℃反应12小时。反应液加水(40ml)，用EA(10mlx3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013002A3(500mg，39％，白色固体)。LCMS:[M+H]+509.04。
第4步：叔-丁基(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯(013002A4)
反应瓶中加入013002A3(500mg,1.0mmol)和无水THF(10ml)，搅拌，冷却至0℃，再加入氢化钠(60％吸附于矿物油，80mg,2.0mmol)，缓慢升温至60℃搅拌反应20分钟。反应完冷却至室温，以2ml水淬灭反应。反应液加水(40ml)，用EA(10mlx3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013002A4(400mg，85％，白色固体)。LCMS:[M+H]+473.01。
第5步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮(013002A5)
化合物013002A4(200mg，0.42mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(1ml)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013002A5,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+373.06。
第6步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮(SZ-013002)
化合物013002A5(157mg,0.42mol)、中间体2(93mg,0.42mmol)和碳酸钾(231mg,1.68mmol)加入到DMSO(5ml)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50ml的水，乙酸乙酯(20mlx3)萃取，有机相减压浓缩得到粗品，快速硅胶柱色谱法(DCM/EA 50％)纯化，产物再以乙腈/水溶解，冷冻干燥，得到SZ-013002(110mg,47％，白色固体)。LCMS:[M+H]+560.15；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),9.25(s,1H),8.70(d,J＝4.4Hz,1H),8.64(s,1H),8.38(s,1H),7.96-7.89(m,3H),6.29-6.03(m,2H),5.76(q,J＝7.0Hz,1H),4.28-4.17(m,2H),4.05(d,J＝17Hz,1H),3.63-3.51(m,3H),2.20(s,3H),2.12(s,3H),2.04-1.92(m,2H),1.74-1.61(m,2H),1.56(d,J＝7.1Hz,3H)。
实施例16SZ-013005:(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-酮
Figure BDA0002305458380000911
Figure BDA0002305458380000921
第1步：叔丁基4-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-(硝基甲基)哌啶-1-羧酸酯
把TBAF的四氢呋喃溶液(15mL，15mmol,1M)在23摄氏度分批加到化合物1(1.29g,5mmol)和硝基甲烷(0.8mL，15mmol)的THF(3mL)溶液中。所得反应混合物加热到86摄氏度并且继续搅拌16小时。所得反应混合物冷却到达室温后加饱和NH4Cl水溶液(30mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(30mL*3)。合并有机相后加无水Mg2SO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。所得粗产品经硅胶柱色谱纯化(PE：EA＝30:1->10:1；Rf＝0.3)，得到无色油状产物013005A0(1.1g，粗品)。
第2步：叔丁基4-甲酰基-4-(2-甲氧基-2-氧乙基)哌啶-1-羧酸酯
把KOH(0.126g,1.1mmol)的甲醇(3.6mL)溶液在1-3摄氏度滴加到013005A0(0.6g，1.8mmol)的甲醇(6mL)溶液中。所得反应混合物在1-3摄氏度继续搅拌30分钟。然后把Mg2SO4(0.19g，1.36mmol)和高锰酸钾(0.216g，1.36mmol)的水(30mL)溶液滴加到以上反应液内。所得反应混合物在1-3摄氏度继续搅拌1小时。所得悬浊液用硅藻土过滤，滤液合并旋干溶剂，然后使用油泵继续减压浓缩得到淡黄色油状物013005A1(0.29g，粗品)直接用于下一步反应。
第3步：叔丁基-(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-3-氧-2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸酯
把NaBH(OAc)3(0.63g，3mmol)在23摄氏度分批加入到化合物013005A1(0.29g,1mmol)和化合物2(0.23g，1mmol)的1,2-二氯乙烷(6mL)悬浊液中，所得反应混合物在16-23摄氏度继续搅拌16小时。所得反应混合物加饱和氯化铵水溶液淬灭(30mL)，二氯甲烷萃取(30mL*3)。合并有机相后用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩除去溶剂，残留物用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝10:1->3:1->1:1->EA->EA:MeOH＝10:1；Rf＝0.3)纯化，得到类白色固体013005A2(0.3g，67％)。LCMS:[M+H]+444.04@3.686min。
第4步：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2，8-二氮杂螺[4.5]癸-3-酮；三氟乙酸盐
把三氟乙酸(3mL)在23摄氏度分批加入到化合物013005A2(0.3g，0.669mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)中。所得反应混合物在23摄氏度继续搅拌一个小时。所得反应混合物旋干溶剂，然后使用油泵减压浓缩得淡黄色油状产物013005A3(0.23g，99％)直接用于下一步反应。LCMS:[M+H]+344.04@2.593min。
第5步：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-2,8二氮杂螺[4.5]癸烷-3-酮
把化合物013005A3(0.23g，0.67mmol)，化合物3(0.16g，0.73mmol)，碳酸钾(0.56g，3.9mmol)和DMSO(6mL)的悬浊液加热到180摄氏度并且继续搅拌1小时。所得反应混合物冷却到21摄氏度然后加水稀释(30mL)，乙酸乙酯萃取(30mL*3)。合并有机相后加饱和食盐水洗涤(30mL*3)，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用柱色谱纯化(PE：EA＝10:1->3:1->1:1->EA->DCM:MeOH＝10:1(加入3V/V％的浓氨水帮助洗脱),Rf＝0.1)得到不纯化合物SZ-013005(50mg)。接着使用高压制备色谱纯化得到白色固体化合物SZ-013005(3.6mg，46.9％)。LCMS:[M+H]+531.13@3.001min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),8.43(s,1H),7.98-7.96(m,2H),7.72(dd,J1＝4.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),6.13(s,1H),6.15(br,1H),6.10(s,1H),5.49(q,J＝8.0Hz)3.98-3.91(m,1H),3.86-3.78(m,1H),3.73-3.63(m,2H),3.41(d,J＝8.0Hz,1H),3.04(d,J＝8.0Hz,1H)2.46(d,J＝4.0Hz,2H),2.27(s,3H),2.21(s,3H),1.73-1.69(m,2H),1.63(d,J＝8.0Hz,3H)1.63-1.46(m,2H)。
实施例17SZ-9387:(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-1-酮
Figure BDA0002305458380000941
第1步：乙基-1,4-二氧螺[4,5]癸烷-8-羧酸酯
把LiHMDS(51mL，51mmol)在-78摄氏度滴加到化合物1(6.5g,30mmol)的THF(60mL)溶液中。所得反应混合物在-78到16摄氏度继续搅拌一小时。然后冷却到-78摄氏度，再将烯丙基溴(3.39mL，39mmol)滴加到上述反应液内。所得反应混合物在-78到16摄氏度继续搅拌16小时。把得到的反应混合物加饱和NH4Cl水溶液(90mL)淬灭并且加水稀释(30mL)。分出有机相后,水相使用乙酸乙酯萃取(0.1L*3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。然后使用油泵抽三分钟，得到黄色液体产物9387A0(8g，粗品)。
第2步：乙基8-烯丙基-1,4-二氧螺[4,5]癸烷-8-羧酸酯
把9387A0(5.18g,21mmol)在13摄氏度加入到水(93mL)和乙腈(96ml)的混合溶液中，接着分批依次加入NaIO4(13.9g)和RuCl3固体(0.129g)。所得反应混合物在13摄氏度继续搅拌1.6小时。所得灰白色悬浊液加水稀释(390mL)后使用乙酸乙酯萃取(0.3L*3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。然后使用油泵抽三分钟，得到淡黄色油状物9387A1(3.9g，粗品)。
第3步：(S)-10-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧-10-氮杂螺[4.2.48.25]十四烷基-9-酮
把NaBH(OAc)3(9g，42.6mmol)在18摄氏度分批加入到化合物9387A1(3.9g,15.3mmol)和化合物2(3g，15.3mmol)的1,2-二氯乙烷溶液中，所得反应混合物在9至18摄氏度继续搅拌16小时。然后把所得反应混合物加热到110摄氏度并且继续搅拌1.6小时。所得反应混合物加水淬灭(300mL)，接着乙酸乙酯萃取(100mL*3)。合并有机相后用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩除去溶剂，残留物用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝10:1->3:1->1:1->1:3->EA->EA:MeOH＝10:1；Rf＝0.3)纯化，得到黄色油状物9387A2(2.6g，42.3％)。LCMS:[M+H]+401.26@3.503min。
第4步：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-氮杂螺[4.5]癸-1,8-二酮
化合物9387A2(2.6g，6.48mmol)溶解在1,4-二氧六环(29mL)中，在13摄氏度向反应液中分批加入盐酸(30mL,6M)，加热到69摄氏度并且继续搅拌16小时。所得反应混合物冷却到13摄氏度并且使用固体Na2CO3调节体系pH>9(如有大量不溶固体出现，适当加水溶解，但请保持体系为Na2CO3饱和)。此混合物使用乙酸乙酯萃取(60mL*3)，合并有机相后使用无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂得到白色固体产品9387A3(1.96g，86％)直接用于下一步反应。LCMS:[M+H]+357.19@3.280min。
第5步：2-((S)1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-羰基-2-氮杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基三氟甲磺酸酯
在-78摄氏度把LiHMDS(16.5mL，16.5mmol)用注射器分批加入到化合物9387A3(1.96g,5.5mol)的四氢呋喃溶液中。所得反应混合物在-78摄氏度继续搅拌1小时。然后在-78摄氏度缓慢加入PhNTf2(2.16g,6.1mmol)的四氢呋喃溶液(13mL)。所得反应混合物在-78升温至13摄氏度继续搅拌16小时。接着往体系中加入饱和NH4Cl水溶液(100mL)淬灭反应并用乙酸乙酯萃取(60ml*3)。合并有机相后用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用柱色谱纯化(PE：EA＝10:1->3:1->1:1,Rf＝0.3)得到白色固体化合物9387A4(1.26g，46.9％)。LCMS:[M+H+]489.16@3.987mi。
第6步：2-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼酸酯-2-基)-2-氮杂螺[4.5]癸-7-烯-1-酮
在18摄氏度下把9387A4(1.26g,2.58mmol)，双联片呐醇硼酸酯(0.8g，3.1mmol)，醋酸钾(0.8g，8mmol)，1,4-二氧六环(26mL)和PdCl2(dppf)DCM(68mg)的悬浊液搅拌下用氮气置换三次，然后在氮气保护下加热至90摄氏度并且继续搅拌3小时。所得反应混合物冷却到19摄氏度，然后加水(60mL)淬灭。乙酸乙酯萃取(60mL*3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。粗产物经快速柱色谱纯化(PE：EA＝10:1->3:1->1:1->1:3->EA；Rf＝0.3)得到白色固体产物9387A5(1.01g，83.7％)。LCMS:[M+H+]467.30@4.101min。
第7步：2-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-2-氮杂螺[4.5]癸-7-烯-1-酮
在16摄氏度下把Pd(PPh3)4(69mg)分批加入到化合物9387A5(0.8g，1.6mmol)，化合物3(0.39g，1.6mmol)，碳酸钾(0.69g，5.3mmol)，1,4-二氧六环(13mL)和水(3mL)的悬浊液中。氮气置换三次，所得反应混合物在Biotage微波反应器内：130摄氏度反应一小时。所得红黄色溶液冷却到室温后加水淬灭(60mL)，乙酸乙酯萃取(60mL*3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。粗产物用快速硅胶柱色谱纯化(PE：EA＝3:1->1:1->1:3->EA->EA:MeOH＝30:1->16:1；Rf＝0.1)得到白色固体产物9387A6(0.39g,46.19％)。LCMS:[M+H+]528.32@3.208min。
第8步：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H))吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-1-酮。
把化合物9387A6(300mg,0.568mmol)在16摄氏度加入到Pd(OH)2/C(300mg)的甲醇(60mL)黑色悬浊液中，接着加入甲酸铵固体(16g)。所得反应混合物加热到69摄氏度并且继续搅拌一个小时。冷却到室温后，用硅藻土过滤并且用甲醇洗涤(30mL*3)。合并滤液以后旋干溶剂然后加水溶解(60mL)，此溶液经加入固体Na2CO3碱化直至饱和。然后乙酸乙酯萃取(60mL*3)，合并有机相后加无水MgSO4干燥过滤旋干有机溶剂。此粗产物经过高压制备液相色谱纯化后得到两个非对映异构体：
SZ-9387A(86mg,28％，白色固体)。LCMS:[M+H+]530.32@3.217min。HPLC tR＝7.53min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.42(d,J＝4.0Hz,1H),8.28(d,J＝4.0Hz,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.8(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.60(d,J＝4.0Hz,1H),6.63(br,1H),6.15(br,1H),5.34(q,J＝4.0Hz,1H),3.42-3.36(m,1H),3.03-2.96(m,1H),2.61(br,1H),2.23(s,3H),2.18(s,3H),2.06-1.91(m,2H),1.89-1.76(m,2H),1.76-1.63(m,4H),1.61-1.56(m,1H)，1.53(d,J＝8.0Hz,3H)，1.46-1.43(m,1H)。
SZ-9387B(110mg,37％，白色固体)。LCMS:[M+H+]530.32@3.349min。HPLC tR＝8.45min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(dd,J1＝4.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),8.40(s,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(dd,J1＝4.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.71(d,J＝4.0Hz,1H),6.75(br,1H),6.44(br,1H),5.44(q,J＝4.0Hz,1H),3.53-3.43(m,1H),3.10-3.03(m,1H),2.78(br,1H),2.56-2.41(m,2H),2.35(s,3H),2.32(s,3H),2.13-2.03(m,1H),1.98-1.89(m,3H),1.86-1.76(m,2H)，1.63(d,J＝8.0Hz,3H)，1.56-1.39(m,2H)。
SZ-9387A和SZ-9387B的HPLC分析条件如下：
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTM C18 3.5um 4.6*150mm Column XP；
流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1.0ml/min；
波长：287nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；
样品溶液:用甲醇溶解适量SZ-9387,用0.22um滤膜过滤，进入液相色谱进行分析。
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
10 37.5 62.5
15 20 80
15.1 75 25
18 75 25
实施例18SZ-9329：2-(2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1,4,8-三氮杂螺[4.5]癸-1,3-二烯-8-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
Figure BDA0002305458380000971
第1步：6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)嘧啶-4-胺
4-哌啶酮缩乙二醇(470mg,3.2mol)、中间体2(670mg,3.0mmol)和碳酸钾(1.2g,9.0mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml*3)萃取，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(MeOH/EA 10％)，得到9329A1(1.0g,99％，白色固体)。[M+H]+331.18。
第2步：1-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-酮
化合物9329A1(1.0g，3.0mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)，搅拌下加入6N浓盐酸(5mL,30mmol)，20℃反应2小时。反应液用饱和碳酸氢钠中和，乙酸乙酯(20ml*3)萃取,有机相减压旋干得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-10％)纯化得到9329A2(700mg，81％，白色固体)。LCMS:[M+H]+287.08。
第3步：2-(2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1,4,8-三氮杂螺[4.5]癸-1,3-二烯-8-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
