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CN111225686A - 使用可摄入装置释放免疫调节剂治疗炎性疾病 - Google Patents

使用可摄入装置释放免疫调节剂治疗炎性疾病 Download PDF

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CN111225686A
CN111225686A CN201880066829.8A CN201880066829A CN111225686A CN 111225686 A CN111225686 A CN 111225686A CN 201880066829 A CN201880066829 A CN 201880066829A CN 111225686 A CN111225686 A CN 111225686A
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reservoir
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M.L.琼斯
C.L.沃尔
S.辛格
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Progenity Inc
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Abstract

本公开的特征在于使用免疫调节剂治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性病症或病状的方法和组合物。

Description

使用可摄入装置释放免疫调节剂治疗炎性疾病
相关申请的交叉引用
本申请要求在2017年8月15日提交的美国临时专利申请序列号62/545,894、2017年11月9日提交的62/583,969、2017年12月7日提交的62/596,041、2017年12月14日提交的62/599,000、2017年12月14日提交的62/599,005、和2018年3月30日提交的62/650,900的优先权，所述专利申请的每一项的内容在此通过引用以其整体并入本申请中。
技术领域
本公开的特征在于用于治疗来源于内胚层的组织中的疾病或病状的方法和组合物。
背景技术
来源于内胚层的组织通过例如淋巴系统连接。例如，胃肠道、胆囊、胰腺和肝脏(所有这些都来源于内胚层)排入肠系膜淋巴系统。尽管来源于内胚层的组织易感染不同的炎性疾病或病状，但优先抑制肠系膜淋巴系统免疫应答的免疫调节剂可能代表了一种治疗产生于内胚层的炎性疾病或病状的新方法。
发明内容
本发明基于以下发现：与全身和载体治疗相比，将免疫调节剂的局部(local/topical)递送至胃肠道显著降低了在肠系膜淋巴结内局部发现的促炎性T细胞的平均数量。此外，在接近药物被递送的位置(盲肠)的相邻发炎组织(小肠派尔集合淋巴结)中发现了较少表达α4β7的T细胞。
用于全身施用的免疫调节剂的传统免疫调节剂作用机制是免疫细胞活化(例如，T细胞活化)的全身性阻断、促炎性细胞因子的分泌和/或表达的全身性降低、和/或抗炎性细胞因子的分泌的全身性增加(例如，全身性阻断T细胞表面α4β7整联蛋白/MAdCAM-1相互作用，从而导致向发炎组织的运输减少)。然而，当将免疫调节剂局部(topically)(例如局部(locally))施用到胃肠道系统(使用本文所述的任何装置)时，在发炎组织、引流淋巴结，以及局部药物递送部位附近和上游的组织中观察到T细胞数量显著、令人印象深刻和出乎意料的减少。这些结果表明，阻断局部α4β7整联蛋白相互作用和T细胞募集可能是有责任的。有可能的是，使用免疫调节剂阻断局部α4β7整联蛋白相互作用和T细胞募集可能减少免疫细胞运输或减少T细胞表达α4β7和变成“肠归巢(gut homing)”的“印记”。有可能的是，局部施用的免疫调节剂在细胞外或淋巴间隙中移动，包括从远端到近端肠道。还有可能的是，这些免疫细胞通过淋巴结构的运输减少导致组织中免疫细胞水平降低，这些组织不在用免疫调节剂直接治疗的区域中。
胃肠道递送的免疫调节剂的药效学作用观察延伸到肠系膜淋巴结(MSN)，和排入MSN(来源于内胚层的组织)的器官和组织，这表明局部递送(胃肠道组织递送的)的免疫调节剂可能对除递送部位以外的一系列适应症具有抗炎作用。在一些实施方式中，本发明的组合物和方法可以用于治疗在来源于内胚层的组织中出现的疾病和病状。内胚层形成胃肠道、呼吸道、内分泌腺和器官、听觉系统和泌尿系统；因此，本发明包括用于治疗在以下组织中发现的疾病和病状的组合物和方法：胃、结肠、肝脏、胰腺、胆囊、膀胱、气管的上皮部分、肺、咽、甲状腺、甲状旁腺、肠和胆囊。
本文提供治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，所述方法包括：在受试者的胃肠道中的位置处释放免疫调节剂，其中所述方法包括向所述受试者施用药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的免疫调节剂。
在这些方法的一些实施方式中，所述药物组合物是可摄入装置且所述方法包括向所述受试者口服施用所述药物组合物。在这些方法的一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过所述免疫调节剂的10％。在这些方法的一些实施方式中，所述方法在作为预期释放部位的位置处提供的所述免疫调节剂的浓度比在并非所述预期释放部位的位置处提供的浓度高2-100倍。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法提供的在所述受试者的血浆中的免疫调节剂的浓度小于3μg/mL、小于0.3μg/mL、或小于0.01μg/mL。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法提供的在所述受试者的血浆中的免疫调节剂的C24值小于3μg/mL、小于0.3μg/mL、或小于0.01μg/mL。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是抑制性核酸。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是小分子。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是反义核酸。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是核酶。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是siRNA。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂存在于装置内的药物制剂中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述制剂是所述免疫调节剂于液体介质中的溶液。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述制剂是所述免疫调节剂于液体介质中的悬浮液。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，来源于内胚层的组织选自以下的组：胃、结肠、肝脏、胰腺、膀胱、气管的上皮部分、肺、咽、甲状腺、甲状旁腺、肠和胆囊。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，来源于内胚层的炎性疾病或病状选自以下的组：胃炎、乳糜泻、肝炎、酒精性肝病、脂肪性肝病(肝脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝病(NASH)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胰腺炎、间质性膀胱炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、咽炎、甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状旁腺炎、肾炎、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫斯氏病、干燥综合征、1型糖尿病、盆腔炎性疾病、耳道炎、耳鸣、前庭神经炎、中耳炎、耳道炎、气管炎、胆汁淤积肝病、原发性胆汁性硬化症、肝实质、遗传性肝代谢紊乱、拜勒综合征、脑腱、黄瘤病、泽尔韦格氏综合征、新生儿肝炎、囊性纤维化、ALGS(阿拉吉欧综合征)、PFIC(进行性家族性肝内胆汁淤积症)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝纤维症、NAFLD、门静脉高压、一般性胆汁淤积(诸如因药物引起的或怀孕期间的黄疸)、肝内和肝外胆汁淤积(诸如遗传形式的胆汁淤积，诸如PFIC1、胆结石和胆总管结石)、导致胆道系统阻塞的恶性肿瘤、由于胆汁淤积/黄疸引起的症状(抓挠、瘙痒)、导致进行性胆汁淤积的慢性自身免疫性肝病、和胆汁淤积性肝病、十二指肠溃疡、肠炎(放射性、化学治疗或感染诱导的肠炎)、憩室炎、结肠袋炎、胆囊炎和胆管炎的瘙痒。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状是肝脏炎症。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的大肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于大肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于大肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的升结肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于升结肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于升结肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的盲肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于盲肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于盲肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的乙状结肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于乙状结肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于乙状结肠的远端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的横结肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于横结肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于横结肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的降结肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于降结肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于降结肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的小肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于小肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于小肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的十二指肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于十二指肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于十二指肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的空肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于空肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于空肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在所述受试者的回肠中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于回肠的近端部分中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，该位置位于回肠的远端部分中。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂的位置距预期释放部位10cm或更近处。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂的位置距预期释放部位5cm或更近处。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂的位置距预期释放部位2cm或更近处。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂通过粘膜接触来释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂通过不包含所述免疫调节剂的全身转运的方法递送到所述位置。
本文所述的方法中的任一种的一些实施方式进一步包括使用包括所述胃肠道的成像的方法识别所述免疫调节剂的预期释放部位。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括在施用所述药物组合物之前识别所述免疫调节剂的预期释放部位。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括基本上与识别所述免疫调节剂的预期释放部位同时释放所述免疫调节剂。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括：(a)识别患有在来源于所述内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的受试者，和(b)评估所述受试者是否适合治疗。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂通过以下中的一者或多者触发：在所述空肠中从6.1至7.2的pH、在中小肠中从7.0至7.8的pH、在所述回肠中从7.0至8.0的pH、在右结肠中从5.7至7.0的pH、在中结肠中从5.7至7.4的pH、在左结肠中从6.3至7.7诸如7.0的pH。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂不依赖于所述位置处或附近的pH。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂通过位于所述装置中的释放组分的降解来触发。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂不通过位于所述装置中的释放组分的降解来触发。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂不依赖于所述位置处或附近的酶活性。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂不依赖于所述位置处或附近的细菌活性。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组合物包括多个包含涂层的电极，并且释放所述免疫调节剂通过所述涂层与所述免疫调节剂的预期释放部位的相互作用所引起的所述电极产生的电信号来触发。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂通过远程电磁信号来触发。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂通过在所述组合物中产生足以排出所述免疫调节剂的量的气体来触发。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放所述免疫调节剂通过根据预定的药物释放曲线在所述装置内产生的电磁信号来触发。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述可摄入装置包括可摄入壳体，其中储存所述免疫调节剂的贮存器附接到所述壳体。本文所述的方法中的任一种的一些实施方式还包括：检测何时所述可摄入壳体接近预期释放部位，其中释放所述免疫调节剂包括响应于所述检测从接近所述预期释放部位的贮存器释放治疗有效量的免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，检测包括通过耦接到可摄入壳体的一个或多个传感器检测。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，一个或多个传感器包括多个涂覆电极，并且其中检测包括：通过所述涂覆电极中的一个或多个响应于所述一个或多个电极接触相应预期释放部位来接收电信号。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放包括打开与贮存器流体连通的一个或多个阀。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述一个或多个阀可通信地耦接至位于所述壳体中的处理器，所述处理器可通信地耦接至被配置成检测所述预期释放部位的一个或多个传感器。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，释放包括通过位于所述可摄入壳体中的泵从所述贮存器泵送治疗有效量的所述免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述泵可通信地耦接至位于所述壳体中的处理器，所述处理器可通信地耦接至被配置成检测所述免疫调节剂的预期释放部位的一个或多个传感器。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，治疗有效量的所述免疫调节剂在高于所述受试者的胃肠道中的压力的贮存器压力下储存在所述贮存器中。
本文所述的方法中的任一种的一些实施方式进一步包括响应于所述检测，将所述可摄入壳体锚定在接近所述预期释放部位的位置处。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，锚定所述可摄入壳体包括一个或多个支腿以从所述可摄入壳体延伸。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，施用的所述免疫调节剂的量为约1mg至约500mg。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是抗体或抗原结合抗体片段。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述抗体是人源化抗体。
在一些实施方式中，每天一次向受试者施用所述剂量的免疫调节剂。在一些实施方式中，每两天一次向受试者施用所述剂量的免疫调节剂。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂的量小于在全身施用所述免疫调节剂时有效的量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括施用(i)作为诱导剂量的量的免疫调节剂。本文所述的方法中的任一种的一些实施方式还包括(ii)在施用所述诱导剂量后施用作为维持剂量的量的所述免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述诱导剂量每天一次地施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述诱导剂量每两天一次地施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述诱导剂量每三天一次地施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述诱导剂量每周一次地施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，步骤(ii)重复一次或多次。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，步骤(ii)在约6-8周的时间段内每天重复一次。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，步骤(ii)在约6-8周的时间段内每三天重复一次。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，步骤(ii)在约6-8周的时间段内每周重复一次。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，诱导剂量等于维持剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，诱导剂量大于维持剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，诱导剂量比维持剂量大5倍。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，诱导剂量比维持剂量大2倍。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括以单次团注在所述胃肠道中的位置处释放所述免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括以超过一次团注在所述胃肠道中的位置处释放所述免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括以连续方式在所述胃肠道中的位置处递送所述免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括在20分钟或更多分钟的时间段内在所述胃肠道中的位置处递送所述免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括将免疫调节剂直肠递送到受试者。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括通过灌肠剂将免疫调节剂递送到受试者。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括通过栓剂将免疫调节剂递送到受试者。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括通过滴注将免疫调节剂递送到受试者的直肠。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括手术植入。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是IL-12/IL-23抑制剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是TNFα抑制剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是IL-6受体抑制剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是CD40/CD40L抑制剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是IL-1抑制剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是PDE4抑制剂。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组合物是自主装置。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组合物包括能够释放免疫调节剂的机构。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组合物包括用于将组合物锚定到所述位置的组织锚定机构。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组织锚定机构能够激活以锚定到所述位置。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组织锚定机构包括渗透驱动的吸管。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组织锚定机构包括可操作用于将所述组合物锚定到所述位置的连接器。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述连接器可操作用于利用粘合剂、负压和/或紧固件将所述组合物锚定到所述位置。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述贮存器是可锚定贮存器。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述药物组合物是可摄入装置，其包括：壳体；位于壳体内并且包含免疫调节剂的贮存器；用于从贮存器释放免疫调节剂的机构；和出口阀，其被配置成允许免疫调节剂从贮存器释放到壳体之外。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述可摄入装置还包括：位于壳体内的电子组件；和气体发生单元，其位于壳体内并且与电子组件相邻，其中电子组件被配置成激活气体发生单元以产生气体。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述可摄入装置还包括：放置在所述壳体内或附接到所述壳体的安全装置，其中安全装置被配置成在内部压力超过阈值水平时释放壳体内的内部压力。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述药物组合物是可摄入装置，其包括：壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；位于所述壳体内的电子组件；气体发生单元，其位于壳体内并且与电子组件相邻，其中电子组件被配置成激活气体发生单元以产生气体；位于所述壳体内的贮存器，其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端连接到所述壳体的第一端；位于所述壳体的第一端的出口阀，其中，所述出口阀被配置成允许所述可配发物质从所述贮存器释放到所述壳体的所述第一端之外；以及放置在所述壳体内或附接到所述壳体的安全装置，其中安全装置被配置成在内部压力超过阈值水平时释放壳体内的内部压力。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述药物组合物是可摄入装置，其包括：壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；位于所述壳体内的电子组件；气体发生单元，其位于壳体内并且与电子组件相邻，其中电子组件被配置成激活气体发生单元以产生气体；位于所述壳体内的贮存器，其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端连接到所述壳体的第一端；位于所述壳体的所述第一端处的注射装置，其中，所述射流注射装置被配置成将所述可配发物质从所述贮存器注射到所述壳体之外；以及放置在所述壳体内或附接到所述壳体上的安全装置，其中安全装置被配置成释放壳体内的内部压力。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述药物组合物是可摄入装置，其包括：壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；位于所述壳体的侧面的光学感测单元，其中，所述光学感测单元被配置成检测来自所述壳体外部环境的反射率；位于所述壳体内的电子组件；气体发生单元，其位于壳体内并且与电子组件相邻，其中，所述电子组件被配置成响应于基于所述反射率识别所述可摄入装置的位置而激活所述气体发生单元以产生气体；位于所述壳体内的贮存器，其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端连接到所述壳体的第一端；与所述气体发生单元接触并且配置成通过由所述气体发生单元产生的压力而移动或变形到所述贮存器中的膜；以及放置在所述壳体的所述第一端的分配出口，其中，所述分配出口被配置成将所述可配发物质从所述贮存器递送到所述壳体之外。
在一些实施方式中，本文提供了一种治疗如本文公开的疾病的方法，所述方法包括：
向所述受试者施用包含如本文公开的治疗剂的药物制剂，
其中所述药物制剂在所述受试者的胃肠道中的位置，诸如接近一个或多个疾病位点的位置释放。
在一些实施方式中，药物制剂在可摄入装置中施用。在一些实施方式中，药物制剂从可摄入装置释放。在一些实施方式中，可摄入装置包括壳体、含有药物制剂的贮存器和用于从装置释放药物制剂的释放机构，
其中所述贮存器可释放地或永久地连接到所述壳体的外部或所述壳体的内部；
在一些实施方式中，本文提供了一种治疗如本文公开的疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用包含壳体、含有药物制剂的贮存器和用于从装置释放药物制剂的释放机构的可摄入装置；
其中所述贮存器可释放地或永久地连接到所述壳体的外部或所述壳体的内部；
其中药物制剂包含如本文公开的治疗剂，并且
所述可摄入装置在所述受试者的胃肠道中的位置，诸如接近一个或多个疾病位点的位置处释放所述药物制剂。在一些实施方式中，壳体在胃肠道中是不可生物降解的。
在一些实施方式中，制剂的释放是自主触发的。在一些实施方式中，装置被程序化为通过一种或多种释放特性释放制剂，所述释放特性在一个或多个位置可以是相同或不同的。在一些实施方式中，装置被程序化为在接近一个或多个疾病位点的位置释放制剂。在一些实施方式中，疾病的一个或多个位点的位置是预先确定的。
在一些实施方式中，贮存器由允许制剂离开贮存器的材料例如可生物降解材料制成。
在一些实施方式中，制剂的释放由预先程序化的算法触发。在一些实施方式中，制剂的释放由来自传感器或检测器的数据触发，以识别装置的位置。在一些更具体的实施方式中，数据并非仅仅基于生理参数(诸如pH、温度和/或传输时间)。
在一些实施方式中，装置包括检测器，所述检测器配置成检测来自壳体外部环境的光反射。在一些更具体的实施方式中，释放被自主触发或基于检测到的反射。
在一些实施方式中，装置在与检测到一个或多个疾病位点的时间基本上相同的时间处释放制剂。在一些实施方式中，通过装置检测(例如通过对胃肠道成像)一个或多个疾病位点。
在一些实施方式中，释放机构是驱动系统。在一些实施方式中，释放机构是化学驱动系统。在一些实施方式中，释放机构是机械驱动系统。在一些实施方式中，释放机构是电驱动系统。在一些实施方式中，驱动系统包括泵，并且释放制剂包括将制剂泵出贮存器。在一些实施方式中，驱动系统包括气体发生单元。在一些实施方式中，装置还包括锚定机构。在一些实施方式中，制剂包含治疗有效量的如本文公开的治疗剂。在一些实施方式中，制剂包含人类等效剂量(HED)的如本文公开的治疗剂。
在一些实施方式中，装置是能够释放如本文公开的固体治疗剂或包含如本文公开的治疗剂的固体制剂的装置。在一些实施方式中，装置是能够释放如本文公开的液体治疗剂或包含如本文公开的治疗剂的液体制剂的装置。因此，在本文方法的一些实施方式中，从装置释放的药物制剂是固体制剂。因此，在本文方法的一些实施方式中，从装置释放的药物制剂是液体制剂。
本文公开的装置能够释放如本文公开的治疗剂或包含如本文公开的治疗剂的制剂，而与如本文公开的治疗剂的具体类型无关。例如，如本文公开的治疗剂可以是小分子、生物、核酸、抗体、融合蛋白等。
在一些实施方式中，本文提供一种将如本文公开的治疗剂释放到受试者的胃肠道以用于治疗胃肠道内的一个或多个疾病位点的方法，该方法包括：
向受试者施用容纳在可摄入装置中的治疗有效量的如本文公开的治疗剂，其中该可摄入装置包括：
检测器，其配置成检测一个或多个疾病位点的存在，以及
控制器或处理器，其配置成响应于检测器检测到一个或多个疾病位点存在来触发接近一个或多个疾病位点的如本文公开的治疗剂的释放。
在一些实施方式中，本文提供一种将如本文公开的治疗剂释放到受试者的胃肠道以用于治疗胃肠道内的一个或多个预定疾病位点的方法，该方法包括：
向受试者施用含在可摄入装置中的治疗有效量的如本文公开的治疗剂，其中该可摄入装置包括：
检测器，其配置成检测装置在胃肠道内的位置，以及
控制器或处理器，其配置成响应于检测器检测对应于一个或多个预定疾病位点的位置的装置位置而触发接近一个或多个预定疾病位点的如本文公开的治疗剂的释放。
在一些实施方式中，本文提供一种将如本文公开的治疗剂释放到受试者的胃肠道以用于治疗胃肠道内的一个或多个疾病位点的方法，该方法包括：
向受试者施用含在可摄入装置中的治疗有效量的如本文公开的治疗剂；
在装置的外部接收器处接收传送环境数据的信号；
评估环境数据以确认一个或多个疾病位点的存在；以及
当确认存在一个或多个疾病位点时，从外部传输器向装置发送信号，触发接近一个或多个疾病位点的如本文公开的治疗剂释放。
在一些实施方式中，本文提供一种将如本文公开的治疗剂释放到受试者的胃肠道以用于治疗胃肠道内的一个或多个疾病位点的方法，该方法包括：
向受试者施用含在可摄入装置中的治疗有效量的如本文公开的治疗剂；
在装置的外部接收器处接收传送环境或光学数据的信号；
评估该环境或光学数据以确认装置在胃肠道内的位置；以及
当确认装置的位置时，从外部发送器向装置发送信号，触发接近一个或多个疾病位点的如本文公开的治疗剂释放。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，药物组合物是美国专利申请序列号62/385,553中公开的可摄入装置，该专利申请通过引用全文并入本文中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，药物组合物是包括如国际专利申请PCT/US2015/052500中公开的定位机构的可摄入装置，该国际专利申请通过引用全文并入本文中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组合物不是镖状剂型。
本文还提供治疗在来源于受试者的内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，其包括：在所述受试者的大肠中的位置处释放免疫调节剂，其中所述方法包括在内窥镜下向所述受试者施用治疗有效量的免疫调节剂，其中所述方法不包括在并非预期释放部位的位置处释放超过所述免疫调节剂的20％。
本文还提供治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，其包括：在所述受试者的大肠的近端部分中的位置释放免疫调节剂，其中所述方法包括在内窥镜下向所述受试者施用包括治疗有效量的免疫调节剂的药物组合物，其中所述药物组合物是可摄入装置。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过所述免疫调节剂的20％。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过所述免疫调节剂的10％。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法在作为预期释放部位的位置处提供的所述免疫调节剂的浓度比在并非所述预期释放部位的位置处提供的浓度高2-100倍。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法提供的在所述受试者的血浆中的免疫调节剂的浓度小于3μg/mL。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法提供的在所述受试者的血浆中的免疫调节剂的浓度小于0.3μg/mL。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法提供的在所述受试者的血浆中的免疫调节剂的浓度小于0.01μg/mL。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法提供的在所述受试者的血浆中的免疫调节剂的C24值小于3μg/mL。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法提供的在所述受试者的血浆中的免疫调节剂的C24值小于0.3μg/mL。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法提供的在所述受试者的血浆中的免疫调节剂的C24值小于0.01μg/mL。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述组合物不包括肠溶包衣。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂不是环肽。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂存在于装置内的药物制剂中。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述制剂是所述免疫调节剂于液体介质中的溶液。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述制剂是所述免疫调节剂于液体介质中的悬浮液。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，来源于内胚层的组织选自以下的组：胃、结肠、肝脏、胰腺、膀胱、气管的上皮部分、肺、咽、甲状腺、甲状旁腺、肠和胆囊。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状选自以下的组：胃炎、乳糜泻、肝炎、酒精性肝病、脂肪性肝病(肝脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝病(NASH)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胰腺炎、间质性膀胱炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、咽炎、甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状旁腺炎、肾炎、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫斯氏病、干燥综合征、1型糖尿病、盆腔炎性疾病、耳道炎、耳鸣、前庭神经炎、中耳炎、耳道炎、气管炎、胆汁淤积肝病、原发性胆汁性硬化症、肝实质、遗传性肝代谢紊乱、拜勒综合征、脑腱、黄瘤病、泽尔韦格氏综合征、新生儿肝炎、囊性纤维化、ALGS(阿拉吉欧综合征)、PFIC(进行性家族性肝内胆汁淤积症)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝纤维症、NAFLD、门静脉高压、一般性胆汁淤积(诸如因药物引起或怀孕期间的黄疸)、肝内和肝外胆汁淤积(诸如遗传形式的胆汁淤积，诸如PFIC1、胆结石和胆总管结石)、导致胆道系统阻塞的恶性肿瘤、由于胆汁淤积/黄疸引起的症状(抓挠、瘙痒)、导致进行性胆汁淤积的慢性自身免疫性肝病、和胆汁淤积性肝病、十二指肠溃疡、肠炎(放射性、化学治疗或感染诱导的肠炎)、憩室炎、结肠袋炎、胆囊炎和胆管炎的瘙痒。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状是肝脏炎症。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在升结肠的近端部分中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在盲肠的近端部分中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在乙状结肠的近端部分中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在横结肠的近端部分中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在降结肠的近端部分中的位置处释放。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括向所述受试者施用包括治疗有效量的免疫调节剂的贮存器，其中所述贮存器连接到内窥镜。
本文所述的方法中的任一种的一些实施方式还包括口服、静脉内或皮下施用第二药剂，其中所述第二药剂是相同的免疫调节剂、不同的免疫调节剂、或具有与所述免疫调节剂不同的生物学靶标的药剂，其中所述第二药剂是适于治疗在来源于所述内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的药剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在第二药剂之前施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂在第二药剂之后施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂和所述第二药剂基本上同时施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述第二药剂经静脉内施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述第二药剂经皮下施用。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，当所述免疫调节剂和所述第二药剂都全身施用时所述第二药剂的量小于所述第二药剂的量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是另一种免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括施用第二药剂。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括在内窥镜施用之前识别预期释放部位。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括基本上在释放所述免疫调节剂的同时识别预期释放部位。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括监测疾病进展。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法不包括用喷雾导管施用免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括用喷雾导管施用免疫调节剂。
本文还提供治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，其包括：在所述受试者的胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，其中所述方法包括向所述受试者施用包括治疗有效量的所述免疫调节剂的药物组合物，所述方法包括以下步骤中的一个或多个：(a)识别患有在来源于所述内胚层的组织中出现的疾病或病状的受试者；(b)确定所述疾病的严重程度；(c)确定所述疾病的位置；(d)评估所述受试者是否适合治疗；(e)施用诱导剂量的所述免疫调节剂；(f)监测所述疾病的进展；和/或(g)任选地重复步骤(e)和(f)一次或多次。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述药物组合物是可摄入装置且所述方法包括向所述受试者口服施用所述药物组合物。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述方法包括在步骤(e)中施用诱导剂量后施用一个或多个维持剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，诱导剂量是在可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，维持剂量是在如本文公开的可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，维持剂量是全身递送的免疫调节剂的剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，诱导剂量是全身递送的免疫调节剂的剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，维持剂量是在可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，诱导剂量是如全身递送的第二药剂的剂量。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，维持剂量是在可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，其中所述免疫调节剂选自以下的组：IL-12/IL-23抑制剂、TNFα抑制剂、IL-6受体抑制剂、CD40/CD40L抑制剂、IL-1抑制剂、IL-13抑制剂、IL-10受体抑制剂、和整联蛋白抑制剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是PDE4抑制剂。
本文还提供免疫调节剂递送设备，其包括：包括具有药物组合物储存于其中的贮存器的可摄入壳体，所述药物组合物包括治疗有效量的免疫调节剂；耦接至所述可摄入壳体的检测器，所述检测器被配置成检测所述可摄入壳体何时接近相应预期释放部位的时间；与所述贮存器系统流体连通的阀门系统；以及可通信地耦接至所述阀门系统和所述检测器的控制器，所述控制器被配置成响应于所述检测器检测到所述可摄入壳体接近所述相应预期释放部位而使阀门系统打开，以在所述相应预期释放部位释放治疗有效量的所述免疫调节剂。本文所述的设备中的任一种的一些实施方式还包括位于所述可摄入壳体中的泵，所述泵被配置成响应于通过所述控制器响应于由所述检测器检测到所述可摄入壳体接近所述预期释放部位而激活所述泵从而从所述贮存器泵送治疗有效量的所述免疫调节剂。在本文所述的设备中的任一种的一些实施方式中，所述控制器被配置成使所述泵根据以下方案从所述贮存器中泵送治疗有效量的所述免疫调节剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述阀门系统包括可溶解的涂层。在本文所述的设备中的任一种的一些实施方式中，所述阀门系统包括配置成通过滑动、枢转和旋转中的至少一种来驱动的一个或多个门。在本文所述的设备中的任一种的一些实施方式中，所述阀门系统包括静电屏。在本文所述的设备中的任一种的一些实施方式中，所述贮存器包括加压单元。
本文所述的设备中的任一种的一些实施方式还包括至少一个可驱动锚，其被配置成在驱动时将所述可摄入壳体保持在所述相应预期释放部位。在本文所述的设备中的任一种的一些实施方式中，所述可驱动锚是可伸缩的。
本文还提供组合物，所述组合物包括治疗有效量的本文所述的免疫调节剂中的任一种，其中所述组合物能够将免疫调节剂释放在受试者的胃肠道中的位置处。在本文所述的组合物中的任一种的一些实施方式中，所述组合物包括用于将组合物锚定到所述位置的组织锚定机构。在本文所述的组合物中的任一种的一些实施方式中，所述组织锚定机构能够锚定以锚定到所述位置。在本文所述的组合物中的任一种的一些实施方式中，所述组织锚定机构包括渗透驱动的吸管。在本文所述的组合物中的任一种的一些实施方式中，所述组织锚定机构包括可操作用于将所述组合物锚定到所述位置的连接器。在本文所述的组合物中的任一种的一些实施方式中，所述连接器可操作用于利用粘合剂、负压和/或紧固件将所述组合物锚定到所述位置。
本文还提供一种免疫调节剂，其用于治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法中，其中，所述方法包括向所述受试者口服施用装载有所述免疫调节剂的可摄入装置，其中所述免疫调节剂由所述装置在所述受试者的胃肠道中接近所述免疫调节剂的预期释放部位的位置处释放。在本文所述的使用的免疫调节剂的一些实施方式中，所述免疫调节剂包含在适于连接至装置壳体的贮存器中，并且其中所述方法包括在向所述受试者口服施用所述可摄入装置之前将所述贮存器连接到所述装置壳体以形成所述可摄入装置。
本文还提供一种含有免疫调节剂的可附接贮存器，其用于治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法中，其中所述方法包括将所述贮存器连接到装置壳体上以形成可摄入装置并且将所述可摄入装置口服施用于受试者，其中通过装置在所述受试者的胃肠道中接近所述预期释放部位的位置处释放所述免疫调节剂。
本文还提供一种包括装载有治疗有效量的免疫调节剂的可摄入装置或由所述可摄入装置组成的组合物，其用于治疗方法中，其中，所述方法包括将所述组合物口服施用于受试者，其中通过所述装置在所述受试者的胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放所述免疫调节剂。
在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的所使用组合物的一些实施方式中，已经预先确定预期释放部位。在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的所使用组合物的一些实施方式中，所述可摄入装置还包括环境传感器，并且所述方法还包括使用所述环境传感器识别预期释放部位的位置。在所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的所使用组合物中的任一种的一些实施方式中，所述环境传感器是成像传感器，并且所述方法还包括对胃肠道成像以识别预期释放部位。在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的所使用组合物中的任一种的一些实施方式中，成像检测预期释放部位。在所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的所使用组合物中的任一种的一些实施方式中，在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状选自以下的组：胃炎、乳糜泻、肝炎、酒精性肝病、脂肪性肝病(肝脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝病(NASH)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胰腺炎、间质性膀胱炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、咽炎、甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状旁腺炎、肾炎、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫斯氏病、干燥综合征、1型糖尿病、盆腔炎性疾病、耳道炎、耳鸣、前庭神经炎、中耳炎、耳道炎、气管炎、胆汁淤积肝病、原发性胆汁性硬化症、肝实质、遗传性肝代谢紊乱、拜勒综合征、脑腱、黄瘤病、泽尔韦格氏综合征、新生儿肝炎、囊性纤维化、ALGS(阿拉吉欧综合征)、PFIC(进行性家族性肝内胆汁淤积症)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝纤维症、NAFLD、门静脉高压、一般性胆汁淤积(诸如因药物引起或怀孕期间的黄疸)、肝内和肝外胆汁淤积(诸如遗传形式的胆汁淤积，诸如PFIC1、胆结石和胆总管结石)、导致胆道系统阻塞的恶性肿瘤、由于胆汁淤积/黄疸引起的症状(抓挠、瘙痒)、导致进行性胆汁淤积的慢性自身免疫性肝病、和胆汁淤积性肝病、十二指肠溃疡、肠炎(放射性、化学治疗或感染诱导的肠炎)、憩室炎、结肠袋炎、胆囊炎和胆管炎的瘙痒。
在所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的所使用组合物中的任一种的一些实施方式中，在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状是选自以下的组的肝脏疾病或病症：纤维症、肝硬化、酒精性肝病、脂肪性肝病(肝脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝病(NASH)、胆汁淤积性肝病、肝实质、遗传性肝代谢紊乱、PFIC(进行性家族性肝内胆汁淤积症)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、NAFLD、导致进行性胆汁淤积的慢性自身免疫性肝病、胆汁淤积性肝病的瘙痒、肝脏炎症和肝纤维症。
在所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的所使用组合物中的任一种的一些实施方式中，在来源于内胚层的组织中出现的疾病或病状是选自由以下组成的组的与肠脑轴相关的疾病或病状：多发性硬化症、帕金森氏病、轻度认知损伤、阿尔茨海默病、脑炎、和肝性脑病。
本文还提供可摄入装置，其装载有治疗有效量的免疫调节剂，其中所述装置可控制用于在受试者的胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放所述免疫调节剂。本文还提供本文所述的用于治疗人体或动物身体的方法中的装置中的任一种。
在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，其中所述可摄入装置包括：壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；位于壳体内并且包含免疫调节剂的贮存器，其中所述贮存器的第一端连接到所述壳体的第一端；用于从贮存器释放免疫调节剂的机构；和出口阀，其被配置成允许免疫调节剂从贮存器释放到壳体之外。
在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，可摄入装置包括：包括贮存器隔室的可摄入壳体，在贮存器隔室中储存治疗有效量的免疫调节剂；释放机构，其具有将免疫调节剂保留在贮存器中的闭合状态和将免疫调节剂从贮存器释放到装置外部的打开状态；以及将所述释放机构的状态从关闭状态改变为打开状态的驱动器。
在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，所述可摄入装置还包括环境传感器，其用于检测所述装置在肠道中的位置。在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的所使用组合物中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，其中所述可摄入装置还包括用于将数据从环境传感器传输到外部接收器的通信系统。在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、本文所述的所使用组合物中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，所述可摄入装置还包括处理器或控制器，所述处理器或控制器耦接到环境传感器和驱动器，且当确定所述装置存在于预期释放部位中和/或位于肠道中已预先确定为接近预期释放部位的位置时，触发驱动器以使释放机构从其闭合状态转换到其打开状态。
在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、本文所述的所使用组合物中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，所述通信系统还包括用于接收来自外部发射器的信号的器具，并且其中所述驱动器适于响应于所述信号而被触发。
在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、本文所述的所使用组合物中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，所述可摄入装置还包括用于将定位数据传输到外部接收器的通信系统。
在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的可附接贮存器中的任一种、本文所述的所使用组合物中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，所述可摄入装置还包括通信系统，所述通信系统用于将定位数据传输至外部接收器和用于接受来自外部发射器的信号；其中所述驱动器适于响应于所述信号而被触发。在本文所述的所使用免疫调节剂中的任一种、本文所述的所使用可附接贮存器隔室中的任一种、本文所述的所使用组合物中的任一种、或本文所述的装置中的任一种的一些实施方式中，所述可摄入装置还包括可展开的锚定系统和用于展开所述锚定系统的驱动器，其中所述锚定系统能够将所述可摄入装置锚定或连接到受试者的组织。
在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述受试者先前已经识别为患有在来源于所述内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状。
本文所述的方面和实施方式旨在自由组合。例如，本文所述的治疗方法的任何细节或实施方式同样适用于用于所述治疗的药剂、组合物或可摄入装置。关于所述装置的任何细节或实施方式同样适用于使用所述装置的治疗方法，或适用于用于涉及所述装置的治疗方法的药剂或组合物。
附图说明
图1是根据本公开内容的一些实施方式的可摄入装置的示例性实施方式的图。
图2是根据本公开内容的一些实施方式的图1的可摄入装置的分解图。
图3是根据本公开内容的一些实施方式的在示例性转移通过胃肠道的过程中的可摄入装置的示意图。
图4是根据本公开内容的一些实施方式的可摄入装置在示例性转移通过空肠的过程中的示意图。
图5是根据本公开内容的一些实施方式的用于确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置的例示性步骤的流程图。
图6是根据本公开内容的一些实施方式的用于检测从胃到十二指肠以及从十二指肠回到胃的转移的例示性步骤的流程图，其可在确定可摄入装置在其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图7是根据本公开内容的一些实施方式例示出在可摄入装置的示例性操作过程中收集的数据的线图，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图8是根据本公开内容的一些实施方式例示出在可摄入装置的示例性操作过程中收集的数据的另一线图，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图9是根据本公开内容的一些实施方式的用于检测从十二指肠到空肠的转移的例示性步骤的流程图，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图10是根据本公开内容的一些实施方式的例示出在可摄入装置的示例性操作过程中收集的数据的线图，其可在探测从十二指肠转移到空肠时使用。
图11是根据本公开内容的一些实施方式例示出由可摄入装置检测的随时间的肌肉收缩的图线，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图12是根据本公开内容的一些实施方式的用于检测从空肠到回肠的转移的例示性步骤的流程图，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图13是根据本公开内容的一些实施方式的用于检测从空肠到回肠的转移的例示性步骤的流程图，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图14是根据本公开内容的一些实施方式的用于检测从回肠到盲肠的转移的例示性步骤的流程图，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图15是根据本公开内容的一些实施方式的用于检测从盲肠到结肠的转移的例示性步骤的流程图，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠道时的位置时使用。
图16显示了用于在胃肠道中递送物质的可摄入装置。
图17显示了具有配置成生成气体以配发物质的气体发生单元的可摄入装置的机构的各个方面。
图18显示了具有推动药物递送的活塞的可摄入装置。
图19显示了一种可摄入装置，其具有用于可配发物质的储存器的波纹管结构。
图20显示了一种具有用于药物递送的可变形的柔性隔膜的可摄入装置。
图21展示了在壳体中具有多个开口的可摄入装置的例示性实施方式。
图22展示了包括阀门系统和取样系统的可摄入装置的高横截面。
图23显示了阀门系统。
图24A和24B分别显示了两阶段阀门系统的第一阶段和第二阶段的一部分。
图25A和25B分别显示了两阶段阀门系统的第一阶段和第二阶段的一部分。
图26A和26B分别显示了两阶段阀门系统的第一阶段和第二阶段的一部分。
图27显示了包括阀门系统和取样系统的可摄入装置的更详细的视图。
图28显示了可摄入装置的一部分，所述可摄入装置包括处于其第二阶段的取样系统和两阶段阀门系统。
图29是可摄入装置的高度示意图。
图30是显示用抗IL-12 p40抗体每三天(Q3D)经腹腔内施用(10mg/kg)或每天(QD)经盲肠内施用(10mg/kg或1mg/kg)治疗的DSS小鼠与用抗IL-12p40抗体通过每三天(Q3D)通过腹腔内施用(10mg/kg)治疗的小鼠以及载体对照(载体)相比，在第14天的体重变化百分比(％)(±SEM)的图。曼-惠特尼U检验和学生t检验分别用于非高斯和高斯数据的统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图31是显示每日(QD)或每三天(Q3D)腹腔内施用(10mg/kg)或盲肠内施用(10mg/kg或1mg/kg)抗IL-12 P40治疗组与载体对照(载体)比较时，以及IP与IC比较时，血浆中抗IL-12 p40大鼠IgG2A(μg/ml)浓度的图。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗IL-12 p40(IgG2A)的浓度。数据表示为平均值±SEM。曼-惠特尼U检验和学生t检验分别用于非高斯和高斯数据的统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图32是显示每日(QD)或每三天(Q3D)腹腔内施用(10mg/kg)和盲肠内施用(10mg/kg和1mg/kg)抗IL-12 P40治疗组与载体对照(载体)比较时，以及IP与IC比较时，盲肠和结肠内容物中的抗IL-12 p40抗体IgG2A(μg/ml)浓度的图。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠IgG2A的浓度。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图33是显示与经载体对照治疗的DSS小鼠对比，经抗IL-12 p40抗体盲肠内施用治疗的急性DSS结肠炎小鼠结肠内容物的平均总体组织免疫标记评分(强度和程度)的图。数据表示为平均值±SEM。
图34是显示与载体对照治疗的DSS小鼠对比，经抗IL-12 p40盲肠内治疗的急性DSS结肠炎小鼠结肠的平均位置特异性免疫标记评分的图。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图35是显示当在初始施用后的同一时间点测量时，结肠组织中的抗IL-12p40抗体与在研究的第0(Q0)天或第3天(Q3D)用抗IL-12 p40抗体治疗的小鼠中的抗IL-12 p40抗体血浆浓度之比的图。从第5组中移除异常动物。
图36是显示与载体对照(载体)相比，每三天(Q3D)经腹腔(10mg/kg)或每日经盲肠内(10mg/kg或1mg/kg)施用抗IL-12 p40治疗的急性DSS结肠炎小鼠的结肠组织溶解物中IL-1β(μg/ml)的浓度的图。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图37是显示与载体对照(载体)相比，每三天(Q3D)经腹膜内(10mg/kg)或每天(QD)经盲肠内施用抗IL-12 p40治疗的急性DSS结肠炎小鼠的结肠组织溶解物中的IL-6(μg/ml)浓度的图。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图38是与载体对照(载体)相比，每三天(Q3D)经腹腔内(10mg/kg)或每天(QD)经盲肠内施用抗IL-12 p40治疗的急性DSS结肠炎小鼠的结肠组织溶解物中IL-17A(μg/ml)的浓度的图。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图39是显示与载体对照(载体)比较时，以及当将IC与IP比较时，每三天(Q3D)经腹腔(25mg/kg)内或每天(QD)经盲肠内(25mg/kg或5mg/kg)施用DATK32(抗α4θ7)治疗的DSS小鼠在第14天的体重变化百分比(％)(±SEM)。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(GraphPad Software公司)。
图40是显示每天(QD)或每三天(Q3D)经腹腔内(25mg/kg)和经盲肠内(25mg/kg和5mg/kg)施用治疗组的DATK32大鼠IgG2A(μg/ml)血浆浓度的图，其中IP与IC进行比较。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图41是显示每天(QD)或每三天(Q3D)经腹腔(25mg/kg)或经盲肠内(25mg/kg和5mg/kg)施用的治疗组的盲肠和结肠内的DATK32大鼠IgG2A抗体(μg/ml)的浓度的图，其中IP与IC进行比较。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图42是显示每日(QD)经腹腔内(25mg/kg)或经盲肠内(25mg/kg和5mg/kg)施用的治疗组的结肠内容物中的DATK32大鼠IgG2A的浓度(μg/ml)，以及浓度随时间(1、2、4、24和48小时)变化的图，其中IP与IC进行比较。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(GraphPad Software公司)。
图43是显示每天(QD)或每三天(Q3D)经腹腔内(25mg/kg)或经盲肠内(25mg/kg和5mg/kg)施用的治疗组的结肠组织中的DATK32大鼠IgG2A(μg/g)浓度的图，其中IP与IC进行比较。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图44是显示每天(QD)经腹腔内(25mg/kg)或经盲肠内(25mg/kg和5mg/kg)施用的治疗组的结肠组织中的DATK32大鼠IgG2A(μg/g)浓度，以及浓度随时间(1、2、4、24和48小时)变化的图，其中IP与IC进行比较。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph PadSoftware公司)。
图45是显示与经载体对照(载体)治疗的DSS小鼠相比，经DATK32(抗α4θ7)抗体治疗的急性DSS结肠炎小鼠结肠中的平均总体组织免疫标记评分(强度和程度)的图。数据表示为平均值±SEM。
图46是显示与经载体对照(载体)治疗的DSS小鼠相比，经DATK32(抗α4θ7)抗体治疗的急性DSS结肠炎小鼠结肠的平均位置特异性免疫标记评分的图。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图47是显示在初始施用后测量时，在研究第0天(D0)或第3天(Q3D)用DATK-32抗体治疗的小鼠(9-12组)中的结肠组织中的DATK-32抗体与DATK-32血浆浓度之比的图。
图48是显示当与载体对照(载体)进行比较时，以及当将IP与IC进行比较时，每日(QD)或每三天(Q3D)经腹腔(25mg/kg)或经盲肠内(25mg/kg或5mg/kg)施用DATK32(抗α4θ7)的治疗组的血液中的Th记忆细胞的平均百分比(平均值±SEM)的图。用FACS分析法测定记忆细胞的平均百分比。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图49是未显示明显病变(即正常结肠)的动物1501远端横结肠组织切片的示例性图像。
图50是显示坏死和炎症区域的动物2501(用TNBS治疗)远端横结肠组织切片的示例性图像。
图51是阿达木单抗单次皮下注射(SQ)或局部注射阿达木单抗后血浆阿达木单抗浓度随时间变化的代表性图。阿达木单抗血浆浓度在施用后6、12、24和48小时进行测定。N/D＝不可检测的。
图52是如图4.6所示的阿达木单抗血浆浓度(μg/ml)的代表性表。
图53是显示在盲肠内阿达木单抗施用后、如在首次施用后6、12、24和24小时测得的在非炎症和炎症结肠组织中的TNFα浓度(pg/ml每毫克总蛋白)的图。
图54是显示在皮下或盲肠内(局部)施用阿达木单抗后结如初始施用后48小时测得的肠组织中的TNFα(pg/ml每毫克总蛋白)浓度的图，。
图55是显示与载体对照(载体)相比，用每三天(Q3D)口服(10mg/kg)或每天(QD)经盲肠内(10mg/kg或3mg/kg)施用环孢菌素A治疗的急性DSS结肠炎小鼠在第14天体重变化百分比(％)(±SEM)的图。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图56是显示每日口服(PO)(10mg/kg)或经盲肠内(IC)(10mg/kg或3mg/kg)施用CsA的治疗的急性DSS结肠炎小鼠的血浆环孢菌素A(CsA)(ng/ml)浓度随时间(1h、2h、4h和24h)变化的图。数据表示为平均值±SEM。
图57是显示每日(QD)经口服(PO)(10mg/kg)或经盲肠内(IC)(10mg/kg或3mg/kg)施用CsA的治疗的急性DSS结肠炎小鼠的结肠组织中的环孢菌素A(CsA)(ng/g)浓度随时间(1h、2h、4h和24h)变化的图。数据表示为平均值±SEM。
图58是显示每日(QD)经口服(PO)(10mg/kg)或经盲肠内(IC)(10mg/kg或3mg/kg)施用CsA治疗的急性DSS结肠炎小鼠的结肠组织环孢菌素A(CsA)(ng/g)浓度峰值的图。数据表示为平均值±SEM。
图59是展示每日(QD)经口服(po)(10mg/kg)或经盲肠内(IC)(10mg/kg或3mg/kg)施用CsA治疗的急性DSS结肠炎小鼠的结肠中的环孢菌素(CsA)(ng/g)组织浓度波谷值的图。数据表示为平均值±SEM。
图60是显示每日(QD)经口服(PO)(10mg/kg)或经盲肠内(IC)(10mg/kg或3mg/kg)施用CsA的治疗的急性DSS结肠炎小鼠的结肠组织中的白细胞介素-2(Il-2)浓度(μg/ml)的图，其中PO与IC进行比较。数据表示为平均值±SEM。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图61是展示每日(QD)经口服(PO)(10mg/kg)或经盲肠内(IC)(10mg/kg或3mg/kg)施用CsA的治疗的急性DSS结肠炎小鼠的结肠组织中的白细胞介素-6(Il-6)浓度(μg/ml)的图。数据表示为平均值±SEM。
图62显示了使用可摄入装置收集、通信和/或分析关于受试者的数据的系统的非限制性示例。
图63A-63F是显示用酶联免疫吸附测定法测量(A)结肠匀浆、(B)mLN匀浆、(C)小肠匀浆、(D)盲肠内容物、(E)结肠内容物和(F)血浆中大鼠IgG2A浓度的图。用血浆基质制备标准品。分析前将样品稀释1:50。从盲肠内容物分析图中删除样本20(异常值)。*p<0.05；**p<0.01；****p<0.001采用不配对t检验确定。
图64显示了锥形硅波纹管。
图65显示了模拟装置夹具中的锥形硅波纹管。
图66显示了光滑的PVC波纹管。
图67显示了模拟装置夹具中的光滑PVC波纹管。
图68示出了在实验中进行竞争分析的原理。
图69展示了AlphaLISA数据。
图70展示了AlphaLISA数据。
图71展示了AlphaLISA数据。
图72是根据本发明的一些实施方式的临床方案的示例性步骤的流程图。
图73是显示在12小时中DSS诱导的结肠炎小鼠的盲肠组织中的FAM-SMAD7-AS寡核苷酸水平的图。在实施方式9中描述的实验中，条形从左到右表示第2组到第5组。
图74是显示在12小时中DSS诱导的结肠炎小鼠的结肠组织中的FAM-SMAD7-AS寡核苷酸水平的图。在实施方式9中描述的实验中，条形从左到右表示第2组到第5组。
图75是显示在12小时中DSS诱导的结肠炎小鼠的盲肠内容物中的FAM-SMAD7-AS寡核苷酸的水平的图。在实施方式9中描述的实验中，条形从左到右表示第2组到第5组。
图76是显示如实施方式10中所述的经盲肠内或经口施用猪他克莫司12小时后盲肠组织和近端结肠组织中他克莫司的平均浓度的图。
图77是显示如实施例13中所述，在向猪盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司1小时、2小时、3小时、4小时、6小时和12小时之后血液中他克莫司的平均浓度的图。
图78是显示如实施例13中所述，在猪中盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司之后血液中他克莫司的AUC0-12小时的图。
图79是显示如实施例13中所述，在猪中经盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司之后盲肠组织、近端结肠组织、螺旋结肠组织、横结肠组织和远端结肠组织中他克莫司的平均浓度的图。****P<0.0001，***P<0.001。
图80是显示如实施例13中所述，在猪中经盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司之后猪中盲肠腔、近端腔、螺旋结肠腔、横结肠腔和远端结肠腔中他克莫司的平均浓度的图。****P<0.0001，***P<0.001。
图81是显示如实施例13中所述，在向猪盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司1小时、3小时、6小时和12小时之后直肠内容物中他克莫司的平均浓度的条形图。
图82是显示如实施例13中所述，在向猪盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司1小时、3小时、6小时和12小时之后直肠内容物中他克莫司的平均浓度的线图。
图83是显示如实施例9中所述，在未治疗的猪中或在盲肠内(IC)或经口施用(PO)SMAD7-AS-FAM之后的猪中在盲肠组织中的SMAD7反义分子(SMAD7-AS-FAM)的平均浓度的图。
图84是显示如实施例9中所述，在未治疗的猪中或在盲肠内(IC)或经口施用(PO)SMAD7-AS-FAM之后的猪中在结肠组织中的SMAD7-AS-FAM的平均浓度的图。
图85是显示如实施例9中所述，在未治疗的猪中或在盲肠内(IC)或经口施用(PO)SMAD7-AS-FAM之后的猪中在结肠内容物中的SMAD7-AS-FAM的平均浓度的图。
图86是显示如实施例9中所述，在未治疗的猪中或在盲肠内(IC)或经口施用(PO)SMAD7-AS-FAM之后的猪中在盲肠内容物中的SMAD7-AS-FAM的平均浓度的图。
图87是显示如实施例10中所述，在盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司1小时、2小时、3小时、4小时、6小时和12小时之后猪的血液中他克莫司的平均浓度的图。
图88是显示如实施例10中所述，在盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司之后在猪的血液中他克莫司的AUC0-12小时的图。
图89是显示如实施例10中所述，在盲肠内(IC)或经口施用(PO)之后，猪中他克莫司的Tmax、Cmax、谷浓度(trough)(在施用后12小时时)和AUC0-12小时的代表性表。
图90是显示如实施例10中所述，在经盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司之后猪的盲肠、近端结肠、螺旋结肠、横结肠和远端结肠中他克莫司的平均浓度的图。
图91是显示如实施例10中所述，在经盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司之后猪的盲肠腔、近端结肠腔、螺旋结肠腔、横结肠腔和远端结肠腔中他克莫司的平均浓度的图。
图92是显示如实施例10中所述，在盲肠内(IC)或经口施用(PO)他克莫司1小时、3小时、6小时和12小时时猪的直肠内容物中他克莫司的平均浓度的图。
图93是显示如实施例11中所述的结肠炎的定量组织学分级的代表性表。
图94是分别显示在施用安慰剂或阿达木单抗之前，在安慰剂或阿达木单抗施用部位处，动物1502(用安慰剂治疗的健康对照猪)、动物2501(用1.86mg/kg阿达木单抗治疗的患有8.5％DSS诱导的结肠炎的猪)、动物2503(用1.86mg/kg阿达木单抗治疗的患有8.5％DSS诱导的结肠炎的猪)、和动物2504(用1.86mg/kg阿达木单抗治疗的患有8.5％DSS诱导的结肠炎的猪)的两个载片的组织病理学评分的图。缺少特定参数的条形表明该参数的值为0。
图95是动物1501(健康对照猪)的横结肠的代表性苏木精和伊红染色的图像。M，粘膜；SM，粘膜下层；TM，肌层。存在大量肠隐窝(星号)并且表面上皮(顶部两个箭头)是完整的。单核炎性细胞在粘膜的固有层(浅色箭头)中突出，并且短距离延伸到粘膜下层(底部两个箭头)中。此量的炎性细胞浸润是预期的背景变化，并且被认为与实验方案无关。
图96是在施用阿达木单抗之前动物2504(施用1.86mg/kg阿达木单抗的8.5％DSS诱导的结肠炎猪)的横向结肠的代表性苏木精和伊红染色的图像。M，粘膜；SM，粘膜下层；TM，肌层。粘膜中存在肠隐窝的大量损失(浅色星号)。散布的隐窝仍保留(深色星号)并且通常膨胀且充满炎性细胞碎片和粘液。腔上皮在某些区域(左上箭头)中存在，而在其它区域中(糜烂；中上方和右上方箭头)则不存在。粘膜中的炎性细胞(浅色箭头)大量存在并且延伸到粘膜下层(左下方和中下方箭头)。
图97是对人IgG染色的动物1501(健康对照猪)的横结肠的代表性免疫组织化学显微照片。M，粘膜；SM，粘膜下层；TM，肌层。指示浆膜表面(箭头)和疏松结缔性肠系膜组织(星号)。此组织中的3,3-二氨基联苯胺(DAB)染色微弱被认为是背景效应并且不指示人IgG。
图98是对人IgG染色的动物2504(用1.86mg/kg阿达木单抗剂量治疗的8.5％DSS诱导的结肠炎猪)的横结肠的代表性免疫组织化学显微照片。M，粘膜；SM，粘膜下层；TM，肌层。DAB染色证明在腔上皮表面(两个右上箭头)和在炎症和糜烂区域的腔表面(左上两个箭头)存在人IgG。强烈染色也在疏松结缔性肠系膜组织(星号)中存在，并且短距离延伸到肌层的外边缘(左下方两个箭头)中。这种类型的染色被认为强烈(4级)或非常强烈(5级)。
图99是对人IgG染色的动物2504(用1.86mg/kg阿达木单抗治疗的8.5％DSS诱导的结肠炎猪)的大肠的代表性免疫组织化学显微照片。M，粘膜；SM，粘膜下层；TM，肌层。在此切片中存在DSS诱导的结肠炎的病变。腔上皮不存在(侵蚀)并且可见隐窝(腺体)的弥散性丧失(顶部两个星号)。非常强烈的(5级)DAB(棕色)染色证明人IgG在松散肠系膜结缔组织(底部两个星号)中存在并且短距离延伸到肌膜外缘中(底部两个箭头)。在糜烂的腔表面(顶部两个向下箭头)处和炎性渗出液内可见对人IgG的强烈(4级)染色。对人IgG的弱染色(2级)延伸到腔表面附近的固有层(顶部两个向上箭头)。
图100是显示在安慰剂或阿达木单抗施用部位处，来自动物1502(安慰剂治疗的健康对照猪)、动物2501(用1.86mg/kg阿达木单抗治疗的患有8.5％DSS诱导的结肠炎的猪)、动物2503(用1.86mg/kg阿达木单抗治疗的患有8.5％DSS诱导的结肠炎的猪)和动物2504(用1.86mg/kg阿达木单抗治疗的患有8.5％DSS诱导的结肠炎的猪)中的每一者的两个载片中指定位置(腔/浅层粘膜、固有层和肌层-外层/浆膜)处人IgG(阿达木单抗)的存在(得分水平)的图。缺少特定位置的条形表明该位置的值为0。得分：0＝不存在；1＝极少；2＝弱；3＝中等；4＝强；并且5＝非常强的免疫标记。
图101是显示当与载体对照(载体)进行比较时，以及当将IP与IC进行比较时，每日(QD)或每三天(Q3D)经腹腔内(25mg/kg)或经盲肠内(25mg/kg或5mg/kg)施用DATK32抗体(抗α4β7整联蛋白抗体)的治疗组的派尔集合淋巴结(PP)中的Th记忆细胞的平均值(平均值±SEM)的图。用FACS分析法测量平均Th记忆细胞。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图102是显示当与载体对照(载体)进行比较时，以及当将IP与IC进行比较时，每日(QD)或每三天(Q3D)经腹腔内(25mg/kg)或经盲肠内(25mg/kg或5mg/kg)施用DATK32抗体(抗α4β7整联蛋白抗体)的治疗组的肠系膜淋巴结(mLN)中的Th记忆细胞的平均值(平均值±SEM)的图。用FACS分析法测量平均Th记忆细胞。分别采用曼-惠特尼U检验和学生t检验对非高斯和高斯数据进行统计分析。p<0.05的值被认为是显著的(Graph Pad Software公司)。
图103是显示在实施例16中所述的研究的第28天和第42天，原始
Figure BDA0002449116230000251
小鼠(第1组)、经腹膜内(IP)和经盲肠内(IC)两者仅施用载体的小鼠(第2组)、经IP施用抗TNFα抗体和经IC施用载体的小鼠(第7组)、和经IC施用抗TNFα抗体和经IP施用载体的小鼠(第8组)的疾病活动性指数(DAI)的图。
图104是一组显示在实施例16中所述的研究的第42天，在经IP和经IC两者仅施用载体的小鼠(第2组)、经IP施用IgG对照抗体和经IC施用载体的小鼠(第3组)、经IC施用IgG对照抗体和经IP施用载体的小鼠(第4组)、经IP施用抗TNFα抗体和经IC施用载体的小鼠(第7组)、和经IC施用抗TNFα抗体和经IP施用载体的小鼠(第8组)中TNFα、IL-17A、IL-4、和IL-22的结肠组织浓度的图。
图105是显示在实施例16中所述的研究的第28天和第42天，原始小鼠(第1组)、经IP和经IC两者仅施用载体的小鼠(第2组)、经IP施用抗IL12 p40抗体和经IC施用载体的小鼠(第5组)、和经IC施用抗IL12 p40抗体和经IP施用载体的小鼠(第6组)的疾病活动性指数(DAI)的图。
图106是一组在实施例16中所述的研究的第42天，在原始小鼠(第1组)、经IP和经IC两者仅施用载体的小鼠(第2组)、经IP施用抗IL12 p40抗体和经IC施用载体的小鼠(第5组)、和经IC施用抗IL12 p40抗体和经IP施用载体的小鼠(第8组)中IFNγ、IL-6、IL-17A、TNFα、IL-22、和IL-1b的结肠组织浓度的图。
具体实施方式
本公开涉及用如本文公开的治疗剂治疗胃肠道疾病的各种方法和制剂。例如，在一个实施方式中，治疗受试者中胃肠道疾病的方法包括向受试者施用包含如本文公开的治疗剂的药物制剂，其中药物制剂在受试者胃肠道中接近一个或多个疾病位点释放。例如，在一个实施方式中，药物制剂包含治疗有效量的如本文公开的治疗剂。
在一些实施方式中，制剂包含在可摄入装置中，并且装置在接近疾病位点的位置释放制剂。疾病位点的位置可以预先确定。例如，可摄取装置(其在胃肠道内的位置可以如本文所公开的那样精确地确定)可用于在受试者的胃肠道中对一个或多个位置进行取样并检测一个或多个分析物，包括疾病的标记物。随后可经由可摄入装置施用药物制剂并在接近预定疾病位点之位置释放。如本文进一步所述，可自主触发释放制剂。
以下公开说明了权利要求中所包含的制剂和方法的各个方面。
制剂，包括药物制剂
如本文所用，免疫调节剂的“制剂”可指纯净形式的免疫调节剂，诸如像冻干的免疫调节剂，或免疫调节剂与一种或多种生理上可接受的载体、赋形剂或稳定剂的混合物。因此，可通过将具有所需纯度的免疫调节剂与可选的生理上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编(1980))以冻干制剂或水溶液的形式混合来制备治疗制剂或药物。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对受体无毒，并包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯化铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚，丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的抗体；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、双糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反离子，诸如钠；金属配合物(例如锌蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。本文中的示例性的医药上可接受的载体还包括诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)等药物分散剂，例如，人类可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(
Figure BDA0002449116230000271
Baxter International公司)。美国专利公布号2005/0260186和2006/0104968中描述了某些示例性sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20。在一个方面，sHASEGP与一个或多个额外的糖胺聚糖酶(如软骨素酶)结合。示例性的冻干制剂于美国专利号6,267,958中描述。水性制剂包括美国专利号6,171,586和WO2006/044908中所述的制剂，后者制剂包括组氨酸醋酸盐缓冲液。
如本文所公开的免疫调节剂的制剂，例如缓释制剂，可进一步包括粘胶剂，例如聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羧基甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、卡波姆、聚丙烯酸酯、壳聚糖、丙烯酸酯类似物、聚合物和硫聚物中的一种或多种。可包括在具有如本文公开的治疗剂的制剂中的粘胶剂的其它实例描述于例如Peppas等人,Biomaterials 17(16):1553-1561,1996；Kharenko等人,Pharmaceutical Chemistry J.43(4):200-208,2009；Salamat-Miller等人,Adv.Drug Deliv.Reviews57(11):1666-1691,2005；Bernkop-Schnurch,Adv.Drug Deliv.Rev.57(11):1569-1582,2005；和Harding等人,Biotechnol.Genet.Eng.News 16(1):41-86,1999中。
在一些实施方式中，制剂的组分可包括以下任一组分或其任何组合：金合欢树、藻酸盐、海藻酸、醋酸铝、防腐剂、苯甲醇、对羟基苯甲酸丁酯、丁基化羟基甲苯、抗氧化剂、柠檬酸、碳酸钙、小烛树蜡、粘合剂、交联羧甲基纤维素钠、糖果剂糖、胶质二氧化硅、纤维素、棕榈蜡、玉米淀粉、羧甲基纤维素钙、硬脂酸钙、EDTA二钠钙、螯合剂、共聚维酮、氢化蓖麻油、磷酸氢钙脱水物、十六烷基吡啶氯化物、半胱氨酸HCl、交联聚维酮、二盐基磷酸钙、磷酸氢二钠、二甲基硅氧烷、赤藓红钠钠、乙基纤维素、明胶、单油酸甘油酯、甘油、甘氨酸、单硬脂酸甘油酯、二十二酸甘油酯、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙甲纤维素、HPMC邻苯二甲酸酯、氧化铁或三氧化二铁、氧化铁黄、氧化铁红或三氧化二铁、乳糖(水合或无水或一水合物或干燥的喷雾)、硬脂酸镁、微晶纤维素、甘露醇、甲基纤维素、碳酸镁、矿物油、甲基丙烯酸共聚物、氧化镁、对羟基苯甲酸甲酯、聚乙二醇、聚山梨酯80、丙二醇、聚氧化乙烯、对羟基苯甲酸丙酯、泊洛沙姆407或188或原形、碳酸氢钾、山梨酸钾、马铃薯淀粉、磷酸、聚氧基140硬脂酸盐、糖化淀粉钠、预糊化淀粉、交叉醇钠、十二烷基硫酸钠、淀粉、二氧化硅、苯甲酸钠、硬脂酸、药用糖果的蔗糖基、造粒剂、山梨酸、碳酸钠、糖精钠、海藻酸钠、硅胶、单油酸山梨糖酯、富马酸硬脂酰钠、氯化钠、焦亚硫酸钠、柠檬酸钠脱水、淀粉钠、羧甲基纤维素钠、琥珀酸、丙酸钠、二氧化钛、滑石、三乙酸甘油酯、柠檬酸三乙酯。
因此，在如本文所公开的治疗疾病的方法的一些实施方式中，该方法包括向受试者施用作为如本文所公开的制剂的药物组合物。在一些实施方式中，制剂的剂型可以是固体形式，例如胶囊、片剂、小袋或锭剂；或者可以是液体形式，例如溶液、悬浮液、乳液或糖浆。
在一些实施方式中，制剂不包含在可摄入装置中。在一些实施方式中，其中制剂不包含在可摄入装置中，制剂可适于经口施用。制剂可以是例如本文所公开的固体剂型或液体剂型。在一些实施方式中，其中制剂不包含在可摄入装置中，制剂可适于直肠施用。举例而言，该制剂可为诸如栓剂或灌肠剂等剂型。在制剂不包含在可摄入装置中的实施方式中，制剂在受试者的胃肠道中接近胃肠道中预期释放部位的位置处释放免疫调节剂。例如可通过包含肠溶衣的制剂来实现这种局部释放。另一实例中，该局部释放可用核的制剂来完成，所述核包含一个或多个适于受控的活性物质释放的聚合物。此类聚合物的非限制性列表包括：聚(2-(二乙氨基)甲基丙烯酸乙酯、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯、聚(乙二醇)、聚(2-氨基甲基丙烯酸乙酯)、(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺、聚(β-苄基-l-天冬氨酸)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)和纤维素衍生物。
在一些实施方式中，制剂包含在如本文所公开的可摄入装置中。在一些实施方式中，其中制剂包含在可摄入装置中，制剂可适于经口施用。制剂可以是例如本文所公开的固体剂型或液体剂型。在一些实施方式中，制剂适于引入并且任选地用于存储在所述装置中。在一些实施方式中，制剂适于引入并且任选地用于储存在包含在装置中的贮存器中。在一些实施方式中，制剂适于引入并且任选地用于储存在包含在装置中的贮存器中。因此，在一些实施方式中，本文提供的是包含治疗有效量的免疫调节剂的贮存器，其中所述贮存器被配置成纳入可摄入装置。在一些实施方式中，包含治疗有效量的免疫调节剂的贮存器可连接到可摄入装置上。在一些实施方式中，包含治疗有效量的免疫调节剂的贮存器能够将自身锚定到受试者的组织上。例如，能够将自身锚定到受试者组织上的贮存器包含硅酮。例如，能够将自身锚定到受试者组织上的贮存器包括聚氯乙烯。
在一些实施方式中，制剂适合于引入本文所公开的喷雾导管中。
本文中的制剂/药剂还可以含有超过一种活性化合物，如对于被治疗的特定适应症，例如具有互补活性且彼此不产生不利影响的那些所必需的。例如，该制剂可进一步包含另一种免疫调节剂或化学治疗剂。这些分子以对预期目的有效的量适当地组合存在。
活性成分也可以被包封在例如通过凝聚技术或界面聚合例如羟甲基纤维素或明胶微囊和聚(甲基甲酰化)微囊制备的微囊中，其分别在于胶体药物递送系统中(例如脂质体、白蛋白微囊、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或宏观乳状液中。这类技术已在Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980)中公开。
用于体内施用的制剂必须是无菌的。这很容易通过无菌滤膜过滤完成。
可制备缓释制剂。缓释制剂的适当实例包括含有免疫调节剂的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质呈成型物形式，例如膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利号3,773,919)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙烯基乙酸酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物(诸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球))和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然诸如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸等聚合物能够释放分子超过100天，但某些水凝胶释放蛋白质的时间较短。当封装的免疫调节剂在体内停留长时间后，它们可能由于暴露于37℃的湿度而变性或聚集，从而导致生物活性的丧失和免疫原性的可能变化。根据所涉及的机构，可以设计合理的稳定策略。例如，如果发现聚集机构是通过硫二硫化物交换形成分子间S-S键，则可以通过修改巯基残基、从酸性溶液中冻干、控制水分含量、使用适当的添加剂和开发特定的聚合物基质组合物来实现稳定。
药物制剂可含有一种或多种免疫调节剂。药物制剂可以本领域已知的任何方式调配。在一些实施方式中，制剂包括以下一种或多种组分：无菌稀释剂(例如无菌水或盐水)、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂，抗菌剂或抗真菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等，抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠，螯合剂，例如乙二胺四乙酸，缓冲剂，例如乙酸酯、柠檬酸盐或磷酸盐，和等渗剂，例如糖(例如葡萄糖)、多元醇(例如甘露醇或山梨醇)或盐(例如氯化钠)，或其任何组合。脂质体悬浮液也可用作医药上可接受的载体(例如参见美国专利号4522811，通过引用将其全部并入本文中)。该制剂可以配制并封装在安瓿、一次性注射器或多剂量药瓶中。如有需要，可通过使用涂层(例如卵磷脂或表面活性剂)来保持适当的流动性。免疫调节剂的受控释放可通过植入物和微胶囊递送系统实现，所述微胶囊递送系统可包括可生物降解的、生物可相容的聚合物(例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸；Alza公司和NovaPharmaceutical公司)。
在一些实施方式中，免疫调节剂存在于装置内的药物制剂中。
在一些实施方式中，免疫调节剂存在于装置内的溶液中。
在一些实施方式中，免疫调节剂存在于装置内的液体介质的悬浮液中。
在一些实施方式中，如本文公开的治疗剂以如本文公开的治疗剂的纯的粉末(例如冻干)形式存在。
定义
“可摄入”意味着装置可以被整个吞咽。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”在最广泛的意义上是可互换使用的，并且包括单克隆抗体(例如全长或完整的单克隆抗体)、多克隆抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如双特异性、三特异性等抗体，只要它们表现出所需的生物学活性即可)，并且也可包括某些抗体片段(如本文更详细地描述的)。抗体可以是人的、人源化的和/或亲和力成熟的。
“抗体片段”仅包含完整抗体的一部分，其中在某些实施方式中，当存在于完整抗体中时，该部分保留通常与该部分相关的至少一种(通常大部分或全部)功能。在一个实施方式中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，因此保留结合抗原的能力。在另一个实施方式中，抗体片段(例如包含Fc区域的一个片段)在完整抗体中保留通常与Fc区域相关的至少一种生物功能，例如FcRN结合、抗体半衰期调节、ADCC功能和补体结合。在一个实施方式中，抗体片段是具有实质上类似于完整抗体的体内半衰期的单价抗体。例如，这样的抗体片段可包含连接到能够赋予所述片段在体内稳定性的Fc序列的抗原结合臂。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从大体上同源的抗体群中获得的抗体，即包含该群的相应抗体是相同的，但可能存在少量的自然发生的突变除外。单克隆抗体具有高度的特异性，直接针对单个抗原。此外，与通常包括针对不同决定因素(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定因素。
本文的单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种的或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而一个或多个链的剩余部分与源自另一物种的或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们表现出所需的生物活性(美国专利号4,816,567；Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。
“治疗方案”是指在存在或不存在另外第二种药物下剂量、施用频率或治疗持续时间的组合。
“有效治疗方案”是指将对接受治疗的患者提供有益反应的治疗方案。
“有效量”是指对接受治疗的患者提供有益反应的药物量。例如，有效剂量可以是人体等效剂量(HED)。
“可配发的”就任何物质而言是指可从如本文所公开的可摄入装置或装置的组件(诸如贮存器)释放的任何物质。例如，可配发物质可以是如本文公开的治疗剂、和/或包含如本文公开的治疗剂的制剂。
“患者反应”或“患者反应度”可使用指示对患者有益的任何终点来评估，该终点包括但不限于：(1)某种程度上抑制疾病进展，包括减慢和完全停止；(2)减少疾病发作次数和/或症状；(3)缩小病变规模；(4)抑制(即减少、减缓或完全停止)疾病细胞向邻近周围器官和/或组织的浸润；(5)抑制(即减少、减缓或完全停止)疾病传播；(6)降低自身免疫反应，这可能(但不必)导致疾病病变的消退或清除；(7)在某种程度上缓解与病症相关的一个或多个症状；(8)治疗后无病表现时间延长；和/或(9)治疗后特定时间点死亡率降低。术语“反应度”是指可测量的反应，包括完全反应(CR)和部分反应(PR)。
如本文所用，“完全反应”或“CR”意指对治疗反应，所有炎症或缓解征象消失。这并不一定意味着疾病已经治愈。
“部分反应”或“PR”意指对治疗反应，炎症严重性至少降低50％。
患者对使用治疗剂和类似用语进行的治疗的“有益反应”是指向在处于来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的风险下或罹患所述炎性疾病或病状的患者赋予临床或治疗益处。这类益处包括细胞或生物反应、完全反应、部分反应、稳定疾病(无进展或复发)，或患者随后源自用药剂的治疗而复发或因用药剂治疗而复发的反应。
如本文所用，“无反应”或“缺乏反应”或类似用语意指对使用治疗剂的治疗没有完全反应、部分反应或有益反应。
“患者保持对治疗的反应度”是指在治疗过程中，患者的反应度不会随着时间的推移而降低。
疾病或病症的“症状”(例如在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状)是受试者经历并表明疾病的任何病态现象或在结构、功能或感觉上偏离正常。
“粘膜相关淋巴组织”或“MALT”是指在人体的各种粘膜下层膜部位(诸如胃肠道、口腔通道、鼻咽道、甲状腺、乳房、肺、唾液腺、眼睛和皮肤)中发现的小浓度的淋巴组织的弥散系统。
“肠道相关淋巴组织”或“GALT”是指更广泛的MALT的一部分，并且包括例如派尔集合淋巴结、肠系膜淋巴结和分离的淋巴滤泡/肠淋巴聚集体。
“派尔集合淋巴结(peyer’s patches)”是指组织成滤泡的聚集淋巴模块并且是GALT的重要部分。派尔集合淋巴结主要存在于远端空肠和回肠中。
“肠系膜淋巴结”是指主动脉旁淋巴结系统的一部分，它是一组位于肠系膜层之间并且引流肠组织且将淋巴递送到胸导管的淋巴结。肠系膜淋巴结包括“上肠系膜淋巴结”，其接收来自空肠、回肠、盲肠以及升结肠和横结肠的部分的传入。肠系膜淋巴结还包括“下肠系膜淋巴结”，其是在整个后肠中存在的淋巴结。后肠例如包括横结肠的远端三分之一和脾曲、降结肠、乙状结肠和直肠。淋巴结排入上肠系膜淋巴结并且最终排到主动脉前淋巴结。
“主动脉旁淋巴结”是指一组位于主动脉附近的腰椎前的肠系膜淋巴结。主动脉旁淋巴结接受来自胃肠道和腹部器官的引流。主动脉旁淋巴结包括例如主动脉后淋巴结、主动脉外侧淋巴结、主动脉前淋巴结(例如，腹腔、胃、肝和脾脏淋巴结)、上肠系膜淋巴结(例如，肠系膜、回肠结肠和结肠系膜淋巴结)和下肠系膜淋巴结(例如，直肠旁淋巴结)。
如本文所用，“准确度”当与受试者的胃肠道内装置的指定位置结合公开时是指装置确定的位置与正确位置相符的程度，其中正确位置基于公认的标准。通过装置确定的在受试者胃肠道内的位置可以基于可摄入装置收集的数据，例如光反射率数据。在一些实施方式中，正确的位置可以基于例如由合格的临床医生或医师解释的外部成像装置，诸如计算机辅助断层摄影(CT)。因此，准确度百分比(“准确度％”)可以指如由装置确定的装置在胃肠道中的位置与例如如由CT确定的正确位置之间的百分比一致性，例如表示为[(由装置确定的位置与如由CT确定的位置相一致的装置数量/向一个或多个受试者施用的装置总数)x100％]，或在每个受试者仅施用一个设备的情况下，[(由装置确定的位置与如由CT确定的位置相一致的受试者总数/受试者总数)x 100％]。在实施例14中使用后一种用于确定准确度％的公式。在一些实施方式中，装置确定位置的准确度是指装置确定其处于为药物释放而预先选择的位置的准确度。