化合物013037A4(350mg，1.4mmol)溶解在甲苯(20mL)中，加入9329A2(400mg,1.4mmol)、醋酸铵(540mg,7.0mmol)，搅拌下加热回流12小时，反应完成后旋干溶剂得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到SZ-9329(15mg,2％,白色固体)。LCMS:[M+H]+514.32。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.86(s,1H),9.23(s,1H),8.70-8.68(m,1H),8.40-8.38(m,1H),7.94-7.85(m,3H),6.25(s,1H),6.10(s,1H),4.11-4.03(m,4H),3.98-3.91(m,2H),2.20(s,3H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),1.63-1.55(m,2H),1.52-1.44(m,2H)。
实施例19SZ-013037：(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)(3-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,8-三氮杂螺[4.5]癸-1,3-二烯-2-基)甲酮
Figure BDA0002305458380000981
Figure BDA0002305458380000991
第1步：(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲醇
反应瓶中加入2-氯-5-羟甲基吡啶(4.3g,30mmol)、4-氟-1H-吡唑(2.6g,20mmol)、碳酸铯(9.6g,30mmol)和DMSO(100ml)，加热到140℃搅拌16h。反应液加水(200ml)，用EA(150ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到013037A1(5.0g，87％，白色固体)。LCMS:[M+H]+194.03。
第2步：5-(氯甲基)-2-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶
化合物013037A1(5.0g，26mmol)和DCM(50ml)，搅拌下冷至0℃，再加入氯化亚砜(6.1g,52mmol)，升至20℃反应2小时。反应液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-10％)纯化得到013037A2(4.0g，73％，白色固体)。LCMS:[M+H]+212.02。
第3步：3-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)戊烷-2,4-二酮
反应瓶中加入013037A2(3.6g,19mmol)、碘化钾(2.8g,19mmol)、氢氧化锂一水合物(1.8g,42mmol)和DMF(20ml)，搅拌，再加入乙酰丙酮(19g,190mmol)，加完升至75℃反应3小时。反应液加水(200ml)搅拌，而后过滤即得013037A3(3.2g，61％，白色固体)。LCMS:[M+H]+276.10。
第4步：1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)丁烷-2,3-二酮
反应瓶中加入013037A3(3.2g,11.6mmol)和无水THF(20ml)，搅拌下冷却至0℃，加入氢化钠(500mg,12.8mmol)，而后升至20℃反应20分钟。将体系冷却至-78℃，缓慢加入亚硝基苯(1.5g,12.8mmol，溶于15mL THF中)。加完升至20℃反应1h。饱和氯化铵淬灭反应。反应液加水(40ml)，用EA(10ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013037A4(1g，35％，白色固体)。
第5步：叔丁基2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1,4,8-三氮杂螺[4.5]癸-1,3-二烯-8-羧酸酯
化合物013037A4(1g，4.0mmol)溶解在甲苯(20mL)中，加入N-Boc哌啶酮(800mg,4.0mmol)、醋酸铵(1.5g,20mmol)，搅拌下加热回流12小时，反应完成后旋干溶剂得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013037A5(600mg,35％,白色固体)。LCMS:[M+H]+427.25。
第6步：2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1,4,8-三氮杂螺[4.5]癸-1,3-二烯
化合物013037A5(600mg,1.4mol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013037A6,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+327.19。
第7步：(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)(3-甲基-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,8-三氮杂螺[4.5]癸-1,3-二烯-2-基)甲酮
化合物013037A6(460mg,1.4mol)、中间体2(310mg,1.4mmol)和碳酸钾(770mg,5.6mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(MeOH/EA 10％)纯化，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013037(60mg,8％，白色固体)。LCMS:[M+H]+528.30。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),9.27(s,1H),9.19-9.17(m,1H),8.84(d,J＝4.4Hz,1H),8.65(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.12-8.07(m,2H),6.29(s,1H),6.12(s,1H),4.15-4.02(m,4H),2.44(s,3H),2.19(s,3H),2.15(s,3H),1.78-1.72(m,4H)。
实施例20SZ-013038：2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-1-酮
Figure BDA0002305458380001011
第1步：叔丁基2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-1-羰基-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入1-氧代-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(270mg,1.0mmol)、碘化钾(166mg,1.0mmol)和THF(10ml)，搅拌下冷却至0℃，而后加入氢化钠(80mg,2.0mmol)，搅拌20分钟后加入013037A2(211mg,1.0mmol)，升至20℃反应3小时。反应液以饱和氯化铵溶液淬灭，加水(20ml)，用EA(15ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到013038A1(360mg，81％，白色固体)。LCMS:[M+H]+444.23。
第2步：2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-1-酮
化合物013038A1(360mg，0.81mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013038A2,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+344.21。
第3步：2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-1-酮
化合物013038A2(278mg,0.81mol)、中间体2(180mg,0.81mmol)和碳酸钾(447mg,3.24mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml*3)萃取，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(MeOH/EA 10％)纯化，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013038(180mg,42％，白色固体)。LCMS:[M+H]+531.32。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.85(s,1H),9.21(s,1H),8.69(d,J＝4.6Hz,1H),8.32(d,J＝1.9Hz,1H),7.94-7.87(m,2H),7.84-7.81(m,1H),6.29-6.04(m,2H),4.53(s,2H),4.38-4.30(m,2H),3.31-3.15(m,4H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),2.00-1.76(m,6H),1.53-1.45(m,2H)。
实施例21SZ-013039：2-(2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
Figure BDA0002305458380001021
第1步：叔丁基2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入013037A2(211mg,1.0mmol)、2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-甲酸叔丁酯(250mg,1.0mmol)、碘化钾(166mg,1.0mmol)、DIPEA(380mg,3.0mmol)和乙腈(10ml)，搅拌下加热至80℃反应2小时。加水(20ml)，用EA(15ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE0-50％)纯化得到013039A1(400mg，93％，白色固体)。LCMS:[M+H]+430.38。
第2步：2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
化合物013039A1(400mg，0.93mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013039A2,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+330.22。
第3步：2-(2-((6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
化合物013039A2(300mg,0.93mol)、中间体2(210mg,0.93mmol)和碳酸钾(510mg,3.72mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml*3)萃取，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(MeOH/EA 10％)纯化，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013039(140mg,29％，白色固体)。LCMS:[M+H]+517.29。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H),8.69-8.66(m,1H),8.38-8.35(m,1H),8.16(s,1H),7.93-7.86(m,3H),6.20-6.03(m,2H),3.75-3.66(m,2H),3.57-3.52(m,2H),2.39(s,2H),2.20(s,5H),2.08(s,3H),1.61-1.30(m,8H)。
实施例22SZ-9399：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
Figure BDA0002305458380001031
Figure BDA0002305458380001041
第1步：1-叔丁基-4-甲基-4-(烯丙氧基)哌啶-1,4-二羧酸酯(9399A2)
9399A1(4.8g,18.4mmol)溶解在DMF(50mL)中，氢化钠(1.6g,60％in oil,27.1mmol)分批加入，加完继续搅拌10min。将烯丙基溴(3.2g,26.6mmol)一次性加入并在室温搅拌1小时，反应液加水(50ml)，用EA(50mLx2)萃取，有机相旋干并用快速硅胶柱色谱法(EA：PE＝1:4)纯化得到无色油状物9399A2(3.7g,61％)。LCMS:[M-100]+199.13。
第2步：1-叔丁基-4-甲基4-(2-羰基乙氧基)哌啶-1,4-二羧酸酯(9399A3)
9399A2(1g,5mmol)溶解在15mL的乙腈和15mL的水中，依次加入高碘酸钠(2.1g,9.8mmol)和催化量的三氯化钌(1％)，反应液在室温搅拌2小时后加水(50ml)，用EA(50mL)萃取，有机相旋干得1g的9399A3粗品。LCMS:[M+H]+301.21。
第3步：(S)-1-叔丁基-4-甲基4-(2-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基)乙氧基)哌啶-1,4-二羧酸酯(9399A5)
9399A3(500mg粗品)和9399A4(460mg,1.65mmol)混悬在二氯乙烷(15mL)中，将三乙酰氧基硼氢化钠(690mg,3.3mmol)加入体系，反应液逐渐澄清，3小时后加入碳酸钠调节体系pH至8左右，DCM(50mL)萃取，有机相旋干并用快速硅胶柱色谱法(EA：MeOH＝10:1)纯化得到无色油状物9399A5(400mg)。LCMS:[M+H]+491.11。
第4步：(S)-叔丁基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-羰基-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯(9399A6)
9399A5(400mg,0.81mmol)溶解在10mL的无水甲醇中，一次性加入0.4mL的甲醇钠的甲醇饱和溶液，反应液在50度下搅拌20小时，旋去溶剂后用快速硅胶柱色谱法(EA：PE＝1:1)纯化得到无色油状物9399A6(220mg)。LCMS:[M+H]+459.03。
第5步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮(9399A7)
9399A6(220mg)溶解在DCM(5mL)中加入TFA(2mL)，2小时后旋去溶剂得到9399A7，直接下一步反应。LCMS:[M+H]+359.18。
第6步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮(SZ-9399)
上一步得到的9399A7和9399A8(97mg，0.43mmol)以及碳酸钾(237mg,1.7mmol)溶解在DMSO里并在115度搅拌6小时，反应结束后直接将粗品经过高压反相柱色谱法(ACN-0.1％碳酸铵水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-9399(66mg,28％)。LCMS:[M+H]+546.21。HPLCtR＝7.25min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.84(s,1H),9.22(s,1H),8.66(dd,J1＝4.4Hz,J2＝0.8Hz,1H),8.35(s,1H),7.89-7.94(m,3H),6.10-6.30(m 2H),5.76(q,J＝6.8Hz,1H),4.48-4.53(m,2H),3.81-3.90(m,2H),3.36-3.42(m,2H),2.93-3.06(m,2H),2.19(s,3H),2.11(s,3H),1.78-2.01(m,4H),1.53(d,J＝6.8Hz,1H)。
实施例23SZ-013043：(S)-1-乙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001051
Figure BDA0002305458380001061
第1步：叔丁基-(S)-4-(乙胺基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入013002A2(2.1g,5mmol)和乙醛(5M in THF)(2mL,10mmol)溶于DCM(25mL)，搅拌下加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.0g,15mmol)，20℃反应2小时。反应液加水(100ml)，用EA(50ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到013043A1(800mg，34％，白色固体)。LCMS:[M+H]+461.32。
第2步：叔丁基-(S)-4-(2-氯-N-乙基乙酰氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入013043A1(800mg,1.7mmol)和无水THF(20ml)，搅拌，再加入三乙胺(500mg,5mmol)，冷却至0℃，滴加氯乙酰氯(214mg,1.9mmol)，滴完升温至20℃反应12小时。反应液加水(40ml)，用EA(10ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013043A2(550mg，60％，白色固体)。LCMS:[M+H]+537.26。
第3步：叔丁基-(S)-1-乙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入013043A2(550mg,1.03mmol)、碘化钾(170mg,1.0mmol)和无水THF(10ml)，搅拌，冷却至0℃，再加入氢化钠(60％吸附于矿物油，80mg,2.0mmol)，缓慢升温至60℃搅拌反应20分钟。冷却至室温，以饱和氯化铵溶液淬灭反应。反应液加水(40ml)，用EA(10ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013043A3(220mg，44％，白色固体)。LCMS:[M+H]+501.25。
第4步：(S)-1-乙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013043A3(220mg，0.44mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013043A4,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+401.24。
第5步：(S)-1-乙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013043A4(200mg,0.44mol)、中间体2(110mg,0.5mmol)和碳酸钾(270mg,2.0mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(MeOH/EA 10％)纯化，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013043(70mg,27％，白色固体)。LCMS:[M+H]+588.34。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.87(s,1H),9.24(s,1H),8.72-8.69(m,1H),8.40(d,J＝2.0Hz,1H),7.98-7.90(m,3H),6.29-6.03(m,2H),5.76(q,J＝7.0Hz,1H),4.58(d,J＝12.5Hz,2H),4.14(d,J＝17.5Hz,1H),3.69(d,J＝17.5Hz,1H),3.51-3.37(m,4H),2.20(s,3H),2.12(s,3H),2.10-2.01(m,2H),1.91-1.79(m,2H),1.58(d,J＝7.23Hz,3H),0.99(t,J＝7.10Hz,3H)。
实施例24SZ-013049：(S)-2-(4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
Figure BDA0002305458380001071
Figure BDA0002305458380001081
第1步：叔丁基-(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
把硼烷的四氢呋喃溶液(21mL，21mmol,1M)在21摄氏度分批加到化合物013049A0(1g,2.1mmol)的THF(16mL)溶液中。所得反应混合物加热到69摄氏度并且继续搅拌1.8小时。所得反应混合物冷却到达室温后加饱和NH4Cl水溶液(10mL)淬灭，然后加水稀释(30mL)。所得溶液加入固体Na2CO3直至饱和后，乙酸乙酯萃取(30mL*3)。合并有机相后加无水Mg2SO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。所得粗产品经过硅胶柱色谱纯化(PE：EA＝10:1->3:1；Rf＝0.3)，得到淡黄色油状产物013005A1(90mg)。LCMS:[M+H]+445.24@3.916min。
第2步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷；三氟乙酸盐
把三氟乙酸(3mL)在21摄氏度分批加入到化合物013049A1(90mg，0.19mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)中。所得反应混合物在21摄氏度继续搅拌一个小时。所得反应混合物旋干溶剂，然后使用油泵继续减压浓缩，得黄色油状产物013049A2(90mg)，直接用于下一步反应。LCMS:[M+H]+345.18@2.177min。
第3步：：(S)-2-(4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
把化合物013049A2(90mg，0.19mmol)，化合物1(60mg，0.269mmol)，碳酸钾(0.3g，2.16mmol)和DMSO(3mL)的悬浊液加热到169摄氏度并且继续搅拌90分钟。所得反应混合物冷却到21摄氏度然后加水稀释(10mL)，乙酸乙酯萃取(10mL*3)。合并有机相后加饱和食盐水洗涤(10mL*3)，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用高压制备色谱纯化得到白色固体化合物SZ-013049(6mg，6％)。LCMS:[M+H]+532.35@2.513min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(d,J＝4.0Hz,1H),8.46(d,J＝2.0Hz,1H),8.03(dd,J1＝8.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(d,J＝4.0Hz,1H),6.16(s,1H),6.15(s,1H),4.49-4.39(m,2H)3.87(q,J＝8.0Hz,1H),3.36-3.29(m,3H),3.18-3.11(m,2H),2.96-2.76(m,3H),2.33(s,3H)2.25(s,3H),2.21-2.16(m,2H),1.73-1.69(m,2H),1.85-1.78(m,2H)1.53(d,J＝4.0Hz,3H)。
实施例25SZ-013048：(S)-6-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-5-酮
Figure BDA0002305458380001091
第1步：1-(叔丁基)3-甲基3-烯丙基吖丁啶-1,3-二羧酸酯
反应瓶中加入1-(叔丁基)3-甲基吖丁啶-1,3-二羧酸酯(2.0g,9.3mmol)和无水THF(20ml)冷至0℃，搅拌下加入LDA(2M in THF,10mL,20mmol)，逐渐升至20℃反应1小时。而后滴加烯丙基溴(1.35g,11mmol)继续反应12h。反应以饱和氯化铵淬灭，加水(100ml)，用EA(50ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-20％)纯化得到013048A1(0.6g，25％，无色油状液体)。LCMS:[M+H]+256.08。
第2步：1-(叔丁基)3-甲基3-(2-羰基乙基)吖丁啶-1,3-二羧酸酯
反应瓶中加入化合物013048A1(0.6g，2.3mmol)，氯化钌(5mg,0.02mml),乙腈(5mL)和水(3ml)，搅拌下加入高碘酸钠(溶于2mL水中，1.5g,7.0mml)，于20℃反应1小时。反应液加水(30mL)，用EA(50ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品013048A2(0.5g，87％，无色油状液体)直接用于下一步。LCMS:[M+H]+258.04。
第3步：叔-丁基(S)-6-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-羰基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯
反应瓶中加入013048A2(0.5g,2.0mmol)，(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(根据WO2017079140制备)(480mg,2.4mmol)，HOAc(0.5mL)，1,2-二氯乙烷(10mL)，最后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.2g,6.0mmol)，20℃反应2小时，而后加热回流反应12小时。反应液加水(100mL)，用EA(50mL*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到013048A3(400mg，48％，白色固体)。LCMS:[M+H]+416.2。
第4步：(S)-6-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-5-酮
化合物013048A3(400mg，1mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013048A4,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+316.14。
第5步：(S)-6-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-5-酮
化合物013048A4(300mg,1.0mmol)、中间体2(223mg,1.0mmol)和碳酸钾(500mg,4.0mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(DCM/EA50％)纯化，产物再以乙腈/水溶解，冷冻干燥，得到SZ-013048(200mg,40％，白色固体)。LCMS:[M+H]+503.40。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.86(s,1H),9.39(s,1H),8.71(dd,J＝4.6,0.7Hz,1H),8.41(d,J＝1.5Hz,1H),7.98-7.91(m,3H),6.38-6.11(m,2H),5.34(q,J＝7.3Hz,1H),4.16-4.07(m,2H),3.96-3.85(m,2H),3.46-3.38(m,1H),3.11-3.03(m,1H),2.44-2.30(m,2H),2.20(s,3H),2.13(s,3H),1.57(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例26SZ-013050：(S)-8-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,5,8-三氮杂螺[3.5]壬烷-6,9-二酮
Figure BDA0002305458380001111
第1步：1-(叔丁基)3-乙基3-(((苄氧基)羰基)氨基)吖丁啶-1,3-二羧酸酯
反应瓶中加入1-(叔丁基)3-乙基3-氨基吖丁啶-1,3-二羧酸酯(1.0g,4mmol),DIPEA(1.5g,12mmol)和DCM(10mL)，搅拌下加入Cbz-Cl(0.85g,5mmol)，20℃反应12小时。反应液加水(100mL)，用EA(50mL*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-20％)纯化得到013050A1(1.5g，99％，白色固体)。LCMS:[M+H]+379.13。
第2步：3-(((苄氧基)羰基)氨基)-1-(叔丁氧基羰基)吖丁啶-3-羧酸
反应瓶中加入化合物013050A1(1.5g，3.9mmol)和甲醇(10mL)，水(3mL)搅拌，再加入氢氧化锂单水合物(1.6g,39mmol)，20℃反应2小时。反应液以1M盐酸中和至中性，用EA(50mL*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到013050A2(1.1g，81％，无色油状液体)。LCMS:[M+H]+251.05(de-Boc)。
第3步：叔丁基(S)-3-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)吖丁啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入013050A2(1.1g,3.1mmol)和DMF(15ml)，搅拌，再加入(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(根据WO2017079140制备)(0.64g,3.1mmol)、DIPEA(1.5g,12mmol)，最后加入HATU(1.2g,3.1mmol)，20℃反应1小时。反应液加水(100mL)，用EA(50mL*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到013050A3(2.0g，95％，白色固体)。LCMS:[M+H]+539.21。
第4步：叔丁基(S)-3-氨基-3-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)吖丁啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入013050A3(2.0g,3.7mmol)，钯碳(10％,300mg)和甲醇(20mL)，搅拌下真空-氢气置换3次，而后于氢气氛下反应4小时。反应液过滤，滤液减压浓缩得到粗品013050A4(1.5g，100％，白色固体)直接用于下一步。LCMS:[M+H]+405.18。
第5步：叔丁基(S)-3-(2-氯乙酰氨基)-3-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)吖丁啶-1-羧酸酯
化合物013050A4(1.5g，3.7mmol)溶解在无水THF(20ml)，搅拌，再加入三乙胺(1.1g,11mmol)，冷却至0℃，滴加氯乙酰氯(500mg,4.4mmol)，滴完升温至20℃反应12小时。反应液加水(40mL)，用EA(10mL*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013050A5(1.5g，84％，白色固体)。LCMS:[M+H]+481.17。
第6步：叔丁基(S)-8-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-6,9-二羰基-2,5,8-三氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯
反应瓶中加入013050A5(1.5g,3.1mmol)，碘化钾(500mg,3.1mmol)和无水THF(20mL)，搅拌，冷却至0℃，再加入氢化钠(60％吸附于矿物油，250mg,6.2mmol)，缓慢升温至60℃搅拌反应20分钟。反应完冷却至室温，以饱和氯化铵溶液淬灭反应。反应液加水(50mL)，用EA(30mL*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013050A6(1.2g，87％，白色固体)。LCMS:[M+H]+445.19。
第7步：(S)-8-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5,8-三氮杂螺[3.5]壬烷-6,9-二酮
化合物013050A6(440mg，1mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013050A7,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+345.18。
第8步：
(S)-8-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,5,8-三氮杂螺[3.5]壬烷-6,9-二酮
化合物013050A7(320mg,1.0mmol)、中间体2(223mg,1.0mmol)和碳酸钾(500mg,4.0mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(DCM/EA 50％)纯化，产物再以乙腈/水溶解，冷冻干燥，得到SZ-013050(200mg,37％，白色固体)。LCMS:[M+H]+532.38。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),9.42(s,1H),9.22(s,1H),8.72(d,J＝4.5Hz,1H),8.45(d,J＝2.0Hz,1H),8.02-7.91(m,3H),6.45-6.11(m,2H),5.81(q,J＝7.1Hz,1H),4.45(s,2H),4.09-4.00(m,3H),3.55(d,J＝17.1Hz,1H),2.22(s,3H),2.15(s,3H),1.60(d,J＝7.2Hz,3H)。
实施例27SZ-9397(SZ-9397A和SZ-9397B):(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-氧杂-4-氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
Figure BDA0002305458380001131
Figure BDA0002305458380001141
第一步：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代)环己酮
反应瓶中加入9397A1(10g,87.7mmol)、咪唑(8.9g,130.8mmol)、TBSCl(15.7g,104.6mmol)和二氯甲烷(100mL)并在室温下搅拌2小时。过滤掉体系中的固体，滤液旋干并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝7:1；Rf＝0.6)纯化得到无色油状物9397A2(16g,80％).
第二步：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代)-1-((三甲基甲硅烷基)氧代)环己甲腈
冰水浴下将9397A2(4.4g,19.2mmol)溶解在二氯甲烷(15mL)中，依次加入TMSCN(2.8mL,31.1mmol)和碘化锌(300mg,5mol％)并搅拌1小时。将体系过滤，滤液旋干既得，所得粗品直接下一步。
第三步：1,4-二羟基环己羧酸
将9397A3(15g)和浓盐酸(100mL)混合并在100度下搅拌3小时。将体系的水旋去并用快速硅胶柱色谱法(MeOH：EA＝1:6；Rf＝0.3)纯化得到无色油状物9397A4粗品(8g)。
第四步：1,4-二羟基环己羧酸甲酯
冰水浴下将所得9397A4粗品溶解在甲醇(100mL)和甲苯(10mL)中，缓慢滴入TMSCHN2(60mL,1M in hexane)并搅拌15min。反应完毕旋去体系的溶剂得9397A5粗品，直接下一步。
第五步：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代)-1-羟基环己羧酸甲酯
所得粗品溶解在二氯甲烷(100mL)中，依次加入TBSCl(9.3g,62mmol)和咪唑(5.1g,75mmol)并在室温下搅拌2小时。反应完毕后过滤掉固体，所得滤液旋干并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝7:1；Rf＝0.6)纯化得到无色油状物9397A6(11g，83％)。
第六步：1-(烯丙氧基)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代)环己羧酸甲酯
冰水浴下将9397A6(10g，34.7mmol)溶解在DMF(100mL)中，氢化钠(2.7g,69.4mmol)加入到体系中，室温搅拌15min后将烯丙基溴(6.2g,52.1mmol)加入并搅拌2小时。反应完毕往体系加入100mL的水和100mL的乙酸乙酯，有机相旋干并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝7:1；Rf＝0.7)纯化得到无色油状物9397A7(9g，79％)。
第七步：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代)-1-(2-羰基乙氧基)环己羧酸甲酯
冰水浴下将9397A7(8g,24.5mmol)溶解在乙腈(100mL)和水(70mL)中，依次加入高碘酸钠(15.6g,73.2mmol)和三氯化钌(100mg)并搅拌1小时。将100mL的水和100mL的乙酸乙酯加入到体系中，有机相旋干得无色油状物粗品。
第八步：(S)-甲基4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代)-1-(2-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基)乙氧基)环己羧酸酯
所得9397A8粗品溶解在二氯乙烷(100mL)中，依次加入9399A4(4.5g)和三乙酰基硼氢化钠(6.8g)并在室温下搅拌过夜。往体系加入100mL的水和100mL的乙酸乙酯，有机相旋干并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝1:1；Rf＝0.7)纯化得到无色油状物9397A9(2g，15％)。LCMS:[M+H]+521.16
第九步：(S)-9-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-氧杂-4-氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
9397A9(2g,3.7mmol)溶解在无水甲醇(10mL)中，加入甲醇钠的甲醇溶液(2mL,5.4M)并在100度下搅拌过夜。反应完毕后旋去溶剂并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝4:1；Rf＝0.6)纯化得到白色的固体9397A10(1g，47％)。LCMS:[M+H]+489.30
第十步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-羟基-1-氧杂-4-氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
9397A10(1g,2.1mmol)溶解在无水四氢呋喃(100mL)中，将TBAF(6mL,1M in THF)加入并在室温下搅拌过夜。反应完毕后旋去溶剂并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝1:1；Rf＝0.3)纯化得到白色的固体9397A11(600mg，78％)。LCMS:[M+H]+375.21
第十一步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-氧杂-4-氮杂螺[5.5]十一烷-5,9-二酮
9397A11(600mg,1.5mmol)溶解在无水二氯甲烷(10mL)中，将PCC(483mg,2.3mmol)加入并在室温搅拌2小时。反应完毕后旋去溶剂并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝1:1；Rf＝0.4)纯化得到白色的固体9397A12 2(100mg，34％)。LCMS:[M+H]+373.22
第十二步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-羰基-1-氧杂-4-氮杂螺[5.5]十一烷-8-烯-9-基三氟甲磺酸酯
9397A12(200mg,0.5mmol)溶解在无水四氢呋喃(5mL)中，冷却到-70度，氩气保护下将LiHMDS(0.6mL,1M in THF)滴入体系并搅拌1小时，然后将N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(300mg,0.8mmol)加入并缓慢升到室温并搅拌30min。反应完毕后往体系加入饱和氯化铵(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，有机相旋干并直接下一步。LCMS:[M+H]+505.15
第十三步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-1-氧杂-4-氮杂螺[5.5]十一烷-8-烯-5-酮
9397A13溶解在无水1,4-二氧六环(10mL)中，氩气保护下依次加入联硼酸频哪醇酯(130mg,0.5mmol)、乙酸钾(140mg,1.4mmol)和Pd(dppf)Cl2.DCM(40mg)并在80度下搅拌3小时。反应完毕后旋去溶剂并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝2:1；Rf＝0.2)纯化得到白色的固体9397A14(100mg，42％)。LCMS:[M+H]+483.19
第十四步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-氧杂-4-氮杂螺[5.5]十一烷-8-烯-5-酮
氩气保护下，9397A14(100mg,0.2mmol)、9399A8(45mg,0.2mmol)、碳酸钾(69mg,0.5mol)和四三苯基膦(25mg,5mol％)溶解在无水1,4-二氧六环(10mL)中在125度微波反应2小时。反应完毕后旋去溶剂并用快速硅胶柱色谱法(EA 100％；Rf＝0.2)纯化得到白色的固体9397A15(50mg，31％)。LCMS:[M+H]+544.11