如本文所用，“自动装置”是指包含一个或多个处理器的装置，所述处理器被配置成当处于受试者的胃肠道中时独立地控制该装置的某些机构或操作。优选地，本发明的自动装置不具有控制装置机构或操作的外部电气或无线连接，尽管可以存在诸如无线连接的连接以实现可选的装置功能，诸如将由装置收集的数据传输到外部(例如体外)系统或接收器。自动装置的独立控制的机构或操作包括例如触发药物(或包含药物的制剂)的释放、触发一种或多种样品的收集、和/或触发一种或多种样品的分析；和/或确定装置在受试者的胃肠道内的位置。这种机构在本文中分别被称为“自动机构”，例如，“自动触发机构”或“自动定位机构”。主动实现这种自动触发或定位机构分别被称为“自动触发”或“自动定位”。“自动定位机构”与“自定位机构”同义。
如本文所用，“壳体”是可摄入装置的一部分，其限定了装置的内部与装置外部的环境之间的边界。
如本文所用，“自定位装置”是指包含可以自动实现以确定体内例如在受试者的胃肠道内的可摄入装置的位置的机构或系统的装置。这种机构被称为“自定位机构”。“自定位机构”与“自动定位机构”同义。自定位装置不需要离体可视化装置或系统，例如使用闪烁显像仪或计算机辅助断层扫描(CT)定位在胃肠道中。
如本文所用，“定位装置”是指确定装置的位置。
如本文所用，“传感器”是指被配置成收集关于可摄入装置的周围环境的信息的机构或机构的一部分。“传感器”的实例包括环境传感器和光传感器。环境传感器的实例包括pH传感器和能够识别肌肉收缩和/或蠕动的传感器。
如本文所用，“转移后的时间”是指装置从胃肠道的一个部分、片段或分段进入胃肠道的相邻部分、片段或分段之后经过的时间。
如本文所用，与药物从装置释放到一个或多个疾病部位结合公开的“接近”是指位置在空间上足够接近一个或多个疾病部位，使得在该位置释放药物，治疗疾病。例如，当药物接近一个或多个疾病部位释放时，药物可以距一个或多个疾病部位150cm或更小、诸如125cm或更小、诸如100cm或更小、诸如50cm或更小、诸如40cm或更小、诸如30cm或更小、诸如20cm或更小、诸如10cm或更小、诸如5cm或更小、诸如2cm或更小处释放。药物释放的接近位置可以在与一个或多个疾病部位相同的胃肠道片段或分段中。在替代方案中，药物释放的接近位置可以位于与一个或多个疾病部位不同的胃肠道片段或分段中；例如，药物释放可以接近一个或多个疾病部位。在非限制性实例中，药物可以在盲肠中释放以治疗升结肠中的疾病组织部位(即，盲肠远端)。在另一个非限制性实例中，药物可以在盲肠中释放以治疗升结肠、横结肠、降结肠或直肠中的一个或多个中的疾病组织部位。因此，在本申请涉及在疾病部位附近释放药物的情况下，这在一些实施方案中可以指在胃肠道的已经确定含有疾病部位的片段或分段中释放。该片段可以选自食道、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和直肠。该分段可以选自十二指肠近端、空肠近端、回肠近端、盲肠近端、升结肠近端、横结肠近端、降结肠近端、十二指肠远端、空肠远端、回肠远端、盲肠远端、升结肠远端、横结肠远端、降结肠远端。
如本文所用，“总诱导剂量”是在给定时间段内的诱导剂量的总和。
如本文所用，“近端”当与解剖结构结合使用时是指在解剖结构的相邻部分、片段或分段之前或上游的部分、片段或分段。在一些实施方式中，近端是指紧接在解剖结构的紧邻部分、片段或分段之前或紧邻其上游的部分、片段或分段。
如本文所用，“远端”当与解剖结构结合使用时是指在解剖结构的相邻部分、片段或分段之后或下游的部分、片段或分段。在一些实施方式中，远端是指紧接在解剖结构的紧邻部分、片段或分段之后或紧邻其下游的部分、片段或分段。
如本文所用，提及药物的国际非专有名称(INN)应解释为包括该药物的通用、生物等效和生物类似版本，包括但不限于通过参考该药物的较早监管批准而接受了简短的监管批准的任何药物。
产生于来源于内胚层的组织的炎性病状或疾病
本发明所要求保护的装置可以例如与在全身施用相同剂量的免疫调节剂时相比，当将免疫调节剂局部递送至胃远端的胃肠道的一个或多个部分时，在外周(例如血液)中提供更高浓度的α4β7表达细胞。本发明所要求保护的装置可以例如导致输送的细胞被迫离开局部胃肠道组织(包括粘膜)和淋巴系统，并且返回到受试者的全身循环中。
因此，本文还提供治疗在来源于内胚层的组织中出现的疾病或病状的方法。内胚层形成胃肠道、呼吸道、内分泌腺和器官、听觉系统和泌尿系统。因此，本发明包括用于治疗在来源于内胚层的以下组织(例如胃、结肠、肝脏、胰腺、膀胱、气管的上皮部分、肺、咽、甲状腺、甲状旁腺、肠和胆囊)中发现的疾病和病状的组合物和装置。本文还提供治疗在来源于内胚层的组织中出现的疾病或病状(例如，本文所述的在来源于内胚层的组织中出现的任何示例性疾病或病状)的方法，该方法包括使用本文所述的任何装置或组合物在小肠或大肠中鞘内释放一种或多种免疫调节剂。
在来源于内胚层的组织中出现的疾病或病状的非限制性实例包括：胃炎、乳糜泻、肝炎、酒精性肝病、脂肪性肝病(肝脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝病(NASH)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胰腺炎、间质性膀胱炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、咽炎、甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状旁腺炎、肾炎、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫斯氏病、干燥综合征、1型糖尿病、盆腔炎性疾病、耳道炎、耳鸣、前庭神经炎、中耳炎、耳道炎、气管炎、胆汁淤积肝病、原发性胆汁性硬化症、肝实质、遗传性肝代谢紊乱、拜勒综合征、脑腱、黄瘤病、泽尔韦格氏综合征、新生儿肝炎、囊性纤维化、ALGS(阿拉吉欧综合征)、PFIC(进行性家族性肝内胆汁淤积症)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝纤维症、NAFLD、门静脉高压、一般性胆汁淤积(诸如因药物引起或怀孕期间的黄疸)、肝内和肝外胆汁淤积(诸如遗传形式的胆汁淤积，诸如PFIC1、胆结石和胆总管结石)、导致胆道系统阻塞的恶性肿瘤、由于胆汁淤积/黄疸引起的症状(抓挠、瘙痒)、导致进行性胆汁淤积的慢性自身免疫性肝病、和胆汁淤积性肝病、十二指肠溃疡、肠炎(放射性、化学疗法或感染诱导的肠炎)、憩室炎、结肠袋炎、胆囊炎和胆管炎的瘙痒。在来源于内胚层的组织中出现的疾病和病状的额外实例是本领域中已知的。
如本文所用，术语“免疫调节剂”意指降低免疫细胞(例如，T细胞，例如记忆T细胞)的活化、降低促炎细胞因子的分泌或表达、降低T淋巴细胞(例如记忆T淋巴细胞)的募集或迁移、和/或增加抗炎细胞因子的分泌或表达的治疗剂。免疫调节剂的非限制性实例是抗炎剂。抗炎剂的非限制性实例包括IL-12/IL-23抑制剂、TNFα抑制剂、IL-6受体抑制剂、免疫调节剂(例如CD40/CD40L抑制剂)、IL-1抑制剂、IL-13抑制剂、IL-10受体激动剂、趋化因子/趋化因子受体抑制剂、和整联蛋白抑制剂。整联蛋白抑制剂的非限制实例包括β7整联蛋白抑制剂，诸如α4β7整联蛋白抑制剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是PDE4抑制剂。
如本文所用，术语“免疫调节剂”意指降低免疫细胞的活化、降低促炎细胞因子的分泌或表达、降低T淋巴细胞(例如记忆T淋巴细胞)的募集或迁移、和/或增加抗炎细胞因子的分泌或表达的治疗剂。免疫调节剂的非限制性实例是抗炎剂。抗炎剂的非限制性实例包括IL-12/IL-23抑制剂、TNFα抑制剂、IL-6受体抑制剂、免疫调节剂(例如CD40/CD40L抑制剂)、IL-1抑制剂、IL-13抑制剂、IL-10受体激动剂、趋化因子/趋化因子受体抑制剂、和整联蛋白抑制剂。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述免疫调节剂是PDE4抑制剂。下文描述了可用于治疗肝脏疾病或病症的免疫调节剂的其它实例。
下文描述了免疫调节剂的非限制性示例性实例。免疫调节剂的额外实例是本领域中已知的。
IL-12/IL-23抑制剂
术语“IL-12/IL-23抑制剂”是指降低IL-12或IL-23表达和/或IL-12与IL-12受体结合的能力或IL-23与IL-23受体结合的能力的试剂。IL-12是异二聚体细胞因子，包括IL-12A(p35)和IL-12B(p40)多肽两者。IL-23是异二聚体细胞因子，包括IL-23(p19)和IL-12B(p40)多肽两者。IL-12的受体是异二聚体受体，包括IL-12R β1和IL-12R β2。IL-23受体的受体是异二聚体受体，包括IL-12R β1和IL-23R两者。
在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂可降低IL-12与IL-12受体的结合。在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂可降低IL-23与IL-23受体的结合。在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂降低IL-12或IL-23的表达。在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂降低IL-12受体的表达。在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂降低IL-23受体的表达。
在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂靶向IL-12B(p40)亚基。在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂靶向IL-12A(p35)。在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂靶向IL-23(p19)。在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂靶向IL-12受体(IL-12R β1或IL-12R β2中的一种或两种)。在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂靶向IL-23受体(IL-12R β1和IL-23R中的一种或两种)。
在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂可以是抑制性核酸。在一些实施方式中，抑制性核酸可以是反义核酸、核酶和小干扰RNA(siRNA)。这些不同的寡核苷酸方面的实例在下文中描述。可以减少哺乳动物细胞中的IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R mRNA的表达的抑制性核酸的任何实例可以在体外合成。
可以减少哺乳动物细胞中的IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R mRNA表达的表达的抑制性核酸包括反义核酸分子，即其核苷酸序列与IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12Rβ1、IL-12R β2、或IL-23R mRNA的全部或部分互补(例如，与SEQ ID NO：1-12的任何一个的全部或部分互补)的核酸分子。
人IL-12A(p35)mRNA(SEQ ID NO:1)
Figure BDA0002449116230000351
人IL-12B(p40)mRNA(SEQ ID NO:2)
Figure BDA0002449116230000352
Figure BDA0002449116230000361
Figure BDA0002449116230000371
人IL-23(p19)mRNA(SEQ ID NO:3)
Figure BDA0002449116230000372
人IL-12R β1 mRNA变体1(SEQ ID NO:4)
Figure BDA0002449116230000373
Figure BDA0002449116230000381
人IL-12R β1 mRNA变体2(SEQ ID NO:5)
Figure BDA0002449116230000382
Figure BDA0002449116230000391
人IL-12R β1 mRNA变体3(SEQ ID NO:6)
Figure BDA0002449116230000392
Figure BDA0002449116230000401
人IL-12R β1 mRNA变体4(SEQ ID NO:7)
Figure BDA0002449116230000411
Figure BDA0002449116230000421
人IL-12R β2 mRNA变体1(SEQ ID NO:8)
Figure BDA0002449116230000422
Figure BDA0002449116230000431
Figure BDA0002449116230000441
人IL-12R β2 mRNA变体2(SEQ ID NO:9)
Figure BDA0002449116230000442
Figure BDA0002449116230000451
人IL-12R β2 mRNA变体3(SEQ ID NO:10)
Figure BDA0002449116230000452
Figure BDA0002449116230000461
Figure BDA0002449116230000471
人IL-12R β2 mRNA变体4(SEQ ID NO:11)
Figure BDA0002449116230000472
Figure BDA0002449116230000481
Figure BDA0002449116230000491
人IL-23R mRNA(SEQ ID NO:12)
Figure BDA0002449116230000492
Figure BDA0002449116230000501
反义核酸分子可与编码IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12Rβ1、IL-12R β2、或IL-23R蛋白的核苷酸序列的编码链的全部或部分非编码区互补。非编码区(5’和3’未翻译区域)是基因中编码区侧翼的5’和3’序列，且不被翻译成氨基酸。
基于本文公开的序列，本领域技术人员可以容易地选择和合成许多适当的反义核酸中的任一种，以靶向本文所述的编码IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R蛋白的核酸。靶向编码IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R蛋白的核酸的反义核酸可以使用集成DNA技术网站(Integrated DNA Technologies website)上提供的软件进行设计。
例如，反义核酸的长度可以是约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个或更多的核苷酸。反义寡核苷酸可以使用本领域已知的程序通过化学合成和酶结合反应来构建。例如，反义核酸可使用天然核苷酸或经被设计用于提高分子的生物稳定性或提高反义核酸和感觉核酸之间形成的双链的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如可以使用的硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸)进行化学合成。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、怀丁苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。或者，可以使用表达载体生物产生反义核酸，其中核酸以反义方向亚克隆到表达载体中(即从插入的核酸转录的RNA将具有对所关注的目标核酸的反义方向)。
本文所述反义核酸分子可在体外制备并施予哺乳动物(例如人类)。可替代地，它们可以在原位产生，使它们与编码以下的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合：IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R蛋白，从而例如通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。杂交可以通过常规的核苷酸互补来形成稳定的双链，或者，例如反义核酸分子与DNA双链结合的情况下，通过双螺旋的大沟中的特定相互作用来形成。反义核酸分子可使用载体(例如慢病毒、逆转录病毒或腺病毒载体)递送至哺乳动物细胞。
反义核酸可以是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，链彼此平行(Gaultier等人,Nucleic Acids Res.15:6625-6641,1987)。反义核酸也可包含2’-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,Nucleic AcidsRes.15:6131-6148,1987)或嵌合体RNA-DNA类似物(Inoue等人,FEBS Lett.215:327-330,1987)。反义核酸的非限制性实例在Vaknin-Dembinsky等人,J.Immunol.176(12):7768-7774,2006中描述。
抑制性核酸的另一实例是对编码IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12Rβ1、IL-12R β2或IL-23R蛋白的核酸具有特异性的核酶(例如对IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R mRNA的特异性，例如对SEQ ID NO:1-12中任一个的特异性)。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化RNA分子，能够切割其上具有互补区的单链核酸如mRNA。因此，核酶(例如，锤头状核酶(描述在Haselhoff和Gerlach,Nature[自然]334:585-591,1988中)可以用于催化切割mRNA转录物，从而抑制由mRNA编码的蛋白质的翻译。可以基于本文公开的IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12Rβ1、IL-12R β2和IL-23R mRNA序列中的任一种的核苷酸序列设计对IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2或IL-23R mRNA具有特异性的核酶。例如，可以构建四膜细胞L-19IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与要在IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12Rβ1、IL-12R β2或IL-23R mRNA中分裂的核苷酸序列互补(参见例如美国专利号4,987,071和5,116,742)。可替代地，IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12Rβ1、IL-12R β2或IL-23R mRNA可用于从RNA分子库中选择具有特异核糖核酸酶活性的催化RNA。参见，例如Bartel等人,Science 261:1411-1418,1993。
抑制性核酸也可以是形成三重螺旋结构的核酸分子。例如，IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2或IL-23R蛋白的表达可通过靶向与编码以下的基因的调节区互补的核苷酸序列而被抑制：IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2或IL-23R蛋白(例如启动子和/或增强子，例如在转录起始状态上游至少1kb、2kb、3kb、4kb或5kb的序列)，从而形成阻止靶细胞中基因的转录的三螺旋结构。通常参见Helene,Anticancer Drug Des.6(6):569-84,1991；Helene,Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36,1992；和Maher,Bioassays 14(12):807-15,1992。
在各种实施方式中，抑制性核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架处进行修饰以改善例如分子的稳定性、杂交性或溶解性。例如，可以对核酸的脱氧核糖磷酸骨架进行修饰以生成肽核酸(参见例如Hyrup等人,Bioorganic Medicinal Chem.4(1):5-23,1996)。肽核酸(PNA)是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代，仅保留四种天然核苷。PNA的中性骨架允许在低离子强度的条件下对DNA和RNA进行特异性杂交。PNA寡聚物的合成可使用标准固相肽合成方案进行(参见例如Perry-O'Keefe等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:14670-675,1996)。PNA可作为反义或反基因因子，用于通过例如诱导转录或翻译扣留或抑制复制等方式对基因表达进行序列特异性调控。
PNA可通过将亲脂性或其它辅助基团连接到PNA、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过使用脂质体或本领域已知的药物递送的其它技术来修饰，例如以增强其稳定性或细胞摄取。例如，可以产生PNA-DNA嵌合体，其可以结合PNA和DNA的有利性质。这种嵌合体允许DNA识别酶(如RNA酶H和DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，而PNA部分将提供高结合亲和力和特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆叠、核碱基间的键数和取向选择适当长度的连接体连接。
PNA-DNA嵌合体的合成可如Finn等人,Nucleic Acids Res.24:3357-63,1996中所述的进行。例如，可以使用标准的磷酰胺偶联化学和修饰的核苷类似物在固体载体上合成DNA链。诸如5’-(4-甲氧基三苯甲基)氨基-5’-脱氧胸苷亚磷酰胺等化合物可用作PNA与DNA的5’端之间的连接(Mag等人,Nucleic Acids Res.17:5973-88,1989)。然后以逐步方式将PNA单体偶联以产生具有5’PNA片段和3’DNA片段的嵌合分子(Finn等人,Nucleic AcidsRes.24:3357-63,1996)。可替代地，嵌合分子可以用5’DNA片段和3’PNA片段合成(Peterser等人,Bioorganic Med.Chem.Lett.5:1119-11124,1975)。
在一些实施方式中，抑制性核酸可包括其它附加基团，诸如肽，或促进跨细胞膜转运的试剂(参见Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6553-6556,1989；Lemaitre等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84:648-652,1989；和WO88/09810)。此外，可使用杂交触发的裂解剂(参见例如Krol等人,Bio/Techniques6:958-976,1988)或插入剂(参见例如Zon,Pharm.Res.5:539-549,1988)对抑制性核酸进行修饰。为此，寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂、杂交触发裂解剂等缀合。
可以减少在哺乳动物细胞中IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2或IL-23R mRNA的表达的其它方式是通过RNA干扰(RNAi)。RNAi是其中mRNA在宿主细胞中降解的过程。为了抑制mRNA，与将被沉默的基因(例如编码IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12Rβ1、IL-12R β2或IL-23R蛋白的基因)的一部分相对应的双链RNA(dsRNA)被引入哺乳动物细胞。dsRNA被消化成21-23个核苷酸长的二联体，称为短干扰RNA(或siRNA)，与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导沉默复合物(或RISC)。RISC通过siRNA链中的一条与内源性mRNA之间的碱基配对相互作用来靶向同源转录物。然后从siRNA的3’端切下mRNA约12个核苷酸(参见Sharp等人,Genes Dev.15:485-490,2001，和Hammond等人,Nature Rev.Gen.2:110-119,2001)。
RNA介导的基因沉默可以以多种方式在哺乳动物细胞中诱导，例如通过加强RNA发夹的内源性表达(参见Paddison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:1443-1448,2002)，或如上所述通过小(21-23nt)dsRNA的转染(在Caplen,Trends Biotech.20:49-51,2002中进行了综述)。例如在美国专利号6506559和US2003/0056235(以引用方式并入本文中)中描述了用RNAi调节基因表达的方法。
标准的分子生物学技术可以用来产生siRNA。短干扰RNA可以通过化学合成、重组产生，例如通过从模板DNA(如质粒)表达RNA，或从商业供应商(如Dharmacon)获得。用于介导RNAi的RNA可包括合成或修饰的核苷酸，如硫代磷酸核苷酸。用siRNA或用设计成制备siRNA的质粒转染细胞的方法是本领域的常规方法。
用于降低IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12Rβ2或IL-23RmRNA表达的siRNA分子可以以多种方式变化。例如，它们可以包括3’羟基和21、22或23个连续核苷酸的链。它们可以是钝端或在3’端、5’端或两端包括悬端。例如，RNA分子的至少一条链可具有从约1到约6个核苷酸(例如1-5、1-3、2-4或3-5个核苷酸(无论是嘧啶或嘌呤核苷酸)的3’突出端的长度。如果两条链都包括突出端，则每条链的突出端长度可能相同或不同。
为了进一步增强RNA双链的稳定性，可以稳定3’突出端以防降解(通过例如包括嘌呤核苷酸，诸如腺苷或鸟苷核苷酸，或用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸腺嘧啶核苷取代尿苷2-核苷酸3’突出端是耐受的，且不影响RNAi的有效性)。任何siRNA都可用于降低IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2或IL-23RmRNA的方法中，只要它与感兴趣的靶标具有足够的同源性(例如在SEQ ID NO:1-12中的任一个中存在的序列，例如涵盖翻译起始位点或mRNA的第一外显子的靶序列)。可以使用的siRNA长度没有上限(例如siRNA可以是从基因的约21个碱基对到基因的全长或更长的范围(例如约20到约30个碱基对，约50到约60个碱基对，约60到约70个碱基对，约70到约80个碱基对，约80到约90个碱基对，或约90到约100个碱基对)。
靶向IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2或IL-23R的siRNA的非限制实例在Tan等人,J.Alzheimers Dis.38(3):633-646,2014；Niimi等人,J.Neuroimmunol.254(1-2):39-45,2013中描述。靶向IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2或IL-23R的短发夹RNA(shRNA)的非限制性实例在Bak等人,BMC Dermatol.11:5,2011中描述。
抑制性核酸的非限制性实例是微小RNA(例如，微小RNA-29(Brain等人,Immunity39(3):521-536,2013)、miR-10a(Xue等人,J.Immunol.187(11):5879-5886,2011)、微小RNA-155(Podsiad等人,Am.J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.310(5):L465-75,2016))。
在一些实施方式中，可向有需要的受试者(例如人类受试者)施用治疗有效量的靶向IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2或IL-23R的抑制性核酸。
在一些实施方式中，抑制性核酸可为约10个核苷酸至约40个核苷酸(例如约10至约30个核苷酸、约10至约25个核苷酸、约10至约20个核苷酸、约10至约15个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、14个核苷酸、15个核苷酸、16个核苷酸、17个核苷酸、18个核苷酸、19个核苷酸、20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸或40个核苷酸)的长度。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
本文所述的任一种抑制性核酸可以配制成向胃肠道施用。参见例如描述于US2016/0090598和Schoellhammer等人,Gastroenterology,doi:10.1053/j.gastro.2017.01.002,2017中的配制方法。
如本领域所知，术语“热熔点(Tm)”是指在限定的离子强度、pH和抑制性核酸浓度下的温度，在该温度下在平衡时与靶序列互补的抑制性核酸的50％与靶序列杂交。在一些实施方式中，抑制性核酸可以在严格的条件下特异性地结合到靶核酸，例如对于短的寡核苷酸(例如10至50个核苷酸)而言，在pH 7.0到8.3下、盐浓度为至少约0.01到1.0M钠离子浓度(或其它盐)且温度为至少约30℃的条件下。加入甲酰胺等失稳剂也可达到严格的条件。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以大于20℃、大于22℃、大于24℃、大于26℃、大于28℃、大于30℃、大于32℃、大于34℃、大于36℃、大于38℃、大于40℃、大于42℃、大于44℃、大于46℃、大于48℃、大于50℃、大于52℃、大于54℃、大于56℃、大于58℃、大于60℃、大于62℃、大于64℃、大于66℃、大于68℃、大于70℃、大于72℃、大于74℃、大于76℃、大于78℃、或大于80℃的Tm与靶核酸(例如，编码IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R中的任一种的核酸)结合，例如如在磷酸盐缓冲盐水中使用UV分光光度计所测量。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以约20℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、约24℃、或约22℃(包括端值)；约22℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、或约24℃(包括端值)；约24℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、或约26℃(包括端值)；约26℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、或约28℃(包括端值)；约28℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、或约30℃(包括端值)；约30℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、或约32℃(包括端值)；约32℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、或约34℃(包括端值)；约34℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、或约36℃(包括端值)；约36℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、或约38℃(包括端值)；约38℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、或约40℃(包括端值)；约40℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、或约42℃(包括端值)；约42℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、或约44℃(包括端值)；约44℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、或约46℃(包括端值)；约46℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、或约48℃(包括端值)；约48℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、或约50℃(包括端值)；约50℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、或约52℃(包括端值)；约52℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、或约54℃(包括端值)；约54℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、或约56℃(包括端值)；约56℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、或约58℃(包括端值)；约58℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、或约60℃(包括端值)；约60℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、或约62℃(包括端值)；约62℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、或约64℃(包括端值)；约64℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、或约66℃(包括端值)；约66℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、或约68℃(包括端值)；约68℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、或约70℃(包括端值)；约70℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、或约72℃(包括端值)；约72℃至约80℃、约78℃、约76℃、或约74℃(包括端值)；约74℃至约80℃、约78℃、或约76℃(包括端值)；约76℃至约80℃或约78℃(包括端值)；或约78℃至约80℃(包括端值)的Tm与靶核酸(例如，编码IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R中的任一种的核酸)结合。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成纳米颗粒(例如包含一种或多种合成聚合物的纳米颗粒，例如Patil等人,Pharmaceutical Nanotechnol.367:195-203,2009；Yang等人,ACS Appl.Mater.Interfaces,doi:10.1021/acsami.6b16556,2017；Perepelyuk等人,Mol.Ther.Nucleic Acids6:259-268,2017)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以是粘膜粘着颗粒(例如具有带正电荷外表面的纳米颗粒)(Andersen等人,MethodsMol.Biol.555:77-86,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以具有带中性电荷的外表面。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成例如脂质体(Buyens等人,J.ControlRelease 158(3):362-370,2012；Scarabel等人,Expert Opin.Drug Deliv.17:1-14,2017)、胶束(例如混合胶束)(Tangsangasaksri等人,BioMacromolecules17:246-255,2016；Wu等人,Nanotechnology,doi:10.1088/1361-6528/aa6519,2017)、微乳液(WO 11/004395)、纳米乳液或固体脂质纳米粒子(Sahay等人,Nature Biotechnol.31:653-658,2013；和Lin等人,Nanomedicine 9(1):105-120,2014)。US2016/0090598中描述了抑制性核酸的其它示例性结构特征和抑制性核酸的制剂。
在一些实施方式中，药物组合物可以包括无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)。在一些实例中，药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)组成。在某些实施方式中，无菌生理盐水是药物级生理盐水。在某些实施方式中，药物组合物可以包括一种或多种抑制核酸(例如本文所述的任何抑制核酸)和无菌水。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌水组成。在某些实施方式中，药物组合物包括一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成。在一些实例中，无菌盐水是药物级PBS。
在某些实施方式中，一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)可与用于制备药物组合物或制剂的药学上可接受的活性和/或惰性物质混合。用于制备药物组合物的组合物和方法取决于许多标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或将施用剂量。
包括一种或多种抑制性核酸的药物组合物包含任何药物上可接受的盐、酯或此类酯的盐。药物组合物的非限制性示例包括抑制性核酸的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
本文还提供了前药，其可包括在抑制性核酸一端或两端的额外核苷，其在身体内被内源性核酸酶切割以形成活性抑制性核酸。
脂质部分可用于形成抑制性核酸。在某些此类方法中，抑制性核酸被引入由阳离子脂质和中性脂质的混合物制成的预成型脂质体或脂质体复合物中。在某些方法中，形成具有单阳离子或多阳离子脂质的抑制性核酸复合物，而不使用中性脂质。在某些实施方式中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物中特定细胞或组织的分布。在一些实例中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物脂肪组织中的分布。在某些实施方式中，选择脂质部分以增加抑制性核酸在肌肉组织的分布。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物包含一种或多种抑制性核酸和一种或多种赋形剂。在某些这样的实施方式中，赋形剂选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括脂质体和乳剂。脂质体和乳剂可用于制备疏水性化合物。在一些实例中，使用某些有机溶剂，如二甲基亚砜。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括一种或多种组织特异性递送分子，其设计用于将一种或多种抑制性核酸递送至哺乳动物中的特定组织或细胞类型。例如，药物组合物可以包括附有组织特异性抗体的脂质体。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物可以包括共溶剂体系。此类共溶剂体系的示例包括苯甲醇、非极性表面活性剂、水溶性有机聚合物和水相。这种共溶剂体系的非限制性示例是VPD共溶剂体系，其是包含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的无水乙醇溶液。可以理解，可以使用其它表面活性剂代替聚山梨酯80TM；聚乙二醇的粒径可以改变；其它生物相容性聚合物、例如聚乙烯吡咯烷酮可以替代聚乙二醇；其它糖或多糖可以替代葡萄糖。
在一些实例中，可将药物组合物配制成经口施用。在一些实例中，药物组合物配制用于颊施用。
在一些实例中，药物组合物配制成通过注射(例如静脉注射、皮下注射、肌肉注射等)施用。在这些实施方式的一些中，药物组合物包括载体，并且在水溶液(诸如水或生理相容的缓冲剂，诸如汉克斯溶液、林格溶液或生理盐水缓冲剂)中配制。在一些实例中，还包括其它成分(例如有助于溶解或用作防腐剂的成分)。在一些实例中，使用适当的液体载体、悬浮剂等来制备可注射悬浮液。一些注射用药物组合物以单位剂量形式(例如在安瓿或多剂量容器中)来配制。一些用于注射的药物组合物是在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可能含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等配方剂。适用于注射用药物组合物的溶剂包括但不限于亲脂溶剂和脂肪油，例如芝麻油、合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，以及脂质体。
抗体
在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合IL-12A(p35)、IL-12B(p40)、IL-23(p19)、IL-12R β1、IL-12R β2、或IL-23R或其组合中的任一种。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2、微型体(minibody)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig，和双亲和性重新靶向抗体(DART)、三功能抗体、具有共同LC的kih IgG、crossmab、ortho-Fab IgG、2-in-1-IgG、IgG-ScFv、scFv2-Fc、双纳米抗体、串联抗体、DART-Fc、scFv-HAS-scFv、DNL-Fab3、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体、纳米抗体-HSA、双抗体、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体(miniantibody)、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体、对接和锁定双特异性抗体(dock and lock bispecific antibody)、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HAS、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在一些实施方式中，抗体是优特克单抗(CNTO 1275，
Figure BDA0002449116230000591
)或其变体(Krueger等人,N.Engl.J.Med.356(6):580-592,2007；Kauffman等人,J.Invest.Dermatol.123(6):1037-1044,2004；Gottlieb等人,Curr.Med.Res.Opin.23(5):1081-1092,2007；Leonardi等人,Lancet 371(9625):1665-1674,2008；Papp等人,Lancet 371(9625):1675-1684,2008)。在一些实施方式中，抗体是布瑞吉努单抗(brazikumab)(ABT-874，J-695)或其变体(Gordon等人,J.Invest.Dermatol.132(2):304-314,2012；Kimball等人,Arch Dermatol.144(2):200-207,2008)。
在一些实施方式中，抗体是谷瑟库单抗(guselkumab)(CNTO-1959)(Callis-Duffin等人,J.Am.Acad.Dermatol.70(5增刊1),2014)；AB162(Sofen等人,J.AllergyClin.Immunol.133:1032-40,2014)；替曲吉珠单抗(tildrakizumab)(MK-3222,SCH900222)(Papp等人(2015)Br.J.Dermatol.2015)；Langley等人,Oral Presentation at:AmericanAcademy of Dermatology,3月21-25,Denver CO,2014)；AMG 139(MEDI2070，布瑞吉努单抗)(Gomollon,Gastroenterol.Hepatol.38(增刊1):13-19,2015；Kock等人,Br.J.Pharmacol.172(1):159-172,2015)；FM-202(Tang等人,Immunology 135(2):112-124,2012)；FM-303(Tang等人,Immunology 135(2):112-124,2012)；ADC-1012(Tang等人,Immunology135(2):112-124,2012)；LY-2525623(Gaffen等人,Nat.Rev.Immunol.14:585-600,2014；Sands,Gastroenterol.Hepatol.12(12):784-786,2016)、LY-3074828(Coskun等人,Trends Pharmacol.Sci.38(2):127-142,2017)、BI-655066(利散吉珠单抗(risankizumab))(Singh等人,MAbs 7(4):778-791,2015；Krueger等人,J.AllergyClin.Immunol.136(1):116-124,2015)或其变体。
参见例如，Tang等人,Immunology 135(2):112-124,2012。IL-12/IL-23抗体和其抗原结合片段的其它教示内容描述于美国专利号6,902,734；7,247,711；7,252,971；和7,491,391；US 2012/0288494；和US 2013/0302343中，所述专利的每一者通过引用全文并入本文。
在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂是PTG-200，它是目前由ProtagonistTherapeutics进行临床前开发的IL-23R抑制剂。
在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂是Mirikizumab(LY 3074828)，它是目前由Eli Lilly进行临床开发(阶段II)的IL-23R抑制剂。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10-5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x 10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10-10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
融合蛋白
在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂是融合蛋白、可溶性拮抗剂或抗微生物肽。在一些实施方式中，融合蛋白包含IL-12受体的可溶性片段或IL-23受体的可溶性片段。在一些实施方式中，融合蛋白包含IL-12的受体的细胞外结构域或IL-23的受体的细胞外结构域。
在一些实施方式中，融合蛋白是adnectin或其变体(Tang等人,Immunology135(2):112-124,2012)。在一些实施方式中，可溶性拮抗剂是人IL-23Ra链mRNA转录物(Raymond等人,J.Immunol.185(12):7302-7308,2010)。在一些实施方式中，IL-12/IL-23是抗微生物肽(例如MP-196(Wenzel等人,PNAS111(14):E1409-E1418,2014))。
小分子
在一些实施方式中，IL-12/IL-23抑制剂是小分子。在一些实施方式中，小分子是STA-5326(阿匹莫德)或其变体(Keino等人,ArthritisRes.Ther.10:R122,2008；Wada等人,Blood 109(3):1156-1164,2007；Sands等人,Inflamm.BowelDis.16(7):1209-1218,2010)。
TNFα抑制剂
术语“TNFα抑制剂”是指直接或间接抑制、损害、降低、下调、或阻断TNFα活性和/或表达的试剂。在一些实施方式中，TNFα抑制剂是抑制性核酸、抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、可溶性TNFα受体(可溶性TNFR1或可溶性TNFR2)、或小分子TNFα拮抗剂。在一些实施例中，所述抑制性核酸是核酶、小发夹RNA、小干扰RNA、反义核酸、或适配子。
直接抑制、损害、降低、下调或阻断TNFα活性和/或表达的示例性TNFα抑制剂可以例如抑制或降低TNFα与其受体(TNFR1和/或TNFR2)的结合和/或抑制或降低细胞(例如哺乳动物细胞)中TNFα或TNFα受体(TNFR1或TNFR2)的表达水平。直接抑制、损害、降低、下调或阻断TNFα活性和/或表达的TNFα抑制剂的非限制性实例包括抑制性核酸(例如，本文所述的抑制性核酸的任何实例)、抗体或其片段、融合蛋白、可溶性TNFα受体(例如可溶性TNFR1或可溶性TNFR2)和小分子TNFα拮抗剂。
可以间接抑制、损害、降低、下调或阻断TNFα活性和/或表达的示例性TNFα抑制剂可以例如抑制或降低哺乳动物细胞中的TNFα受体(例如，TNFR1或TNFR2)的下游信号传导水平(例如，降低以下信号传导蛋白中的一种或多种的水平和/或活性：哺乳动物细胞中的TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK和NF-κB)，和/或降低哺乳动物细胞中的TNFα诱导的基因表达的水平(例如，减少由例如选自NF-κB、c-Jun和ATF2的组的一种或多种转录因子调节的基因的转录)。TNFα受体的下游信号传导的描述提供于Wajant等人,Cell Death Differentiation10:45-65,2003(通过引用并入本文)中。例如，这类间接TNFα抑制剂可以是靶向(降低表达)TNFα受体下游的信号传导组分(例如，本文所述或本领域中已知的TNFα受体下游的任何一种或多种信号传导组分)的抑制性核酸、TNFα诱导的基因(例如，本领域中已知的任何TNFα诱导的基因)、或选自NF-κB、c-Jun和ATF2的组的转录因子。
在其它实例中，这类间接TNFα抑制剂可以是TNFα受体的下游的信号传导组分(例如，本文所述或本领域中已知的TNFα受体的下游的任何信号传导组分)的小分子抑制剂、TNFα诱导的基因所编码的蛋白质(例如，本领域中已知的TNFα诱导的基因所编码的任何蛋白质)的小分子抑制剂，以及选自NF-κB、c-Jun和ATF2的组的转录因子的小分子抑制剂。
在其它实施方式中，TNFα抑制剂可以间接抑制、损害、降低、下调或阻断哺乳动物细胞(例如巨噬细胞、CD4+淋巴细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸粒细胞或神经元)中参与导致TNFα mRNA转录、TNFα mRNA稳定化和TNFα mRNA翻译的信号传导途径的一种或多种组分(例如，选自以下的组的一种或多种组分：CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP、和MK2)。例如，这类间接TNFα抑制剂可以是靶向(降低表达)哺乳动物细胞中参与导致TNFα mRNA转录、TNFα mRNA稳定化和TNFα mRNA翻译的信号传导途径的组分(例如，选自以下的组的组分：CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP、和MK2)的抑制性核酸。在其它实例中，间接TNFα抑制剂是哺乳动物细胞中参与导致TNFα mRNA转录、TNFα mRNA稳定化和TNFα mRNA翻译的信号传导途径的组分(例如，选自以下的组的组分：CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP、和MK2)的小分子抑制剂。
抑制性核酸
可以降低哺乳动物细胞中TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA表达的表达的抑制性核酸包括反义核酸分子，即其核苷酸序列与TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA的全部或部分互补(例如与SEQ ID NO:13-49中任何一个的全部或部分互补)的核酸分子。
人TNFαCDS(SEQ ID NO:13)
ATGAGCACTGAAAGCATGATCCGGGACGTGGAGCTGGCCGAGGAGGCGCTCCCCAAGAAGACAGGGGGGCCCCAGGGCTCCAGGCGGTGCTTGTTCCTCAGCCTCTTCTCCTTCCTGATCGTGGCAGGCGCCACCACGCTCTTCTGCCTGCTGCACTTTGGAGTGATCGGCCCCCAGAGGGAAGAGTTCCCCAGGGACCTCTCTCTAATCAGCCCTCTGGCCCAGGCAGTCAGATCATCTTCTCGAACCCCGAGTGACAAGCCTGTAGCCCATGTTGTAGCAAACCCTCAAGCTGAGGGGCAGCTCCAGTGGCTGAACCGCCGGGCCAATGCCCTCCTGGCCAATGGCGTGGAGCTGAGAGATAACCAGCTGGTGGTGCCATCAGAGGGCCTGTACCTCATCTACTCCCAGGTCCTCTTCAAGGGCCAAGGCTGCCCCTCCACCCATGTGCTCCTCACCCACACCATCAGCCGCATCGCCGTCTCCTACCAGACCAAGGTCAACCTCCTCTCTGCCATCAAGAGCCCCTGCCAGAGGGAGACCCCAGAGGGGGCTGAGGCCAAGCCCTGGTATGAGCCCATCTATCTGGGAGGGGTCTTCCAGCTGGAGAAGGGTGACCGACTCAGCGCTGAGATCAATCGGCCCGACTATCTCGACTTTGCCGAGTCTGGGCAGGTCTACTTTGGGATCATTGCCCTGTGA人TNFR1 CDS(SEQ ID NO:14)
ATGGGCCTCTCCACCGTGCCTGACCTGCTGCTGCCGCTGGTGCTCCTGGAGCTGTTGGTGGGAATATACCCCTCAGGGGTTATTGGACTGGTCCCTCACCTAGGGGACAGGGAGAAGAGAGATAGTGTGTGTCCCCAAGGAAAATATATCCACCCTCAAAATAATTCGATTTGCTGTACCAAGTGCCACAAAGGAACCTACTTGTACAATGACTGTCCAGGCCCGGGGCAGGATACGGACTGCAGGGAGTGTGAGAGCGGCTCCTTCACCGCTTCAGAAAACCACCTCAGACACTGCCTCAGCTGCTCCAAATGCCGAAAGGAAATGGGTCAGGTGGAGATCTCTTCTTGCACAGTGGACCGGGACACCGTGTGTGGCTGCAGGAAGAACCAGTACCGGCATTATTGGAGTGAAAACCTTTTCCAGTGCTTCAATTGCAGCCTCTGCCTCAATGGGACCGTGCACCTCTCCTGCCAGGAGAAACAGAACACCGTGTGCACCTGCCATGCAGGTTTCTTTCTAAGAGAAAACGAGTGTGTCTCCTGTAGTAACTGTAAGAAAAGCCTGGAGTGCACGAAGTTGTGCCTACCCCAGATTGAGAATGTTAAGGGCACTGAGGACTCAGGCACCACAGTGCTGTTGCCCCTGGTCATTTTCTTTGGTCTTTGCCTTTTATCCCTCCTCTTCATTGGTTTAATGTATCGCTACCAACGGTGGAAGTCCAAGCTCTACTCCATTGTTTGTGGGAAATCGACACCTGAAAAAGAGGGGGAGCTTGAAGGAACTACTACTAAGCCCCTGGCCCCAAACCCAAGCTTCAGTCCCACTCCAGGCTTCACCCCCACCCTGGGCTTCAGTCCCGTGCCCAGTTCCACCTTCACCTCCAGCTCCACCTATACCCCCGGTGACTGTCCCAACTTTGCGGCTCCCCGCAGAGAGGTGGCACCACCCTATCAGGGGGCTGACCCCATCCTTGCGACAGCCCTCGCCTCCGACCCCATCCCCAACCCCCTTCAGAAGTGGGAGGACAGCGCCCACAAGCCACAGAGCCTAGACACTGATGACCCCGCGACGCTGTACGCCGTGGTGGAGAACGTGCCCCCGTTGCGCTGGAAGGAATTCGTGCGGCGCCTAGGGCTGAGCGACCACGAGATCGATCGGCTGGAGCTGCAGAACGGGCGCTGCCTGCGCGAGGCGCAATACAGCATGCTGGCGACCTGGAGGCGGCGCACGCCGCGGCGCGAGGCCACGCTGGAGCTGCTGGGACGCGTGCTCCGCGACATGGACCTGCTGGGCTGCCTGGAGGACATCGAGGAGGCGCTTTGCGGCCCCGCCGCCCTCCCGCCCGCGCCCAGTCTTCTCAGATGA
人TNFR2 CDS(SEQ ID NO:15)
ATGGCGCCCGTCGCCGTCTGGGCCGCGCTGGCCGTCGGACTGGAGCTCTGGGCTGCGGCGCACGCCTTGCCCGCCCAGGTGGCATTTACACCCTACGCCCCGGAGCCCGGGAGCACATGCCGGCTCAGAGAATACTATGACCAGACAGCTCAGATGTGCTGCAGCAAATGCTCGCCGGGCCAACATGCAAAAGTCTTCTGTACCAAGACCTCGGACACCGTGTGTGACTCCTGTGAGGACAGCACATACACCCAGCTCTGGAACTGGGTTCCCGAGTGCTTGAGCTGTGGCTCCCGCTGTAGCTCTGACCAGGTGGAAACTCAAGCCTGCACTCGGGAACAGAACCGCATCTGCACCTGCAGGCCCGGCTGGTACTGCGCGCTGAGCAAGCAGGAGGGGTGCCGGCTGTGCGCGCCGCTGCGCAAGTGCCGCCCGGGCTTCGGCGTGGCCAGACCAGGAACTGAAACATCAGACGTGGTGTGCAAGCCCTGTGCCCCGGGGACGTTCTCCAACACGACTTCATCCACGGATATTTGCAGGCCCCACCAGATCTGTAACGTGGTGGCCATCCCTGGGAATGCAAGCATGGATGCAGTCTGCACGTCCACGTCCCCCACCCGGAGTATGGCCCCAGGGGCAGTACACTTACCCCAGCCAGTGTCCACACGATCCCAACACACGCAGCCAACTCCAGAACCCAGCACTGCTCCAAGCACCTCCTTCCTGCTCCCAATGGGCCCCAGCCCCCCAGCTGAAGGGAGCACTGGCGACTTCGCTCTTCCAGTTGGACTGATTGTGGGTGTGACAGCCTTGGGTCTACTAATAATAGGAGTGGTGAACTGTGTCATCATGACCCAGGTGAAAAAGAAGCCCTTGTGCCTGCAGAGAGAAGCCAAGGTGCCTCACTTGCCTGCCGATAAGGCCCGGGGTACACAGGGCCCCGAGCAGCAGCACCTGCTGATCACAGCGCCGAGCTCCAGCAGCAGCTCCCTGGAGAGCTCGGCCAGTGCGTTGGACAGAAGGGCGCCCACTCGGAACCAGCCACAGGCACCAGGCGTGGAGGCCAGTGGGGCCGGGGAGGCCCGGGCCAGCACCGGGAGCTCAGATTCTTCCCCTGGTGGCCATGGGACCCAGGTCAATGTCACCTGCATCGTGAACGTCTGTAGCAGCTCTGACCACAGCTCACAGTGCTCCTCCCAAGCCAGCTCCACAATGGGAGACACAGATTCCAGCCCCTCGGAGTCCCCGAAGGACGAGCAGGTCCCCTTCTCCAAGGAGGAATGTGCCTTTCGGTCACAGCTGGAGACGCCAGAGACCCTGCTGGGGAGCACCGAAGAGAAGCCCCTGCCCCTTGGAGTGCCTGATGCTGGGATGAAGCCCAGTTAA
人TRADD CDS(SEQ ID NO:16)
ATGGCAGCTGGGCAAAATGGGCACGAAGAGTGGGTGGGCAGCGCATACCTGTTTGTGGAGTCCTCGCTGGACAAGGTGGTCCTGTCGGATGCCTACGCGCACCCCCAGCAGAAGGTGGCAGTGTACAGGGCTCTGCAGGCTGCCTTGGCAGAGAGCGGCGGGAGCCCGGACGTGCTGCAGATGCTGAAGATCCACCGCAGCGACCCGCAGCTGATCGTGCAGCTGCGATTCTGCGGGCGGCAGCCCTGTGGCCGCTTCCTCCGCGCCTACCGCGAGGGGGCGCTGCGCGCCGCGCTGCAGAGGAGCCTGGCGGCCGCGCTCGCCCAGCACTCGGTGCCGCTGCAACTGGAGCTGCGCGCCGGCGCCGAGCGGCTGGACGCTTTGCTGGCGGACGAGGAGCGCTGTTTGAGTTGCATCCTAGCCCAGCAGCCCGACCGGCTCCGGGATGAAGAACTGGCTGAGCTGGAGGATGCGCTGCGAAATCTGAAGTGCGGCTCGGGGGCCCGGGGTGGCGACGGGGAGGTCGCTTCGGCCCCCTTGCAGCCCCCGGTGCCCTCTCTGTCGGAGGTGAAGCCGCCGCCGCCGCCGCCACCTGCCCAGACTTTTCTGTTCCAGGGTCAGCCTGTAGTGAATCGGCCGCTGAGCCTGAAGGACCAACAGACGTTCGCGCGCTCTGTGGGTCTCAAATGGCGCAAGGTGGGGCGCTCACTGCAGCGAGGCTGCCGGGCGCTGCGGGACCCGGCGCTGGACTCGCTGGCCTACGAGTACGAGCGCGAGGGACTGTACGAGCAGGCCTTCCAGCTGCTGCGGCGCTTCGTGCAGGCCGAGGGCCGCCGCGCCACGCTGCAGCGCCTGGTGGAGGCACTCGAGGAGAACGAGCTCACCAGCCTGGCAGAGGACTTGCTGGGCCTGACCGATCCCAATGGCGGCCTGGCCTAG
人TRAF2 CDS(SEQ ID NO:17)
ATGGCTGCAGCTAGCGTGACCCCCCCTGGCTCCCTGGAGTTGCTACAGCCCGGCTTCTCCAAGACCCTCCTGGGGACCAAGCTGGAAGCCAAGTACCTGTGCTCCGCCTGCAGAAACGTCCTCCGCAGGCCCTTCCAGGCGCAGTGTGGCCACCGGTACTGCTCCTTCTGCCTGGCCAGCATCCTCAGCTCTGGGCCTCAGAACTGTGCTGCCTGTGTTCACGAGGGCATATATGAAGAAGGCATTTCTATTTTAGAAAGCAGTTCGGCCTTCCCAGATAATGCTGCCCGCAGGGAGGTGGAGAGCCTGCCGGCCGTCTGTCCCAGTGATGGATGCACCTGGAAGGGGACCCTGAAAGAATACGAGAGCTGCCACGAAGGCCGCTGCCCGCTCATGCTGACCGAATGTCCCGCGTGCAAAGGCCTGGTCCGCCTTGGTGAAAAGGAGCGCCACCTGGAGCACGAGTGCCCGGAGAGAAGCCTGAGCTGCCGGCATTGCCGGGCACCCTGCTGCGGAGCAGACGTGAAGGCGCACCACGAGGTCTGCCCCAAGTTCCCCTTAACTTGTGACGGCTGCGGCAAGAAGAAGATCCCCCGGGAGAAGTTTCAGGACCACGTCAAGACTTGTGGCAAGTGTCGAGTCCCTTGCAGATTCCACGCCATCGGCTGCCTCGAGACGGTAGAGGGTGAGAAACAGCAGGAGCACGAGGTGCAGTGGCTGCGGGAGCACCTGGCCATGCTACTGAGCTCGGTGCTGGAGGCAAAGCCCCTCTTGGGAGACCAGAGCCACGCGGGGTCAGAGCTCCTGCAGAGGTGCGAGAGCCTGGAGAAGAAGACGGCCACTTTTGAGAACATTGTCTGCGTCCTGAACCGGGAGGTGGAGAGGGTGGCCATGACTGCCGAGGCCTGCAGCCGGCAGCACCGGCTGGACCAAGACAAGATTGAAGCCCTGAGTAGCAAGGTGCAGCAGCTGGAGAGGAGCATTGGCCTCAAGGACCTGGCGATGGCTGACTTGGAGCAGAAGGTCTTGGAGATGGAGGCATCCACCTACGATGGGGTCTTCATCTGGAAGATCTCAGACTTCGCCAGGAAGCGCCAGGAAGCTGTGGCTGGCCGCATACCCGCCATCTTCTCCCCAGCCTTCTACACCAGCAGGTACGGCTACAAGATGTGTCTGCGTATCTACCTGAACGGCGACGGCACCGGGCGAGGAACACACCTGTCCCTCTTCTTTGTGGTGATGAAGGGCCCGAATGACGCCCTGCTGCGGTGGCCCTTCAACCAGAAGGTGACCTTAATGCTGCTCGACCAGAATAACCGGGAGCACGTGATTGACGCCTTCAGGCCCGACGTGACTTCATCCTCTTTTCAGAGGCCAGTCAACGACATGAACATCGCAAGCGGCTGCCCCCTCTTCTGCCCCGTCTCCAAGATGGAGGCAAAGAATTCCTACGTGCGGGACGATGCCATCTTCATCAAGGCCATTGTGGACCTGACAGGGCTCTAA
人MEKK1 CDS(SEQ ID NO:18)
ATGGCGGCGGCGGCGGGGAATCGCGCCTCGTCGTCGGGATTCCCGGGCGCCAGGGCTACGAGCCCTGAGGCAGGCGGCGGCGGAGGAGCCCTCAAGGCGAGCAGCGCGCCCGCGGCTGCCGCGGGACTGCTGCGGGAGGCGGGCAGCGGGGGCCGCGAGCGGGCGGACTGGCGGCGGCGGCAGCTGCGCAAAGTGCGGAGTGTGGAGCTGGACCAGCTGCCTGAGCAGCCGCTCTTCCTTGCCGCCTCACCGCCGGCCTCCTCGACTTCCCCGTCGCCGGAGCCCGCGGACGCAGCGGGGAGTGGGACCGGCTTCCAGCCTGTGGCGGTGCCGCCGCCCCACGGAGCCGCGAGCCGCGGCGGCGCCCACCTTACCGAGTCGGTGGCGGCGCCGGACAGCGGCGCCTCGAGTCCCGCAGCGGCCGAGCCCGGGGAGAAGCGGGCGCCCGCCGCCGAGCCGTCTCCTGCAGCGGCCCCCGCCGGTCGTGAGATGGAGAATAAAGAAACTCTCAAAGGGTTGCACAAGATGGATGATCGTCCAGAGGAACGAATGATCAGGGAGAAACTGAAGGCAACCTGTATGCCAGCCTGGAAGCACGAATGGTTGGAAAGGAGAAATAGGCGAGGGCCTGTGGTGGTAAAACCAATCCCAGTTAAAGGAGATGGATCTGAAATGAATCACTTAGCAGCTGAGTCTCCAGGAGAGGTCCAGGCAAGTGCGGCTTCACCAGCTTCCAAAGGCCGACGCAGTCCTTCTCCTGGCAACTCCCCATCAGGTCGCACAGTGAAATCAGAATCTCCAGGAGTAAGGAGAAAAAGAGTTTCCCCAGTGCCTTTTCAGAGTGGCAGAATCACACCACCCCGAAGAGCCCCTTCACCAGATGGCTTCTCACCATATAGCCCTGAGGAAACAAACCGCCGTGTTAACAAAGTGATGCGGGCCAGACTGTACTTACTGCAGCAGATAGGGCCTAACTCTTTCCTGATTGGAGGAGACAGCCCAGACAATAAATACCGGGTGTTTATTGGGCCTCAGAACTGCAGCTGTGCACGTGGAACATTCTGTATTCATCTGCTATTTGTGATGCTCCGGGTGTTTCAACTAGAACCTTCAGACCCAATGTTATGGAGAAAAACTTTAAAGAATTTTGAGGTTGAGAGTTTGTTCCAGAAATATCACAGTAGGCGTAGCTCAAGGATCAAAGCTCCATCTCGTAACACCATCCAGAAGTTTGTTTCACGCATGTCAAATTCTCATACATTGTCATCATCTAGTACTTCTACGTCTAGTTCAGAAAACAGCATAAAGGATGAAGAGGAACAGATGTGTCCTATTTGCTTGTTGGGCATGCTTGATGAAGAAAGTCTTACAGTGTGTGAAGACGGCTGCAGGAACAAGCTGCACCACCACTGCATGTCAATTTGGGCAGAAGAGTGTAGAAGAAATAGAGAACCTTTAATATGTCCCCTTTGTAGATCTAAGTGGAGATCTCATGATTTCTACAGCCACGAGTTGTCAAGTCCTGTGGATTCCCCTTCTTCCCTCAGAGCTGCACAGCAGCAAACCGTACAGCAGCAGCCTTTGGCTGGATCACGAAGGAATCAAGAGAGCAATTTTAACCTTACTCATTATGGAACTCAGCAAATCCCTCCTGCTTACAAAGATTTAGCTGAGCCATGGATTCAGGTGTTTGGAATGGAACTCGTTGGCTGCTTATTTTCTAGAAACTGGAATGTGAGAGAGATGGCCCTCAGGCGTCTTTCCCATGATGTCAGTGGGGCCCTGCTGTTGGCAAATGGGGAGAGCACTGGAAATTCTGGGGGCAGCAGTGGAAGCAGCCCGAGTGGGGGAGCCACCAGTGGGTCTTCCCAGACCAGTATCTCAGGAGATGTGGTGGAGGCATGCTGCAGCGTTCTGTCAATGGTCTGTGCTGACCCTGTCTACAAAGTGTACGTTGCTGCTTTAAAAACATTGAGAGCCATGCTGGTATATACTCCTTGCCACAGTTTAGCGGAAAGAATCAAACTTCAGAGACTTCTCCAGCCAGTTGTAGACACCATCCTAGTCAAATGTGCAGATGCCAATAGCCGCACAAGTCAGCTGTCCATATCAACACTGTTGGAACTGTGCAAAGGCCAAGCAGGAGAGTTGGCAGTTGGCAGAGAAATACTAAAAGCTGGATCCATTGGTATTGGTGGTGTTGATTATGTCTTAAATTGTATTCTTGGAAACCAAACTGAATCAAACAATTGGCAAGAACTTCTTGGCCGCCTTTGTCTTATAGATAGACTGTTGTTGGAATTTCCTGCTGAATTTTATCCTCATATTGTCAGTACTGATGTTTCACAAGCTGAGCCTGTTGAAATCAGGTATAAGAAGCTGCTGTCCCTCTTAACCTTTGCTTTGCAGTCCATTGATAATTCCCACTCAATGGTTGGCAAACTTTCCAGAAGGATCTACTTGAGTTCTGCAAGAATGGTTACTACAGTACCCCATGTGTTTTCAAAACTGTTAGAAATGCTGAGTGTTTCCAGTTCCACTCACTTCACCAGGATGCGTCGCCGTTTGATGGCTATTGCAGATGAGGTGGAAATTGCCGAAGCCATCCAGTTGGGCGTAGAAGACACTTTGGATGGTCAACAGGACAGCTTCTTGCAGGCATCTGTTCCCAACAACTATCTGGAAACCACAGAGAACAGTTCCCCTGAGTGCACAGTCCATTTAGAGAAAACTGGAAAAGGATTATGTGCTACAAAATTGAGTGCCAGTTCAGAGGACATTTCTGAGAGACTGGCCAGCATTTCAGTAGGACCTTCTAGTTCAACAACAACAACAACAACAACAACAGAGCAACCAAAGCCAATGGTTCAAACAAAAGGCAGACCCCACAGTCAGTGTTTGAACTCCTCTCCTTTATCTCATCATTCCCAATTAATGTTTCCAGCCTTGTCAACCCCTTCTTCTTCTACCCCATCTGTACCAGCTGGCACTGCAACAGATGTCTCTAAGCATAGACTTCAGGGATTCATTCCCTGCAGAATACCTTCTGCATCTCCTCAAACACAGCGCAAGTTTTCTCTACAATTCCACAGAAACTGTCCTGAAAACAAAGACTCAGATAAACTTTCCCCAGTCTTTACTCAGTCAAGACCCTTGCCCTCCAGTAACATACACAGGCCAAAGCCATCTAGACCTACCCCAGGTAATACAAGTAAACAGGGAGATCCCTCAAAAAATAGCATGACACTTGATCTGAACAGTAGTTCCAAATGTGATGACAGCTTTGGCTGTAGCAGCAATAGTAGTAATGCTGTTATACCCAGTGACGAGACAGTGTTCACCCCAGTAGAGGAGAAATGCAGATTAGATGTCAATACAGAGCTCAACTCCAGTATTGAGGACCTTCTTGAAGCATCTATGCCTTCAAGTGATACAACAGTAACTTTTAAGTCAGAAGTTGCTGTCCTGTCTCCTGAAAAGGCTGAAAATGATGATACCTACAAAGATGATGTGAATCATAATCAAAAGTGCAAAGAGAAGATGGAAGCTGAAGAAGAAGAAGCTTTAGCAATTGCCATGGCAATGTCAGCGTCTCAGGATGCCCTCCCCATAGTTCCTCAGCTGCAGGTTGAAAATGGAGAAGATATCATCATTATTCAACAGGATACACCAGAGACTCTACCAGGACATACCAAAGCAAAACAACCGTATAGAGAAGACACTGAATGGCTGAAAGGTCAACAGATAGGCCTTGGAGCATTTTCTTCTTGTTATCAGGCTCAAGATGTGGGAACTGGAACTTTAATGGCTGTTAAACAGGTGACTTATGTCAGAAACACATCTTCTGAGCAAGAAGAAGTAGTAGAAGCACTAAGAGAAGAGATAAGAATGATGAGCCATCTGAATCATCCAAACATCATTAGGATGTTGGGAGCCACGTGTGAGAAGAGCAATTACAATCTCTTCATTGAATGGATGGCAGGGGGATCGGTGGCTCATTTGCTGAGTAAATATGGAGCCTTCAAAGAATCAGTAGTTATTAACTACACTGAACAGTTACTCCGTGGCCTTTCGTATCTCCATGAAAACCAAATCATTCACAGAGATGTCAAAGGTGCCAATTTGCTAATTGACAGCACTGGTCAGAGACTAAGAATTGCAGATTTTGGAGCTGCAGCCAGGTTGGCATCAAAAGGAACTGGTGCAGGAGAGTTTCAGGGACAATTACTGGGGACAATTGCATTTATGGCACCTGAGGTACTAAGAGGTCAACAGTATGGAAGGAGCTGTGATGTATGGAGTGTTGGCTGTGCTATTATAGAAATGGCTTGTGCAAAACCACCATGGAATGCAGAAAAACACTCCAATCATCTTGCTTTGATATTTAAGATTGCTAGTGCAACTACTGCTCCATCGATCCCTTCACATTTGTCTCCTGGTTTACGAGATGTGGCTCTTCGTTGTTTAGAACTTCAACCTCAGGACAGACCTCCATCAAGAGAGCTACTGAAGCATCCAGTCTTTCGTACTACATGGTAG
人MEKK4 CDS(SEQ ID NO:19)
ATGAGAGAAGCCGCTGCCGCGCTGGTCCCTCCTCCCGCCTTTGCCGTCACGCCTGCCGCCGCCATGGAGGAGCCGCCGCCACCGCCGCCGCCGCCACCACCGCCACCGGAACCCGAGACCGAGTCAGAACCCGAGTGCTGCTTGGCGGCGAGGCAAGAGGGCACATTGGGAGATTCAGCTTGCAAGAGTCCTGAATCTGATCTAGAAGACTTCTCCGATGAAACAAATACAGAGAATCTTTATGGTACCTCTCCCCCCAGCACACCTCGACAGATGAAACGCATGTCAACCAAACATCAGAGGAATAATGTGGGGAGGCCAGCCAGTCGGTCTAATTTGAAAGAAAAAATGAATGCACCAAATCAGCCTCCACATAAAGACACTGGAAAAACAGTGGAGAATGTGGAAGAATACAGCTATAAGCAGGAGAAAAAGATCCGAGCAGCTCTTAGAACAACAGAGCGTGATCATAAAAAAAATGTACAGTGCTCATTCATGTTAGACTCAGTGGGTGGATCTTTGCCAAAAAAATCAATTCCAGATGTGGATCTCAATAAGCCTTACCTCAGCCTTGGCTGTAGCAATGCTAAGCTTCCAGTATCTGTGCCCATGCCTATAGCCAGACCTGCACGCCAGACTTCTAGGACTGACTGTCCAGCAGATCGTTTAAAGTTTTTTGAAACTTTACGACTTTTGCTAAAGCTTACCTCAGTCTCAAAGAAAAAAGACAGGGAGCAAAGAGGACAAGAAAATACGTCTGGTTTCTGGCTTAACCGATCTAACGAACTGATCTGGTTAGAGCTACAAGCCTGGCATGCAGGACGGACAATTAACGACCAGGACTTCTTTTTATATACAGCCCGTCAAGCCATCCCAGATATTATTAATGAAATCCTTACTTTCAAAGTCGACTATGGGAGCTTCGCCTTTGTTAGAGATAGAGCTGGTTTTAATGGTACTTCAGTAGAAGGGCAGTGCAAAGCCACTCCTGGAACAAAGATTGTAGGTTACTCAACACATCATGAGCATCTCCAACGCCAGAGGGTCTCATTTGAGCAGGTAAAACGGATAATGGAGCTGCTAGAGTACATAGAAGCACTTTATCCATCATTGCAGGCTCTTCAGAAGGACTATGAAAAATATGCTGCAAAAGACTTCCAGGACAGGGTGCAGGCACTCTGTTTGTGGTTAAACATCACAAAAGACTTAAATCAGAAATTAAGGATTATGGGCACTGTTTTGGGCATCAAGAATTTATCAGACATTGGCTGGCCAGTGTTTGAAATCCCTTCCCCTCGACCATCCAAAGGTAATGAGCCGGAGTATGAGGGTGATGACACAGAAGGAGAATTAAAGGAGTTGGAAAGTAGTACGGATGAGAGTGAAGAAGAACAAATCTCTGATCCTAGGGTACCGGAAATCAGACAGCCCATAGATAACAGCTTCGACATCCAGTCGCGGGACTGCATATCCAAGAAGCTTGAGAGGCTCGAATCTGAGGATGATTCTCTTGGCTGGGGAGCACCAGACTGGAGCACAGAAGCAGGCTTTAGTAGACATTGTCTGACTTCTATTTATAGACCATTTGTAGACAAAGCACTGAAGCAGATGGGGTTAAGAAAGTTAATTTTAAGACTTCACAAGCTAATGGATGGTTCCTTGCAAAGGGCACGTATAGCATTGGTAAAGAACGATCGTCCAGTGGAGTTTTCTGAATTTCCAGATCCCATGTGGGGTTCAGATTATGTGCAGTTGTCAAGGACACCACCTTCATCTGAGGAGAAATGCAGTGCTGTGTCGTGGGAGGAGCTGAAGGCCATGGATTTACCTTCATTCGAACCTGCCTTCCTAGTTCTCTGCCGAGTCCTTCTGAATGTCATACATGAGTGTCTGAAGTTAAGATTGGAGCAGAGACCTGCTGGAGAACCATCTCTCTTGAGTATTAAGCAGCTGGTGAGAGAGTGTAAGGAGGTCCTGAAGGGCGGCCTGCTGATGAAGCAGTACTACCAGTTCATGCTGCAGGAGGTTCTGGAGGACTTGGAGAAGCCCGACTGCAACATTGACGCTTTTGAAGAGGATCTACATAAAATGCTTATGGTGTATTTTGATTACATGAGAAGCTGGATCCAAATGCTACAGCAATTACCTCAAGCATCGCATAGTTTAAAAAATCTGTTAGAAGAAGAATGGAATTTCACCAAAGAAATAACTCATTACATACGGGGAGGAGAAGCACAGGCCGGGAAGCTTTTCTGTGACATTGCAGGAATGCTGCTGAAATCTACAGGAAGTTTTTTAGAATTTGGCTTACAGGAGAGCTGTGCTGAATTTTGGACTAGTGCGGATGACAGCAGTGCTTCCGACGAAATCAGGAGGTCTGTTATAGAGATCAGTCGAGCCCTGAAGGAGCTCTTCCATGAAGCCAGAGAAAGGGCTTCCAAAGCACTTGGATTTGCTAAAATGTTGAGAAAGGACCTGGAAATAGCAGCAGAATTCAGGCTTTCAGCCCCAGTTAGAGACCTCCTGGATGTTCTGAAATCAAAACAGTATGTCAAGGTGCAAATTCCTGGGTTAGAAAACTTGCAAATGTTTGTTCCAGACACTCTTGCTGAGGAGAAGAGTATTATTTTGCAGTTACTCAATGCAGCTGCAGGAAAGGACTGTTCAAAAGATTCAGATGACGTACTCATCGATGCCTATCTGCTTCTGACCAAGCACGGTGATCGAGCCCGTGATTCAGAGGACAGCTGGGGCACCTGGGAGGCACAGCCTGTCAAAGTCGTGCCTCAGGTGGAGACTGTTGACACCCTGAGAAGCATGCAGGTGGATAATCTTTTACTAGTTGTCATGCAGTCTGCGCATCTCACAATTCAGAGAAAAGCTTTCCAGCAGTCCATTGAGGGACTTATGACTCTGTGCCAGGAGCAGACATCCAGTCAGCCGGTCATCGCCAAAGCTTTGCAGCAGCTGAAGAATGATGCATTGGAGCTATGCAACAGGATAAGCAATGCCATTGACCGCGTGGACCACATGTTCACATCAGAATTTGATGCTGAGGTTGATGAATCTGAATCTGTCACCTTGCAACAGTACTACCGAGAAGCAATGATTCAGGGGTACAATTTTGGATTTGAGTATCATAAAGAAGTTGTTCGTTTGATGTCTGGGGAGTTTAGACAGAAGATAGGAGACAAATATATAAGCTTTGCCCGGAAGTGGATGAATTATGTCCTGACTAAATGTGAGAGTGGTAGAGGTACAAGACCCAGGTGGGCGACTCAAGGATTTGATTTTCTACAAGCAATTGAACCTGCCTTTATTTCAGCTTTACCAGAAGATGACTTCTTGAGTTTACAAGCCTTGATGAATGAATGCATTGGCCATGTCATAGGAAAACCACACAGTCCTGTTACAGGTTTGTACCTTGCCATTCATCGGAACAGCCCCCGTCCTATGAAGGTACCTCGATGCCATAGTGACCCTCCTAACCCACACCTCATTATCCCCACTCCAGAGGGATTCAGCACTCGGAGCATGCCTTCCGACGCGCGGAGCCATGGCAGCCCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTTGCTGCCAGTCGGCCCAGCCCCTCTGGTGGTGACTCTGTGCTGCCCAAATCCATCAGCAGTGCCCATGATACCAGGGGTTCCAGCGTTCCTGAAAATGATCGATTGGCTTCCATAGCTGCTGAATTGCAGTTTAGGTCCCTGAGTCGTCACTCAAGCCCCACGGAGGAGCGAGATGAACCAGCATATCCAAGAGGAGATTCAAGTGGGTCCACAAGAAGAAGTTGGGAACTTCGGACACTAATCAGCCAGAGTAAAGATACTGCTTCTAAACTAGGACCCATAGAAGCTATCCAGAAGTCAGTCCGATTGTTTGAAGAAAAGAGGTACCGAGAAATGAGGAGAAAGAATATCATTGGTCAAGTTTGTGATACGCCTAAGTCCTATGATAATGTTATGCACGTTGGCTTGAGGAAGGTGACCTTCAAATGGCAAAGAGGAAACAAAATTGGAGAAGGCCAGTATGGGAAGGTGTACACCTGCATCAGCGTCGACACCGGGGAGCTGATGGCCATGAAAGAGATTCGATTTCAACCTAATGACCATAAGACTATCAAGGAAACTGCAGACGAATTGAAAATATTCGAAGGCATCAAACACCCCAATCTGGTTCGGTATTTTGGTGTGGAGCTCCATAGAGAAGAAATGTACATCTTCATGGAGTACTGCGATGAGGGGACTTTAGAAGAGGTGTCAAGGCTGGGACTTCAGGAACATGTGATTAGGCTGTATTCAAAGCAGATCACCATTGCGATCAACGTCCTCCATGAGCATGGCATAGTCCACCGTGACATTAAAGGTGCCAATATCTTCCTTACCTCATCTGGATTAATCAAACTGGGAGATTTTGGATGTTCAGTAAAGCTCAAAAACAATGCCCAGACCATGCCTGGTGAAGTGAACAGCACCCTGGGGACAGCAGCATACATGGCACCTGAAGTCATCACTCGTGCCAAAGGAGAGGGCCATGGGCGTGCGGCCGACATCTGGAGTCTGGGGTGTGTTGTCATAGAGATGGTGACTGGCAAGAGGCCTTGGCATGAGTATGAGCACAACTTTCAAATTATGTATAAAGTGGGGATGGGACATAAGCCACCAATCCCTGAAAGATTAAGCCCTGAAGGAAAGGACTTCCTTTCTCACTGCCTTGAGAGTGACCCAAAGATGAGATGGACCGCCAGCCAGCTCCTCGACCATTCGTTTGTCAAGGTTTGCACAGATGAAGAATGA
人MEKK7 CDS(SEQ ID NO:20)
ATGTCTACAGCCTCTGCCGCCTCCTCCTCCTCCTCGTCTTCGGCCGGTGAGATGATCGAAGCCCCTTCCCAGGTCCTCAACTTTGAAGAGATCGACTACAAGGAGATCGAGGTGGAAGAGGTTGTTGGAAGAGGAGCCTTTGGAGTTGTTTGCAAAGCTAAGTGGAGAGCAAAAGATGTTGCTATTAAACAAATAGAAAGTGAATCTGAGAGGAAAGCGTTTATTGTAGAGCTTCGGCAGTTATCCCGTGTGAACCATCCTAATATTGTAAAGCTTTATGGAGCCTGCTTGAATCCAGTGTGTCTTGTGATGGAATATGCTGAAGGGGGCTCTTTATATAATGTGCTGCATGGTGCTGAACCATTGCCATATTATACTGCTGCCCACGCAATGAGTTGGTGTTTACAGTGTTCCCAAGGAGTGGCTTATCTTCACAGCATGCAACCCAAAGCGCTAATTCACAGGGACCTGAAACCACCAAACTTACTGCTGGTTGCAGGGGGGACAGTTCTAAAAATTTGTGATTTTGGTACAGCCTGTGACATTCAGACACACATGACCAATAACAAGGGGAGTGCTGCTTGGATGGCACCTGAAGTTTTTGAAGGTAGTAATTACAGTGAAAAATGTGACGTCTTCAGCTGGGGTATTATTCTTTGGGAAGTGATAACGCGTCGGAAACCCTTTGATGAGATTGGTGGCCCAGCTTTCCGAATCATGTGGGCTGTTCATAATGGTACTCGACCACCACTGATAAAAAATTTACCTAAGCCCATTGAGAGCCTGATGACTCGTTGTTGGTCTAAAGATCCTTCCCAGCGCCCTTCAATGGAGGAAATTGTGAAAATAATGACTCACTTGATGCGGTACTTTCCAGGAGCAGATGAGCCATTACAGTATCCTTGTCAGTATTCAGATGAAGGACAGAGCAACTCTGCCACCAGTACAGGCTCATTCATGGACATTGCTTCTACAAATACGAGTAACAAAAGTGACACTAATATGGAGCAAGTTCCTGCCACAAATGATACTATTAAGCGCTTAGAATCAAAATTGTTGAAAAATCAGGCAAAGCAACAGAGTGAATCTGGACGTTTAAGCTTGGGAGCCTCCCGTGGGAGCAGTGTGGAGAGCTTGCCCCCAACCTCTGAGGGCAAGAGGATGAGTGCTGACATGTCTGAAATAGAAGCTAGGATCGCCGCAACCACAGGCAACGGACAGCCAAGACGTAGATCCATCCAAGACTTGACTGTAACTGGAACAGAACCTGGTCAGGTGAGCAGTAGGTCATCCAGTCCCAGTGTCAGAATGATTACTACCTCAGGACCAACCTCAGAAAAGCCAACTCGAAGTCATCCATGGACCCCTGATGATTCCACAGATACCAATGGATCAGATAACTCCATCCCAATGGCTTATCTTACACTGGATCACCAACTACAGCCTCTAGCACCGTGCCCAAACTCCAAAGAATCTATGGCAGTGTTTGAACAGCATTGTAAAATGGCACAAGAATATATGAAAGTTCAAACAGAAATTGCATTGTTATTACAGAGAAAGCAAGAACTAGTTGCAGAACTGGACCAGGATGAAAAGGACCAGCAAAATACATCTCGCCTGGTACAGGAACATAAAAAGCTTTTAGATGAAAACAAAAGCCTTTCTACTTACTACCAGCAATGCAAAAAACAACTAGAGGTCATCAGAAGTCAGCAGCAGAAACGACAAGGCACTTCATGA
人JNK CDS(SEQ ID NO:21)
ATGAGCAGAAGCAAGCGTGACAACAATTTTTATAGTGTAGAGATTGGAGATTCTACATTCACAGTCCTGAAACGATATCAGAATTTAAAACCTATAGGCTCAGGAGCTCAAGGAATAGTATGCGCAGCTTATGATGCCATTCTTGAAAGAAATGTTGCAATCAAGAAGCTAAGCCGACCATTTCAGAATCAGACTCATGCCAAGCGGGCCTACAGAGAGCTAGTTCTTATGAAATGTGTTAATCACAAAAATATAATTGGCCTTTTGAATGTTTTCACACCACAGAAATCCCTAGAAGAATTTCAAGATGTTTACATAGTCATGGAGCTCATGGATGCAAATCTTTGCCAAGTGATTCAGATGGAGCTAGATCATGAAAGAATGTCCTACCTTCTCTATCAGATGCTGTGTGGAATCAAGCACCTTCATTCTGCTGGAATTATTCATCGGGACTTAAAGCCCAGTAATATAGTAGTAAAATCTGATTGCACTTTGAAGATTCTTGACTTCGGTCTGGCCAGGACTGCAGGAACGAGTTTTATGATGACGCCTTATGTAGTGACTCGCTACTACAGAGCACCCGAGGTCATCCTTGGCATGGGCTACAAGGAAAACGTTGACATTTGGTCAGTTGGGTGCATCATGGGAGAAATGATCAAAGGTGGTGTTTTGTTCCCAGGTACAGATCATATTGATCAGTGGAATAAAGTTATTGAACAGCTTGGAACACCATGTCCTGAATTCATGAAGAAACTGCAACCAACAGTAAGGACTTACGTTGAAAACAGACCTAAATATGCTGGATATAGCTTTGAGAAACTCTTCCCTGATGTCCTTTTCCCAGCTGACTCAGAACACAACAAACTTAAAGCCAGTCAGGCAAGGGATTTGTTATCCAAAATGCTGGTAATAGATGCATCTAAAAGGATCTCTGTAGATGAAGCTCTCCAACACCCGTACATCAATGTCTGGTATGATCCTTCTGAAGCAGAAGCTCCACCACCAAAGATCCCTGACAAGCAGTTAGATGAAAGGGAACACACAATAGAAGAGTGGAAAGAATTGATATATAAGGAAGTTATGGACTTGGAGGAGAGAACCAAGAATGGAGTTATACGGGGGCAGCCCTCTCCTTTAGGTGCAGCAGTGATCAATGGCTCTCAGCATCCATCATCATCGTCGTCTGTCAATGATGTGTCTTCAATGTCAACAGATCCGACTTTGGCCTCTGATACAGACAGCAGTCTAGAAGCAGCAGCTGGGCCTCTGGGCTGCTGTAGATGA
人AP-1CDS(SEQ ID NO:22)
ATGACTGCAAAGATGGAAACGACCTTCTATGACGATGCCCTCAACGCCTCGTTCCTCCCGTCCGAGAGCGGACCTTATGGCTACAGTAACCCCAAGATCCTGAAACAGAGCATGACCCTGAACCTGGCCGACCCAGTGGGGAGCCTGAAGCCGCACCTCCGCGCCAAGAACTCGGACCTCCTCACCTCGCCCGACGTGGGGCTGCTCAAGCTGGCGTCGCCCGAGCTGGAGCGCCTGATAATCCAGTCCAGCAACGGGCACATCACCACCACGCCGACCCCCACCCAGTTCCTGTGCCCCAAGAACGTGACAGATGAGCAGGAGGGCTTCGCCGAGGGCTTCGTGCGCGCCCTGGCCGAACTGCACAGCCAGAACACGCTGCCCAGCGTCACGTCGGCGGCGCAGCCGGTCAACGGGGCAGGCATGGTGGCTCCCGCGGTAGCCTCGGTGGCAGGGGGCAGCGGCAGCGGCGGCTTCAGCGCCAGCCTGCACAGCGAGCCGCCGGTCTACGCAAACCTCAGCAACTTCAACCCAGGCGCGCTGAGCAGCGGCGGCGGGGCGCCCTCCTACGGCGCGGCCGGCCTGGCCTTTCCCGCGCAACCCCAGCAGCAGCAGCAGCCGCCGCACCACCTGCCCCAGCAGATGCCCGTGCAGCACCCGCGGCTGCAGGCCCTGAAGGAGGAGCCTCAGACAGTGCCCGAGATGCCCGGCGAGACACCGCCCCTGTCCCCCATCGACATGGAGTCCCAGGAGCGGATCAAGGCGGAGAGGAAGCGCATGAGGAACCGCATCGCTGCCTCCAAGTGCCGAAAAAGGAAGCTGGAGAGAATCGCCCGGCTGGAGGAAAAAGTGAAAACCTTGAAAGCTCAGAACTCGGAGCTGGCGTCCACGGCCAACATGCTCAGGGAACAGGTGGCACAGCTTAAACAGAAAGTCATGAACCACGTTAACAGTGGGTGCCAACTCATGCTAACGCAGCAGTTGCAAACATTTTGA
人ASK1 CDS(SEQ ID NO:23)
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人RIP CDS(SEQ ID NO:24)
ATGTGGAGCAAACTGAATAATGAAGAGCACAATGAGCTGAGGGAAGTGGACGGCACCGCTAAGAAGAATGGCGGCACCCTCTACTACATGGCGCCCGAGCACCTGAATGACGTCAACGCAAAGCCCACAGAGAAGTCGGATGTGTACAGCTTTGCTGTAGTACTCTGGGCGATATTTGCAAATAAGGAGCCATATGAAAATGCTATCTGTGAGCAGCAGTTGATAATGTGCATAAAATCTGGGAACAGGCCAGATGTGGATGACATCACTGAGTACTGCCCAAGAGAAATTATCAGTCTCATGAAGCTCTGCTGGGAAGCGAATCCGGAAGCTCGGCCGACATTTCCTGGCATTGAAGAAAAATTTAGGCCTTTTTATTTAAGTCAATTAGAAGAAAGTGTAGAAGAGGACGTGAAGAGTTTAAAGAAAGAGTATTCAAACGAAAATGCAGTTGTGAAGAGAATGCAGTCTCTTCAACTTGATTGTGTGGCAGTACCTTCAAGCCGGTCAAATTCAGCCACAGAACAGCCTGGTTCACTGCACAGTTCCCAGGGACTTGGGATGGGTCCTGTGGAGGAGTCCTGGTTTGCTCCTTCCCTGGAGCACCCACAAGAAGAGAATGAGCCCAGCCTGCAGAGTAAACTCCAAGACGAAGCCAACTACCATCTTTATGGCAGCCGCATGGACAGGCAGACGAAACAGCAGCCCAGACAGAATGTGGCTTACAACAGAGAGGAGGAAAGGAGACGCAGGGTCTCCCATGACCCTTTTGCACAGCAAAGACCTTACGAGAATTTTCAGAATACAGAGGGAAAAGGCACTGCTTATTCCAGTGCAGCCAGTCATGGTAATGCAGTGCACCAGCCCTCAGGGCTCACCAGCCAACCTCAAGTACTGTATCAGAACAATGGATTATATAGCTCACATGGCTTTGGAACAAGACCACTGGATCCAGGAACAGCAGGTCCCAGAGTTTGGTACAGGCCAATTCCAAGTCATATGCCTAGTCTGCATAATATCCCAGTGCCTGAGACCAACTATCTAGGAAATACACCCACCATGCCATTCAGCTCCTTGCCACCAACAGATGAATCTATAAAATATACCATATACAATAGTACTGGCATTCAGATTGGAGCCTACAATTATATGGAGATTGGTGGGACGAGTTCATCACTACTAGACAGCACAAATACGAACTTCAAAGAAGAGCCAGCTGCTAAGTACCAAGCTATCTTTGATAATACCACTAGTCTGACGGATAAACACCTGGACCCAATCAGGGAAAATCTGGGAAAGCACTGGAAAAACTGTGCCCGTAAACTGGGCTTCACACAGTCTCAGATTGATGAAATTGACCATGACTATGAGCGAGATGGACTGAAAGAAAAGGTTTACCAGATGCTCCAAAAGTGGGTGATGAGGGAAGGCATAAAGGGAGCCACGGTGGGGAAGCTGGCCCAGGCGCTCCACCAGTGTTCCAGGATCGACCTTCTGAGCAGCTTGATTTACGTCAGCCAGAACTAA
人MEKK 3CDS(SEQ ID NO:25)