第十五步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-氧杂-4-氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
9397A15(50mg,0.09mmol)溶解在甲醇中，将甲酸铵(70mg)和氢氧化钯(70mg)加入并在90度下搅拌3小时。反应结束后过滤，直接将滤液粗品经过高压反相柱色谱法(ACN-0.1％碳酸氢铵水溶液)纯化，冷冻干燥，得到两个异构体SZ-9397A(2.6mg)和SZ-9397B(3.6mg)。LCMS:[M+H]+546.22。
SZ-9397A：HPLC tR＝6.43min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.93(s,1H),9.49(s,1H),8.70(d,J＝4.4Hz,1H),8.35(s,1H),7.89-7.95(m,3H),5.74(q,J＝6.8Hz,1H),3.80-3.85(m,2H),2.93-2.96(m,3H),2.35-2.39(m,2H),2.28(s,3H),2.21(s,3H),1.97-2.01(m,2H),1.85-1.87(m,2H),1.59-1.66(m,2H),1.53(d,J＝6.8Hz,3H)。
SZ-9397B：HPLC tR＝5.95min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.91(s,1H),9.51(s,1H),8.71(d,J＝4.4Hz,1H),8.38(s,1H),7.92-8.05(m,3H),5.82(q,J＝6.8Hz,1H),3.80-3.85(m,2H),2.61-2.93(m,3H),2.30-2.39(m,2H),2.26(s,3H),2.22(s,3H),1.74-2.05(m,6H),1.56(d,J＝6.8Hz,3H)。
SZ-9397A和SZ-9397B的HPLC分析方法如下：
仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTMC18 2.5um 4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：PDA全波长，254nm，220nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
Figure BDA0002305458380001171
实施例28SZ-013044:(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001181
第1步：叔丁基-(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入013002A4(1.2g,2.5mmol)和THF(20mL)，搅拌下冷至0℃，再慢慢加入LiHMDS(1M in THF,5mL,5mmol),加完升至室温搅拌20分钟。最后加入2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(2.3g,10mmol)，升温至60℃反应12小时。反应液以饱和氯化铵溶液淬灭，而后加水(100mL)，用EA(50mL*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-50％)纯化得到013044A1(500mg，40％，白色固体)。LCMS:[M+H]+455.13(de-Boc)。
第2步：((S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013044A1(500mg，1.0mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013044A2,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+455.27。
第3步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013044A2(400mg,1.0mol)、中间体2(223mg,1.0mmol)和碳酸钾(500mg,4.0mmol)加入到DMSO(10mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL水，乙酸乙酯(20mL)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013044(60mg,9.3％，白色固体)。LCMS:[M+H]+642.31。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),9.24(s,1H),8.73(d,J＝4.5Hz,1H),8.42(d,J＝1.6Hz,1H),8.00-7.91(m,3H),6.35-6.05(m,2H),5.79(q,J＝7.1Hz,1H),4.70(d,J＝12.4Hz,2H),4.39-4.29(m,3H),3.93(d,J＝18.4Hz,1H),3.43-3.38(m,1H),3.30-3.21(m,1H),2.22(s,3H),2.21-2.18(m,1H),2.15(s,3H),2.13-2.06(m,1H),1.93-1.80(s,2H),1.62(d,J＝7.1Hz,3H)。
实施例29SZ-013034:(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
Figure BDA0002305458380001191
第1步：叔丁基(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
把硼烷的四氢呋喃溶液(9mL，9mmol,1M)在16摄氏度分批加到化合物013034A0(330mg,0.698mmol)的THF(9mL)溶液中。所得反应混合物加热到31摄氏度并且继续搅拌3小时。所得反应混合物冷却到达室温后加饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭，然后加水稀释(30mL)。所得溶液加入固体碳酸钠直至饱和后，乙酸乙酯萃取(30mL*3)。合并有机相后加无水硫酸镁干燥，过滤，旋干有机溶剂。所得粗产品经过柱纯化得到淡黄色油状产物013034A1(130mg)。LCMS:[M+H+]459.21@3.609min。
第2步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮；三氟乙酸盐
把三氟乙酸(3mL)在16摄氏度分批加入到化合物013034A1(100mg，0.21mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)中。所得反应混合物在16摄氏度继续搅拌一个小时。然后把所得反应混合物旋干溶剂，然后使用油泵抽三分钟得黄色油状产物013034A2(100mg)直接用于下一步反应。LCMS:[M+H]+359.18@2.603min。
第3步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)-12-氮杂烷基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
把化合物013034A2(100mg，0.21mmol)，化合物1(63mg，0.276mmol)，碳酸钾(0.3g，2.16mmol)和DMSO(3mL)的悬浊液加热到169摄氏度并且继续搅拌3小时。所得反应混合物冷却到16摄氏度然后加水稀释(10mL)，乙酸乙酯萃取(10mL*3)。合并有机相后加饱和食盐水洗涤(10mL*3)，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用高压制备色谱纯化得到白色固体化合物SZ-013034(21mg，18.6％)。LCMS:[M+H+]546.21@2.986min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(d,J＝4.0Hz,1H),8.39(s,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.88(dd,J1＝8.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.71(d,J＝4.0Hz,1H),6.23(br,1H),6.10(br,1H),5.98(q,J＝8.0Hz,1H),4.61-4.39(m,2H),3.39-3.33(m,1H),3.33-3.26(m,2H),3.16-2.86(m,3H),2.28(s,3H)2.23(s,3H),2.21-2.16(m,2H),1.76(t,J＝8.0Hz,2H),1.61(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例30SZ-013035:(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
Figure BDA0002305458380001201
Figure BDA0002305458380001211
第1步：叔丁基(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
把硼烷的四氢呋喃溶液(31mL，31mmol,1M)在16摄氏度用注射器分批加到化合物013049A0(1.1g,2.33mmol)的THF(30mL)溶液中。所得反应混合物在16摄氏度搅拌3小时，然后加热到69摄氏度并且继续搅拌30分钟。所得反应混合物冷却到达室温后加饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭，然后加水稀释(30mL)。所得溶液加入固体碳酸钠直至饱和后，乙酸乙酯萃取(60mL*3)。合并有机相后加无水硫酸镁干燥，过滤，旋干有机溶剂。所得粗产品经过柱纯化得到淡黄色油状产物013034A1(260mg)。LCMS:[M+H+]459.21@3.609min。
第2步：叔丁基(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
把NaH(160mg,3.9mmol)在16摄氏度分批加入到化合物013034A1(180mg，0.39mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中。所得反应混合物在16摄氏度继续搅拌6分钟。然后把碘甲烷(260mg，3.9mmol)用注射器滴加到上述灰白色悬浊液中。所得反应混合物用封管密封后加热到69摄氏度并且继续搅拌半16小时。把所得反应混合物冷却到达室温后，加入饱和氯化铵水溶液淬灭(10mL)，接着加水稀释(10mL)。所得溶液加入乙酸乙酯萃取(30mL*3)，合并有机相后加无水硫酸镁干燥，过滤，旋干有机溶剂。残余物经过柱纯化得到黄色油状产物013035A1(90mg)。LCMS:[M+H]+473.19@3.169min。
第3步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮；三氟乙酸盐
把三氟乙酸(3mL)在16摄氏度分批加入到化合物013035A1(90mg，0.19mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)中。所得反应混合物在16摄氏度继续搅拌一个小时。把所得反应混合物旋干溶剂，然后使用油泵抽三分钟得黄色油状产物013035A2(80mg)直接用于下一步反应。LCMS:[M+H]+373.16@2.65min。
第4步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
把化合物013035A2(69mg，0.139mmol)，化合物1(63mg，0.269mmol)，碳酸钾(0.31g，2.16mmol)和DMSO(3mL)的悬浊液加热到169摄氏度并且继续搅拌一小时。所得反应混合物冷却到16摄氏度然后加水稀释(13mL)，乙酸乙酯萃取(30mL*3)。合并有机相后加饱和食盐水洗涤(10mL*3)，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用高压制备色谱纯化得到白色固体化合物SZ-013035(18mg,23％)。LCMS:[M+H+]560.37@2.789min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.42(d,J＝4.0Hz,1H),8.29(d,J＝2.0Hz,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(dd,J1＝8.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.61(d,J＝4.0Hz,1H),6.12(br,1H),5.98(br,1H),5.90(q,J＝8.0Hz,1H),4.22(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),3.43-3.33(m,3H),3.09(t,J＝8.0Hz,2H),2.90(m,1H),2.36(s,3H)2.18(s,3H),2.11(s,3H),1.98-1.89(m,4H),1.53(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例31SZ-013031(SZ-013031A和SZ-013031B)：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001221
Figure BDA0002305458380001231
第1步：8-(((苄氧基)羰基)氨基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸(013031A1)
化合物9305A4(3.63g,10mmol)和氢氧化锂单水合物(2.1g,50mmol)溶解在甲醇(20ml)和水(20ml)中，体系加热到60度搅拌3小时，反应完毕后冷却，用1N盐酸调节体系pH＝3，EA(30mlX3)萃取，有机相经过硫酸钠干燥后浓缩得到013031A1(3.63g，无色油状物)未做进一步纯化。
第2步：苯甲基(S)-(8-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)氨基甲酸酯(013031A2)
013031A1(3.35g,10mmol)和(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙胺(2.06g，10mmol)溶解在DMF(20ml)中，加入HATU(4.56g，12mmol)后室温搅拌3小时，加入水(100ml)随后用乙酸乙酯(30mlX3)萃取，有机相经过硫酸钠干燥后，用快速硅胶柱色谱法得到013031A2(4.5g,二步86％，白色固体)。LCMS:[M+H]+524.4。
第3步：(S)-8-氨基-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺(013031A3)
013031A2(4.5g，8.6mmol)溶解在甲醇(50mL)中，加入甲酸铵(5.42g,86mmol)和氢氧化钯/C(500mg)，在60℃条件下搅拌3小时，过滤，有机相减压旋干，未做进一步纯化得到013031A3(3.5g，白色固体)。LCMS:[M+H]+390.4
第4步：(S)-8-(2-氯乙酰氨基)-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺(013031A4)
013031A3(3.35g,8.6mmol)溶解在DCM(50ml)中，加入DIPEA(3.32g，25.8mmol)，在室温下滴加氯乙酰氯(1.16g，10.3mmol)并在此温度下搅拌6小时。反应完毕后用快速硅胶柱色谱法得到013031A4(3.2g,Y＝80％，白色固体)。LCMS:[M+H]+466.9。
第5步：(S)-12-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧杂-9,12-二氮杂二螺[4.2.58.25]十五烷-10,13-二酮(013031A5)
013031A4(3g,6.45mmol)溶解在无水四氢呋喃(50ml)中，在0℃条件下分批加入NaH(516mg，12.9mmol)，反应0.5小时以后，升温到65℃反应5小时，反应结束后用快速硅胶柱色谱法纯化得013031A5(700mg,Y＝25％，白色固体)。LCMS:[M+H]+430.4
第6步：(S)-12-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-甲基-1,4-二氧杂-9,12-二氮杂二螺[4.2.58.25]十五烷-10,13-二酮(013031A6)
013031A5(700mg,1.63mmol)溶解在无水四氢呋喃(10ml)中，在0℃条件下分批加入NaH(130mg，3.3mmol)，反应0.5小时以后，加入碘甲烷(463mg，3.3mmol)室温反应3小时，反应结束后用快速硅胶柱色谱法纯化得013031A6(360mg,Y＝51％，白色固体)。LCMS:[M+H]+444.5
第7步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-1,4-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,5,9-三酮(013031A7)
013031A6(360mg,0.81mmol)溶解在Dioxane(5ml)中，加入4N盐酸(4mL)，60℃条件下搅拌3小时，然后加入水(50mL)，随后用乙酸乙酯(10*3mL)提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干得到粗品，用快速硅胶柱色谱法得到013031A7(300mg,91％，白色固体)。LCMS:[M+H]+372.12
第8步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-2,5-二羰基-1,4-二氮杂螺[5.5]十一碳-8-烯-9-基三氟甲磺酸酯(013031A8)
013031A7(300mg,0.75mmol)溶解在无水四氢呋喃(10mL)中，氩气保护下将体系冷却到-70℃并将LiHMDS(1mL,1mol/L)缓慢滴入，然后再此温度下搅拌1小时，随后将苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(277mg,0.75mmol)的四氢呋喃(3mL)快速加入体系并升温到0℃搅拌2小时。反应完毕后加入30mL饱和氯化铵淬灭，用50mL乙酸乙酯提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干并用快速硅胶柱色谱法纯化得013031A8(80mg,Y＝20％，白色固体)。LCMS:[M+H]+532.4。
第9步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一碳-8-烯-2,5-二酮(013031A9)
013031A8(0.48g，0.9mmol)和联硼酸频哪醇(230g，0.9mmol)、Pd(dppf)2Cl2.DCM(37mg，5％)、乙酸钾(0.265g，2.7mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(10mL)中并加热到80度搅拌4小时。反应完毕后冷却旋去溶剂，用快速硅胶柱色谱法纯化得013031A9(450mg，Y＝95％，白色固体)。LCMS:[M+H]+510.4。
第10步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一碳-8-烯-2,5-二酮(013031A10)
013011A09(0.45g,0.88mmol)和9305A8(200mg,0.88mmol)、Pd(PPh3)4(51mg,5％)、碳酸钾(364mg,2.64mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(6mL)和水(2mL)中，在125℃微波下搅拌5小时，所得反应液旋干用快速硅胶柱色谱法纯化得013031A10(320mg,Y＝63％，白色固体)。LCMS:[M+H]+571.7。
第十一步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
013031A10(320mg，0.56mmol)溶解在甲醇(10mL)中，加入甲酸铵(352m g,5.6mmol)和氢氧化钯/C(30mg)，在60℃条件下搅拌3小时，过滤，有机相减压旋干得到粗品，并用中压反相柱色谱法(ACN-0.1％HCO2H水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-013031A(100mg，白色固体)和SZ-013031B(37mg，白色固体)。
LCMS:[M+H]+573.32，HPLC:tR＝5.574min。SZ-013031A：1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.95(s,1H),9.57(s,1H),8.73(d,J＝4.5Hz,1H),8.40(s,1H),7.95(m,3H),6.82(s,1H)，6.20(s,1H),5.80(q,J＝7.0Hz,1H),4.13(dd,J＝17.6,8.6Hz,1H),3.67(dd,J＝17.7,9.3Hz,1H),3.02(s,3H),2.83(s,1H),2.27(s,3H),2.22(s,3H),2.21–1.96(m,8H),1.58(d,J＝7.2Hz,3H).