ATGGACGAACAGGAGGCATTGAACTCAATCATGAACGATCTGGTGGCCCTCCAGATGAACCGACGTCACCGGATGCCTGGATATGAGACCATGAAGAACAAAGACACAGGTCACTCAAATAGGCAGAAAAAACACAACAGCAGCAGCTCAGCCCTTCTGAACAGCCCCACAGTAACAACAAGCTCATGTGCAGGGGCCAGTGAGAAAAAGAAATTTTTGAGTGACGTCAGAATCAAGTTCGAGCACAACGGGGAGAGGCGAATTATAGCGTTCAGCCGGCCTGTGAAATATGAAGATGTGGAGCACAAGGTGACAACAGTATTTGGACAACCTCTTGATCTACATTACATGAACAATGAGCTCTCCATCCTGCTGAAAAACCAAGATGATCTTGATAAAGCAATTGACATTTTAGATAGAAGCTCAAGCATGAAAAGCCTTAGGATATTGCTGTTGTCCCAGGACAGAAACCATAACAGTTCCTCTCCCCACTCTGGGGTGTCCAGACAGGTGCGGATCAAGGCTTCCCAGTCCGCAGGGGATATAAATACTATCTACCAGCCCCCCGAGCCCAGAAGCAGGCACCTCTCTGTCAGCTCCCAGAACCCTGGCCGAAGCTCACCTCCCCCTGGCTATGTTCCTGAGCGGCAGCAGCACATTGCCCGGCAGGGGTCCTACACCAGCATCAACAGTGAGGGGGAGTTCATCCCAGAGACCAGCGAGCAGTGCATGCTGGATCCCCTGAGCAGTGCAGAAAATTCCTTGTCTGGAAGCTGCCAATCCTTGGACAGGTCAGCAGACAGCCCATCCTTCCGGAAATCACGAATGTCCCGTGCCCAGAGCTTCCCTGACAACAGACAGGAATACTCAGATCGGGAAACTCAGCTTTATGACAAAGGGGTCAAAGGTGGAACCTACCCCCGGCGCTACCACGTGTCTGTGCACCACAAGGACTACAGTGATGGCAGAAGAACATTTCCCCGAATACGGCGTCATCAAGGCAACTTGTTCACCCTGGTGCCCTCCAGCCGCTCCCTGAGCACAAATGGCGAGAACATGGGTCTGGCTGTGCAATACCTGGACCCCCGTGGGCGCCTGCGGAGTGCGGACAGCGAGAATGCCCTCTCTGTGCAGGAGAGGAATGTGCCAACCAAGTCTCCCAGTGCCCCCATCAACTGGCGCCGGGGAAAGCTCCTGGGCCAGGGTGCCTTCGGCAGGGTCTATTTGTGCTATGACGTGGACACGGGACGTGAACTTGCTTCCAAGCAGGTCCAATTTGATCCAGACAGTCCTGAGACAAGCAAGGAGGTGAGTGCTCTGGAGTGCGAGATCCAGTTGCTAAAGAACTTGCAGCATGAGCGCATCGTGCAGTACTATGGCTGTCTGCGGGACCGCGCTGAGAAGACCCTGACCATCTTCATGGAGTACATGCCAGGGGGCTCGGTGAAAGACCAGTTGAAGGCTTACGGTGCTCTGACAGAGAGCGTGACCCGAAAGTACACGCGGCAGATCCTGGAGGGCATGTCCTACCTGCACAGCAACATGATTGTTCACCGGGACATTAAGGGAGCCAACATCCTCCGAGACTCTGCTGGGAATGTAAAGCTGGGGGACTTTGGGGCCAGCAAACGCCTGCAGACGATCTGTATGTCGGGGACGGGCATGCGCTCCGTCACTGGCACACCCTACTGGATGAGCCCTGAGGTGATCAGCGGCGAGGGCTATGGAAGGAAAGCAGACGTGTGGAGCCTGGGCTGCACTGTGGTGGAGATGCTGACAGAGAAACCACCGTGGGCAGAGTATGAAGCTATGGCCGCCATCTTCAAGATTGCCACCCAGCCCACCAATCCTCAGCTGCCCTCCCACATCTCTGAACATGGCCGGGACTTCCTGAGGCGCATTTTTGTGGAGGCTCGCCAGAGACCTTCAGCTGAGGAGCTGCTCACACACCACTTTGCACAGCTCATGTACTGA
人MEKK 6CDS(SEQ ID NO:26)
ATGGCGGGGCCGTGTCCCCGGTCCGGGGCGGAGCGCGCCGGCAGCTGCTGGCAGGACCCGCTGGCCGTGGCGCTGAGCCGGGGCCGGCAGCTCGCGGCGCCCCCGGGCCGGGGCTGCGCGCGGAGCCGGCCGCTCAGCGTGGTCTACGTGCTGACCCGGGAGCCGCAGCCCGGGCTCGAGCCTCGGGAGGGAACCGAGGCGGAGCCGCTGCCCCTGCGCTGCCTGCGCGAGGCTTGCGCGCAGGTCCCCCGGCCGCGGCCGCCCCCGCAGCTGCGCAGCCTGCCCTTCGGGACGCTGGAGCTAGGCGACACCGCGGCTCTGGATGCCTTCTACAACGCGGATGTGGTGGTGCTGGAGGTGAGCAGCTCGCTGGTACAGCCCTCCCTGTTCTACCACCTTGGTGTGCGTGAGAGCTTCAGCATGACCAACAATGTGCTCCTCTGCTCCCAGGCCGACCTCCCTGACCTGCAGGCCCTGCGGGAGGATGTTTTCCAGAAGAACTCGGATTGCGTTGGCAGCTACACACTGATCCCCTATGTGGTGACGGCCACTGGTCGGGTGCTGTGTGGTGATGCAGGCCTTCTGCGGGGCCTGGCTGATGGGCTGGTACAGGCTGGAGTGGGGACCGAGGCCCTGCTCACTCCCCTGGTGGGCCGGCTTGCCCGCCTGCTGGAGGCCACACCCACAGACTCTTGTGGCTATTTCCGGGAGACCATTCGGCGGGACATCCGGCAGGCGCGGGAGCGGTTCAGTGGGCCACAGCTGCGGCAGGAGCTGGCTCGCCTGCAGCGGAGACTGGACAGCGTGGAGCTGCTGAGCCCCGACATCATCATGAACTTGCTGCTCTCCTACCGCGATGTGCAGGACTACTCGGCCATCATTGAGCTGGTGGAGACGCTGCAGGCCTTGCCCACCTGTGATGTGGCCGAGCAGCATAATGTCTGCTTCCACTACACTTTTGCCCTCAACCGGAGGAACAGGCCTGGGGACCGGGCGAAGGCCCTGTCTGTGCTGCTGCCGCTGGTACAGCTTGAGGGCTCTGTGGCGCCCGATCTGTACTGCATGTGTGGCCGTATCTACAAGGACATGTTCTTCAGCTCGGGTTTCCAGGATGCTGGGCACCGGGAGCAGGCCTATCACTGGTATCGCAAGGCTTTTGACGTAGAGCCCAGCCTTCACTCAGGCATCAATGCAGCTGTGCTCCTCATTGCTGCCGGGCAGCACTTTGAGGATTCCAAAGAGCTCCGGCTAATAGGCATGAAGCTGGGCTGCCTGCTGGCCCGCAAAGGCTGCGTGGAGAAGATGCAGTATTACTGGGATGTGGGTTTCTACCTGGGAGCCCAGATCCTCGCCAATGACCCCACCCAGGTGGTGCTGGCTGCAGAGCAGCTGTATAAGCTCAATGCCCCCATATGGTACCTGGTGTCCGTGATGGAGACCTTCCTGCTCTACCAGCACTTCAGGCCCACGCCAGAGCCCCCTGGAGGGCCACCACGCCGTGCCCACTTCTGGCTCCACTTCTTGCTACAGTCCTGCCAACCATTCAAGACAGCCTGTGCCCAGGGCGACCAGTGCTTGGTGCTGGTCCTGGAGATGAACAAGGTGCTGCTGCCTGCAAAGCTCGAGGTTCGGGGTACTGACCCAGTAAGCACAGTGACCCTGAGCCTGCTGGAGCCTGAGACCCAGGACATTCCCTCCAGCTGGACCTTCCCAGTCGCCTCCATATGCGGAGTCAGCGCCTCAAAGCGCGACGAGCGCTGCTGCTTCCTCTATGCACTCCCCCCGGCTCAGGACGTCCAGCTGTGCTTCCCCAGCGTAGGGCACTGCCAGTGGTTCTGCGGCCTGATCCAGGCCTGGGTGACGAACCCGGATTCCACGGCGCCCGCGGAGGAGGCGGAGGGCGCGGGGGAGATGTTGGAGTTTGATTATGAGTACACGGAGACGGGCGAGCGGCTGGTGCTGGGCAAGGGCACGTATGGGGTGGTGTACGCGGGCCGCGATCGCCACACGAGGGTGCGCATCGCCATCAAGGAGATCCCGGAGCGGGACAGCAGGTTCTCTCAGCCCCTGCATGAAGAGATCGCTCTTCACAGACGCCTGCGCCACAAGAACATAGTGCGCTATCTGGGCTCAGCTAGCCAGGGCGGCTACCTTAAGATCTTCATGGAGGAAGTGCCTGGAGGCAGCCTGTCCTCCTTGCTGCGGTCGGTGTGGGGACCCCTGAAGGACAACGAGAGCACCATCAGTTTCTACACCCGCCAGATCCTGCAGGGACTTGGCTACTTGCACGACAACCACATCGTGCACAGGGACATAAAAGGGGACAATGTGCTGATCAACACCTTCAGTGGGCTGCTCAAGATTTCTGACTTCGGCACCTCCAAGCGGCTGGCAGGCATCACACCTTGCACTGAGACCTTCACAGGAACTCTGCAGTATATGGCCCCAGAAATCATTGACCAGGGCCCACGCGGGTATGGGAAAGCAGCTGACATCTGGTCACTGGGCTGCACTGTCATTGAGATGGCCACAGGTCGCCCCCCCTTCCACGAGCTCGGGAGCCCACAGGCTGCCATGTTTCAGGTGGGTATGTACAAGGTCCATCCGCCAATGCCCAGCTCTCTGTCGGCCGAGGCCCAAGCCTTTCTCCTCCGAACTTTTGAGCCAGACCCCCGCCTCCGAGCCAGCGCCCAGACACTGCTGGGGGACCCCTTCCTGCAGCCTGGGAAAAGGAGCCGCAGCCCCAGCTCCCCACGACATGCTCCACGGCCCTCAGATGCCCCTTCTGCCAGTCCCACTCCTTCAGCCAACTCAACCACCCAGTCTCAGACATTCCCGTGCCCTCAGGCACCCTCTCAGCACCCACCCAGCCCCCCGAAGCGCTGCCTCAGTTATGGGGGCACCAGCCAGCTCCGGGTGCCCGAGGAGCCTGCGGCCGAGGAGCCTGCGTCTCCGGAGGAGAGTTCGGGGCTGAGCCTGCTGCACCAGGAGAGCAAGCGTCGGGCCATGCTGGCCGCAGTATTGGAGCAGGAGCTGCCAGCGCTGGCGGAGAATCTGCACCAGGAGCAGAAGCAAGAGCAGGGGGCCCGTCTGGGCAGAAACCATGTGGAAGAGCTGCTGCGCTGCCTCGGGGCACACATCCACACTCCCAACCGCCGGCAGCTCGCCCAGGAGCTGCGGGCGCTGCAAGGACGGCTGAGGGCCCAGGGCCTTGGGCCTGCGCTTCTGCACAGACCGCTGTTTGCCTTCCCGGATGCGGTGAAGCAGATCCTCCGCAAGCGCCAGATCCGTCCACACTGGATGTTCGTTCTGGACTCACTGCTCAGCCGTGCTGTGCGGGCAGCCCTGGGTGTGCTAGGACCGGAGGTGGAGAAGGAGGCGGTCTCACCGAGGTCAGAGGAGCTGAGTAATGAAGGGGACTCCCAGCAGAGCCCAGGCCAGCAGAGCCCGCTTCCGGTGGAGCCCGAGCAGGGCCCCGCTCCTCTGATGGTGCAGCTGAGCCTCTTGAGGGCAGAGACTGATCGGCTGCGCGAAATCCTGGCGGGGAAGGAACGGGAGTACCAGGCCCTGGTGCAGCGGGCTCTACAGCGGCTGAATGAGGAAGCCCGGACCTATGTCCTGGCCCCAGAGCCTCCAACTGCTCTTTCAACGGACCAGGGCCTGGTGCAGTGGCTACAGGAACTGAATGTGGATTCAGGCACCATCCAAATGCTGTTGAACCATAGCTTCACCCTCCACACTCTGCTCACCTATGCCACTCGAGATGACCTCATCTACACCCGCATCAGGGGAGGGATGGTATGCCGCATCTGGAGGGCCATCTTGGCACAGCGAGCAGGATCCACACCAGTCACCTCTGGACCCTGA
人NIK CDS(SEQ ID NO:27)
ATGGCAGTGATGGAAATGGCCTGCCCAGGTGCCCCTGGCTCAGCAGTGGGGCAGCAGAAGGAACTCCCCAAAGCCAAGGAGAAGACGCCGCCACTGGGGAAGAAACAGAGCTCCGTCTACAAGCTTGAGGCCGTGGAGAAGAGCCCTGTGTTCTGCGGAAAGTGGGAGATCCTGAATGACGTGATTACCAAGGGCACAGCCAAGGAAGGCTCCGAGGCAGGGCCAGCTGCCATCTCTATCATCGCCCAGGCTGAGTGTGAGAATAGCCAAGAGTTCAGCCCCACCTTTTCAGAACGCATTTTCATCGCTGGGTCCAAACAGTACAGCCAGTCCGAGAGTCTTGATCAGATCCCCAACAATGTGGCCCATGCTACAGAGGGCAAAATGGCCCGTGTGTGTTGGAAGGGAAAGCGTCGCAGCAAAGCCCGGAAGAAACGGAAGAAGAAGAGCTCAAAGTCCCTGGCTCATGCAGGAGTGGCCTTGGCCAAACCCCTCCCCAGGACCCCTGAGCAGGAGAGCTGCACCATCCCAGTGCAGGAGGATGAGTCTCCACTCGGCGCCCCATATGTTAGAAACACCCCGCAGTTCACCAAGCCTCTGAAGGAACCAGGCCTTGGGCAACTCTGTTTTAAGCAGCTTGGCGAGGGCCTACGGCCGGCTCTGCCTCGATCAGAACTCCACAAACTGATCAGCCCCTTGCAATGTCTGAACCACGTGTGGAAACTGCACCACCCCCAGGACGGAGGCCCCCTGCCCCTGCCCACGCACCCCTTCCCCTATAGCAGACTGCCTCATCCCTTCCCATTCCACCCTCTCCAGCCCTGGAAACCTCACCCTCTGGAGTCCTTCCTGGGCAAACTGGCCTGTGTAGACAGCCAGAAACCCTTGCCTGACCCACACCTGAGCAAACTGGCCTGTGTAGACAGTCCAAAGCCCCTGCCTGGCCCACACCTGGAGCCCAGCTGCCTGTCTCGTGGTGCCCATGAGAAGTTTTCTGTGGAGGAATACCTAGTGCATGCTCTGCAAGGCAGCGTGAGCTCAGGCCAGGCCCACAGCCTGACCAGCCTGGCCAAGACCTGGGCAGCAAGGGGCTCCAGATCCCGGGAGCCCAGCCCCAAAACTGAGGACAACGAGGGTGTCCTGCTCACTGAGAAACTCAAGCCAGTGGATTATGAGTACCGAGAAGAAGTCCACTGGGCCACGCACCAGCTCCGCCTGGGCAGAGGCTCCTTCGGAGAGGTGCACAGGATGGAGGACAAGCAGACTGGCTTCCAGTGCGCTGTCAAAAAGGTGCGGCTGGAAGTATTTCGGGCAGAGGAGCTGATGGCATGTGCAGGATTGACCTCACCCAGAATTGTCCCTTTGTATGGAGCTGTGAGAGAAGGGCCTTGGGTCAACATCTTCATGGAGCTGCTGGAAGGTGGCTCCCTGGGCCAGCTGGTCAAGGAGCAGGGCTGTCTCCCAGAGGACCGGGCCCTGTACTACCTGGGCCAGGCCCTGGAGGGTCTGGAATACCTCCACTCACGAAGGATTCTGCATGGGGACGTCAAAGCTGACAACGTGCTCCTGTCCAGCGATGGGAGCCACGCAGCCCTCTGTGACTTTGGCCATGCTGTGTGTCTTCAACCTGATGGCCTGGGAAAGTCCTTGCTCACAGGGGACTACATCCCTGGCACAGAGACCCACATGGCTCCGGAGGTGGTGCTGGGCAGGAGCTGCGACGCCAAGGTGGATGTCTGGAGCAGCTGCTGTATGATGCTGCACATGCTCAACGGCTGCCACCCCTGGACTCAGTTCTTCCGAGGGCCGCTCTGCCTCAAGATTGCCAGCGAGCCTCCGCCTGTGAGGGAGATCCCACCCTCCTGCGCCCCTCTCACAGCCCAGGCCATCCAAGAGGGGCTGAGGAAAGAGCCCATCCACCGCGTGTCTGCAGCGGAGCTGGGAGGGAAGGTGAACCGGGCACTACAGCAAGTGGGAGGTCTGAAGAGCCCTTGGAGGGGAGAATATAAAGAACCAAGACATCCACCGCCAAATCAAGCCAATTACCACCAGACCCTCCATGCCCAGCCGAGAGAGCTTTCGCCAAGGGCCCCAGGGCCCCGGCCAGCTGAGGAGACAACAGGCAGAGCCCCTAAGCTCCAGCCTCCTCTCCCACCAGAGCCCCCAGAGCCAAACAAGTCTCCTCCCTTGACTTTGAGCAAGGAGGAGTCTGGGATGTGGGAACCCTTACCTCTGTCCTCCCTGGAGCCAGCCCCTGCCAGAAACCCCAGCTCACCAGAGCGGAAAGCAACCGTCCCGGAGCAGGAACTGCAGCAGCTGGAAATAGAATTATTCCTCAACAGCCTGTCCCAGCCATTTTCTCTGGAGGAGCAGGAGCAAATTCTCTCGTGCCTCAGCATCGACAGCCTCTCCCTGTCGGATGACAGTGAGAAGAACCCATCAAAGGCCTCTCAAAGCTCGCGGGACACCCTGAGCTCAGGCGTACACTCCTGGAGCAGCCAGGCCGAGGCTCGAAGCTCCAGCTGGAACATGGTGCTGGCCCGGGGGCGGCCCACCGACACCCCAAGCTATTTCAATGGTGTGAAAGTCCAAATACAGTCTCTTAATGGTGAACACCTGCACATCCGGGAGTTCCACCGGGTCAAAGTGGGAGACATCGCCACTGGCATCAGCAGCCAGATCCCAGCTGCAGCCTTCAGCTTGGTCACCAAAGACGGGCAGCCTGTTCGCTACGACATGGAGGTGCCAGACTCGGGCATCGACCTGCAGTGCACACTGGCCCCTGATGGCAGCTTCGCCTGGAGCTGGAGGGTCAAGCATGGCCAGCTGGAGAACAGGCCCTAA人IKK CDS(SEQ ID NO:28)
ATGTTTTCAGGGGGGTGTCATAGCCCCGGGTTTGGCCGCCCCAGCCCCGCCTTCCCCGCCCCGGGGAGCCCGCCCCCTGCCCCGCGTCCCTGCCGACAGGAAACAGGTGAGCAGATTGCCATCAAGCAGTGCCGGCAGGAGCTCAGCCCCCGGAACCGAGAGCGGTGGTGCCTGGAGATCCAGATCATGAGAAGGCTGACCCACCCCAATGTGGTGGCTGCCCGAGATGTCCCTGAGGGGATGCAGAACTTGGCGCCCAATGACCTGCCCCTGCTGGCCATGGAGTACTGCCAAGGAGGAGATCTCCGGAAGTACCTGAACCAGTTTGAGAACTGCTGTGGTCTGCGGGAAGGTGCCATCCTCACCTTGCTGAGTGACATTGCCTCTGCGCTTAGATACCTTCATGAAAACAGAATCATCCATCGGGATCTAAAGCCAGAAAACATCGTCCTGCAGCAAGGAGAACAGAGGTTAATACACAAAATTATTGACCTAGGATATGCCAAGGAGCTGGATCAGGGCAGTCTTTGCACATCATTCGTGGGGACCCTGCAGTACCTGGCCCCAGAGCTACTGGAGCAGCAGAAGTACACAGTGACCGTCGACTACTGGAGCTTCGGCACCCTGGCCTTTGAGTGCATCACGGGCTTCCGGCCCTTCCTCCCCAACTGGCAGCCCGTGCAGTGGCATTCAAAAGTGCGGCAGAAGAGTGAGGTGGACATTGTTGTTAGCGAAGACTTGAATGGAACGGTGAAGTTTTCAAGCTCTTTACCCTACCCCAATAATCTTAACAGTGTCCTGGCTGAGCGACTGGAGAAGTGGCTGCAACTGATGCTGATGTGGCACCCCCGACAGAGGGGCACGGATCCCACGTATGGGCCCAATGGCTGCTTCAAGGCCCTGGATGACATCTTAAACTTAAAGCTGGTTCATATCTTGAACATGGTCACGGGCACCATCCACACCTACCCTGTGACAGAGGATGAGAGTCTGCAGAGCTTGAAGGCCAGAATCCAACAGGACACGGGCATCCCAGAGGAGGACCAGGAGCTGCTGCAGGAAGCGGGCCTGGCGTTGATCCCCGATAAGCCTGCCACTCAGTGTATTTCAGACGGCAAGTTAAATGAGGGCCACACATTGGACATGGATCTTGTTTTTCTCTTTGACAACAGTAAAATCACCTATGAGACTCAGATCTCCCCACGGCCCCAACCTGAAAGTGTCAGCTGTATCCTTCAAGAGCCCAAGAGGAATCTCGCCTTCTTCCAGCTGAGGAAGGTGTGGGGCCAGGTCTGGCACAGCATCCAGACCCTGAAGGAAGATTGCAACCGGCTGCAGCAGGGACAGCGAGCCGCCATGATGAATCTCCTCCGAAACAACAGCTGCCTCTCCAAAATGAAGAATTCCATGGCTTCCATGTCTCAGCAGCTCAAGGCCAAGTTGGATTTCTTCAAAACCAGCATCCAGATTGACCTGGAGAAGTACAGCGAGCAAACCGAGTTTGGGATCACATCAGATAAACTGCTGCTGGCCTGGAGGGAAATGGAGCAGGCTGTGGAGCTCTGTGGGCGGGAGAACGAAGTGAAACTCCTGGTAGAACGGATGATGGCTCTGCAGACCGACATTGTGGACTTACAGAGGAGCCCCATGGGCCGGAAGCAGGGGGGAACGCTGGACGACCTAGAGGAGCAAGCAAGGGAGCTGTACAGGAGACTAAGGGAAAAACCTCGAGACCAGCGAACTGAGGGTGACAGTCAGGAAATGGTACGGCTGCTGCTTCAGGCAATTCAGAGCTTCGAGAAGAAAGTGCGAGTGATCTATACGCAGCTCAGTAAAACTGTGGTTTGCAAGCAGAAGGCGCTGGAACTGTTGCCCAAGGTGGAAGAGGTGGTGAGCTTAATGAATGAGGATGAGAAGACTGTTGTCCGGCTGCAGGAGAAGCGGCAGAAGGAGCTCTGGAATCTCCTGAAGATTGCTTGTAGCAAGGTCCGTGGTCCTGTCAGTGGAAGCCCGGATAGCATGAATGCCTCTCGACTTAGCCAGCCTGGGCAGCTGATGTCTCAGCCCTCCACGGCCTCCAACAGCTTACCTGAGCCAGCCAAGAAGAGTGAAGAACTGGTGGCTGAAGCACATAACCTCTGCACCCTGCTAGAAAATGCCATACAGGACACTGTGAGGGAACAAGACCAGAGTTTCACGGCCCTAGACTGGAGCTGGTTACAGACGGAAGAAGAAGAGCACAGCTGCCTGGAGCAGGCCTCATGA
人NF-κB CDS(SEQ ID NO:29)
ATGGCAGAAGATGATCCATATTTGGGAAGGCCTGAACAAATGTTTCATTTGGATCCTTCTTTGACTCATACAATATTTAATCCAGAAGTATTTCAACCACAGATGGCACTGCCAACAGATGGCCCATACCTTCAAATATTAGAGCAACCTAAACAGAGAGGATTTCGTTTCCGTTATGTATGTGAAGGCCCATCCCATGGTGGACTACCTGGTGCCTCTAGTGAAAAGAACAAGAAGTCTTACCCTCAGGTCAAAATCTGCAACTATGTGGGACCAGCAAAGGTTATTGTTCAGTTGGTCACAAATGGAAAAAATATCCACCTGCATGCCCACAGCCTGGTGGGAAAACACTGTGAGGATGGGATCTGCACTGTAACTGCTGGACCCAAGGACATGGTGGTCGGCTTCGCAAACCTGGGTATACTTCATGTGACAAAGAAAAAAGTATTTGAAACACTGGAAGCACGAATGACAGAGGCGTGTATAAGGGGCTATAATCCTGGACTCTTGGTGCACCCTGACCTTGCCTATTTGCAAGCAGAAGGTGGAGGGGACCGGCAGCTGGGAGATCGGGAAAAAGAGCTAATCCGCCAAGCAGCTCTGCAGCAGACCAAGGAGATGGACCTCAGCGTGGTGCGGCTCATGTTTACAGCTTTTCTTCCGGATAGCACTGGCAGCTTCACAAGGCGCCTGGAACCCGTGGTATCAGACGCCATCTATGACAGTAAAGCCCCCAATGCATCCAACTTGAAAATTGTAAGAATGGACAGGACAGCTGGATGTGTGACTGGAGGGGAGGAAATTTATCTTCTTTGTGACAAAGTTCAGAAAGATGACATCCAGATTCGATTTTATGAAGAGGAAGAAAATGGTGGAGTCTGGGAAGGATTTGGAGATTTTTCCCCCACAGATGTTCATAGACAATTTGCCATTGTCTTCAAAACTCCAAAGTATAAAGATATTAATATTACAAAACCAGCCTCTGTGTTTGTCCAGCTTCGGAGGAAATCTGACTTGGAAACTAGTGAACCAAAACCTTTCCTCTACTATCCTGAAATCAAAGATAAAGAAGAAGTGCAGAGGAAACGTCAGAAGCTCATGCCCAATTTTTCGGATAGTTTCGGCGGTGGTAGTGGTGCTGGAGCTGGAGGCGGAGGCATGTTTGGTAGTGGCGGTGGAGGAGGGGGCACTGGAAGTACAGGTCCAGGGTATAGCTTCCCACACTATGGATTTCCTACTTATGGTGGGATTACTTTCCATCCTGGAACTACTAAATCTAATGCTGGGATGAAGCATGGAACCATGGACACTGAATCTAAAAAGGACCCTGAAGGTTGTGACAAAAGTGATGACAAAAACACTGTAAACCTCTTTGGGAAAGTTATTGAAACCACAGAGCAAGATCAGGAGCCCAGCGAGGCCACCGTTGGGAATGGTGAGGTCACTCTAACGTATGCAACAGGAACAAAAGAAGAGAGTGCTGGAGTTCAGGATAACCTCTTTCTAGAGAAGGCTATGCAGCTTGCAAAGAGGCATGCCAATGCCCTTTTCGACTACGCGGTGACAGGAGACGTGAAGATGCTGCTGGCCGTCCAGCGCCATCTCACTGCTGTGCAGGATGAGAATGGGGACAGTGTCTTACACTTAGCAATCATCCACCTTCATTCTCAACTTGTGAGGGATCTACTAGAAGTCACATCTGGTTTGATTTCTGATGACATTATCAACATGAGAAATGATCTGTACCAGACGCCCTTGCACTTGGCAGTGATCACTAAGCAGGAAGATGTGGTGGAGGATTTGCTGAGGGCTGGGGCCGACCTGAGCCTTCTGGACCGCTTGGGTAACTCTGTTTTGCACCTAGCTGCCAAAGAAGGACATGATAAAGTTCTCAGTATCTTACTCAAGCACAAAAAGGCAGCACTACTTCTTGACCACCCCAACGGGGACGGTCTGAATGCCATTCATCTAGCCATGATGAGCAATAGCCTGCCATGTTTGCTGCTGCTGGTGGCCGCTGGGGCTGACGTCAATGCTCAGGAGCAGAAGTCCGGGCGCACAGCACTGCACCTGGCTGTGGAGCACGACAACATCTCATTGGCAGGCTGCCTGCTCCTGGAGGGTGATGCCCATGTGGACAGTACTACCTACGATGGAACCACACCCCTGCATATAGCAGCTGGGAGAGGGTCCACCAGGCTGGCAGCTCTTCTCAAAGCAGCAGGAGCAGATCCCCTGGTGGAGAACTTTGAGCCTCTCTATGACCTGGATGACTCTTGGGAAAATGCAGGAGAGGATGAAGGAGTTGTGCCTGGAACCACGCCTCTAGATATGGCCACCAGCTGGCAGGTATTTGACATATTAAATGGGAAACCATATGAGCCAGAGTTTACATCTGATGATTTACTAGCACAAGGAGACATGAAACAGCTGGCTGAAGATGTGAAGCTGCAGCTGTATAAGTTACTAGAAATTCCTGATCCAGACAAAAACTGGGCTACTCTGGCGCAGAAATTAGGTCTGGGGATACTTAATAATGCCTTCCGGCTGAGTCCTGCTCCTTCCAAAACACTTATGGACAACTATGAGGTCTCTGGGGGTACAGTCAGAGAGCTGGTGGAGGCCCTGAGACAAATGGGCTACACCGAAGCAATTGAAGTGATCCAGGCAGCCTCCAGCCCAGTGAAGACCACCTCTCAGGCCCACTCGCTGCCTCTCTCGCCTGCCTCCACAAGGCAGCAAATAGACGAGCTCCGAGACAGTGACAGTGTCTGCGACAGCGGCGTGGAGACATCCTTCCGCAAACTCAGCTTTACCGAGTCTCTGACCAGTGGTGCCTCACTGCTAACTCTCAACAAAATGCCCCATGATTATGGGCAGGAAGGACCTCTAGAAGGCAAAATTTAG
人CD14 CDS(SEQ ID NO:30)
ATGGAGCGCGCGTCCTGCTTGTTGCTGCTGCTGCTGCCGCTGGTGCACGTCTCTGCGACCACGCCAGAACCTTGTGAGCTGGACGATGAAGATTTCCGCTGCGTCTGCAACTTCTCCGAACCTCAGCCCGACTGGTCCGAAGCCTTCCAGTGTGTGTCTGCAGTAGAGGTGGAGATCCATGCCGGCGGTCTCAACCTAGAGCCGTTTCTAAAGCGCGTCGATGCGGACGCCGACCCGCGGCAGTATGCTGACACGGTCAAGGCTCTCCGCGTGCGGCGGCTCACAGTGGGAGCCGCACAGGTTCCTGCTCAGCTACTGGTAGGCGCCCTGCGTGTGCTAGCGTACTCCCGCCTCAAGGAACTGACGCTCGAGGACCTAAAGATAACCGGCACCATGCCTCCGCTGCCTCTGGAAGCCACAGGACTTGCACTTTCCAGCTTGCGCCTACGCAACGTGTCGTGGGCGACAGGGCGTTCTTGGCTCGCCGAGCTGCAGCAGTGGCTCAAGCCAGGCCTCAAGGTACTGAGCATTGCCCAAGCACACTCGCCTGCCTTTTCCTGCGAACAGGTTCGCGCCTTCCCGGCCCTTACCAGCCTAGACCTGTCTGACAATCCTGGACTGGGCGAACGCGGACTGATGGCGGCTCTCTGTCCCCACAAGTTCCCGGCCATCCAGAATCTAGCGCTGCGCAACACAGGAATGGAGACGCCCACAGGCGTGTGCGCCGCACTGGCGGCGGCAGGTGTGCAGCCCCACAGCCTAGACCTCAGCCACAACTCGCTGCGCGCCACCGTAAACCCTAGCGCTCCGAGATGCATGTGGTCCAGCGCCCTGAACTCCCTCAATCTGTCGTTCGCTGGGCTGGAACAGGTGCCTAAAGGACTGCCAGCCAAGCTCAGAGTGCTCGATCTCAGCTGCAACAGACTGAACAGGGCGCCGCAGCCTGACGAGCTGCCCGAGGTGGATAACCTGACACTGGACGGGAATCCCTTCCTGGTCCCTGGAACTGCCCTCCCCCACGAGGGCTCAATGAACTCCGGCGTGGTCCCAGCCTGTGCACGTTCGACCCTGTCGGTGGGGGTGTCGGGAACCCTGGTGCTGCTCCAAGGGGCCCGGGGCTTTGCCTAA
人MyD88 CDS(SEQ ID NO:31)
ATGCGACCCGACCGCGCTGAGGCTCCAGGACCGCCCGCCATGGCTGCAGGAGGTCCCGGCGCGGGGTCTGCGGCCCCGGTCTCCTCCACATCCTCCCTTCCCCTGGCTGCTCTCAACATGCGAGTGCGGCGCCGCCTGTCTCTGTTCTTGAACGTGCGGACACAGGTGGCGGCCGACTGGACCGCGCTGGCGGAGGAGATGGACTTTGAGTACTTGGAGATCCGGCAACTGGAGACACAAGCGGACCCCACTGGCAGGCTGCTGGACGCCTGGCAGGGACGCCCTGGCGCCTCTGTAGGCCGACTGCTCGAGCTGCTTACCAAGCTGGGCCGCGACGACGTGCTGCTGGAGCTGGGACCCAGCATTGGTGCCGCCGGATGGTGGTGGTTGTCTCTGATGATTACCTGCAGAGCAAGGAATGTGACTTCCAGACCAAATTTGCACTCAGCCTCTCTCCAGGTGCCCATCAGAAGCGACTGA
人IRAK CDS(SEQ ID NO:32)
ATGGCCGGGGGGCCGGGCCCGGGGGAGCCCGCAGCCCCCGGCGCCCAGCACTTCTTGTACGAGGTGCCGCCCTGGGTCATGTGCCGCTTCTACAAAGTGATGGACGCCCTGGAGCCCGCCGACTGGTGCCAGTTCGCCGCCCTGATCGTGCGCGACCAGACCGAGCTGCGGCTGTGCGAGCGCTCCGGGCAGCGCACGGCCAGCGTCCTGTGGCCCTGGATCAACCGCAACGCCCGTGTGGCCGACCTCGTGCACATCCTCACGCACCTGCAGCTGCTCCGTGCGCGGGACATCATCACAGCCTGGCACCCTCCCGCCCCGCTTCCGTCCCCAGGCACCACTGCCCCGAGGCCCAGCAGCATCCCTGCACCCGCCGAGGCCGAGGCCTGGAGCCCCCGGAAGTTGCCATCCTCAGCCTCCACCTTCCTCTCCCCAGCTTTTCCAGGCTCCCAGACCCATTCAGGGCCTGAGCTCGGCCTGGTCCCAAGCCCTGCTTCCCTGTGGCCTCCACCGCCATCTCCAGCCCCTTCTTCTACCAAGCCAGGCCCAGAGAGCTCAGTGTCCCTCCTGCAGGGAGCCCGCCCCTTTCCGTTTTGCTGGCCCCTCTGTGAGATTTCCCGGGGCACCCACAACTTCTCGGAGGAGCTCAAGATCGGGGAGGGTGGCTTTGGGTGCGTGTACCGGGCGGTGATGAGGAACACGGTGTATGCTGTGAAGAGGCTGAAGGAGAACGCTGACCTGGAGTGGACTGCAGTGAAGCAGAGCTTCCTGACCGAGGTGGAGCAGCTGTCCAGGTTTCGTCACCCAAACATTGTGGACTTTGCTGGCTACTGTGCTCAGAACGGCTTCTACTGCCTGGTGTACGGCTTCCTGCCCAACGGCTCCCTGGAGGACCGTCTCCACTGCCAGACCCAGGCCTGCCCACCTCTCTCCTGGCCTCAGCGACTGGACATCCTTCTGGGTACAGCCCGGGCAATTCAGTTTCTACATCAGGACAGCCCCAGCCTCATCCATGGAGACATCAAGAGTTCCAACGTCCTTCTGGATGAGAGGCTGACACCCAAGCTGGGAGACTTTGGCCTGGCCCGGTTCAGCCGCTTTGCCGGGTCCAGCCCCAGCCAGAGCAGCATGGTGGCCCGGACACAGACAGTGCGGGGCACCCTGGCCTACCTGCCCGAGGAGTACATCAAGACGGGAAGGCTGGCTGTGGACACGGACACCTTCAGCTTTGGGGTGGTAGTGCTAGAGACCTTGGCTGGTCAGAGGGCTGTGAAGACGCACGGTGCCAGGACCAAGTATCTGAAAGACCTGGTGGAAGAGGAGGCTGAGGAGGCTGGAGTGGCTTTGAGAAGCACCCAGAGCACACTGCAAGCAGGTCTGGCTGCAGATGCCTGGGCTGCTCCCATCGCCATGCAGATCTACAAGAAGCACCTGGACCCCAGGCCCGGGCCCTGCCCACCTGAGCTGGGCCTGGGCCTGGGCCAGCTGGCCTGCTGCTGCCTGCACCGCCGGGCCAAAAGGAGGCCTCCTATGACCCAGGAGAACTCCTACGTGTCCAGCACTGGCAGAGCCCACAGTGGGGCTGCTCCATGGCAGCCCCTGGCAGCGCCATCAGGAGCCAGTGCCCAGGCAGCAGAGCAGCTGCAGAGAGGCCCCAACCAGCCCGTGGAGAGTGACGAGAGCCTAGGCGGCCTCTCTGCTGCCCTGCGCTCCTGGCACTTGACTCCAAGCTGCCCTCTGGACCCAGCACCCCTCAGGGAGGCCGGCTGTCCTCAGGGGGACACGGCAGGAGAATCGAGCTGGGGGAGTGGCCCAGGATCCCGGCCCACAGCCGTGGAAGGACTGGCCCTTGGCAGCTCTGCATCATCGTCGTCAGAGCCACCGCAGATTATCATCAACCCTGCCCGACAGAAGATGGTCCAGAAGCTGGCCCTGTACGAGGATGGGGCCCTGGACAGCCTGCAGCTGCTGTCGTCCAGCTCCCTCCCAGGCTTGGGCCTGGAACAGGACAGGCAGGGGCCCGAAGAAAGTGATGAATTTCAGAGCTGA
人LBP CDS(SEQ ID NO:33)
ATGGGGGCCTTGGCCAGAGCCCTGCCGTCCATACTGCTGGCATTGCTGCTTACGTCCACCCCAGAGGCTCTGGGTGCCAACCCCGGCTTGGTCGCCAGGATCACCGACAAGGGACTGCAGTATGCGGCCCAGGAGGGGCTATTAGCTCTGCAGAGTGAGCTGCTCAGGATCACGCTGCCTGACTTCACCGGGGACTTGAGGATCCCCCACGTCGGCCGTGGGCGCTATGAGTTCCACAGCCTGAACATCCACAGCTGTGAGCTGCTTCACTCTGCGCTGAGGCCTGTCCCTGGCCAGGGCCTGAGTCTCAGCATCTCCGACTCCTCCATCCGGGTCCAGGGCAGGTGGAAGGTGCGCAAGTCATTCTTCAAACTACAGGGCTCCTTTGATGTCAGTGTCAAGGGCATCAGCATTTCGGTCAACCTCCTGTTGGGCAGCGAGTCCTCCGGGAGGCCCACAGTTACTGCCTCCAGCTGCAGCAGTGACATCGCTGACGTGGAGGTGGACATGTCGGGAGACTTGGGGTGGCTGTTGAACCTCTTCCACAACCAGATTGAGTCCAAGTTCCAGAAAGTACTGGAGAGCAGGATTTGCGAAATGATCCAGAAATCAGTGTCCTCCGATCTACAGCCTTATCTCCAAACTCTGCCAGTTACAACAGAGATTGACAGTTTCGCCGACATTGATTATAGCTTAGTGGAAGCCCCTCGGGCAACAGCCCAGATGCTGGAGGTGATGTTTAAGGGTGAAATCTTTCATCGTAACCACCGTTCTCCAGTTACCCTCCTTGCTGCAGTCATGAGCCTTCCTGAGGAACACAACAAAATGGTCTACTTTGCCATCTCGGATTATGTCTTCAACACGGCCAGCCTGGTTTATCATGAGGAAGGATATCTGAACTTCTCCATCACAGATGACATGATACCGCCTGACTCTAATATCCGACTGACCACCAAGTCCTTCCGACCCTTCGTCCCACGGTTAGCCAGGCTCTACCCCAACATGAACCTGGAACTCCAGGGATCAGTGCCCTCTGCTCCGCTCCTGAACTTCAGCCCTGGGAATCTGTCTGTGGACCCCTATATGGAGATAGATGCCTTTGTGCTCCTGCCCAGCTCCAGCAAGGAGCCTGTCTTCCGGCTCAGTGTGGCCACTAATGTGTCCGCCACCTTGACCTTCAATACCAGCAAGATCACTGGGTTCCTGAAGCCAGGAAAGGTAAAAGTGGAACTGAAAGAATCCAAAGTTGGACTATTCAATGCAGAGCTGTTGGAAGCGCTCCTCAACTATTACATCCTTAACACCTTCTACCCCAAGTTCAATGATAAGTTGGCCGAAGGCTTCCCCCTTCCTCTGCTGAAGCGTGTTCAGCTCTACGACCTTGGGCTGCAGATCCATAAGGACTTCCTGTTCTTGGGTGCCAATGTCCAATACATGAGAGTTTGA
人TRAF6 CDS(SEQ ID NO:34)
ATGAGTCTGCTAAACTGTGAAAACAGCTGTGGATCCAGCCAGTCTGAAAGTGACTGCTGTGTGGCCATGGCCAGCTCCTGTAGCGCTGTAACAAAAGATGATAGTGTGGGTGGAACTGCCAGCACGGGGAACCTCTCCAGCTCATTTATGGAGGAGATCCAGGGATATGATGTAGAGTTTGACCCACCCCTGGAAAGCAAGTATGAATGCCCCATCTGCTTGATGGCATTACGAGAAGCAGTGCAAACGCCATGCGGCCATAGGTTCTGCAAAGCCTGCATCATAAAATCAATAAGGGATGCAGGTCACAAATGTCCAGTTGACAATGAAATACTGCTGGAAAATCAACTATTTCCAGACAATTTTGCAAAACGTGAGATTCTTTCTCTGATGGTGAAATGTCCAAATGAAGGTTGTTTGCACAAGATGGAACTGAGACATCTTGAGGATCATCAAGCACATTGTGAGTTTGCTCTTATGGATTGTCCCCAATGCCAGCGTCCCTTCCAAAAATTCCATATTAATATTCACATTCTGAAGGATTGTCCAAGGAGACAGGTTTCTTGTGACAACTGTGCTGCATCAATGGCATTTGAAGATAAAGAGATCCATGACCAGAACTGTCCTTTGGCAAATGTCATCTGTGAATACTGCAATACTATACTCATCAGAGAACAGATGCCTAATCATTATGATCTAGACTGCCCTACAGCCCCAATTCCATGCACATTCAGTACTTTTGGTTGCCATGAAAAGATGCAGAGGAATCACTTGGCACGCCACCTACAAGAGAACACCCAGTCACACATGAGAATGTTGGCCCAGGCTGTTCATAGTTTGAGCGTTATACCCGACTCTGGGTATATCTCAGAGGTCCGGAATTTCCAGGAAACTATTCACCAGTTAGAGGGTCGCCTTGTAAGACAAGACCATCAAATCCGGGAGCTGACTGCTAAAATGGAAACTCAGAGTATGTATGTAAGTGAGCTCAAACGAACCATTCGAACCCTTGAGGACAAAGTTGCTGAAATCGAAGCACAGCAGTGCAATGGAATTTATATTTGGAAGATTGGCAACTTTGGAATGCATTTGAAATGTCAAGAAGAGGAGAAACCTGTTGTGATTCATAGCCCTGGATTCTACACTGGCAAACCCGGGTACAAACTGTGCATGCGCTTGCACCTTCAGTTACCGACTGCTCAGCGCTGTGCAAACTATATATCCCTTTTTGTCCACACAATGCAAGGAGAATATGACAGCCACCTCCCTTGGCCCTTCCAGGGTACAATACGCCTTACAATTCTTGATCAGTCTGAAGCACCTGTAAGGCAAAACCACGAAGAGATAATGGATGCCAAACCAGAGCTGCTTGCTTTCCAGCGACCCACAATCCCACGGAACCCAAAAGGTTTTGGCTATGTAACTTTTATGCATCTGGAAGCCCTAAGACAAAGAACTTTCATTAAGGATGACACATTATTAGTGCGCTGTGAGGTCTCCACCCGCTTTGACATGGGTAGCCTTCGGAGGGAGGGTTTTCAGCCACGAAGTACTGATGCAGGGGTATAG
人K-Ras CDS(SEQ ID NO:35)
ATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTGGTGGCGTAGGCAAGAGTGCCTTGACGATACAGCTAATTCAGAATCATTTTGTGGACGAATATGATCCAACAATAGAGGATTCCTACAGGAAGCAAGTAGTAATTGATGGAGAAACCTGTCTCTTGGATATTCTCGACACAGCAGGTCAAGAGGAGTACAGTGCAATGAGGGACCAGTACATGAGGACTGGGGAGGGCTTTCTTTGTGTATTTGCCATAAATAATACTAAATCATTTGAAGATATTCACCATTATAGAGAACAAATTAAAAGAGTTAAGGACTCTGAAGATGTACCTATGGTCCTAGTAGGAAATAAATGTGATTTGCCTTCTAGAACAGTAGACACAAAACAGGCTCAGGACTTAGCAAGAAGTTATGGAATTCCTTTTATTGAAACATCAGCAAAGACAAGACAGGGTGTTGATGATGCCTTCTATACATTAGTTCGAGAAATTCGAAAACATAAAGAAAAGATGAGCAAAGATGGTAAAAAGAAGAAAAAGAAGTCAAAGACAAAGTGTGTAATTATGTAA
人N-Ras CDS(SEQ ID NO:36)
ATGACTGAGTACAAACTGGTGGTGGTTGGAGCAGGTGGTGTTGGGAAAAGCGCACTGACAATCCAGCTAATCCAGAACCACTTTGTAGATGAATATGATCCCACCATAGAGGATTCTTACAGAAAACAAGTGGTTATAGATGGTGAAACCTGTTTGTTGGACATACTGGATACAGCTGGACAAGAAGAGTACAGTGCCATGAGAGACCAATACATGAGGACAGGCGAAGGCTTCCTCTGTGTATTTGCCATCAATAATAGCAAGTCATTTGCGGATATTAACCTCTACAGGGAGCAGATTAAGCGAGTAAAAGACTCGGATGATGTACCTATGGTGCTAGTGGGAAACAAGTGTGATTTGCCAACAAGGACAGTTGATACAAAACAAGCCCACGAACTGGCCAAGAGTTACGGGATTCCATTCATTGAAACCTCAGCCAAGACCAGACAGGGTGTTGAAGATGCTTTTTACACACTGGTAAGAGAAATACGCCAGTACCGAATGAAAAAACTCAACAGCAGTGATGATGGGACTCAGGGTTGTATGGGATTGCCATGTGTGGTGATGTAA
人Raf CDS(SEQ ID NO:37)
ATGGCTAGCAAACGAAAATCTACAACTCCATGCATGGTTCGGACATCACAAGTAGTAGAACAAGATGTGCCCGAGGAAGTAGACAGGGCCAAAGAGAAAGGAATCGGCACACCACAGCCTGACGTGGCCAAGGACAGTTGGGCAGCAGAACTTGAAAACTCTTCCAAAGAAAACGAAGTGATAGAGGTGAAATCTATGGGGGAAAGCCAGTCCAAAAAACTCCAAGGTGGTTATGAGTGCAAATACTGCCCCTACTCCACGCAAAACCTGAACGAGTTCACGGAGCATGTCGACATGCAGCATCCCAACGTGATTCTCAACCCCCTCTACGTGTGTGCAGAATGTAACTTCACAACCAAAAAGTACGACTCCCTATCCGACCACAACTCCAAGTTCCATCCCGGGGAGGCCAACTTCAAGCTGAAGTTAATTAAACGCAATAATCAAACTGTCTTGGAACAGTCCATCGAAACCACCAACCATGTCGTGTCCATCACCACCAGTGGCCCTGGAACTGGTGACAGTGATTCTGGGATCTCGGTGAGTAAAACCCCCATCATGAAGCCTGGAAAACCAAAAGCGGATGCCAAGAAGGTGCCCAAGAAGCCCGAGGAGATCACCCCCGAGAACCACGTGGAAGGGACCGCCCGCCTGGTGACAGACACAGCTGAGATCCTCTCGAGACTCGGCGGGGTGGAGCTCCTCCAAGACACATTAGGACACGTCATGCCTTCTGTACAGCTGCCACCAAATATCAACCTTGTGCCCAAGGTCCCTGTCCCACTAAATACTACCAAATACAACTCTGCCCTGGATACAAATGCCACGATGATCAACTCTTTCAACAAGTTTCCTTACCCGACCCAGGCTGAGTTGTCCTGGCTGACAGCTGCCTCCAAACACCCAGAGGAGCACATCAGAATCTGGTTTGCCACCCAGCGCTTAAAGCATGGCATCAGCTGGTCCCCAGAAGAGGTGGAGGAGGCCCGGAAGAAGATGTTCAACGGCACCATCCAGTCAGTACCCCCGACCATCACTGTGCTGCCCGCCCAGTTGGCCCCCACAAAGGTGACGCAGCCCATCCTCCAGACGGCTCTACCGTGCCAGATCCTCGGCCAGACTAGCCTGGTGCTGACTCAGGTGACCAGCGGGTCAACAACCGTCTCTTGCTCCCCCATCACACTTGCCGTGGCAGGAGTCACCAACCATGGCCAGAAGAGACCCTTGGTGACTCCCCAAGCTGCCCCCGAACCCAAGCGTCCACACATCGCTCAGGTGCCAGAGCCCCCACCCAAGGTGGCCAACCCCCCGCTCACACCAGCCAGTGACCGCAAGAAGACAAAGGAGCAGATAGCACATCTCAAGGCCAGCTTTCTCCAGAGCCAGTTCCCTGACGATGCCGAGGTTTACCGGCTCATCGAGGTGACTGGCCTTGCCAGGAGCGAGATCAAGAAGTGGTTCAGTGACCACCGATATCGGTGTCAAAGGGGCATCGTCCACATCACCAGCGAATCCCTTGCCAAAGACCAGTTGGCCATCGCGGCCTCCCGACACGGTCGCACGTATCATGCGTACCCAGACTTTGCCCCCCAGAAGTTCAAAGAGAAAACACAGGGTCAGGTTAAAATCTTGGAAGACAGCTTTTTGAAAAGTTCTTTTCCTACCCAAGCAGAACTGGATCGGCTAAGGGTGGAGACCAAGCTGAGCAGGAGAGAGATCGACTCCTGGTTCTCGGAGAGGCGGAAGCTTCGAGACAGCATGGAACAAGCTGTCTTGGATTCCATGGGGTCTGGCAAAAAAGGCCAAGATGTGGGAGCCCCCAATGGTGCTCTGTCTCGACTCGACCAGCTCTCCGGTGCCCAGTTAACAAGTTCTCTGCCCAGCCCTTCGCCAGCAATTGCAAAAAGTCAAGAACAGGTTCATCTCCTGAGGAGCACGTTTGCAAGAACCCAGTGGCCTACTCCCCAGGAGTACGACCAGTTAGCGGCCAAGACTGGCCTGGTCCGAACTGAGATTGTGCGTTGGTTCAAGGAGAACAGATGCTTGCTGAAAACGGGAACCGTGAAGTGGATGGAGCAGTACCAGCACCAGCCCATGGCAGATGATCACGGCTACGATGCCGTAGCAAGGAAAGCAACAAAACCCATGGCCGAGAGCCCAAAGAACGGGGGTGATGTGGTTCCACAATATTACAAGGACCCCAAAAAGCTCTGCGAAGAGGACTTGGAGAAGTTGGTGACCAGGGTAAAAGTAGGCAGCGAGCCAGCAAAAGACTGTTTGCCAGCAAAGCCCTCAGAGGCCACCTCAGACCGGTCAGAGGGCAGCAGCCGGGACGGCCAGGGTAGCGACGAGAACGAGGAGTCGAGCGTTGTGGATTACGTGGAGGTGACGGTCGGGGAGGAGGATGCGATCTCAGATAGATCAGATAGCTGGAGTCAGGCTGCGGCAGAAGGTGTGTCGGAACTGGCTGAATCAGACTCCGACTGCGTCCCTGCAGAGGCTGGCCAGGCCTAG
人MEK1 CDS(SEQ ID NO:38)
ATGCCCAAGAAGAAGCCGACGCCCATCCAGCTGAACCCGGCCCCCGACGGCTCTGCAGTTAACGGGACCAGCTCTGCGGAGACCAACTTGGAGGCCTTGCAGAAGAAGCTGGAGGAGCTAGAGCTTGATGAGCAGCAGCGAAAGCGCCTTGAGGCCTTTCTTACCCAGAAGCAGAAGGTGGGAGAACTGAAGGATGACGACTTTGAGAAGATCAGTGAGCTGGGGGCTGGCAATGGCGGTGTGGTGTTCAAGGTCTCCCACAAGCCTTCTGGCCTGGTCATGGCCAGAAAGCTAATTCATCTGGAGATCAAACCCGCAATCCGGAACCAGATCATAAGGGAGCTGCAGGTTCTGCATGAGTGCAACTCTCCGTACATCGTGGGCTTCTATGGTGCGTTCTACAGCGATGGCGAGATCAGTATCTGCATGGAGCACATGGATGGAGGTTCTCTGGATCAAGTCCTGAAGAAAGCTGGAAGAATTCCTGAACAAATTTTAGGAAAAGTTAGCATTGCTGTAATAAAAGGCCTGACATATCTGAGGGAGAAGCACAAGATCATGCACAGAGATGTCAAGCCCTCCAACATCCTAGTCAACTCCCGTGGGGAGATCAAGCTCTGTGACTTTGGGGTCAGCGGGCAGCTCATCGACTCCATGGCCAACTCCTTCGTGGGCACAAGGTCCTACATGTCGCCAGAAAGACTCCAGGGGACTCATTACTCTGTGCAGTCAGACATCTGGAGCATGGGACTGTCTCTGGTAGAGATGGCGGTTGGGAGGTATCCCATCCCTCCTCCAGATGCCAAGGAGCTGGAGCTGATGTTTGGGTGCCAGGTGGAAGGAGATGCGGCTGAGACCCCACCCAGGCCAAGGACCCCCGGGAGGCCCCTTAGCTCATACGGAATGGACAGCCGACCTCCCATGGCAATTTTTGAGTTGTTGGATTACATAGTCAACGAGCCTCCTCCAAAACTGCCCAGTGGAGTGTTCAGTCTGGAATTTCAAGATTTTGTGAATAAATGCTTAATAAAAAACCCCGCAGAGAGAGCAGATTTGAAGCAACTCATGGTTCATGCTTTTATCAAGAGATCTGATGCTGAGGAAGTGGATTTTGCAGGTTGGCTCTGCTCCACCATCGGCCTTAACCAGCCCAGCACACCAACCCATGCTGCTGGCGTCTAA
人MEK2 CDS(SEQ ID NO:39)
ATGCTGGCCCGGAGGAAGCCGGTGCTGCCGGCGCTCACCATCAACCCTACCATCGCCGAGGGCCCATCCCCTACCAGCGAGGGCGCCTCCGAGGCAAACCTGGTGGACCTGCAGAAGAAGCTGGAGGAGCTGGAACTTGACGAGCAGCAGAAGAAGCGGCTGGAAGCCTTTCTCACCCAGAAAGCCAAGGTCGGCGAACTCAAAGACGATGACTTCGAAAGGATCTCAGAGCTGGGCGCGGGCAACGGCGGGGTGGTCACCAAAGTCCAGCACAGACCCTCGGGCCTCATCATGGCCAGGAAGCTGATCCACCTTGAGATCAAGCCGGCCATCCGGAACCAGATCATCCGCGAGCTGCAGGTCCTGCACGAATGCAACTCGCCGTACATCGTGGGCTTCTACGGGGCCTTCTACAGTGACGGGGAGATCAGCATTTGCATGGAACACATGGACGGCGGCTCCCTGGACCAGGTGCTGAAAGAGGCCAAGAGGATTCCCGAGGAGATCCTGGGGAAAGTCAGCATCGCGGTTCTCCGGGGCTTGGCGTACCTCCGAGAGAAGCACCAGATCATGCACCGAGATGTGAAGCCCTCCAACATCCTCGTGAACTCTAGAGGGGAGATCAAGCTGTGTGACTTCGGGGTGAGCGGCCAGCTCATCGACTCCATGGCCAACTCCTTCGTGGGCACGCGCTCCTACATGGCTCCGGAGCGGTTGCAGGGCACACATTACTCGGTGCAGTCGGACATCTGGAGCATGGGCCTGTCCCTGGTGGAGCTGGCCGTCGGAAGGTACCCCATCCCCCCGCCCGACGCCAAAGAGCTGGAGGCCATCTTTGGCCGGCCCGTGGTCGACGGGGAAGAAGGAGAGCCTCACAGCATCTCGCCTCGGCCGAGGCCCCCCGGGCGCCCCGTCAGCGGTCACGGGATGGATAGCCGGCCTGCCATGGCCATCTTTGAACTCCTGGACTATATTGTGAACGAGCCACCTCCTAAGCTGCCCAACGGTGTGTTCACCCCCGACTTCCAGGAGTTTGTCAATAAATGCCTCATCAAGAACCCAGCGGAGCGGGCGGACCTGAAGATGCTCACAAACCACACCTTCATCAAGCGGTCCGAGGTGGAAGAAGTGGATTTTGCCGGCTGGTTGTGTAAAACCCTGCGGCTGAACCAGCCCGGCACACCCACGCGCACCGCCGTGTGA
人ERK1 CDS(SEQ ID NO:40)
ATGGCGGCGGCGGCGGCTCAGGGGGGCGGGGGCGGGGAGCCCCGTAGAACCGAGGGGGTCGGCCCGGGGGTCCCGGGGGAGGTGGAGATGGTGAAGGGGCAGCCGTTCGACGTGGGCCCGCGCTACACGCAGTTGCAGTACATCGGCGAGGGCGCGTACGGCATGGTCAGCTCGGCCTATGACCACGTGCGCAAGACTCGCGTGGCCATCAAGAAGATCAGCCCCTTCGAACATCAGACCTACTGCCAGCGCACGCTCCGGGAGATCCAGATCCTGCTGCGCTTCCGCCATGAGAATGTCATCGGCATCCGAGACATTCTGCGGGCGTCCACCCTGGAAGCCATGAGAGATGTCTACATTGTGCAGGACCTGATGGAGACTGACCTGTACAAGTTGCTGAAAAGCCAGCAGCTGAGCAATGACCATATCTGCTACTTCCTCTACCAGATCCTGCGGGGCCTCAAGTACATCCACTCCGCCAACGTGCTCCACCGAGATCTAAAGCCCTCCAACCTGCTCATCAACACCACCTGCGACCTTAAGATTTGTGATTTCGGCCTGGCCCGGATTGCCGATCCTGAGCATGACCACACCGGCTTCCTGACGGAGTATGTGGCTACGCGCTGGTACCGGGCCCCAGAGATCATGCTGAACTCCAAGGGCTATACCAAGTCCATCGACATCTGGTCTGTGGGCTGCATTCTGGCTGAGATGCTCTCTAACCGGCCCATCTTCCCTGGCAAGCACTACCTGGATCAGCTCAACCACATTCTGGGCATCCTGGGCTCCCCATCCCAGGAGGACCTGAATTGTATCATCAACATGAAGGCCCGAAACTACCTACAGTCTCTGCCCTCCAAGACCAAGGTGGCTTGGGCCAAGCTTTTCCCCAAGTCAGACTCCAAAGCCCTTGACCTGCTGGACCGGATGTTAACCTTTAACCCCAATAAACGGATCACAGTGGAGGAAGCGCTGGCTCACCCCTACCTGGAGCAGTACTATGACCCGACGGATGAGGTGGGCCAGTCCCCAGCAGCAGTGGGGCTGGGGGCAGGGGAGCAGGGGGGCACGTAG
人ERK2 CDS(SEQ ID NO:41)
ATGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGGCGCGGGCCCGGAGATGGTCCGCGGGCAGGTGTTCGACGTGGGGCCGCGCTACACCAACCTCTCGTACATCGGCGAGGGCGCCTACGGCATGGTGTGCTCTGCTTATGATAATGTCAACAAAGTTCGAGTAGCTATCAAGAAAATCAGCCCCTTTGAGCACCAGACCTACTGCCAGAGAACCCTGAGGGAGATAAAAATCTTACTGCGCTTCAGACATGAGAACATCATTGGAATCAATGACATTATTCGAGCACCAACCATCGAGCAAATGAAAGATGTATATATAGTACAGGACCTCATGGAAACAGATCTTTACAAGCTCTTGAAGACACAACACCTCAGCAATGACCATATCTGCTATTTTCTCTACCAGATCCTCAGAGGGTTAAAATATATCCATTCAGCTAACGTTCTGCACCGTGACCTCAAGCCTTCCAACCTGCTGCTCAACACCACCTGTGATCTCAAGATCTGTGACTTTGGCCTGGCCCGTGTTGCAGATCCAGACCATGATCACACAGGGTTCCTGACAGAATATGTGGCCACACGTTGGTACAGGGCTCCAGAAATTATGTTGAATTCCAAGGGCTACACCAAGTCCATTGATATTTGGTCTGTAGGCTGCATTCTGGCAGAAATGCTTTCTAACAGGCCCATCTTTCCAGGGAAGCATTATCTTGACCAGCTGAACCACATTTTGGGTATTCTTGGATCCCCATCACAAGAAGACCTGAATTGTATAATAAATTTAAAAGCTAGGAACTATTTGCTTTCTCTTCCACACAAAAATAAGGTGCCATGGAACAGGCTGTTCCCAAATGCTGACTCCAAAGCTCTGGACTTATTGGACAAAATGTTGACATTCAACCCACACAAGAGGATTGAAGTAGAACAGGCTCTGGCCCACCCATATCTGGAGCAGTATTACGACCCGAGTGACGAGCCCATCGCCGAAGCACCATTCAAGTTCGACATGGAATTGGATGACTTGCCTAAGGAAAAGCTCAAAGAACTAATTTTTGAAGAGACTGCTAGATTCCAGCCAGGATACAGATCTTAA
人IκB CDS(SEQ ID NO:42)
ATGTTCCAGGCGGCCGAGCGCCCCCAGGAGTGGGCCATGGAGGGCCCCCGCGACGGGCTGAAGAAGGAGCGGCTACTGGACGACCGCCACGACAGCGGCCTGGACTCCATGAAAGACGAGGAGTACGAGCAGATGGTCAAGGAGCTGCAGGAGATCCGCCTCGAGCCGCAGGAGGTGCCGCGCGGCTCGGAGCCCTGGAAGCAGCAGCTCACCGAGGACGGGGACTCGTTCCTGCACTTGGCCATCATCCATGAAGAAAAGGCACTGACCATGGAAGTGATCCGCCAGGTGAAGGGAGACCTGGCCTTCCTCAACTTCCAGAACAACCTGCAGCAGACTCCACTCCACTTGGCTGTGATCACCAACCAGCCAGAAATTGCTGAGGCACTTCTGGGAGCTGGCTGTGATCCTGAGCTCCGAGACTTTCGAGGAAATACCCCCCTACACCTTGCCTGTGAGCAGGGCTGCCTGGCCAGCGTGGGAGTCCTGACTCAGTCCTGCACCACCCCGCACCTCCACTCCATCCTGAAGGCTACCAACTACAATGGCCACACGTGTCTACACTTAGCCTCTATCCATGGCTACCTGGGCATCGTGGAGCTTTTGGTGTCCTTGGGTGCTGATGTCAATGCTCAGGAGCCCTGTAATGGCCGGACTGCCCTTCACCTCGCAGTGGACCTGCAAAATCCTGACCTGGTGTCACTCCTGTTGAAGTGTGGGGCTGATGTCAACAGAGTTACCTACCAGGGCTATTCTCCCTACCAGCTCACCTGGGGCCGCCCAAGCACCCGGATACAGCAGCAGCTGGGCCAGCTGACACTAGAAAACCTTCAGATGCTGCCAGAGAGTGAGGATGAGGAGAGCTATGACACAGAGTCAGAGTTCACGGAGTTCACAGAGGACGAGCTGCCCTATGATGACTGTGTGTTTGGAGGCCAGCGTCTGACGTTATGA
人Rac CDS(SEQ ID NO:43)
ATGAGCGACGTGGCTATTGTGAAGGAGGGTTGGCTGCACAAACGAGGGGAGTACATCAAGACCTGGCGGCCACGCTACTTCCTCCTCAAGAATGATGGCACCTTCATTGGCTACAAGGAGCGGCCGCAGGATGTGGACCAACGTGAGGCTCCCCTCAACAACTTCTCTGTGGCGCAGTGCCAGCTGATGAAGACGGAGCGGCCCCGGCCCAACACCTTCATCATCCGCTGCCTGCAGTGGACCACTGTCATCGAACGCACCTTCCATGTGGAGACTCCTGAGGAGCGGGAGGAGTGGACAACCGCCATCCAGACTGTGGCTGACGGCCTCAAGAAGCAGGAGGAGGAGGAGATGGACTTCCGGTCGGGCTCACCCAGTGACAACTCAGGGGCTGAAGAGATGGAGGTGTCCCTGGCCAAGCCCAAGCACCGCGTGACCATGAACGAGTTTGAGTACCTGAAGCTGCTGGGCAAGGGCACTTTCGGCAAGGTGATCCTGGTGAAGGAGAAGGCCACAGGCCGCTACTACGCCATGAAGATCCTCAAGAAGGAAGTCATCGTGGCCAAGGACGAGGTGGCCCACACACTCACCGAGAACCGCGTCCTGCAGAACTCCAGGCACCCCTTCCTCACAGCCCTGAAGTACTCTTTCCAGACCCACGACCGCCTCTGCTTTGTCATGGAGTACGCCAACGGGGGCGAGCTGTTCTTCCACCTGTCCCGGGAGCGTGTGTTCTCCGAGGACCGGGCCCGCTTCTATGGCGCTGAGATTGTGTCAGCCCTGGACTACCTGCACTCGGAGAAGAACGTGGTGTACCGGGACCTCAAGCTGGAGAACCTCATGCTGGACAAGGACGGGCACATTAAGATCACAGACTTCGGGCTGTGCAAGGAGGGGATCAAGGACGGTGCCACCATGAAGACCTTTTGCGGCACACCTGAGTACCTGGCCCCCGAGGTGCTGGAGGACAATGACTACGGCCGTGCAGTGGACTGGTGGGGGCTGGGCGTGGTCATGTACGAGATGATGTGCGGTCGCCTGCCCTTCTACAACCAGGACCATGAGAAGCTTTTTGAGCTCATCCTCATGGAGGAGATCCGCTTCCCGCGCACGCTTGGTCCCGAGGCCAAGTCCTTGCTTTCAGGGCTGCTCAAGAAGGACCCCAAGCAGAGGCTTGGCGGGGGCTCCGAGGACGCCAAGGAGATCATGCAGCATCGCTTCTTTGCCGGTATCGTGTGGCAGCACGTGTACGAGAAGAAGCTCAGCCCACCCTTCAAGCCCCAGGTCACGTCGGAGACTGACACCAGGTATTTTGATGAGGAGTTCACGGCCCAGATGATCACCATCACACCACCTGACCAAGATGACAGCATGGAGTGTGTGGACAGCGAGCGCAGGCCCCACTTCCCCCAGTTCTCCTACTCGGCCAGCGGCACGGCCTGA
人MEK3 CDS(SEQ ID NO:44)
ATGTCCAAGCCACCCGCACCCAACCCCACACCCCCCCGGAACCTGGACTCCCGGACCTTCATCACCATTGGAGACAGAAACTTTGAGGTGGAGGCTGATGACTTGGTGACCATCTCAGAACTGGGCCGTGGAGCCTATGGGGTGGTAGAGAAGGTGCGGCACGCCCAGAGCGGCACCATCATGGCCGTGAAGCGGATCCGGGCCACCGTGAACTCACAGGAGCAGAAGCGGCTGCTCATGGACCTGGACATCAACATGCGCACGGTCGACTGTTTCTACACTGTCACCTTCTACGGGGCACTATTCAGAGAGGGAGACGTGTGGATCTGCATGGAGCTCATGGACACATCCTTGGACAAGTTCTACCGGAAGGTGCTGGATAAAAACATGACAATTCCAGAGGACATCCTTGGGGAGATTGCTGTGTCTATCGTGCGGGCCCTGGAGCATCTGCACAGCAAGCTGTCGGTGATCCACAGAGATGTGAAGCCCTCCAATGTCCTTATCAACAAGGAGGGCCATGTGAAGATGTGTGACTTTGGCATCAGTGGCTACTTGGTGGACTCTGTGGCCAAGACGATGGATGCCGGCTGCAAGCCCTACATGGCCCCTGAGAGGATCAACCCAGAGCTGAACCAGAAGGGCTACAATGTCAAGTCCGACGTCTGGAGCCTGGGCATCACCATGATTGAGATGGCCATCCTGCGGTTCCCTTACGAGTCCTGGGGGACCCCGTTCCAGCAGCTGAAGCAGGTGGTGGAGGAGCCGTCCCCCCAGCTCCCAGCCGACCGTTTCTCCCCCGAGTTTGTGGACTTCACTGCTCAGTGCCTGAGGAAGAACCCCGCAGAGCGTATGAGCTACCTGGAGCTGATGGAGCACCCCTTCTTCACCTTGCACAAAACCAAGAAGACGGACATTGCTGCCTTCGTGAAGGAGATCCTGGGAGAAGACTCATAG
人MEK6 CDS(SEQ ID NO:45)
ATGGAACTGGGACGAGGTGCGTACGGGGTGGTGGAGAAGATGCGGCACGTGCCCAGCGGGCAGATCATGGCAGTGAAGCGGATCCGAGCCACAGTAAATAGCCAGGAACAGAAACGGCTACTGATGGATTTGGATATTTCCATGAGGACGGTGGACTGTCCATTCACTGTCACCTTTTATGGCGCACTGTTTCGGGAGGGTGATGTGTGGATCTGCATGGAGCTCATGGATACATCACTAGATAAATTCTACAAACAAGTTATTGATAAAGGCCAGACAATTCCAGAGGACATCTTAGGGAAAATAGCAGTTTCTATTGTAAAAGCATTAGAACATTTACATAGTAAGCTGTCTGTCATTCACAGAGACGTCAAGCCTTCTAATGTACTCATCAATGCTCTCGGTCAAGTGAAGATGTGCGATTTTGGAATCAGTGGCTACTTGGTGGACTCTGTTGCTAAAACAATTGATGCAGGTTGCAAACCATACATGGCCCCTGAAAGAATAAACCCAGAGCTCAACCAGAAGGGATACAGTGTGAAGTCTGACATTTGGAGTCTGGGCATCACGATGATTGAGTTGGCCATCCTTCGATTTCCCTATGATTCATGGGGAACTCCATTTCAGCAGCTCAAACAGGTGGTAGAGGAGCCATCGCCACAACTCCCAGCAGACAAGTTCTCTGCAGAGTTTGTTGACTTTACCTCACAGTGCTTAAAGAAGAATTCCAAAGAACGGCCTACATACCCAGAGCTAATGCAACATCCATTTTTCACCCTACATGAATCCAAAGGAACAGATGTGGCATCTTTTGTAAAACTGATTCTTGGAGACTAA
人p38 CDS(SEQ ID NO:46)
ATGTCTCAGGAGAGGCCCACGTTCTACCGGCAGGAGCTGAACAAGACAATCTGGGAGGTGCCCGAGCGTTACCAGAACCTGTCTCCAGTGGGCTCTGGCGCCTATGGCTCTGTGTGTGCTGCTTTTGACACAAAAACGGGGTTACGTGTGGCAGTGAAGAAGCTCTCCAGACCATTTCAGTCCATCATTCATGCGAAAAGAACCTACAGAGAACTGCGGTTACTTAAACATATGAAACATGAAAATGTGATTGGTCTGTTGGACGTTTTTACACCTGCAAGGTCTCTGGAGGAATTCAATGATGTGTATCTGGTGACCCATCTCATGGGGGCAGATCTGAACAACATTGTGAAATGTCAGAAGCTTACAGATGACCATGTTCAGTTCCTTATCTACCAAATTCTCCGAGGTCTAAAGTATATACATTCAGCTGACATAATTCACAGGGACCTAAAACCTAGTAATCTAGCTGTGAATGAAGACTGTGAGCTGAAGATTCTGGATTTTGGACTGGCTCGGCACACAGATGATGAAATGACAGGCTACGTGGCCACTAGGTGGTACAGGGCTCCTGAGATCATGCTGAACTGGATGCATTACAACCAGACAGTTGATATTTGGTCAGTGGGATGCATAATGGCCGAGCTGTTGACTGGAAGAACATTGTTTCCTGGTACAGACCATATTAACCAGCTTCAGCAGATTATGCGTCTGACAGGAACACCCCCCGCTTATCTCATTAACAGGATGCCAAGCCATGAGGCAAGAAACTATATTCAGTCTTTGACTCAGATGCCGAAGATGAACTTTGCGAATGTATTTATTGGTGCCAATCCCCTGGCTGTCGACTTGCTGGAGAAGATGCTTGTATTGGACTCAGATAAGAGAATTACAGCGGCCCAAGCCCTTGCACATGCCTACTTTGCTCAGTACCACGATCCTGATGATGAACCAGTGGCCGATCCTTATGATCAGTCCTTTGAAAGCAGGGACCTCCTTATAGATGAGTGGAAAAGCCTGACCTATGATGAAGTCATCAGCTTTGTGCCACCACCCCTTGACCAAGAAGAGATGGAGTCCTGA
人PKR CDS(SEQ ID NO:47)
ATGGCTGGTGATCTTTCAGCAGGTTTCTTCATGGAGGAACTTAATACATACCGTCAGAAGCAGGGAGTAGTACTTAAATATCAAGAACTGCCTAATTCAGGACCTCCACATGATAGGAGGTTTACATTTCAAGTTATAATAGATGGAAGAGAATTTCCAGAAGGTGAAGGTAGATCAAAGAAGGAAGCAAAAAATGCCGCAGCCAAATTAGCTGTTGAGATACTTAATAAGGAAAAGAAGGCAGTTAGTCCTTTATTATTGACAACAACGAATTCTTCAGAAGGATTATCCATGGGGAATTACATAGGCCTTATCAATAGAATTGCCCAGAAGAAAAGACTAACTGTAAATTATGAACAGTGTGCATCGGGGGTGCATGGGCCAGAAGGATTTCATTATAAATGCAAAATGGGACAGAAAGAATATAGTATTGGTACAGGTTCTACTAAACAGGAAGCAAAACAATTGGCCGCTAAACTTGCATATCTTCAGATATTATCAGAAGAAACCTCAGTGAAATCTGACTACCTGTCCTCTGGTTCTTTTGCTACTACGTGTGAGTCCCAAAGCAACTCTTTAGTGACCAGCACACTCGCTTCTGAATCATCATCTGAAGGTGACTTCTCAGCAGATACATCAGAGATAAATTCTAACAGTGACAGTTTAAACAGTTCTTCGTTGCTTATGAATGGTCTCAGAAATAATCAAAGGAAGGCAAAAAGATCTTTGGCACCCAGATTTGACCTTCCTGACATGAAAGAAACAAAGTATACTGTGGACAAGAGGTTTGGCATGGATTTTAAAGAAATAGAATTAATTGGCTCAGGTGGATTTGGCCAAGTTTTCAAAGCAAAACACAGAATTGACGGAAAGACTTACGTTATTAAACGTGTTAAATATAATAACGAGAAGGCGGAGCGTGAAGTAAAAGCATTGGCAAAACTTGATCATGTAAATATTGTTCACTACAATGGCTGTTGGGATGGATTTGATTATGATCCTGAGACCAGTGATGATTCTCTTGAGAGCAGTGATTATGATCCTGAGAACAGCAAAAATAGTTCAAGGTCAAAGACTAAGTGCCTTTTCATCCAAATGGAATTCTGTGATAAAGGGACCTTGGAACAATGGATTGAAAAAAGAAGAGGCGAGAAACTAGACAAAGTTTTGGCTTTGGAACTCTTTGAACAAATAACAAAAGGGGTGGATTATATACATTCAAAAAAATTAATTCATAGAGATCTTAAGCCAAGTAATATATTCTTAGTAGATACAAAACAAGTAAAGATTGGAGACTTTGGACTTGTAACATCTCTGAAAAATGATGGAAAGCGAACAAGGAGTAAGGGAACTTTGCGATACATGAGCCCAGAACAGATTTCTTCGCAAGACTATGGAAAGGAAGTGGACCTCTACGCTTTGGGGCTAATTCTTGCTGAACTTCTTCATGTATGTGACACTGCTTTTGAAACATCAAAGTTTTTCACAGACCTACGGGATGGCATCATCTCAGATATATTTGATAAAAAAGAAAAAACTCTTCTACAGAAATTACTCTCAAAGAAACCTGAGGATCGACCTAACACATCTGAAATACTAAGGACCTTGACTGTGTGGAAGAAAAGCCCAGAGAAAAATGAACGACACACATGTTAG
人TTP CDS(SEQ ID NO:48)
ATGGCGGCTCAGCGGATCCGAGCGGCCAACTCCAATGGCCTCCCTCGCTGCAAGTCAGAGGGGACCCTGATTGACCTGAGCGAAGGGTTTTCAGAGACGAGCTTTAATGACATCAAAGTGCCTTCTCCCAGTGCCTTGCTCGTAGACAACCCCACACCTTTCGGAAATGCAAAGGAAGTGATTGCGATCAAGGACTATTGCCCCACCAACTTCACCACACTGAAGTTCTCCAAGGGCGACCATCTCTACGTCTTGGACACATCTGGCGGTGAGTGGTGGTACGCACACAACACCACCGAAATGGGCTACATCCCCTCCTCCTATGTGCAGCCCTTGAACTACCGGAACTCAACACTGAGTGACAGCGGTATGATTGATAATCTTCCAGACAGCCCAGACGAGGTAGCCAAGGAGCTGGAGCTGCTCGGGGGATGGACAGATGACAAAAAAGTACCAGGCAGAATGTACAGTAATAACCCTTTCTGGAATGGGGTCCAGACCAATCCATTTCTGAATGGGAACGTGCCCGTCATGCCCAGCCTGGATGAGCTGAATCCCAAAAGTACTGTGGATTTGCTCCTTTTTGACGCAGGTACATCCTCCTTCACCGAATCCAGCTCAGCCACCACGAATAGCACTGGCAACATCTTCGATGAGCTTCCAGTCACAAACGGACTCCACGCAGAGCCGCCGGTCAGGCGGGACAACCCCTTCTTCAGAAGCAAGCGCTCCTACAGTCTCTCGGAACTCTCCGTCCTCCAAGCCAAGTCCGATGCTCCCACATCGTCGAGTTTCTTCACCGGCTTGAAATCACCTGCCCCCGAGCAATTTCAGAGCCGGGAGGATTTTCGAACTGCCTGGCTAAACCACAGGAAGCTGGCCCGGTCTTGCCACGACCTGGACTTGCTTGGCCAAAGCCCTGGTTGGGGCCAGACCCAAGCCGTGGAGACAAACATCGTGTGCAAGCTGGATAGCTCCGGGGGTGCTGTCCAGCTTCCTGACACCAGCATCAGCATCCACGTGCCCGAGGGCCACGTCGCCCCTGGGGAGACCCAGCAGATCTCCATGAAAGCCCTGCTGGACCCCCCGCTGGAGCTCAACAGTGACAGGTCCTGCAGCATCAGCCCTGTGCTGGAGGTCAAGCTGAGCAACCTGGAGGTGAAAACCTCTATCATCTTGGAGATGAAAGTGTCAGCCGAGATAAAAAATGACCTTTTTAGCAAAAGCACAGTGGGCCTCCAGTGCCTGAGGAGCGACTCGAAGGAAGGGCCATATGTCTCCGTCCCGCTCAACTGCAGCTGTGGGGACACGGTCCAGGCACAGCTGCACAACCTGGAGCCCTGTATGTACGTGGCTGTCGTGGCCCATGGCCCAAGCATCCTCTACCCTTCCACCGTGTGGGACTTCATCAATAAAAAAGTCACAGTGGGTCTCTACGGCCCTAAACACATCCACCCATCCTTCAAGACGGTAGTGACCATTTTTGGGCATGACTGTGCCCCAAAGACGCTCCTGGTCAGCGAGGTCACACGCCAGGCACCCAACCCTGCCCCGGTGGCCCTGCAGCTGTGGGGGAAGCACCAGTTCGTTTTGTCCAGGCCCCAGGATCTCAAGGTCTGTATGTTTTCCAATATGACGAATTACGAGGTCAAAGCCAGCGAGCAGGCCAAAGTGGTGCGAGGATTCCAGCTGAAGCTGGGCAAGGTGAGCCGCCTGATCTTCCCCATCACCTCCCAGAACCCCAACGAGCTCTCTGACTTCACGCTGCGGGTTCAGGTGAAGGACGACCAGGAGGCCATCCTCACCCAGTTTTGTGTCCAGACTCCTCAGCCACCCCCTAAAAGTGCCATCAAGCCTTCCGGGCAAAGGAGGTTTCTCAAGAAGAACGAAGTCGGGAAAATCATCCTGTCCCCGTTTGCCACCACTACAAAGTACCCGACTTTCCAGGACCGCCCGGTGTCCAGCCTCAAGTTTGGTAAGTTGCTCAAGACTGTGGTGCGGCAGAACAAGAACCACTACCTGCTGGAGTACAAGAAGGGCGACGGGATCGCCCTGCTCAGCGAGGAGCGGGTCAGGCTCCGGGGCCAGCTGTGGACCAAGGAGTGGTACATCGGCTACTACCAGGGCAGGGTGGGCCTCGTGCACACCAAGAACGTGCTGGTGGTCGGCAGGGCCCGGCCCAGCCTGTGCTCGGGCCCCGAGCTGAGCACCTCGGTGCTGCTGGAGCAGATCCTGCGGCCCTGCAAATTCCTCACGTACATCTATGCCTCCGTGAGGACCCTGCTCATGGAGAACATCAGCAGCTGGCGCTCCTTCGCTGACGCCCTGGGCTACGTGAACCTGCCGCTCACCTTTTTCTGCCGGGCAGAGCTGGATAGTGAGCCCGAGCGGGTGGCGTCCGTCCTAGAAAAGCTGAAGGAGGACTGTAACAACACTGAGAACAAAGAACGGAAGTCCTTCCAGAAGGAGCTTGTGATGGCCCTACTGAAGATGGACTGCCAGGGCCTGGTGGTCAGACTCATCCAGGACTTTGTGCTCCTGACCACGGCTGTAGAGGTGGCCCAGCGCTGGCGGGAGCTGGCTGAGAAGCTGGCCAAGGTCTCCAAGCAGCAGATGGACGCCTACGAGTCTCCCCACCGGGACAGGAACGGGGTTGTGGACAGCGAGGCCATGTGGAAGCCTGCGTATGACTTCTTACTCACCTGGAGCCATCAGATCGGGGACAGCTACCGGGATGTCATCCAGGAGCTGCACCTGGGCCTGGACAAGATGAAAAACCCCATCACCAAGCGCTGGAAGCACCTCACTGGGACTCTGATCTTGGTGAACTCCCTGGACGTTCTGAGAGCAGCCGCCTTCAGCCCTGCGGACCAGGACGACTTCGTGATTTGA
人MK2 CDS(SEQ ID NO:49)
ATGCTGTCCAACTCCCAGGGCCAGAGCCCGCCGGTGCCGTTCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCCGCAGCCCCCCACCCCTGCCCTGCCGCACCCCCCGGCGCAGCCGCCGCCGCCGCCCCCGCAGCAGTTCCCGCAGTTCCACGTCAAGTCCGGCCTGCAGATCAAGAAGAACGCCATCATCGATGACTACAAGGTCACCAGCCAGGTCCTGGGGCTGGGCATCAACGGCAAAGTTTTGCAGATCTTCAACAAGAGGACCCAGGAGAAATTCGCCCTCAAAATGCTTCAGGACTGCCCCAAGGCCCGCAGGGAGGTGGAGCTGCACTGGCGGGCCTCCCAGTGCCCGCACATCGTACGGATCGTGGATGTGTACGAGAATCTGTACGCAGGGAGGAAGTGCCTGCTGATTGTCATGGAATGTTTGGACGGTGGAGAACTCTTTAGCCGAATCCAGGATCGAGGAGACCAGGCATTCACAGAAAGAGAAGCATCCGAAATCATGAAGAGCATCGGTGAGGCCATCCAGTATCTGCATTCAATCAACATTGCCCATCGGGATGTCAAGCCTGAGAATCTCTTATACACCTCCAAAAGGCCCAACGCCATCCTGAAACTCACTGACTTTGGCTTTGCCAAGGAAACCACCAGCCACAACTCTTTGACCACTCCTTGTTATACACCGTACTATGTGGCTCCAGAAGTGCTGGGTCCAGAGAAGTATGACAAGTCCTGTGACATGTGGTCCCTGGGTGTCATCATGTACATCCTGCTGTGTGGGTATCCCCCCTTCTACTCCAACCACGGCCTTGCCATCTCTCCGGGCATGAAGACTCGCATCCGAATGGGCCAGTATGAATTTCCCAACCCAGAATGGTCAGAAGTATCAGAGGAAGTGAAGATGCTCATTCGGAATCTGCTGAAAACAGAGCCCACCCAGAGAATGACCATCACCGAGTTTATGAACCACCCTTGGATCATGCAATCAACAAAGGTCCCTCAAACCCCACTGCACACCAGCCGGGTCCTGAAGGAGGACAAGGAGCGGTGGGAGGATGTCAAGGGGTGTCTTCATGACAAGAACAGCGACCAGGCCACTTGGCTGACCAGGTTGTGA
反义核酸分子可以与编码以下各者的核苷酸序列的编码链的非编码区的全部或部分互补：TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2蛋白。非编码区(5’和3’未翻译区域)是基因中编码区侧翼的5’和3’序列，且不被翻译成氨基酸。
基于本文公开的序列，本领域技术人员可以容易选择和合成靶向编码以下各者的核酸的多种合适反义核酸中的任一种：TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2蛋白。靶向编码以下各者的核酸的反义核酸可以使用可在集成DNA技术网站(Integrated DNA Technologies)网站处获得的软件来设计：TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2蛋白。
反义核酸的长度可以是例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个或更多的核苷酸。反义寡核苷酸可以使用本领域已知的程序通过化学合成和酶结合反应来构建。例如，反义核酸可使用天然核苷酸或经被设计用于提高分子的生物稳定性或提高反义核酸和感觉核酸之间形成的双链的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如硫代磷酸酯衍生物和可以使用的吖啶取代的核苷酸)进行化学合成。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、怀丁苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。或者，可以使用表达载体生物产生反义核酸，其中核酸以反义方向亚克隆到表达载体中(即从插入的核酸转录的RNA将具有对所关注的目标核酸的反义方向)。
本文所述反义核酸分子可在体外制备并施予哺乳动物(例如人类)。可替代地，它们可以原位产生，使得它们与编码以下各者的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合：TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、LBP、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2蛋白，从而例如通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。杂交可以通过常规的核苷酸互补来形成稳定的双链，或者，例如反义核酸分子与DNA双链结合的情况下，通过双螺旋的大沟中的特定相互作用来形成。反义核酸分子可使用载体(例如慢病毒、逆转录病毒或腺病毒载体)递送至哺乳动物细胞。
反义核酸可以是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，链彼此平行(Gaultier等人,Nucleic Acids Res.15:6625-6641,1987)。反义核酸也可包含2’-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,Nucleic AcidsRes.15:6131-6148,1987)或嵌合体RNA-DNA类似物(Inoue等人,FEBS Lett.215:327-330,1987)。
抑制性核酸的另一实例是对编码TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2蛋白的核酸具有特异性(例如，对TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA具有特异性，例如对SEQID NO:13-49中的任一种具有特异性)的核酶。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化RNA分子，能够切割其上具有互补区的单链核酸如mRNA。因此，核酶(例如，锤头状核酶(描述在Haselhoff和Gerlach,Nature334:585-591,1988中)可以用于催化切割mRNA转录物，从而抑制由mRNA编码的蛋白质的翻译。对TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA具有特异性的核酶可以基于本文公开的TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA序列中的任一种的核苷酸序列设计。例如，可以构建四膜L-19IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与要在TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA中分裂的核苷酸序列互补(参见例如美国专利号4,987,071和5,116,742)。可替代地，TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA可以用于从RNA分子库中选择具有特异性核糖核酸酶活性的催化RNA。参见，例如Bartel等人,Science261:1411-1418,1993。
抑制性核酸也可以是形成三重螺旋结构的核酸分子。例如，TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2多肽的表达可以通过靶向与编码以下的基因的调节区互补的核苷酸序列来抑制：TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2多肽(例如启动子和/或增强子，例如在转录起始状态上游至少1kb、2kb、3kb、4kb或5kb的序列)，从而形成阻止靶细胞中基因的转录的三螺旋结构。通常参见Helene,Anticancer Drug Des.6(6):569-84,1991；Helene,Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36,1992；和Maher,Bioassays 14(12):807-15,1992。
在各种实施方式中，抑制性核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架处进行修饰以改善例如分子的稳定性、杂交性或溶解性。例如，可以对核酸的脱氧核糖磷酸骨架进行修饰以生成肽核酸(参见例如Hyrup等,Bioorganic Medicinal Chem.4(1):5-23,1996)。肽核酸(PNA)是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代，仅保留四种天然核苷。PNA的中性骨架允许在低离子强度的条件下对DNA和RNA进行特异性杂交。PNA寡聚物的合成可使用标准固相肽合成方案进行(参见例如Perry-O'Keefe等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:14670-675,1996)。PNA可作为反义或反基因因子，用于通过例如诱导转录或翻译扣留或抑制复制等方式对基因表达进行序列特异性调控。
PNA可通过将亲脂性或其它辅助基团连接到PNA、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过使用脂质体或本领域已知的药物递送的其它技术来修饰，例如以增强其稳定性或细胞摄取。例如，可以产生PNA-DNA嵌合体，其可以结合PNA和DNA的有利性质。这种嵌合体允许DNA识别酶(如RNA酶H和DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，而PNA部分将提供高结合亲和力和特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆叠、核碱基间键数和取向选择适当长度的连接体连接。
PNA-DNA嵌合体的合成可如Finn等人,Nucleic Acids Res.24:3357-63,1996中所述的进行。例如，可以使用标准的磷酰胺偶联化学和修饰的核苷类似物在固体载体上合成DNA链。诸如5’-(4-甲氧基三苯甲酰)氨基-5’-脱氧胸苷亚磷酰胺等化合物可用作PNA与DNA的5’端之间的连接(Mag等人,Nucleic Acids Res.17:5973-88,1989)。然后以逐步方式将PNA单体偶联以产生具有5’PNA片段和3’DNA片段的嵌合分子(Finn等人,Nucleic AcidsRes.24:3357-63,1996)。可替代地，嵌合分子可以用5’DNA片段和3’PNA片段合成(Peterser等人,Bioorganic Med.Chem.Lett.5:1119-11124,1975)。
在一些实施方式中，抑制性核酸可包括其它附加基团，诸如肽，或促进跨细胞膜转运的试剂(参见Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6553-6556,1989；Lemaitre等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84:648-652,1989；和WO88/09810)。此外，可使用杂交触发的裂解剂(参见例如Krol等人,Bio/Techniques6:958-976,1988)或插入剂(参见例如Zon,Pharm.Res.,5:539-549,1988)对抑制性核酸进行修饰。为此，寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂、杂交触发裂解剂等缀合。
可以降低哺乳动物细胞中TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA的表达的其它方式是通过RNA干扰(RNAi)。RNAi是其中mRNA在宿主细胞中降解的过程。为了抑制mRNA，与将被沉默的基因(例如编码TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2多肽的基因)的一部分相对应的双链RNA(dsRNA)被引入哺乳动物细胞。dsRNA被消化成21-23个核苷酸长的二联体，称为短干扰RNA(或siRNA)，与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导沉默复合物(或RISC)。RISC通过siRNA链中的一条与内源性mRNA之间的碱基配对相互作用来靶向同源转录物。然后从siRNA的3’端切下mRNA约12个核苷酸(参见Sharp等人,Genes Dev.15:485-490,2001，和Hammond等人,Nature Rev.Gen.2:110-119,2001)。
RNA介导的基因沉默可以以多种方式在哺乳动物细胞中诱导，例如通过加强RNA发夹的内源性表达(参见Paddison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:1443-1448,2002)，或如上所述通过小(21-23nt)dsRNA的转染(在Caplen,Trends Biotech.20:49-51,2002中进行了综述)。例如在美国专利号6506559和US2003/0056235中描述了用RNAi调节基因表达的方法，所述美国专利以引用方式并入本文中。
标准的分子生物学技术可以用来产生siRNA。短干扰RNA可以通过化学合成、重组产生，例如通过从模板DNA(如质粒)表达RNA，或从商业供应商(如Dharmacon)获得。用于介导RNAi的RNA可包括合成或修饰的核苷酸，如硫代磷酸核苷酸。用siRNA或用设计成制备siRNA的质粒转染细胞的方法是本领域的常规方法。
用于降低TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA的表达的siRNA分子可以在多个方面不同。例如，它们可以包括3’羟基和21、22或23个连续核苷酸的链。它们可以是钝端或在3’端、5’端或两端包括悬端。例如，RNA分子的至少一条链可具有从约1到约6个核苷酸(例如1-5、1-3、2-4或3-5个核苷酸(无论是嘧啶或嘌呤核苷酸)的3’突出端的长度。如果两条链都包括突出端，则每条链的突出端长度可能相同或不同。
为了进一步增强RNA双链的稳定性，可以稳定3’突出端以防降解(通过例如包括嘌呤核苷酸，诸如腺苷或鸟苷核苷酸，或用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸腺嘧啶核苷取代尿苷2-核苷酸3’突出端是耐受的，且不影响RNAi的有效性)。任何siRNA都可用于降低TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2 mRNA的方法中，只要它与感兴趣的靶标具有足够的同源性(例如在SEQ ID NO:13-49中的任一个中存在的序列，例如涵盖翻译起始位点或mRNA的第一外显子的靶序列)。可以使用的siRNA长度没有上限(例如siRNA可以是从基因的约21个碱基对到基因的全长或更长的范围(例如约20到约30个碱基对，约50到约60个碱基对，约60到约70个碱基对，约70到约80个碱基对，约80到约90个碱基对，或约90到约100个碱基对)。
作为靶向TNFα的抑制性核酸的示例性TNFα抑制剂包括例如反义DNA(例如，Myers等人,JPharmacolExp Ther.304(1):411-424,2003；Wasmuth等人,Invest.Opthalmol.Vis.Sci,2003；Dong等人,J.Orthop.Res.26(8):1114-1120,2008；美国专利申请序列号2003/0083275、2003/0022848、和2004/0770970；ISIS 104838；美国专利号6,180,403、6,080,580、和6,228,642；Kobzik等人,Inhibition of TNF Synthesis byAntisense Oligonucleotides,in Manual of Antisense Methodology,Kluwer AcademicPublishers,第4卷,第107-123页,1999；Taylor等人,Antisense Nucleic Acid DrugDevelop.8(3):199-205,1998；Mayne等人,Stroke 32:240-248,2001；Mochizuki等人,J.ControlledRelease 151(2):155-161,2011；Dong等人,J.Orthopaedic Res.26(8):1114-1120,2008；Dong等人,Pharm.Res.28(6):1349-1356,2011；和Pampfer等人,Biol.Reproduction 52(6):1316-1326,1995)、反义RNA、短干扰RNA(siRNA)(例如，Taishi等人,Brain Research 1156:125-132,2007；Presumey等人,Eur.J.Pharm.Biopharm.82(3):457-467,2012；Laroui等人,J.Controlled Release 186:41-53,2014；D’Amore等人,Int.J.Immunopathology Pharmacol.21:1045-1047,2008；Choi等人,J.Dermatol.Sci.52:87-97,2008；Qin等人,Artificial Organs 35:706-714,2011；McCarthy等人,J.ControlledRelease 168:28-34,2013；Khoury等人,Current Opin.Mol.Therapeutics 9(5):483-489,2007；Lu等人,RNA Interference Technology From Basic Science toDrug Development303,2005；Xie等人,PharmaGenomics 4(6):28-34,2004；Aldawsari等人,Current Pharmaceutical Design 21(31):4594-4605,2015；Zheng等人,Arch.Med.Sci.11:1296-1302,2015；Peng等人,Chinese J.Surgery 47(5):377-380,2009；Aldayel等人,Molecular Therapy.Nucleic Acids 5(7):e340,2016；Bai et al.,CurrentDrug Targets 16:1531-1539,2015；美国专利申请公开号2008/0097091、2009/0306356、和2005/0227935；和WO 14/168264)、短发夹RNA(shRNA)(例如，Jakobsen等人,Mol.Ther.17(10):1743-1753,2009；Ogawa等人,PLoS One 9(3):e92073,2014；Ding等人,BoneJoint94-6(Suppl.11):44,2014；和Hernandez-Alejandro等人,J.Surgical Res.176(2):614-620,2012)、和微小RNA(参见例如，WO15/26249)。在一些实施方式中，抑制性核酸阻断TNFα的前体mRNA剪接(例如，Chiu等人,Mol.Pharmacol.71(6):1640-1645,2007)。
在一些实施方式中，抑制性核酸，例如适配体(例如,Orava等人,ACS ChemBiol.2013；8(1):170-178,2013)可以阻断TNFα蛋白质与其受体(TNFR1和/或TNFR2)的阻断。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以下调TNFα诱导的下游介体(例如，TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、p38、JNK、IκB-α、或CCL2)的表达。下游TNFα诱导的介体的其它教示内容可以见于例如通过引用并入本文中的Schwamborn等人,BMC Genomics 4:46,2003；和Zhou等人,Oncogene 22:2034-2044,2003中。抑制性核酸的额外方面描述于Aagaard等人,Adv.DrugDelivery Rev.59(2):75-86,2007，和Burnett等人,Biotechnol.J.6(9):1130-1146,2011中。
在某些实施方式中，可以向有需要的受试者(例如人类受试者)施用治疗有效量的抑制性核酸，该抑制性核酸靶向编码以下各者的核酸：TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2蛋白。
在一些实施方式中，抑制性核酸可为约10个核苷酸至约40个核苷酸(例如约10至约30个核苷酸、约10至约25个核苷酸、约10至约20个核苷酸、约10至约15个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、14个核苷酸、15个核苷酸、16个核苷酸、17个核苷酸、18个核苷酸、19个核苷酸、20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸或40个核苷酸)的长度。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
如本领域所知，术语“热熔点(Tm)”是指在限定的离子强度、pH和抑制性核酸浓度下的温度，在该温度下在平衡时与靶序列互补的抑制性核酸的50％与靶序列杂交。在一些实施方式中，抑制性核酸可以在严格的条件下特异性地结合到靶核酸，例如对于短的寡核苷酸(例如10至50个核苷酸)而言，在pH 7.0到8.3下、盐浓度为至少约0.01到1.0M钠离子浓度(或其它盐)且温度为至少约30℃的条件下。加入甲酰胺等失稳剂也可达到严格的条件。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以大于20℃、大于22℃、大于24℃、大于26℃、大于28℃、大于30℃、大于32℃、大于34℃、大于36℃、大于38℃、大于40℃、大于42℃、大于44℃、大于46℃、大于48℃、大于50℃、大于52℃、大于54℃、大于56℃、大于58℃、大于60℃、大于62℃、大于64℃、大于66℃、大于68℃、大于70℃、大于72℃、大于74℃、大于76℃、大于78℃、或大于80℃的Tm与靶核酸(例如，编码TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2中的任一种的核酸)结合，例如如在磷酸盐缓冲盐水中使用UV分光光度计所测量。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以约20℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、约24℃、或约22℃(包括端值)；约22℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、或约24℃(包括端值)；约24℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、或约26℃(包括端值)；约26℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、或约28℃(包括端值)；约28℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、或约30℃(包括端值)；约30℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、或约32℃(包括端值)；约32℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、或约34℃(包括端值)；约34℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、或约36℃(包括端值)；约36℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、或约38℃(包括端值)；约38℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、或约40℃(包括端值)；约40℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、或约42℃(包括端值)；约42℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、或约44℃(包括端值)；约44℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、或约46℃(包括端值)；约46℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、或约48℃(包括端值)；约48℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、或约50℃(包括端值)；约50℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、或约52℃(包括端值)；约52℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、或约54℃(包括端值)；约54℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、或约56℃(包括端值)；约56℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、或约58℃(包括端值)；约58℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、或约60℃(包括端值)；约60℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、或约62℃(包括端值)；约62℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、或约64℃(包括端值)；约64℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、或约66℃(包括端值)；约66℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、或约68℃(包括端值)；约68℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、或约70℃(包括端值)；约70℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、或约72℃(包括端值)；约72℃至约80℃、约78℃、约76℃、或约74℃(包括端值)；约74℃至约80℃、约78℃、或约76℃(包括端值)；约76℃至约80℃或约78℃(包括端值)；或约78℃至约80℃(包括端值)的Tm与靶核酸(例如，编码TNFα、TNFR1、TNFR2、TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK、NF-κB、CD14、MyD88、IRAK、脂多糖结合蛋白(LBP)、TRAF6、ras、raf、MEK1/2、ERK1/2、NIK、IKK、IκB、NF-κB、rac、MEK4/7、JNK、c-jun、MEK3/6、p38、PKR、TTP或MK2中的任一种的核酸)结合。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成纳米颗粒(例如包含一种或多种合成聚合物的纳米颗粒，例如Patil等人,Pharmaceutical Nanotechnol.367:195-203,2009；Yang等人,ACS Appl.Mater.Interfaces,doi:10.1021/acsami.6b16556,2017；Perepelyuk等人,Mol.Ther.Nucleic Acids6:259-268,2017)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以是粘膜粘着颗粒(例如具有带正电荷外表面的纳米颗粒)(Andersen等人,MethodsMol.Biol.555:77-86,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以具有带中性电荷的外表面。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成例如脂质体(Buyens等人,J.ControlRelease 158(3):362-370,2012；Scarabel等人,Expert Opin.Drug Deliv.17:1-14,2017)、胶束(例如混合胶束)(Tangsangasaksri等人,BioMacromolecules17:246-255,2016；Wu等人,Nanotechnology,doi:10.1088/1361-6528/aa6519,2017)、微乳液(WO 11/004395)、纳米乳液或固体脂质纳米粒子(Sahay等人,Nature Biotechnol.31:653-658,2013；和Lin等人,Nanomedicine 9(1):105-120,2014)。US2016/0090598中描述了抑制性核酸的其它示例性结构特征和抑制性核酸的制剂。
在一些实施方式中，药物组合物可以包括无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)。在一些实例中，药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)组成。在某些实施方式中，无菌生理盐水是药物级生理盐水。在某些实施方式中，药物组合物可以包括一种或多种抑制核酸(例如本文所述的任何抑制核酸)和无菌水。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌水组成。在某些实施方式中，药物组合物包括一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成。在一些实例中，无菌盐水是药物级PBS。
在某些实施方式中，一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)可与用于制备药物组合物或制剂的药学上可接受的活性和/或惰性物质混合。用于配制药物组合物的组合物和方法取决于一些标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或施用剂量。
包括一种或多种抑制性核酸的药物组合物包含任何药物上可接受的盐、酯或此类酯的盐。药物组合物的非限制性示例包括抑制性核酸的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
本文还提供了前药，其可包括在抑制性核酸的一端或两端的额外核苷，其在身体内被内源性核酸酶切割以形成活性抑制性核酸。
脂质部分可用于形成抑制性核酸。在某些方法中，抑制性核酸被引入由阳离子脂质和中性脂质混合物制成的预成型脂质体或脂质体复合物中。在某些方法中，形成具有单阳离子或多阳离子脂质的抑制性核酸复合物，而不存在中性脂质。在某些实施方式中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物中特定细胞或组织的分布。在一些实例中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物脂肪组织中的分布。在某些实施方式中，选择脂质部分以增加抑制性核酸在肌肉组织的分布。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物包含一种或多种抑制性核酸和一种或多种赋形剂。在某些这样的实施方式中，赋形剂选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括脂质体和乳剂。脂质体和乳剂可用于配制疏水性化合物。在一些实例中，使用某些有机溶剂，如二甲基亚砜。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括一种或多种组织特异性递送分子，其设计用于将一种或多种抑制性核酸递送至哺乳动物中的特定组织或细胞类型。例如，药物组合物可以包括附有组织特异性抗体的脂质体。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物可以包括共溶剂体系。此类共溶剂体系的示例包括苯甲醇、非极性表面活性剂、水溶性有机聚合物和水相。这种共溶剂体系的非限制性示例是VPD共溶剂体系，其是包含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的无水乙醇溶液。可以理解，可以使用其它表面活性剂代替聚山梨酯80TM；聚乙二醇的粒径可以改变；其它生物相容性聚合物、例如聚乙烯吡咯烷酮可以替代聚乙二醇；其它糖或多糖可以替代葡萄糖。
在一些实例中，可将药物组合物配制成经口施用。在一些实例中，药物组合物配制用于颊施用。
在一些实例中，药物组合物配配制成通过注射(例如静脉注射、皮下注射、肌肉注射等)施用。在这些实施方式的一些中，药物组合物包括载体，并且在水溶液(诸如水或生理相容的缓冲剂，诸如汉克斯溶液、林格溶液或生理盐水缓冲剂)中配制。在一些实例中，还包括其它成分(例如有助于溶解或用作防腐剂的成分)。在一些实例中，使用适当的液体载体、悬浮剂等来制备可注射悬浮液。一些注射用药物组合物以单位剂量形式(例如在安瓿或多剂量容器中)来配制。一些用于注射的药物组合物是在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可能含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等配方剂。适用于注射用药物组合物的溶剂包括但不限于亲脂溶剂和脂肪油，例如芝麻油、合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，以及脂质体。
抗体
在一些实施方式中，TNFα抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施例中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合TNFα、TNFR1、或TNFR2中的任一种。在一些实施例中，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段可以特异性结合TNFα。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段可以特异性结合TNFα受体(TNFR1或TNFR2)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体，嵌合抗体，多价抗体或其片段。在一些实施例中，抗体可以是scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2、微型体(minibody)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig，和双亲和性重新靶向抗体(DART)、三功能抗体、具有共同LC的kih IgG、crossmab、ortho-Fab IgG、2-in-1-IgG、IgG-ScFv、scFv2-Fc、双纳米抗体、串联抗体、DART-Fc、scFv-HAS-scFv、DNL-Fab3、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体、纳米抗体-HSA、双抗体、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HAS、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
作为特异性结合TNFα的抗体的TNF抑制剂的非限制性实例描述于Elliott等人,Lancet 1994；344:1125-1127,1994；Rankin等人,Br.J.Rheumatol.2:334-342,1995；Butler等人,Eur.Cytokine Network 6(4):225-230,1994；Lorenz等人,J.Immunol.156(4):1646-1653,1996；Hinshaw等人,Circulatory Shock 30(3):279-292,1990；Wanner等人,Shock 11(6):391-395,1999；Bongartz等人,JAMA295(19):2275-2285,2006；Knight等人,Molecular Immunol.30(16):1443-1453,1993；Feldman,Nature Reviews Immunol.2(5):364-371,2002；Taylor等人,Nature Reviews Rheumatol.5(10):578-582,2009；Garces等人,Annals Rheumatic Dis.72(12):1947-1955,2013；Palladino等人,NatureRev.DrugDiscovery 2(9):736-746,2003；Sandborn等人,Inflammatory BowelDiseases 5(2):119-133,1999；Atzeni等人,Autoimmunity Reviews 12(7):703-708,2013；Maini等人,Immunol.Rev.144(1):195-223,1995；Ordas等人,Clin.Pharmacol.Therapeutics 91(4):635-646,2012；Cohen等人,Canadian J.Gastroenterol.Hepatol.15(6):376-384,2001；Feldmann等人,Ann.Rev.Immunol.19(1):163-196,2001；Ben-Horin等人,Autoimmunity Rev.13(1):24-30,2014；和美国专利号6,090,382；6,258,562；和6,509,015)中。
在某些实施方式中，TNFα抑制剂可以包括或为英利昔单抗(RemicadeTM)、CDP571、CDP 870、戈利木单抗(golimumabTM)、阿达木单抗(HumiraTM)、或培戈-赛妥珠单抗(certolizumab pegol，CimziaTM)。在某些实施方式中，所述TNFα抑制剂可以是TNFα抑制剂生物类似药。经过批准的和后期TNFα抑制剂生物类似药的实例包括但不限于：英利昔单抗生物类似药，诸如来自Celltrion/Pfizer的RemsimaTM和
Figure BDA0002449116230001051
(CT-P13)、来自Aprogen的GS071、来自Samsung Bioepis的FlixabiTM(SB2)、来自Pfizer/Sandoz的PF-06438179、来自Nichi-Iko Pharmaceutical公司的NI-071、和来自Amgen的ABP 710；阿达木单抗生物类似药，诸如来自印度Zydus Cadila的ExemptiaTM(ZRC3197)、来自Amgen的
Figure BDA0002449116230001061
和
Figure BDA0002449116230001062
(ABP 501)、来自Samsung Bioepis的Imraldi(SB5)、来自瑞士Sandoz的GP-2017、来自美国Oncobiologics/Viropro的ONS-3010、来自MomentaPharmaceuticals/Baxalta(Baxter spinoff USA)的M923、来自Pfizer的PF-06410293、来自Biocon/Mylan的BMO-2或MYL-1401-A、来自Coherus的CHS-1420、来自Fujifilm/KyowaHakko Kirin(Fujifilm Kyowa Kirin Biologics)的FKB327、来自Boehringer Ingelheim的Cyltezo(BI 695501)、来自Celltrion的CT-P17、来自Baxalta(现在是Shire的一部分)的BAX 923、来自Fresenius Kabi的MSB11022(2017年购自Merck kGaA(Merck Group))、来自韩国/日本LG Life Sciences/Mochida Pharmaceutical的LBAL、来自Prestige Biopharma的PBP1502、来自印度Torrent Pharmaceuticals的Adfrar、由Adello Biologics开发的阿达木单抗的生物类似药、由德国/瑞士AET Biotech/BioXpress Therapeutics开发的阿达木单抗的生物类似药、来自西班牙mAbxience的阿达木单抗的生物类似药、由加拿大PlantForm开发的阿达木单抗的生物类似药；和依那西普生物类似药，诸如来自Sandoz/Novartis的ErelziTM、来自Samsung Bioepis的BrenzysTM(SB4)、来自Sandoz的GP2015、来自Mycenax的
Figure BDA0002449116230001063
来自LG Life的LBEC0101和来自Coherus的CHS-0214。
在一些实施方式中，生物类似药是具有与参考抗体(例如，阿达木单抗)相比具有相同的一级氨基酸序列的轻链和与参考抗体相比具有相同的一级氨基酸序列的重链的抗体或其抗原结合片段。在一些实例中，生物类似药是具有包含与参考抗体(例如，阿达木单抗)相同的轻链可变结构域序列的轻链和包含与参考抗体相同的重链可变结构域序列的重链的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，生物类似药可具有与参考抗体(例如，阿达木单抗)相比类似的糖基化模式。在其它实施方式中，生物类似药可具有与参考抗体(例如，阿达木单抗)相比不同的糖基化模式。
与参考抗体(例如，阿达木单抗)相比，生物类似药的N-连接糖基化谱图的变化可以使用2-邻氨基苯甲酸(AA)衍生化和具有荧光检测的正常相液相色谱来检测，如Kamoda等人,J.ChromatographyJ.1133:332-339,2006中一般所描述。例如，与参考抗体(例如，阿达木单抗)相比，生物类似药可具有以下类型的N-糖基化中的一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或十一种)的变化：电中性寡糖；单唾液酸化含岩藻糖寡糖；单唾液酸化寡糖；双唾液酸化含岩藻糖寡糖；双唾液酸化寡糖；三触角的(triantennary)、形式1的三唾液酸化寡糖；三触角的、形式2的三唾液酸化寡糖；甘露糖-6-磷酸寡糖；单磷酸化寡糖；四唾液酸化寡糖；单唾液酸化和单磷酸化寡糖；和双甘露糖-6-磷酸寡糖。
在一些实施方式中，与参考抗体(例如，阿达木单抗)相比，生物类似药可具有以下中的一种、两种或三种的变化：具有一个C末端赖氨酸的物种的百分比、具有两个C末端赖氨酸的物种的百分比以及具有三个C末端赖氨酸的物种的百分比。
在一些实施方式中，与参考抗体(例如，阿达木单抗)相比，生物类似药可在组合物中具有酸性物种、中性物种和碱性物种中的一种、两种或三种的水平变化。
在一些实施方式中，与参考抗体相比，生物类似药可具有硫酸化水平的变化。
在一些实施方式中，TNFα抑制剂可以是SAR252067(例如，特异性结合TNFSF14的单克隆抗体，描述于美国专利申请公开号2013/0315913中)或MDGN-002(描述于美国专利申请公开号2015/0337046中)。在一些实施方式中，TNFα抑制剂可以是PF-06480605，其特异性结合TNFSF15(例如，描述于美国专利申请公开号2015/0132311中)。TNFα抑制剂的额外实例包括DLCX105(描述于Tsianakas等人,Exp.Dermatol.25:428-433,2016中)和特异性结合TNFSF15的PF-06480605(描述于美国专利申请公开号2015/0132311中)。作为抗体或抗原结合抗体片段的TNFα抑制剂的其它实例描述于例如WO 17/158097、EP3219727、WO 16/156465、和WO 17/167997中。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
融合蛋白
在一些实施方式中，所述TNFα抑制剂是融合蛋白(例如，融合至配偶体肽，例如免疫球蛋白，例如人IgG的Fc区的TNFR的胞外结构域)(参见，例如Peppel等人,J.Exp.Med.174(6):1483-1489,1991；Deeg等人,Leukemia 16(2):162,2002)或特异性结合TNFα的可溶性TNFR(例如，TNFR1或TNFR2)。在一些实施方式中，所述TNFα抑制剂包括或是依那西普(EnbrelTM)(参见，例如WO 91/03553和WO 09/406,476，所述专利通过引用并入本文)。在一些实施方式中，所述TNFα抑制剂包括或是r-TBP-I(例如，Gradstein等人,J.Acquir.ImmuneDefic.Syndr.26(2):111-117,2001)。在一些实施方式中，TNFα抑制剂包括或是可溶性TNFα受体(例如，Watt等人,JLeukoc Biol.66(6):1005-1013,1999；Tsao等人,EurRespir J.14(3):490-495,1999；Kozak等人,Am.J.Physiol.Reg.Integrative ComparativePhysiol.269(1):R23-R29,1995；Mohler等人,J.Immunol.151(3):1548-1561,1993；Nophar等人,EMBOJ.9(10):3269,1990；Bjornberg等人,Lymphokine Cytokine Res.13(3):203-211,1994；Piguet等人,Eur.RespiratoryJ.7(3):515-518,1994；和Gray等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87(19):7380-7384,1990)。
小分子
在一些实施方式中，TNFα抑制剂是小分子。在一些实施方式中，所述TNFα抑制剂是C87(Ma等人,J.Biol.Chem.289(18):12457-66,2014)。在一些实施方式中，所述小分子是LMP-420(例如，Haraguchi等人,AIDS Res.Ther.3:8,2006)。在一些实施方式中，所述小分子是肿瘤坏死因子转化酶(TACE)抑制剂(例如，Moss等人,Nature Clinical PracticeRheumatology 4:300-309,2008)。在一些实施方式中，所述TACE抑制剂是TMI-005和BMS-561392。小分子抑制剂的另外实例描述于例如He等人,Science 310(5750):1022-1025,2005中。
在一些实例中，TNFα抑制剂是抑制哺乳动物细胞中TRADD、TRAF2、MEKK1/4、MEKK4/7、JNK、AP-1、ASK1、RIP、MEKK 3/6、MAPK、NIK、IKK和NF-κB中的一种的活性的小分子。
在一些实例中，TNFα抑制剂是抑制以下中的一种的活性的小分子：CD14、MyD88(参见例如,Olson等人,Scientific Reports 5:14246,2015)、IRAK(Chaudhary等人,J.Med.Chem.58(1):96-110,2015)、脂多糖结合蛋白(LBP)(参见例如，美国专利号5,705,398)、TRAF6(例如，3-[(2,5-二甲基苯基)氨基]-1-苯基-2-丙-1-酮)、ras(例如，Baker等人,Nature 497:577-578,2013)、raf(例如，维莫非尼(PLX4032，RG7204)、甲苯磺酸索拉非尼、PLX-4720、达拉非尼(GSK2118436)、GDC-0879、RAF265(CHIR-265)、AZ 628、NVP-BHG712、SB590885、ZM 336372、索拉非尼、GW5074、TAK-632、CEP-32496、恩拉非尼(encorafenib)(LGX818)、CCT196969、LY3009120、RO5126766(CH5126766)、PLX7904、和MLN2480)、MEK1/2(例如，Facciorusso等人,Expert Review Gastroentrol.Hepatol.9:993-1003,2015)、ERK1/2(例如，Mandal等人,Oncogene35:2547-2561,2016)、NIK(例如，Mortier等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.20:4515-4520,2010)、IKK(例如，Reilly等人,Nature Med.19:313-321,2013)、IκB(例如，Suzuki等人,Expert.Opin.Invest.Drugs 20:395-405,2011)、NF-κB(例如，Gupta等人,Biochim.Biophys.Acta 1799(10-12):775-787,2010)、rac(例如，美国专利号9,278,956)、MEK4/7、JNK(例如，AEG 3482、BI 78D3、CEP 1347、c-JUN肽、IQ 1S、JIP-1(153-163)、SP600125、SU 3327、和TCS JNK6o)、c-jun(例如，AEG 3482、BI 78D3、CEP1347、c-JUN肽、IQ 1S、JIP-1(153-163)、SP600125、SU 3327、和TCS JNK6o)、MEK3/6(例如，Akinleye等人,J.Hematol.Oncol.6:27,2013)、p38(例如，AL 8697、AMG 548、BIRB 796、CMPD-1、DBM1285二氢氯化物、EO 1428、JX 401、ML 3403、Org 48762-0、PH 797804、RWJ67657、SB 202190、SB 203580、SB 239063、SB 706504、SCIO 469、SKF 86002、SX 011、TA01、TA 02、TAK 715、VX 702、和VX 745)、PKR(例如，2-氨基嘌呤或CAS 608512-97-6)、TTP(例如，CAS 329907-28-0)、和MK2(PF 3644022和PHA 767491)。
IL-6受体抑制剂
术语“IL-6受体抑制剂”是指降低IL-6受体表达和/或IL-6与IL-6受体结合的能力的试剂。在一些实施方式中，IL-6受体抑制剂靶向IL-6受体β亚基糖蛋白130(sIL6gp130)。在其它实施方式中，IL-6受体抑制剂靶向IL-6受体亚基(IL6R)。在其它实施方式中，IL-6受体抑制剂靶向由IL-6受体亚基(IL6R)和IL-6受体β-亚基糖蛋白130(sIL6gp130)组成的复合物。在一些实施方式中，IL-6受体抑制剂靶向IL-6。
在一些实施方式中，IL-6受体抑制剂是抑制性核酸、抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、IL-6受体拮抗剂、或小分子。在一些实施方式中，抑制性核酸是小干扰RNA、反义核酸、适配体或微小RNA。本文中描述了示例性IL-6受体抑制剂。IL-6受体抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
不同的抑制性核酸的示例性方面在下文中描述。可以降低IL6R、sIL6gp130或IL-6mRNA表达的抑制性核酸的任何实例。可以减少哺乳动物细胞中的IL6R、sIL6gp130、或IL-6mRNA的表达的抑制性核酸包括反义核酸分子，即其核苷酸序列与IL6R、sIL6gp130、或IL-6mRNA的全部或部分互补(例如，与SEQ ID NO:50-55的任何一个的全部或部分互补)的核酸分子。
人IL6R mRNA变体1(SEQ ID NO:50)
Figure BDA0002449116230001101
Figure BDA0002449116230001111
Figure BDA0002449116230001121
Figure BDA0002449116230001131
人IL6R mRNA变体2(SEQ ID NO:51)
Figure BDA0002449116230001132
Figure BDA0002449116230001141
Figure BDA0002449116230001151
人IL6R mRNA变体3(SEQ ID NO:52)
Figure BDA0002449116230001152
Figure BDA0002449116230001161
人IL-6受体β亚基糖蛋白130(sIL6gp130)(SEQ ID NO:53)
Figure BDA0002449116230001162
Figure BDA0002449116230001171
Figure BDA0002449116230001181
人IL-6mRNA转录物1(SEQ ID NO:54)
Figure BDA0002449116230001182
人IL-6mRNA转录物2(SEQ ID NO:55)
Figure BDA0002449116230001183
Figure BDA0002449116230001191
抑制性核酸
反义核酸分子可与编码IL6R、sIL6gp130或IL-6蛋白的核苷酸序列的编码链的全部或部分非编码区互补。非编码区(5’和3’未翻译区域)是基因中编码区侧翼的5’和3’序列，且不被翻译成氨基酸。
基于本文公开的序列，本领域技术人员可以容易地选择和合成许多适当的反义核酸中的任一种，以靶向本文所述的编码IL6R、sIL6gp130或IL-6蛋白的核酸。靶向编码IL6R、sIL6gp130或IL-6蛋白的核酸的反义核酸可以使用集成DNA技术网站(Integrated DNATechnologies website)上提供的软件进行设计。
例如，反义核酸的长度可以是约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个或更多的核苷酸。反义寡核苷酸可以使用本领域已知的程序通过化学合成和酶结合反应来构建。例如，反义核酸可使用天然核苷酸或经被设计用于提高分子的生物稳定性或提高反义核酸和感觉核酸之间形成的双链的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如硫代磷酸酯衍生物和可以使用的吖啶取代的核苷酸)进行化学合成。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、怀丁苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。或者，可以使用表达载体生物产生反义核酸，其中核酸以反义方向亚克隆到表达载体中(即从插入的核酸转录的RNA将具有对所关注的目标核酸的反义方向)。
本文所述反义核酸分子可在体外制备并施予哺乳动物(例如人类)。可替代地，它们可以在原位产生，使它们与编码以下的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合：IL6R、sIL6gp130或IL-6蛋白，从而例如通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。杂交可以通过常规的核苷酸互补来形成稳定的双链，或者，例如反义核酸分子与DNA双链结合的情况下，通过双螺旋的大沟中的特定相互作用来形成。反义核酸分子可使用载体(例如慢病毒、逆转录病毒或腺病毒载体)递送至哺乳动物细胞。
反义核酸可以是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，链彼此平行(Gaultier等人,Nucleic Acids Res.15:6625-6641,1987)。反义核酸也可包含2’-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,Nucleic AcidsRes.15:6131-6148,1987)或嵌合体RNA-DNA类似物(Inoue等人,FEBS Lett.215:327-330,1987)。
作为IL-6受体抑制剂的示例性反义核酸描述于Keller等人,J.Immunol.154(8):4091-4098,1995；和Jiang等人,AnticancerRes.31(9):2899-2906,2011中。
抑制性核酸的另一实例是对编码IL6R、sIL6gp130或IL-6蛋白的核酸具有特异性的核酶(例如对IL6R、sIL6gp130或IL-6mRNA的特异性，例如对SEQ ID NO:50-55中任一个的特异性)。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化RNA分子，能够切割其上具有互补区的单链核酸如mRNA。因此，核酶(例如，锤头状核酶(描述在Haselhoff和Gerlach,Nature 334:585-591,1988中)可以用于催化切割mRNA转录物，从而抑制由mRNA编码的蛋白质的翻译。对IL6R、sIL6gp130或IL-6mRNA具有特异性的核酶可以基于本文公开的以下中的任一个的核苷酸序列来设计：IL6R、sIL6gp130或IL-6mRNA序列。例如，可以构建四膜细胞L-19IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与要在IL6R、sIL6gp130或IL-6mRNA中分裂的核苷酸序列互补(参见例如美国专利号4,987,071和5,116,742)。可替代地，SMAD7 mRNA可用于从RNA分子库中选择具有特异核糖核酸酶活性的催化RNA。参见，例如Bartel等人,Science261:1411-1418,1993。
抑制性核酸也可以是形成三重螺旋结构的核酸分子。例如，IL6R、sIL6gp130或IL-6多肽的表达可通过靶向与编码以下的基因的调节区互补的核苷酸序列而被抑制：IL6R、sIL6gp130或IL-6多肽(例如启动子和/或增强子，例如在转录起始状态上游至少1kb、2kb、3kb、4kb或5kb的序列)，从而形成阻止靶细胞中基因的转录的三螺旋结构。通常参见Helene,Anticancer Drug Des.6(6):569-84,1991；Helene,Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36,1992；和Maher,Bioassays 14(12):807-15,1992。
在各种实施方式中，抑制性核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架处进行修饰以改善例如分子的稳定性、杂交性或溶解性。例如，可以对核酸的脱氧核糖磷酸骨架进行修饰以生成肽核酸(参见例如Hyrup等,Bioorganic Medicinal Chem.4(1):5-23,1996)。肽核酸(PNA)是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代，仅保留四种天然核苷。PNA的中性骨架允许在低离子强度的条件下对DNA和RNA进行特异性杂交。PNA寡聚物的合成可使用标准固相肽合成方案进行(参见例如Perry-O'Keefe等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:14670-675,1996)。PNA可作为反义或抗原因子，用于通过例如诱导转录或翻译扣留或抑制复制等方式对基因表达进行序列特异性调控。
PNA可通过将亲脂性或其它辅助基团连接到PNA、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过使用脂质体或本领域已知的药物递送的其它技术来修饰，例如以增强其稳定性或细胞摄取。例如，可以产生PNA-DNA嵌合体，其可以结合PNA和DNA的有利性质。这种嵌合体允许DNA识别酶(如RNA酶H和DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，而PNA部分将提供高结合亲和力和特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆叠、核碱基间键数和取向选择适当长度的连接体连接。
PNA-DNA嵌合体的合成可如Finn等人,Nucleic Acids Res.24:3357-63,1996中所述的进行。例如，可以使用标准的磷酰胺偶联化学和修饰的核苷类似物在固体载体上合成DNA链。诸如5’-(4-甲氧基三苯甲酰)氨基-5’-脱氧胸苷亚磷酰胺等化合物可用作PNA与DNA的5’端之间的连接(Mag等人,Nucleic Acids Res.17:5973-88,1989)。然后以逐步方式将PNA单体偶联以产生具有5’PNA片段和3’DNA片段的嵌合分子(Finn等人,Nucleic AcidsRes.24:3357-63,1996)。可替代地，嵌合分子可以用5’DNA片段和3’PNA片段合成(Peterser等人,Bioorganic Med.Chem.Lett.5:1119-11124,1975)。
在一些实施方式中，抑制性核酸可包括其它附加基团，诸如肽，或促进跨细胞膜转运的试剂(参见Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6553-6556,1989；Lemaitre等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84:648-652,1989；和WO88/09810)。此外，可使用杂交触发的裂解剂(参见例如Krol等人,Bio/Techniques6:958-976,1988)或插入剂(参见例如Zon,Pharm.Res.5:539-549,1988)对抑制性核酸进行修饰。为此，寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂、杂交触发裂解剂等缀合。
可以减少在哺乳动物细胞中表达IL6R、sIL6gp130或IL-6mRNA的其它方式是通过RNA干扰(RNAi)。RNAi是其中mRNA在宿主细胞中降解的过程。为了抑制mRNA，与将被沉默的基因(例如编码IL6R、sIL6gp130或IL-6多肽的基因)的一部分相对应的双链RNA(dsRNA)被引入哺乳动物细胞。dsRNA被消化成21-23个核苷酸长的二联体，称为短干扰RNA(或siRNA)，与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导沉默复合物(或RISC)。RISC通过siRNA链中的一条与内源性mRNA之间的碱基配对相互作用来靶向同源转录物。然后从siRNA的3’端切下mRNA约12个核苷酸(参见Sharp等人,Genes Dev.15:485-490,2001，和Hammond等人,NatureRev.Gen.2:110-119,2001)。
RNA介导的基因沉默可以以多种方式在哺乳动物细胞中诱导，例如通过加强RNA发夹的内源性表达(参见Paddison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:1443-1448,2002)，或如上所述通过小(21-23nt)dsRNA的转染(在Caplen,Trends Biotech.20:49-51,2002中进行了综述)。例如在美国专利号6506559和US2003/0056235中描述了用RNAi调节基因表达的方法，其以引用方式并入本文中。
标准的分子生物学技术可以用来产生siRNA。短干扰RNA可以通过化学合成、重组产生，例如通过从模板DNA(如质粒)表达RNA，或从商业供应商(如Dharmacon)获得。用于介导RNAi的RNA可包括合成或修饰的核苷酸，如硫代磷酸核苷酸。用siRNA或用设计成制备siRNA的质粒转染细胞的方法是本领域的常规方法。
用于降低IL6R、sIL6gp130或IL-6mRNA表达的siRNA分子可以以多种方式变化。例如，它们可以包括3’羟基和21、22或23个连续核苷酸的链。它们可以是钝端或在3’端、5’端或两端包括一个悬端。例如，RNA分子的至少一条链可具有从约1到约6个核苷酸(例如1-5、1-3、2-4或3-5个核苷酸(无论是嘧啶或嘌呤核苷酸)的3’突出端的长度。如果两条链都包括突出端，则每条链的突出端长度可能相同或不同。
为了进一步增强RNA双链的稳定性，可以稳定3’突出端以防降解(通过例如包括嘌呤核苷酸，诸如腺苷或鸟苷核苷酸，或用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸腺嘧啶核苷取代尿苷2-核苷酸3’突出端是耐受的，且不影响RNAi的有效性)。任何siRNA都可用于降低IL6R、sIL6gp130或IL-6mRNA的方法中，只要它与感兴趣的目标具有足够的同源性(例如在SEQ ID NO:50-55中的任一个中存在的序列，例如涵盖翻译起始位点或mRNA的第一外显子的靶序列)。可以使用的siRNA长度没有上限(例如siRNA可以是从基因的约21个碱基对到基因的全长或更长的范围(例如约20到约30个碱基对，约50到约60个碱基对，约60到约70个碱基对，约70到约80个碱基对，约80到约90个碱基对，或约90到约100个碱基对)。
作为IL-6受体抑制剂的短干扰RNA(siRNA)的非限制性实例描述于Yi等人,Int.J.Oncol.41(1):310-316,2012；和Shinriki等人,Clin.Can.Res.15(17):5426-5434,2009)中。作为IL-6受体抑制剂的微小RNA的非限制性实例描述于miR34a(Li等人,Int.J.Clin.Exp.Pathol.8(2):1364-1373,2015)和miR-451(Liu等人,CancerEpidemiol.38(1):85-92,2014)中。
作为IL-6受体抑制剂的适配体的非限制性实例描述于Meyer等人,RNA Biol.11(1):57-65,2014；Meyer等人,RNA Biol.9(1):67-80,2012；和Mittelberger等人,RNABiol.12(9):1043-1053,2015中。作为IL-6受体抑制剂的抑制性核酸的额外实例描述于例如WO 96/040157中。
在某些实施方式中，可向有需要的患者(例如人类受试者)施用治疗有效量的靶向编码IL6R、sIL6gp130或IL-6蛋白的核酸的抑制性核酸。
在一些实施方式中，抑制性核酸可为约10个核苷酸至约40个核苷酸(例如约10至约30个核苷酸、约10至约25个核苷酸、约10至约20个核苷酸、约10至约15个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、14个核苷酸、15个核苷酸、16个核苷酸、17个核苷酸、18个核苷酸、19个核苷酸、20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸或40个核苷酸)的长度。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
如本领域所知，术语“热熔点(Tm)”是指在限定的离子强度、pH和抑制性核酸浓度下的温度，在该温度下与靶序列互补的抑制性核酸的50％在平衡时与靶序列杂交。在一些实施方式中，抑制性核酸可以在严格的条件下特异性地结合到靶核酸，例如对于短的寡核苷酸(例如10至50个核苷酸)而言，在pH 7.0到8.3下、盐浓度为至少约0.01到1.0M钠离子浓度(或其它盐)且温度为至少约30℃的条件下。加入甲酰胺等失稳剂也可达到严格的条件。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以大于20℃、大于22℃、大于24℃、大于26℃、大于28℃、大于30℃、大于32℃、大于34℃、大于36℃、大于38℃、大于40℃、大于42℃、大于44℃、大于46℃、大于48℃、大于50℃、大于52℃、大于54℃、大于56℃、大于58℃、大于60℃、大于62℃、大于64℃、大于66℃、大于68℃、大于70℃、大于72℃、大于74℃、大于76℃、大于78℃、或大于80℃的Tm与靶核酸(例如，编码IL6R、sIL6gp130或IL-6中的任一种的核酸)结合，例如如在磷酸盐缓冲盐水中使用UV分光光度计所测量。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以约20℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、约24℃、或约22℃(包括端值)；约22℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、或约24℃(包括端值)；约24℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、或约26℃(包括端值)；约26℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、或约28℃(包括端值)；约28℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、或约30℃(包括端值)；约30℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、或约32℃(包括端值)；约32℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、或约34℃(包括端值)；约34℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、或约36℃(包括端值)；约36℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、或约38℃(包括端值)；约38℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、或约40℃(包括端值)；约40℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、或约42℃(包括端值)；约42℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、或约44℃(包括端值)；约44℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、或约46℃(包括端值)；约46℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、或约48℃(包括端值)；约48℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、或约50℃(包括端值)；约50℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、或约52℃(包括端值)；约52℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、或约54℃(包括端值)；约54℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、或约56℃(包括端值)；约56℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、或约58℃(包括端值)；约58℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、或约60℃(包括端值)；约60℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、或约62℃(包括端值)；约62℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、或约64℃(包括端值)；约64℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、或约66℃(包括端值)；约66℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、或约68℃(包括端值)；约68℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、或约70℃(包括端值)；约70℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、或约72℃(包括端值)；约72℃至约80℃、约78℃、约76℃、或约74℃(包括端值)；约74℃至约80℃、约78℃、或约76℃(包括端值)；约76℃至约80℃或约78℃(包括端值)；或约78℃至约80℃(包括端值)的Tm与靶核酸(例如，编码IL6R、sIL6gp130或IL-6中的任一种的核酸)结合。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成纳米颗粒(例如包含一种或多种合成聚合物的纳米颗粒，例如Patil等人,Pharmaceutical Nanotechnol.367:195-203,2009；Yang等人,ACS Appl.Mater.Interfaces,doi:10.1021/acsami.6b16556,2017；Perepelyuk等人,Mol.Ther.Nucleic Acids6:259-268,2017)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以是粘膜粘着颗粒(例如具有带正电荷外表面的纳米颗粒)(Andersen等人,MethodsMol.Biol.555:77-86,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以具有带中性电荷的外表面。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成例如脂质体(Buyens等人,J.ControlRelease 158(3):362-370,2012；Scarabel等人,Expert Opin.Drug Deliv.17:1-14,2017)、胶束(例如混合胶束)(Tangsangasaksri等人,BioMacromolecules17:246-255,2016；Wu等人,Nanotechnology,doi:10.1088/1361-6528/aa6519,2017)、微乳液(WO 11/004395)、纳米乳液或固体脂质纳米粒子(Sahay等人,Nature Biotechnol.31:653-658,2013；和Lin等人,Nanomedicine 9(1):105-120,2014)。US2016/0090598中描述了抑制性核酸的其它示例性结构特征和抑制性核酸的制剂。
在一些实施方式中，药物组合物可以包括无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)。在一些实例中，药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)组成。在某些实施方式中，无菌生理盐水是药物级生理盐水。在某些实施方式中，药物组合物可以包括一种或多种抑制核酸(例如本文所述的任何抑制核酸)和无菌水。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌水组成。在某些实施方式中，药物组合物包括一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成。在一些实例中，无菌盐水是药物级PBS。
在某些实施方式中，一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)可与用于制备药物组合物或制剂的药学上可接受的活性和/或惰性物质混合。用于制备药物组合物的组合物和方法取决于许多标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或施用剂量。
包括一种或多种抑制性核酸的药物组合物包含任何药物上可接受的盐、酯或此类酯的盐。药物组合物的非限制性示例包括抑制性核酸的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
本文还提供了前药，其可包括在抑制性核酸一端或两端的额外核苷，其在身体内被内源性核酸酶切割以形成活性抑制性核酸。
脂质部分可用于形成抑制性核酸。在某些方法中，抑制性核酸被引入由阳离子脂质和中性脂质混合物制成的预成型脂质体或脂质体复合物中。在某些方法中，形成具有单阳离子或多阳离子脂质的抑制性核酸复合物，而不使用中性脂质。在某些实施方式中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物中特定细胞或组织的分布。在一些实例中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物脂肪组织中的分布。在某些实施方式中，选择脂质部分以增加抑制性核酸在肌肉组织的分布。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物包含一种或多种抑制性核酸和一种或多种赋形剂。在某些这样的实施方式中，赋形剂选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括脂质体和乳剂。脂质体和乳剂可用于制备疏水性化合物。在一些实例中，使用某些有机溶剂，如二甲基亚砜。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括一种或多种组织特异性递送分子，其设计用于将一种或多种抑制性核酸递送至哺乳动物中的特定组织或细胞类型。例如，药物组合物可以包括附有组织特异性抗体的脂质体。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物可以包括共溶剂体系。此类共溶剂体系的示例包括苯甲醇、非极性表面活性剂、水溶性有机聚合物和水相。这种共溶剂体系的非限制性示例是VPD共溶剂体系，其是包含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的无水乙醇溶液。可以理解，可以使用其它表面活性剂代替聚山梨酯80TM；聚乙二醇的粒径可以改变；其它生物相容性聚合物、例如聚乙烯吡咯烷酮可以替代聚乙二醇；其它糖或多糖可以替代葡萄糖。
在一些实例中，可将药物组合物配制成经口施用。在一些实例中，药物组合物配制用于颊施用。
在一些实例中，药物组合物配制成通过注射(例如静脉注射、皮下注射、肌肉注射等)施用。在这些实施方式的一些中，药物组合物包括载体，并且在水溶液(诸如水或生理相容的缓冲剂，诸如汉克斯溶液、林格溶液或生理盐水缓冲剂)中配制。在一些实例中，还包括其它成分(例如有助于溶解或用作防腐剂的成分)。在一些实例中，使用适当的液体载体、悬浮剂等来制备可注射悬浮液。一些注射用药物组合物以单位剂量形式(例如在安瓿或多剂量容器中)来配制。一些用于注射的药物组合物是在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可能含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等配方剂。适用于注射用药物组合物的溶剂包括但不限于亲脂溶剂和脂肪油，例如芝麻油、合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，以及脂质体。
抗体
在一些实施方式中，IL-6受体抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合IL-6。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合IL-6受体(例如，IL6R和sIL6gp130中的一种或两种)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体，嵌合抗体，多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2、微型抗体(minibody)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig，和双亲和性重新靶向抗体(DART)、三功能抗体、具有共同LC的kih IgG、crossmab、ortho-Fab IgG、2-in-1-IgG、IgG-ScFv、scFv2-Fc、双纳米抗体、串联抗体、DART-Fc、scFv-HAS-scFv、DNL-Fab3、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体、纳米抗体-HSA、双抗体、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HAS、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在某些实施方式中，抗体包含或由以下各者的抗原结合片段或部分组成：托西利珠单抗(artlizumab，
Figure BDA0002449116230001281
Sebba,Am.J.Health Syst.Pharm.65(15):1413-1418,2008；Tanaka等人,FEBS Letters 585(23):3699-3709,2011；Nishimoto等人,ArthritisRheum.50:1761-1769,2004；Yokota等人,Lancet371(9617):998-1006,2008；Emery等人,Ann.Rheum.Dis.67(11):1516-1523,2008；Roll等人,Arthritis Rheum.63(5):1255-1264,2011)；克拉吉珠单抗(BMS945429；ALD518，一种人源化单克隆壳体，其结合循环IL-6细胞因子而非IL-6受体，阻断经典的信号传导和反式信号传导(Weinblatt,Michael E.等人“TheEfficacy and Safety of Subcutaneous Clazakizumab in Patients With Moderate-to-Severe Rheumatoid Arthritis and an Inadequate Response to Methotrexate:Results From a Multinational,Phase IIb,Randomized,Double-Blind,Placebo/Active-Controlled,Dose-Ranging Study.”Arthritis&Rheumatology 67.10(2015):2591-2600.))；萨瑞鲁单抗(REGN88或SAR153191；Huizinga等人,Ann.Rheum.Dis.73(9):1626-1634,2014；Sieper等人,Ann.Rheum.Dis.74(6):1051-1057,2014；Cooper,Immunotherapy8(3):249-250,2016)；MR-16(Hartman等人,PLosOne 11(12):e0167195,2016；Fujita等人,Biochim.Biophys.Acta.10:3170-80,2014；Okazaki等人,Immunol.Lett.84(3):231-40,2002；Noguchi-Sasaki等人,BMC Cancer 16:270,2016；Ueda等人,Sci.Rep.3:1196,2013)；rhPM-1(MRA；Nishimoto等人,Blood 95:56-61,2000；Nishimoto等人,Blood 106:2627-2632,2005；Nakahara等人,Arthritis Rheum.48(6):1521-1529,2003)；NI-1201(Lacroix等人,J.Biol.Chem.290(45):26943-26953,2015)；EBI-029(Schmidt等人,Eleven Biotherapeutics Poster#B0200,2014)。在一些实施方式中，抗体是纳米抗体(例如，ALX-0061(Van Roy等人,ArthritisRes.Ther.17:135,2015；Kim等人,Arch.Pharm.Res.38(5):575-584,2015))。在一些实施方式中，抗体是NRI或其变体(Adachi等人,Mol.Ther.11(1):S262-263,2005；Hoshino等人,Can.Res.67(3):871-875,2007)。在一些实施方式中，抗体是PF-04236921(Pfizer)(Wallace等人,Ann.Rheum.Dis.76(3):534-542,2017)。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
融合蛋白
在一些实施方式中，IL-6受体抑制剂是融合蛋白、可溶性受体或肽(参见例如，美国专利号5,591,827)。在一些实施方式中，IL-6受体融合蛋白包含可溶性gp130或由其组成(Jostock等人,Eur.J.Biochem.268(1):160-167,2001；Richards等人,ArthritisRheum.54(5):1662-1672,2006；Rose-John等人,Exp.Opin.Ther.Targets 11(5):613-624,2007)。
在一些实施方式中，IL-6受体融合蛋白包含FE999301(Jostock等人,Eur.J.Biochem.268(1):160-167,2001)或sgp130Fc蛋白(Jones等人,J.Clin.Invest.121(9):3375-3383,2011)或由其组成。在一些实施方式中，IL-6受体抑制剂是肽(例如，S7(Su等人,CancerRes.65(11):4827-4835,2005)。在一些实施方式中，IL-6受体抑制剂是三萜皂苷(例如，chikusetsuaponin IVa丁基酯(CS-Iva-Be)(Yang等人,Mol.Cancer.Ther.15(6):1190-200,2016))。
小分子
在一些实施方式中，IL-6受体抑制剂是小分子(参见例如，美国专利号9,409,990)。在一些实施方式中，小分子是LMT-28(Hong等人,J.Immunol.195(1):237-245,2015)；ERBA(Enomoto等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.323:1096-1102,2004；Boos等人,J.Nat.Prod.75(4):661-668,2012)；ERBF(TB-2-081)(Hayashi等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.303:104-109,2002；Vardanyan等人,Pain 151(2):257-265,2010；Kino等人,J.Allergy Clin.Immunol.120(2):437-444,2007)或其变体。
免疫调节剂
如本文所用，术语“修饰剂的免疫调节剂”是指为CD40/CD40抑制剂(如本文所定义)、CD3抑制剂(如本文所定义)、CD14抑制剂(如所定义的试剂)、CD20抑制剂(如本文所定义)、CD25抑制剂(如本文定义)、CD28抑制剂(如本文所定义)、CD49抑制剂(如本文所定义)或CD89抑制剂。本文中描述免疫调节剂的实例。免疫调节剂的额外实例是本领域中已知的。
CD40/CD40L抑制剂
术语“CD40/CD40L抑制剂”是指降低CD40或CD40L(CD154)表达和/或CD40与CD40L(CD154)结合的能力的试剂。CD40是与其配体CD40L(CD154)结合的共刺激受体。
在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂可通过阻断CD40与CD40L相互作用的能力来降低CD40与CD40L之间的结合。在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂可通过阻断CD40L与CD40相互作用的能力来降低CD40与CD40L之间的结合。在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂降低CD40或CD40L的表达。在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂降低CD40的表达。在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂降低CD40L的表达。
在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂是抑制性核酸、抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、或小分子。在一些实施方式中，抑制性核酸是小干扰RNA、反义核酸、适配体或微小RNA。本文中描述了示例性CD40/CD40L抑制剂。CD40/CD40L抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
不同的抑制性核酸的示例性方面在下文中描述。可以减少哺乳动物细胞中的CD40或CD40L mRNA的表达的抑制性核酸的任何实例可以在体外合成。可以减少哺乳动物细胞中的CD40或CD40L mRNA的表达的抑制性核酸包括反义核酸分子，即其核苷酸序列与CD40或CD40L mRNA的全部或部分互补(例如，与SEQ ID NO:56-61的任何一个的全部或部分互补)的核酸分子。
人CD40 mRNA(变体1)NM_001250.5(SEQ ID NO:56)
Figure BDA0002449116230001311
Figure BDA0002449116230001321
人CD40 mRNA(变体2)NM_152854.3(SEQ ID NO:57)
Figure BDA0002449116230001322
人CD40 mRNA(变体3)NM_001302753.1(SEQ ID NO:58)
Figure BDA0002449116230001323
Figure BDA0002449116230001331
人CD40 mRNA(变体5)NM_001322421.1(SEQ ID NO:59)
Figure BDA0002449116230001332
Figure BDA0002449116230001341
人CD40 mRNA(变体6)NM_001322422.1(SEQ ID NO:60)
Figure BDA0002449116230001342
人CD154(CD40L)mRNA NM_000074.2(SEQ ID NO:61)
Figure BDA0002449116230001351
抑制性核酸
反义核酸分子可与编码CD40或CD40L蛋白的核苷酸序列的编码链的全部或部分非编码区互补。非编码区(5’和3’未翻译区域)是基因中编码区侧翼的5’和3’序列，且不被翻译成氨基酸。
基于本文公开的序列，本领域技术人员可以容易地选择和合成许多适当的反义核酸中的任一种，以靶向本文所述的编码CD40或CD40L蛋白的核酸。靶向编码CD40或CD40L蛋白的核酸的反义核酸可以使用集成DNA技术网站(Integrated DNA Technologieswebsite)上提供的软件进行设计。
例如，反义核酸的长度可以是约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个或更多的核苷酸。反义寡核苷酸可以使用本领域已知的程序通过化学合成和酶结合反应来构建。例如，反义核酸可使用天然存在的核苷酸或经被设计用于提高分子的生物稳定性或提高反义核酸和有义核酸之间形成的双链的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如硫代磷酸酯衍生物和可以使用的吖啶取代的核苷酸)进行化学合成。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、怀丁苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。或者，可以使用表达载体生物产生反义核酸，其中核酸以反义方向亚克隆到表达载体中(即从插入的核酸转录的RNA将具有对所关注的目标核酸的反义方向)。
本文所述的反义核酸分子可以使用本文所述的任一种装置在体外制备并且施用于哺乳动物(例如人类)。可替代地，它们可以在原位产生，使它们与编码CD40或CD40L蛋白的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合，从而例如通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。杂交可以通过常规的核苷酸互补来形成稳定的双链，或者，例如反义核酸分子与DNA双链结合的情况下，通过双螺旋的大沟中的特定相互作用来形成。反义核酸分子可使用载体(例如慢病毒、逆转录病毒或腺病毒载体)递送至哺乳动物细胞。
反义核酸可以是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，链彼此平行(Gaultier等人,Nucleic Acids Res.15:6625-6641,1987)。反义核酸也可包含2’-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,Nucleic AcidsRes.15:6131-6148,1987)或嵌合体RNA-DNA类似物(Inoue等人,FEBS Lett.215:327-330,1987)。
作为CD40或CD40L抑制剂的一些示例性反义核酸描述于例如美国专利号6,197,584和7,745,609；Gao等人,Gut 54(1):70-77,2005；Arranz等人,J.Control Release 165(3):163-172,2012；Donner等人,Mol.Ther.NucleicAcids 4:e265,2015中。
抑制性核酸的另一实例是对编码CD40或CD40L蛋白的核酸具有特异性的核酶(例如对CD40或CD40L mRNA的特异性，例如对SEQ ID NO:56-61中任一个的特异性)。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化RNA分子，能够切割其上具有互补区的单链核酸如mRNA。因此，核酶(例如，锤头状核酶(描述在Haselhoff和Gerlach,Nature[自然]334:585-591,1988中)可以用于催化切割mRNA转录物，从而抑制由mRNA编码的蛋白质的翻译。对CD40或CD40L mRNA具有特异性的核酶可以基于本文公开的CD40或CD40L mRNA序列中的任一个的核苷酸序列来设计。例如，可以构建四膜细胞L-19IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与要在CD40或CD40L mRNA中分裂的核苷酸序列互补(参见例如美国专利号4,987,071和5,116,742)。可替代地，CD40或CD40L mRNA可用于从RNA分子库中选择具有特异核糖核酸酶活性的催化RNA。参见，例如Bartel等人,Science 261:1411-1418,1993。
抑制性核酸也可以是形成三重螺旋结构的核酸分子。例如，CD40或CD40L多肽的表达可通过靶向与编码CD40或CD40L多肽的基因的调节区互补的核苷酸序列而被抑制(例如启动子和/或增强子，例如在转录起始状态上游至少1kb、2kb、3kb、4kb或5kb的序列)，从而形成阻止靶细胞中基因的转录的三螺旋结构。通常参见Helene,Anticancer Drug Des.6(6):569-84,1991；Helene,Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36,1992；和Maher,Bioassays 14(12):807-15,1992。
在各种实施方式中，抑制性核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架处进行修饰以改善例如分子的稳定性、杂交性或溶解性。例如，可以对核酸的脱氧核糖磷酸骨架进行修饰以生成肽核酸(参见例如Hyrup等人,Bioorg.Med.Chem.4(1):5-23,1996)。肽核酸(PNA)是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代，仅保留四种天然核苷。PNA的中性骨架允许在低离子强度的条件下对DNA和RNA进行特异性杂交。PNA寡聚物的合成可使用标准固相肽合成方案进行(参见例如Perry-O'Keefe等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:14670-675,1996)。PNA可作为反义或抗原因子，用于通过例如诱导转录或翻译扣留或抑制复制等方式对基因表达进行序列特异性调控。
PNA可通过将亲脂性或其它辅助基团连接到PNA、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过使用脂质体或本领域已知的药物递送的其它技术来修饰，例如以增强其稳定性或细胞摄取。例如，可以产生PNA-DNA嵌合体，其可以结合PNA和DNA的有利性质。这种嵌合体允许DNA识别酶(如RNA酶H和DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，而PNA部分将提供高结合亲和力和特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆叠、核碱基间键数和取向选择适当长度的连接体连接。
PNA-DNA嵌合体的合成可如Finn等人,Nucleic Acids Res.24:3357-63,1996中所述的进行。例如，可以使用标准的磷酰胺偶联化学和修饰的核苷类似物在固体载体上合成DNA链。诸如5’-(4-甲氧基三苯甲酰)氨基-5’-脱氧胸苷亚磷酰胺等化合物可用作PNA与DNA的5’端之间的连接(Mag等人,Nucleic Acids Res.17:5973-88,1989)。然后以逐步方式将PNA单体偶联以产生具有5’PNA片段和3’DNA片段的嵌合分子(Finn等人,Nucleic AcidsRes.24:3357-63,1996)。可替代地，嵌合分子可以用5’DNA片段和3’PNA片段合成(Peterser等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.5:1119-11124,1975)。
在一些实施方式中，抑制性核酸可包括其它附加基团，诸如肽，或促进跨细胞膜转运的试剂(参见Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6553-6556,1989；Lemaitre等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84:648-652,1989；和WO88/09810)。此外，可使用杂交触发的裂解剂(参见例如Krol等人,Bio/Techniques6:958-976,1988)或插入剂(参见例如Zon,Pharm.Res.5:539-549,1988)对抑制性核酸进行修饰。为此，寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂、杂交触发裂解剂等缀合。
可以减少在哺乳动物细胞中表达CD40或CD40L mRNA的其它方式是通过RNA干扰(RNAi)。RNAi是其中mRNA在宿主细胞中降解的过程。为了抑制mRNA，与将被沉默的基因(例如编码CD40或CD40L多肽的基因)的一部分相对应的双链RNA(dsRNA)被引入哺乳动物细胞。dsRNA被消化成21-23个核苷酸长的二联体，称为短干扰RNA(或siRNA)，其与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导沉默复合物(或RISC)。RISC通过siRNA链中的一条与内源性mRNA之间的碱基配对相互作用来靶向同源转录物。然后从siRNA的3’端切下mRNA约12个核苷酸(参见Sharp等人,Genes Dev.15:485-490,2001，和Hammond等人,Nature Rev.Gen.2:110-119,2001)。
RNA介导的基因沉默可以以多种方式在哺乳动物细胞中诱导，例如通过加强RNA发夹的内源性表达(参见Paddison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:1443-1448,2002)，或如上所述通过小(21-23nt)dsRNA的转染(在Caplen,Trends Biotech.20:49-51,2002中进行了综述)。例如在美国专利号6506559和US2003/0056235中描述了用RNAi调节基因表达的方法，其以引用方式并入本文中。
标准的分子生物学技术可以用来产生siRNA。短干扰RNA可以通过化学合成、重组产生，例如通过从模板DNA(如质粒)表达RNA，或从商业供应商(如Dharmacon)获得。用于介导RNAi的RNA可包括合成或修饰的核苷酸，如硫代磷酸核苷酸。用siRNA或用设计来制备siRNA的质粒转染细胞的方法是本领域的常规方法。
用于降低CD40或CD40L mRNA表达的siRNA分子可以以多种方式变化。例如，它们可以包括3’羟基和21、22或23个连续核苷酸的链。它们可以是钝端或在3’端、5’端或两端包括悬端。例如，RNA分子的至少一条链可具有从约1到约6个核苷酸(例如1-5、1-3、2-4或3-5个核苷酸(无论是嘧啶或嘌呤核苷酸)的3’突出端的长度。如果两条链都包括突出端，则每条链的突出端长度可能相同或不同。
为了进一步增强RNA双链的稳定性，可以稳定3’突出端以防降解(通过例如包括嘌呤核苷酸，诸如腺苷或鸟苷核苷酸，或用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸腺嘧啶核苷取代尿苷2-核苷酸3’突出端是耐受的，且不影响RNAi的有效性)。任何siRNA都可用于降低CD40或CD40L mRNA的方法中，只要它与感兴趣的目标具有足够的同源性(例如在SEQ ID NO:56-61中的任一个中存在的序列，例如涵盖翻译起始位点或mRNA的第一外显子的靶序列)。可以使用的siRNA长度没有上限(例如siRNA可以是从基因的约21个碱基对到基因的全长或更长的范围(例如约20到约30个碱基对，约50到约60个碱基对，约60到约70个碱基对，约70到约80个碱基对，约80到约90个碱基对，或约90到约100个碱基对)。
作为CD40/CD40L抑制剂的短干扰RNA(siRNA)的非限制性实例描述于例如Pluvinet等人,Blood 104:3642-3646,2004；Karimi等人,Cell Immunol.259(1):74-81,2009；和Zheng等人,Arthritis Res.Ther.12(1):R13,2010中。靶向CD40/CD40L的短发夹RNA(shRNA)的非限制性实例描述于Zhang等人,Gene Therapy 21:709-714,2014中。作为CD40/CD40L抑制剂的微小RNA的非限制性实例包括例如miR146a(Chen等人,FEBS Letters585(3):567-573,2011)、miR-424、和miR-503(Lee等人,Sci.Rep.7:2528,2017)。
作为CD40/CD40L抑制剂的适配体的非限制性实例描述于Soldevilla等人,Biomaterials 67:274-285,2015中。
在某些实施方式中，可使用本文所述的任何装置向有需要的患者(例如人类受试者)局部递送治疗有效量的靶向编码CD40或CD40L蛋白的核酸的抑制性核酸。
在一些实施方式中，抑制性核酸可为约10个核苷酸至约40个核苷酸(例如约10至约30个核苷酸、约10至约25个核苷酸、约10至约20个核苷酸、约10至约15个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、14个核苷酸、15个核苷酸、16个核苷酸、17个核苷酸、18个核苷酸、19个核苷酸、20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸或40个核苷酸)的长度。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
本文所述的任一种抑制性核酸可以配制成向胃肠道施用。参见例如描述于US2016/0090598和Schoellhammer等人,Gastroenterology,doi:10.1053/j.gastro.2017.01.002,2017中的配制方法。
如本领域所知，术语“热熔点(Tm)”是指在限定的离子强度、pH和抑制性核酸浓度下的温度，在该温度下在平衡时与靶序列互补的抑制性核酸的50％与靶序列杂交。在一些实施方式中，抑制性核酸可以在严格的条件下特异性地结合到靶核酸，例如对于短的寡核苷酸(例如10-50个核苷酸)而言，在pH 7.0到8.3下、盐浓度至少为约0.01到1.0M钠离子浓度(或其它盐)且温度为至少约30℃的条件下。加入甲酰胺等失稳剂也可达到严格的条件。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以大于20℃、大于22℃、大于24℃、大于26℃、大于28℃、大于30℃、大于32℃、大于34℃、大于36℃、大于38℃、大于40℃、大于42℃、大于44℃、大于46℃、大于48℃、大于50℃、大于52℃、大于54℃、大于56℃、大于58℃、大于60℃、大于62℃、大于64℃、大于66℃、大于68℃、大于70℃、大于72℃、大于74℃、大于76℃、大于78℃、或大于80℃的Tm与靶核酸(例如，编码CD40或CD40L的核酸)结合，例如如在磷酸盐缓冲盐水中使用UV分光光度计所测量。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以约20℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、约24℃、或约22℃(包括端值)；约22℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、或约24℃(包括端值)；约24℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、或约26℃(包括端值)；约26℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、或约28℃(包括端值)；约28℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、或约30℃(包括端值)；约30℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、或约32℃(包括端值)；约32℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、或约34℃(包括端值)；约34℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、或约36℃(包括端值)；约36℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、或约38℃(包括端值)；约38℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、或约40℃(包括端值)；约40℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、或约42℃(包括端值)；约42℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、或约44℃(包括端值)；约44℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、或约46℃(包括端值)；约46℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、或约48℃(包括端值)；约48℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、或约50℃(包括端值)；约50℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、或约52℃(包括端值)；约52℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、或约54℃(包括端值)；约54℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、或约56℃(包括端值)；约56℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、或约58℃(包括端值)；约58℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、或约60℃(包括端值)；约60℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、或约62℃(包括端值)；约62℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、或约64℃(包括端值)；约64℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、或约66℃(包括端值)；约66℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、或约68℃(包括端值)；约68℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、或约70℃(包括端值)；约70℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、或约72℃(包括端值)；约72℃至约80℃、约78℃、约76℃、或约74℃(包括端值)；约74℃至约80℃、约78℃、或约76℃(包括端值)；约76℃至约80℃或约78℃(包括端值)；或约78℃至约80℃(包括端值)的Tm与靶核酸(例如，编码CD40或CD40L的核酸)结合。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成纳米颗粒(例如包含一种或多种合成聚合物的纳米颗粒，例如Patil等人,Pharmaceutical Nanotechnol.367:195-203,2009；Yang等人,ACS Appl.Mater.Interfaces,doi:10.1021/acsami.6b16556,2017；Perepelyuk等人,Mol.Ther.Nucleic Acids6:259-268,2017)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以是粘膜粘着颗粒(例如具有带正电荷外表面的纳米颗粒)(Andersen等人,MethodsMol.Biol.555:77-86,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以具有带中性电荷的外表面。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成例如脂质体(Buyens等人,J.ControlRelease 158(3):362-370,2012；Scarabel等人,Expert Opin.Drug Deliv.17:1-14,2017)、胶束(例如混合胶束)(Tangsangasaksri等人,BioMacromolecules17:246-255,2016；Wu等人,Nanotechnology,doi:10.1088/1361-6528/aa6519,2017)、微乳液(WO 11/004395)、纳米乳液或固体脂质纳米粒子(Sahay等人,Nature Biotechnol.31:653-658,2013；和Lin等人,Nanomedicine 9(1):105-120,2014)。US2016/0090598中描述了抑制性核酸的其它示例性结构特征和抑制性核酸的制剂。
在一些实施方式中，药物组合物可以包括无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)。在一些实例中，药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)组成。在某些实施方式中，无菌生理盐水是药物级生理盐水。在某些实施方式中，药物组合物可以包括一种或多种抑制核酸(例如本文所述的任何抑制核酸)和无菌水。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌水组成。在某些实施方式中，药物组合物包括一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成。在一些实例中，无菌盐水是药物级PBS。
在某些实施方式中，一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)可与用于制备药物组合物或制剂的药学上可接受的活性和/或惰性物质混合。用于制备药物组合物的组合物和方法取决于多个标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或施用剂量。
包括一种或多种抑制性核酸的药物组合物包含任何药物上可接受的盐、酯或此类酯的盐。药物组合物的非限制性示例包括抑制性核酸的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
本文还提供了前药，其可包括在抑制性核酸一端或两端的额外核苷，其在身体内被内源性核酸酶切割以形成活性抑制性核酸。
脂质部分可用于形成抑制性核酸。在某些方法中，抑制性核酸被引入由阳离子脂质和中性脂质混合物制成的预成型脂质体或脂质体复合物中。在某些方法中，形成具有单阳离子或多阳离子脂质的抑制性核酸复合物，而不存在中性脂质。在某些实施方式中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物中特定细胞或组织的分布。在一些实例中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物脂肪组织中的分布。在某些实施方式中，选择脂质部分以增加抑制性核酸在肌肉组织的分布。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物可以包括一种或多种抑制性核酸和一种或多种赋形剂。在某些这类实施方式中，赋形剂选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括脂质体和乳剂。脂质体和乳剂可用于配制疏水性化合物。在一些实例中，使用某些有机溶剂，诸如二甲基亚砜。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括一种或多种组织特异性递送分子，其设计用于将一种或多种抑制性核酸递送至哺乳动物中的特定组织或细胞类型。例如，药物组合物可以包括附有组织特异性抗体的脂质体。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物可以包括共溶剂体系。此类共溶剂体系的示例包括苯甲醇、非极性表面活性剂、水溶性有机聚合物和水相。这种共溶剂体系的非限制性示例是VPD共溶剂体系，其是包含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的无水乙醇溶液。可以理解，可以使用其它表面活性剂代替聚山梨酯80TM；聚乙二醇的粒径可以改变；其它生物相容性聚合物、例如聚乙烯吡咯烷酮可以替代聚乙二醇；其它糖或多糖可以替代葡萄糖。可以使用本文所述的任何装置向受试者口服递送本文所述的药物组合物中的任一种。
在一些实例中，抑制性核酸可以配制成包括载体，并且在水溶液(诸如水或生理相容的缓冲剂，诸如汉克斯溶液、林格溶液或生理盐水缓冲剂)中配制。在一些实例中，还包括其它成分(例如有助于溶解或用作防腐剂的成分)。在一些实例中，抑制性核酸可以被配制成悬浮液，并且可以使用适当的液体载体、悬浮剂等来制备。可以使用本文所述的任何装置将抑制性核酸在鞘内施用之前配制成在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可以含有配方剂，诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。适用于配制抑制性核酸的溶剂包括但不限于亲脂溶剂和脂肪油，诸如芝麻油、合成脂肪酸酯，诸如油酸乙酯或甘油三酯，以及脂质体。
抗体