LCMS:[M+H]+573.32，HPLC:tR＝5.363min。SZ-013031B：1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),9.56(s,1H),8.72(d,J＝4.5Hz,1H),8.39(s,1H),8.06–7.82(m,3H),5.84(q,J＝7.1Hz,1H),4.11(d,J＝17.8Hz,1H),3.66(d,J＝17.7Hz,1H),2.94(s,3H),2.72(dd,J＝23.8,11.4Hz,1H),2.46–1.80(m,14H),1.59(d,J＝7.2Hz,3H).
HPLC测试条件：仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTMC183.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
实施例32SZ-013045：(S)-1-环丙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001261
第1步：叔-丁基(S)-1-环丙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入化合物013002A4(230mg,0.5mmol),环丙烷硼酸(86mg,1.0mmol)，DMAP(183mg,1.5mmol)，无水醋酸铜(10mg,0.05mmol)和THF(10ml)，搅拌下加入LiHMDS(1M,0.5mL,0.5mmol)，升温至60℃反应12小时。反应液加水(100ml)，用EA(50ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-20％)纯化得到013045A1(130mg，50％，白色固体)。LCMS:[M+H]+513.26。
第2步：(S)-1-环丙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013045A1(130mg，0.25mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌1小时，浓缩除去溶剂得到粗品013045A2,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+413.24。
第3步：(S)-1-环丙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013045A2(100mg,0.25mmol)，中间体2(56mg,0.25mmol)和碳酸钾(138mg,1.0mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013045(15mg,10％，白色固体)。LCMS:[M+H]+600.36。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.88(s,1H),9.23(s,1H),8.72(d,J＝4.6Hz,1H),8.40(s,1H),7.96(d,J＝4.3Hz,1H),7.96-7.92(m,2H),6.34-6.03(m,2H),5.74(q,J＝7.3Hz,1H),4.60(d,J＝12.1Hz,2H),4.14(d,J＝18.7Hz,1H),3.70(d,J＝18.4Hz,1H),3.46-3.37(m,1H),3.33-3.27(m,1H),2.30-2.25(m,1H),2.23(s,3H),2.21-2.16(m,2H),2.15(s,3H),2.13-2.07(m,2H),1.58(d,J＝7.1Hz,3H),0.87-0.81(m,2H),0.64-0.52(m,2H).
实施例33SZ-013052：(S)-1-(环丙基甲基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001271
Figure BDA0002305458380001281
第1步：叔-丁基(S)-4-((环丙基甲基)氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入化合物013002A2(2.1g,5mmol),环丙基甲醛(0.7g,10mmol)和二氯乙烷(20ml)，搅拌下加入醋酸硼氢化钠(3.1g,15mmol)，20℃反应4小时。反应液加水(100ml)，用DCM(50ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 20-50％)纯化得到013052A1(2.0g，81％，白色固体)。LCMS:[M+H]+487.47。
第2步：叔-丁基(S)-4-(2-氯-N-(环丙基甲基)乙酰氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
化合物013052A1(1.0g，2.0mmol)溶解在无水THF(20ml)，搅拌，再加入三乙胺(600mg,6.0mmol)，冷却至0℃，滴加氯乙酰氯(280mg,2.5mmol)，滴完升温至20℃反应12小时。反应液加水(40ml)，用EA(10ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013052A2(610mg，53％，白色固体)。LCMS:[M+H]+563.27。
第3步：叔-丁基(S)-1-(环丙基甲基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入013052A2(610mg,1.1mmol),碘化钾(180mg,1.1mmol)和无水THF(10ml)，搅拌，冷却至0℃，再加入氢化钠(60％吸附于矿物油，88mg,2.2mmol)，缓慢升温至60℃搅拌反应2h。反应完冷却至室温，以饱和氯化铵溶液淬灭反应。反应液加水(50ml)，用EA(30ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013052A3(450mg，78％，白色固体)。LCMS:[M+H]+527.25。
第4步：(S)-1-(环丙基甲基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013052A3(200mg，0.38mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013052A4,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+427.28。
第5步：(S)-1-(环丙基甲基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013052A4(162mg,0.38mmol)、中间体2(85mg,0.38mmol)和碳酸钾(210mg,1.5mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013052(85mg,36％，白色固体)。LCMS:[M+H]+614.38。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.98(s,1H),9.27(s,1H),8.72(d,J＝4.5Hz,1H),8.43(d,J＝2.1Hz,1H),8.22(s,0.4H)(HCOOH),8.00-7.92(m,3H),6.33-6.07(m,2H),5.78(q,J＝7.1Hz,1H),4.64(d,J＝12.3Hz,2H),4.20(d,J＝18.1Hz,1H),3.76(d,J＝18.1Hz,1H),3.48-3.40(m,1H),3.35-3.21(m,3H),2.22(s,3H),2.15(s,3H),2.13-2.05(m,1H),2.03-1.93(m,2H),1.61(d,J＝7.1Hz,3H),0.88-0.76(m,1H),0.40-0.30(m,2H),0.23-0.12(m,2H).
实施例34SZ-013046：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2-酮
Figure BDA0002305458380001291
Figure BDA0002305458380001301
第1步：叔丁基(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
把四氢铝锂粉末(1g，26.3mmol)在26摄氏度分批加到化合物013046A0(1g,2.11mmol)的无水四氢呋喃(30mL)溶液中。所得反应混合物在26摄氏度继续搅拌1小时。把所得反应混合物加入无水四氢呋喃(30mL)稀释，然后依次缓慢滴加水(1g)，氢氧化钠水溶液(1g，15Wt％)和水(3g)。所的白色悬浊液剧烈搅拌十分钟后过滤。合并滤液以后旋干溶剂。残余物经过柱纯化得到淡黄色固体产物013046A1(300mg)。LCMS:[M+H+]459.23@3.641min。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)8.68(d,J＝4.0Hz,1H),8.41(d,J＝2.0Hz,1H),7.96(dd,J1＝8.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.93-7.83(m,3H),3.71(q,J＝8.0Hz,1H),3.58-3.5(m,2H),3.10(d,J＝16.0Hz,1H),2.97(br,2H),2.84(d,J＝16.0Hz,1H),2.58(d,J＝12.0Hz,1H)2.31(d,J＝12.0Hz,1H),1.66-1.6(m,1H),1.6-1.46(m,3H)1.36(s,9H)。
第2步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2-酮；三氟乙酸盐
把三氟乙酸(3mL)在31摄氏度分批加入到化合物013046A1(190mg，0.41mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)中。所得反应混合物在31摄氏度继续搅拌一个小时。把所得反应混合物旋干溶剂，然后使用油泵抽三分钟得淡黄色油状产物013046A2(190mg)直接用于下一步反应。LCMS:[M+H]+359.21@2.669min。
第3步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2-酮
把化合物013046A2(190mg，0.41mmol)，化合物1(136mg，0.6mmol)，碳酸钾(0.3g，2.16mmol)和DMSO(3mL)的悬浊液加热到169摄氏度并且继续搅拌一小时。所得反应混合物冷却到31摄氏度然后加水稀释(10mL)，乙酸乙酯萃取(10mL*3)。合并有机相后加饱和食盐水洗涤(10mL*3)，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用高压制备色谱纯化得到白色固体化合物SZ-013046(36mg,16％)。LCMS:[M+H+]546.31@3.069min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.82(s,1H),9.13(s,1H),8.68(d,J＝4.0Hz,1H),8.43(d,J＝4.0Hz,1H),8.00(dd,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.91(s,1H),7.90(d,J＝4.0Hz,1H),7.87(s,1H),6.18(br,1H),6.05(s,1H),4.09(d,J＝16.0Hz,2H)3.74(q,J＝8.0Hz,1H),3.28-3.16(m,2H),3.12(d,J＝16.0Hz,1H),2.87(d,J＝16.0Hz,1H),2.65(d,J＝12.0Hz,1H)2.39(d,J＝12.0Hz,1H),2.19(s,3H),2.08(s,3H),1.73-1.66(m,1H),1.63-1.53(m,3H)1.39(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例35SZ-013053(SZ-013053A和SZ-013053B)：(S)-1-乙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001311
第1步：(S)-8-(乙胺基)-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺(013053A1)
013031A3(7.8g,20mmol)溶解在DCE(50ml)中，加入乙醛的四氢呋喃溶液(22mL，1Mol/L)，在室温下分批加入氰基硼氢化钠(3.74g，60mmol)并在此温度下搅拌6小时。反应完毕后用快速硅胶柱色谱法得到013053A1(4.2g,Y＝50％，白色固体)。LCMS:[M+H]+418.4。
第2步：(S)-8-(2-氯-N-乙基乙酰氨基)-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺(013053A2)
013053A1(4.2g,10mmol)溶解在DCM(50ml)中，加入DIPEA(3.3g，25mmol)，在室温下滴加氯乙酰氯(1.36g，12mmol)并在此温度下搅拌6小时。反应完毕后用快速硅胶柱色谱法得到013053A2(3.7g,Y＝75％，白色固体)。LCMS:[M+H]+494.8。
第3步：(S)-9-乙基-12-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧杂-9,12-二氮杂二螺[4.2.58.25]十五烷-10,13-二酮(013053A3)
013053A2(3.7g,7.5mmol)溶解在无水四氢呋喃(50ml)中，在0℃条件下分批加入NaH(600mg，15mmol)，反应0.5小时以后，升温到65℃反应5小时，反应结束后用快速硅胶柱色谱法纯化得013053A3(2.3g,Y＝67％，白色固体)。LCMS:[M+H]+456.4
第4步：(S)-1-乙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,5,9-三酮(013053A4)
013053A3(2.3g,5mmol)溶解在Dioxane(50ml)中，加入4N盐酸(40mL)，60℃条件下搅拌6小时，然后加入水(500mL)，随后用乙酸乙酯(100*3mL)提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干得到粗品，用快速硅胶柱色谱法得到013353A4(1.65g,Y＝80％，白色固体)。LCMS:[M+H]+414.4
第5步：1-乙基-4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1,4-二氮杂螺[5.5]十一碳-8-烯-9-基三氟甲磺酸酯(013053A5)
013053A4(1100mg,2.7mmol)溶解在无水四氢呋喃(30mL)中，氩气保护下将体系冷却到-70℃并将LiHMDS(3mL,1mol/L)缓慢滴入，然后再此温度下搅拌1小时，随后将苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(964mg,0.75mmol)的四氢呋喃(8mL)快速加入体系并升温到0℃搅拌2小时。反应完毕后加入50mL饱和氯化铵淬灭，用50mL乙酸乙酯提取，有机相经过硫酸钠干燥后旋干并用快速硅胶柱色谱法纯化得013053A5(700mg,Y＝48％，白色固体)。LCMS:[M+H]+546.4。
第6步：1-乙基-4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一碳-8-烯-2,5-二酮(013053A6)
013053A5(700mg，1.28mmol)和联硼酸频哪醇(326mg，1.28mmol)、Pd(dppf)2Cl2.DCM(52mg，5％)、乙酸钾(0.376g，3.84mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(10mL)中并加热到80度搅拌4小时。反应完毕后冷却旋去溶剂，用快速硅胶柱色谱法纯化得013053A6(480mg，Y＝72％，白色固体)。LCMS:[M+H]+524.3。
第7步：1-乙基-4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一碳-8-烯-2,5-二酮(013053A7)
013053A6(0.48g,0.91mmol)和9305A8(208mg,0.91mmol)、Pd(PPh3)4(53mg,5％)、碳酸钾(376mg,2.73mmol)在氩气保护下混合在二氧六环(6mL)和水(2mL)中，在125℃微波下搅拌5小时，所得反应液旋干用快速硅胶柱色谱法纯化得013053A7(440mg,Y＝75％，白色固体)。LCMS:[M+H]+585.6。
第8步：(S)-1-乙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
013053A7(400mg，0.75mmol)溶解在甲醇(10mL)中，加入甲酸铵(472m g,7.5mmol)和氢氧化钯/C(40mg)，在60℃条件下搅拌3小时，过滤，有机相减压旋干得到粗品，并用中压反相柱色谱法(ACN-0.1％HCO2H水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-013053A(120mg，白色固体)和SZ-013053B(25mg，白色固体)。
LCMS:[M+H]+587.33，HPLC:tR＝8.737min。SZ-013053A：1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.87(s,1H),9.51(s,1H),8.65(t,J＝20.8Hz,1H),8.39(d,J＝26.5Hz,1H),8.09–7.80(m,3H),6.78(s,1H),6.32(s,1H),5.91–5.69(m,1H),4.08(d,J＝17.7Hz,1H),3.62(d,J＝17.7Hz,1H),3.49(q,J＝6.8Hz,2H),2.70(t,J＝11.9Hz,1H),2.42–2.01(m,10H),1.89(d,J＝10.2Hz,4H),1.56(d,J＝7.2Hz,3H),1.07(t,J＝7.0Hz,3H).
LCMS:[M+H]+587.33，HPLC:tR＝9.444min。SZ-013053B：1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),9.53(s,1H),8.69(d,J＝4.1Hz,1H),8.37(s,1H),7.96–7.89(m,3H),6.84(s,1H),6.14(s,1H),5.74(q,J＝7.1Hz,1H),4.07(d,J＝17.7Hz,1H),3.61(d,J＝17.6Hz,1H),3.41–3.25(m,2H),2.91(s,1H),2.31–1.82(m,14H),1.55(d,J＝7.2Hz,3H),0.95(t,J＝6.9Hz,3H).