在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CD40或CD40L，或CD40和CD40L两者。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体，嵌合抗体，多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3(Guo等人)、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(heteroconjugate antibody)(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO 15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在某些实施方式中，抗体包含或由以下各者的抗原结合片段或部分组成：PG102(Pangenetics)(Bankert等人,J.Immunol.194(9):4319-4327,2015)；2C10(Lowe等人,Am.J.Transplant 12(8):2079-2087,2012)；ASKP1240(比勒斯单抗(Bleselumab))(Watanabe等人,Am.J.Transplant 13(8):1976-1988,2013)；4D11(Imai等人,Transplantation 84(8):1020-1028,2007)；BI 655064(Boehringer Ingelheim)(Visvanathan等人,2016American College of Rheumatology Annual Meeting,Abstract1588,2016年9月28日)；5D12(Kasran等人,Aliment.Pharmacol.Ther.,22(2):111-122,2005；Boon等人,Toxicology 174(1):53-65,2002)；卢普利珠单抗(ruplizumab)(hu5c8)(Kirk等人,Nat.Med.5(6):686-693,1999)；CHIR12.12(HCD122)(Weng等人,Blood 104(11):3279,2004；Tai等人,Cancer Res.65(13):5898-5906,2005)；CDP7657(Shock等人,Arthritis Res.Ther.17(1):234,2015)；BMS-986004结构域抗体(dAb)(Kim等人,Am.J.Transplant.17(5):1182-1192,2017)；5c8(Xie等人,J.Immunol.192(9):4083-4092,2014)；达塞妥珠单抗(dacetuzumab)(SGN-40)(Lewis等人,Leukemia 25(6):1007-1016,2011；和Khubchandani等人,Curr.Opin.Investig.Drugs 10(6):579-587,2009)；鲁卡妥木单抗(lucatumumab)(HCD122)(Bensinger等人,Br.J.Haematol.159:58-66,2012；和Byrd等人,Leuk.Lymphoma 53(11):10.3109/10428194.2012.681655,2012)；PG102(FFP104)(Bankert等人,J.Immunol.194(9):4319-4327,2015)；Chi Lob 7/4(Johnson等人,J.Clin.Oncol.28:2507,2019)；和ASKP1240(Okimura等人,Am.J.Transplant.14(6):1290-1299,2014；或Ma等人,Transplantation 97(4):397-404,2014)。
CD40/CD40L抗体和其抗原结合片段的其它教示内容描述于例如美国专利号5,874,082；7,169,389；7,271,152；7,288,252；7,445,780；7,537,763、8,277,810；8,293,237、8,551,485；8,591,900；8,647,625；8,784,823；8,852,597；8,961,976；9,023,360、9,028,826；9,090,696、9,221,913；US2014/0093497；和US2015/0017155中，所述专利中的每一个通过引用全文并入。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
融合和截短蛋白和肽
在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂是融合蛋白、截短蛋白(例如可溶性受体)或肽。在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂是截短蛋白，如例如WO 01/096397中所公开。在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂是肽，诸如环肽(参见例如美国专利号8,802,634；Bianco等人,Org.Biomol.Chem.4:1461-1463,2006；Deambrosis等人,J.Mol.Med.87(2):181-197,2009；Vaitaitis等人,Diabetologia 57(11):2366-2373,2014)。在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂是CD40配体结合剂，例如肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)：TRAF2、TRAF3、TRAF6、TRAF5和TTRAP、或E3泛素蛋白连接酶RNF128。
小分子
在一些实施方式中，CD40/CD40L抑制剂是小分子(参见例如美国专利号7,173,046、美国专利申请号2011/0065675)。在一些实施方式中，小分子是Bio8898(Silvian等人,ACS Chem.Biol.6(6):636-647,2011)；苏拉明(Margolles-Clark等人,Biochem.Pharmacol.77(7):1236-1245,2009)；小分子有机染料(Margolles-Clark等人,J.Mol.Med.87(11):1133-1143,2009；Buchwald等人,J.Mol.Recognit.23(1):65-73,2010)、萘磺酸衍生物(Margolles-Clark等人,Chem.Biol.DrugDes.76(4):305-313,2010)或其变体。
CD3抑制剂
术语“CD3抑制剂”是指降低CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ中的一种或多种与TCR-α、TCR-β、TCR-δ和TCR-γ中的一种或多种缔合的能力的试剂。在一些实施方式中，CD3抑制剂可以通过阻断CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ中的一种或多种与TCR-α、TCR-β、TCR-δ和TCR-γ中的一种或多种相互作用的能力来降低CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ中的一种或多种与TCR-α、TCR-β、TCR-δ和TCR-γ中的一种或多种之间的缔合。
在一些实施方式中，CD3抑制剂是抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、或小分子。本文中描述了示例性CD3抑制剂。CD3抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
人CD3γ、人CD3δ、人CD3ε和人CD3ζ的示例性序列在下文示出。
人CD3γ(SEQ ID NO:62)
meqgkglavl ilaiillqgt laqsikgnhl vkvydyqedg svlltcdaea knitwfkdgk
migfltedkk kwnlgsnakd prgmyqckgs qnkskplqvy yrmcqnciel naatisgflf
aeivsifvla vgvyfiagqd gvrqsrasdk qtllpndqly qplkdreddq yshlqgnqlr
rn
人CD3δ同种型A(SEQ ID NO:63)
fkipieele drvfvncnts itwvegtvgt llsditrldl gkrildprgi yrcngtdiykdkestvqvhy rmcqscveld patvagiivt dviatlllal gvfcfaghet grlsgaadtq allrndqvyqplrdrddaqy shlggnwarn k
人CD3δ同种型B(SEQ ID NO:64)
fkipieele drvfvncnts itwvegtvgt llsditrldl gkrildprgi yrcngtdiykdkestvqvhy rtadtqallr ndqvyqplrd rddaqyshlg gnwarnk
人CD3ε(SEQ ID NO:65)
dgneemgg itqtpykvsi sgttviltcp qypgseilwq hndkniggde ddknigsdedhlslkefsel eqsgyyvcyp rgskpedanf ylylrarvce ncmemdvmsv ativivdici tggllllvyywsknrkakak pvtrgagagg rqrgqnkerp ppvpnpdyep irkgqrdlys glnqrri
人CD3ζ同种型1(SEQ ID NO:66)
qsfglldpk lcylldgilf iygviltalf lrvkfsrsad apayqqgqnq lynelnlgrreeydvldkrr grdpemggkp qrrknpqegl ynelqkdkma eayseigmkg errrgkghdg lyqglstatkdtydalhmqa lppr
人CD3ζ同种型2(SEQ ID NO:67)
qsfglldpk lcylldgilf iygviltalf lrvkfsrsad apayqqgqnq lynelnlgrreeydvldkrr grdpemggkp rrknpqegly nelqkdkmae ayseigmkge rrrgkghdgl yqglstatkdtydalhmqal ppr
抗体
在一些实施方式中，CD3抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，CD3抑制剂是特异性结合CD3γ的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，CD3抑制剂是特异性结合CD3δ的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，CD3抑制剂是特异性结合CD3ε的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，CD3抑制剂是特异性结合CD3ζ的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，CD3抑制剂是可以与CD3γ、CD3δ、CD3ε、和CD3ζ中的两种或更多种(例如两种、三种或四种)结合的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3(Guo等人)、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在某些实施方式中，抗体包含或由以下各者的抗原结合片段或部分组成：维西珠单抗(visiluzumab)(Nuvion；HuM-291；M291；SMART抗CD3抗体)(Carpenter等人,Biol.Blood Marrow Transplant 11(6):465-471,2005；TrajkovicCurr.Opin.Investig.Drugs 3(3):411-414,2002；Malviya等人,J.Nucl.Med.50(10):1683-1691,2009)；莫罗单抗-CD3(orthoclone OKT3)(Hori等人,Surg.Today41(4):585-590,2011；Norman Ther.DrugMonit.17(6):615-620,1995；和Gramatzki等人,Leukemia 9(3):382-390,19)；奥昔珠单抗(otelixizumab)(TRX4)(Vossenkamper等人,Gastroenterology 147(1):172-183,2014；和Wiczling等人,J.Clin.Pharmacol.50(5):494-506,2010)；弗雷鲁单抗(furalumab)(NI-0401)(Ogura等人,Clin.Immunol.183:240-246；和van der Woude等人,Inflamm.Bowel Dis.16:1708-1716,2010)；ChAgly CD3；特普利珠单抗(teplizumab)(MGA031)(Waldron-Lynch等人,Sci.Transl.Med.4(118):118ra12,2012；和Skelley等人,Ann.Pharmacother.46(10):1405-1412,2012)；或卡妥玛索单抗
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(Linke等人,Mabs 2(2):129-136,2010；和Bokemeyer等人,Gastric Cancer18(4):833-842,2015)。
作为抗体或抗体片段的CD3抑制剂的额外实例描述于例如美国专利申请公开号2017/0204194、2017/0137519、2016/0368988、2016/0333095、2016/0194399、2016/0168247、2015/0166661、2015/0118252、2014/0193399、2014/0099318、2014/0088295、2014/0080147、2013/0115213、2013/0078238、2012/0269826、2011/0217790、2010/0209437、2010/0183554、2008/0025975、2007/0190045、2007/0190052、2007/0154477、2007/0134241、2007/0065437、2006/0275292、2006/0269547、2006/0233787、2006/0177896、2006/0165693、2006/0088526、2004/0253237、2004/0202657、2004/0052783、2003/0216551和2002/0142000中，所述专利的每一者(例如，描述CD3抑制剂的部分)通过引用全文并入本文。作为抗体或抗原结合抗体片段的额外CD3抑制剂描述于例如Smith等人,J.Exp.Med.185(8):1413-1422,1997；Chatenaud等人,Nature 7:622-632,2007中。
在一些实施方式中，CD3抑制剂包含以下各者或由其组成：双特异性抗体(例如JNJ-63709178)(Gaudet等人,Blood 128(22):2824,2016)；JNJ-64007957(Girgis等人,Blood 128:5668,2016)；MGD009(Tolcher等人,J.Clin.Oncol.34:15,2016)；ERY974(Ishiguro等人,Sci.Transl.Med.9(410):pii.eaal4291,2017)；AMV564(Hoseini和CheungBlood Cancer J.7:e522,2017)；AFM11(Reusch等人,MAbs 7(3):584-604,2015)；duvortuxizumab(JNJ 64052781)；RO6958688；布利妥莫单抗(blinatumomab)(
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AMG103)(Ribera Expert Rev.Hematol.1:1-11,2017；和Mori等人,N Engl.J.Med.376(23):e49,2017)；XmAb13676；或REGN1979(Bannerji等人,Blood 128:621,2016；和Smith等人,Sci.Rep.5:17943,2015)。
在一些实施方式中，CD3抑制剂包含三特异性抗体(例如，厄妥玛索单抗(ertumaxomab)(Kiewe和Thiel,Expert Opin.Investig.Drugs 17(10):1553-1558,2008；和Haense等人,BMC Cancer 16:420,2016)；或FBTA05(Bi20；Lymphomun)(Buhmann等人,J.Transl.Med.11:160,2013；和Schuster等人,Br.J.Haematol.169(1):90-102,2015))或由其组成。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
融合和截短蛋白和肽
在一些实施方式中，CD3抑制剂是融合蛋白、截短蛋白(例如可溶性受体)或肽。在一些实施方式中，CD3抑制剂可以是融合蛋白(参见例如Lee等人,Oncol.Rep.15(5):1211-1216,2006)。
小分子
在一些实施方式中，CD3抑制剂包含双特异性小分子-抗体缀合物或由其组成(参见例如Kim等人,PNAS 110(44):17796-17801,2013；Viola等人,Eur.J.Immunol.27(11):3080-3083,1997)。
CD14抑制剂
术语“CD14抑制剂”是指降低CD14与脂多糖(LPS)结合的能力的试剂。CD14充当与Toll样受体4(TLR4)的共受体，该共受体在脂多糖结合蛋白(LBP)存在下与LPS结合。在一些实施方式中，CD14抑制剂可通过阻断CD14与LPS相互作用的能力来降低CD14与LPS之间的结合。
在一些实施方式中，CD14抑制剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，CD14抑制剂是小分子。本文中描述了示例性CD14抑制剂。CD14抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
人CD14的示例性序列在下文示出。
人CD14(SEQ ID NO:68)
maaaaasrgv gaklglreir ihlcqrspgs qgvrdfiekr yvelkkanpd lpilirecsdvqpklwarya fgqetnvpln nfsadqvtra lenvlsgka
CD14抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CD14抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，CD14抑制剂是特异性结合CD14的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体，嵌合抗体，多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3(Guo等人)、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在某些实施方式中，抗体包含IC14(Axtelle和Pribble,J.Endotoxin Res.7(4):310-314,2001；Reinhart等人,Crit.Care Med.32(5):1100-1108,2004；Spek等人,J.Clin.Immunol.23(2):132-140,2003)的抗原结合片段或部分或由其组成。抗CD14抗体和CD14抑制剂的额外实例可以见于例如WO 2015/140591和WO2014/122660中，这些专利全文并入本文。
作为抗体或抗体片段的CD14抑制剂的额外实例描述于例如美国专利申请序列号2017/0107294、2014/0050727、2012/0227412、2009/0203052、2009/0029396、2008/0286290、2007/0106067、2006/0257411、2006/0073145、2006/0068445、2004/0092712、2004/0091478、和2002/0150882，所述专利的每一者(例如，描述CD14抑制剂的部分)通过引用并入本文。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合片段的CD14抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CD14抑制剂-小分子
在一些实施方式中，CD14抑制剂是小分子。作为小分子的CD14抑制剂的非限制性实例描述于例如甲基6-脱氧基-6-N-二甲基-N-环戊基铵-2,3-二-O-十四烷基-α-D-吡喃葡萄糖苷碘化物(IAXO-101)；甲基6-脱氧基-6-氨基-2,3-二-O-十四烷基-α-D-吡喃葡萄糖苷(IAXO-102)；N-(3,4-双-十四烷基氧基-苄基)-N-环戊基-N,N-二甲基碘化铵(IAXO-103)；和IMO-9200中。
作为小分子的CD14抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CD20抑制剂
术语“CD20抑制剂”是指特异性结合在哺乳动物细胞表面上表达的CD20的试剂。
在一些实施方式中，CD20抑制剂是抗体或其抗原结合片段、或融合蛋白或肽。本文中描述了示例性CD20抑制剂。CD20抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
人CD20的示例性序列在下文示出。
人CD20(SEQ ID NO:69)
mttprnsvng tfpaepmkgp iamqsgpkpl frrmsslvgp tqsffmresk tlgavqimnglfhialggll mipagiyapi cvtvwyplwg gimyiisgsl laateknsrk clvkgkmimn slslfaaisgmilsimdiln ikishflkme slnfirahtp yiniyncepa npseknspst qycysiqslf lgilsvmlifaffqelviag ivenewkrtc srpksnivll saeekkeqti eikeevvglt etssqpknee dieiipiqeeeeeetetnfp eppqdqessp iendssp
CD20抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CD20抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3(Guo等人)、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在某些实施方式中，抗体包含以下各者的抗原结合片段或部分或由其组成：利妥昔单抗(
Figure BDA0002449116230001591
Mab
Figure BDA0002449116230001592
MK-8808)(Ji等人,Indian J.Hematol.BloodTransfus.33(4):525-533,2017；和Calderon-Gomez和Panes Gastroenterology 142(1):1741-76,2012)；-PF-05280586；奥瑞利珠单抗(ocrelizumab)(OcrevusTM)(SharpN.Engl.J.Med.376(17):1692,2017)；奥法妥木单抗(ofatumumab)(
Figure BDA0002449116230001593
HuMax-CD20)(AlDallal Ther.Clin.RiskManag.13:905-907,2017；和Furman等人,LancetHaematol.4(1):e24-e34,2017)；PF-05280586(Williams等人,Br.J.Clin.Pharmacol.82(6):1568-1579,2016；和Cohen等人,Br.J.Clin.Pharmacol.82(1):129-138,2016)；奥比妥珠单抗(obinutuzumab)
Figure BDA0002449116230001601
(Reddy等人,Rheumatology 56(7):1227-1237,2017；和Marcus等人,N.Engl.J.Med.377(14):1331-1344,2017)；奥卡土珠单抗(ocaratuzumab)(AME-133v；LY2469298)(Cheney等人,Mabs 6(3):749-755,2014；和Tobinai等人,Cancer Sci.102(2):432-8,2011)；GP2013(Jurczak等人,Lancet Haenatol.4(8):e350-e361,2017)；IBI301；HLX01；维妥珠单抗(veltuzumab)(hA20)(Kalaycio等人,Leuk.Lymphoma 57(4):803-811,2016；和Ellebrecht等人,JAMADermatol.150(12):1331-1335,2014)；SCT400(Gui等人,Chin.J.CancerRes.28(2):197-208)；替坦-艾瑞妥莫单抗(ibritumomab tiuxetan)
Figure BDA0002449116230001602
(Philippe等人,BoneMarrow Transplant 51(8):1140-1142,2016；和Lossos等人,Leuk.Lymphoma 56(6):1750-1755,2015)；乌利妥昔单抗(ublituximab)(TG1101)(Sharman等人,Blood124:4679,2014；和Sawas等人,Br.J.Haematol.177(2):243-253,2017)；LFB-R603(Esteves等人,Blood118:1660,2011；和Baritaki等人,Int.J.Oncol.38(6):1683-1694,2011)；或托西莫单抗(tositumomab)(Bexxar)(Buchegger等人,J.Nucl.Med.52(6):896-900,2011；以及William和Bierman Expert Opin.Biol.Ther.10(8):1271-1278,2010)。CD20抗体的额外实例是本领域中已知的(参见例如WO2008/156713)。
在某些实施方式中，抗体包含双特异性抗体(例如，XmAb13676；REGN1979(Bannerji等人,Blood 128:621,2016；和Smith等人,Sci.Rep.5:17943,2015)；PRO131921(Casulo等人,Clin.Immnol.154(1):37-46,2014；以及Robak和Robak BioDrugs 25(1):13-25,2011)；或Acellbia)的抗原结合片段或部分或由其组成。
在一些实施方式中，CD20抑制剂包含三特异性抗体(例如，FBTA05(Bi20；Lymphomun)(Buhmann等人,J.Transl.Med.11:160,2013；和Schuster等人,Br.J.Haematol.169(1):90-102,2015))或由其组成。
作为抗体或抗原结合片段的CD20抑制剂的额外实例描述于例如美国专利申请公开号2017/0304441、2017/0128587、2017/0088625、2017/0037139、2017/0002084、2016/0362472、2016/0347852、2016/0333106、2016/0271249、2016/0243226、2016/0115238、2016/0108126、2016/0017050、2016/0017047、2016/0000912、2016/0000911、2015/0344585、2015/0290317、2015/0274834、2015/0265703、2015/0259428、2015/0218280、2015/0125446、2015/0093376、2015/0079073、2015/0071911、2015/0056186、2015/0010540、2014/0363424、2014/0356352、2014/0328843、2014/0322200、2014/0294807、2014/0248262、2014/0234298、2014/0093454、2014/0065134、2014/0044705、2014/0004104、2014/0004037、2013/0280243、2013/0273041、2013/0251706、2013/0195846、2013/0183290、2013/0089540、2013/0004480、2012/0315268、2012/0301459、2012/0276085、2012/0263713、2012/0258102、2012/0258101、2012/0251534、2012/0219549、2012/0183545、2012/0100133、2012/0034185、2011/0287006、2011/0263825、2011/0243931、2011/0217298、2011/0200598、2011/0195022、2011/0195021、2011/0177067、2011/0165159、2011/0165152、2011/0165151、2011/0129412、2011/0086025、2011/0081681、2011/0020322、2010/0330089、2010/0310581、2010/0303808、2010/0183601、2010/0080769、2009/0285795、2009/0203886、2009/0197330、2009/0196879、2009/0191195、2009/0175854、2009/0155253、2009/0136516、2009/0130089、2009/0110688、2009/0098118、2009/0074760、2009/0060913、2009/0035322、2008/0260641、2008/0213273、2008/0089885、2008/0044421、2008/0038261、2007/0280882、2007/0231324、2007/0224189、2007/0059306、2007/0020259、2007/0014785、2007/0014720、2006/0121032、2005/0180972、2005/0112060、2005/0069545、2005/0025764、2004/0213784、2004/0167319、2004/0093621、2003/0219433、2003/0206903、2003/0180292、2003/0026804、2002/0039557、2002/0012665、和2001/0018041中，所述专利各自通过引用整体(例如描述CD20抑制剂的部分)并入本文中。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合片段的CD20抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CD20抑制剂-肽和融合蛋白
在一些实施方式中，CD20抑制剂是免疫毒素(例如MT-3724(Hamlin Blood128:4200,2016))。
在一些实施方式中，CD20抑制剂是融合蛋白(例如TRU-015(Rubbert-RothCurr.Opin.Mol.Ther.12(1):115-123,2010))。作为融合蛋白的CD20抑制剂的额外实例描述于例如美国专利申请公开号2012/0195895、2012/0034185、2009/0155253、2007/0020259、和2003/0219433中，所述专利的每一者通过引用以其整体(例如描述CD20抑制剂的部分)并入本文中。
CD25抑制剂
术语“CD25抑制剂”是指降低CD25(也称为白细胞介素-2受体α链)与白细胞介素-2结合的能力的试剂。CD25与白细胞介素-2受体β链和白细胞介素-2共有γ链形成复合物。
在一些实施方式中，CD25抑制剂是抗体或其抗原结合片段、或融合蛋白。本文中描述了示例性CD25抑制剂。CD25抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
人CD25的示例性序列在下文示出。
人CD25同种型1(SEQ ID NO:70)
elcdddppe iphatfkama ykegtmlnce ckrgfrriks gslymlctgn sshsswdnqcqctssatrnt tkqvtpqpee qkerkttemq spmqpvdqas lpghcreppp weneateriy hfvvgqmvyyqcvqgyralh rgpaesvckm thgktrwtqp qlictgemet sqfpgeekpq aspegrpese tsclvtttdfqiqtemaatm etsiftteyq vavagcvfll isvlllsglt wqrrqrksrr ti
人CD25同种型2(SEQ ID NO:71)
elcdddppe iphatfkama ykegtmlnce ckrgfrriks gslymlctgn sshsswdnqcqctssatrnt tkqvtpqpee qkerkttemq spmqpvdqas lpgeekpqas pegrpesets clvtttdfqiqtemaatmet siftteyqva vagcvfllis vlllsgltwq rrqrksrrti
人CD25同种型3(SEQ ID NO:72)
elcdddppe iphatfkama ykegtmlnce ckrgfrriks gslymlctgn sshsswdnqcqctssatrnt tkqvtpqpee qkerkttemq spmqpvdqas lpdfqiqtem aatmetsift teyqvavagcvfllisvlll sgltwqrrqr ksrrti
CD25抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CD25抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，CD25抑制剂是特异性结合CD25的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，CD25抑制剂是特异性结合IL-2的抗体。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3(Guo等人)、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在某些实施方式中，抗体包含以下各者的抗原结合片段或部分：巴司利昔单抗(SimulectTM)(Wang等人,Clin.Exp.Immunol.155(3):496-503,2009；和Kircher等人,Clin.Exp.Immunol.134(3):426-430,2003)；达克利珠单抗(Zenapax；
Figure BDA0002449116230001651
)(Berkowitz等人,Clin.Immunol.155(2):176-187,2014；和Bielekova等人,ArchNeurol.66(4):483-489,2009)；或IMTOX-25。
在一些实施方式中，CD25抑制剂是抗体-药物缀合物(例如ADCT-301(Flynn等人,Blood 124:4491,2014))。
作为抗体的CD25抑制剂的额外实例是本领域中已知的(参见例如WO2004/045512)。作为抗体或抗原结合片段的CD25抑制剂的额外实例描述于例如美国专利申请公开号2017/0240640、2017/0233481、2015/0259424、2015/0010539、2015/0010538、2012/0244069、2009/0081219、2009/0041775、2008/0286281、2008/0171017、2004/0170626、2001/0041179、和2010/0055098，所述专利的每一者(例如，描述CD25抑制剂的部分)通过引用并入本文。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合片段的CD25抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CD25抑制剂-融合蛋白
在一些实施方式中，CD25抑制剂是融合蛋白。参见例如，Zhang等人,PNAS100(4):1891-1895,2003。
CD28抑制剂
术语“CD28抑制剂”是指降低CD28与CD80和CD86中的一者或两者结合的能力的试剂。CD28是一种与其配体CD80(也称为B7.1)和CD86(称为B7.2)结合的受体。
在一些实施方式中，CD28抑制剂可通过阻断CD28与CD80相互作用的能力来降低CD28与CD80之间的结合。在一些实施方式中，CD28抑制剂可通过阻断CD28与CD86相互作用的能力来降低CD28与CD86之间的结合。在一些实施方式中，CD28抑制剂可降低CD28与CD80和CD86中的每一者的结合。
在一些实施方式中，CD28抑制剂是抗体或其抗原结合片段、融合蛋白或肽。本文中描述了示例性CD28抑制剂。CD28抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
人CD28、人CD80、和人CD86的示例性序列在下文示出。
人CD28同种型1(SEQ ID NO:73)
nkilvkqspmlv aydnavnlsc kysynlfsre fraslhkgld savevcvvygnysqqlqvysktgfncdgkl gnesvtfylq nlyvnqtdiy fckievmypp pyldneksng tiihvkgkhlcpsplfpgpskpfwvlvvvg gvlacysllv tvafiifwvr skrsrllhsd ymnmtprrpg ptrkhyqpyapprdfaayrs人CD28同种型2(SEQ ID NO:74)
nkilvkqspmlv aydnavnlsw khlcpsplfp gpskpfwvlv vvggvlacys llvtvafiifwvrskrsrll hsdymnmtpr rpgptrkhyq pyapprdfaa yrs
人CD28同种型3(SEQ ID NO:75)
khlcpsplfpgp skpfwvlvvv ggvlacysll vtvafiifwv rskrsrllhs dymnmtprrpgptrkhyqpy apprdfaayr s
人CD80(SEQ ID NO:76)
vihvtk evkevatlsc ghnvsveela qtriywqkek kmvltmmsgd mniwpeyknrtifditnnls ivilalrpsd egtyecvvlk yekdafkreh laevtlsvka dfptpsisdf eiptsnirriicstsggfpe phlswlenge elnainttvs qdpetelyav sskldfnmtt nhsfmcliky ghlrvnqtfnwnttkqehfp dnllpswait lisvngifvi ccltycfapr crerrrnerl rresvrpv
人CD86同种型1(SEQ ID NO:77)
yfnetadlpc qfansqnqsl selvvfwqdq enlvlnevyl gkekfdsvhs kymgrtsfdsdswtlrlhnl qikdkglyqc iihhkkptgm irihqmnsel svlanfsqpe ivpisniten vyinltcssihgypepkkms vllrtknsti eydgimqksq dnvtelydvs islsvsfpdv tsnmtifcil etdktrllsspfsieledpq pppdhipwit avlptviicv mvfclilwkw kkkkrprnsy kcgtntmere eseqtkkrekihipersdea qrvfksskts scdksdtcf
人CD86同种型2(SEQ ID NO:78)
yfneta dlpcqfansq nqslselvvf wqdqenlvln evylgkekfd svhskymgrtsfdsdswtlr lhnlqikdkg lyqciihhkk ptgmirihqm nselsvlanf sqpeivpisn itenvyinltcssihgypep kkmsvllrtk nstieydgim qksqdnvtel ydvsislsvs fpdvtsnmti fciletdktrllsspfsiel edpqpppdhi pwitavlptv iicvmvfcli lwkwkkkkrp rnsykcgtnt mereeseqtkkrekihiper sdeaqrvfks sktsscdksd tcf
人CD86同种型3(SEQ ID NO:79)
yfneta dlpcqfansq nqslselvvf wqdqenlvln evylgkekfd svhskymgrtsfdsdswtlr lhnlqikdkg lyqciihhkk ptgmirihqm nselsvlanf sqpeivpisn itenvyinltcssihgypep kkmsvllrtk nstieydgim qksqdnvtel ydvsislsvs fpdvtsnmti fciletdktrllsspfsigt ntmereeseq tkkrekihip ersdeaqrvf kssktsscdk sdtcf
人CD86同种型4(SEQ ID NO:80)
eiv pisnitenvy inltcssihg ypepkkmsvllrtknstiey dgimqksqdn vtelydvsislsvsfpdvts nmtifcilet dktrllsspf sieledpqpp pdhipwitav lptviicvmv fclilwkwkkkkrprnsykc gtntmerees eqtkkrekih ipersdeaqr vfkssktssc dksdtcf
人CD86同种型5(SEQ ID NO:81)
mgrtsfdsds wtlrlhnlqi kdkglyqcii hhkkptgmir ihqmnselsv lanfsqpeiv
pisnitenvy inltcssihg ypepkkmsvl lrtknstiey dgimqksqdn vtelydvsis
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dksdtcf
CD28抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CD28抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3(Guo等人)、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在一些实施方式中，CD28抑制剂是单价Fab’抗体(例如CFR104)(Poirier等人,Am.J.Transplant 15(1):88-100,2015)。
作为抗体或抗原结合片段的CD28抑制剂的额外实例描述于例如美国专利申请公开号2017/0240636、2017/0114136、2016/0017039、2015/0376278、2015/0299321、2015/0232558、2015/0150968、2015/0071916、2013/0266577、2013/0230540、2013/0109846、2013/0078257、2013/0078236、2013/0058933、2012/0201814、2011/0097339、2011/0059071、2011/0009602、2010/0266605、2010/0028354、2009/0246204、2009/0117135、2009/0117108、2008/0095774、2008/0038273、2007/0154468、2007/0134240、2007/0122410、2006/0188493、2006/0165690、2006/0039909、2006/0009382、2006/0008457、2004/0116675、2004/0092718、2003/0170232、2003/0086932、2002/0006403、2013/0197202、2007/0065436、2003/0180290、2017/0015747、2012/0100139、和2007/0148162中，所述专利申请的每一者(例如，描述CD28抑制剂的部分)通过引用全文并入本文。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合片段的CD28抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CD28抑制剂-融合蛋白和肽
在一些实施方式中，CD28抑制剂是融合蛋白(参见例如US 5,521,288；和US 2002/0018783)。在一些实施方式中，CD28抑制剂是阿巴西普
Figure BDA0002449116230001721
(Herrero-Beaumont等人,Rheumatol.Clin.8:78-83,2012；和Korhonen和Moilanen BasicClin.Pharmacol.Toxicol.104(4):276-284,2009)。
在一些实施方式中，CD28抑制剂是肽模拟物(例如AB103)(参见例如Bulger等人,JAMA Surg.149(6):528-536,2014)或合成类肽(参见例如Li等人,Cell Mol.Immunol.7(2):133-142,2010)。
CD49抑制剂
术语“CD49抑制剂”是指降低CD49与其配体中的一种(例如MMP1)结合的能力的试剂。在一些实施方式中，CD49抑制剂是抗体或其抗原结合片段。本文中描述了示例性CD49抑制剂。CD49抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
人CD49和人MMP1的示例性序列在下文示出。
人CD49(SEQ ID NO:82)
mgpertgaap lplllvlals qgilncclay nvglpeakif sgpsseqfgy avqqfinpkg
nwllvgspws gfpenrmgdv ykcpvdlsta tceklnlqts tsipnvtemk tnmslglilt
rnmgtggflt cgplwaqqcg nqyyttgvcs dispdfqlsa sfspatqpcp slidvvvvcd
esnsiypwda vknflekfvq gldigptktq vgliqyannp rvvfnlntyk tkeemivats
qtsqyggdlt ntfgaiqyar kyaysaasgg rrsatkvmvv vtdgeshdgs mlkavidqcn
hdnilrfgia vlgylnrnal dtknlikeik aiasiptery ffnvsdeaal lekagtlgeq
ifsiegtvqg gdnfqmemsq vgfsadyssq ndilmlgavg afgwsgtivq ktshghlifp
kqafdqilqd rnhssylgys vaaistgest hfvagapran ytgqivlysv nengnitviq
ahrgdqigsy fgsvlcsvdv dkdtitdvll vgapmymsdl kkeegrvylf tikkgilgqh
qflegpegie ntrfgsaiaa lsdinmdgfn dvivgsplen qnsgavyiyn ghqgtirtky
sqkilgsdga frshlqyfgr sldgygdlng dsitdvsiga fgqvvqlwsq siadvaieas
ftpekitlvn knaqiilklc fsakfrptkq nnqvaivyni tldadgfssr vtsrglfken
nerclqknmv vnqaqscpeh iiyiqepsdv vnsldlrvdi slenpgtspa leaysetakv
fsipfhkdcg edglcisdlv ldvrqipaaq eqpfivsnqn krltfsvtlk nkresayntg
ivvdfsenlf fasfslpvdg tevtcqvaas qksvacdvgy palkreqqvt ftinfdfnlq
nlqnqaslsf qalsesqeen kadnlvnlki pllydaeihl trstninfye issdgnvpsi
vhsfedvgpk fifslkvttg svpvsmatvi ihipqytkek nplmyltgvq tdkagdiscn
adinplkigq tsssvsfkse nfrhtkelnc rtascsnvtc wlkdvhmkge yfvnvttriw
ngtfasstfq tvqltaaaei ntynpeiyvi edntvtiplm imkpdekaev ptgviigsii
agillllalv ailwklgffk rkyekmtknp deidettels s
人MMP1(SEQ ID NO:83)
mhsfppllll lfwgvvshsf patletqeqd vdlvqkylek yynlkndgrq vekrrnsgpv
veklkqmqef fglkvtgkpd aetlkvmkqp rcgvpdvaqf vltegnprwe qthltyrien
ytpdlpradv dhaiekafql wsnvtpltft kvsegqadim isfvrgdhrd nspfdgpggn
lahafqpgpg iggdahfded erwtnnfrey nlhrvaahel ghslglshst digalmypsy
tfsgdvqlaq ddidgiqaiy grsqnpvqpi gpqtpkacds kltfdaitti rgevmffkdr
fymrtnpfyp evelnfisvf wpqlpnglea ayefadrdev rffkgnkywa vqgqnvlhgy
pkdiyssfgf prtvkhidaa lseentgkty ffvankywry deykrsmdpg ypkmiahdfp
gighkvdavf mkdgffyffh gtrqykfdpk tkriltlqka nswfncrkn
CD49抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CD49抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3(Guo等人)、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在某些实施方式中，抗体包含那他珠单抗
Figure BDA0002449116230001751
(参见例如，Pagnini等人,Expert Opin.Biol.Ther.17(11):1433-1438,2017；和Chataway和MillerNeurotherapeutics 10(1):19-28,2013；或伐特利珠单抗(ELND-004))的抗原结合片段或部分或由其组成。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合片段的CD49抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CD89抑制剂
术语“CD89抑制剂”是指降低CD89与IgA结合的能力的试剂。CD89是与IgA的重链恒定区结合的跨膜糖蛋白。在一些实施方式中，CD89抑制剂可通过阻断CD89与IgA相互作用的能力来降低CD89与IgA之间的结合。在一些实施方式中，CD89抑制剂是抗体或其抗原结合片段。本文中描述了示例性CD89抑制剂。CD89抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
人CD89的示例性序列在下文示出。
人CD89(SEQ ID NO:84)
mdpkqttllc lvlclgqriq aqegdfpmpf isaksspvip ldgsvkiqcq aireayltql
miiknstyre igrrlkfwne tdpefvidhm dankagryqc qyrighyrfr ysdtlelvvt
glygkpflsa drglvlmpge nisltcssah ipfdrfslak egelslpqhq sgehpanfsl
gpvdlnvsgi yrcygwynrs pylwsfpsna lelvvtdsih qdyttqnlir mavaglvlva
llailvenwh shtalnkeas advaepswsq qmcqpgltfa rtpsvck
CD89抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CD89抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3(Guo等人)、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在某些实施方式中，抗体包含HF-1020的抗原结合片段或部分或由其组成。CD89抗体的额外实例是本领域中已知的(参见例如WO 2002/064634)。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合片段的CD89抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CD283(TLR3)抗体
在一些实施方式中，治疗剂是PRV-300，例如如PCT公开WO 2006/060513中所描述，所述PCT公开通过引用全文并入本文。PRV-300是抗Toll样受体3(TLR3)/CD283单克隆抗体，其阻断细胞表面上和核内体中的TLR3。
IL-1抑制剂
术语“IL-1抑制剂”是指降低IL-1细胞因子或IL-1受体表达和/或降低IL-1细胞因子特异性结合IL-1受体的能力的试剂。IL-1细胞因子的非限制性实例包括IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38和IL-33。在一些实例中，IL-1细胞因子是IL-1α。在一些实例中，IL-1细胞因子是IL-1β。
如本领域中已知的，IL-1α和IL-1β各自与IL-1R1和IL1RAP蛋白的复合物结合；IL-18与IL-18Rα结合；IL-36α、IL-36β和IL-36γ各自与IL-1RL2和IL-1RAP蛋白的复合物结合；并且IL-33与IL1RL1和IL1RAP蛋白的复合物结合。IL-1Ra是一种内源性可溶性蛋白，其降低IL-1α和IL-1β与其受体(例如，IL-1R1和IL1RAP蛋白的复合物)结合的能力。IL-36Ra是一种内源性可溶性蛋白，其降低IL-36α、IL-36β、和IL-36γ与其受体(例如，IL-1RL2和IL-1RAP蛋白的复合物)结合的能力。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂模拟天然人白细胞介素1受体拮抗剂(IL1-Ra)。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL-1α。在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL-1β。在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL-1R1和IL1RAP中的一者或两者。例如，IL-1抑制剂可降低IL-1α的表达和/或降低IL-1α与其受体(例如IL-1R1和IL1RAP蛋白的复合物)结合的能力。在另一个实例中，IL-1抑制剂可降低IL-1β的表达和/或降低IL-1β与其受体(例如IL-1R1和IL1RAP蛋白的复合物)结合的能力。在一些实施方式中，IL-1抑制剂可降低IL-1R1和IL1RAP中的一者或两者的表达。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL-18。在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL-18Rα。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL-18与其受体(例如IL-18Rα)结合的能力。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL-18的表达。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL-18Rα的表达。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL-36α、IL-36β和IL-36γ中的一种或多种(例如两种或三种)。在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL-1RL2和IL-1RAP中的一者或两者。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL-36α、IL-36β和IL-36γ中的一种或多种(例如两种或三种)的表达。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL-1RL2和IL-1RAP蛋白中的一者或两者的表达。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL-36α与其受体(例如，包含IL-1RL2和IL-1RAP的复合物)结合的能力。在一些实例中，IL-1抑制剂降低IL-36β与其受体(例如，包含IL-1RL2和IL-1RAP的复合物)结合的能力。在一些实例中，IL-1抑制剂降低IL-36γ与其受体(例如，包含IL-1RL2和IL-1RAP的复合物)结合的能力。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL-33。在一些实施方式中，IL-1抑制剂靶向IL1RL1和IL1RAP中的一者或两者。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL-33的表达。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL1RL1和IL1RAP中的一者或两者的表达。在一些实施方式中，IL-1抑制剂降低IL-33与其受体(例如，IL1RL1和IL1RAP蛋白的复合物)结合的能力。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂是抑制性核酸、抗体或其片段、或融合蛋白。在一些实施方式中，抑制性核酸是反义核酸、核酶、或小干扰RNA。
抑制性核酸
可以减少哺乳动物细胞中的IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1 mRNA表达的表达的抑制性核酸包括反义核酸分子，即其核苷酸序列与IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1 mRNA的全部或部分互补(例如，与SEQID NO：85-125的任何一个的全部或部分互补)的核酸分子。
人IL-1α mRNA(SEQ ID NO:85)
Figure BDA0002449116230001811
Figure BDA0002449116230001821
Figure BDA0002449116230001831
人IL-1βmRNA(SEQ ID NO:86)
Figure BDA0002449116230001832
人IL-18mRNA变体1(SEQ ID NO:87)
Figure BDA0002449116230001833
Figure BDA0002449116230001841
人IL-18mRNA变体2(SEQ ID NO:88)
Figure BDA0002449116230001842
人IL-36α mRNA(SEQ ID NO:89)
Figure BDA0002449116230001843
Figure BDA0002449116230001851
人IL-36βmRNA变体1(SEQ ID NO:90)
Figure BDA0002449116230001852
人IL-36βmRNA变体2(SEQ ID NO:91)
Figure BDA0002449116230001853
Figure BDA0002449116230001861
人IL-36γmRNA变体1(SEQ ID NO:92)
Figure BDA0002449116230001862
人IL-36γmRNA变体2(SEQ ID NO:93)
Figure BDA0002449116230001871
人IL-38mRNA变体1(SEQ ID NO:94)
Figure BDA0002449116230001872
Figure BDA0002449116230001881
人IL-38mRNA变体2(SEQ ID NO:95)
Figure BDA0002449116230001882
人IL-33mRNA变体1(SEQ ID NO:96)
Figure BDA0002449116230001883
Figure BDA0002449116230001891
人IL-33mRNA变体2(SEQ ID NO:97)
Figure BDA0002449116230001892
Figure BDA0002449116230001901
Figure BDA0002449116230001911
人IL-33mRNA变体3(SEQ ID NO:98)
Figure BDA0002449116230001912
Figure BDA0002449116230001921
人IL-33mRNA变体4(SEQ ID NO:99)
Figure BDA0002449116230001922
Figure BDA0002449116230001931
人IL-33mRNA变体5(SEQ ID NO:100)
Figure BDA0002449116230001932
Figure BDA0002449116230001941
人IL-33mRNA变体6(SEQ ID NO:101)
Figure BDA0002449116230001942
Figure BDA0002449116230001951
人IL-33mRNA变体7(SEQ ID NO:102)
Figure BDA0002449116230001952
Figure BDA0002449116230001961
人IL-33mRNA变体8(SEQ ID NO:103)
Figure BDA0002449116230001971
Figure BDA0002449116230001981
人IL-1R1 mRNA变体1(SEQ ID NO:104)
Figure BDA0002449116230001982
Figure BDA0002449116230001991
Figure BDA0002449116230002001
人IL-1R1 mRNA变体2(SEQ ID NO:105)
Figure BDA0002449116230002002
Figure BDA0002449116230002011
Figure BDA0002449116230002021
人IL-1R1 mRNA变体3(SEQ ID NO:106)
Figure BDA0002449116230002022
Figure BDA0002449116230002031
Figure BDA0002449116230002041
人IL-1R1 mRNA变体4(SEQ ID NO:107)
Figure BDA0002449116230002051
Figure BDA0002449116230002061
Figure BDA0002449116230002071
人IL-1R1 mRNA变体5(SEQ ID NO:108)
Figure BDA0002449116230002072
Figure BDA0002449116230002081
Figure BDA0002449116230002091
人IL-1R1 mRNA变体6(SEQ ID NO:109)
Figure BDA0002449116230002092
Figure BDA0002449116230002101
Figure BDA0002449116230002111
人IL-1R1 mRNA变体7(SEQ ID NO:110)
Figure BDA0002449116230002112
Figure BDA0002449116230002121
Figure BDA0002449116230002131
人IL-1R1 mRNA变体8(SEQ ID NO:111)
Figure BDA0002449116230002141
Figure BDA0002449116230002151
Figure BDA0002449116230002161
人IL-1R1 mRNA变体9(SEQ ID NO:112)
Figure BDA0002449116230002162
Figure BDA0002449116230002171
Figure BDA0002449116230002181
人IL-1R1 mRNA变体10(SEQ ID NO:113)
Figure BDA0002449116230002182
人IL1RAP mRNA变体1(SEQ ID NO:114)
Figure BDA0002449116230002183
Figure BDA0002449116230002191
Figure BDA0002449116230002201
人IL1RAP mRNA变体2(SEQ ID NO:115)
Figure BDA0002449116230002202
Figure BDA0002449116230002211
人IL1RAP mRNA变体3(SEQ ID NO:116)
Figure BDA0002449116230002212
Figure BDA0002449116230002221
Figure BDA0002449116230002231
Figure BDA0002449116230002241
人IL1RAP mRNA变体4(SEQ ID NO:117)
Figure BDA0002449116230002242
Figure BDA0002449116230002251
Figure BDA0002449116230002261
人IL1RAP mRNA变体5(SEQ ID NO:118)
Figure BDA0002449116230002262
Figure BDA0002449116230002271
人IL1RAP mRNA变体6(SEQ ID NO:119)
Figure BDA0002449116230002272
Figure BDA0002449116230002281
人IL-18Rα mRNA变体1(SEQ ID NO:120)
Figure BDA0002449116230002282
Figure BDA0002449116230002291
Figure BDA0002449116230002301
人IL-18Rα mRNA变体2(SEQ ID NO:121)
Figure BDA0002449116230002302
Figure BDA0002449116230002311
人IL-1RL2 mRNA(SEQ ID NO:122)
Figure BDA0002449116230002312
Figure BDA0002449116230002321
人IL1RL1 mRNA变体1(SEQ ID NO:123)
Figure BDA0002449116230002322
Figure BDA0002449116230002331
人IL1RL1 mRNA变体2(SEQ ID NO:124)
Figure BDA0002449116230002332
Figure BDA0002449116230002341
Figure BDA0002449116230002351
人IL1RL1 mRNA变体3(SEQ ID NO:125)
Figure BDA0002449116230002352
Figure BDA0002449116230002361
反义核酸分子可与编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1蛋白的核苷酸序列的编码链的全部或部分非编码区互补。非编码区(5’和3’未翻译区域)是基因中编码区侧翼的5’和3’序列，且不被翻译成氨基酸。
基于本文公开的序列，本领域技术人员可以容易地选择和合成许多适当的反义核酸中的任一种，以靶向本文所述的编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1蛋白的核酸。靶向编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1蛋白的核酸的反义核酸可以使用集成DNA技术网站(Integrated DNA Technologieswebsite)上提供的软件进行设计。
反义核酸的长度可以是例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个或更多的核苷酸。反义寡核苷酸可以使用本领域已知的程序通过化学合成和酶结合反应来构建。例如，反义核酸可使用天然核苷酸或经被设计用于提高分子的生物稳定性或提高反义核酸和感觉核酸之间形成的双链的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如硫代磷酸酯衍生物和可以使用的吖啶取代的核苷酸)进行化学合成。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、怀丁苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。或者，可以使用表达载体生物产生反义核酸，其中核酸以反义方向亚克隆到表达载体中(即从插入的核酸转录的RNA将具有对所关注的目标核酸的反义方向)。
本文所述反义核酸分子可在体外制备并施予哺乳动物(例如人类)。可替代地，它们可以在原位产生，使它们与编码以下的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合：IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1蛋白，从而例如通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。杂交可以通过常规的核苷酸互补来形成稳定的双链，或者，例如反义核酸分子与DNA双链结合的情况下，通过双螺旋的大沟中的特定相互作用来形成。反义核酸分子可使用载体(例如慢病毒、逆转录病毒或腺病毒载体)递送至哺乳动物细胞。
反义核酸可以是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，链彼此平行(Gaultier等人,Nucleic Acids Res.15:6625-6641,1987)。反义核酸也可包含2’-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,Nucleic AcidsRes.15:6131-6148,1987)或嵌合体RNA-DNA类似物(Inoue等人,FEBS Lett.215:327-330,1987)。
抑制性核酸的另一实例是对编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1蛋白的核酸具有特异性的核酶(例如对IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1 mRNA的特异性，例如对SEQ ID NO:62-102中任一个的特异性)。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化RNA分子，能够切割其上具有互补区的单链核酸如mRNA。因此，核酶(例如，锤头状核酶(描述在Haselhoff和Gerlach,Nature 334:585-591,1988中)可以用于催化切割mRNA转录物，从而抑制由mRNA编码的蛋白质的翻译。可以基于本文公开的IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1 mRNA序列中的任一种的核苷酸序列设计对IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1 mRNA具有特异性的核酶。例如，可以构建四膜细胞L-19IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与要在IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1 mRNA中分裂的核苷酸序列互补(参见例如美国专利号4,987,071和5,116,742)。可替代地，SMAD7 mRNA可用于从RNA分子库中选择具有特异核糖核酸酶活性的催化RNA。参见，例如Bartel等人,Science 261:1411-1418,1993。
抑制性核酸也可以是形成三重螺旋结构的核酸分子。例如，IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1多肽的表达可通过靶向与编码以下的基因的调节区互补的核苷酸序列而被抑制：IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1多肽(例如启动子和/或增强子，例如在转录起始状态上游至少1kb、2kb、3kb、4kb或5kb的序列)，从而形成阻止靶细胞中基因的转录的三螺旋结构。通常参见Helene,Anticancer Drug Des.6(6):569-84,1991；Helene,Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36,1992；和Maher,Bioassays 14(12):807-15,1992。
在各种实施方式中，抑制性核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架处进行修饰以改善例如分子的稳定性、杂交性或溶解性。例如，可以对核酸的脱氧核糖磷酸骨架进行修饰以生成肽核酸(参见例如Hyrup等,Bioorganic Medicinal Chem.4(1):5-23,1996)。肽核酸(PNA)是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代，仅保留四种天然核苷。PNA的中性骨架允许在低离子强度的条件下对DNA和RNA进行特异性杂交。PNA寡聚物的合成可使用标准固相肽合成方案进行(参见例如Perry-O'Keefe等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:14670-675,1996)。PNA可作为反义或抗原因子，用于通过例如诱导转录或翻译扣留或抑制复制等方式对基因表达进行序列特异性调控。
PNA可通过将亲脂性或其它辅助基团连接到PNA、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过使用脂质体或本领域已知的药物递送的其它技术来修饰，例如以增强其稳定性或细胞摄取。例如，可以产生PNA-DNA嵌合体，其可以结合PNA和DNA的有利性质。这种嵌合体允许DNA识别酶(如RNA酶H和DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，而PNA部分将提供高结合亲和力和特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆叠、核碱基间键数和取向选择适当长度的连接体连接。
PNA-DNA嵌合体的合成可如Finn等人,Nucleic Acids Res.24:3357-63,1996中所述的进行。例如，可以使用标准的磷酰胺偶联化学和修饰的核苷类似物在固体载体上合成DNA链。诸如5’-(4-甲氧基三苯甲酰)氨基-5’-脱氧胸苷亚磷酰胺等化合物可用作PNA与DNA的5’端之间的连接(Mag等人,Nucleic Acids Res.17:5973-88,1989)。然后以逐步方式将PNA单体偶联以产生具有5’PNA片段和3’DNA片段的嵌合分子(Finn等人,Nucleic AcidsRes.24:3357-63,1996)。可替代地，嵌合分子可以用5’DNA片段和3’PNA片段合成(Peterser等人,Bioorganic Med.Chem.Lett.5:1119-11124,1975)。
在一些实施方式中，抑制性核酸可包括其它附加基团，诸如肽，或促进跨细胞膜转运的试剂(参见Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6553-6556,1989；Lemaitre等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84:648-652,1989；和WO88/09810)。此外，可使用杂交触发的裂解剂(参见例如Krol等人,Bio/Techniques6:958-976,1988)或插入剂(参见例如Zon,Pharm.Res.,5:539-549,1988)对抑制性核酸进行修饰。为此，寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂、杂交触发裂解剂等缀合。
可以减少在哺乳动物细胞中表达IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1 mRNA的其它方式是通过RNA干扰(RNAi)。RNAi是其中mRNA在宿主细胞中降解的过程。为了抑制mRNA，与将被沉默的基因(例如编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2或IL1RL1多肽的基因)的一部分相对应的双链RNA(dsRNA)被引入哺乳动物细胞。dsRNA被消化成21-23个核苷酸长的二联体，称为短干扰RNA(或siRNA)，与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导沉默复合物(或RISC)。RISC通过siRNA链中的一条与内源性mRNA之间的碱基配对相互作用来靶向同源转录物。然后从siRNA的3’端切下mRNA约12个核苷酸(参见Sharp等人,Genes Dev.15:485-490,2001，和Hammond等人,Nature Rev.Gen.2:110-119,2001)。
RNA介导的基因沉默可以以多种方式在哺乳动物细胞中诱导，例如通过加强RNA发夹的内源性表达(参见Paddison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:1443-1448,2002)，或如上所述通过小(21-23nt)dsRNA的转染(在Caplen,Trends Biotech.20:49-51,2002中进行了综述)。例如在美国专利号6506559和US2003/0056235中描述了用RNAi调节基因表达的方法，其以引用方式并入本文中。
标准的分子生物学技术可以用来产生siRNA。短干扰RNA可以通过化学合成、重组产生，例如通过从模板DNA(如质粒)表达RNA，或从商业供应商(如Dharmacon)获得。用于介导RNAi的RNA可包括合成或修饰的核苷酸，如硫代磷酸核苷酸。用siRNA或用设计成制备siRNA的质粒转染细胞的方法是本领域的常规方法。
用于降低IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2或IL1RL1 mRNA表达的siRNA分子可以以多种方式变化。例如，它们可以包括3’羟基和21、22或23个连续核苷酸的链。它们可以是钝端或在3’端、5’端或两端包括悬端。例如，RNA分子的至少一条链可具有从约1到约6个核苷酸(例如1-5、1-3、2-4或3-5个核苷酸(无论是嘧啶或嘌呤核苷酸)的3’突出端的长度。如果两条链都包括突出端，则每条链的突出端长度可能相同或不同。
为了进一步增强RNA双链的稳定性，可以稳定3’突出端以防降解(通过例如包括嘌呤核苷酸，诸如腺苷或鸟苷核苷酸，或用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸腺嘧啶核苷取代尿苷2-核苷酸3’突出端是耐受的，且不影响RNAi的有效性)。任何siRNA都可用于降低IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2或IL1RL1mRNA的方法中，只要它与感兴趣的靶标具有足够的同源性(例如在SEQ ID NO:62-102中的任一个中存在的序列，例如涵盖翻译起始位点或mRNA的第一外显子的靶序列)。可以使用的siRNA长度没有上限(例如siRNA可以是从基因的约21个碱基对到基因的全长或更长的范围(例如约20到约30个碱基对，约50到约60个碱基对，约60到约70个碱基对，约70到约80个碱基对，约80到约90个碱基对，或约90到约100个碱基对)。
如本文所述，抑制性核酸优先与编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、或IL1RL1蛋白的核酸结合(例如杂交)以治疗过敏性疾病(例如哮喘(Corren等人,N.Engl.J.Med.365:1088-1098,2011))、放射性肺损伤(Chung等人,Sci.Rep.6:39714,2016)、溃疡性结肠炎(Hua等人,Br.J.Clin.Pharmacol.80:101-109,2015)、皮炎(Guttman-Yassky等人,Exp.Opin.Biol.Ther.13(4):1517,2013)、和慢性阻塞性肺疾病(COPD)(Walsh等人(2010)Curr.Opin.InvestigDrugs.11(11):1305-1312,2010)。
作为反义核酸的示例性IL-1抑制剂描述于Yilmaz-Elis等人,Mol.Ther.NucleicAcids 2(1):e66,2013；Lu等人,J.Immunol.190(12):6570-6578,2013)、小干扰RNA(siRNA)(例如，Ma等人,Ann.Hepatol.15(2):260-270,2016)或其组合中。在某些实施方式中，可向有需要的受试者(例如人类受试者)施用治疗有效量的靶向编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2或IL1RL1蛋白的核酸的抑制性核酸。
在一些实施方式中，抑制性核酸可为约10个核苷酸至约40个核苷酸(例如约10至约30个核苷酸、约10至约25个核苷酸、约10至约20个核苷酸、约10至约15个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、14个核苷酸、15个核苷酸、16个核苷酸、17个核苷酸、18个核苷酸、19个核苷酸、20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸或40个核苷酸)的长度。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
如本领域所知，术语“热熔点(Tm)”是指在限定的离子强度、pH和抑制性核酸浓度下的温度，在该温度下在平衡时与靶序列互补的抑制性核酸的50％与靶序列杂交。在一些实施方式中，抑制性核酸可以在严格的条件下特异性地结合到靶核酸，例如对于短的寡核苷酸(例如10至50个核苷酸)而言，在pH 7.0到8.3下、盐浓度为至少约0.01到1.0M钠离子浓度(或其它盐)且温度为至少约30℃的条件下。加入甲酰胺等失稳剂也可达到严格的条件。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以大于20℃、大于22℃、大于24℃、大于26℃、大于28℃、大于30℃、大于32℃、大于34℃、大于36℃、大于38℃、大于40℃、大于42℃、大于44℃、大于46℃、大于48℃、大于50℃、大于52℃、大于54℃、大于56℃、大于58℃、大于60℃、大于62℃、大于64℃、大于66℃、大于68℃、大于70℃、大于72℃、大于74℃、大于76℃、大于78℃、或大于80℃的Tm与靶核酸(例如，编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2或IL1RL1中的任一种的核酸)结合，例如，如使用UV分光光度计在磷酸盐缓冲盐水中所测量。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以约20℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、约24℃、或约22℃(包括端值)；约22℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、或约24℃(包括端值)；约24℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、或约26℃(包括端值)；约26℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、或约28℃(包括端值)；约28℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、或约30℃(包括端值)；约30℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、或约32℃(包括端值)；约32℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、或约34℃(包括端值)；约34℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、或约36℃(包括端值)；约36℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、或约38℃(包括端值)；约38℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、或约40℃(包括端值)；约40℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、或约42℃(包括端值)；约42℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、或约44℃(包括端值)；约44℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、或约46℃(包括端值)；约46℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、或约48℃(包括端值)；约48℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、或约50℃(包括端值)；约50℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、或约52℃(包括端值)；约52℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、或约54℃(包括端值)；约54℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、或约56℃(包括端值)；约56℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、或约58℃(包括端值)；约58℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、或约60℃(包括端值)；约60℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、或约62℃(包括端值)；约62℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、或约64℃(包括端值)；约64℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、或约66℃(包括端值)；约66℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、或约68℃(包括端值)；约68℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、或约70℃(包括端值)；约70℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、或约72℃(包括端值)；约72℃至约80℃、约78℃、约76℃、或约74℃(包括端值)；约74℃至约80℃、约78℃、或约76℃(包括端值)；约76℃至约80℃或约78℃(包括端值)；或约78℃至约80℃(包括端值)的Tm与靶核酸(例如，编码IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2或IL1RL1中的任一种的核酸)结合。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成纳米颗粒(例如包含一种或多种合成聚合物的纳米颗粒，例如Patil等人,Pharmaceutical Nanotechnol.367:195-203,2009；Yang等人,ACS Appl.Mater.Interfaces,doi:10.1021/acsami.6b16556,2017；Perepelyuk等人,Mol.Ther.Nucleic Acids6:259-268,2017)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以是粘膜粘着颗粒(例如具有带正电荷外表面的纳米颗粒)(Andersen等人,MethodsMol.Biol.555:77-86,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以具有带中性电荷的外表面。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成例如脂质体(Buyens等人,J.ControlRelease 158(3):362-370,2012；Scarabel等人,Expert Opin.Drug Deliv.17:1-14,2017)、胶束(例如混合胶束)(Tangsangasaksri等人,BioMacromolecules17:246-255,2016；Wu等人,Nanotechnology,doi:10.1088/1361-6528/aa6519,2017)、微乳液(WO 11/004395)、纳米乳液或固体脂质纳米粒子(Sahay等人,Nature Biotechnol.31:653-658,2013；和Lin等人,Nanomedicine 9(1):105-120,2014)。US2016/0090598中描述了抑制性核酸的其它示例性结构特征和抑制性核酸的制剂。
在一些实施方式中，药物组合物可以包括无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)。在一些实例中，药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)组成。在某些实施方式中，无菌生理盐水是药物级生理盐水。在某些实施方式中，药物组合物可以包括一种或多种抑制核酸(例如本文所述的任何抑制核酸)和无菌水。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌水组成。在某些实施方式中，药物组合物包括一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成。在一些实例中，无菌盐水是药物级PBS。
在某些实施方式中，一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)可与用于制备药物组合物或制剂的药学上可接受的活性和/或惰性物质混合。用于制备药物组合物的组合物和方法取决于多个标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或将施用的剂量。
包括一种或多种抑制性核酸的药物组合物包含任何药物上可接受的盐、酯或此类酯的盐。药物组合物的非限制性示例包括抑制性核酸的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
本文还提供了前药，其可包括在抑制性核酸一端或两端的额外核苷，其在身体内被内源性核酸酶切割以形成活性抑制性核酸。
脂质部分可用于形成抑制性核酸。在某些方法中，抑制性核酸被引入由阳离子脂质和中性脂质混合物制成的预成型脂质体或脂质体复合物中。在某些方法中，形成具有单阳离子或多阳离子脂质的抑制性核酸复合物，而不存在中性脂质。在某些实施方式中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物中特定细胞或组织的分布。在一些实例中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物脂肪组织中的分布。在某些实施方式中，选择脂质部分以增加抑制性核酸在肌肉组织的分布。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物包含一种或多种抑制性核酸和一种或多种赋形剂。在某些这样的实施方式中，赋形剂选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括脂质体和乳剂。脂质体和乳剂可用于配制疏水性化合物。在一些实例中，使用某些有机溶剂，如二甲基亚砜。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括一种或多种组织特异性递送分子，其设计用于将一种或多种抑制性核酸递送至哺乳动物中的特定组织或细胞类型。例如，药物组合物可以包括附有组织特异性抗体的脂质体。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物可以包括共溶剂体系。此类共溶剂体系的示例包括苯甲醇、非极性表面活性剂、水溶性有机聚合物和水相。这种共溶剂体系的非限制性示例是VPD共溶剂体系，其是包含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的无水乙醇溶液。可以理解，可以使用其它表面活性剂代替聚山梨酯80TM；聚乙二醇的粒径可以改变；其它生物相容性聚合物、例如聚乙烯吡咯烷酮可以替代聚乙二醇；其它糖或多糖可以替代葡萄糖。
在一些实例中，可将药物组合物配制成经口施用。在一些实例中，药物组合物配制用于颊施用。
在一些实例中，药物组合物配制成通过注射(例如静脉注射、皮下注射、肌肉注射等)施用。在这些实施方式的一些中，药物组合物包括载体，并且在水溶液(诸如水或生理相容的缓冲剂，诸如汉克斯溶液、林格溶液或生理盐水缓冲剂)中配制。在一些实例中，还包括其它成分(例如有助于溶解或用作防腐剂的成分)。在一些实例中，使用适当的液体载体、悬浮剂等来制备可注射悬浮液。一些注射用药物组合物以单位剂量形式(例如在安瓿或多剂量容器中)来配制。一些用于注射的药物组合物是在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可能含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等配方剂。适用于注射用药物组合物的溶剂包括但不限于亲脂溶剂和脂肪油，例如芝麻油、合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，以及脂质体。
抗体
在一些实施方式中，IL-1抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、和IL-33中的任一种。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段可以特异性结合IL-1R1和IL1RAP中的一者或两者。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段可以特异性结合IL-18Rα。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段可以特异性结合IL1RL1和IL1RAP中的一者或两者。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段可以与IL-1RL2和IL-1RAP中的一者或两者结合。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2、微型抗体、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig，和双亲和性重新靶向抗体(DART)、三功能抗体、具有共同LC的kih IgG、crossmab、ortho-Fab IgG、2-in-1-IgG、IgG-ScFv、scFv2-Fc、双纳米抗体、串联抗体、DART-Fc、scFv-HAS-scFv、DNL-Fab3、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体、纳米抗体-HSA、双抗体、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HAS、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂是卡那吉努单抗(canakinumab)(ACZ885，
Figure BDA0002449116230002451
(Dhimolea,MAbs 2(1):3-13,2010；Yokota等人,Clin.Exp.Rheumatol.2016；Torene等人,Ann.Rheum.Dis.76(1):303-309,2017；Gram,Curr.Opin.Chem.Biol.32:1-9,2016；Kontzias等人,Semin.Arthritis Rheum 42(2):201-205,2012)。在一些实施方式中，IL-1抑制剂是阿那白滞素(
Figure BDA0002449116230002461
Beynon等人,J.Clin.Rheumatol.23(3):181-183,2017；Stanam等人,Oncotarget 7(46):76087-76100,2016；Nayki等人,J.ObstetGynaecol.Res.42(11):1525-1533,2016；Greenhalgh等人,Dis.ModelMech.5(6):823-833,2012)；或其变体。在一些实施方式中，IL-1抑制剂是格沃吉珠单抗(gevokizumab)(XOMA052；Knicklebein等人,Am.J.Ophthalmol.172:104-110,2016；Roubille等人,Atherosclerosis 236(2):277-285,2014；Issafras等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.348(1):202-215,2014；Handa等人,Obesity 21(2):306-309,2013；Geiler等人,Curr.Opin.Mol.Ther.12(6):755-769,2010)、LY2189102(Bihorel等人,AAPSJ.16(5):1009-1117,2014；Sloan-Lancaster等人,Diabetes Care 36(8):2239-2246,2013)、MABp1(Hickish等人,Lancey Oncol.18(2):192-201,2017；Timper等人,J.DiabetesComplications 29(7):955-960,2015)、CDP-484(Braddock等人,Drug Discov.3:330-339,2004)、或其变体(Dinarello等人,Nat.Rev.DrugDiscov.11(8):633-652,2012)。
作为抗体或其抗原结合片段的IL-1抑制剂的其它教示内容描述于美国专利号5,075,222；7,446,175；7,531,166；7,744,865；7,829,093；和8,273,350；US2016/0326243；US2016/0194392，和US 2009/0191187中，所述专利的每一者通过引用全文并入本文。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
融合蛋白或可溶性受体
在一些实施方式中，IL-1抑制剂是融合蛋白或可溶性受体。例如，融合可以包括融合至配偶体氨基酸序列的IL-1R1、IL1RAP、IL-18Rα、IL-1RL2、和IL1RL1中的任一种的胞外结构域(例如，稳定结构域，例如IgG Fc区，例如人IgG Fc区)。在一些实施方式中，IL-1抑制剂是IL-1RL1和IL1RAP中的一者或两者的可溶性形式。在一些实施方式中，IL-1抑制剂是IL-18Rα的可溶性形式。在一些实施方式中，IL-1抑制剂是IL-1RL2和IL-1RAP中的一者或两者的可溶性形式。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂是融合蛋白，其包含利那西普(IL-1Trap，
Figure BDA0002449116230002481
)(参见例如，Kapur&Bonk,P.T.34(3):138-141,2009；Church等人,Biologics 2(4):733-742,2008；McDermott,Drugs Today(Barc)45(6):423-430,2009)或由其组成。在一些实施方式中，IL-1抑制剂是嵌合的融合蛋白(例如EBI-005
Figure BDA0002449116230002482
(Furfine等人,Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.53(14):2340-2340,2012；Goldstein等人,EyeContact Lens 41(3):145-155,2015；Goldstein等人,Eye ContactLens,2016))。
在一些实施方式中，IL-1抑制剂是可溶性受体，其包含sIL-1RI和/或sIL-1RII(Svenson等人,Eur.J.Immunol.25(10):2842-2850,1995)或由其组成。
内源性IL-I抑制剂肽
在一些实施方式中，IL-1抑制剂可以是内源性配体或其活性片段，例如IL-1Ra或IL-36Ra。IL-1Ra是一种内源性可溶性蛋白，其降低IL-1α和IL-1β与其受体(例如，IL-1R1和IL1RAP蛋白的复合物)结合的能力。IL-36Ra是一种内源性可溶性蛋白，其降低IL-36α、IL-36β、和IL-36γ与其受体(例如，IL-1RL2和IL-1RAP蛋白的复合物)结合的能力。IL-1Ra和IL-36Ra的示例性序列在下文示出。
人IL-1Ra mRNA转录物1(SEQ ID NO:126)
Figure BDA0002449116230002483
Figure BDA0002449116230002491
人IL-1Ra mRNA转录物2(SEQ ID NO:127)
Figure BDA0002449116230002492
Figure BDA0002449116230002501
人IL-1Ra mRNA转录物3(SEQ ID NO:128)
Figure BDA0002449116230002502
Figure BDA0002449116230002511
人IL-1Ra mRNA转录物4(SEQ ID NO:129)
Figure BDA0002449116230002512
人IL-36Ra mRNA变体1(SEQ ID NO:130)
Figure BDA0002449116230002521
Figure BDA0002449116230002531
人IL-36Ra mRNA变体2(SEQ ID NO:131)
Figure BDA0002449116230002532
Figure BDA0002449116230002541
IL-13抑制剂
术语“IL-13抑制剂”是指降低IL-13表达和/或降低IL-13与IL-13受体的结合的试剂。在一些实施方式中，IL-13抑制剂降低IL-13结合IL-13受体(例如，包括IL-4Rα和IL-13Rα1的复合物，或包括IL-13Rα1和IL-13Rα2的复合物)的能力。
在一些实施方式中，IL-13抑制剂靶向IL-4Rα亚基。在一些实施方式中，IL-13抑制剂靶向IL-13Rα1。在一些实施方式中，IL-13抑制剂靶向IL-13Rα2。在一些实施方式中，IL-13抑制剂靶向包括IL-4Rα和IL-13Rα1的IL-13受体。在一些实施方式中，IL-13抑制剂靶向包括IL-13Rα1和IL-13Rα2的IL-13受体。在一些实施方式中，IL-13抑制剂靶向IL-13。
在一些实施方式中，IL-13抑制剂是抑制性核酸、抗体或其抗原结合片段、或融合蛋白。在一些实施方式中，抑制性核酸可以是反义核酸、核酶、小干扰RNA、小发夹RNA或微小RNA。这些不同的抑制性核酸方面的实例在下文中描述。可以降低哺乳动物细胞中的IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα mRNA的表达的抑制性核酸的任何实例可以在体外合成。
可以降低哺乳动物细胞中的IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα mRNA表达的表达的抑制性核酸包括反义核酸分子，即其核苷酸序列与IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα mRNA的全部或部分互补(例如，与SEQ ID NO:132-138的任何一个的全部或部分互补)的核酸分子。
人IL-13mRNA(SEQ ID NO:132)
Figure BDA0002449116230002542
Figure BDA0002449116230002551
人IL-13Rα1 mRNA(SEQ ID NO:133)
Figure BDA0002449116230002552
Figure BDA0002449116230002561
Figure BDA0002449116230002571
人IL-13Rα2 mRNA(SEQ ID NO:134)
Figure BDA0002449116230002572
人IL-4Rα mRNA转录物变体1(SEQ ID NO:135)
Figure BDA0002449116230002573
Figure BDA0002449116230002581
Figure BDA0002449116230002591
人IL-4Rα mRNA转录物变体3(SEQ ID NO:136)
Figure BDA0002449116230002592
Figure BDA0002449116230002601
Figure BDA0002449116230002611
人IL-4Rα mRNA转录物变体4(SEQ ID NO:137)
Figure BDA0002449116230002612
Figure BDA0002449116230002621
人IL-4Rα mRNA转录物变体5(SEQ ID NO:138)
Figure BDA0002449116230002631
Figure BDA0002449116230002641
反义核酸分子可与编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα蛋白的核苷酸序列的编码链的全部或部分非编码区互补。非编码区(5’和3’未翻译区域)是基因中编码区侧翼的5’和3’序列，且不被翻译成氨基酸。
基于本文公开的序列，本领域技术人员可以容易地选择和合成许多适当的反义核酸中的任一种，以靶向本文所述的编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα蛋白的核酸。靶向编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα蛋白的核酸的反义核酸可以使用集成DNA技术网站(Integrated DNA Technologies website)上提供的软件进行设计。
反义核酸的长度可以是例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个或更多的核苷酸。反义寡核苷酸可以使用本领域已知的程序通过化学合成和酶结合反应来构建。例如，反义核酸可使用天然核苷酸或经被设计用于提高分子的生物稳定性或提高反义核酸和感觉核酸之间形成的双链的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如硫代磷酸酯衍生物和可以使用的吖啶取代的核苷酸)进行化学合成。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、怀丁苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。或者，可以使用表达载体生物产生反义核酸，其中核酸以反义方向亚克隆到表达载体中(即从插入的核酸转录的RNA将具有对所关注的目标核酸的反义方向)。
本文所述反义核酸分子可在体外制备并施予哺乳动物(例如人类)。可替代地，它们可以在原位产生，使它们与编码以下的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合：IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα蛋白，从而例如通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。杂交可以通过常规的核苷酸互补来形成稳定的双链，或者，例如反义核酸分子与DNA双链结合的情况下，通过双螺旋的大沟中的特定相互作用来形成。反义核酸分子可使用载体(例如慢病毒、逆转录病毒或腺病毒载体)递送至哺乳动物细胞。
反义核酸可以是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，链彼此平行(Gaultier等人,Nucleic Acids Res.15:6625-6641,1987)。反义核酸也可包含2’-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,Nucleic AcidsRes.15:6131-6148,1987)或嵌合体RNA-DNA类似物(Inoue等人,FEBS Lett.215:327-330,1987)。
作为反义核酸的IL-13抑制剂的非限制性实例描述于Kim等人,J.Gene Med.11(1):26-37,2009；和Mousavi等人,Iran J.Allergy Asthma Immunol.2(3):131-137,2003中。
抑制性核酸的另一实例是对编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα蛋白的核酸具有特异性的核酶(例如对IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4RαmRNA的特异性，例如对SEQ ID NO:109-115中任一个的特异性)。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化RNA分子，能够切割其上具有互补区的单链核酸如mRNA。因此，核酶(例如，锤头状核酶(描述在Haselhoff和Gerlach,Nature334:585-591,1988中)可以用于催化切割mRNA转录物，从而抑制由mRNA编码的蛋白质的翻译。对IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα mRNA具有特异性的核酶可以基于本文公开的以下中的任一个的核苷酸序列来设计：IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα mRNA序列。例如，可以构建四膜细胞L-19IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与要在IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα mRNA中分裂的核苷酸序列互补(参见例如美国专利号4,987,071和5,116,742)。可替代地，IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4RαmRNA可用于从RNA分子库中选择具有特异核糖核酸酶活性的催化RNA。参见，例如Bartel等人,Science 261:1411-1418,1993。
抑制性核酸也可以是形成三重螺旋结构的核酸分子。例如，IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα多肽的表达可通过靶向与编码以下的基因的调节区互补的核苷酸序列而被抑制：IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα多肽(例如启动子和/或增强子，例如在转录起始状态上游至少1kb、2kb、3kb、4kb或5kb的序列)，从而形成阻止靶细胞中基因的转录的三螺旋结构。通常参见Helene,Anticancer Drug Des.6(6):569-84,1991；Helene,Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36,1992；和Maher,Bioassays 14(12):807-15,1992。
在各种实施方式中，抑制性核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架处进行修饰以改善例如分子的稳定性、杂交性或溶解性。例如，可以对核酸的脱氧核糖磷酸骨架进行修饰以生成肽核酸(参见例如Hyrup等,Bioorganic Medicinal Chem.4(1):5-23,1996)。肽核酸(PNA)是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代，仅保留四种天然核苷。PNA的中性骨架允许在低离子强度的条件下对DNA和RNA进行特异性杂交。PNA寡聚物的合成可使用标准固相肽合成方案进行(参见例如Perry-O'Keefe等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:14670-675,1996)。PNA可作为反义或反基因因子，用于通过例如诱导转录或翻译扣留或抑制复制等方式对基因表达进行序列特异性调控。
PNA可通过将亲脂性或其它辅助基团连接到PNA、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过使用脂质体或本领域已知的药物递送的其它技术来修饰，例如以增强其稳定性或细胞摄取。例如，可以产生PNA-DNA嵌合体，其可以结合PNA和DNA的有利性质。这种嵌合体允许DNA识别酶(如RNA酶H和DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，而PNA部分将提供高结合亲和力和特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆叠、核碱基间键数和取向选择适当长度的连接体连接。
PNA-DNA嵌合体的合成可如Finn等人,Nucleic Acids Res.24:3357-63,1996中所述的进行。例如，可以使用标准的磷酰胺偶联化学和修饰的核苷类似物在固体载体上合成DNA链。诸如5’-(4-甲氧基三苯甲酰)氨基-5’-脱氧胸苷亚磷酰胺等化合物可用作PNA与DNA的5’端之间的连接(Mag等人,Nucleic Acids Res.17:5973-88,1989)。然后以逐步方式将PNA单体偶联以产生具有5’PNA片段和3’DNA片段的嵌合分子(Finn等人,Nucleic AcidsRes.24:3357-63,1996)。可替代地，嵌合分子可以用5’DNA片段和3’PNA片段合成(Peterser等人,Bioorganic Med.Chem.Lett.5:1119-11124,1975)。
在一些实施方式中，抑制性核酸可包括其它附加基团，诸如肽，或促进跨细胞膜转运的试剂(参见Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6553-6556,1989；Lemaitre等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84:648-652,1989；和WO88/09810)。此外，可使用杂交触发的裂解剂(参见例如Krol等人,Bio/Techniques6:958-976,1988)或插入剂(参见例如Zon,Pharm.Res.,5:539-549,1988)对抑制性核酸进行修饰。为此，寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂、杂交触发裂解剂等缀合。
可以降低在哺乳动物细胞中表达IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4RαmRNA的其它方式是通过RNA干扰(RNAi)。RNAi是其中mRNA在宿主细胞中降解的过程。为了抑制mRNA，与将被沉默的基因(例如编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα多肽的基因)的一部分相对应的双链RNA(dsRNA)被引入哺乳动物细胞。dsRNA被消化成21-23个核苷酸长的二联体，称为短干扰RNA(或siRNA)，与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导沉默复合物(或RISC)。RISC通过siRNA链中的一条与内源性mRNA之间的碱基配对相互作用来靶向同源转录物。然后从siRNA的3’端切下mRNA约12个核苷酸(参见Sharp等人,Genes Dev.15:485-490,2001，和Hammond等人,Nature Rev.Gen.2:110-119,2001)。
RNA介导的基因沉默可以以多种方式在哺乳动物细胞中诱导，例如通过加强RNA发夹的内源性表达(参见Paddison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:1443-1448,2002)，或如上所述通过小(21-23nt)dsRNA的转染(在Caplen,Trends Biotech.20:49-51,2002中进行了综述)。例如在美国专利号6506559和US2003/0056235中描述了用RNAi调节基因表达的方法，其以引用方式并入本文中。
标准的分子生物学技术可以用来产生siRNA。短干扰RNA可以通过化学合成、重组产生，例如从模板DNA(如质粒)表达RNA，或从商业供应商(如Dharmacon)获得。用于介导RNAi的RNA可包括合成或修饰的核苷酸，如硫代磷酸核苷酸。用siRNA或用设计成制备siRNA的质粒转染细胞的方法是本领域的常规方法。
用于降低IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα mRNA的siRNA分子在很多方面不同。例如，它们可以包括3’羟基和21、22或23个连续核苷酸的链。它们可以是钝端或在3’端、5’端或两端包括悬端。例如，RNA分子的至少一条链可具有从约1到约6个核苷酸(例如1-5、1-3、2-4或3-5个核苷酸(无论是嘧啶或嘌呤核苷酸)的3’突出端的长度。如果两条链都包括突出端，则每条链的突出端长度可能相同或不同。
为了进一步增强RNA双链的稳定性，可以稳定3’突出端以防降解(通过例如包括嘌呤核苷酸，诸如腺苷或鸟苷核苷酸，或用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸腺嘧啶核苷取代尿苷2-核苷酸3’突出端是耐受的，且不影响RNAi的有效性)。任何siRNA都可用于降低IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα mRNA的方法中，只要它与感兴趣的目标具有足够的同源性(例如在SEQ ID NO:109-115中的任一个中存在的序列，例如涵盖翻译起始位点或mRNA的第一外显子的靶序列)。可以使用的siRNA长度没有上限(例如siRNA可以是从基因的约21个碱基对到基因的全长或更长的范围(例如约20到约30个碱基对，约50到约60个碱基对，约60到约70个碱基对，约70到约80个碱基对，约80到约90个碱基对，或约90到约100个碱基对)。
如本文所述，抑制性核酸优先与编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα蛋白的核酸结合(例如杂交)以治疗过敏性疾病(例如哮喘(Corren等人,N.Engl.J.Med.365:1088-1098,2011))、放射性肺损伤(Chung等人,Sci.Rep.6:39714,2016)、溃疡性结肠炎(Hua等人,Br.J.Clin.Pharmacol.80:101-109,2015)、皮炎(Guttman-Yassky等人,Exp.Opin.Biol.Ther.13(4):1517,2013)、和慢性阻塞性肺疾病(COPD)(Walsh等人(2010)Curr.Opin.InvestigDrugs.11(11):1305-1312,2010)。
作为IL-13抑制剂的短干扰RNA(siRNA)的非限制性实例描述于Lively等人,J.Allergy Clin.Immunol.121(1):88-94,2008中。作为IL-13抑制剂的短发夹RNA(shRNA)的非限制性实例描述于Lee等人,Hum Gene Ther.22(5):577-586,2011，和Shilovskiy等人,Eur.Resp.J.42:P523,2013中。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以是微小RNA。作为IL-13抑制剂的微小RNA的非限制性实例是let-7(Kumar等人,J.Allergy Clin.Immunol.128(5):1077-1085,2011)。
在某些实施方式中，可向有需要的受试者(例如人类受试者)施用治疗有效量的靶向编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα蛋白的核酸的抑制性核酸。
在一些实施方式中，抑制性核酸可为约10个核苷酸至约40个核苷酸(例如约10至约30个核苷酸、约10至约25个核苷酸、约10至约20个核苷酸、约10至约15个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、14个核苷酸、15个核苷酸、16个核苷酸、17个核苷酸、18个核苷酸、19个核苷酸、20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸或40个核苷酸)的长度。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
如本领域所知，术语“热熔点(Tm)”是指在限定的离子强度、pH和抑制性核酸浓度下的温度，在该温度下在平衡时与靶序列互补的抑制性核酸的50％与靶序列杂交。在一些实施方式中，抑制性核酸可以在严格的条件下特异性地结合到靶核酸，例如对于短的寡核苷酸(例如10至50个核苷酸)而言，在pH7.0到8.3下、盐浓度为至少约0.01到1.0M钠离子浓度(或其它盐)且温度为至少约30℃的条件下。加入甲酰胺等失稳剂也可达到严格的条件。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以大于20℃、大于22℃、大于24℃、大于26℃、大于28℃、大于30℃、大于32℃、大于34℃、大于36℃、大于38℃、大于40℃、大于42℃、大于44℃、大于46℃、大于48℃、大于50℃、大于52℃、大于54℃、大于56℃、大于58℃、大于60℃、大于62℃、大于64℃、大于66℃、大于68℃、大于70℃、大于72℃、大于74℃、大于76℃、大于78℃、或大于80℃的Tm与靶核酸(例如，编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα中的任一种的核酸)结合，例如，如使用UV分光光度计在磷酸盐缓冲盐水中所测量。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以约20℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、约24℃、或约22℃(包括端值)；约22℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、或约24℃(包括端值)；约24℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、或约26℃(包括端值)；约26℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、或约28℃(包括端值)；约28℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、或约30℃(包括端值)；约30℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、或约32℃(包括端值)；约32℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、或约34℃(包括端值)；约34℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、或约36℃(包括端值)；约36℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、或约38℃(包括端值)；约38℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、或约40℃(包括端值)；约40℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、或约42℃(包括端值)；约42℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、或约44℃(包括端值)；约44℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、或约46℃(包括端值)；约46℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、或约48℃(包括端值)；约48℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、或约50℃(包括端值)；约50℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、或约52℃(包括端值)；约52℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、或约54℃(包括端值)；约54℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、或约56℃(包括端值)；约56℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、或约58℃(包括端值)；约58℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、或约60℃(包括端值)；约60℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、或约62℃(包括端值)；约62℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、或约64℃(包括端值)；约64℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、或约66℃(包括端值)；约66℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、或约68℃(包括端值)；约68℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、或约70℃(包括端值)；约70℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、或约72℃(包括端值)；约72℃至约80℃、约78℃、约76℃、或约74℃(包括端值)；约74℃至约80℃、约78℃、或约76℃(包括端值)；约76℃至约80℃或约78℃(包括端值)；或约78℃至约80℃(包括端值)的Tm与靶核酸(例如，编码IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα中的任一种的核酸)结合。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成纳米颗粒(例如包含一种或多种合成聚合物的纳米颗粒，例如Patil等人,Pharmaceutical Nanotechnol.367:195-203,2009；Yang等人,ACS Appl.Mater.Interfaces,doi:10.1021/acsami.6b16556,2017；Perepelyuk等人,Mol.Ther.Nucleic Acids6:259-268,2017)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以是粘膜粘着颗粒(例如具有带正电荷外表面的纳米颗粒)(Andersen等人,MethodsMol.Biol.555:77-86,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以具有带中性电荷的外表面。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成例如脂质体(Buyens等人,J.ControlRelease 158(3):362-370,2012；Scarabel等人,Expert Opin.Drug Deliv.17:1-14,2017)、胶束(例如混合胶束)(Tangsangasaksri等人,BioMacromolecules17:246-255,2016；Wu等人,Nanotechnology,doi:10.1088/1361-6528/aa6519,2017)、微乳液(WO 11/004395)、纳米乳液或固体脂质纳米粒子(Sahay等人,Nature Biotechnol.31:653-658,2013；和Lin等人,Nanomedicine 9(1):105-120,2014)。US2016/0090598中描述了抑制性核酸的其它示例性结构特征和抑制性核酸的制剂。
在一些实施方式中，药物组合物可以包括无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)。在一些实例中，药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)组成。在某些实施方式中，无菌生理盐水是药物级生理盐水。在某些实施方式中，药物组合物可以包括一种或多种抑制核酸(例如本文所述的任何抑制核酸)和无菌水。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌水组成。在某些实施方式中，药物组合物包括一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成。在一些实例中，无菌盐水是药物级PBS。
在某些实施方式中，一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)可与用于制备药物组合物或制剂的药学上可接受的活性和/或惰性物质混合。用于制备药物组合物的组合物和方法取决于多个标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或将施用的剂量。
包括一种或多种抑制性核酸的药物组合物包含任何药物上可接受的盐、酯或此类酯的盐。药物组合物的非限制性示例包括抑制性核酸的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
本文还提供了前药，其可包括在抑制性核酸一端或两端的额外核苷，其在身体内被内源性核酸酶切割以形成活性抑制性核酸。
脂质部分可用于形成抑制性核酸。在某些方法中，抑制性核酸被引入由阳离子脂质和中性脂质混合物制成的预成型脂质体或脂质体复合物中。在某些方法中，形成具有单阳离子或多阳离子脂质的抑制性核酸复合物，而不存在中性脂质。在某些实施方式中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物中特定细胞或组织的分布。在一些实例中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物脂肪组织中的分布。在某些实施方式中，选择脂质部分以增加抑制性核酸在肌肉组织的分布。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物包含一种或多种抑制性核酸和一种或多种赋形剂。在某些这样的实施方式中，赋形剂选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括脂质体和乳剂。脂质体和乳剂可用于配制疏水性化合物。在一些实例中，使用某些有机溶剂，如二甲基亚砜。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括一种或多种组织特异性递送分子，其设计用于将一种或多种抑制性核酸递送至哺乳动物中的特定组织或细胞类型。例如，药物组合物可以包括附有组织特异性抗体的脂质体。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物可以包括共溶剂体系。此类共溶剂体系的示例包括苯甲醇、非极性表面活性剂、水溶性有机聚合物和水相。这种共溶剂体系的非限制性示例是VPD共溶剂体系，其是包含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的无水乙醇溶液。可以理解，可以使用其它表面活性剂代替聚山梨酯80TM；聚乙二醇的粒径可以改变；其它生物相容性聚合物、例如聚乙烯吡咯烷酮可以替代聚乙二醇；其它糖或多糖可以替代葡萄糖。
在一些实例中，可将药物组合物配制成经口施用。在一些实例中，药物组合物配制用于颊施用。
在一些实例中，药物组合物配制成通过注射(例如静脉注射、皮下注射、肌肉注射等)施用。在这些实施方式的一些中，药物组合物包括载体，并且在水溶液(诸如水或生理相容的缓冲剂，诸如汉克斯溶液、林格溶液或生理盐水缓冲剂)中配制。在一些实例中，还包括其它成分(例如有助于溶解性或用作防腐剂的成分)。在一些实例中，使用适当的液体载体、悬浮剂等来制备可注射悬浮液。一些注射用药物组合物以单位剂量形式(例如在安瓿或多剂量容器中)来配制。一些用于注射的药物组合物是在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可能含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等配方剂。适用于注射用药物组合物的溶剂包括但不限于亲脂溶剂和脂肪油，例如芝麻油、合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，以及脂质体。
抗体
在一些实施方式中，IL-13抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、或IL-4Rα或其组合中的任一种。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段可以特异性结合IL-13。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段可以特异性结合IL-13受体(例如，包括IL-4Rα和IL-13Rα1的复合物，或包括IL-13Rα1和IL-13Rα2的复合物)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施例中，抗体可以是scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2、微型抗体、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig，和双亲和性重新靶向抗体(DART)、三功能抗体、具有共同LC的kih IgG、crossmab、ortho-FabIgG、2-in-1-IgG、IgG-ScFv、scFv2-Fc、双纳米抗体、串联抗体、DART-Fc、scFv-HAS-scFv、DNL-Fab3、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体、纳米抗体-HSA、双抗体、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HAS、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，IL-13抑制剂是单克隆抗体(Bagnasco等人,Int.Arch.Allergy Immunol.170:122-131,2016)。在一些实施方式中，IL-13抑制剂是QAX576(Novartis)或其抗原结合片段(参见例如，Kariyawasam等人,B92NewTreatmentApproachesforAsthma andAllergery San Diego,2009；Rothenberg等人,J.Allergy Clin.Immunol.135:500-507,2015)。在一些实施方式中，IL-13抑制剂是ABT-308(Abbott)或其抗原结合片段(参见例如，Ying等人,American Thoracic Society2010International Conference,2010年5月14-19日,New Orleans；Abstract A6644)。在一些实施方式中，IL-13抑制剂是CNTO-5825(Centrocore)或其抗原结合片段(参见例如，van Hartingsveldt等人,British J.Clin.Pharmacol.75:1289-1298,2013)。在一些实施方式中，IL-13抑制剂是度匹鲁单抗(dupilumab)(REGN668/SAR231893)或其抗原结合片段(参见例如，Simpson等人,N.Eng.J.Med.375:2335-2348,2016；Thaci等人,Lancet 387:40-52,2016)。在一些实施方式中，IL-13抑制剂是AMG317(Amgen)或其抗原结合片段(Polosa等人,Drug Discovery Today 17:591-599,2012；Holgate,British J.ClinicalPharmacol.76:277-291,2013)。在一些实施方式中，IL-13抑制剂是特异性结合IL-13Rα1的抗体(参见例如，美国专利号7,807,158；WO 96/29417；WO 97/15663；和WO03/080675)。
在一些实施方式中，IL-13抑制剂是人源化单克隆抗体(例如，乐瑞吉珠单抗(lebrikizumab)(TNX-650)(Thomson等人,Biologics 6:329-335,2012；和Hanania等人,Thorax 70(8):748-756,2015))。在一些实施方式中，IL-13抑制剂是抗IL-13抗体，例如GSK679586或其变体(Hodsman等人,Br.J.Clin.Pharmacol.75(1):118-128,2013；和DeBoever等人,J.Allergy Clin.Immunol.133(4):989-996,2014)。在一些实施方式中，IL-13抑制剂是曲洛吉努单抗(tralokinumab)(CAT-354)或其变体(Brightling等人,Lancet 3(9):692-701,2015；Walsh等人(2010)Curr.Opin.Investig.Drugs 11(11):1305-1312,2010；Piper等人,Euro.Resp.J.41:330-338,2013；May等人,Br.J.Pharmacol.166(1):177-193,2012；Singh等人,BMC Pulm Med.10:3,2010；Blanchard等人,Clin.Exp.Allergy 35(8):1096-1103,2005)。在一些实施方式中，Il-13抑制剂是安卢吉珠单抗(anrukinzumab)(IMA-638)(Hua等人,Br.J.Clin.Pharmacol.80:101-109,2015；Reinisch等人,Gut 64(6):894-900,2015；Gauvreau等人,Am.J.Respir.Crit.Care Med.183(8):1007-1014,2011；Bree等人,J.Allergy Clin.Immunol.119(5):1251-1257,2007)。作为抗体或其抗原结合片段的IL-13抑制剂的其它教示内容描述于美国专利号8,067,199；7,910,708；8,221,752；8,388,965；8,399,630；和8,734,801；US 2014/0341913；US 2015/0259411；US 2016/0075777；US2016/0130339、US 2011/0243928和US 2014/0105897中，所述专利的每一者通过引用全文并入本文。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
融合蛋白
在一些实施方式中，IL-13抑制剂是融合蛋白或可溶性拮抗剂。在一些实施方式中，融合蛋白包含IL-13受体的可溶性片段(例如，包括IL-13Rα1和IL-4Rα的复合物的可溶性片段、包括IL-13Rα1和IL-13Rα2的复合物的可溶性片段、IL-13Rα1的可溶性片段、IL-13Rα2的可溶性片段、或IL-4Rα的可溶性片段)。在一些实施方式中，融合蛋白包含IL-13受体的胞外结构域(例如，包括IL-13Rα1和IL-4Rα两者的胞外结构域的融合蛋白、包括IL-13Rα1和IL-13Rα2两者的胞外结构域的融合蛋白、包括IL-13Rα1的胞外结构的融合蛋白、包括IL-13Rα2的胞外结构域的融合蛋白、或包括IL-4Rα的胞外结构域的融合蛋白)。
在一些实施方式中，融合蛋白包含sIL-13Rα2-Fc(参见例如，Chiaramonte等人,J.Clin.Invest.104(6):777-785,1999；Kasaian等人,Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.36(3):368-376,2007；Miyahara等人,J.Allergy Clin.Immunol.118(5):1110-1116,2006；Rahaman等人,CancerRes.62(4):1103-1109,2002；通过引用并入本文)或由其组成。在一些实施方式中，融合蛋白包含IL-13融合细胞毒素(例如，IL-13/白喉毒素融合蛋白(Li等人,Protein Eng.15(5):419-427,2002)、IL-13-PE38QQR(IL-13-PE)(Blease等人(2001)J.Immunol.167(11):6583-6592,2001；和Husain等人,J.Neuro-Oncol.65(1):37-48,2003))或由其组成。
IL-10受体激动剂
术语“IL-10受体激动剂”是结合且激活在哺乳动物细胞上表达的IL-10的受体或编码这种分子的核酸的任何分子。IL-10的受体可以包括例如两种IL-10受体-1(IL-10R1)蛋白和两种IL-10受体2(IL-10R2)蛋白的复合物。在一些实例中，IL-10受体激动剂是特异性结合且激活IL-10的受体(例如，IL-10的人受体)的抗体或抗原结合抗体片段。在一些实例中，IL-10受体激动剂是重组IL-10(例如，人重组IL-10)。在一些实例中，IL-10受体激动剂是聚乙二醇化重组IL-10(例如聚乙二醇化重组人IL-10)。在一些实例中，IL-10受体激动剂是融合蛋白。在一些实例中，IL-10受体激动剂是IL-10肽模拟物。
在一些实施方式中，本文所述的任何装置或组合物可以含有分泌IL-10受体激动剂(例如，重组IL-10，例如重组人IL-10)的重组哺乳动物细胞(例如重组人细胞)。在一些实施方式中，本文所述的任何装置或组合物可以含有分泌IL-10(例如，人IL-10)的哺乳动物细胞(例如人细胞)。
哺乳动物细胞中IL-10受体的激活可以通过检测与IL-10受体激动剂接触的哺乳动物细胞中下游信号传导蛋白的激活的增加来确定。例如，哺乳动物细胞中IL-10受体的激活可以通过JAK1和TYK2的磷酸化和活性增加、STAT3的磷酸化和随后的核易位、和/或BCLXL、细胞周期蛋白-D1、细胞周期蛋白-D2、细胞周期蛋白-D3、细胞周期蛋白-A、Pim1、c-Myc或p19(INK4D)的转录增加来检测(参见例如，Hu等人,J.Leukoc.Biol.82(2):237-243,2007；和Cavalcante等人,J.Periodontol.83(7):926-935,2012)。用于检测指示IL-10受体激活的这些下游事件的试剂可从例如ThermoFisher Scientific获得。
IL-10和IL-10受体
人IL-10蛋白和cDNA序列的示例性序列在下文示出。
前体人IL-10蛋白(信号序列呈粗体)(SEQ ID NO:139)
Figure BDA0002449116230002761
Figure BDA0002449116230002771
成熟人IL-10蛋白(SEQ ID NO:140)
spgqgtqsensc thfpgnlpnm lrdlrdafsr vktffqmkdq ldnlllkesl ledfkgylgcqalsemiqfy leevmpqaen qdpdikahvn slgenlktlr lrlrrchrfl pcenkskave qvknafnklqekgiykamse fdifinyiea ymtmkirn
人IL-10 cDNA(SEQ ID NO:141)
Figure BDA0002449116230002772
IL-10的示例性非人同源物的蛋白质和cDNA序列在下文示出。前体小鼠IL-10蛋白(信号序列呈粗体)(SEQ ID NO:142)
Figure BDA0002449116230002781
小鼠IL-10cDNA(SEQ ID NO:143)
Figure BDA0002449116230002782
前体大鼠IL-10蛋白(信号序列呈粗体)(SEQ ID NO:144)
Figure BDA0002449116230002783
大鼠IL-10cDNA(SEQ ID NO:145)
Figure BDA0002449116230002784
Figure BDA0002449116230002791
前体兔IL-10蛋白(SEQ ID NO:146)
Figure BDA0002449116230002792
兔IL-10cDNA(SEQ ID NO:147)
Figure BDA0002449116230002793
前体猴IL-10蛋白(信号序列呈粗体)(SEQ ID NO:148)
Figure BDA0002449116230002794
猴IL-10cDNA(SEQ ID NO:149)
Figure BDA0002449116230002801
人IL-10R-1和人IL-10R-2的示例性蛋白质和cDNA序列在下文示出。前体人IL-10R-1蛋白(信号序列呈粗体)(SEQ ID NO:150)
Figure BDA0002449116230002802
人IL-10R-1cDNA，转录物变体1(SEQ ID NO:151)
Figure BDA0002449116230002803
Figure BDA0002449116230002811
Figure BDA0002449116230002821
人IL-10R-1cDNA，转录物变体2(SEQ ID NO:152)
Figure BDA0002449116230002822
Figure BDA0002449116230002831
前体人IL-10R-2蛋白(信号序列呈粗体)(SEQ ID NO:153)
Figure BDA0002449116230002841
人IL-10R-2cDNA(SEQ ID NO:154)
Figure BDA0002449116230002842
Figure BDA0002449116230002851
重组IL-10
在一些实例中，IL-10受体激动剂是重组IL-10蛋白。在一些实例中，重组IL-10蛋白具有与人IL-10蛋白相同的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:140)。重组人IL-10蛋白的非限制性商业来源可从Peprotech(Rocky Hill,NJ)、Novus Biologicals(Littleton,CO)、StemcellTM Technologies(Cambridge,MA)、Millipore Sigma(Billerica,MA)、和R&DSystems(Minneapolis,MN)获得。在一些实例中，重组人IL-10蛋白可以是TenovilTM(Schering Corporation)。
在一些实例中，重组IL-10蛋白是人IL-10蛋白的功能片段(例如，SEQ ID NO:140)。在一些实例中，人IL-10的功能片段是能够特异性结合且激活IL-10的人受体的人IL-10蛋白的片段(例如，SEQ ID NO:140)。例如，人IL-10蛋白的功能片段可以具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、或二十个来自SEQ ID NO:140的N端和/或C端的氨基酸。
在一些实例中，重组人IL-10包括与SEQ ID NO:140至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少98％相同、或至少99％相同)的序列，并且能够结合且激活IL-10的人受体。在不同哺乳动物物种之间不保守的氨基酸的突变不太可能对重组IL-10蛋白的活性产生负面影响。
在一些实施方式中，IL-10受体激动剂是rhuIL-10(Tenovil)或其变体。参见例如McHutchison等人,J.Interferon Cytokine Res.1:1265-1270,1999；Rosenblum等人,Regul.Toxicol.Pharmacol.35:56-71,2002；Schreiber等人,Gastroenterology 119(6):1461-1472,2000；Maini等人,Arthritis Rheum.40(Suppl):224,1997。
制备重组人IL-10的示例性方法描述于Pajkrt等人,J.Immunol.158:3971-3977,1997中。制备重组IL-10的其它示例性方法在本文中描述并且是本领域中已知的。
在一些实施方式中，重组IL-10是聚乙二醇化重组IL-10(例如聚乙二醇化重组人IL-10)(例如，IL-10的5kDa N封端的聚乙二醇化形式；AM0010)(Infante等人,ASCOMeetingAbstracts 33(15_suppl):3017,2015；Chan等人,PLoS One 11(6):e0156229,2016；Mumm等人,Cancer Cell 20(6):781-796,2011；Teng等人,Cancer Cell 20(6):691-693,2011；美国专利号8,691,205；8,865,652；9,259,478；和9,364,517；以及美国专利申请公开号2008/0081031；2009/0214471；2011/0250163；2011/0091419；2014/0227223；2015/0079031；2015/0086505；2016/0193352；2016/0367689；2016/0375101；和2016/0166647)。
在一些实施方式中，重组IL-10是重组IL-10的稳定同种型。在一些实施方式中，重组IL-10的稳定化同种型是病毒IL-10蛋白(例如，人巨细胞病毒IL10(例如，cmv-IL10、LA-cmv-IL-10(例如，Lin等人,Virus Res.131(2):213-223,2008；Jenkins等人,J.Virol.78(3):1440-1447,2004；Kotenko等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97(4):1695-1700,2000；Jones等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99(14):9404-9409,2002)或潜伏相关病毒IL-10蛋白(例如Poole等人,J.Virol.88(24):13947-13955,2014))。
在一些实施方式中，重组IL-10是哺乳动物IL-10同源物(参见例如，WO00/073457)。在一些实施方式中，哺乳动物IL-10同源物是BCRF1、人IL-10的EBV同源物(也称为病毒IL-10)，或其变体(Liu等人,J.Immunol.158(2):604-613,1997)。
融合蛋白
在一些实施方式中，IL-10受体激动剂是融合蛋白。在一些实施方式中，融合蛋白包含IL-10蛋白(或其功能片段)和融合配偶体(例如，Fc区(例如，人IgG Fc)或人血清白蛋白)的氨基酸序列。在一些实施方式中，融合配偶体可以是将IL-10受体激动剂靶向发炎组织的抗体或抗原结合抗体片段(例如，scFv)。在一些实施方式中，作为融合配偶体的抗体或抗原结合片段可以通过例如CD69特异性地或优先地结合发炎的胃肠道细胞。在一些实施方式中，作为融合蛋白的IL-10受体激动剂可以是例如F8-IL-10，诸如Dekavil(Philogen)。
在一些实施方式中，融合蛋白是L19-IL-10融合蛋白、HyHEL10-IL-10融合蛋白、或其变体。参见例如Trachsel等人,Arthritis Res.Ther.9(1):R9,2007，和Walmsley等人,ArthritisRheum.39:495-503,1996。
IL-10肽模拟物
在一些实施方式中，IL-10受体激动剂是IL-10肽模拟物。IL-10肽模拟物的非限制性实例是IT 9302或其变体(Osman等人,Surgery 124(3):584-92,1998；Lopez等人,Immunobiology 216(10):1117-1126,2011)。IL-10肽模拟物的额外实例描述于DeWitt,Nature Biotech.17:214,1999，和Reineke等人,Nature Biotech.17:271-275,1999中。
抗体和抗原结合片段
在一些实施方式中，IL-10受体激动剂是结合且激活IL-10受体(例如人IL-10受体)的抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方式中，是特异性结合IL-10R-1蛋白(例如人IL-10R-1蛋白)的表位的抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方式中，是特异性结合IL-10R-2蛋白(例如人IL-10R-2蛋白)的表位的抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方式中，是特异性结合IL-10R-1和IL-10R-2蛋白(例如人IL-10R-1和人IL-10R-2蛋白)的表位的抗体或抗原结合抗体片段。在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2、微型抗体、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig，和双亲和性重新靶向抗体(DART)、三功能抗体、具有共同LC的kih IgG、crossmab、ortho-Fab IgG、2-in-1-IgG、IgG-ScFv、scFv2-Fc、双纳米抗体、串联抗体、DART-Fc、scFv-HAS-scFv、DNL-Fab3、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体、纳米抗体-HSA、双抗体、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HAS、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，IL-10受体激动剂是抗体(例如F8-IL10(也称为DEKAVIL))或其变体(参见例如Schwager等人,Arthritis Res.Ther.11(5):R142,2009；Franz等人,Int.J.Cardiol.195:311-322,2015；Galeazzi等人,Isr.Med.Assoc.J.16(10):666,2014)。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
产生重组IL-10的细胞
在一些实施方式中，本文所述的任何装置或组合物可以包括分泌重组IL-10(例如，本文所述的重组IL-10蛋白中的任一种)的哺乳动物细胞(例如人重组哺乳动物细胞)。在一些实施方式中，本文所述的任何装置或组合物可以包括分泌IL-10(例如，人IL-10)的细胞(例如哺乳动物细胞)。在一些实施方式中，哺乳动物细胞可以是获自受试者的哺乳动物细胞，并且在将编码重组IL-10(例如，本文所述的任何重组IL-10蛋白)的核酸引入获自受试者的细胞之后，将细胞掺入本文所述的任何组合物或装置中。
可以通过引入载体来产生重组细胞，所述载体包括编码重组IL-10蛋白(例如，本文所述的任何重组IL-10蛋白)的核酸序列。在一些实施方式中，将载体或编码重组IL-10蛋白的核酸序列整合到重组哺乳动物细胞的染色体中。在一些实施方式中，不将载体或编码重组IL-10蛋白的核酸序列整合到重组哺乳动物细胞的染色体中。
载体可以是病毒载体。病毒载体的非限制性实例包括腺病毒载体、疱疹病毒载体、杆状病毒载体和逆转录病毒载体。表达载体也可以是质粒或黏粒。载体的额外实例是本领域中已知的。
载体可以包括可操作地连接到编码重组IL-10蛋白(例如，本文所述的任何重组IL-10蛋白)的核酸序列的启动子序列。可以可操作地连接到编码重组IL-10蛋白(例如本文所述的任何重组IL-10蛋白)的序列(例如cDNA)的启动子序列的非限制性实例包括：猿猴病毒40(SV40)早期启动子、核糖体蛋白21(rpS21)启动子、仓鼠β-肌动蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子(例如CMV立即早期启动子(参见例如Teschendorf等人,AnticancerRes.22:3325-3330,2002)、泛素C(UBC)启动子、延伸因子1-α(EF1A)启动子、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PCK)启动子、来自小鼠CMV的IE2启动子/增强子区域(参见例如Chatellard等人,Biotechnol.Bioeng.96:106-117,2007)和鸡β-肌动蛋白启动子。可以用于本文所述的任何载体中的人基因启动子的额外非限制性实例描述于哺乳动物启动子数据库(在mrpombdb.wister.upenn.edu的Wistar Institute网站)中。可以用于表达载体中的哺乳动物启动子序列的额外实例是本领域中已知的。
可以用于将载体或核酸引入细胞(例如哺乳动物细胞)的方法的非限制性实例包括脂质转染、转染、电穿孔、显微注射、磷酸钙转染、基于树状聚合物的转染、阳离子聚合物转染、细胞挤压、声纳穿孔、光学转染、刺穿转染(impalection)、流体动力递送、磁转染、病毒转导(例如腺病毒和慢病毒转导)、和纳米颗粒转染。将载体或核酸引入细胞的这些和其它方法是本领域熟知的。
在一些实例中，重组哺乳动物细胞可以是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、B细胞、CD8+T细胞、树突细胞、角质形成细胞或上皮细胞。参见例如Mosser等人,Immunol.Rev.226:205-218,2009；Fillatreau等人,Nat.Rev.Immunol.8:391-397,2008；Ryan等人,Crit.Rev.Immunol.27:15-32,2007；Moore等人,Annu.Rev.Immunol.19:683-765,2001。在一些实施方式中，重组哺乳动物细胞可以是间充质干细胞(例如Gupte等人,Biomed.J.40(1):49-54,2017)。
编码IL-10受体激动剂的核酸和载体
在一些实例中，IL-10受体激动剂可以是包括编码IL-10受体激动剂(例如，本文所述的任何IL-10蛋白)的序列的核酸(例如，载体)。在一些实施方式中，核酸包括编码IL-10(例如人IL-10)的序列。在一些实施方式中，核酸包括编码重组IL-10(例如重组人IL-10)的序列。在一些实施方式中，编码IL-10受体激动剂的序列可以是SEQ ID NO:141。在一些实施方式中，编码IL-10受体激动剂的序列可以包括与SEQ ID NO:141至少80％(例如，至少82％、至少84％、至少86％、至少88％、至少90％、至少92％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％、或至少99％)相同的序列。
核酸可以是例如载体。在一些实施方式中，载体可以是病毒载体(例如，腺病毒载体、疱疹病毒载体、杆状病毒载体、或逆转录病毒载体)。载体也可以是例如质粒或黏粒。载体的额外实例是本领域中已知的。
载体可以包括可操作地连接到编码IL-10受体激动剂(例如，本文所述的任何重组IL-10蛋白)的序列的启动子序列。可以可操作地连接到编码IL-10受体激动剂(例如本文所述的任何重组IL-10蛋白)的序列的启动子序列的非限制性实例包括：猿猴病毒40(SV40)早期启动子、核糖体蛋白21(rpS21)启动子、仓鼠β-肌动蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子(例如CMV立即早期启动子(参见例如Teschendorf等人,Anticancer Res.22:3325-3330,2002)、泛素C(UBC)启动子、延伸因子1-α(EF1A)启动子、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PCK)启动子、来自小鼠CMV的IE2启动子/增强子区域(参见例如Chatellard等人,Biotechnol.Bioeng.96:106-117,2007)和鸡β-肌动蛋白启动子。可以用于本文所述的任何载体中的人基因启动子的额外非限制性实例描述于哺乳动物启动子数据库(在mrpombdb.wister.upenn.edu的Wistar Institute网站)中。启动子可以是组成型启动子或诱导型启动子。组成型启动子和诱导型启动子的实例是本领域中已知的。可以用于表达载体中的哺乳动物启动子序列的额外实例和特征是本领域中已知的。
包括编码IL-10受体激动剂的核酸的组合物的非限制性实例是XT-150(XaludTherapeutics)。
IL-10受体激动剂的额外实例
在一些实施方式中，重组细胞是重组革兰氏阳性细菌细胞(例如，基因修饰的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)(LL-Thy12)(参见例如Steidler等人,Science 289:1352-1355,2000；Braat等人,Clin.Gastroenterol.Heptal.4:754-759,2006)。在一些实施方式中，重组细胞是分泌IL-10受体激动剂(例如重组IL-10蛋白)的重组革兰氏阴性细菌细胞(例如福氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)细胞)(Chamekh等人,J.Immunol.180(6):4292-4298,2008)。
在一些实施方式中，IL-10受体激动剂是诱导另一细胞(例如巨噬细胞)产生和分泌IL-10的细胞(例如酪酸梭菌(Clostridium butyricum)细胞)(例如Hayashi等人,CellHostMicrobe 13:711-722,2013)。在一些实施方式中，IL-10受体激动剂是重组细菌细胞(例如嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)细胞)，其缺乏脂磷壁酸且诱导不同细胞(例如树突细胞)产生和分泌IL-10(例如，Mohamadzadeh等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.108(增刊1):4623-4630,2011；Konstantinov等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.105(49):19474-9,2008)。在一些实施方式中，IL-10受体激动剂是保持在上清液中的细菌细胞或细菌细胞的片段，其诱导不同细胞(例如免疫细胞)中的IL-10分泌(例如普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)细胞或普氏粪杆菌上清液)(参见例如Sokol等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.105(43):16731-16736,2008)。
其它IL-10受体激动剂的额外实例描述于例如美国专利号6,936,586；WO96/01318；WO 91/00349；WO 13/130913中，所述专利各自全文并入本文。
整联蛋白抑制剂
术语“整联蛋白抑制剂”是指降低一种或多种整联蛋白的表达和/或降低整联蛋白配体与在白细胞的募集、外渗和/或激活中起作用的一种或多种整联蛋白的结合的试剂。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂特异性结合靶整联蛋白上的配体结合位点的至少一部分。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂在与内源性配体相同的位点处特异性结合靶整联蛋白。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂降低哺乳动物细胞中靶整联蛋白的表达水平。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂特异性结合整联蛋白配体。
可以被本文所述的任何整联蛋白抑制剂靶向的整联蛋白的非限制性实例包括：α2β1整联蛋白、α1β1整联蛋白、α4β7整联蛋白、整联蛋白α4β1(VLA-4)、E-选择素、ICAM-1、α5β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、VLA-4、α2β1整联蛋白、α5β3整联蛋白、α5β5整联蛋白、αIIbβ3整联蛋白和MAdCAM-1。可以降低α4β7整联蛋白的表达和/或活性的整联蛋白抑制剂的非限制性实例是FTY720。特异性靶向MAdCAM的整联蛋白抑制剂的非限制性实例是PF-547659(Pfizer)。特异性靶向α4β7的整联蛋白抑制剂的非限制性实例是AJM300(Ajinomoto)、依托珠单抗(etrolizumab)(Genentech)和维多珠单抗(vedolizumab)(Millenium/Takeda)。
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是αIIbβ3整联蛋白抑制剂。在一些实施方式中，αIIbβ3整联蛋白抑制剂是阿昔单抗
Figure BDA0002449116230002911
c7E3；Kononczuk等人,Curr.DrugTargets 16(13):1429-1437,2015；Jiang等人,Appl.Microbiol.Biotechnol.98(1):105-114,2014)、依替巴肽(
Figure BDA0002449116230002912
Scarborough等人,J.Biol.Chem.268:1066-1073,1993；Tcheng等人,Circulation 91:2151-2157,1995)或替罗非班(
Figure BDA0002449116230002913
Hartman等人,J.Med.Chem.35:4640-4642,1992；Pierro等人,Eur.J.Ophthalmol.26(4):e74-76,2016；Guan等人,Eur.J.Pharmacol761:144-152,2015)。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是αL选择性整联蛋白抑制剂。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是β2整联蛋白抑制剂。
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是α4整联蛋白(例如，α4β1整联蛋白(例如，极迟抗原-4(VLA-4)、CD49d、或CD29))抑制剂、α4β7整联蛋白抑制剂。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂靶向内皮VCAM1、纤连蛋白、黏膜地址素细胞黏附分子1(MAdCAM-1)、玻连蛋白、腱生蛋白-C、骨桥蛋白(OPN)、肾连蛋白、血管抑制素、组织型转谷氨酰胺酶、因子XIII、VonWillebrand因子(血管性血友病因子)(VWF)、ADAM蛋白、ICAM蛋白、胶原蛋白、e-钙粘着蛋白、层粘连蛋白、腓骨蛋白-5或TGFβ。在一些实施方式中，α4整联蛋白抑制剂是那他珠单抗(natalizumab)(
Figure BDA0002449116230002921
Targan等人,Gastroenterology132(5):1672-1683,2007；Sandborn等人,N.Engl.J.Med.353(18):1912-1925,2005；Nakamura等人,Intern.Med.56(2):211-214,2017；和Singh等人,J.Pediatr.Gastroenterol.Nutr.62(6):863-866,2016)。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是内源性整联蛋白抑制剂(例如，SHARPIN(Rantala等人,Nat.Cell.Biol.13(11):1315-1324,2011))。
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是αv整联蛋白(例如，α5β1整联蛋白、α5β3整联蛋白、α5β5整联蛋白抑制剂、和/或α5β6整联蛋白)抑制剂。
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是α5β1整联蛋白抑制剂。
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是抑制性核酸、抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、整联蛋白拮抗剂、环肽、解整联蛋白、拟肽或小分子。在一些实施方式中，抑制性核酸是小发夹RNA、小干扰RNA、反义、适配体或微小RNA。
抑制性核酸
如本文所述，抑制性核酸特异性结合(例如杂交)编码整联蛋白或整联蛋白配体的核酸以治疗炎性疾病(例如，慢性炎症、肠易激综合症(IBS)、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病或自发炎性疾病)。在一些实施方式中，抑制性核酸可以是反义核酸、核酶、小干扰RNA、小发夹RNA或微小RNA。这些不同的抑制性核酸方面的实例在下文中描述。可以降低哺乳动物细胞中的靶整联蛋白或靶整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白或任何示例性整联蛋白配体)表达的抑制性核酸的任何实例可以在体外合成。
可以降低哺乳动物细胞中的靶整联蛋白mRNA或靶整联蛋白配体mRNA(例如本文所述的任何示例性整联蛋白或本文所述的任何示例性整联蛋白配体)表达的抑制性核酸包括反义核酸分子，即其核苷酸序列与靶整联蛋白mRNA或靶整联蛋白配体mRNA的全部或部分互补(例如，与SEQ ID NO:155-181中任一个的全部或部分互补)的核酸分子。
整联蛋白α2(ITGA)(NCBI Ref.:NM_002203.3)(SEQ ID NO:155)
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整联蛋白αIIb(α2b)(NCBI Ref.:NM_000419.4；SEQ ID NO:156)
Figure BDA0002449116230002962
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整联蛋白α4(VLA-4)(NCBI Ref.:NM_000885.5；SEQ ID NO:157)
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整联蛋白α5(NCBI Ref.:NM_002205.4；SEQ ID NO:158)
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Figure BDA0002449116230003021
Figure BDA0002449116230003031
整联蛋白β1(NCBI Ref.:NM_002211.3；SEQ ID NO:159)
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整联蛋白β3(NCBI Ref.:NM_000212.2；SEQ ID NO:160)
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Figure BDA0002449116230003051
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整联蛋白β5(NCBI Ref.:NM_002213.4；SEQ ID NO:161)
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整联蛋白β7(NCBI Ref.:NM_000889.2；SEQ ID NO:162)
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E-选择素(NCBI Ref.:NM_000450.2；SEQ ID NO:163)
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ICAM-1(NCBI Ref.:NM_000201.2；SEQ ID NO:164)
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TGF-β(NCBI Ref.:NM_000660.6；SEQ ID NO:165)
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MadCAM-1(NCBI Ref.:NM_130760.2；SEQ ID NO:166)
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Figure BDA0002449116230003151
VCAM-1(NCBI Ref.:NM_001078.3；SEQ ID NO:167)
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纤连蛋白(NCBI Ref.:NM_001306129.1；SEQ ID NO:168)
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玻连蛋白(NCBI Ref.:NM_000638.3；SEQ ID NO:169)
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腱生蛋白-C(NCBI Ref.:NM_002160.3；SEQ ID NO:170)
Figure BDA0002449116230003212
Figure BDA0002449116230003221
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骨桥蛋白(NCBI Ref.:NM_000582.2；SEQ ID NO:171)
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Figure BDA0002449116230003261
肾连蛋白(NCBI Ref.:NM_001033047.2；SEQ ID NO:172)
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Figure BDA0002449116230003281
血管抑制素(PLG)(NCBI Ref.:NM_000301.3；SEQ ID NO:173)
Figure BDA0002449116230003282
Figure BDA0002449116230003291
组织转谷氨酰胺酶因子XIII(F13A1)(NCBI Ref.:NM_000129.3；SEQ ID NO:174)
Figure BDA0002449116230003292
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Figure BDA0002449116230003311
Von Willebrand因子(NCBI Ref.:NM_000552.4；SEQ ID NO:175)
Figure BDA0002449116230003312
Figure BDA0002449116230003321
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ADAM2(NCBI Ref.:NM_001278113.1；SEQ ID NO:176)
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Figure BDA0002449116230003361
ICAM1(NCBI Ref.:NM_000201.2；SEQ ID NO:177)
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Figure BDA0002449116230003381
胶原蛋白(NCBI Ref.:NM_000088.3；SEQ ID NO:178)
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Figure BDA0002449116230003401
E-钙黏着蛋白(NCBI Ref.:NM_001317184.1；SEQ ID NO:179)
Figure BDA0002449116230003402
Figure BDA0002449116230003411
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层粘连蛋白(LAMA1)(NCBI Ref.:NM_005559.3；SEQ ID NO:180)
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腓骨蛋白-5(NCBI Ref.:NM_006329.3；SEQ ID NO:181)
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反义核酸分子可以与编码靶整联蛋白或靶整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白或任何示例性整联蛋白配体)的核苷酸序列的编码链的全部或部分非编码区互补。非编码区(5’和3’未翻译区域)是基因中编码区侧翼的5’和3’序列，且不被翻译成氨基酸。
基于本文公开的序列，本领域技术人员可以容易地选择和合成许多适当的反义核酸中的任一种，以靶向编码靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)的核酸或编码整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的核酸。靶向编码靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)的核酸或编码整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的核酸可以使用集成DNA技术网站(Integrated DNATechnologies website)上提供的软件进行设计。
反义核酸的长度可以是例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个或更多的核苷酸。反义寡核苷酸可以使用本领域已知的程序通过化学合成和酶结合反应来构建。例如，反义核酸可使用天然核苷酸或经被设计用于提高分子的生物稳定性或提高反义核酸和感觉核酸之间形成的双链的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如硫代磷酸酯衍生物和可以使用的吖啶取代的核苷酸)进行化学合成。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、怀丁苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。或者，可以使用表达载体生物产生反义核酸，其中核酸以反义方向亚克隆到表达载体中(即从插入的核酸转录的RNA将具有对所关注的目标核酸的反义方向)。
本文所述反义核酸分子可在体外制备并施予哺乳动物(例如人类)。可替代地，它们可以在原位产生，使它们与编码以下的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合：靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)，从而例如通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。杂交可以通过常规的核苷酸互补来形成稳定的双链，或者，例如反义核酸分子与DNA双链结合的情况下，通过双螺旋的大沟中的特定相互作用来形成。反义核酸分子可使用载体(例如慢病毒、逆转录病毒或腺病毒载体)递送至哺乳动物细胞。
反义核酸可以是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，链彼此平行(Gaultier等人,Nucleic Acids Res.15:6625-6641,1987)。反义核酸也可包含2’-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,Nucleic AcidsRes.15:6131-6148,1987)或嵌合体RNA-DNA类似物(Inoue等人,FEBS Lett.215:327-330,1987)。
作为反义核酸的示例性整联蛋白抑制剂包括ATL1102(例如，Limmroth等人,Neurology 83(20):1780-1788,2014；Li等人,Dig.Liver Dis.39(6):557-565,2007；Goto等人,Inflamm.BowelDis.12(8):758-765,2006)。
抑制性核酸的另一实例是对编码靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的核酸具有特异性的核酶。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化RNA分子，能够切割其上具有互补区的单链核酸如mRNA。因此，核酶(例如，锤头状核酶(描述在Haselhoff和Gerlach,Nature 334:585-591,1988中)可以用于催化切割mRNA转录物，从而抑制由mRNA编码的蛋白质的翻译。可以基于本文公开的或本领域中已知的任何整联蛋白mRNA序列或整联蛋白配体mRNA序列的核苷酸序列设计对靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)具有特异性的核酶。例如，可以构建四膜细胞L-19IVSRNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与要在靶整联蛋白mRNA或整联蛋白配体mRNA中分裂的核苷酸序列互补(参见例如美国专利号4,987,071和5,116,742)。可替代地，整联蛋白mRNA(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白mRNA)或整联蛋白配体mRNA(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体mRNA)可用于从RNA分子库中选择具有特异核糖核酸酶活性的催化RNA。参见，例如Bartel等人,Science 261:1411-1418,1993。
抑制性核酸也可以是形成三重螺旋结构的核酸分子。例如，靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的表达可通过靶向与编码以下的基因的调节区互补的核苷酸序列而被抑制：靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)(例如启动子和/或增强子，例如在转录起始状态上游至少1kb、2kb、3kb、4kb或5kb的序列)，从而形成阻止靶细胞中基因的转录的三螺旋结构。通常参见Helene,Anticancer Drug Des.6(6):569-84,1991；Helene,Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36,1992；和Maher,Bioassays 14(12):807-15,1992。
在各种实施方式中，抑制性核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架处进行修饰以改善例如分子的稳定性、杂交性或溶解性。例如，可以对核酸的脱氧核糖磷酸骨架进行修饰以生成肽核酸(参见例如Hyrup等,Bioorganic Medicinal Chem.4(1):5-23,1996)。肽核酸(PNA)是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代，仅保留四种天然核苷。PNA的中性骨架允许在低离子强度的条件下对DNA和RNA进行特异性杂交。PNA寡聚物的合成可使用标准固相肽合成方案进行(参见例如Perry-O'Keefe等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:14670-675,1996)。PNA可作为反义或反基因因子，用于通过例如诱导转录或翻译扣留或抑制复制等方式对基因表达进行序列特异性调控。
PNA可通过将亲脂性或其它辅助基团连接到PNA、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过使用脂质体或本领域已知的药物递送的其它技术来修饰，例如以增强其稳定性或细胞摄取。例如，可以产生PNA-DNA嵌合体，其可以结合PNA和DNA的有利性质。这种嵌合体允许DNA识别酶(如RNA酶H和DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，而PNA部分将提供高结合亲和力和特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆叠、核碱基间键数和取向选择适当长度的连接体连接。
PNA-DNA嵌合体的合成可如Finn等人,Nucleic Acids Res.24:3357-63,1996中所述的进行。例如，可以使用标准的磷酰胺偶联化学和修饰的核苷类似物在固体载体上合成DNA链。诸如5’-(4-甲氧基三苯甲酰)氨基-5’-脱氧胸苷亚磷酰胺等化合物可用作PNA与DNA的5’端之间的连接(Mag等人,Nucleic Acids Res.17:5973-88,1989)。然后以逐步方式将PNA单体偶联以产生具有5’PNA片段和3’DNA片段的嵌合分子(Finn等人,Nucleic AcidsRes.24:3357-63,1996)。可替代地，嵌合分子可以用5’DNA片段和3’PNA片段合成(Peterser等人,Bioorganic Med.Chem.Lett.5:1119-11124,1975)。
在一些实施方式中，抑制性核酸可包括其它附加基团，诸如肽，或促进跨细胞膜转运的试剂(参见Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6553-6556,1989；Lemaitre等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84:648-652,1989；和WO88/09810)。此外，可使用杂交触发裂解剂(参见例如Krol等人,Bio/Techniques6:958-976,1988)或插入剂(参见例如Zon,Pharm.Res.,5:539-549,1988)对抑制性核酸进行修饰。为此，寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂、杂交触发裂解剂等缀合。
可以降低在哺乳动物细胞中表达靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)mRNA或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)mRNA的其它方式是通过RNA干扰(RNAi)。RNAi是其中mRNA在宿主细胞中降解的过程。为了抑制mRNA，与将被沉默的基因(例如编码靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的基因)的一部分相对应的双链RNA(dsRNA)被引入哺乳动物细胞。dsRNA被消化成21-23个核苷酸长的二联体，称为短干扰RNA(或siRNA)，与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导沉默复合物(或RISC)。RISC通过siRNA链中的一条与内源性mRNA之间的碱基配对相互作用来靶向同源转录物。然后从siRNA的3’端切下mRNA约12个核苷酸(参见Sharp等人,Genes Dev.15:485-490,2001，和Hammond等人,Nature Rev.Gen.2:110-119,2001)。
RNA介导的基因沉默可以以多种方式在哺乳动物细胞中诱导，例如通过加强RNA发夹的内源性表达(参见Paddison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:1443-1448,2002)，或如上所述通过小(21-23nt)dsRNA的转染(在Caplen,Trends Biotech.20:49-51,2002中进行了综述)。例如在美国专利号6506559和US2003/0056235中描述了用RNAi调节基因表达的方法，所述专利以引用方式并入本文中。
标准的分子生物学技术可以用来产生siRNA。短干扰RNA可以通过化学合成、重组产生，例如通过表达从模板DNA(如质粒)表达RNA，或从商业供应商(如Dharmacon)获得。用于介导RNAi的RNA可包括合成或修饰的核苷酸，如硫代磷酸核苷酸。用siRNA或用设计成制备siRNA的质粒转染细胞的方法是本领域的常规方法。
用于降低靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)mRNA或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的siRNA分子可以在很多方面不同。例如，它们可以包括3’羟基和21、22或23个连续核苷酸的链。它们可以是钝端或在3’端、5’端或两端包括悬端。例如，RNA分子的至少一条链可具有从约1到约6个核苷酸(例如1-5、1-3、2-4或3-5个核苷酸(无论是嘧啶或嘌呤核苷酸)的3’突出端的长度。如果两条链都包括突出端，则每条链的突出端长度可能相同或不同。
为了进一步增强RNA双链的稳定性，可以稳定3’突出端以防降解(通过例如包括嘌呤核苷酸，诸如腺苷或鸟苷核苷酸，或用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸腺嘧啶核苷取代尿苷2-核苷酸3’突出端是耐受的，且不影响RNAi的有效性)。任何siRNA都可用于降低靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)mRNA或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)mRNA的方法中，只要它与感兴趣的目标具有足够的同源性(例如在SEQ ID NO:132-158中的任一个中存在的序列，例如包含翻译起始位点或mRNA的第一外显子的靶序列)。可以使用的siRNA长度没有上限(例如siRNA可以是从基因的约21个碱基对到基因的全长或更长的范围(例如约20到约30个碱基对，约50到约60个碱基对，约60到约70个碱基对，约70到约80个碱基对，约80到约90个碱基对，或约90到约100个碱基对)。
如本文所述，抑制性核酸优先与编码靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的核酸结合(例如杂交)。
作为短干扰RNA(siRNA)的整联蛋白抑制剂的非限制性实例描述于Wang等人,Cancer CellInt.16:90,2016中。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是短发夹RNA(shRNA)。
作为微小RNA的整联蛋白抑制剂的非限制性实例包括miR-124(Cai等人,Sci.Rep.7:40733,2017)、miR-134(Qin等人,Oncol.Rep.37(2):823-830,2017)、miR-92b(Ma等人,Oncotarget 8(4):6681-6690,2007)、miR-17(Gong等人,Oncol.Rep.36(4),2016)、miR-338(Chen等人,Oncol.Rep.36(3):1467-74,2016)、和miR-30a-5p(Li等人,Int.J.Oncol.48(3):1155-1164,2016)。
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂可以包括修饰碱基/锁核酸(LNA)。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是适配体(例如，Berg等人,Mol.Ther.Nucl.Acids 5:e294,2016；和Hussain等人,Nucleic Acid Ther.23(3):203-212,2013)。作为抑制性核酸的整联蛋白抑制剂的额外实例描述于Juliano等人,Theranostics1:211-219,2011；Millard等人,Theranostics 1:154-188,2011；和Teoh等人,Curr.Mol.Med.15:714-734,2015中。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是反义核酸，例如阿里克弗森(alicaforsen)(Yacyshyn等人,Clin.Gastroenterol.Hepatol.5(2):215-220,2007)。
在某些实施方式中，可以向有需要的受试者(例如，人类受试者)施用治疗有效量的靶向编码靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)或整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的核酸的抑制性核酸。
在一些实施方式中，抑制性核酸可为约10个核苷酸至约40个核苷酸(例如约10至约30个核苷酸、约10至约25个核苷酸、约10至约20个核苷酸、约10至约15个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、14个核苷酸、15个核苷酸、16个核苷酸、17个核苷酸、18个核苷酸、19个核苷酸、20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸或40个核苷酸)的长度。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
如本领域所知，术语“热熔点(Tm)”是指在限定的离子强度、pH和抑制性核酸浓度下的温度，在该温度下在平衡时与靶序列互补的抑制性核酸的50％与靶序列杂交。在一些实施方式中，抑制性核酸可以在严格的条件下特异性地结合到靶核酸，例如对于短的寡核苷酸(例如10至50个核苷酸)而言，在pH 7.0到8.3下、盐浓度为至少约0.01到1.0M钠离子浓度(或其它盐)且温度为至少约30℃的条件下。加入甲酰胺等失稳剂也可达到严格的条件。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以大于20℃、大于22℃、大于24℃、大于26℃、大于28℃、大于30℃、大于32℃、大于34℃、大于36℃、大于38℃、大于40℃、大于42℃、大于44℃、大于46℃、大于48℃、大于50℃、大于52℃、大于54℃、大于56℃、大于58℃、大于60℃、大于62℃、大于64℃、大于66℃、大于68℃、大于70℃、大于72℃、大于74℃、大于76℃、大于78℃、或大于80℃的Tm与靶核酸(例如，编码靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)的核酸或编码整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的核酸)结合，例如，如使用UV分光光度计在磷酸盐缓冲盐水中所测量。
在本文所述的抑制性核酸中的任一种的一些实施方式中，抑制性核酸以约20℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、约24℃、或约22℃(包括端值)；约22℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、约26℃、或约24℃(包括端值)；约24℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、约28℃、或约26℃(包括端值)；约26℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、约30℃、或约28℃(包括端值)；约28℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、约32℃、或约30℃(包括端值)；约30℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、约34℃、或约32℃(包括端值)；约32℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、约36℃、或约34℃(包括端值)；约34℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、约38℃、或约36℃(包括端值)；约36℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、约40℃、或约38℃(包括端值)；约38℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、约42℃、或约40℃(包括端值)；约40℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、约44℃、或约42℃(包括端值)；约42℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、约46℃、或约44℃(包括端值)；约44℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、约48℃、或约46℃(包括端值)；约46℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、约50℃、或约48℃(包括端值)；约48℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、约52℃、或约50℃(包括端值)；约50℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、约54℃、或约52℃(包括端值)；约52℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、约56℃、或约54℃(包括端值)；约54℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、约58℃、或约56℃(包括端值)；约56℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、约60℃、或约58℃(包括端值)；约58℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、约62℃、或约60℃(包括端值)；约60℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、约64℃、或约62℃(包括端值)；约62℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、约66℃、或约64℃(包括端值)；约64℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、约68℃、或约66℃(包括端值)；约66℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、约70℃、或约68℃(包括端值)；约68℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、约72℃、或约70℃(包括端值)；约70℃至约80℃、约78℃、约76℃、约74℃、或约72℃(包括端值)；约72℃至约80℃、约78℃、约76℃、或约74℃(包括端值)；约74℃至约80℃、约78℃、或约76℃(包括端值)；约76℃至约80℃或约78℃(包括端值)；或约78℃至约80℃(包括端值)的Tm与靶核酸(例如，编码靶整联蛋白(例如，本文所述的任何示例性靶整联蛋白)的核酸或编码整联蛋白配体(例如，本文所述的任何示例性整联蛋白配体)的核酸)结合。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成纳米颗粒(例如包含一种或多种合成聚合物的纳米颗粒，例如Patil等人,Pharmaceutical Nanotechnol.367:195-203,2009；Yang等人,ACS Appl.Mater.Interfaces,doi:10.1021/acsami.6b16556,2017；Perepelyuk等人,Mol.Ther.Nucleic Acids6:259-268,2017)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以是粘膜粘着颗粒(例如具有带正电荷外表面的纳米颗粒)(Andersen等人,MethodsMol.Biol.555:77-86,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以具有带中性电荷的外表面。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成例如脂质体(Buyens等人,J.ControlRelease 158(3):362-370,2012；Scarabel等人,Expert Opin.Drug Deliv.17:1-14,2017)、胶束(例如混合胶束)(Tangsangasaksri等人,BioMacromolecules17:246-255,2016；Wu等人,Nanotechnology,doi:10.1088/1361-6528/aa6519,2017)、微乳液(WO 11/004395)、纳米乳液或固体脂质纳米粒子(Sahay等人,Nature Biotechnol.31:653-658,2013；和Lin等人,Nanomedicine 9(1):105-120,2014)。US2016/0090598中描述了抑制性核酸的其它示例性结构特征和抑制性核酸的制剂。
在一些实施方式中，药物组合物可以包括无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)。在一些实例中，药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)组成。在某些实施方式中，无菌生理盐水是药物级生理盐水。在某些实施方式中，药物组合物可以包括一种或多种抑制核酸(例如本文所述的任何抑制核酸)和无菌水。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌水组成。在某些实施方式中，药物组合物包括一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方式中，药物组合物由一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)和无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成。在一些实例中，无菌盐水是药物级PBS。
在某些实施方式中，一种或多种抑制性核酸(例如本文所述的任何抑制性核酸)可与用于制备药物组合物或制剂的药学上可接受的活性和/或惰性物质混合。用于制备药物组合物的组合物和方法取决于多个标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或将施用的剂量。
包括一种或多种抑制性核酸的药物组合物包含任何药物上可接受的盐、酯或此类酯的盐。药物组合物的非限制性示例包括抑制性核酸的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