HPLC测试条件：仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTMC183.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
Figure BDA0002305458380001331
Figure BDA0002305458380001341
实施例36SZ-013054：(S)-1-(2,2-二氟乙基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001342
第1步：叔-丁基(S)-1-(2,2-二氟乙基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入化合物013002A4(1.2g,2.5mmol)和THF(20mL),滴加LiHMDS(1M,5mL,5mmol)，搅拌10分钟，而后加入2,2-二氟乙基三氟甲磺酸酯(2.1g,1.0mmol)，于20℃反应12小时。反应液加水(100ml)，用EA(50ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 0-20％)纯化得到013054A1(1.0g，74％，白色固体)。LCMS:[M+H]+537.24。
第2步：(S)-1-(2,2-二氟乙基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013054A1(450mg，0.84mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌1小时，浓缩除去溶剂得到粗品013054A2,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+437.22。
第3步：(S)-1-(2,2-二氟乙基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013054A2(360mg,0.84mmol)，中间体2(187mg,0.84mmol)和碳酸钾(460mg,3.3mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013054(105mg,20％，白色固体)。LCMS:[M+H]+624.36。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.86(s,1H),9.22(s,1H),8.72(d,J＝4.6Hz,1H),8.43(d,J＝1.7Hz,1H),8.01-7.91(m,3H),6.32-5.91(m,3H),5.78(q,J＝7.0Hz,1H),4.64(d,J＝11.7Hz,2H),4.28(d,J＝17.9Hz,1H),3.92-3.79(m,3H),3.47-3.38(m,1H),3.33-3.25(m,1H),2.22(s,3H),2.19-2.06(m,5H),1.93-1.82(m,1H),1.62(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例37SZ-013055：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-丙基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001351
第1步：叔-丁基(S)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)-4-(丙基氨基)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入化合物013002A2(2.0g,4.6mmol),正丙醛(268mg,4.6mmol)和二氯乙烷(20ml)，搅拌下加入醋酸硼氢化钠(1.46g,7mmol)，20℃反应4小时。反应液加水(100ml)，用DCM(50ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 20-50％)纯化得到013055A1(2.0g，91％，白色固体)。LCMS:[M+H]+475.31。
第2步：叔-丁基(S)-4-(2-氯-N-丙基乙酰氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
化合物013055A1(2.0g，4.2mmol)溶解在无水THF(20ml)，搅拌，再加入三乙胺(1.5g,16mmol)，冷却至0℃，滴加氯乙酰氯(600mg,5.2mmol)，滴完升温至20℃反应12小时。反应液加水(40ml)，用EA(10ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013055A2(1.5g，64％，白色固体)。LCMS:[M+H]+551.27。
第3步：叔-丁基(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1-丙基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入013055A2(1.5g,2.7mmol),碘化钾(452mg,2.7mmol)和无水THF(20ml)，搅拌，冷却至0℃，再加入氢化钠(60％吸附于矿物油，216mg,5.4mmol)，缓慢升温至80℃搅拌反应2h。反应完冷却至室温，以饱和氯化铵溶液淬灭反应。反应液加水(50ml)，用EA(30ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013055A3(610mg，44％，白色固体)。LCMS:[M+H]+515.30。
第4步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1-丙基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013055A3(610mg,1.19mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩除去溶剂得到粗品013055A4,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+415.28。
第5步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1-丙基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013055A4(490mg,1.2mmol)、中间体2(265mg,1.2mmol)和碳酸钾(657mg,4.8mmol)加入到DMSO(10mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013055(190mg,26％，白色固体)。LCMS:[M+H]+602.37。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.02(s,1H),9.23(s,1H),8.71(d,J＝4.4Hz,1H),8.42(d,J＝1.6Hz,1H),8.17(s,0.3H)(HCOOH),8.00-7.91(m,3H),6.31-6.06(m,2H),5.78(q,J＝7.1Hz,1H),4.61(d,J＝12.4Hz,2H),4.16(d,J＝18.0Hz,1H),3.72(d,J＝18.0Hz,1H),3.51-3.40(m,2H),3.35-3.17(m,2H),2.22(s,3H),2.21-2.17(m,1H),2.15(s,3H),2.12-2.06(m,1H),1.94-1.79(m,2H),1.61(d,J＝7.1Hz,3H),1.46-1.35(m,2H),0.82-0.75(m,3H).
实施例38SZ-013056：(S)-1-丁基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001371
第一步：(S)-叔丁基4-(丁基氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入SZ-013056A1(1.5g,3.47mmol)、丁醛(0.25g,3.47mmol)和二氯乙烷(10mL)，滴入两滴乙酸后分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.8g,3.81mmol)并在室温下搅拌2小时。过滤掉体系中的固体，滤液旋干并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝2:1；Rf＝0.6)纯化得到无色油状物SZ-013056A2(500mg,31％)。[M+H]+489.30
第二步：(S)-叔丁基4-(N-丁基-2-氯乙酰氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
冰水浴下将SZ-013056A2(500mg,1.02mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(0.2mL,1.53mmol)后缓慢滴入氯乙酰氯(137mg，1.25mmol)并搅拌1小时。向体系中加入10mL的水和10mL的二氯甲烷，有机相硫酸钠干燥后旋干既得，所得粗品直接下一步。[M+H]+567.11
第三步：(S)-叔丁基1-丁基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,5-二羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
将SZ-013056A3(15g)溶解在无水四氢呋喃(10mL)中，氢化钠(100mg，2.3mmol)加入体系并搅拌30分钟，最后将碘化钾(169mg，1.02mmol)加入并在100度下搅拌过夜。向体系加入5mL的水和10mL的乙酸乙酯，有机相旋干并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝1:1；Rf＝0.3)纯化得到无色油状物SZ-013056A4(120mg)。[M+H]+529.16
第四步：(S)-1-丁基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
SZ-013056A4溶解在二氯甲烷(5mL)中，三氟乙酸(2mL)加入并在室温下搅拌2小时，反应完毕后直接旋干下一步。[M+H]+429.34
第五步：(S)-9-(4-((1H-吡唑-5-基)氨基)-6-甲基嘧啶-2-基)-1-丁基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
所得SZ-013056A5粗品溶解在DMSO(5mL)中，依次加入碳酸钾(160mg,1.15mmol)和嘧啶氯中间体(50mg,0.23mmol)并在110度下搅拌过夜。反应完毕后直接将粗品经过高压反相柱色谱法(ACN-0.1％碳酸铵水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-013056。LCMS:[M+H]+616.21
SZ-013056：HPLC tR＝7.08min。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ9.24(s,1H),8.72(d,J＝4.4Hz,1H),8.43(d,J＝2.0Hz,1H),7.93-7.99(m,3H),6.14-6.25(m,2H),5.74(q,J＝6.8Hz,1H),4.59(d,J＝12.8Hz,2H),4.16(d,J＝17.6Hz,1H),3.69-3.79(m,1H),3.42-3.48(m,1H),3.24-3.31(m,2H),2.07-2.33(.m,9H),1.83-1.94(m,2H),1.60(d,J＝3.2Hz,3H),1.33-1.41(m,2H),1.17-1.25(m,2H),0.82(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例39SZ-013057：(S)-7-乙基-11-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,7,11-三氮杂螺[5.6]十二碳-9-烯-8,12-二酮
Figure BDA0002305458380001391
第一步：(S)-叔丁基4-(N-乙基丙烯酰基酰氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入SZ-013057A1(1.0g,2.18mmol)、三乙胺(0.5mL,3.27mmol)和二氯乙烷(10mL)，缓慢加入氯代丙酰氯(300mg，2.18mmol)并在室温下搅拌2小时。滤液旋干并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝2:1；Rf＝0.2)纯化得到无色油状物SZ-013057A2(1.1g)。[M+H]+515.20
第二步：(S)-叔丁基7-乙基-11-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8,12-二羰基-3,7,11-三氮杂螺[5.6]十二碳-9-烯-3-羧酸酯
冰水浴下将SZ-013057A2(1.1g,2.14mmol)溶解在四氢呋喃(10mL)中，加入氢化钠(0.4g,10mmol)后回流搅拌4小时。冷却后向体系中加入10mL的水和10mL的乙酸乙酯，有机相硫酸钠干燥后旋干并用快速硅胶柱色谱法(PE：EA＝1:1；Rf＝0.4)纯化得到无色油状物SZ-013057A3(120mg)。[M+H]+513.54
第三步：(S)-7-乙基-11-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-3,7,11-三氮杂螺[5.6]十二碳-9-烯-8,12-二酮
SZ-013056A3溶解在二氯甲烷(2mL)中，三氟乙酸(2mL)加入并在室温下搅拌2小时，反应完毕后直接旋干下一步。[M+H]+412.59
第五步：(S)-7-乙基-11-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,7,11-三氮杂螺[5.6]十二碳-9-烯-8,12-二酮
所得SZ-013056A4粗品溶解在DMSO(5mL)中，依次加入碳酸钾(160mg,1.15mmol)和嘧啶氯中间体(50mg,0.23mmol)并在110度下搅拌过夜。反应完毕后直接将粗品经过高压反相柱色谱法(ACN-0.1％碳酸铵水溶液)纯化，冷冻干燥，得到SZ-013057。LCMS:[M+H]+560.12
SZ-013057：HPLC tR＝7.01min。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ11.86(s,1H),9.22(s,1H),8.70(d,J＝4.4Hz,1H),8.39(s,1H),7.90-7.95(m,3H),6.11-6.24(m,2H),5.87(q,J＝6.8Hz,1H),5.65(s,1H),5.14(s,1H),4.61(t,J＝15.6Hz,2H),4.16(d,J＝17.6Hz,1H),3.44-3.49(m,2H),3.13-3.33(m,2H),2.22(s,3H),2.13(s,3H),2.06-2.09(m,2H),1.92-1.83(m,2H),1.89(d,J＝7.2Hz,3H),1.07(t,J＝6.8Hz,3H).
实施例40SZ-013058(SZ-013058A和SZ-013058B)：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-1,4-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-酮
Figure BDA0002305458380001401
Figure BDA0002305458380001411
第1步：8-(2-氯乙酰胺基)-1,4-二氧螺[4,5]十烷烃-8-羧酸
把化合物1(8.1g，71.8mmol)用注射器在1-3摄氏度滴加到化合物013058A0(23.9g，121.9mmol)，碳酸钠(15.3g，143.6mmol)，乙腈(160mL)和水(160mL)的悬浊液中。所得反应混合物在1-3摄氏度继续搅拌1.6小时，然后加水稀释(160mL)。(经检测后发现体系pH＝8-9)接着把所得反应混合液旋干所有溶剂，然后油泵减压除去残留溶剂得到粗品化合物013058A1(31g，粗品)。此化合物直接用于下一步反应。LCMS:[M+H+]277.98@2.411min。
第2步：(S)-8-(2-氯乙酰胺基)-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,-二氧螺[4，5]十烷烃-8-羧酸酰胺
安装机械搅拌装置以后，把T3P/乙酸乙酯溶液(198mL)在21摄氏度滴加到化合物013058A1(31g，粗品)，化合物2(31g,128mmol)和三乙胺(110mL)的DMF(1.3L)悬浊液中，所得反应混合物在16-23摄氏度继续搅拌16小时。把得到的白色悬浊液加水淬灭(1.6L)，然后乙酸乙酯萃取(600mL*3)。合并有机相后用饱和食盐水洗涤(300mL*3)，无水硫酸镁干燥，过滤，旋干有机溶剂后过柱纯化得到黄色粘稠油状化合物013058A2(8g)。LCMS:[M+H]+466.16@3.627min。
第3步：(S)-12-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧-9，12-二氮杂螺[4.2.58.25]十五烷-10，13-二酮
把固体粉末状NaH(1.56g，39mmol)在21摄氏度分批加入到化合物013058A2(1.9g，4.06mmol)和碘化钾(1.6g，9.63mmol)的四氢呋喃(36mL)悬浊液中。所得反应混合物在21摄氏度继续搅拌30分钟。然后加饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭，接着加水稀释(30mL)，乙酸乙酯萃取(60mL*3)。合并有机相后用无水硫酸镁干燥，过滤，旋干有机溶剂。然后用油泵抽三分钟得到粗品化合物013058A3(1.9g)，此化合物直接用于下一步反应。LCMS:[M+H+]430.26@3.167min。
第4步：(S)-12-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4-二氧-9，12-二氮杂螺[4.2.58.25]十五烷-10-酮