本文还提供了前药，其可包括在抑制性核酸一端或两端的额外核苷，其在身体内被内源性核酸酶切割以形成活性抑制性核酸。
脂质部分可用于形成抑制性核酸。在某些方法中，抑制性核酸被引入由阳离子脂质和中性脂质混合物制成的预成型脂质体或脂质体复合物中。在某些方法中，形成具有单阳离子或多阳离子脂质的抑制性核酸复合物，而不存在中性脂质。在某些实施方式中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物中特定细胞或组织的分布。在一些实例中，选择脂质部分来增加抑制性核酸在哺乳动物脂肪组织中的分布。在某些实施方式中，选择脂质部分以增加抑制性核酸在肌肉组织的分布。
在某些实施方式中，本文提供的药物组合物包含一种或多种抑制性核酸和一种或多种赋形剂。在某些这样的实施方式中，赋形剂选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括脂质体和乳剂。脂质体和乳剂可用于制备疏水性化合物。在一些实例中，使用某些有机溶剂，如二甲基亚砜。
在一些实例中，本文提供的药物组合物包括一种或多种组织特异性递送分子，其设计用于将一种或多种抑制性核酸递送至哺乳动物中的特定组织或细胞类型。例如，药物组合物可以包括附有组织特异性抗体的脂质体。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物可以包括共溶剂体系。此类共溶剂体系的示例包括苯甲醇、非极性表面活性剂、水溶性有机聚合物和水相。这种共溶剂体系的非限制性示例是VPD共溶剂体系，其是包含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的无水乙醇溶液。可以理解，可以使用其它表面活性剂代替聚山梨酯80TM；聚乙二醇的粒径可以改变；其它生物相容性聚合物、例如聚乙烯吡咯烷酮可以替代聚乙二醇；其它糖或多糖可以替代葡萄糖。
在一些实例中，可将药物组合物配制成经口施用。在一些实例中，药物组合物配制用于颊施用。
在一些实例中，药物组合物配制成通过注射(例如静脉注射、皮下注射、肌肉注射等)施用。在这些实施方式的一些中，药物组合物包括载体，并且在水溶液(诸如水或生理相容的缓冲剂，诸如汉克斯溶液、林格溶液或生理盐水缓冲剂)中配制。在一些实例中，还包括其它成分(例如有助于溶解或用作防腐剂的成分)。在一些实例中，使用适当的液体载体、悬浮剂等来制备可注射悬浮液。一些注射用药物组合物以单位剂量形式(例如在安瓿或多剂量容器中)来配制。一些用于注射的药物组合物是在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可能含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等配方剂。适用于注射用药物组合物的溶剂包括但不限于亲脂溶剂和脂肪油，例如芝麻油、合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，以及脂质体。
在某些实施方式中，可向有需要的受试者(例如人类受试者)施用治疗有效量的靶向整联蛋白的抑制性核酸。
在某些实施方式中，抑制性核酸的长度是10个至40个(例如，10个至30个、10个至25个、10个至20个、10个至15个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个或40个)核苷酸。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
抗体
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc、VHH结构域、VNAR结构域、(scFv)2、微型抗体、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig，和双亲和性重新靶向抗体(DART)、三功能抗体、具有共同LC的kih IgG、crossmab、ortho-Fab IgG、2-in-1-IgG、IgG-ScFv、scFv2-Fc、双纳米抗体、串联抗体、DART-Fc、scFv-HAS-scFv、DNL-Fab3、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体、纳米抗体-HSA、双抗体、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HAS、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
本文所述的任何抗体或其抗原结合片段可以与本文所述的任何整联蛋白或本文所述的任何整联蛋白配体结合。
在一些实施方式中，抗体是pan-β1抗体(例如，OS2966(Carbonell等人,CancerRes.73(10):3145-3154,2013))。在一些实施方式中，整联蛋白抗体是单克隆抗体(例如，17E6(Castel等人,Eur.J.Cell.Biol.79(7):502-512,2000)；Mitjans等人,Int.J.Cancer 87(5):716-723,2000)。在一些实施方式中，单克隆抗体是维多珠单抗(vedolizumab)(例如
Figure BDA0002449116230003581
)或其变体(Feagan等人,N.Engl.J.Med369:699-710,2013；Sandborn等人,N.Engl.J.Med.369:711-721,2013；Sands等人,Gastroenterology147:618-627,2014；和Milch等人,Neuroimmunol.264:123-126,2013；Wyant等人,J.CrohnsColitis 10(12):1437-1444,2016；和Feagan等人,Gastroenterology 142(5):S160-S161,2012)。
在一些实施方式中，抗体可以是单克隆嵌合小鼠-人抗体(例如，阿昔单抗(ReoPro，c7E3)，Kononczuk等人,Curr.Drug Targets 16(13):1429-1437,2015；Jiang等人,Appl.Microbiol.Biotechnol.98(1):105-114,2014)或其变体的Fab片段。在一些实施方式中，整联蛋白抗体是人源化单克隆抗体。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是那他珠单抗
Figure BDA0002449116230003582
(Targan等人,Gastroenterology132(5):1672-1683,2007；Sandborn等人,N.Engl.J.Med.353(18):1912-1925,2005；Nakamura等人,Intern.Med.56(2):211-214,2017；和Singh等人,J.Pediatr.Gastroenterol.Nutr.62(6):863-866,2016)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是vitaxin(MEDI-523)或其变体(Huveneers等人,Int,J.Radiat.Biol.81(11-12):743-751,2007；Coleman等人,Circ.Res.84(11):1268-1276,1999)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是伊瑞西珠单抗(
Figure BDA0002449116230003583
MEDI-522，LM609)或其变体(Hersey等人,Cancer 116(6):1526-1534,2010；Delbaldo等人,InvestNew Drugs 26(1):35-43,2008)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是CNTO95
Figure BDA0002449116230003584
或其变体(Jia等人,Anticancer Drugs 24(3):237-250,2013；Heidenreich等人,Ann.Oncol.24(2):329-336,2013；Wu等人,J.Neurooncol.110(1):27-36,2012)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是依法利珠单抗
Figure BDA0002449116230003585
或其变体(Krueger等人,J.Invest.Dermatol.128(11):2615-2624,2008；Li等人,PNAS 106(11):4349-4354,2009；Woolacott等人,Health Technol.Assess 10:1-233,2006)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是STX-100
Figure BDA0002449116230003586
或其变体(van Aarsen等人,CancerRes.68:561-570,2008；Lo等人,Am.J.Transplant.13(12):3085-3093,2013)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是264RAD或其变体(Eberlein等人,Oncogene 32(37):4406-4417,2013)。
在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是罗维珠单抗或其变体(Goodman等人,Trends Pharmacol.Sci 33:405-412,2012)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是
Figure BDA0002449116230003587
或其变体(Rychert等人,Virology J.10:120,2013)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是依托珠单抗或其变体(Vermeire等人,Lancet384:309-318,2014；Rutgeerts等人,Gut 62:1122-1130,2013；Lin等人,Gastroenterology 146:307-309,2014；Ludviksson等人,J.Immunol.162(8):4975-4982,1999；Stefanich等人,Br.J.Pharmacol.162(8):1855-1870,2011)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是阿布利鲁单抗(abrilumab)(AMG181；MEDI-7183)或其变体(Pan等人,Br.J.Pharmacol.169(1):51-68,2013；Pan等人,Br.J.Clin.Pharmacol.78(6):1315-1333,2014)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是PF-00547659(SHP647)或其变体(Vermeire等人,Gut60(8):1068-1075,2011；Sandborn等人,Gastroenterology 1448(4):S-162,2015)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是SAN-300(hAQC2)或其变体(Karpusas等人,J.Mol.Biol.327:1031-1041,2003)。在一些实施方式中，人源化单克隆抗体是DI176E6(EMD 5257)或其变体(Goodman等人,Trends Pharmacol.Sci33:405-412,2012；和Sheridan等人,Nat.Biotech.32:205-207,2014)。
在一些实施方式中，整联蛋白抗体是嵌合单克隆抗体。在一些实施方式中，嵌合单克隆抗体是沃洛昔单抗(volociximab)或其变体(Kuwada等人,Curr.Opin.Mol.Ther.9(1):92-98,2007；Ricart等人,Clin.CancerRes.14(23):7924-7929,2008；Ramakrishnan等人,J.Exp.Ther.Oncol.5(4):273-86,2006；Bell-McGuinn等人,Gynecol.Oncol.121:273-279,2011；Almokadem等人,Exp.Opin.Biol.Ther.12:251-7,2012)。
在一些实施方式中，抗体特异性结合一种或多种(例如1、2、3、4或5种)整联蛋白。在一些实施方式中，抗体特异性结合整联蛋白二聚体(例如，MLN-00002，MLN02(Feagan等人,Clin.Gastroenterol.Hepatol.6(12):1370-1377,2008；Feagan等人,N.Engl.J.Med.352(24):2499-2507,2005)。在某些实施方式中，抗体包含阿昔单抗(ReoproTM)(Straub等人,Eur.J.Cardiothorac Surg.27(4):617-621,2005；Kim等人,Korean J.Intern.Med.19(4):220-229,2004)或由其组成。在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是抗体-药物缀合物(例如IMGN388(Bendell等人,EJCSuppl 8(7):152,2010))。
抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号5,919,792；6,214,834；7,074,408；6,833,373；7,655,624；7,465,449；9,558,899；7,659,374；8,562,986；8,398,975；和8,853,149；US 2007/0117849；US 2009/0180951；US 2014/0349944；US 2004/0018192；WO 11/137418；和WO 01/068586中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
融合蛋白
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是融合蛋白(例如，整联蛋白或整联蛋白受体的胞外结构域的Fc融合蛋白)、可溶性受体(例如，整联蛋白或整联蛋白受体的胞外结构域)、或重组整联蛋白结合蛋白(例如整联蛋白配体)。参见例如Lode等人,PNAS 96(4):1591-1596,1999；Stephens等人,Cell Adhesion Comm.7:377-390,2000；和US 2008/0739003；通过引用并入本文中。作为整联蛋白抑制剂的融合蛋白的非限制性实例包括Ag25426(Proteintech)。
小分子拮抗剂
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是小分子。在一些实施方式中，小分子是非肽小分子。在一些实施方式中，非肽小分子是RGD(ArgGlyAsp)模拟拮抗剂(例如，替罗非班
Figure BDA0002449116230003611
Pierro等人,Eur.J.Ophthalmol.26(4):e74-76,2016；Guan等人,Eur.J.Pharmacol 761:144-152,2015)。在一些实施方式中，小分子是α4拮抗剂(例如，非拉司特(Miller等人,Lancet Neurol.11(2):131-139,2012)、AJM300(Yoshimura等人,Gastroenterology149(7):1775-1783,2015；Takazoe等人,Gastroenterology 136(5):A-181,2009；Sugiura等人,J.Crohns Colitis 7(11):e533-542,2013))。在一些实施方式中，小分子是α4β1拮抗剂(例如，IVL745(Norris等人,J.Allergy Clin.Immunol.116(4):761-767,2005；Cox等人,Nat.Rev.Drug Discov.9(10):804-820,2010))、BIO-1211(Abraham等人,Am.J.Respir.Crit.Care Med.162:603-611,2000；Ramroodi等人,Immunol.Invest.44(7):694-712,2015；Lin等人,J.Med.Chem.42(5):920-934,1999)、HMR 1031(Diamant等人,Clin.Exp.Allergy35(8):1080-1087,2005)；伐拉司特(R411)(Cox等人,Nat.Rev.DrugDiscov.9(10):804-820,2010)、GW559090X(Ravensberg等人,Allergy 61(9):1097-1103,2006)、TR14035(Sircar等人,Bioorg.Med.Chem.10(6):2051-2066,2002；Cortijo等人,Br.J.Pharmacol.147(6):661-670,2006))。在一些实施方式中，小分子是αvβ3拮抗剂(例如L0000845704、SB273005)。在一些实施方式中，小分子是α5β1拮抗剂(例如JSM6427)。在一些实施方式中，小分子是GLPG0974(Vermeire等人,J.Crohns Colitis Suppl.1:S39,2015)。在一些实施方式中，小分子是MK-0429(Pickarksi等人,Oncol.Rep.33(6):2737-45,2015；Rosenthal等人,Asia Pac J.Clin.Oncol.6:42-8,2010)。在一些实施方式中，小分子是JSM-6427或其变体(Zahn等人,Arch.Ophthalmol.127(10):1329-1335,2009；Stragies等人,J.Med.Chem.50:3786-94,2007)。
在一些实施方式中，小分子整联蛋白抑制剂可以是PTG-100，其描述于例如Shames等人,“Pharmakokinetics and Pharmacodynamics of the Novel OralPeptideTherapeutic PTG-100(α4β7Integrin Antagonist)in Normal Healthy Volunteers,”24thUnitedEuropean Gastroentrology Week,10月15-19日,奥地利维也纳,2016中。
在一些实施方式中，小分子靶向β2整联蛋白。在一些实施方式中，小分子是SAR-118(SAR1118)或其变体(Zhong等人,ACSMed.Chem.Lett.3(3):203-206,2012；Suchard等人,J.Immunol.184:3917-3926,2010；Yandrapu等人,J.Ocul.Pharmacol.Ther.29(2):236-248,2013；Semba等人,Am.J.Ophthalmol.153:1050-60,2012)。在一些实施方式中，小分子是BMS-587101或其变体(Suchard等人,J.Immunol.184(7):3917-3926,2010；Potin等人,J.Med.Chem.49:6946-6949,2006)。参见例如Shimaoka等人,Immunity 19(3):391-402,2003；美国专利号7,138,417；7,928,113；7,943,660；和9,216,174；US 2008/0242710；和US2008/0300237。
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是如下表中示出的抑制剂：
Figure BDA0002449116230003621
ALPHA-4抑制剂
Figure BDA0002449116230003622
Figure BDA0002449116230003631
Figure BDA0002449116230003641
Figure BDA0002449116230003651
Figure BDA0002449116230003661
Figure BDA0002449116230003671
Figure BDA0002449116230003681
BETA-7
抑制剂
Figure BDA0002449116230003682
Figure BDA0002449116230003691
ITGAL-整
联蛋白
α-L
Figure BDA0002449116230003692
Figure BDA0002449116230003701
其它示例性整联蛋白抑制剂包括以下：
来自PDL BioPharma公司的SMART抗L-选择素Mab，它是L-选择素拮抗剂，并且描述于WO-09706822和Co MS等人“Properties and pharmacokinetics of two humanizedantibodies specific for L-selectin”；Immunotechnology；1999 4 253–266中；两者在此都通过引用并入来自Tetherex Pharmaceuticals公司的SEL-K2，一种抗PSGL-1抗体，其描述于Barbara Muz等人“Inhibition of P-Selectin and PSGL-1Using HumanizedMonoclonal Antibodies Increases the Sensitivity of Multiple Myeloma Cells toProteasome Inhibitors”American Society of Hematology Annual Meeting andExposition；2014年第56期(12月08日)Abs 4758中，其在此通过引用并入
伐特利珠单抗(vatelizumab)，其描述于I.A.Antonijevic等人“Safety,tolerability and pharmacodynamic characterization of vatelizumab,a monoclonalantibody targeting very-late-antigen(VLA)-2:a randomized,double-blind,placebo-controlled phase 1study”摘要发布日期：2015年9月23日,2015)ECTRIMSOnline Library.2015年10月9日；和WO-2010095031；WO-2011104604；WO-2010052556中，其在此全部都通过引用并入本文
抗VCAM mAb，其描述于Soriano,Antonio等人“VCAM-1,but not ICAM-1orMAdCAM-1,immunoblockade ameliorates DSS-induced colitis in mice.”Laboratoryinvestigation 80.10(2000):1541；和Gerritsen ME等人(1995).Activation-dependentisolation and culture of murine pulmonary microvascularendothelium.Microcirculation 2:151–163中。
环肽
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是环肽。在一些实施方式中，环肽包含如内源性整联蛋白配体的配体识别序列的氨基酸序列中列出的氨基酸序列或由其组成。在一些实施方式中，环肽与内源性整联蛋白配体竞争靶标整联蛋白配体结合位点。在一些实施方式中，环肽包括一个或多个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个)D-氨基酸。在一些实施方式中，环肽是合成环肽。在一些实施方式中，合成环肽是七肽。在一些实施方式中，合成环肽是依替巴肽(eptifabitide)(IntegrilinTM)或其变体。在一些实施方式中，环肽包含杂环核(例如，苯并二氮杂
Figure BDA0002449116230003712
酮、哌嗪、苯并氮杂
Figure BDA0002449116230003711
酮、硝基芳基、异噁唑啉、吲唑或苯酚；Spalluto等人,Curr.Med.Chem.12:51-70,2005)。在一些实施方式中，环肽是大环(参见例如Halland等人,ACS Med.Chem.Lett.5(2):193-198,2014)。在一些实施方案中，该肽是ALG-1001或其变体(Mathis等人,Retin.Phys.9:70,2012)。在一些实施方式中，环肽是咪唑啉酮-苯基丙氨酸衍生物、杂芳基、杂环和芳基衍生物、双环-芳族氨基酸衍生物、环己烷-羧酸衍生物、二芳基取代的脲衍生物、多聚L-丙氨酸衍生物、L-丙氨酸衍生物、或嘧啶基-磺酰胺衍生物(参见例如，美国专利号6,630,492；6,794,506；7,049,306；7,371,854；7,759,387；8,030,328；8,129,366；7,820,687；8,350,010；和9,345,793)。
拟肽
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂是拟肽。在一些实施方式中，拟肽具有整联蛋白-配体识别基序(例如RGD、KTS或MLD)。参见例如Carron等人,Cancer Research 58:1930-1935,1998；Fanelli等人,Vascular Cell 6:11,2014；和De Marco等人,Curr.Top.Med.Chem.16(3):343-359,2016。
在一些实施方式中，拟肽是基于RGD(ArgGlyAsp)的肽(美国专利号8,809,338，通过引用全文并入本文)。在一些实施方式中，基于RGD的肽可以是西仑吉肽或其变体(EMD12974)(Mas-Moruno等人,Anticancer Agents Med.Chem.10:753-768,2010；Reardon等人,Future Oncol.7(3):339-354,2011；Beekman等人,Clin.Genitourin Cancer 4(4):299-302,2006)；SC56631(例如Engleman等人,Am Soc.Clin.Invest.99(9):2284-2292,1997；Peng等人,Nature Chem Biol.2:381-389,2006)。在一些实施方式中，拟肽可以是基于Lys-Gly-Asp(KGD)的肽。在一些实施方式中，拟肽可以是vipegitide或其变体(Momic等人,DrugDesign Devel.Therapy 9:291-304,2015)。在一些实施方式中，拟肽可以是与抗微生物合成肽缀合的肽。(例如与(KLAKLAK)2缀合的ACDCRGDCFC)(Ellerby等人,Nat.Med.5(9):1032-1038,1999)。参见例如，美国专利号8,636,977。
解整联蛋白
在一些实施方式中，整联蛋白抑制剂可以是解整联蛋白。如本文所用，术语“解整联蛋白”是指源自蛇毒(例如，蝮蛇毒液)的低分子量肽整联蛋白抑制剂。在一些实施方式中，解整联蛋白是基于RGD(ArgGlyAsp)、KTS或MLD的解整联蛋白。
解整联蛋白的非限制性实例包括accutin、accurhagin-C、白唇竹叶青素(albolabrin)、alternagin-c、barbourin、basilicin、bitisgabonin-1、bitisgabonin-2、bitistatin、cerastin、cereberin、cumanastatin 1、contortrostatin、cotiarin、crotatroxin、dendroaspin、disba-01、durissin、echistatin、EC3、elegantin、eristicophin、eristostatin、EMS11、EO4、EO5、flavoridin、flavostatin、insularin、jarastatin、jerdonin、jerdostatin、lachesin、lebein(例如，lebein-1、lebein-2)、leberagin-C、lebestatin、lutosin、molossin、obtustatin、ocellatusin、rhodocetin、rhodostomin、R-mojastin 1、salmosin、saxatilin、schistatin、tablysin-15、tergeminin、triflavin、trigramin、trimestatin、VA6、vicrostatin、viridin、viperstatin、VB7、VLO4、和VLO5、或其变体。参见例如Arruda Macedo等人,Curr.Protein.Pept.Sci.16(6):532-548,2015；Hsu等人,Sci.Rep.6:23387,2016；Kele等人Curr.Protein Pept.Sci.6:532-548,2015；Koh等人,Toxicon 59(4):497-506,2012；Scarborough等人,J.Biol.Chem.268:1058-1065,1993；Kisiel等人,FEBSLett.577:478-482,2004；Souza等人,Arch.Biochem.Biophys.384:341-350,2000；Eble等人,J.Biol.Chem.278:26488-26496,2003；Marcinkiewicz等人,J.Biol.Chem.274:12468-12473,1999；Calvete等人,J.Proteome Res.6:326-336,2007；Scibelli等人,FEMSMicrobiol.Lett.247:51-57,2005；Oliva等人,Toxicon 50:1053-1063,2007；Minea等人,Toxicon 59:472-486,2012；Smith等人,FEBS Lett.512:111-115,2002；Tselepis等人,J.Biol.Chem.272:21341-21348,1997；Da Silva等人,Tromb.Res.123:731-739,2009；Thibault等人,Mol.Pharmacol.58:1137-1145,2000；Lu等人,Biochem.J.304:818-825,1994；Yeh等人,Biochim.Biophys.Acta.1425:493-504,1998；Huang等人,Exp.Hematol.36:1704-1713,2008；Shih等人,MatrixBiol.32:152-159,2013；Wang等人,Br.J.Pharmacol.160:1338-1351,2010；Della-Casa等人,Toxicon 57:125-133,2011；Sheu等人,Biochim.Biophys.Acta.1336:445-454,1997；Fujii等人,J.Mol.Biol.332:115-122,2003；Bilgrami等人,J.Mol.Biol.341:829-837,2004；Zhou等人,Toxicon 43:69-75,2004；Scarborough等人,J.Biol.Chem.268:1066-1073,1993；Shebuski等人,J.Biol.Chem.264:21550-21556,1989；Lu等人,Biochem.J.304:929-936,1994；McLane等人,Biochem.J.301:429-436,1994；Juarez等人,Toxicon 56:1052-1058,2010；Olfa等人,Lab.Invest.85:1507-1516,2005；Elbe等人,Matrix Biol.21:547-558,2002；Bazan-Socha等人,Biochemistry 43:1639-1647,2004；Danen等人,Exp.Cell.Res.238:188-196,1998；Marcinkiewicz等人,Biochemistry 38(40):13302-13309,1999；Calvete等人,Biochem.J.372:725-734,2003；Swenson等人,Pathophysiol.Haemost.Thromb.34:169-176,2005；Kwon等人,PLoS One 8；e81165,2013；Yang等人,Toxicon 45:661-669,2005；Limam等人,Matrix Biol.29:117-126,2010；Gan等人,J.Biol.Chem.263:19827-19832,1988；Ma等人,Thromb.Haemost.105(6):1032-1045,2011；和美国专利号7,074,408，以其全文并入本文。
趋化因子/趋化因子受体抑制剂
术语“趋化因子/趋化因子受体抑制剂”是指降低趋化因子与其受体结合的能力的试剂，其中趋化因子是CXCL10(IL-10)、CCL11或ELR趋化因子之一，或趋化因子受体是CCR2或CCR9。
CXCL10(IP-10)抑制剂
如本文所用，“CXCL10”、“干扰素γ诱导的蛋白质10”和“IP-10”可以互换使用。CXCL10与CXCR3受体(例如CXCR3-A或CXCR3-B)结合。
术语“CXCL10抑制剂”是指降低CXCL10与CXCR3受体(例如，CXCR3-A和/或CXCR3-B)结合的能力的试剂。
在一些实施方式中，CXCL10抑制剂可通过阻断CXCL10与CXCR3-A相互作用的能力来降低CXCL10与CXCR3-A之间的结合。在一些实施方式中，CXCL10抑制剂可通过阻断CXCL10与CXCR3-B相互作用的能力来降低CXCL10与CXCR3-B之间的结合。
在一些情况下，降低CXCL10和CXCR3(例如，CXCR3-A和/或CXCR3-B)之间的结合的CXCL10抑制剂是小分子。在一些情况下，降低CXCL10和CXCR3(例如，CXCR3-A和/或CXCR3-B)之间的结合的CXCL10抑制剂是抗体或抗原结合抗体片段。在一些情况下，降低CXCL10和CXCR3(例如，CXCR3-A和/或CXCR3-B)之间的结合的CXCL10抑制剂是肽(例如，CXCR3受体的肽拮抗剂，例如，CXCR-A和/或CXCR-B中的一者或两者)。
人CXCL10和人CXCR3的示例性序列在下文示出。
人CXCL10(SEQ ID NO:182)
vplsrtvrc tcisisnqpv nprsleklei ipasqfcprv eiiatmkkkg ekrclnpeskaiknllkavs kerskrsp人CXCR3同种型1(SEQ ID NO:183)
mvlevsdhqv lndaevaall enfsssydyg enesdsccts ppcpqdfsln fdraflpaly
sllfllgllg ngavaavlls rrtalsstdt fllhlavadt llvltlplwa vdaavqwvfg
sglckvagal fninfyagal llacisfdry lnivhatqly rrgpparvtl tclavwglcl
lfalpdfifl sahhderlna thcqynfpqv grtalrvlql vagfllpllv maycyahila
vllvsrgqrr lramrlvvvv vvafalcwtp yhlvvlvdil mdlgalarnc gresrvdvak
svtsglgymh cclnpllyaf vgvkfrermw mlllrlgcpn qrglqrqpss srrdsswsetseasysgl
人CXCR3同种型2(SEQ ID NO:184)
melrkygpgr lagtviggaa qsksqtksds itkeflpgly tapsspfpps qvsdhqvlnd
aevaallenf sssydygene sdscctsppc pqdfslnfdr aflpalysll fllgllgnga
vaavllsrrt alsstdtfll hlavadtllv ltlplwavda avqwvfgsgl ckvagalfni
nfyagallla cisfdrylni vhatqlyrrg pparvtltcl avwglcllfa lpdfiflsah
hderlnathc qynfpqvgrt alrvlqlvag fllpllvmay cyahilavll vsrgqrrlra
mrlvvvvvva falcwtpyhl vvlvdilmdl galarncgre srvdvaksvt sglgymhccl
npllyafvgv kfrermwmll lrlgcpnqrg lqrqpsssrr dsswsetsea sysgl
CXCL10抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CXCL10抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CXCL10或CXCR3受体(例如，CXCR3-A和/或CXCR3-B)、或CXCL10和CXCR3受体(例如，CXCR3-A和/或CXCR3-B)两者。在一些实施方式中，CXCL10抑制剂可以结合CXCR3-A和CXCR3-B两者。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；和Stocks,DrugDiscov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；和Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMCBiotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；和Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者(例如，描述CXCL10抑制剂的部分)通过引用全文并入。
在其它情况下，CXCL10抑制剂是单克隆抗体(mAb)(参见例如，WO05/58815)。例如，CXCL10抑制剂可以是
Figure BDA0002449116230003761
(MDX-1100或BMS-936557)、BMS-986184(Bristol-Meyers Squibb)或NI-0801(NovImmune)。参见例如，Kuhne等人,J.Immunol.178(1):S241,2007；Sandborn等人,J.Crohns Colitis 11(7):811-819,2017；和Danese等人,Gastroenterology 147(5):981-989,2014。作为抗体的CXCL10抑制剂的额外实例描述于美国专利申请公开号2017/0158757、2017/0081413、2016/0009808、2015/0266951、2015/0104866、2014/0127229、2014/0065164、2013/0216549、2010/0330094、2010/0322941、2010/0077497、2010/0021463、2009/0285835、2009/0169561、2008/0063646、2005/0191293、2005/0112119、2003/0158392、2003/0031645、和2002/0018776；以及WO 98/11218中，所述专利的每一者(例如，CXCL10抑制剂的描述)通过引用全文并入本文。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合抗体片段的CXCL10抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CCL11抑制剂
术语“CCL11抑制剂”是指降低CCL11与CCR2、CCR3、和CCR5中的一种或更多种结合的能力的试剂。
在一些实施方式中，CCL11抑制剂可通过阻断CCL11与CCR2相互作用的能力来降低CCL11与CCR2之间的结合。在一些实施方式中，CCL11抑制剂可通过阻断CCL11与CCR3相互作用的能力来降低CCL11与CCR3之间的结合。在一些实施方式中，CCL11抑制剂可通过阻断CCL11与CCR5相互作用的能力来降低CCL11与CCR5之间的结合。
在一些实施方式中，CCL11抑制剂是抗体或其抗原结合片段。
人CCL11、人CCR2、人CCR3和人CCR5的示例性序列在下文示出。
人CCL11(SEQ ID NO:185)
mkvsaallwl lliaaafspq glagpasvpt tccfnlanrk iplqrlesyr ritsgkcpqk
avifktklak dicadpkkkw vqdsmkyldq ksptpkp
人CCR2同种型A(SEQ ID NO:186)
mlstsrsrfi rntnesgeev ttffdydyga pchkfdvkqi gaqllpplys lvfifgfvgnmlvvlilinc kklkcltdiy llnlaisdll flitlplwah saanewvfgn amcklftgly higyfggiffiilltidryl aivhavfalk artvtfgvvt svitwlvavf asvpgiiftk cqkedsvyvc gpyfprgwnnfhtimrnilg lvlpllimvi cysgilktll rcrnekkrhr avrviftimi vyflfwtpyn ivillntfqeffglsncest sqldqatqvt etlgmthcci npiiyafvge kfrslfhial gcriaplqkp vcggpgvrpgknvkvttqgl ldgrgkgksi grapeaslqd kega
人CCR2同种型B(SEQ ID NO:187)
mlstsrsrfi rntnesgeev ttffdydyga pchkfdvkqi gaqllpplys lvfifgfvgn
mlvvlilinc kklkcltdiy llnlaisdll flitlplwah saanewvfgn amcklftgly
higyfggiff iilltidryl aivhavfalk artvtfgvvt svitwlvavf asvpgiiftk
cqkedsvyvc gpyfprgwnn fhtimrnilg lvlpllimvi cysgilktll rcrnekkrhr
avrviftimi vyflfwtpyn ivillntfqe ffglsncest sqldqatqvt etlgmthcci
npiiyafvge kfrrylsvff rkhitkrfck qcpvfyretv dgvtstntps tgeqevsagl
人CCR3同种型1(SEQ ID NO:188)
mttsldtvet fgttsyyddv gllcekadtr almaqfvppl yslvftvgll gnvvvvmili
kyrrlrimtn iyllnlaisd llflvtlpfw ihyvrghnwv fghgmcklls gfyhtglyse
iffiilltid rylaivhavf alrartvtfg vitsivtwgl avlaalpefi fyeteelfee
tlcsalyped tvyswrhfht lrmtifclvl pllvmaicyt giiktllrcp skkkykairl
ifvimavffi fwtpynvail lssyqsilfg ndcerskhld lvmlvtevia yshccmnpvi
yafvgerfrk ylrhffhrhl lmhlgryipf lpseklerts svspstaepe lsivf
人CCR3同种型2(SEQ ID NO:189)
mpfgirmllr ahkpgssrrs emttsldtve tfgttsyydd vgllcekadt ralmaqfvpp
lyslvftvgl lgnvvvvmil ikyrrlrimt niyllnlais dllflvtlpf wihyvrghnw
vfghgmckll sgfyhtglys eiffiillti drylaivhav falrartvtf gvitsivtwg
lavlaalpef ifyeteelfe etlcsalype dtvyswrhfh tlrmtifclv lpllvmaicy
tgiiktllrc pskkkykair lifvimavff ifwtpynvai llssyqsilf gndcerskhl
dlvmlvtevi ayshccmnpv iyafvgerfr kylrhffhrh llmhlgryip flpseklert
ssvspstaep elsivf
人CCR3同种型3(SEQ ID NO:190)
mpfgirmllr ahkpgrsemt tsldtvetfg ttsyyddvgl lcekadtral maqfvpplys
lvftvgllgn vvvvmiliky rrlrimtniy llnlaisdll flvtlpfwih yvrghnwvfg
hgmckllsgf yhtglyseif fiilltidry laivhavfal rartvtfgvi tsivtwglav
laalpefify eteelfeetl csalypedtv yswrhfhtlr mtifclvlpl lvmaicytgi
iktllrcpsk kkykairlif vimavffifw tpynvaills syqsilfgnd cerskhldlv
mlvteviays hccmnpviya fvgerfrkyl rhffhrhllm hlgryipflp seklertssv
spstaepels ivf
人CCR5(SEQ ID NO:191)
mdyqvsspiy dinyytsepc qkinvkqiaa rllpplyslv fifgfvgnml vililinckrlksmtdiyll nlaisdlffl ltvpfwahya aaqwdfgntm cqlltglyfi gffsgiffii lltidrylavvhavfalkar tvtfgvvtsv itwvvavfas lpgiiftrsq keglhytcss hfpysqyqfw knfqtlkivilglvlpllvm vicysgilkt llrcrnekkr hravrlifti mivyflfwap ynivlllntf qeffglnncsssnrldqamq vtetlgmthc cinpiiyafv
gekfrnyllv ffqkhiakrf ckccsifqqe aperassvyt rstgeqeisv glCCL11抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CCL11抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCL11、CCR2、CCR3或CCR5，或可以特异性结合CCL11、CCR2、CCR3和CCR5中的两种或更多种。在一些实施方式中，CCL11抑制剂可以与CCR2、CCR3和CCR5中的两种或更多种结合。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscoveryToday 20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；和Stocks,DrugDiscov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；和Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMCBiotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是人源化单克隆抗体。参见例如，Hunter&Jones,Nat.Immunol.16:448-457,2015；和Heo等人,Oncotarget 7(13):15460-15473,2016。抗体和其抗原结合片段的额外实例描述于美国专利号8,440,196；7,842,144；8,034,344；和8,529,895；US 2013/0317203；US 2014/0322239；US 2015/0166666；US2016/0152714；和US 2017/0002082中，所述专利的每一者通过引用全文并入。
在一些实例中，趋化因子/趋化因子受体抑制剂是柏替莫单抗(ImmunePharmaceuticals)，其是靶向CCL11的抗嗜酸性粒细胞趋化因子-1单克隆抗体，并且目前处于溃疡性结肠炎的II期临床研究中。CCL11抑制剂的额外实例描述于美国专利申请公开号2016/0289329、2015/0086546、2014/0342450、2014/0178367、2013/0344070、2013/0071381、2011/0274696、2011/0038871、2010/0074886、2009/0297502、2009/0191192、2009/0169541、2009/0142339、2008/0268536、2008/0241923、2008/0241136、2005/0260139、2005/0048052、2004/0265303、2004/0132980、2004/0126851、2003/0165494、2002/0150576、2002/0150570、2002/0051782、2002/0051781、2002/0037285、2002/0028436、2002/0015700、2002/0012664、2017/0131282、2016/0368979、2016/0208011、2011/0268723、2009/0123375、2007/0190055、2017/0049884、2011/0165182、2009/0226434、2009/0110686、2009/0047735、2009/0028881、2008/0107647、2008/0107595、2008/0015348、2007/0274986、2007/0231327、2007/0036796、2007/0031408、2006/0229336、2003/0228306、2003/0166870、2003/0003440、2002/0019345、和2001/0000241中，所述专利的每一者(例如，CCL11抑制剂的描述)通过引用全文并入本文。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合抗体片段的CCL11抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CXCL10抑制剂-小分子和肽
在一些情况下，CXCL10抑制剂是小分子。例如，CXCL10抑制剂可以是灵芝霉素(ganodermycin)(参见例如Jung等人,J.Antiobiotics 64:683-686,2011)。额外的示例性小分子CXCL10抑制剂描述于：美国专利申请公开号2005/0075333；美国专利申请公开号2004/0242498；美国专利申请公开号2003/0069234；美国专利申请公开号2003/0055054；美国专利申请公开号2002/0169159；WO 97/24325；WO 98/38167；WO 97/44329；WO 98/04554；WO 98/27815；WO 98/25604；WO 98/25605；WO 98/25617；WO 98/31364；Hesselgesser等人,J.Biol.Chem.273(25):15687-15692(1998)；和Howard等人,J.Med.Chem.41(13):2184-2193(1998)。
在一些实例中，CXCL10抑制剂是CXCR3受体的肽拮抗剂(例如，如美国专利申请公开号2007/0116669、2006/0204498和WO 98/09642中所述)。在一些实例中，CXCL10抑制剂是趋化因子突变体或类似物，例如在美国专利号5,739,103、WO 96/38559和WO 98/06751中所述的那些。作为小分子或肽的CXCL10抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CCR2抑制剂
如本文所用，“CCR2”、“CC趋化因子受体2”或“MCP-1”可以互换使用。CCL2、CCL8和CCL16各自独立地与CCR2结合。
术语“CCR2抑制剂”是指降低CCR2与CCL2、CCL8、和CCL16中的一种或更多种(例如两种或三种)结合的能力的试剂。
在一些实施方式中，CCR2抑制剂可通过阻断CCL2与CCR2相互作用的能力来降低CCL2与CCR2之间的结合。在一些实施方式中，CCR2抑制剂可通过阻断CCL8与CCR2相互作用的能力来降低CCL8与CCR2之间的结合。在一些实施方式中，CCR2抑制剂可通过阻断CCL16与CCR2相互作用的能力来降低CCL16与CCR2之间的结合。
在一些实施方式中，CCR2抑制剂降低CCR2与CCL2和CCL8中的每一种结合的能力。在一些实施方式中，CCR2抑制剂降低CCR2与CCL2和CCL16中的每一种结合的能力。在一些实施方式中，CCR2抑制剂降低CCR2与CCL8和CCL16中的每一种结合的能力。在一些实施方式中，CCRS抑制剂降低CCR2与CCL2、CCL8和CCL16中的每一种结合的能力。
在一些情况下，CCR2抑制剂是小分子。在一些情况下，CCR2抑制剂是抗体或抗原结合抗体片段。在一些情况下，CCR2抑制剂是肽。
人CCR2、人CCL2、人CCL8和人CCL16的示例性序列在下文示出。
人CCR2同种型A(SEQ ID NO:192)
mlstsrsrfi rntnesgeev ttffdydyga pchkfdvkqi gaqllpplys lvfifgfvgn
mlvvlilinc kklkcltdiy llnlaisdll flitlplwah saanewvfgn amcklftgly
higyfggiff iilltidryl aivhavfalk artvtfgvvt svitwlvavf asvpgiiftk
cqkedsvyvc gpyfprgwnn fhtimrnilg lvlpllimvi cysgilktll rcrnekkrhr
avrviftimi vyflfwtpyn ivillntfqe ffglsncest sqldqatqvt etlgmthcci
npiiyafvge kfrslfhial gcriaplqkp vcggpgvrpg knvkvttqgl ldgrgkgksi
grapeaslqd kega
人CCL2同种型B(SEQ ID NO:193)
mlstsrsrfi rntnesgeev ttffdydyga pchkfdvkqi gaqllpplys lvfifgfvgn
mlvvlilinc kklkcltdiy llnlaisdll flitlplwah saanewvfgn amcklftgly
higyfggiff iilltidryl aivhavfalk artvtfgvvt svitwlvavf asvpgiiftk
cqkedsvyvc gpyfprgwnn fhtimrnilg lvlpllimvi cysgilktll rcrnekkrhr
avrviftimi vyflfwtpyn ivillntfqe ffglsncest sqldqatqvt etlgmthcci
npiiyafvge kfrrylsvff rkhitkrfck qcpvfyretv dgvtstntps tgeqevsagl
人CCL8(SEQ ID NO:194)
qpdsvsi pitccfnvin rkipiqrles ytritniqcp keavifktkr gkevcadpkerwvrdsmkhl dqifqnlkp人CCL16(SEQ ID NO:195)
qpkvpew vntpstcclk yyekvlprrl vvgyrkalnc hlpaiifvtk rnrevctnpnddwvqeyikd pnlpllptrn lstvkiitak ngqpqllnsq
CCR2抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CCR2抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCR2。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCL2。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCL8。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCL16。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCR2，以及CCL2、CCL8、和CCL16中的一种或多种(例如一种、两种或三种)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,DrugDiscovery Today20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；和Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；和Stocks,DrugDiscov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；和Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMCBiotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，CCR2抑制剂是单克隆抗体。例如，CCR2抑制剂可以是MLN1202(Millennium Pharmaceuticals)、C775、STI-B0201、STI-B0211、STI-B0221、STI-B0232、卡鲁单抗(carlumab)(CNTO 888；Centocor公司)或STI-B0234，或其抗原结合片段。还参见例如Vergunst等人,Arthritis Rheum.58(7):1931-1939,2008。作为抗体或抗原结合抗体片段的CCR2抑制剂的额外实例描述于例如美国专利申请公开号2015/0086546、2016/0272702、2016/0289329、2016/0083482、2015/0361167；2014/0342450、2014/0178367、2013/0344070、2013/0071381、2011/0274696、2011/0059107、2011/0038871、2009/0068109、2009/0297502、2009/0142339、2008/0268536、2008/0241923、2008/0241136、2007/0128112、2007/0116708、2007/0111259、2006/0246069、2006/0039913、2005/0232923、2005/0260139、2005/0058639、2004/0265303、2004/0132980、2004/0126851、2004/0219644、2004/0047860、2003/0165494、2003/0211105、2002/0150576、2002/0051782、2002/0042370、和2002/0015700；以及美国专利号6,312,689、6,084,075、6,406,694、6,406,865、6,696,550、6,727,349、7,442,775、7,858,318、5,859,205、5,693,762、和6,075,181中，所述专利的每一者(例如，CCR2抑制剂的描述)通过引用并入本文。CCR2抑制剂的额外实例描述于例如WO 00/05265中。作为抗体或抗原结合抗体片段的CCR2抑制剂的额外实例描述于例如Loberg等人,CancerRes.67(19):9417,2007中。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合抗体片段的CCR2抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CCR2抑制剂-小分子和肽
在一些实例中，CCR2抑制剂是小分子。例如，CCR2抑制剂可以是elubrixin、PF-04634817、BMS-741672或CCX872。参见例如美国专利号9,434,766；美国专利申请公开号20070021466；Deerberg等人,Org.Process Rev.Dev.20(11):1949-1966,2016；和Morganti等人,J.Neurosci.35(2):748-760,2015。
作为小分子的CCR2抑制剂的额外非限制性实例包括例如描述于美国专利申请公开号2009/0112004中的苯氨基取代的季盐化合物；描述于美国专利申请公开号2009/0048238中的联芳基衍生物；描述于美国专利申请公开号2009/0029963中的吡唑衍生物；描述于美国专利申请公开号2009/0023713中的杂环化合物；描述于美国专利申请公开号2009/0012063中的咪唑衍生物；描述于美国专利申请公开号2008/0176883中的氨基吡咯烷；描述于美国专利申请公开号2008/0081803中的杂环环戊基四氢异喹诺酮和四氢吡啶并吡啶；描述于美国专利申请公开号2010/0056509中的杂芳基磺酰胺；描述于美国专利申请公开号2010/0152186中的三唑基吡啶基苯磺酰胺；描述于美国专利申请公开号2006/0074121中的双环和桥接氮杂环；描述于WO 09/009740中的稠合的杂芳基吡啶基和苯基苯磺酰胺；和描述于WO 04/050024中的3-氨基吡咯烷衍生物。
CCR2抑制剂的额外非限制性实例包括：N-((1R,3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7,8-二氢-1,6-萘-啶-6(5H)-基]羰基}环戊基)-N-[(3S,4S)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基]胺；3[(3S,4R)-1-((1R,3S)-3-异丙基-2-氧代-3-{[6-(三氟甲基)-2H-1,3-苯-噁嗪-3(4H)-基]甲基}环戊基)-3-甲基哌啶-4-基]苯甲酸；(3S,48)-N-((1R,3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1B)-基]羰基}环戊基)-3-甲基四氢-2H-吡喃-4-铵；3-[(3S,4R或3R,4S)-1-((1R,3S)-3-异丙基-3-{[6-(三氟甲基)-2H-1,3-苯并噁嗪-3-(4H)-基]羰基}环戊基)-3-甲基哌啶-4-基]苯甲酸；INCB3284；嗜酸性粒细胞趋化因子3；PF-04178903(Pfizer)，和其药学上可接受的盐。
CCR2抑制剂的额外非限制性实例包括：宾达利(2-((1-苄基-1H-吲唑-3-基)甲氧基)-2-甲基丙酸)；AZD2423(AstraZeneca)；描述于美国专利号7,297,696、6,962,926、6,737,435和6,569,888中的吲哚；描述于6,441,004和6,479,527中的双环吡咯衍生物；描述于美国专利申请公开号2005/0054668、2005/0026975、2004/0198719和2004/0047860以及Howard等人,Expert Opin.Ther.Patents11(7):1147-1151(2001)中的CCR2抑制剂。
作为小分子的CCR2抑制剂的额外非限制性实例描述于例如WO 97/24325；WO 98/38167；WO 97/44329；WO 98/04554；WO 98/27815；WO 98/25604；WO98/25605；WO 98/25617；WO 98/31364；Hesselgesser等人,J.Biol.Chem.273(25):15687-15692,1998；和Howard等人,J.Med.Chem.41(13):2184-2193,1998中。
在一些实施方式中，CCR2抑制剂是小核酸，例如NOX-E36(与40-kDa PEG连接的40个核苷酸的L-RNA寡核苷酸；NOXXON Pharma AG)。
在一些实施方式中，CCR2抑制剂是肽，例如描述于例如Kiyota等人,Mol.Ther.17(5):803-809,2009和美国专利申请公开号20070004906中的显性负性肽，或拮抗肽，例如描述于WO 05/037305和Jiang-Hong Gong等人,J.Exp.Med.186:131,1997中的拮抗肽。作为肽的CCR2抑制剂的额外实例描述于例如美国专利号5,739,103；WO 96/38559；WO 98/06751；和WO 98/09642中。在一些实施方式中，CCR2抑制剂是CCR2突变蛋白(例如美国专利申请公开号2004/0185450)。
作为小分子和肽的CCR2抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CCR9抑制剂
如本文所用，“CCR9”、“CC趋化因子受体9”可以互换使用。CCR9特异性结合CCL25。
术语“CCR9抑制剂”是指降低CCR9与CCL25结合的能力的试剂。
在一些实施方式中，CCR9抑制剂可通过阻断CCL25与CCR9相互作用的能力来降低CCL25与CCR9之间的结合。在一些情况下，CCR9抑制剂是小分子。在一些情况下，CCR9抑制剂是抗体或抗原结合抗体片段。
人CCR9和人CCL25的示例性序列在下文示出。
人CCR9同种型A(SEQ ID NO:196)
mtptdftspi pnmaddygse stssmedyvn fnftdfycek nnvrqfashf lpplywlvfi
vgalgnslvi lvywyctrvk tmtdmfllnl aiadllflvt lpfwaiaaad qwkfqtfmck
vvnsmykmnf yscvllimci svdryiaiaq amrahtwrek rllyskmvcf tiwvlaaalc
ipeilysqik eesgiaictm vypsdestkl ksavltlkvi lgfflpfvvm accytiiiht
liqakksskh kalkvtitvl tvfvlsqfpy ncillvqtid ayamfisnca vstnidicfq
vtqtiaffhs clnpvlyvfv gerfrrdlvk tlknlgcisq aqwvsftrre gslklssmll
ettsgalsl
人CCR9同种型B(SEQ ID NO:197)
maddygsest ssmedyvnfn ftdfyceknn vrqfashflp plywlvfivg algnslvilv
ywyctrvktm tdmfllnlai adllflvtlp fwaiaaadqw kfqtfmckvv nsmykmnfys
cvllimcisv dryiaiaqam rahtwrekrl lyskmvcfti wvlaaalcip eilysqikee
sgiaictmvy psdestklks avltlkvilg fflpfvvmac cytiiihtli qakksskhka
lkvtitvltv fvlsqfpync illvqtiday amfisncavs tnidicfqvt qtiaffhscl
npvlyvfvge rfrrdlvktl knlgcisqaq wvsftrregs lklssmllet tsgalsl
人CCL25同种型1(SEQ ID NO:198)
qgvfedc clayhypigw avlrrawtyr iqevsgscnl paaifylpkr hrkvcgnpksrevqramkll
darnkvfakl hhntqtfqag phavkklssg nsklssskfs npissskrnv sllisansgl
人CCL25同种型2(SEQ ID NO:199)
qgvfedc clayhypigw avlrrawtyr iqevsgscnl paaifylpkr hrkvcgnpksrevqramkll
darnkvfakl hhntqtfqgp havkklssgn sklssskfsn pissskrnvs llisansgl
CCR9抑制剂-抗体
在一些实施方式中，CCR9抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCR9。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCL25。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CCR9和CCL25两者。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；和WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs 2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBOMol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature 424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；和Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs 6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；和Stocks,DrugDiscov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；和Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMCBiotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在其它情况下，CCR9抑制剂是单克隆抗体。例如，CCR9抗体可以是91R，参见例如Chamorro等人,MAbs 6(4):1000-1012,2014。CCR9抑制剂的额外的非限制性实例描述于例如美国专利申请公开号2012/0100554、2012/0100154、2011/0123603、2009/0028866、和2005/0181501中。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合抗体片段的CCR9抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
CCR9抑制剂-小分子
在一些情况下，CCR9抑制剂是小分子。例如，CCR9抑制剂可以是
Figure BDA0002449116230003931
(还称为Vercirnon、CCX282、和GSK1605786)或Tu1652CCX507。参见例如Eksteen等人,IDrugs13(7):472-481,2010；和Walters等人,Gastroenterology 144(5):S-815,2013。
作为小分子的CCR9抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
ELR趋化因子抑制剂
ELR趋化因子是具有谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(ELR)基序的CXC趋化因子。参见例如，Strieter等人,J.Biol.Chem.270:27348-27357,1995。
术语“ELR趋化因子抑制剂”是指降低CXCR1和/或CXCR2与CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7和CXCL8中的一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种或八种)结合的能力。
在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR1与CXCL8相互作用的能力来降低CXCR1与CXCL8之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR1与CXCL6相互作用的能力来降低CXCR1与CXCL6之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可降低CXCR1与CXCL8和CXCL6中的每一种的结合。
在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR2与CXCL1相互作用的能力来降低CXCR2与CXCL1之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR2与CXCL2相互作用的能力来降低CXCR2与CXCL2之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR2与CXCL3相互作用的能力来降低CXCR2与CXCL3之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR2与CXCL4相互作用的能力来降低CXCR2与CXCL4之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR2与CXCL5相互作用的能力来降低CXCR2与CXCL5之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR2与CXCL6相互作用的能力来降低CXCR2与CXCL6之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可通过阻断CXCR2与CXCL7相互作用的能力来降低CXCR2与CXCL7之间的结合。在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可降低CXCR2与CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6和CXCL7中的一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种或七种)之间的结合。
在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂可降低CXCR1与CXCL6和CXCL8中的一者或两者的结合，并且可降低CXCR2与CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6和CXCL7中的一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种或七种)之间的结合。
在一些情况下，ELR趋化因子抑制剂是小分子。在一些情况下，ELR趋化因子抑制剂是抗体或抗原结合抗体片段。
人CXCR1、人CXCR2、人CXCL1、人CXCL2、人CXCL3、人CXCL4、人CXCL5、人CXCL6、人CXCL7和人CXCL8的示例性序列。
人CXCR1(SEQ ID NO:200)
msnitdpqmw dfddlnftgm ppadedyspc xletetlnky vviiayalvf llsllgnslv
mlvilysrvg rsvtdvylln laladllfal tlpiwaaskv ngwifgtflc kvvsllkevn
fysgilllac isvdrylaiv hatrtltqkr hlvkfvclgc wglsmnlslp fflfrqayhp
nnsspvcyev lgndtakwrm vlrilphtfg fivplfvmlf cygftlrtlf kahmgqkhra
mrvifavvli fllcwlpynl vlladtlmrt qviqescerr nnigraldat eilgflhscl
npiiyafigq nfrhgflkil amhglvskef larhrvtsyt sssvnvssnl
人CXCR2(SEQ ID NO:201)
medfnmesds fedfwkgedl snysysstlp pflldaapce pesleinkyf vviiyalvfl
lsllgnslvm lvilysrvgr svtdvyllnl aladllfalt lpiwaaskvn gwifgtflck
vvsllkevnf ysgilllaci svdrylaivh atrtltqkry lvkficlsiw glslllalpv
llfrrtvyss nvspacyedm gnntanwrml lrilpqsfgf ivpllimlfc ygftlrtlfk
ahmgqkhram rvifavvlif llcwlpynlv lladtlmrtq viqetcerrn hidraldate
ilgilhscln pliyafigqk frhgllkila ihgliskdsl pkdsrpsfvg sssghtsttl
人CXCL1(SEQ ID NO:202)
maraalsaap snprllrval lllllvaagr raagasvate lrcqclqtlq gihpkniqsv
nvkspgphca qteviatlkn grkaclnpas pivkkiiekm lnsdksn
人CXCL2(SEQ ID NO:203)
maratlsaap snprllrval lllllvaasr raagaplate lrcqclqtlq gihlkniqsv
kvkspgphca qteviatlkn gqkaclnpas pmvkkiiekm lkngksn
人CXCL3(SEQ ID NO:204)
asvvte lrcqclqtlq gihlkniqsv nvrspgphca qteviatlkn gkkaclnpaspmvqkiieki lnkgstn人CXCL4(SEQ ID NO:205)
mssaagfcas rpgllflgll llplvvafas aeaeedgdlq clcvkttsqv rprhitslev
ikagphcpta qliatlkngr kicldlqapl ykkiikklle s
人CXCL5(SEQ ID NO:206)
msllssraar vpgpssslca llvllllltq pgpiasagpa aavlrelrcv clqttqgvhp
kmisnlqvfa igpqcskvev vaslkngkei cldpeapflk kviqkildgg nken
人CXCL6(SEQ ID NO:207)
gpv savltelrct clrvtlrvnp ktigklqvfp agpqcskvev vaslkngkqv cldpeapflkkviqkildsg nkkn
人CXCL7(SEQ ID NO:208)
mslrldttps cnsarplhal qvllllslll talasstkgq tkrnlakgke esldsdlyae
lrcmciktts gihpkniqsl evigkgthcn qveviatlkd grkicldpda prikkivqkk
lagdesad
人CXCL8同种型1(SEQ ID NO:209)
egavlprsak elrcqcikty skpfhpkfik elrviesgph canteiivkl sdgrelcldpkenwvqrvve
kflkraens
人CXCL8同种型2(SEQ ID NO:210)
egavlprsak elrcqcikty skpfhpkfik elrviesgph canteiivkl sdgrelcldpkenwvqrvve kflkr
ELR趋化因子抑制剂-抗体
在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂是抗体或其抗原结合片段(例如，Fab或scFv)。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合CXCR1和/或CXCR2。在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段特异性结合以下中的一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种或八种)：CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、和CXCL8(IL-8)。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；和WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs 2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBOMol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature 424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；和Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs 6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；和Stocks,Drug Discov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；和Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMCBiotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
ELR趋化因子抑制剂可以是例如单克隆抗体。ELR抑制剂的非限制性实例是TAB-099MZ。作为抗体或抗原结合抗体片段的ELR趋化因子抑制剂的额外实例描述于例如美国专利号9,290,570；和美国专利申请公开号2004/0170628、2010/0136031、2015/0160227、2015/0224190、2016/0060347、2016/0152699、2016/0108117、2017/0131282、2016/0060347、2014/0271647、2014/0170156、2012/0164143、2010/0254941、2009/0130110、2008/0118517、2004/0208873、2003/0021790、2002/0082396、和2001/0006637中，所述专利或专利申请的每一者(例如，描述ELR趋化因子抑制剂的部分)通过引用并入本文。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有小于1x 10- 5M(例如，小于0.5x 10-5M、小于1x 10-6M、小于0.5x 10-6M、小于1x10-7M、小于0.5x 10-7M、小于1x 10-8M、小于0.5x 10-8M、小于1x 10-9M、小于0.5x 10-9M、小于1x 10-10M、小于0.5x 10- 10M、小于1x 10-11M、小于0.5x 10-11M、或小于1x 10-12M)的解离常数(KD)，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-12M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x 10-10M、约0.5x 10-10M、约1x 10-11M、或约0.5x 10-11M(包括端值)；约0.5x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、约1x10-10M、约0.5x 10-10M、或约1x 10-11M(包括端值)；约1x 10-11M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x 10- 9M、约0.5x10-9M、约1x 10-10M、或约0.5x 10-10M(包括端值)；约0.5x 10-10M至约1x10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10- 8M、约1x 10-9M、约0.5x 10-9M、或约1x 10-10M(包括端值)；约1x 10-10M至约1x 10-5M、约0.5x10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、约1x10-9M、或约0.5x 10-9M(包括端值)；约0.5x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、约1x 10-8M、约0.5x 10-8M、或约1x 10-9M(包括端值)；约1x 10-9M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x10-7M、约1x 10-8M、或约0.5x 10-8M(包括端值)；约0.5x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、约0.5x 10-7M、或约1x 10-8M(包括端值)；约1x 10-8M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x10-6M、约0.5x 10-6M、约1x 10-7M、或约0.5x 10-7M(包括端值)；约0.5x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、约0.5x 10-6M、或约1x 10-7M(包括端值)；约1x 10-7M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、约1x 10-6M、或约0.5x 10-6M(包括端值)；约0.5x 10-6M至约1x 10-5M、约0.5x 10-5M、或约1x 10-6M(包括端值)；约1x 10-6M至约1x 10-5M或约0.5x 10-5M(包括端值)；或约0.5x 10-5M至约1x 10-5M(包括端值)的KD，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x10-6s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10-4s-1、约1x 10-5s-1、或约0.5x 10- 5s-1(包括端值)；约0.5x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、约0.5x 10- 4s-1、或约1x 10-5s-1(包括端值)；约1x 10-5s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、约1x 10-4s-1、或约0.5x 10-4s-1(包括端值)；约0.5x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、约0.5x 10-3s-1、或约1x 10- 4s-1(包括端值)；约1x 10-4s-1至约1x 10-3s-1、或约0.5x 10-3s-1(包括端值)；或约0.5x 10- 5s-1至约1x 10-3s-1(包括端值)的Koff，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
在一些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段中的任一种具有约1x102M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、约1x 103M-1s-1、或约0.5x 103M-1s-1(包括端值)；约0.5x 103M-1s-1至约1x106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、约0.5x 104M-1s-1、或约1x 103M-1s-1(包括端值)；约1x 103M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、约1x 104M-1s-1、或约0.5x 104M-1s-1(包括端值)；约0.5x 104M- 1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、约0.5x 105M-1s-1、或约1x 104M-1s-1(包括端值)；约1x 104M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、约1x 105M-1s-1、或约0.5x105M-1s-1(包括端值)；约0.5x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、约0.5x 106M-1s-1、或约1x 105M-1s-1(包括端值)；约1x 105M-1s-1至约1x 106M-1s-1、或约0.5x 106M-1s-1(包括端值)；或约0.5x106M-1s-1至约1x 106M-1s-1(包括端值)的Kon，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)在磷酸盐缓冲盐水中测量的。
作为抗体或抗原结合抗体片段的ELR趋化因子抑制剂的额外实例是本领域中已知的。
ELR趋化因子抑制剂-小分子
在一些情况下，ELR趋化因子抑制剂是例如小分子。例如，ELR趋化因子抑制剂可以是例如LY-3041658或瑞帕他辛(repertaxin)(瑞帕利辛；DF 1681Y)。作为小分子的ELR趋化因子抑制剂的额外非限制性实例描述于例如美国专利申请公开号2007/0248594、2006/0014794、2004/0063709、2004/0034229、2003/0204085、2003/0097004、2004/0186142、2004/0235908、2006/0025453、2017/0224679、2017/0190681、2017/0144996、和2017/0128474中，所述专利申请的每一者(例如，描述ELR趋化因子抑制剂的部分)通过引用并入。
在一些实施方式中，ELR趋化因子抑制剂是肽，例如描述于美国专利申请公开号2009/0270318、2009/0118469、和2007/0160574、2007/0021593、2003/0077705、和2007/0181987中的任何肽，所述专利申请的每一者(例如，描述ELR趋化因子抑制剂的部分)通过引用并入。
磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂
术语“PDE4抑制剂”是指例如与在不存在该试剂下的PDE4活性水平相比，降低在体外或在哺乳动物细胞中的PDE4活性，和/或例如与未与该试剂接触的相同哺乳动物细胞相比，降低与该试剂接触的哺乳动物细胞中的PDE4蛋白水平的试剂。PDE4活性的非限制性实例是cAMP的降解。
在一些实施方式中，PDE4抑制剂可以是分子量小于900道尔顿(例如，小于500道尔顿)的小分子(例如，有机、无机或生物无机分子)。在一些实施方式中，PDE4抑制剂可以是抑制性核酸。
小分子
在一些实施方式中，PDE4抑制剂是小分子。作为PDE4抑制剂的小分子的非限制性实例示于表A中。
表A.作为PDE4抑制剂的示例性小分子
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作为PDE4抑制剂的小分子的额外实例包括：阿普斯特(Apremilast)(CC-10004；CC-110004；CDC-104；
Figure BDA0002449116230004242
lead selCID(2)；selCID)；CC-1088(CC-1088；CC-5048；CC-801；CDC-801；lead SelCID(1))；替托司特(Tetomilast)(OPC-6535)；KF-19514；PF-06266047；SKF-107806；PDB-093；托拉芬群(Tolafentrine)(BY-4070)；TAK-648；CH-928；CH-673；CH-422；ABI-4(18F-PF-06445974；氟-18-PF-06445974)；罗氟司特(roflumilast)；罗氟司特N-氧化物(APTA-2217；B9302-107；BY-217；BYK-20860；
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Dalveza；
Figure BDA0002449116230004244
Libertek；Xevex；罗氟米司特(roflumist))；NVP-ABE-171；BYK-321084；WAY-127093B；NCS-613；SDZ-ISQ-844；GS-5759；Ro-20-1724；Hemay-005；KCA-1490；TVX-2706；硝喹宗(Nitraquazone)；非明司特(Filaminast)(PDA-641；WAY-PDA-641)；LASSBio-596；ASP-3258；TAS-203；AN-2889；AN-5322；AN-6414；AN-6415；Iotamilast(E-6005；RVT-501)；GPD-1116；西潘茶碱(Cipamfylline)(BRL-61063；HEP-688)；MNP-001；MS-23；MSP-001；K-34；KF-66490；AL-38583(希洛马斯(cilomast))；ZL-N-91；Almirall；CDP-840；GSK-356728；西洛司特(Cilomilast)(Ariflo；SB-207499)；OCID-2987；AN-2898；CBS-3595；ASP-9831(ASP9831)；E-4021(4-哌啶羧酸,1-[4-[(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基甲基)氨基]-6-氯-2-喹唑啉基])；吡拉米司特(Piclamilast)(RP-73401；RPR-73401)；CD-160130；GSK-256066(256066)；4AZA-PDE4；YM-393059；revamilast(GRC-4039)；AN-2728(PF-06930164；crisaborole(EucrisaTM))；MK-0952(MK-952)；异丁司特(AV-411；MN-166；KC-404)；GP-0203；ELB-526；茶碱(Teonova)；CHF-6001(CHF-5480)；elbimilast(AWD-12-353；ELB-353；若诺米拉斯特(ronomilast))；AWD-12-281(842470)；OS-0217；奥米司特(Oglemilast)(GRC-3886)；R-1627；ND-1510；ND-1251；WAY-122331；GRC-3566；妥非司特(Tofimilast)(CP-325366)；BAY-61-9987；咯利普兰(ME-3167；ZK-62711)；MEM-1414(R-1533)；腺苷A3拮抗剂(CGH-2466)；RPL-554(RPL-565；VMX-554；VMX-565；VRP-554；曲喹辛类似物)；CT-5357；依他唑酯(EHT-0202；SQ-20009；盐酸依他唑酯)；Z-15370(Z-15370A)；Org-30029；Org-20241；阿罗茶碱(Arofylline)(LAS-31025)；阿罗茶碱衍生物；KW-4490；HT-0712(IPL-455903)；HT-0712；IPL-455903；CT-2450；CT-2820；CT-3883；CT-5210；L-454560；L-787258；L-791943；L-826141；L-869298；MK-0359；OX-914(BLX-028914；BLX-914；IPL-4088；IPL-4182；IPL-4722)；SDZ-PDI-747；AP-0679；Sch-351591(D-4396；Sch-365351)；TA-7906(T-2585；TA-7906)；HMR-1571；利米司特(Lirimilast)(BAY-19-8004)；达利普兰(Daxalipram)(Mesopram；SH-636；ZK-117137)；SelCI(CC-10036；CC-10083；CC-110007；CC-110036；CC-110037；CC-110038；CC-110049；CC-110052；CC-110083；CC-11069；CC-111050；CC-13039；CC-14046；CC-17034；CC-17035；CC-17075；CC-17085；CC-18062；CC-7075)；RPR-117658；AWD-12-281(842470；AWD-12-343；GW842470X)；256066(GSK-256066；SB-207499)；RPR-132294(RPR-132703)；CI-1018；CI-1044；PD-168787；PD-189659；PD-190036；PD-190749；YM-976；XT-611；氯沙坦衍生物；DWP-205衍生物(DWP-205297)；WAY-126120；YM-58997；CP-293321；V-11294A；CH-3697；CP-353164；阿替唑兰(Atizoram)(CP-80633)；D-4418；RPR-114597；IC-197；IC-246；IC-247；IC-485；IC-86518；IC-86518/IC-86521；IC-86521；CP-220629；ZL-n-91；D-22888(AWD-12-232)；GW-3600；GSK356278；TPI 1100；BPN14770；和MK-0873。参见例如Schafter等人(2014)Cellular Signaling 26(9):2016-2029)；Gurney等人(2011)Handb Exp Pharmacol 204:167-192；Spadaccini等人(2017)Intl J Mol Sciences18:1276；Bickston等人(2012)Expert Opinion Invest Drugs 21:12,1845-1849；Keshavarzian等人(2007)Expert Opinion Invest Drugs 16:9,1489-1506。
作为PDE-4抑制剂的小分子的额外实例描述于例如美国专利申请公开号2017/0348311、20176/0319558、2016/0213642、2015/0328187、2015/0306079、2015/0272949、2015/0272936、2015/0080359、2015/0051254、2014/0350035、2014/0148420、2014/0121221、2013/0252928、2013/0237527、2013/0225609、2012/0309726、2012/0196867、2012/0088743、2012/0059031、2012/0035143、2012/0028932、2011/0021478、2011/0021476、2010/0234382、2010/0129363、2010/0069392、2010/0056604、2010/0048616、2010/0048615、2009/0099148、2009/0093503、2008/0287522、2008/0255209、2008/0255186、2008/0221111、2007/0232637、2007/0208181、2007/0167489、2006/0269600、2006/0183764、2006/0154934、2006/0094723、2006/0079540、2005/0267135、2005/0234238、2005/0033521、2003/0229134、2003/0220352、2003/0212112、2003/0158189、2003/0069260、2003/0050329、2002/0058687、和2002/0028842中。作为PDE 4抑制剂的小分子的额外实例是本领域中已知的。
抑制性核酸
在一些实施方式中，PDE4抑制剂可以是抑制性核酸。在一些实施方式中，抑制性核酸可以是反义核酸、核酶和小干扰RNA(siRNA)。这些不同的寡核苷酸方面的实例在下文中描述。可以降低哺乳动物细胞中的PDE4 mRNA的表达的抑制性核酸的任何实例可以在体外合成。
可以降低哺乳动物细胞中的PDE4 mRNA表达的表达的抑制性核酸包括反义核酸分子，即其核苷酸序列与PDE4 mRNA的全部或部分互补(例如，与SEQ ID NO:1-5的任何一个的全部或部分互补)的核酸分子。
人PDE4 mRNA转录物变体1(SEQ ID NO:1)
Figure BDA0002449116230004261
Figure BDA0002449116230004271
Figure BDA0002449116230004281
人PDE4 mRNA转录物变体2(SEQ ID NO:2)
Figure BDA0002449116230004282
Figure BDA0002449116230004291
Figure BDA0002449116230004301
人PDE4 mRNA转录物变体3(SEQ ID NO:3)
Figure BDA0002449116230004302
Figure BDA0002449116230004311
Figure BDA0002449116230004321
人PDE4 mRNA转录物变体4(SEQ ID NO:4)
Figure BDA0002449116230004322
Figure BDA0002449116230004331
Figure BDA0002449116230004341
人PDE4 mRNA转录物变体5(SEQ ID NO:5)
Figure BDA0002449116230004342
Figure BDA0002449116230004351
Figure BDA0002449116230004361
反义核酸分子可与编码PDE4蛋白的核苷酸序列的编码链的全部或部分非编码区互补。非编码区(5’和3’未翻译区域)是基因中编码区侧翼的5’和3’序列，且不被翻译成氨基酸。
基于本文公开的序列，本领域技术人员可以容易地选择和合成许多适当的反义核酸中的任一种，以靶向本文所述的编码PDE4的核酸。靶向编码PDE4的核酸的反义核酸可以使用集成DNA技术网站(Integrated DNA Technologies website)上提供的软件进行设计。
反义核酸的长度可以是例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个或更多的核苷酸。反义寡核苷酸可以使用本领域已知的程序通过化学合成和酶结合反应来构建。例如，反义核酸可使用天然核苷酸或经被设计用于提高分子的生物稳定性或提高反义核酸和感觉核酸之间形成的双链的物理稳定性的各种修饰的核苷酸(例如硫代磷酸酯衍生物和可以使用的吖啶取代的核苷酸)进行化学合成。
可用于产生反义核酸的修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、怀丁苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。或者，可以使用表达载体生物产生反义核酸，其中核酸以反义方向亚克隆到表达载体中(即从插入的核酸转录的RNA将具有对所关注的目标核酸的反义方向)。