把固体四氢铝锂粉末(1.3g,34.3mmol)在23摄氏度分批加入到化合物013058A3(1.63g，3.9mmol)的四氢呋喃溶液(39mL)中。所得反应混合物在23摄氏度继续搅拌1小时。然后加入四氢呋喃稀释(30mL)，接着依次加入水(1.3g)，氢氧化钠水溶液(1.3g，15Wt％)和水(3.9g)淬灭。所得反应悬浊液在23摄氏度继续剧烈搅拌半小时后减压过滤。合并滤液以后旋干所有溶剂。残余物经过柱纯化得到白色固体化合物013058A4(1g,61.3％)LCMS:[M+H+]416.21@3.36min。
第5步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,-二氮杂螺[5.5]十一烷-2,9-二酮
把稀盐酸(13mL，78mmol，6M)在23摄氏度分批加入到化合物013058A4(760mg,1.8mmol)的1，4-二氧六环溶液(13mL)中。所得反应混合物加热到69摄氏度并且继续搅拌1小时。接着把所得反应混合物加入固体碳酸钠和水调节体系pH值到8-9，继续加入固体碳酸钠直至饱和后乙酸乙酯萃取(30mL*3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。然后用油泵抽三分钟得到白色固体产物013058A5(610mg，91％)。LCMS:[M+H+]372.17@3.167min。
第6步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-羰基-1,4,-二氮杂螺[5.5]十一烷-8-烯-9-基三氟甲磺酸酯
在-78摄氏度把LiHMDS(1.9mL，1.9mmol)用注射器分批加入到化合物013058A5(610mg,1.6mmol)的四氢呋喃(16mL)溶液中。所得反应混合物在-78摄氏度继续搅拌1小时。然后在-78摄氏度把PhNTf2(680mg,1.9mmol)的四氢呋喃溶液(3mL)用注射器滴加到以上反应液内。所得反应混合物在-78-23摄氏度继续搅拌16小时。接着往体系中加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应并用乙酸乙酯萃取(30ml*3)。合并有机相后用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用柱色谱纯化得到白色固体化合物013058A6(399mg，49％)。LCMS:[M+H+]504.14@3.771min。
第7步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)-12-氮杂烷基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷
在33摄氏度下把013058A6(399mg,0.8mmol)，双联片呐醇硼酸酯(253mg，1mmol)，醋酸钾(0.26g，2.6mmol)，1,4-二氧六环(9mL)和PdCl2(dppf).DCM(80mg)的悬浊液搅拌下用氮气置换三次，然后在氮气保护下加热至90摄氏度并且继续搅拌3小时。所得反应混合物冷却到33摄氏度，然后加水(16mL)淬灭。接着乙酸乙酯萃取(30mL*3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。粗产物经快速柱色谱纯化得到白色固体产物013058A7(330mg，84.6％)。LCMS:[M+H+]482.31@3.905min。LCMS:[M+H+]532.35@2.513min。
第8步：4-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基-1,4,-二氮杂螺[5.5]十一烷-8-烯-2-酮
在26摄氏度下把Pd(PPh3)4(69mg)分批加入到化合物013058A7(330mg，1.6mmol)，化合物3(390mg，1.6mmol)，碳酸钾(690g，5.3mmol)，1,4-二氧六环(6mL)和水(1.6mL)的悬浊液中。氮气置换三次，所得反应混合物在Biotage微波反应器内：130摄氏度反应一小时。所得红黄色溶液冷却到室温后加水淬灭(30mL)，乙酸乙酯萃取(30mL*3)。合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。粗产物用快速硅胶柱色谱纯化得到白色固体产物013058A8(130mg,46.19％)。LCMS:[M+H+]543.28@3.683min。
第9步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基-1,4,-二氮杂螺[5.5]十一烷-2-酮
把化合物013058A8(130mg,0.239mmol)在26摄氏度加入到湿Pd(OH)2/C(300mg)的甲醇(33mL)黑色悬浊液中，接着加入甲酸铵固体(3g)。所得反应混合物加热到69摄氏度并且继续搅拌一个小时。所得黑色悬浊液冷却到室温后，用硅藻土过滤并且用甲醇洗涤(10mL*3)。合并滤液以后旋干溶剂然后加水溶解(30mL)，此溶液经加入固体Na2CO3碱化直至饱和。然后乙酸乙酯萃取(30mL*3)，合并有机相后加无水MgSO4干燥，过滤，旋干有机溶剂。此粗产物经过高压制备液相色谱纯化后得到两个非对映异构体：
SZ-013058A(13mg,10％,白色固体)。LCMS:[M+H+]545.26@2.821min。HPLC tR＝5.21min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.41(d,J＝2.0Hz,1H),8.37(d,J＝4.0Hz,1H),7.96(dd,J1＝8.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(d,J＝4.0Hz,1H),6.63(br,1H),6.11(br,1H),3.73(q,J＝4.0Hz,1H),3.33(d,J＝4.0Hz,1H),3.04(d,J＝16.0Hz,1H),2.82(d,J＝8.0Hz,1H),2.68-2.53(m,2H),2.31(s,3H),2.26(s,3H),2.18-2.11(m,2H),2.03-1.98(m,1H),1.83-1.73(m,2H),1.66-1.53(m,4H)，1.49(d,J＝8.0Hz,3H)。
SZ-013058B(3.9mg,3％,白色固体)。LCMS:[M+H+]545.21@2.916min。HPLC tR＝6.066min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.56(d,J＝4.0Hz,1H),8.46(s,1H),8.02(dd,J1＝8.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),6.78(br,1H),6.21(br,1H),3.71(q,J＝4.0Hz,1H),3.43-3.41(m,1H),3.09-3.07(m,1H),2.73-2.71(br,1H),2.56(d,J＝8.0Hz,1H),2.51(d,J＝8.0Hz,1H),2.36(s,3H),2.33(s,3H),2.23(t,J＝4.0Hz,2H),2.16-1.91(m,3H),1.89-1.81(m,1H)，1.69-1.58(m,2H),1.49(d,J＝4.0Hz,3H)。
HPLC测试条件：仪器:Waters Acquity ARC(UHPLC)；色谱柱：XSelect CSHTMC183.5μm、4.6*150mm Column XP；流动相A:0.1％氨水水溶液；流动相B:乙腈；流速：1ml/min；波长：282nm；柱温：30℃；空白溶剂:甲醇；样品溶液:用甲醇溶解适量待测物，用0.22μm滤膜过滤；梯度洗脱:
时间(min) A(％) B(％)
0 75 25
4 35 65
7 20 80
13 20 80
13.1 75 25
18 75 25
实施例41SZ-013059：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-3,3-二甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001451
第1步：叔-丁基(S)-4-(2-溴-2-甲基丙酰氨基)-4-((1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰)哌啶-1-羧酸酯
反应瓶中加入化合物013002A2(1.0g,2.3mmol)，无水THF(20ml)，搅拌，再加入三乙胺(690mg,6.9mmol)，冷却至0℃，滴加溴乙酰溴(634mg,2.8mmol)，滴完升温至20℃反应12小时。反应液加水(40ml)，用EA(10ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013059A1(1.0g，75％，白色固体)。LCMS:[M+H]+581.22,583.23。
第2步：叔-丁基(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-3,3-二甲基-2,5-二羰基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸酯
反应瓶中加入013059A1(1.0g,1.7mmol),碘化钾(285mg,1.7mmol)和无水THF(20ml)，搅拌，冷却至0℃，再加入LiHMDS(1M in THF，3.4mL,3.4mmol)，于20℃搅拌反应6h。反应完冷却至室温，以饱和氯化铵溶液淬灭反应。反应液加水(50ml)，用EA(30ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE50-100％)纯化得到013059A2(150mg，18％，白色固体)。LCMS:[M+H]+501.27。
第3步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-3,3-二甲基-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013059A2(150mg,0.3mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌1小时，浓缩除去溶剂得到粗品013059A3,未做纯化直接下一步反应。LCMS:[M+H]+401.21。
第4步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-3,3-二甲基-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
化合物013059A3(120mg,0.3mmol)、中间体2(67mg,0.3mmol)和碳酸钾(165mg,1.2mmol)加入到DMSO(5mL)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50mL的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013059(25mg,14％，白色固体)。LCMS:[M+H]+588.32。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.86(s,1H),9.21(s,1H),8.68(d,J＝4.4Hz,1H),8.36(d,J＝1.2Hz,1H),7.94(d,J＝4.4Hz,1H),7.91-7.88(m,2H),6.29-6.05(m,2H),5.91(q,J＝7.1Hz,1H),4.38-4.26(m,2H),3.45-3.36(m,2H),2.97(s,1H),2.21(s,3H),2.13(s,3H),1.89-1.76(m,2H),1.76-1.68(m,5H),1.37(s,3H),1.31(s,3H).
实施例42SZ-013061：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
Figure BDA0002305458380001461
第1步：(S)-9-(6-溴-4-甲基吡啶-2-基)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
反应瓶中加入化合物013002A5(600mg,1.6mmol)，2-溴-6-氟-4-甲基吡啶(334mg,1.76mmol)，DIPEA(624mg,4.8mmol)和异丙醇(20ml)，升温至100℃反应12小时。反应液加水(50ml)，用EA(30ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013061A1(360mg，42％，白色固体)。LCMS:[M+H]+542.14,544.16。
第2步：(S)-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-2,5-二酮
20mL微波管中加入013061A1(360mg,0.66mmol),5-甲基-1H-吡唑-3-胺(65mg,0.66mmol)，Pd2(dba)3(36mg,10％)，XantPhos(190mg,0.33mmol)，Cs2CO3(643mg,1.98mmol)和1,4-二氧六环(8ml)，氩气置换脱气10分钟，于微波反应器上100℃搅拌反应2h。反应完冷却至室温。反应液加水(30ml)，用EA(20ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013061(30mg,8％，白色固体)。LCMS:[M+H]+559.32。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),8.71(d,J＝4.6Hz,1H),8.65(s,1H),8.55(s,1H),8.40(s,1H),7.98-7.91(m,3H),6.36(s,1H),6.02(s,1H),5.78(q,J＝7.3Hz,1H),4.08(d,J＝17.0Hz,1H),4.01-3.90(m,2H),3.57(d,J＝17.0Hz,1H),3.51-3.41(m,2H),2.20(s,3H),2.15(s,3H),2.10-2.00(m,2H),1.77-1.63(m,2H),1.58(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例43SZ-013062：(S)-1-乙基-4-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-9-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
Figure BDA0002305458380001471
把氰基硼氢化钠(160mg，2.53mmol)在33摄氏度分批加入到化合物SZ-013034(16mg，29.3umol)和乙醛/四氢呋喃溶液(3mL，15mmol,5M)的甲醇(3mL)溶液中，然后加入一滴乙酸(13mg，21.67mmol)。所得反应混合物用封管封住后加热到69摄氏度并且继续搅拌16小时。所得反应混合物冷却到达室温以后，加饱和氯化铵水溶液淬灭(10mL)，乙酸乙酯萃取(10mL*3)。合并有机相后用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。接着使用高压制备色谱纯化得到白色固体化合物SZ-013062(2.3mg，13.6％)。LCMS:[M+H+]574.26@2.986min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.56(d,J＝4.0Hz,1H),8.43(d,J＝2.0Hz,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.93(dd,J1＝8.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.63(d,J＝4.0Hz,1H),6.23(br,1H),6.11(br,1H),6.01(q,J＝4.0Hz,1H),4.26-4.19(m,1H),3.73-3.63(m,1H),3.49-3.43(m,1H),3.29-3.16(m,3H),3.03-2.93(m,2H),2.78-2.63(m,2H),2.31(s,3H)2.23(s,3H),2.13-2.03(m,4H),1.65(d,J＝8.0Hz,3H),1.14(t,J＝8.0Hz,3H)。
实施例44SZ-013063：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-酮
Figure BDA0002305458380001481
第1步：(S)-8-(6-溴-4-甲基吡啶-2-基)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-酮
反应瓶中加入化合物9386A3(1.0g,3.0mmol)，2-溴-6-氟-4-甲基吡啶(570mg,3.0mmol)，Cs2CO3(2.9g,9.0mmol)和异丙醇(20ml)，升温至100℃反应12小时。反应液加水(50ml)，用EA(30ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(EA/PE 50-100％)纯化得到013063A1(500mg，32％，白色固体)。LCMS:[M+H]+513.17,515.13。
第2步：(S)-2-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1-酮
20mL微波管中加入013063A1(500mg,1.0mmol),5-甲基-1H-吡唑-3-胺(106mg,1.1mmol)，Pd2(dba)3(50mg,10％)，XantPhos(290mg,0.5mmol)，Cs2CO3(1.0g,3.0mmol)和1,4-二氧六环(8ml)，氩气置换脱气10分钟，于微波反应器上100℃搅拌反应2h。反应完冷却至室温。反应液加水(30ml)，用EA(20ml*3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到SZ-013063(70mg,13％，白色固体)。LCMS:[M+H]+530.32。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.65(s,1H),8.71(d,J＝4.6Hz,1H),8.55(s,1H),8.38(s,1H),7.96(d,J＝4.2Hz,1H),7.93(d,J＝1.2Hz,2H),6.34(s,1H),6.06-5.96(m,2H),5.33(q,J＝7.0Hz,1H),4.20-4.08(m,2H),3.47-3.38(m,1H),3.10-2.93(m,3H),2.19(s,3H),2.14(s,3H),2.09-1.95(m,2H),1.79-1.64(m,2H),1.57(d,J＝7.3Hz,3H),1.49-1.31(m,2H).
效果实施例1RET活性抑制测试
试验目的：以Staurosporine和BLU-667作为阳性对照化合物。利用Mobilityshift assay的方法，检测化合物在RET激酶上IC50值。
试验条件：
酶浓度：2.5nM
ATPKm：16uM
预孵育：10min
反应时间：60min
化合物起始浓度1μM，3倍稀释，10个浓度，复孔检测。
试验方法：
1、化合物配制:将化合物粉末溶解在100％DMSO中，配制成10mM储存液。
2、激酶反应过程
(1)配制1×Kinase buffer。
(2)化合物浓度梯度的配制：化合物测试浓度为1μM，在384板中稀释成100倍终浓度的100％DMSO溶液，之后3倍稀释化合物，10个浓度。使用分液器向目的板转移250nL 100倍终浓度的化合物。
(3)用1×Kinase buffer配制2.5倍终浓度的激酶溶液。
(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加10μL的2.5倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加10μL的1×Kinase buffer。
(5)1000rpm离心30秒，反应板振荡混匀后室温孵育10分钟。
(6)用1×Kinase buffer配制5/3倍终浓度的ATP和Kinase substrate 2的混合溶液。
(7)加入15μL的5/3倍终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。
(8)将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育60分钟。
(9)加入30μL终止检测液停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。
(10)用Caliper EZ Reader读取转化率。
3、数据分析
计算公式：％Inhibition＝(Conversion％_max-Conversion％_sample)/(Conversion％_max-Conversion％_min)×100％
其中：Conversion％_sample是样品的转化率读数；
Conversion％_min：阴性对照孔均值，代表没有酶活孔的转化率读数；
Conversion％_max：阳性对照孔比值均值，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。
拟合量效曲线：以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。试验结果如表1所示：
表1
Figure BDA0002305458380001501
Figure BDA0002305458380001511
Figure BDA0002305458380001521
效果实施例2化合物抑制细胞生长试验
试验目的：在MTC-TT和LC-2/AD细胞系上检测化合物对细胞生长的抑制作用。
试验方法：
1.细胞系来源和培养条件
细胞系 特性 来源 培养基
LC-2/AD 贴壁 CAS F12K+10％FBS
MTC-TT 贴壁 南京科柏 RPMI-1640+10％FBS
2.第0天：接种细胞
(1)细胞消化后制备细胞悬液，用自动细胞计数器计算细胞密度。
(2)根据铺板密度稀释细胞悬液到合适的密度
(3)接种150uL细胞到96孔板中，加入生长培养基。空白培养基用作背景对照(Min)。
(4)37℃，5％CO2培养过夜。
3.第1天：化合物孵育
(1)用DMSO制备200*化合物母液
(2)用生长培养基稀释化合物至21倍终浓度，即将21uL 200*化合物加入到179uL生长培养基中。
(3)加入7.5uL稀释的化合物到细胞中，37℃，5％CO2培养72小时。
4.第4天：检测
(1)在检测前将孔板平衡到室温。
(2)每孔加入40uL CellTiter-Glo试剂。
(3)水平震荡仪震荡2分钟，裂解细胞。
(4)室温孵育10分钟稳定荧光信号。
(5)EnVision多标记微孔板检测仪检测荧光信号。
5.数据分析
(1)使用GraphPad Prism 5分析数据。
(2)％Inh＝(Max signal-Compound signal)/(Max signal-Min signal)×100。
(3)最大信号：仅加入DMSO孔的荧光读数。
(4)最小信号：仅加入培养基的孔的荧光读数。
6.检测结果：
表2
Figure BDA0002305458380001531
Figure BDA0002305458380001541

Claims (31)

1.一种如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
Figure FDA0003949674610000011
其中，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000012
中的
Figure FDA0003949674610000013
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000014
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000015
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure FDA0003949674610000016
中的
Figure FDA0003949674610000017
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000018
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure FDA0003949674610000019
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure FDA00039496746100000110
其中，X4的b端与X3连接；
A1为N；
A2为CR3；R3为氢、氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)、C(＝S)或CH2；
当A3为CH2时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为O时，A4为CH2；
n为0或1；
A5为NR10；R10为C1～C4烷基；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure FDA0003949674610000021
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或C1～C4烷基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢。
2.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，s为1；t为1；
和/或，X4为
Figure FDA0003949674610000022
和/或，当X4为
Figure FDA0003949674610000023
时，A5为NR10；R10为甲基、乙基、正丙基、异丙基或正丁基；
和/或，n为1；
和/或，X6为CHR2；
和/或，R2为C1～C4烷基。
3.如权利要求2所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为甲基；
和/或，Y2为N；
和/或，
Figure FDA0003949674610000024
中的
Figure FDA0003949674610000025
为单键；当
Figure FDA0003949674610000026
为单键时，X1为N或CH；
和/或，当X4为
Figure FDA0003949674610000027
时，A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
和/或，当X4为
Figure FDA0003949674610000031
时，A3为NR4、CH2或O；R4为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、-CH2CF3、环丙烷或-CH2-环丙烷；
和/或，当X4为
Figure FDA0003949674610000032
时，A4为C(＝O)或CH2；
和/或，R2为甲基；
和/或，R7为F。
4.如权利要求3所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，当X4为
Figure FDA0003949674610000033
时，A2为CR3；R3为氨基、甲基或异丙基；
和/或，当X4为
Figure FDA0003949674610000034
时，A4为C(＝O)。
5.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000035
中的
Figure FDA0003949674610000036
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000037
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000038
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure FDA0003949674610000039
中的
Figure FDA00039496746100000310
为单键或双键；当
Figure FDA00039496746100000311
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure FDA00039496746100000312
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure FDA00039496746100000313
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为CH2时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为O时，A4为CH2；
n为0或1；
A5为NR10；R10为C1～C4烷基；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure FDA0003949674610000041
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或C1～C4烷基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢。
6.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为甲基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000042
中的
Figure FDA0003949674610000043
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000044
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000045
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure FDA0003949674610000046
中的
Figure FDA0003949674610000047
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000048
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure FDA0003949674610000049
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure FDA00039496746100000410
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基、甲基或异丙基；
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、-CH2CF3、环丙烷或-CH2-环丙烷；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为CH2时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为O时，A4为CH2；
n为0或1；
A5为NR10；R10为甲基、乙基、正丙基、异丙基或正丁基；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure FDA0003949674610000051
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或甲基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或甲基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为F；
R8为氢。
7.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为甲基；
Y1为CH；
Y2为N；
R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000052
中的
Figure FDA0003949674610000053
为单键；当
Figure FDA0003949674610000054
为单键时，X1为N或CH；
s为1；t为1；
Figure FDA0003949674610000055
中的
Figure FDA0003949674610000056
为单键；当
Figure FDA0003949674610000057
为单键时，X3为N，X2为C(＝O)；
X4为
Figure FDA0003949674610000058
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
A4为C(＝O)；n为1；
X6为CHR2；
R2为C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢。
8.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000061
中的
Figure FDA0003949674610000062
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000063
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000064
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure FDA0003949674610000065
中的
Figure FDA0003949674610000066
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000067
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure FDA0003949674610000068
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure FDA0003949674610000069
A5为NR10；R10为C1～C4烷基；
A6为C(＝O)或CH2；
A7为
Figure FDA00039496746100000610
或CR11R12；R11和R12独立地为氢或C1～C4烷基，但R11和R12不同时为氢；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢。
9.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000071
中的
Figure FDA0003949674610000072
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000073
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000074
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure FDA0003949674610000075
中的
Figure FDA0003949674610000076
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000077
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure FDA0003949674610000078
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure FDA0003949674610000079
{其中，X4的b端与X3连接}
A1为N；
A2为CR3；R3为氢、氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为CH2时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为O时，A4为CH2；
n为0或1；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢。
10.如权利要求9所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N；
R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000081
中的
Figure FDA0003949674610000082
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000083
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000084
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure FDA0003949674610000085
中的
Figure FDA0003949674610000086
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000087
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure FDA0003949674610000088
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure FDA0003949674610000089
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为CH2时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为O时，A4为CH2；
n为0或1；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
11.如权利要求9所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基；
Figure FDA00039496746100000810
中的
Figure FDA00039496746100000811
为单键或双键；当
Figure FDA00039496746100000812
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA00039496746100000813
为双键时，X1为C；
s为0或1；t为0或1；
Figure FDA0003949674610000091
中的
Figure FDA0003949674610000092
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000093
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure FDA0003949674610000094
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure FDA0003949674610000095
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；当A3为CH2或O时，A4为CH2；
n为0或1；
X6为C(＝O)或CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
12.如权利要求9所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000096
中的
Figure FDA0003949674610000097
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000098
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000099
为双键时，X1为C；
s为1；t为1；
Figure FDA00039496746100000910
中的
Figure FDA00039496746100000911
为单键；X3为N，X2为CH2或C(＝O)；
X4为
Figure FDA00039496746100000912
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为CH2时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为O时，A4为CH2；
n为1；
X6为CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
13.如权利要求9所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000101
中的
Figure FDA0003949674610000102
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000103
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000104
为双键时，X1为C；
s为1；t为1；
Figure FDA0003949674610000105
中的
Figure FDA0003949674610000106
为单键；X3为N，X2为CH2或C(＝O)；
X4为
Figure FDA0003949674610000107
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、或、氟取代的C1～C4烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；当A3为CH2或O时，A4为CH2；
n为1；
X6为CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
14.如权利要求9所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；Y2为N；R9为甲基；
Figure FDA0003949674610000108
中的
Figure FDA0003949674610000109
为单键或双键；当
Figure FDA00039496746100001010
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA00039496746100001011
为双键时，X1为C；
s为1；t为1；
Figure FDA00039496746100001012
中的
Figure FDA00039496746100001013
为单键；X3为N，X2为CH2或C(＝O)；
X4为
Figure FDA0003949674610000111
当X2为CH2时，A3为NR4，A4为C(＝O)；
当X2为C(＝O)时，A3为NR4，A4为C(＝O)或CH2，或者，A3为CH2或O，A4为CH2；
n为1；
X6为CHR2；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；R8为氢。
15.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，当R1为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当
Figure FDA0003949674610000112
为双键时，
Figure FDA0003949674610000113
为
Figure FDA0003949674610000121
和/或
Figure FDA0003949674610000122
和/或，当
Figure FDA0003949674610000123
为单键、X1为CH时，
Figure FDA0003949674610000124
为
Figure FDA0003949674610000131
和/或
Figure FDA0003949674610000132
和/或，当R3为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个；
和/或，当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基的个数为1个；
和/或，当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
和/或，当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
和/或，当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个；
和/或，当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
和/或，当R10为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R11为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R12为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当X6为CHR2时，
Figure FDA0003949674610000141
为
Figure FDA0003949674610000142
和/或
Figure FDA0003949674610000151
和/或，当R2为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R7为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
和/或，除已确定立体构型的部分外，所述的杂环化合物I-0的其余部分均为各立体构型的混合；
和/或，所述的杂环化合物I-0中所有原子均为天然同位素丰度的原子。
16.如权利要求15所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，当R1为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基；
和/或，当R3为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基或异丙基；
和/或，当R4为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基或正丁基；
和/或，当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个；
和/或，当R4为C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基时，所述的C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基为环丙基甲基；
和/或，当R4为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基；
和/或，当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为1个、2个或3个；
和/或，当R10为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基或正丁基；
和/或，当R11为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基或正丁基；
和/或，当R12为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基或正丁基；
和/或，当X6为CHR2、
Figure FDA0003949674610000152
为双键时，
Figure FDA0003949674610000161
为
Figure FDA0003949674610000162
Figure FDA0003949674610000163
和
Figure FDA0003949674610000171
中的一种或多种；
和/或，当X6为CHR2、
Figure FDA0003949674610000172
为单键、X1为CH时，
Figure FDA0003949674610000173
为
Figure FDA0003949674610000174
Figure FDA0003949674610000181
和
Figure FDA0003949674610000182
中的一种或多种；
和/或，当X6为CHR2、
Figure FDA0003949674610000183
为单键、X1为N时，
Figure FDA0003949674610000184
为
Figure FDA0003949674610000185
和/或
Figure FDA0003949674610000191
和/或，当R2为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基；
和/或，当R7为卤素时，所述的卤素为氟。
17.如权利要求16所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟取代的C1～C4烷基为2,2,2-三氟乙基或2,2-二氟乙基。
18.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其为
Figure FDA0003949674610000192
R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N或CH；
Figure FDA0003949674610000193
中的
Figure FDA0003949674610000194
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000195
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA0003949674610000196
为双键时，X1为C；
Figure FDA0003949674610000197
中的
Figure FDA0003949674610000198
为单键或双键；当
Figure FDA0003949674610000199
为单键时，X3为N，X2为CH2或C(＝O)；当
Figure FDA00039496746100001910
为双键时，X3为C，X2为N；
X4为
Figure FDA00039496746100001911
A1为N；
A2为CR3；R3为氢、氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2或O；R4为氢、C1～C4烷基、氟取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、或、氟取代的C3～C6环烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为CH2时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为O时，A4为CH2；
n为0或1；
R2为氢或C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；R7为卤素；
R8为氢；
R9为甲基。
19.如权利要求18所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，当R1为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R3为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R4为氟取代的C1～C4烷基时，所述的氟的个数为一个或多个；
和/或，当R4为C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
和/或，当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的C3～C6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
和/或，当R4为氟取代的C3～C6环烷基时，所述的氟的个数为一个或多个；
和/或，当R2为C1～C4烷基时，所述的C1～C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R7为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
和/或，
Figure FDA0003949674610000211
为
Figure FDA0003949674610000212
和/或
Figure FDA0003949674610000213
和/或，当
Figure FDA0003949674610000214
中的
Figure FDA0003949674610000215
为单键，X1为CH时；
Figure FDA0003949674610000216
为
Figure FDA0003949674610000221
和/或
Figure FDA0003949674610000222
和/或，当
Figure FDA0003949674610000223
中的
Figure FDA0003949674610000224
为双键，X1为C时；
Figure FDA0003949674610000225
为
Figure FDA0003949674610000226
和/或
Figure FDA0003949674610000231
20.如权利要求19所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，当X4为
Figure FDA0003949674610000232
时，
Figure FDA0003949674610000233
为
Figure FDA0003949674610000234
和/或，当X4为
Figure FDA0003949674610000235
时，
Figure FDA0003949674610000236
为
Figure FDA0003949674610000237
Figure FDA0003949674610000238
21.如权利要求18所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为C1～C4烷基；
Y1为CH；
Y2为N；
Figure FDA0003949674610000239
中的
Figure FDA00039496746100002310
为单键或双键；当
Figure FDA00039496746100002311
为单键时，X1为N或CH；当
Figure FDA00039496746100002312
为双键时，X1为C；
Figure FDA00039496746100002313
中的
Figure FDA00039496746100002314
为单键；当
Figure FDA00039496746100002315
为单键时，X3为N，X2为C(＝O)；
X4为
Figure FDA00039496746100002316
A1为N；
A2为CR3；R3为氨基或C1～C4烷基；
A3为NR4、CH2或O；R4为氢或C1～C4烷基；
当A3为NR4时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为CH2时，A4为C(＝O)或CH2；
当A3为O时，A4为CH2；
n为0；
R2为C1～C4烷基；
X5为CH；
R6为氢；
R7为卤素；
R8为氢；
R9为甲基。
22.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的杂环化合物I-0为如下任一化合物：
Figure FDA0003949674610000241
Figure FDA0003949674610000251
Figure FDA0003949674610000261
Figure FDA0003949674610000271
Figure FDA0003949674610000281
23.如权利要求1所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的杂环化合物I为如下任一化合物：
Figure FDA0003949674610000282
Figure FDA0003949674610000291
Figure FDA0003949674610000301
24.一种如权利要求1～23中任一项所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐在制备RET抑制剂或药物中的应用，所述的药物用于预防和/或治疗由RET异常表达介导的疾病。
25.如权利要求24中所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐在制备RET抑制剂或药物中的应用，其特征在于，所述的“由RET异常表达介导的疾病”为癌症。
26.如权利要求25中所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐在制备RET抑制剂或药物中的应用，其特征在于，所述的癌症为甲状腺乳头状癌、甲状腺髓样癌、嗜铬细胞瘤、胰腺导管腺癌、多发性内分泌瘤、乳腺癌、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、慢性骨髓单核细胞性白血病、结肠癌、直肠癌、卵巢癌或唾液腺癌。
27.如权利要求26中所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐在制备RET抑制剂或药物中的应用，其特征在于，所述的多发性内分泌瘤为MEN2A或MEN2B；所述乳腺癌为转移性乳腺癌。
28.一种如权利要求1～23中任一项所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的应用，所述的药物用于预防和/或治疗癌症。
29.如权利要求28中所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的应用，其特征在于，所述的癌症为甲状腺乳头状癌、甲状腺髓样癌、嗜铬细胞瘤、胰腺导管腺癌、多发性内分泌瘤、乳腺癌、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、慢性骨髓单核细胞性白血病、结肠癌、直肠癌、卵巢癌或唾液腺癌。
30.如权利要求29中所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的应用，其特征在于，所述的多发性内分泌瘤为MEN2A或MEN2B；所述的乳腺癌为转移性乳腺癌。
31.一种药物组合物，其包括如权利要求1～23中任一项所述的如式I-0所示的杂环化合物或其药学上可接受的盐、以及、药用辅料。
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