本文所述反义核酸分子可在体外制备并施予哺乳动物(例如人类)。可替代地，它们可以在原位产生，使得它们与编码PDE4蛋白的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合，从而例如通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。杂交可以通过常规的核苷酸互补来形成稳定的双链，或者，例如在反义核酸分子与DNA双链结合的情况下，通过双螺旋的大沟中的特定相互作用来形成。反义核酸分子可使用载体(例如慢病毒、逆转录病毒或腺病毒载体)递送至哺乳动物细胞。
反义核酸可以是α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，链彼此平行(Gaultier等人,Nucleic Acids Res.15:6625-6641,1987)。反义核酸也可包含2’-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,Nucleic AcidsRes.15:6131-6148,1987)或嵌合体RNA-DNA类似物(Inoue等人,FEBS Lett.215:327-330,1987)。
抑制性核酸的另一实例是对编码PDE4蛋白的核酸具有特异性(例如对PDE4 mRNA的特异性，例如对SEQ ID NO:1、2、3、4、或5的特异性的核酶)。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化RNA分子，能够切割其上具有互补区的单链核酸如mRNA。因此，核酶(例如，锤头状核酶(在Haselhoff和Gerlach,Nature334:585-591,1988中描述)可以用于催化切割mRNA转录物，从而抑制由mRNA编码的蛋白质的翻译。对PDE4 mRNA具有特异性的核酶可以基于本文公开的PDE4 mRNA序列中的任一个的核苷酸序列来设计。例如，可以构建四膜细胞L-19IVSRNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与要在PDE4 mRNA中分裂的核苷酸序列互补(参见例如美国专利号4,987,071和5,116,742)。可替代地，PDE4 mRNA可用于从RNA分子库中选择具有特异核糖核酸酶活性的催化RNA。参见，例如Bartel等人,Science 261:1411-1418,1993。
抑制性核酸也可以是形成三重螺旋结构的核酸分子。例如，PDE4多肽的表达可通过靶向与编码PDE4多肽的基因的调节区互补的核苷酸序列而被抑制(例如启动子和/或增强子，例如在转录起始状态上游至少1kb、2kb、3kb、4kb或5kb的序列)，从而形成阻止靶细胞中基因的转录的三螺旋结构。通常参见Helene,Anticancer Drug Des.6(6):569-84,1991；Helene,Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36,1992；和Maher,Bioassays 14(12):807-15,1992。
在各种实施方式中，抑制性核酸可在碱基部分、糖部分或磷酸骨架处进行修饰以改善例如分子的稳定性、杂交性或溶解性。例如，可以对核酸的脱氧核糖磷酸骨架进行修饰以生成肽核酸(参见例如Hyrup等,Bioorganic Medicinal Chem.4(1):5-23,1996)。肽核酸(PNA)是核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中脱氧核糖磷酸骨架被假肽骨架取代，仅保留四种天然核苷。PNA的中性骨架允许在低离子强度的条件下对DNA和RNA进行特异性杂交。PNA寡聚物的合成可使用标准固相肽合成方案进行(参见例如Perry-O'Keefe等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:14670-675,1996)。PNA可作为反义或反基因因子，用于通过例如诱导转录或翻译扣留或抑制复制等方式对基因表达进行序列特异性调控。
PNA可通过将亲脂性或其它辅助基团连接到PNA、通过形成PNA-DNA嵌合体、或通过使用脂质体或本领域已知的药物递送的其它技术来修饰，例如以增强其稳定性或细胞摄取。例如，可以产生PNA-DNA嵌合体，其可以结合PNA和DNA的有利性质。这种嵌合体允许DNA识别酶(如RNA酶H和DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，而PNA部分将提供高结合亲和力和特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆叠、核碱基间键数和取向选择适当长度的连接体连接。
PNA-DNA嵌合体的合成可如Finn等人,Nucleic Acids Res.24:3357-63,1996中所述的进行。例如，可以使用标准的磷酰胺偶联化学和修饰的核苷类似物在固体载体上合成DNA链。诸如5’-(4-甲氧基三苯甲酰)氨基-5’-脱氧胸苷亚磷酰胺等化合物可用作PNA与DNA的5’端之间的连接(Mag等人,Nucleic Acids Res.17:5973-88,1989)。然后以逐步方式将PNA单体偶联以产生具有5’PNA片段和3’DNA片段的嵌合分子(Finn等人,Nucleic AcidsRes.24:3357-63,1996)。可替代地，嵌合分子可以用5’DNA片段和3’PNA片段合成(Peterser等人,Bioorganic Med.Chem.Lett.5:1119-11124,1975)。
在一些实施方式中，抑制性核酸可包括其它附加基团，诸如肽，或促进跨细胞膜转运的试剂(参见Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6553-6556,1989；Lemaitre等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84:648-652,1989；和WO88/09810)。此外，可使用杂交触发裂解剂(参见例如Krol等人,Bio/Techniques6:958-976,1988)或插入剂(参见例如Zon,Pharm.Res.5:539-549,1988)对抑制性核酸进行修饰。为此，寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂、杂交触发裂解剂等缀合。
可以降低在哺乳动物细胞中表达PDE4 mRNA的其它方式是通过RNA干扰(RNAi)。RNAi是其中mRNA在宿主细胞中降解的过程。为了抑制mRNA，与将被沉默的基因(例如编码PDE4多肽的基因)的一部分相对应的双链RNA(dsRNA)被引入哺乳动物细胞。dsRNA被消化成21-23个核苷酸长的二联体，称为短干扰RNA(或siRNA)，与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导沉默复合物(或RISC)。RISC通过siRNA链中的一条与内源性mRNA之间的碱基配对相互作用来靶向同源转录物。然后从siRNA的3’端切下mRNA约12个核苷酸(参见Sharp等人,Genes Dev.15:485-490,2001，和Hammond等人,Nature Rev.Gen.2:110-119,2001)。
RNA介导的基因沉默可以以多种方式在哺乳动物细胞中诱导，例如通过加强RNA发夹的内源性表达(参见Paddison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:1443-1448,2002)，或如上所述通过小(21-23nt)dsRNA的转染(在Caplen,Trends Biotech.20:49-51,2002中进行了综述)。例如在美国专利号6506559和US2003/0056235中描述了用RNAi调节基因表达的方法，所述专利以引用方式并入本文中。
标准的分子生物学技术可以用来产生siRNA。短干扰RNA可以通过化学合成、重组产生，例如通过表达从模板DNA(如质粒)表达RNA，或从商业供应商(如Dharmacon)获得。用于介导RNAi的RNA可包括合成或修饰的核苷酸，如硫代磷酸核苷酸。用siRNA或用设计成制备siRNA的质粒转染细胞的方法是本领域的常规方法。
用于降低PDE4 mRNA表达的siRNA分子可以以多种方式变化。例如，它们可以包括3’羟基和21、22或23个连续核苷酸的链。它们可以是钝端或在3’端、5’端或两端包括悬端。例如，RNA分子的至少一条链可具有从约1到约6个核苷酸(例如1-5、1-3、2-4或3-5个核苷酸(无论是嘧啶或嘌呤核苷酸)的3’突出端的长度。如果两条链都包括突出端，则每条链的突出端长度可能相同或不同。
为了进一步增强RNA双链的稳定性，可以稳定3’突出端以防降解(通过例如包括嘌呤核苷酸，诸如腺苷或鸟苷核苷酸，或用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸腺嘧啶核苷取代尿苷2-核苷酸3’突出端是耐受的，且不影响RNAi的有效性)。任何siRNA都可用于降低PDE4 mRNA的方法中，只要它与感兴趣的目标具有足够的同源性(例如在SEQID NO:1-5中的任一个中存在的序列，例如涵盖翻译起始位点或mRNA的第一外显子的靶序列)。可以使用的siRNA长度没有上限(例如siRNA可以是从基因的约21个碱基对到基因的全长或更长的范围(例如约20到约30个碱基对，约50到约60个碱基对，约60到约70个碱基对，约70到约80个碱基对，约80到约90个碱基对，或约90到约100个碱基对)。
靶向PDE4的siRNA的非限制性实例描述于Takakura等人,PLosOne10(12):e0142981,2015；Watanabe等人,Cell Signal 27(7):1517-1524,2015；Suzuki等人,PLosOne 11(7):e0158967,2016；Kai等人,Mol.Ther.Nucl.Acids 6:163-172,2017)。参见例如Cheng等人Exp TherMed 12(4):2257-2264,2016；Peter等人,J Immunol 178)8):4820-4831；和Lynch等人JBiolog Chem 280:33178-33189中。PDE4抑制性核酸的额外实例描述于美国专利申请公开号2010/0216703和2014/0171487中，所述专利申请通过引用全文并入本文。
在一些实施方式中，可向有需要的受试者(例如人类受试者)施用治疗有效量的靶向PDE4的抑制性核酸。
在一些实施方式中，抑制性核酸可为约10个核苷酸至约40个核苷酸(例如约10至约30个核苷酸、约10至约25个核苷酸、约10至约20个核苷酸、约10至约15个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、13个核苷酸、14个核苷酸、15个核苷酸、16个核苷酸、17个核苷酸、18个核苷酸、19个核苷酸、20个核苷酸、21个核苷酸、22个核苷酸、23个核苷酸、24个核苷酸、25个核苷酸、26个核苷酸、27个核苷酸、28个核苷酸、29个核苷酸、30个核苷酸、31个核苷酸、32个核苷酸、33个核苷酸、34个核苷酸、35个核苷酸、36个核苷酸、37个核苷酸、38个核苷酸、39个核苷酸或40个核苷酸)的长度。本领域技术人员将了解抑制性核酸可在DNA或RNA的5’或3’端包含至少一种修饰核酸。
本文所述的任一种抑制性核酸可以配制成向胃肠道施用。参见例如描述于US2016/0090598和Schoellhammer等人,Gastroenterology,doi:10.1053/j.gastro.2017.01.002,2017中的配制方法。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成纳米颗粒(例如，包括一种或多种合成聚合物的纳米颗粒，例如Patil等人,Pharmaceutical Nanotechnol.367:195-203,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以是粘膜粘着颗粒(例如具有带正电荷外表面的纳米颗粒)(Andersen等人,Methods Mol.Biol.555:77-86,2009)。在一些实施方式中，纳米颗粒可以具有带中性电荷的外表面。
在一些实施方式中，抑制性核酸可以配制成例如脂质体(Buyens等人,J.ControlRelease 158(3):362-370,2012)、胶束(例如混合胶束)(Tangsangasaksri等人,BioMacromolecules 17:246-255,2016)、微乳液(WO 11/004395)、纳米乳液、或固体脂质纳米颗粒(Sahay等人,Nature Biotechnol.31:653-658,2013；Lin等人,Nanomedicine 9(1):105-120,2014)。
免疫调节剂的额外实例
本文所述的免疫调节剂可以是抗体或抗原结合片段、核酸(例如抑制性核酸)、小分子和活性生物治疗剂，诸如益生菌。在一些实施方式中，免疫调节剂可以是用于治疗炎性肠病(IBD)，例如克罗恩病或溃疡性结肠炎(UC)的药物或治疗剂。可用于治疗或预防炎性肠病的非限制性免疫调节剂包括抑制细胞因子产生、下调或抑制自身抗原表达或遮蔽MHC抗原的物质。免疫调节剂的非限制性实例包括但不限于：CHST15抑制剂(例如STNM01)；IL-6受体抑制剂(例如托珠单抗)；IL-12/IL-23抑制剂(例如优特克单抗和布瑞吉努单抗)；整联蛋白抑制剂(例如维多珠单抗和那他珠单抗)；JAK抑制剂(例如托西替尼)；SMAD7抑制剂(例如Mongersen)；IL-13抑制剂；IL-1受体抑制剂；TLR激动剂(例如Kappaproct)；干细胞(例如Cx601)；2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(参见美国专利号4,665,077)；非甾体类抗炎药(NSAID)；更昔洛韦；他克莫司；诸如皮质醇(Cortisol)或醛固酮等皮质类固醇；抗炎剂诸如环氧酶抑制剂；5-脂氧合酶抑制剂；或白三烯受体拮抗剂；嘌呤拮抗剂，诸如硫唑嘌呤或霉酚酸酯(MMF)；烷基化剂诸如环磷酰胺；溴隐亭；达那唑；氨苯砜；戊二醛(其遮蔽MHC抗原，如美国专利号4,120,649中所述)；MHC抗原和MHC片段的抗独特型抗体；环孢素；6-巯基嘌呤；类固醇，诸如皮质类固醇或糖皮质激素或糖皮质激素类似物，例如强的松，甲基强的松龙，包括
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甲基强的松龙琥珀酸钠和地塞米松；二氢叶酸还原酶抑制剂，诸如甲氨蝶呤(口服或皮下)；抗疟疾剂，诸如氯喹和羟氯喹；柳氮磺胺吡啶；来氟米特；细胞因子或细胞因子受体抗体或拮抗剂，包括抗干扰素α、β或γ抗体，抗肿瘤坏死因子(TNF)α抗体(英夫利昔单抗
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或阿达木单抗)，抗TNFα免疫粘附素(依那西普)，抗TNFβ抗体，抗白细胞介素2(IL-2)抗体和抗IL-2受体抗体，以及抗白细胞介素-6(IL-6)受体抗体和拮抗剂；抗LFA-1抗体，包括抗CD11a和抗CD18抗体；抗L3T4抗体；异源抗淋巴细胞球蛋白；pan-T抗体，抗CD3或抗CD4/CD4a抗体；含有LFA-3结合结构域的可溶性肽(WO 90/08187，1990年7月26日公开)；链激酶；转化生长因子-β(TGF-β)；链道酶；来自宿主的RNA或DNA；FK506；RS-61443；苯丁酸氮芥；脱氧精胍菌素；雷帕霉素；T细胞受体(Cohen等人，美国专利号5,114,721)；T细胞受体片段(Offner等人,Science,251:430-432(1991)；WO 90/11294；Ianeway,Nature,341:482(1989)；和WO 91/01133)；BAFF拮抗剂诸如BAFF或BR3抗体或免疫粘附素和zTNF4拮抗剂(综述参见Mackay和Mackay,Trends Immunol,23:113-5(2002)，并且还参见下文的定义)；干扰T细胞辅助信号的10种生物制剂，诸如抗CD40受体或抗CD40配体(CD154)，包括阻断CD40-CD40配体的抗体(例如，Durie等人,Science,261:1328-30(1993)；Mohan等人,J.Immunol,154:1470-80(1995))和CTLA4-Ig(Finck等人,Science,265:1225-7(1994))；和T细胞受体抗体(EP 340,109)，诸如T10B9。试剂的非限制性实例还包括以下：布地奈德(budenoside)；表皮生长因子；氨基水杨酸盐；甲硝唑；美沙拉嗪；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓素抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1单克隆抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基咪唑化合物；TNF拮抗剂；IL-4、IL-10、IL-13和/或TGFβ细胞因子或其激动剂(例如，激动剂抗体)；IL-11；葡糖苷酸或葡聚糖缀合的强的松龙前药，地塞米松或布地奈德；ICAM-I反义硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸(ISIS 2302；Isis Pharmaceuticals公司)；可溶性补体受体1(TPIO；T Cell Sciences公司)；缓释美沙拉嗪；血小板活化因子(PAF)的拮抗剂；环丙沙星；和利多卡因。
可用于治疗溃疡性结肠炎的免疫调节剂的非限制性实例包括针对轻度病例的柳氮磺胺吡啶和相关的含水杨酸酯的药物以及针对重度病例的皮质类固醇药物。可用于治疗肝脏疾病或病症(例如，肝纤维化或NASH)的免疫调节剂的非限制性实例包括：依拉贝特(elafibranor)(GFT 505；Genfit公司)、奥贝胆酸(obeticholic acid)(OCA；InterceptPharmaceuticals公司)、cenicriviroc(CVC；Allergan plc)、瑟隆舍替(selosertib)(先前称为GS-4997；Gilead Sciences公司)、抗LOXL2抗体(辛妥珠单抗(simtuzumab)(先前称为GS 6624；Gilead Sciences公司))、GS-9450(Gilead Sciences公司)、GS-9674(GileadSciences公司)、GS-0976(先前称为NDI-010976；Gilead Sciences公司)、恩利卡生(Emricasan)(Conatus Pharmaceuticals公司)、花生基-氨基胆酸(Arachidyl-amidocholanoic acid)(AramcholTM；Galmed Pharmaceuticals有限公司)、AKN-083(Allerganplc(Akarna Therapeutics有限公司))、TGFTX4(Genfit公司)、TGFTX5(Genfit公司)、TGFTX1(Genfit公司)、RoRK激动剂(例如LYC-55716；Lycera公司)、回肠胆汁酸转运因子(iBAT)抑制剂(例如依洛昔巴特(elobixibat)、Albireo Pharma公司；GSK2330672，GlaxoSmithKline plc和A4250；Albireo Pharma公司)、干细胞、CCR2抑制剂、巴多索龙甲基(Reata Pharmaceuticals公司)、骨形态生成蛋白7(BMP-7)模拟物(例如THR-123(参见例如Sugimoto等人(2012)Nature Medicine 18:396-404))、抗TGF-β抗体(例如，夫苏木单抗(fresolimumab)；还参见美国专利号7,527,791和8,383,780，通过引用并入本文)、吡非尼酮(
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Genentech USA公司)、抗整联蛋白αvβ6抗体、抗结缔组织生长因子(CTGF)抗体(例如潘瑞鲁单抗(pamrevlumab)；FibroGen公司)、己酮可可碱、血管内皮生长因子(VEGF)、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)抑制剂(例如，肾素抑制剂(例如胃酶抑素、CGP2928、阿利吉仑)或ACE抑制剂(例如卡托普利、佐芬普利、依那普利、雷米普利、奎那普利、培哚普利、赖诺普利、贝那普利、咪达普利、福辛普利和群多普利))、血小板应答蛋白、他汀、巴多索龙、PDE5抑制剂(例如，昔多芬、伐地那非和他达拉非)、NADPH氧化酶-1(NOX1)抑制剂(参见例如，美国公开号2011/0178082，通过引用并入本文)、NADPH氧化酶-4(NOX4)抑制剂(参见例如，美国公开号2014/0323500，通过引用并入本文)、ETA拮抗剂(例如西他生坦、安贝生坦、阿曲生坦、BQ-123和齐泊腾坦(zibotentan))、宁特达尼(nintedanib)(Boehringer Ingelheim)、INT-767(Intercept Pharmaceuticals公司)、VBY-376(Virobay公司)、PF-04634817(Pfizer)、EXC 001(Pfizer)、GM-CT-01(Galectin Therapeutics)、GCS-100(La Jolla Pharmaceuticals)、肝细胞生长因子模拟物(
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AngionBiomedica)、SAR156597(Sanofi)、曲洛吉努单抗(tralokinumab)(AstraZeneca)、泊马度胺(Celgene)、STX-100(Biogen IDEC)、CC-930(Celgene)、抗miR-21(RegulusTherapeutics)、PRM-151(Promedior)、BOT191(BiOrion)、Palomod529(PalomaPharamaceuticals)、IMD1041(IMMD，日本)、serelaxin(Novartis)、PEG-松弛素(Ambrx和Bristol-Myers Squibb)、ANG-4011(Angion Biomedica)、FT011(FibrotechTherapeutics)、吡非尼酮(InterMune)、F351(吡非尼酮衍生物(GNI Pharma)、维生素E(例如生育三烯酚(α、β、γ和δ)和生育酚(α、β、γ和δ))、己酮可可碱、胰岛素增敏剂(例如罗格列酮和吡格列酮)、组织蛋白酶B抑制剂R-3020、依那西普及其生物类似物、阻断Fas激活的肽(参见例如国际公开号WO 2005/117940，通过引用并入本文)、胱天蛋白酶抑制剂VX-166、胱天蛋白酶抑制剂Z-VAD-fmk、法舒地尔、贝那卡桑(benacasan)(VX-765)和普雷卡桑(pralnacasan)(VX-740)。
可用于治疗本文适应症的治疗剂还包括：
TNF抑制剂：tulinercept；DLX-105(凝胶制剂)；
IL-12/Il-23抑制剂：AK-101；
IL-6R抑制剂：YSIL6、奥鲁凯珠单抗(olokizumab)(CDP-6038)；
JAK抑制剂；PF-06700841、PF-06651600；
活性生物治疗剂：神经调节蛋白4；NN8555；
免疫调节剂：KHK-4083、GSK2618960、托利珠单抗(Toralizumab)：
趋化因子：GSK3050002(先前称为KANAb071)、E-6011、HGS-1025；
IL-1抑制剂：K(D)PT；
IL-10抑制剂：RG-7880；
CHST15抑制剂：SB-012：
TLR激动剂：BL-7040；EN-101；Monarsen。
在一些实施方式中，免疫调节剂可以降低其靶受体，诸如TNF、IL-12/IL-23、IL-6R、JAK、趋化因子、IL-1、IL-10、CHST15或TLR在哺乳动物细胞中的活性和/或水平。在一些实施方式中，例如与不与试剂接触的相同哺乳动物细胞中的PDE4蛋白的水平相比，免疫调节剂可降低与试剂接触的哺乳动物细胞中的PDE4蛋白的水平(例如，降低约1％至约99％、约1％至约95％、约1％至约90％、约1％至约85％、约1％至约80％、约1％至约75％、约1％至约70％、约1％至约65％、约1％至约60％、约1％至约55％、约1％至约50％、约1％至约45％、约1％至约40％、约1％至约35％、约1％至约30％、约1％至约25％、约1％至约20％、约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约1％至约5％、约5％至约99％、约5％至约90％、约5％至约85％、约5％至约80％、约5％至约75％、约5％至约70％、约5％至约65％、约5％至约60％、约5％至约55％、约5％至约50％、约5％至约45％、约5％至约40％、约5％至约35％、约5％至约30％、约5％至约25％、约5％至约20％、约5％至约15％、约5％至约10％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约75％、约10％至约70％、约10％至约65％、约10％至约60％、约10％至约55％、约10％至约50％、约10％至约45％、约10％至约40％、约10％至约35％、约10％至约30％、约10％至约25％、约10％至约20％、约10％至约15％、约15％至约99％、约15％至约95％、约15％至约90％、约15％至约85％、约15％至约80％、约15％至约75％、约15％至约70％、约15％至约65％、约15％至约60％、约15％至约55％、约15％至约50％、约15％至约45％、约15％至约40％、约15％至约35％、约15％至约30％、约15％至约25％、约15％至约20％、约20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约20％至约75％、约20％至约70％、约20％至约65％、约20％至约60％、约20％至约55％、约20％至约50％、约20％至约45％、约20％至约40％、约20％至约35％、约20％至约30％、约20％至约25％、约25％至约99％、约25％至约95％、约25％至约90％、约25％至约85％、约25％至约80％、约25％至约75％、约25％至约70％、约25％至约65％、约25％至约60％、约25％至约55％、约25％至约50％、约25％至约45％、约25％至约40％、约25％至约35％、约25％至约30％、约30％至约99％、约30％至约95％、约30％至约90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约30％至约75％、约30％至约70％、约30％至约65％、约30％至约60％、约30％至约55％、约30％至约50％、约30％至约45％、约30％至约40％、约30％至约35％、约35％至约99％、约35％至约95％、约35％至约90％、约35％至约85％、约35％至约80％、约35％至约75％、约35％至约70％、约35％至约65％、约35％至约60％、约35％至约55％、约35％至约50％、约35％至约45％、约35％至约40％、约40％至约99％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约85％、约40％至约80％、约40％至约75％、约40％至约70％、约40％至约65％、约40％至约60％、约40％至约55％、约40％至约50％、约40％至约45％、约45％至约99％、约45％至约95％、约45％至约90％、约45％至约85％、约45％至约80％、约45％至约75％、约45％至约70％、约45％至约65％、约45％至约60％、约45％至约55％、约45％至约50％、约50％至约99％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约80％、约50％至约75％、约50％至约70％、约50％至约65％、约50％至约60％、约50％至约55％、约55％至约99％、约55％至约95％、约55％至约90％、约55％至约85％、约55％至约80％、约55％至约75％、约55％至约70％、约55％至约65％、约55％至约60％、约60％至约99％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％、约60％至约80％、约60％至约75％、约60％至约70％、约60％至约65％、约65％至约99％、约65％至约95％、约65％至约90％、约65％至约85％、约65％至约80％、约65％至约75％、约65％至约70％、约70％至约99％、约70％至约95％、约70％至约90％、约70％至约85％、约70％至约80％、约70％至约75％、约75％至约99％、约75％至约95％、约75％至约90％、约75％至约85％、约75％至约80％、约80％至约99％、约80％至约95％、约80％至约90％、约80％至约85％、约85％至约99％、约85％至约95％、约85％至约90％、约90％至约99％、约90％至约95％、或约95％至约99％)。
在一些实施方式中，免疫调节剂可以以约1pM至约100μM、约1pM至约95μM、约1pM至约90μM、约1pM至约85μM、约1pM至约80μM、约1pM至约75μM、约1pM至约70μM、约1pM至约65μM、约1pM至约60μM、约1pM至约55μM、约1pM至约50μM、约1pM至约45μM、约1pM至约40μM、约1pM至约35μM、约1pM至约30μM、约1pM至约25μM、约1pM至约20μM、约1pM至约15μM、约1pM至约10μM、约1pM至约5μM、约1pM至约1μM、约1pM至约900nM、约1pM至约800nM、约1pM至约700nM、约1pM至约600nM、约1pM至约500nM、约1pM至约400nM、约1pM至约300nM、约1pM至约200nM、约1pM至约100nM、约1pM至约50nM、约1pM至约1nM、约1pM至约800pM、约1pM至约600pM、约1pM至约400pM、约1pM至约200pM、约200pM至约100μM、约200pM至约95μM、约200pM至约90μM、约200pM至约85μM、约200pM至约80μM、约200pM至约75μM、约200pM至约70μM、约200pM至约65μM、约200pM至约60μM、约200pM至约55μM、约200pM至约50μM、约200pM至约45μM、约200pM至约40μM、约200pM至约35μM、约200pM至约30μM、约200pM至约25μM、约200pM至约20μM、约200pM至约15μM、约200pM至约10μM、约200pM至约5μM、约200pM至约1μM、约200pM至约900nM、约200pM至约800nM、约200pM至约700nM、约200pM至约600nM、约200pM至约500nM、约200pM至约400nM、约200pM至约300nM、约200pM至约200nM、约200pM至约100nM、约200pM至约50nM、约200pM至约1nM、约200pM至约800pM、约200pM至约600pM、约200pM至约400pM、约400pM至约100μM、约400pM至约95μM、约400pM至约90μM、约400pM至约85μM、约400pM至约80μM、约400pM至约75μM、约400pM至约70μM、约400pM至约65μM、约400pM至约60μM、约400pM至约55μM、约400pM至约50μM、约400pM至约45μM、约400pM至约40μM、约400pM至约35μM、约400pM至约30μM、约400pM至约25μM、约400pM至约20μM、约400pM至约15μM、约400pM至约10μM、约400pM至约5μM、约400pM至约1μM、约400pM至约900nM、约400pM至约800nM、约400pM至约700nM、约400pM至约600nM、约400pM至约500nM、约400pM至约400nM、约400pM至约300nM、约400pM至约200nM、约400pM至约100nM、约400pM至约50nM、约400pM至约1nM、约400pM至约800pM,400pM至约600pM、约600pM至约100μM、约600pM至约95μM、约600pM至约90μM、约600pM至约85μM、约600pM至约80μM、约600pM至约75μM、约600pM至约70μM、约600pM至约65μM、约600pM至约60μM、约600pM至约55μM、约600pM至约50μM、约600pM至约45μM、约600pM至约40μM、约600pM至约35μM、约600pM至约30μM、约600pM至约25μM、约600pM至约20μM、约600pM至约15μM、约600pM至约10μM、约600pM至约5μM、约600pM至约1μM、约600pM至约900nM、约600pM至约800nM、约600pM至约700nM、约600pM至约600nM、约600pM至约500nM、约600pM至约400nM、约600pM至约300nM、约600pM至约200nM、约600pM至约100nM、约600pM至约50nM、约600pM至约1nM、约600pM至约800pM、约800pM至约100μM、约800pM至约95μM、约800pM至约90μM、约800pM至约85μM、约800pM至约80μM、约800pM至约75μM、约800pM至约70μM、约800pM至约65μM、约800pM至约60μM、约800pM至约55μM、约800pM至约50μM、约800pM至约45μM、约800pM至约40μM、约800pM至约35μM、约800pM至约30μM、约800pM至约25μM、约800pM至约20μM、约800pM至约15μM、约800pM至约10μM、约800pM至约5μM、约800pM至约1μM、约800pM至约900nM、约800pM至约800nM、约800pM至约700nM、约800pM至约600nM、约800pM至约500nM、约800pM至约400nM、约800pM至约300nM、约800pM至约200nM、约800pM至约100nM、约800pM至约50nM、约800pM至约1nM、约1nM至约100μM、约1nM至约95μM、约1nM至约90μM、约1nM至约85μM、约1nM至约80μM、约1nM至约75μM、约1nM至约70μM、约1nM至约65μM、约1nM至约60μM、约1nM至约55μM、约1nM至约50μM、约1nM至约45μM、约1nM至约40μM、约1nM至约35μM、约1nM至约30μM、约1nM至约25μM、约1nM至约20μM、约1nM至约15μM、约1nM至约10μM、约1nM至约5μM、约1nM至约1μM、约1nM至约900nM、约1nM至约800nM、约1nM至约700nM、约1nM至约600nM、约1nM至约500nM、约1nM至约400nM、约1nM至约300nM、约1nM至约200nM、约1nM至约100nM、约1nM至约50nM、约50nM至约100μM、约50nM至约95μM、约50nM至约90μM、约50nM至约85μM、约50nM至约80μM、约50nM至约75μM、约50nM至约70μM、约50nM至约65μM、约50nM至约60μM、约50nM至约55μM、约50nM至约50μM、约50nM至约45μM、约50nM至约40μM、约50nM至约35μM、约50nM至约30μM、约50nM至约25μM、约50nM至约20μM、约50nM至约15μM、约50nM至约10μM、约50nM至约5μM、约50nM至约1μM、约50nM至约900nM、约50nM至约800nM、约50nM至约700nM、约50nM至约600nM、约50nM至约500nM、约50nM至约400nM、约50nM至约300nM、约50nM至约200nM、约50nM至约100nM、约100nM至约100μM、约100nM至约95μM、约100nM至约90μM、约100nM至约85μM、约100nM至约80μM、约100nM至约75μM、约100nM至约70μM、约100nM至约65μM、约100nM至约60μM、约100nM至约55μM、约100nM至约50μM、约100nM至约45μM、约100nM至约40μM、约100nM至约35μM、约100nM至约30μM、约100nM至约25μM、约100nM至约20μM、约100nM至约15μM、约100nM至约10μM、约100nM至约5μM、约100nM至约1μM、约100nM至约900nM、约100nM至约800nM、约100nM至约700nM、约100nM至约600nM、约100nM至约500nM、约100nM至约400nM、约100nM至约300nM、约100nM至约200nM、约200nM至约100μM、约200nM至约95μM、约200nM至约90μM、约200nM至约85μM、约200nM至约80μM、约200nM至约75μM、约200nM至约70μM、约200nM至约65μM、约200nM至约60μM、约200nM至约55μM、约200nM至约50μM、约200nM至约45μM、约200nM至约40μM、约200nM至约35μM、约200nM至约30μM、约200nM至约25μM、约200nM至约20μM、约200nM至约15μM、约200nM至约10μM、约200nM至约5μM、约200nM至约1μM、约200nM至约900nM、约200nM至约800nM、约200nM至约700nM、约200nM至约600nM、约200nM至约500nM、约200nM至约400nM、约200nM至约300nM、约300nM至约100μM、约300nM至约95μM、约300nM至约90μM、约300nM至约85μM、约300nM至约80μM、约300nM至约75μM、约300nM至约70μM、约300nM至约65μM、约300nM至约60μM、约300nM至约55μM、约300nM至约50μM、约300nM至约45μM、约300nM至约40μM、约300nM至约35μM、约300nM至约30μM、约300nM至约25μM、约300nM至约20μM、约300nM至约15μM、约300nM至约10μM、约300nM至约5μM、约300nM至约1μM、约300nM至约900nM、约300nM至约800nM、约300nM至约700nM、约300nM至约600nM、约300nM至约500nM、约300nM至约400nM、约400nM至约100μM、约400nM至约95μM、约400nM至约90μM、约400nM至约85μM、约400nM至约80μM、约400nM至约75μM、约400nM至约70μM、约400nM至约65μM、约400nM至约60μM、约400nM至约55μM、约400nM至约50μM、约400nM至约45μM、约400nM至约40μM、约400nM至约35μM、约400nM至约30μM、约400nM至约25μM、约400nM至约20μM、约400nM至约15μM、约400nM至约10μM、约400nM至约5μM、约400nM至约1μM、约400nM至约900nM、约400nM至约800nM、约400nM至约700nM、约400nM至约600nM、约400nM至约500nM、约500nM至约100μM、约500nM至约95μM、约500nM至约90μM、约500nM至约85μM、约500nM至约80μM、约500nM至约75μM、约500nM至约70μM、约500nM至约65μM、约500nM至约60μM、约500nM至约55μM、约500nM至约50μM、约500nM至约45μM、约500nM至约40μM、约500nM至约35μM、约500nM至约30μM、约500nM至约25μM、约500nM至约20μM、约500nM至约15μM、约500nM至约10μM、约500nM至约5μM、约500nM至约1μM、约500nM至约900nM、约500nM至约800nM、约500nM至约700nM、约500nM至约600nM、约600nM至约100μM、约600nM至约95μM、约600nM至约90μM、约600nM至约85μM、约600nM至约80μM、约600nM至约75μM、约600nM至约70μM、约600nM至约65μM、约600nM至约60μM、约600nM至约55μM、约600nM至约50μM、约600nM至约45μM、约600nM至约40μM、约600nM至约35μM、约600nM至约30μM、约600nM至约25μM、约600nM至约20μM、约600nM至约15μM、约600nM至约10μM、约600nM至约5μM、约600nM至约1μM、约600nM至约900nM、约600nM至约800nM、约600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示例性实施方式
内窥镜、可摄入装置和含有药物的贮存器
胃肠道可以使用内窥镜成像，或者最近通过吞咽的可摄入装置成像。
标准结肠镜检查背后的技术由具有可操纵的尖端的长的、半刚性的插入管(如果与结肠相比是硬的)，其由医生从外面推动。然而，侵袭性、患者不适、对疼痛的恐惧，以及(通常)清醒镇静的需求限制了结肠镜检查的开展。胃肠道的诊断和治疗主要是使用柔性内窥镜。一些大公司，如奥林巴斯医疗系统公司(日本东京)、宾得医疗公司(美国新泽西州蒙特瓦尔)、富士康公司(美国新泽西州韦恩)和卡尔斯托兹有限公司(德国图特林根)，在柔性胃肠内窥镜领域占据了大部分市场。
内窥镜可包括导管。作为一个实例，导管可以是喷雾导管。作为一个实例，可以使用喷雾导管来输送用于诊断目的的染料。作为一个实例，喷雾导管可用于在胃肠道中的预期位点输送治疗剂。例如，Olypmus PW-205V是现成的喷雾导管，能够在内窥镜检查过程中有效地实现组织结构的最大分化，但也可用于输送药物。
内窥镜可包括导管。作为一个实例，导管可以是喷雾导管。作为一个实例，可以使用喷雾导管来输送用于诊断目的的染料。作为一个实例，喷雾导管可用于在胃肠道疾病位点输送治疗剂。例如，Olypmus PW-205V是现成的喷雾导管，能够在内窥镜检查过程中有效地实现组织结构的最大分化，但也可用于向患病组织输送药物。
在robotic endoscopic capsules,Journal of Micro-Bio Robotics 11.1-4(2016):1-18,Ciuti等中说明了在微型机电系统(MEMS)技术方面的进展，除了传统的粘膜可视化(嵌入如压力、酸碱度、血液检测和温度传感器)外，还促进了具有增强的诊断能力的新型内镜胶囊的开发。
然而，内窥镜胶囊不具备自动精确定位位点的能力。它们需要医生在一段时间内的监督，以便手动确定位置。在这方面，自主的可摄入装置是有利的。
可摄入装置也优于喷雾导管，因为它们具有较小的侵入性，从而允许比喷雾导管更频繁地定量施用。可摄入装置的另一个优点是，相对于导管，它们更容易进入胃肠道的某些部分，如升结肠、盲肠和小肠的所有部分。
定位的方法和机构
除了(或者作为一种替代)直接观察胃肠道，还可以使用一种或多种不同的机构来确定消化道内可摄入装置的位置。各种实施可用于在胃肠道内定位可摄入装置。例如，某些实施可包括一个或多个电磁传感器线圈、磁场、电磁波、电位值、超声波定位系统、伽马闪烁扫描技术或其它无线电跟踪器技术。或者，例如使用解剖标志或基于多个图像的更复杂的三维重建算法，成像可用于定位。其它的技术依赖于无线电频率，它依靠放置在身体外部的传感器来接收由胶囊发出的信号强度。也可根据装置周围介质中的反射光、pH值、温度、摄入后的时间和/或声音信号来定位可摄入装置。
本发明提供了一种可摄入装置以及相关系统和方法，其提供了以非常高的精度确定受试者胃肠道内可摄入装置的位置。在一些实施方式中，可摄入装置可以自主地确定其在受试者胃肠道内的位置。
通常，可摄取设备包括一个或多个处理设备和一个以上机器可读硬件存储设备。在一些实施方式中，一个或多个机器可读硬件存储设备存储可由一个或多个处理设备执行的指令，以确定可摄取设备在主题的胃肠道的一部分中的位置。在某些实施方式中，一个或多个机器可读硬件存储设备存储可由一个或多个处理设备执行的指令，以将数据传输到能够实现数据去数据的外部设备(例如，主体外部的基站，例如主体所穿戴物品上的基站)确定装置在受试者胃肠道内的位置。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者的胃肠道内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。在一些实施方式中，可摄入装置在受试者的胃肠道内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。在所述实施方式中，受试者的胃肠道部分可以包括(例如)食道、胃、十二指肠、空肠和/或末端回肠、盲肠和结肠。示例性和非限制性实施方式在下面的实施例14中提供。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者食管内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。示例性和非限制性实施方式在下面的实施例14中提供。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者胃内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。示例性和非限制性实施方式在下面的实施例14中提供。
在某些实施方式中，可摄入装置在受试者十二指肠内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。示例性和非限制性实施方式在下面的实施例14中提供。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者空肠内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。示例性和非限制性实施方式在下面的实施例14中提供。
在某些实施方式中，可摄入装置在受试者的末端回肠、盲肠和结肠内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者盲肠内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。示例性和非限制性实施方式在下面的实施例14中提供。在这样的实施方式中，主体胃肠道的所述部分可包括例如：食道、胃、十二指肠、空肠和/或末端回肠、盲肠和结肠。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者食管内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者胃内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。
在某些实施方式中，可摄入装置在受试者十二指肠内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者空肠内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。
在某些实施方式中，可摄入装置在受试者的末端回肠、盲肠和结肠内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。
在一些实施方式中，可摄入装置在受试者盲肠内的位置可以确定为至少85％、例如至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、100％的准确度。
如在此所述，术语“反射率”是指从由所述装置发出、反射回所述装置、并由所述装置中或所述装置上的探测器接收的光所得到的值。例如，在一些实施方式中，这是指由所述装置发出的光，其中光的一部分被装置外部表面反射，并且所述光由位于装置中或装置上的探测器接收。
如在此所用，术语“光照”是指任何电磁发射。在一些实施方式中，光照可在红外光(IR)、可见光谱和紫外光(UV)的范围内，并且光照可使其大部分的功率集中在100nm至1000nm范围内的特定波长。在一些实施方式中，有利地可使用这样的光照，其大部分功率限制到红外(750nm－1000nm)光谱、红(600nm－750nm)光谱、绿(495nm－600nm)光谱、蓝(400nm－495nm)光谱或紫外(100nm－400nm)光谱中的一种。在一些实施方式中，可使用具有不同波长的多种光照。为了例示目的，在此所述的实施方式可提到使用绿或蓝光谱的光。然而，应理解，这些实施方式可使用任何适合的光，其具有的波长大致或近似处于如上限定的绿或蓝光谱内，且在此所述的定位系统和方法可使用任何适合光谱的光。
现在参见图1，其中显示出可摄入装置100的示例性实施方式的图，其可用于识别胃肠(GI)道内的位置。在一些实施方式中，可摄入装置100可被构造为利用以不同波长光操作的传感器自主确定其是否位于胃、小肠的特定部分(诸如十二指肠、空肠或回肠)或者大肠中。此外，可摄入装置100可被构造为自主确定其是否位于小肠或大肠的特定部分(例如十二指肠、空肠、盲肠或结肠)内。
可摄入装置100可具有形状类似于药丸或胶囊的壳体102。可摄入装置100的壳体102可具有第一端部分104和第二端部分106。第一端部分104可包括第一壁部分108，并且第二端部分106可包括第二壁部分110。在一些实施方式中，可摄入装置100的第一端部分104和第二端部分106可分别制造，并可通过连接部分112固定到一起。
在一些实施方式中，可摄入装置100可包括光学透明窗114。光学透明窗114可对可见光谱、红外光谱或紫外光谱中的各种类型的光照是可透光的，并且可摄入装置100可具有位于壳体102内且在透明窗114之后的各种传感器和光照器。这可允许可摄入装置100被构造为以不同波长将光照通过透明窗114传输到可摄入装置100的壳体102外的环境，并探测从壳体102外的环境通过透明窗114反射回的部分光照的反射率。可摄入装置100然后可使用探测到的反射率水平，以为了确定可摄入装置100在胃肠道中的位置。在一些实施方式中，光学透明窗114可为任意形状和尺寸，并可围绕可摄入装置100的周边卷绕。在此情况下，可摄入装置100可具有位于窗114之后不同方位位置的多组传感器和光照器。
在一些实施方式中，可摄入装置100可以可选地包括在第二壁部分110中的开口116。在一些实施方式中，第二壁部分110可被构造为围绕可摄入装置100的纵向轴线旋转(例如经由装容在可摄入装置100内的适合马达或其它致动器)。这可允许可摄入装置100通过开口116获取来自于胃肠道的流体样本、或者将物质释放到胃肠道中。
图2显示出可摄入装置100的分解图。在一些实施方式中，可摄入装置100可以可选地包括旋转组件118。可选的旋转组件118可包括：马达118-1，其通过微控制器(例如联接到印刷电路板120的微控制器)驱动；旋转位置传感环118-2；和存储子单元118-3，其被构造为紧密装配到第二端部分104内。在一些实施方式中，旋转组件118可以使第二端部分104和开口116相对于存储子单元118-3旋转。在一些实施方式中，存储子单元118-3的侧面上可存在腔，其用作储存室。当开口116对准存储子单元118-3的侧面上的腔时，存储子单元118-3的侧面上的腔可暴露于可摄入装置100的壳体102外部的环境。在一些实施方式中，在可摄入装置100被送给到主体之前，存储子单元118-3可被加载以药剂或其它物质。在此情况下，通过使开口116对准存储子单元118-3内的腔，药剂或其它物质可从可摄入装置100释放。在一些实施方式中，存储子单元118-3可被构造为保持从胃肠道获取的流体样本。例如，可摄入装置100可被构造为使开口116对准存储子单元118-3内的腔，从而允许来自胃肠道的流体样本进入存储子单元118-3内的腔。此后，可摄入装置100可被构造为：通过使第二端部分106相对于存储子单元118-3进一步旋转而将流体样本密封到存储子单元118-3内。在一些实施方式中，存储子单元118-3还可包括亲水海绵，其可使可摄入装置100能够更好地将特定类型流体样本抽入可摄入装置100中。在一些实施方式中，响应于确定可摄入装置100已到达胃肠道内的预定位置，可摄入装置100可被构造为从胃肠道内获取样本或者将物质释放到胃肠道中。例如，可摄入装置100可被构造为：响应于确定可摄入装置已进入小肠的空肠部分中(例如，如参照图9所述过程900所确定)，从胃肠道获取流体样本。能够获取样本或者释放物质的其它可摄入装置在以下文件中论述：2013年2月15日递交的共同转让的PCT申请号PCT/CA2013/000133、共同转让的美国临时申请号62/385,553和共同转让的美国临时申请号62/376,688，这些文件中的每一者均在此全文通过引用并入本文。应理解，获取样本或释放物质的任何适合方法可并入在此公开的可摄入装置的一些实施方式中，并且用于确定可摄入装置的位置的系统和方法可并入任何适合类型的可摄入装置中。
可摄入装置100可包括印刷电路板(PCB)120、和被构造为给PCB 120提供电力的电池128。PCB 120可包括：可编程的微控制器；和控制和记忆电路，用于保持和执行用于协调可摄入装置100以及可摄入装置100各个部件的操作的固件或软件。例如，PCB 120可包括记忆电路，其用于存储数据，例如通过传感子单元126收集的测量值数据组、或由控制电路执行的用于实现定位过程(诸如例如，在此所述的一个或多个过程，包括以下结合一个或多个相关联的流程图所述的过程)的指令。PCB 120可包括探测器122和光照器124，它们一起形成传感子单元126。在一些实施方式中，PCB 120内的控制电路可包括处理单元、通信电路、或用于操作可摄入装置100的任何其它适合类型的电路。为了例示目的，仅显示出形成单个传感子单元126的单个探测器122和单个光照器124。然而，应理解，在一些实施方式中，可摄入装置100内可存在多个传感子单元，每个传感子单元具有分立的光照器和探测器。例如，可以存在围绕PCB 120的周边沿方位角分开的多个传感子单元，多个传感子单元可以使可摄入装置100能够发送光照并且沿所述装置的周边各方向探测反射率或环境光。在一些实施方式中，传感子单元126可被构造为使用光照器124产生光照，光照被导引通过窗114，沿径向方向远离可摄入装置100。这种光照可反映出可摄入装置100外的环境，并且通过窗114回到可摄入装置100中的反射光可由探测器122探测反射率。
在一些实施方式中，窗114可为任何适合的形状和尺寸。例如，窗114可围绕可摄入装置100的全周边延伸。在一些实施方式中，可存在多个传感子单元(例如类似于传感子单元126)，它们位于窗后的不同位置。例如，三个传感子单元可位于窗后，处于相同的纵向位置，但沿方位角分开120度。这可使可摄入装置100能够围绕可摄入装置100沿径向各方向传输光照并测量每个对应的反射率。
在一些实施方式中，光照器124可以能够产生在紫外、红外或可见光谱中的各种不同波长的光照。例如，光照器124可使用红-绿-蓝发光二极管包封件(RGB-LED)实现。这些类型的RGB-LED包封件能够传输红、蓝或绿光照、或者红、蓝或绿光照的组合。类似地，探测器122可被构造为传感与光照器124所产生光照波长相同的反射光。例如，如果光照器124被构造为产生红、蓝或绿光照，则探测器122可被构造为探测由红、蓝或绿光照产生的不同反射率(例如通过使用适合构造的光电二极管)。这些探测到的反射率可由可摄入装置100存储(例如存储到PCB 120的记忆电路内)，并且然后可以由可摄入装置100使用以确定可摄入装置100在胃肠道内的位置(例如通过使用过程500(图5)，过程600(图6)或过程900(图9))。
应理解，可摄入装置100意在为例示性的，而非限制性的。应理解，对关于图1和图2所述的各种装置和机构的整体形状和结构的修改可在不显著改变所述装置和机构的功能和操作的情况下进行。例如，可摄入装置100的壳体可以通过单一件模制塑料形成，而不是分为第一端部分104和第二端部分106。作为可替代示例，窗114在可摄入装置100内的位置可以移动到一些其它位置，例如可摄入装置100的中心，或者移动到可摄入装置100的一个端部。另外，关于图1－10所述的系统和方法可实现在任何适合类型的可摄入装置上，只要可摄入装置能够探测一定量光照的反射率或水平。例如，在一些实施方式中，可摄入装置100可修改为将探测器122替换为图像传感器，并且可摄入装置可被构造为通过将记录的图像分解为其各个光谱分量而测量红、蓝或绿光的相对水平。具有定位能力的可摄入装置的其它示例(可用于实施关于图1－11所述的系统和方法)在2015年9月25日提交的共同拥有的PCT申请号PCT/US2015/052500中论述，该申请通过引用全文并入本文。另外，应注意，在任一实施方式中所述的特征和限定可应用于本文中的任何其它实施方式，并且关于一个实施方式的描述和示例可与任何其它实施方式以适合方式组合。
图3是根据本公开内容的一些实施方式的可摄入装置在示例性转移通过胃肠(GI)道的过程中的示意图。可摄入装置300可包括本公开内容中所述任意其它可摄入装置(例如可摄入装置100(图1))的任意部分，并且可为具有定位能力的任意适合类型的可摄入装置。例如，可摄入装置300可为可摄入装置100的一个实施方式，而没有可选的开口116(图1)或者可选的旋转组件118(图2))。在一些实施方式中，可摄入装置300可被主体摄入，并且当可摄入装置300穿过胃肠道时，可摄入装置300可被构造为确定其在胃肠道内的位置。例如，可摄入装置300的运动和可摄入装置300探测(例如通过探测器122(图2))的光的量可显著不同，取决于可摄入装置300在胃肠道内的位置，并且可摄入装置300可被构造为使用此信息确定可摄入装置300在胃肠道内的位置。例如，可摄入装置300可探测来自周围环境的环境光或基于由可摄入装置300产生(例如由光照器124(图1)产生)的光照的反射率，并使用此信息确定可摄入装置300在整个过程中的位置，例如在本文中所述。可摄入装置300的当前位置以及可摄入装置300探测在胃肠道各个部分之间每次转移的时间然后可以通过可摄入装置300存储(例如存储在PCB 120(图2)的记忆电路中)，并可用于任何适合目的。
当可摄入装置300被摄入之后不久，可摄入装置将穿过食道302，其可将主体的嘴连接到胃306。在一些实施方式中，可摄入装置300可被构造为：通过测量可摄入装置300周围环境中的光的量和类型(例如通过探测器122(图2))而确定其已进入食道部分胃肠道。例如，与在胃肠道内时探测到的光水平相比，当在主体体外时，可摄入装置300可在可见光谱中探测到更高的光水平(例如通过探测器122(图2))。在一些实施方式中，可摄入装置300可预先存储数据(例如存储在PCB 120(图2)的记忆电路上)而指示当处于体外时典型的光水平，并且可摄入装置300可被构造为当(例如通过探测器122(图2)探测)的已探测光水平已减至超出阈值水平(例如减少至少20－30％)持续足够时段(例如5秒)时确定进入体内已发生。
在一些实施方式中，可摄入装置300可被构造为通过经过括约肌304而探测从食道302到胃306的转移。在一些实施方式中，可摄入装置300可被构造为至少部分地基于多个参数而确定其是否已进入胃306，所述参数例如但不限于：使用光或温度测量值(例如经由探测器122(图2)或经由可摄入装置300内的温度计)、pH测量值(例如经由可摄入装置300内的pH计)、时间测量值(例如通过使用PCB 120(图2)内包括的时钟电路探测)或者任何其它适合信息。例如，可摄入装置300可被构造为：当探测到可摄入装置300的测量温度超过31摄氏度之后，确定可摄入装置300已进入胃306。另外地或可替代地，可摄入装置300可被构造为：从可摄入装置300被摄入起经过一分钟(或另一预设持续时间参数，80秒、90秒等)或者从可摄入装置300探测到其已进入胃肠道起一分钟(或另一预设持续时间参数，80秒、90秒等)之后，自动确定其已进入胃306。
胃306是相对较大的、开放的并且空腔状的器官，并且因而可摄入装置300可具有相对较大的运动范围。通过比较，可摄入装置300的运动相对被限制在十二指肠310、空肠314和回肠(未示出)(它们共同形成小肠)的管状结构内。此外，胃306的内部具有与十二指肠310和空肠314不同的光学性能，这可使可摄入装置300能够通过适当使用测量到的反射率(例如通过使用由探测器122(图2)测量到的反射率)而探测从胃306到十二指肠310的转移，如结合过程600(图6)所用。
在一些实施方式中，可摄入装置300可被构造为探测从胃306经幽门308到十二指肠310的幽门转移。例如，在一些实施方式中，可摄入装置300可以被构造为定期地产生绿和蓝光波长的光照(例如经由光照器124(图2))，并测量形成的反射率(例如经由探测器122(图2))。可摄入装置300可被构造为然后使用探测到的绿光反射率与探测到的蓝光反射率的比率确定可摄入装置300是否位于胃306或十二指肠310内(例如经由过程600(图6))。进而，这可使可摄入装置300能够探测从胃306到十二指肠310的幽门转移，其示例关于图6论述。
类似地，在一些实施方式中，可摄入装置300可被构造为探测从十二指肠310到胃306的逆向幽门转移。可摄入装置300将典型地自然从胃306转移到十二指肠310，并向前到空肠314和胃肠道其余部分。然而，类似于其它被摄入物质，可摄入装置300由于主体的运动或由于器官胃肠道的自然行为而可能偶然从十二指肠310转移回到胃306。为调解这种可能性，可摄入装置300可被构造为继续定期地产生绿和蓝光波长的光照(例如经由光照器124(图2))，并测量形成的反射率(例如经由探测器122(图2))以探测是否可摄入装置300已返回到胃306。示例性探测过程参照图6更详细描述。
在进入十二指肠310之后，可摄入装置300可被构造为探测通过十二指肠空肠曲312向空肠314的转移。例如，可摄入装置300可被构造为使用反射率探测空肠314内的蠕动波，其由于使空肠314的壁起皱的平滑肌组织收缩所致。特别地，可摄入装置300可被构造为以足够高频率开始定期发出光照(并测量形成的反射率(例如经由探测器122和传感子单元126(图2)的光照器124)，以探测空肠314内的肌肉收缩。可摄入装置300然后可响应于已探测到首次肌肉收缩或者预定数量的肌肉收缩(例如在已依次探测到三次肌肉收缩之后)而确定其已进入空肠314。可摄入装置300与空肠314的壁的相互作用还参照图4论述，并且这种探测过程的示例参照图9更详细描述。
图4是根据本公开内容的一些实施方式的可摄入装置在示例性转移通过空肠的过程中的示意图。示意图410、420、430和440图示出在可摄入装置400穿过空肠(例如空肠314)时的可摄入装置400和可摄入装置400如何与由空肠壁406A和406B(共同为壁406)形成的蠕动波相互作用。在一些实施方式中，可摄入装置400可包括在此公开内容中所述的任何其它可摄入装置(例如可摄入装置100(图1)或可摄入装置300(图3))的任何其它部分，并可以为具有定位能力的任意适合类型的可摄入装置。例如，可摄入装置400可大致类似于可摄入装置300(图3)或者可摄入装置100(图1)，其中窗404与窗114(图1)相同，并且传感子单元402与传感子单元126(图2)相同。
示意图410图示出空肠内的可摄入装置400，此时空肠的壁406放松。在一些实施方式中，空肠的狭窄的管状结构自然使可摄入装置400沿空肠长度沿纵向取向，其中窗404面对壁406。在此取向下，可摄入装置400可使用传感子单元402以产生朝向壁406取向的光照(例如经由光照器124(图2))，并(例如经由探测器122(图2))探测从壁406反射并且向回通过窗404的光照部分的形成的反射率。在一些实施方式中，可摄入装置400可被构造为使用传感子单元402产生光照并以足够频率测量形成的反射率，以探测空肠内的蠕动波。例如，在健康人类受试者中，蠕动波可以约0.1Hz至0.2Hz的速率发生。因此，可摄入装置400可被构造为产生光照并每2.5秒至少一次测量形成的反射率(即，探测0.2Hz的信号必需的最小速率)，并且优选地以更高速率(例如每0.5秒一次)，这由于更多可用数据点而可以改善总体探测过程的可靠性。应理解，可摄入装置400不需以精确时间间隔搜集测量值，并且在一些实施方式中，可摄入装置400可被适配为分析以更不规则的时间间隔搜集的数据，只要仍有足够数量的适当分开的数据点来探测0.1Hz至0.2Hz的信号。
示意图420图示出空肠内的可摄入装置400，此时空肠的壁406开始收缩并形成蠕动波。示意图420示出壁406A的收缩部分408A和壁406B的收缩部分408B(共同为壁406的收缩部分408)，其在空肠内形成蠕动波。蠕动波随壁406的不同部分收缩和松开而沿空肠长度行进，使其显现如同壁406的收缩部分408沿空肠长度行进(即，如收缩部分408在示意图410-430中从左向右行进所示)。在此位置时，可摄入装置400可以探测(例如通过使用光照器124和传感子单元126(图2)的探测器122)的反射率水平可与未发生蠕动波时探测(例如当可摄入装置400处于示意图410中所示位置时探测)的反射率类似。
示意图430图示出空肠内的可摄入装置400，此时空肠的壁406继续收缩，围绕可摄入装置400挤压。随着蠕动波沿空肠长度行进，壁406的收缩部分408可围绕可摄入装置400紧密挤压，使壁406的内表面接触窗404。在此位置时，可摄入装置400可以探测由于传感子单元402所产生光照的探测的反射率的变化。测量的反射率的变化的绝对值可取决于多个因素，例如，窗404的光学性能、光照的光谱分量和壁406的光学性能。然而，可摄入装置400可以被构造为随时间推移而存储具有反射率值的数据组，并在数据组中搜索与蠕动波频率一致的周期性变化(例如通过分析频率域中的数据组并搜索0.1Hz至0.2Hz之间的峰值)。这可使可摄入装置400能够探测由于蠕动波所致的肌肉收缩，无需预先知晓由于探测蠕动波的肌肉收缩可能发生的反射率信号幅度的确切变化。用于探测肌肉收缩的示例性进程参照图9进一步论述，并且当可摄入装置400位于空肠内时搜集的反射率数据组的示例参照图10论述。
示意图440图示出空肠内的可摄入装置400，此时蠕动波已移动经过可摄入装置400。示意图440图示出形成空肠内的已移动经过可摄入装置400的端的蠕动波的收缩部分408。蠕动波随壁406的不同部分收缩和松开而沿空肠长度行进，使其显现如同壁406的收缩部分408沿空肠长度行进(即，如收缩部分408在示意图410-430中从左向右行进所示)。在此位置时，可摄入装置400可以探测(例如通过使用光照器124和传感子单元126(图2)的探测器122)的反射率水平与未发生蠕动波时探测(例如当可摄入装置400处于示意图410或示意图420中所示位置时探测)的反射率水平类似。
根据受试者的物种，蠕动波可相对以相对可预计的规律发生。在蠕动波已经过可摄入装置400之后(例如如示意图440中所示)，空肠的壁406可再次放松(例如如示意图410中所示)，直到下一蠕动波开始形成。在一些实施方式中，可摄入装置400可被构造为当其处于胃肠道内时继续搜集反射率值数据，并可随时间推移而存储具有反射率值的数据组。这可以允许可摄入装置400随着蠕动波经过可摄入装置400(例如如示意图430中所示)而探测每次肌肉收缩，并可使可摄入装置400能够对发生的肌肉收缩数量计数并确定可摄入装置400在空肠内的当前位置。例如，可摄入装置400可被构造为当处于胃或十二指肠内时监测可能的肌肉收缩，并响应于探测与蠕动波一致的肌肉收缩而可以确定可摄入装置400已移动到空肠。
图5是例示出可摄入装置所用的定位过程的一些方面的流程图。虽然图5出于例示目的可结合可摄入装置100描述，但是这不意在限制性的，并且图5中所述定位进程500的任一部分或全部可应用于本申请中所述的任意装置(例如可摄入装置100,300和400)，并且任意可摄入装置可用于执行图5中所述过程的一个或多个部分。另外，图5的特征可以与本申请中所述的任何其它系统、方法或过程组合。例如，图5中的过程的一部分可集成于图6所述的幽门转移探测进程或者按图9所述的空肠探测过程或与所述探测进程或过程组合。
在502处，可摄入装置(例如可摄入装置100,300,400)搜集环境光的测量值(例如通过探测器122(图2))。例如，可摄入装置100可被构造为定期地测量可摄入装置100周围的环境中的环境光的水平(例如通过探测器122(图2))。在一些实施方式中，被测量的环境光的类型可取决于可摄入装置100内的探测器122的构造。例如，如果探测器122被构造为探测红、绿和蓝波长的光，则可摄入装置100可被构造为测量来自周围环境的环境红、绿、蓝光的量。在一些实施方式中，与可摄入装置100当处于食道、胃或胃肠道其它部分(例如食道302、胃306、十二指肠310或空肠314(图3))内时测量到的环境光水平相比，由可摄入装置100在体外区域中(例如在将可摄入装置100给送给到主体的照明良好的房间)和在主体口腔中测量到的环境光的量将会更大。
在504处，可摄入装置(例如可摄入装置100,300或400)确定(例如经由PCB 120(图2)内的控制电路)是否已探测到可摄入装置进入胃肠道中。例如，可摄入装置100可被构造确定何时环境光的最近测量值(例如在502处搜集的测量值)指示可摄入装置已进入胃肠道。例如，在首次可摄入装置100在502处搜集环境光测量值时，可摄入装置100可将测量值存储(例如经由PCB 120(图2)内的存储电路实现)为体外环境光的典型水平。可摄入装置100可被构造为然后将环境光的最近测量值与体外环境光的典型水平比较(例如经由PCB120(图2)内的控制电路)，并当环境光最近测量值显著小于体外环境光的典型水平时确定可摄入装置100已进入胃肠道。例如，可摄入装置100可被构造为响应于确定环境光的最近测量值小于或等于体外环境光的典型水平的20％，探测到其已进入胃肠道。如果可摄入装置100确定已探测到进入到胃肠道中(例如可摄入装置100已至少进入食道302(图3))，则过程500行进到506。可替代地，如果可摄入装置100确定没有探测到进入胃肠道中(例如由于最近测量值类似于体外环境光的典型水平)，则过程500行进回到502，其中可摄入装置100搜集进一步的测量值。例如，可摄入装置100可被构造为等待预定的时间量(例如5秒、10秒，等等)，并且然后从可摄入装置100的周围环境搜集环境光水平的另一测量值。
在506处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)等待从食道转移到胃(例如从食道302到胃306(图3))。例如，可摄入装置100可被构造为在已进入胃肠道之后等待预定时段之后，确定其已进入胃(例如胃306(图3))。例如，人类患者中典型的食道转移时间可在15-30秒的量级。在此情况下，在已探测到在504处可摄入装置100已进入胃肠道之后(即，在探测到可摄入装置100已至少到达食道302(图3)之后)，可摄入装置100可被构造为在自动确定可摄入装置100至少已进入胃(例如胃306(图3))之前等待一分钟、或者长于典型食道转移时间的类似时间量(例如90秒)。
在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)也可基于pH或温度的测量值确定其已进入胃。例如，可摄入装置100可被构造为当可摄入装置的温度已增大到至少31摄氏度(即，与胃内的温度一致)时或者当可摄入装置100周围环境的测量的pH足够酸(即，与可在胃内出现的胃液的酸性一致)时确定其已进入胃。
在508处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)存储指示出可摄入装置已进入胃(例如胃306(图3))的数据。例如，当在506处已等待足够时间量之后，可摄入装置100可存储指示可摄入装置100至少已进入胃的数据(例如存储到PCB 120(图2)的存储电路内)。一旦可摄入装置100至少到达胃，则过程500行进到510，在此，可摄入装置100可被构造为搜集数据以探测进入十二指肠(例如十二指肠310(图3))。
在一些实施方式中，过程500也可以从508到520同时进行，其中，可摄入装置100可被构造为搜集数据，以探测肌肉收缩和探测进入空肠(例如空肠314(图3))中。在一些实施方式中，可摄入装置100可被构造为在516－518同时监测进入十二指肠中以及在520－524探测进入空肠中。这可以允许可摄入装置100确定何时其已进入空肠(例如由于探测肌肉收缩而确定)、甚至何时其未能首先探测到进入十二指肠(例如由于可摄入装置通过十二指肠的极快转移时间所致)。
在510处，当在胃(例如胃306(图3))中时，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)搜集绿和蓝光反射率水平的测量值(例如通过使用光照器124和传感子单元126(图2)的探测器122)。例如，可摄入装置100可被构造为当在胃中时定期地搜集绿和蓝光反射率水平的测量值。例如，可摄入装置100可被构造为每5至15秒发出绿色光照和蓝色光照(例如经由光照器124(图2))，并且测量形成的反射率(例如经由探测器122(图2))。每次可摄入装置100搜集新的测量值组，测量值可被添加到存储的数据组(例如存储到PCB 120(图2)的记忆电路内)。可摄入装置100然后可使用此数据组确定是否可摄入装置100仍在胃(例如胃306(图3))或十二指肠(例如十二指肠310(图3))内。
在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)可被构造为基于产生约为绿色光谱(在495－600nm)的第一波长的光照探测第一反射率，和基于产生约为蓝色光谱(在400－495nm)的第二波长的光照探测第二反射率。在一些实施方式中，可摄入装置可确保绿色光谱的光照和蓝色光谱的光照具有分离至少50nm的波长。这可使可摄入装置100能够当探测反射率(例如经由探测器122(图2))时在两个波长之间充分区别。应理解，分离50nm意在例示性的，而非限制性的，而且根据可摄入装置100内的探测器的准确性，也可使用较小的分离。
在512处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)确定(例如使用PCB 120(图2)内的控制电路)是否可摄入装置基于绿和蓝(G/B)反射率水平的比率已探测到从胃(例如胃306(图3))转移到十二指肠(例如十二指肠310(图3))。例如，可摄入装置100可以(例如从PCB 120(图2)的记忆电路)获取数据组，其包含在相应时间测量的绿光反射率与蓝光反射率的相应比率的历史数据。通常而言，与由胃(例如胃306(图3))反射的绿光与蓝光的比率相比，人类主体的十二指肠(例如十二指肠310(图3))反射的绿光与蓝光的比率会更高。基于此，可摄入装置100可被构造为：提取体现最近测量结果的数据组中的第一组比率，并将其与体现过去测量结果的数据组中的第二组比率比较。当可摄入装置100确定第一组比率的平均值显著大于第二组比率的平均值(即，反射绿光与反射蓝光的比率增大)时，可摄入装置100可确定其已从胃(例如胃306(图3)进入十二指肠(例如十二指肠310(图3))。如果可摄入装置100探测到从胃(例如胃306(图3))转移到十二指肠(例如十二指肠310(图3))，则过程500行进到514，其中可摄入装置100存储指示可摄入装置100已进入十二指肠(例如十二指肠310(图3))的数据。可替代地，如果可摄入装置确定可摄入装置尚未从胃(例如胃306(图3))转移到十二指肠(例如十二指肠310(图3))，则过程500行进回到510以当仍处于胃(例如胃306(图3))中时搜集更多的绿和蓝光反射率水平的测量值。用于使用绿和蓝光反射率测量值监测在胃与十二指肠之间的转移的示例性进程参照图6更详细论述。
在一些实施方式中，在第一次可摄入装置100探测到从胃(例如胃306(图3))转移到十二指肠(例如十二指肠310(图3))时，可摄入装置100可被构造为提取第二组数据(例如在胃306(图3)中时先前记录的数据组)的平均值，并将其存储为胃(例如胃306(图3))内探测到的绿光与蓝光的典型比率(例如存储到PCB 120(图2)的记忆电路内)。此存储的信息可在此后由可摄入装置100使用以确定何时可摄入装置100由于逆向幽门转移而从十二指肠(例如十二指肠310(图3))再次进入胃(例如胃306(图3))。
在514处，可摄入装置(例如可摄入装置100,300或400)存储指示出可摄入装置已进入十二指肠(例如十二指肠310(图3))中的数据。例如，可摄入装置100可将标志存储到本地记忆体(例如PCB 120的记忆电路)内，指示出可摄入装置100当前处于十二指肠中。在一些实施方式中，可摄入装置100也可存储时间戳，指示出可摄入装置100进入十二指肠时的时间。一旦可摄入装置100到达十二指肠，则过程500行进到520，其中，可摄入装置100可被构造为搜集数据以探测肌肉收缩和探测进入空肠(例如空肠314(图3))中。过程500也从514行进到516，其中，可摄入装置100可被构造为搜集额外数据以探测从十二指肠(例如十二指肠310(图3))再次进入胃(例如胃306(图3))中。
在516处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)当在十二指肠(例如十二指肠310(图3))中时搜集绿和蓝光反射率水平的测量值(例如经由传感子单元126(图2))。例如，可摄入装置100可被构造为当在十二指肠中时定期地搜集绿和蓝光反射率水平的测量值(例如经由传感子单元126(图2))，类似于当在胃中时在510处实现的测量值。例如，可摄入装置100可被构造为每5至15秒发出绿色光照和蓝色光照(例如经由光照器124(图2))，并且测量形成的反射率(例如经由探测器122(图2))。每次可摄入装置100搜集新的测量值组，测量值可被添加到存储的数据组(例如存储到PCB 120(图2)的记忆电路内)。可摄入装置100然后可使用此数据组确定是否可摄入装置100仍处于十二指肠(例如十二指肠310(图3))内或者是否可摄入装置100已转移回到胃(例如胃306(图3))中。
在518处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)基于测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率确定从十二指肠(例如十二指肠310(图3))到胃(例如胃306(图3))的转移。在一些实施方式中，可摄入装置100可比较由可摄入装置100最近搜集的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率(例如在516搜集的测量值)，并确定是否测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率类似于胃(例如胃306(图3))中所见测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率。例如，可摄入装置100可以(例如从PCB 120(图2)的记忆电路)取回指示出胃中所见测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率的数据，并当测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的最近测量比率充分类似于胃中的平均水平(例如处于胃中所见的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率的20％范围内，或处于任何其它适合阈值水平内)时，确定可摄入装置100已转移回到胃。如果可摄入装置探测到从十二指肠(例如十二指肠310(图3))转移到胃(例如胃306(图3))，则过程500行进到508以存储指示出可摄入装置已进入胃(例如胃306(图3))的数据，并且继续监测进一步的转移。可替代地，如果可摄入装置没有探测到从十二指肠(例如十二指肠310(图3))转移到胃(例如胃306(图3))，则过程500行进到516以当在十二指肠(例如十二指肠310(图3))中时搜集额外的绿和蓝光反射率水平测量值，其可用于连续监测可能的回到胃中的转移。用于使用绿和蓝光反射率测量值监测在胃与十二指肠之间的转移的示例性进程参照图6更详细论述。
在520处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)当在十二指肠(例如十二指肠310(图3))中时搜集反射率水平的周期性测量值(例如经由传感子单元126(图2))。在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100,300或400)也可以当在胃中时搜集类似的周期性测量值。在一些实施方式中，这些周期性测量值可以使可摄入装置100能够探测肌肉收缩(例如由于参照图4所述的蠕动波的肌肉收缩)，其可指示出进入到空肠(例如空肠314(图3))中。可摄入装置100可被构造为使用任何适合波长的光照(例如通过使用光照器124产生光照并使用探测器122(图2)探测形成的反射率)或波长组合的光照搜集周期性测量值。例如，在一些实施方式中，可摄入装置100可被构造为产生红、绿和蓝光照，存储指示红、绿和蓝光照的分离数据组，并分别分析每个数据组以在记录数据中搜寻指示出探测到肌肉收缩的频率分量。在一些实施方式中，由可摄入装置100在520搜集的测量值可以足够快以探测主体中的蠕动波。例如，在健康人类受试者中，蠕动波可以约0.1Hz至0.2Hz的速率发生。因此，可摄入装置400可以被构造为产生光照并每2.5秒至少一次(即，探测0.2Hz的信号必需的最小速率)，并且优选地以更高速率(例如每0.5秒一次或更快)测量形成的反射率，并将指示形成的反射率的值存储到数据组中(例如在PCB 120(图2)的记忆电路内)。当搜集额外数据之后(例如当搜集一个新的数据点或预定数量的新数据点之后)，过程500行进到522，其中可摄入装置100确定是否已探测到肌肉收缩。
在522处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)基于反射率水平的测量值(例如由传感子单元126(图2)所搜集)确定是否可摄入装置探测到肌肉收缩(例如经由PCB120(图2)内的控制电路)。例如，可摄入装置100可以获取存储为在520进行的测量值结果的固定量的数据(例如从PCB 120(图2)内的记忆电路中取回上一分钟的数据)。可摄入装置100然后可将获取的数据转变为频率域，并在将与蠕动波一致的频率范围内搜寻峰值。例如，在健康的人类主体中，蠕动波可以约0.1Hz至0.2Hz的速率发生，并且可摄入装置100可被构造为高于阈值的在0.1Hz至0.2Hz之间的数据的频率域表现中搜寻峰值。如果可摄入装置100基于反射率水平探测到收缩(例如基于探测到在0.1Hz至0.2Hz之间的数据的频率域表现中探测到峰值)，则过程500行进到524以存储指示出所述装置已进入空肠的数据。可替代地，如果可摄入装置100没有探测到肌肉收缩，则过程500行进到520以当在十二指肠(例如十二指肠310(图3))中时搜集反射率水平的周期性测量值。在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100,300或400)可存储指示探测到肌肉收缩的数据(例如存储到PCB120(图2)的记忆电路内)，并且直到已探测到足够数量的肌肉收缩，过程500才从522进行到524。
在524处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)存储指示出所述装置已进入空肠(例如空肠314(图3))的数据(例如到PCB 120(图2)的记忆电路内)。例如，响应于在522处探测到肌肉收缩已发生，可摄入装置100可确定其已进入空肠314，而不再处于十二指肠(例如十二指肠310(图3))或者胃(例如胃306(图3))内。在一些实施方式中，可摄入装置100可当在空肠中时继续测量肌肉收缩，并且可存储指示出肌肉收缩随时间推移的频率、数量或者强度的数据(例如到PCB 120(图2)的记忆电路内)。在一些实施方式中，可摄入装置100也可被构造为监测一次获多次转移。这样的转移可包括从空肠到回肠的转移，从回肠到盲肠的回盲肠转移，从盲肠到结肠的转移，或者探测从身体的离开(例如通过测量反射率、温度或环境光水平)。
在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)也可在已探测到进入十二指肠(例如十二指肠310(图3))之后已经过预定时间量之后确定其已进入空肠(例如空肠314(图3))。例如，除非发生从十二指肠(例如十二指肠310(图3))回到胃(例如胃306(图3))的逆向幽门转移，否则可摄入装置从健康人类主体中的十二指肠达到空肠的典型转移时间少于三分钟。在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100,300或400)可因而被构造为当在十二指肠内经过至少三分钟之后自动确定其已进入空肠。这种确定可独立于基于测量的肌肉收缩所进行的确定(例如在522进行的确定)而进行，并且在一些实施方式中，可摄入装置100可响应于探测到肌肉收缩或者从已进入十二指肠(例如，如通过在514处存储指示出可摄入装置进入十二指肠的时间的数据而确定)起经过三分钟之后而确定其已进入空肠。
为例示目的，过程500的512－518描述可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)测量绿光反射率和蓝光反射率，计算两种反射率的比率，并使用此信息确定何时可摄入装置在十二指肠与胃之间转移。然而，在一些实施方式中，可使用其它波长的光，而非绿光和蓝光，只要所选光的波长在胃和十二指肠内具有不同的反射性能(例如由于胃组织和十二指肠组织的不同的反射系数)。
应理解，本公开内容的流程图(包括图5)的步骤和描述仅为例示性的。流程图(包括图5)的任何步骤和描述可修改、省略、重新布置和以可替代顺序或并行地执行，两个或更多个步骤可组合，或者可增加任意额外的步骤，而不背离本公开内容的范围。例如，可摄入装置100可并行地计算多个数据组的平均值和标准偏差以加速总计算时间。作为另一示例，可摄入装置100可搜集数据周期性测量值和探测可能的肌肉收缩(例如在520－522处)，而同时搜集绿和蓝光反射率水平以确定往来于胃和十二指肠的转移(例如在510－518)。另外，应注意，图5的步骤和描述可与本申请中所述任何其它系统、装置或方法(包括过程600(图6)和900(图9))组合，并且在本申请中所述的任何可摄入装置或系统(例如可摄入装置100,300或400)可用于执行图5中的一个或多个步骤。
图6是根据本公开内容的一些实施方式的流程图，例示出用于探测从胃到十二指肠以及从十二指肠回到胃的转移的过程的一些方面，可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠(GI)道时的位置时使用。在一些实施方式中，过程600可以在可摄入装置首先探测到其已进入胃时开始，并且只要可摄入装置确定其处于胃或十二指肠内将继续。在一些实施方式中，过程600可以仅当可摄入装置确定其已进入空肠时被终止，或者以其它方式进行通过十二指肠和胃。虽然图6为例示目的可结合可摄入装置100描述，但是这并非限制性的，并且图6中所述的十二指肠探测过程600的任一部分或全部可应用于本申请中所述的任意装置(例如可摄入装置100,300或400)，并且任意可摄入装置可用于执行图6中所述过程的一个或多个部分。另外，图6的特征可以与本申请中所述的任何其它系统、方法或过程组合。例如，通过图6中的过程所述的过程的一部分可集成于参照图5所述的过程500中。
在602处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)取回数据组(例如从PCB120(图2)内的记忆电路取回)，其中具有随时间推移的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率。例如，可摄入装置100可从PCB120取回数据组，该数据组包含最近记录的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率(例如，如在过程500(图5)的510或516处记录的)。在一些实施方式中，已取回的数据组可包括随时间推移的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率。测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率的数据组的示例性线图参照图7和图8进一步论述。
在604处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)包括在数据组中的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率的新测量值(例如通过传感子单元126(图2)进行)。例如，可摄入装置100可被构造为：通过发出绿色和蓝色光照(例如经由光照器124(图2))而偶尔记录新数据，探测由于绿色和蓝色光照而接收的反射率的量(例如通过探测器122(图2)实现)，并(例如在PCB 120(图2)的记忆电路中)存储指示出所接收反射率的量的数据。可摄入装置100可以被构造为每5－15秒、或以任意其它方便的时间间隔记录新数据。为了例示目的，可摄入装置100被描述为存储和取回测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率(例如，如果在给定时间探测的绿光反射率的量等于探测的蓝光反射率的量，则在所述给定时间绿光和蓝光反射率的比率将为“1.0”)；然而应理解，绿光反射率数据和蓝光反射率数据可以分别存储到可摄入装置100的记忆体内(例如，在PCB 120(图2)的记忆电路中存储为两个分立的数据组)。
在606处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)通过将第一滑动窗过滤器施加于数据组而取回第一子组最近数据。例如，可摄入装置100可使用滑动窗过滤器在数据组内获取预定量的最近数据，其可包括在604处获取的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率的任何新值。例如，可摄入装置可被构造为在来自数据组的10与40个数据点之间选择，或者，可摄入装置100可被构造为在15秒数据与5分钟数据之间选择预定的数据值范围。在一些实施方式中，根据记录测量值的频繁程度和迫近的具体应用可选择其它数据范围。例如，可在滑动窗中选择任意适合量的数据，条件是足以探测到第二滑动窗中所选择数据(例如在614处选择的第二子组数据)之间的统计学上的显著差别。
在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)也可被构造为从数据组中去除异常点或者消除数组中的不需要的噪点。例如，可摄入装置100可通过将窗过滤器施加于数据组首先获取原始组的值而选择第一子组数据或任何其它子组数据(例如选择特定数据范围包括其中)。可摄入装置100然后可以被构造为识别原始组的值中的异常点；例如，通过识别大于偏离原始组值平均值或任意其它适合阈值的3个标准偏差的数据点。可摄入装置100然后可以通过从原始组值中去除异常点而确定子组数据。这可使可摄入装置100能够在确定是否其位于胃或十二指肠内时避免非真信息。
在608处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)确定是否最近探测的位置是十二指肠(例如十二指肠310(图3))。在一些实施方式中，可摄入装置100可存储数据标志(例如存储到PCB 120(图2)的记忆电路内)，其指示出可摄入装置100探测到其自身处于胃肠道内的最近部分。例如，每次可摄入装置100探测到进入到胃(例如由于在610处进行的决定而探测到进入胃306(图3)中)，标志被存储到记忆体中(例如作为在612处的存储数据的一部分)而指示出可摄入装置100处于胃中。如果可摄入装置100随后探测到进入十二指肠中(例如由于在624处进行的决定而探测到进入十二指肠310(图3)中)，则另一不同的标志存储到记忆体中(例如作为在624处的存储数据的一部分)而指示出可摄入装置100处于十二指肠中。在此情况下，可摄入装置100可在608处取回最近存储的标志，并确定是否所述标志指示出可摄入装置100最近处于十二指肠内。如果可摄入装置100探测到其最近处于十二指肠中，则过程600行进到610，其中，可摄入装置将测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率的最近测量值(例如包括在606处进行的最近测量值的测量值)与在胃内测量到的典型比率比较，并且使用此信息确定是否已经发生从十二指肠回到胃的逆向幽门转移。可替代地，如果可摄入装置100探测到其最近未处于十二指肠中(例如而是由于其处于胃中)，则过程600行进到614，其中可摄入装置将测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率的最近测量值(例如包括在606处进行的最近测量值的测量值)与过去测量值比较，并且使用此信息确定是否已经发生从胃到十二指肠的幽门转移。
当可摄入装置确定其最近处于十二指肠中时，过程600从608行进到610。在610处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)(例如经由PCB 120(图2)内的控制电路)确定是否当前G/B信号类似于记录的胃中的平均G/B信号。例如，可摄入装置100可以被构造为(例如在PCB 120(图2)的记忆电路内)具有先前存储的数据，其指示在胃中测量到的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率。可摄入装置100然后可以取回此指示在胃中的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率的存储数据，并且将其与最近测量值比较，以确定是否可摄入装置100已从十二指肠返回到胃。例如，可摄入装置100可以确定第一子组最近数据的平均值(即，测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的最近测量的比率的平均值)是否小于在胃内的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率，或者小于胃内测量的平均比率加上胃内测量的比率的标准偏差的预定倍。例如，如果在胃中的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率是“1”且标准偏差是“0.2”，则可摄入装置100可确定是否第一子组数据的平均值小于“1.0+k*0.2”，其中k是0至5之间的数。应理解，在一些实施方式中，可摄入装置100可被构造为使用不同阈值水平确定是否第一子组最近数据的平均值充分相似于在胃内的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率。响应于确定测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的最近比率相似于胃中所见的测量的绿光和蓝光反射率水平的平均比率，过程600行进到612，其中，可摄入装置100存储数据，该数据指示其已从十二指肠再次进入胃。可替代地，响应于确定测量的绿光和蓝光反射率水平的最近比率充分不同于胃中所见的测量的绿光和蓝光反射率水平的平均比率，可摄入装置100直接行进到604，并且在正在进行的基础上继续获取新数据。
在612处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)存储数据，该数据指示出探测到从十二指肠到胃的逆向幽门转移。例如，可摄入装置100可以(例如在PCB 120(图2)的记忆电路内)存储数据标志，其指示出可摄入装置100最近探测到自身处于胃肠道的胃部分(例如胃306(图3))内。在一些实施方式中，可摄入装置100也可(例如在PCB 120(图2)的记忆电路内)存储数据，其指示出可摄入装置100探测到从十二指肠到胃的逆向幽门转移的时间。此信息可由可摄入装置100在608处使用，并且结果过程600可从608行进到614，而非从618行进到610。在可摄入装置100存储指示探测到从十二指肠到胃的逆向幽门转移的数据之后，过程600行进到604，其中，可摄入装置100继续搜集额外测量值，并继续监测胃与十二指肠之间的进一步转移。
当可摄入装置确定其最近未在十二指肠中时(例如而是由于最近在胃中)，过程600从608行进到614。在614处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)通过将第二滑动窗过滤器施加于数据组而取回先前的第二子组数据。例如，可摄入装置100可使用滑动窗过滤器获取来自过去时间范围的预定量的较旧数据，其可以通过预定时段与用于选择在606处搜集的第一子组数据的最近时间范围分离。在一些实施方式中，任意适量的数据可通过第一和第二窗过滤器选择，并且第一和第二窗过滤器可通过任意适合的预定时间量分离。例如，在一些实施方式中，第一窗过滤器和第二窗过滤器可以各自被构造为从数据组选择预定范围的数据值，所述预定范围在15秒数据与5分钟数据之间。在一些实施方式中，最近测量值和过去测量值然后可以通过预定时段分离，该预定时段在预定范围数据值的1至5倍之间。例如，可摄入装置100可将第一子组数据和第二子组数据选择为各自为从数据组中选择的1分钟数据(即，选择为具有1分钟的预定范围)，并且第一子组数据和第二子组数据从分隔至少2分钟的记录测量值选择(即，预定时段为2分钟，其是用于使用窗过滤器选择子组数据的范围的两倍)。作为另一示例，可摄入装置100可选择第一子组数据和第二子组数据为各自从数据组中选择的5分钟数据(即，选择为具有5分钟的预定范围)，并且第一子组数据和第二子组数据从分隔至少10分钟的记录测量值中选择(即，预定时段为2分钟，其是用于使用窗过滤器选择子组数据的范围的两倍)。
在一些实施方式中，如果可摄入装置100最近从十二指肠转移到胃(例如通过检查在612处存储到可摄入装置100内的最近数据而确定)，当可摄入装置100已知处于胃内时，可摄入装置100可以在614处从时间帧中选择第二子组数据。在一些实施方式中，可摄入装置100可以可替代地对于胃内的绿光反射率和蓝光反射率的比率选择先前记录的平均值和标准偏差(例如，如先前在620处存储在PCB 120的记忆电路内的在胃内记录的数据的典型平均值和标准偏差)替代第二子组数据。在此情况下，当在616处进行确定时，可摄入装置100可简单地使用先前记录的平均值和先前记录的标准偏差，而非耗费资源计算第二子组的平均值和标准偏差。
在616处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)确定是否第二子组的平均值与第一子组的平均值之差大于第一子组标准偏差的预定倍数。例如，可摄入装置100可以计算第一子组最近数据的平均值与第二子组过去数据的平均值之差，并确定是否该差大于第二子组过去数据的标准偏差的3倍。在一些实施方式中，应理解，可以使用任何方便的阈值水平，而非标准偏差的3倍，例如为标准偏差的1至5倍之间的任意值。而且，在一些实施方式中，可摄入装置可以可替代地基于第二子组而非第一子组的标准偏差而设定阈值水平。响应于确定第一子组的平均值与第二子组的平均值之差大于第二子组的标准偏差的预定倍数，过程600行进到618。否则，过程600行进回到604，其中，可摄入装置604继续搜集新数据，用于监测在胃(例如胃306(图3))与十二指肠(例如十二指肠310(图3))之间的转移。
在618处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)(例如经由PCB120(图2)内的控制电路)确定在616处所进行的确定是否是第一子组最近数据的平均值与第二子组过去数据的平均值之差首次被计算为大于第二子组的标准偏差。如果可摄入装置确定这是第一子组的平均值与第二子组的平均值之差首次被计算为大于第二子组的标准偏差，则过程600行进到620以存储过去的第二子组数据的平均值存储作为胃中的平均G/B信号。可替代地，如果可摄入装置确定在616处做出的立刻进行的确定不是第一子组最近数据的平均值与第二子组过去数据的平均值之差首次被计算为大于第二子组的标准偏差，则过程600直接行进到622。
在620处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)存储第二子组的平均值作为胃中的平均G/B信号。例如，可摄入装置100可以被构造为存储第二子组过去数据的平均值(例如存储到PCB 120(图2)的记忆电路内)作为胃中测量到的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的平均比率。在一些实施方式中，可摄入装置100也可存储第二子组过去数据的标准偏差作为在胃内探测到的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率的典型标准偏差。这种存储信息可由可摄入装置在此后使用(例如在610处)以与未来数据比较，这可使可摄入装置能够探测从从十二指肠(例如十二指肠310(图3))回到胃(例如胃306(图3))的逆向幽门转移，并可通常用于替代从胃中搜集的其它实验数据(例如替代在616处的第二子组数据)。在存储第二子组的平均值作为胃中的平均G/B信号之后，过程600行进到622。
在622处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)确定第一子组最近数据的平均值与第二子组过去数据的平均值之差是否大于预定阈值“M”。在一些实施方式中，预定阈值“M”将足够大以确保第一子组的平均值显著大于第二子组的平均值，并且可以使可摄入装置100能够确保其探测到实际转移到十二指肠。当由于第二子组过去数据的标准偏差异常小而使得在616处进行的确定可能不可靠时，这可以特别有利。例如，预定阈值“M”的典型值可以在0.1至0.5的量级。如果可摄入装置100确定第一子组最近数据与的第二子组过去数据的平均值之差大于预定阈值，则过程600行进到624以存储数据，其指示探测到从胃到十二指肠(例如从胃306到十二指肠310(图3))的幽门转移。可替代地，如果可摄入装置确定第一子组与第二子组的平均值的比率小于或等于预定阈值M(即，确定未发生到十二指肠的转移)，则过程600直接行进到604，其中可摄入装置100继续进行新的测量并监测胃与十二指肠之间的可能转移。
在一些实施方式中，不使用第一子组最近数据的平均值与第二子组过去数据的平均值之差，而是可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)确定是否第一子组最近数据的平均值与第二子组过去数据的平均值的比率大于预定阈值“M”。在一些实施方式中，预定阈值“M”将足够大以确保第一子组的平均值显著大于第二子组的平均值，并且可以使可摄入装置100能够确保其探测到实际转移到十二指肠。当由于第二子组过去数据的标准偏差异常小而使得在616处进行的确定可能不可靠时，这可以特别有利。例如，预定阈值“M”的典型值可以在1.2至2.0的量级。应理解，任何方便类型的阈值或者计算可用于确定是否第一子组数据和第二子组数据均在统计学上彼此区别，而且根据总体平均值也彼此显著不同。
在624处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)存储数据，该数据指示探测到从胃到十二指肠的幽门转移。例如，可摄入装置100可存储数据标志(例如在PCB 120(图2)的记忆电路内)，其指示可摄入装置100最近探测到自身处于胃肠道的十二指肠部分(例如十二指肠310(图3))内。在一些实施方式中，可摄入装置100也可存储数据(例如在PCB120(图2)的记忆电路内)，其指示可摄入装置100探测到从胃到十二指肠的幽门转移的时间。此信息可由可摄入装置100在608处使用，并且结果过程600可以从608行进到610，而非从618行进到614。在可摄入装置100存储指示出探测到从胃到十二指肠的幽门转移的数据之后，过程600行进到604，其中，可摄入装置100继续搜集额外测量值，并继续监测胃与十二指肠之间的进一步转移。
应理解，本公开内容的流程图(包括图6)的步骤和描述仅为例示性的。流程图(包括图6)的任何步骤和描述可修改、省略、重新布置和以可替代顺序或并行地执行，两个或更多个步骤可组合，或者可增加任意额外的步骤，而不背离本公开内容的范围。例如，可摄入装置100可并行地计算多个数据组的平均值和标准偏差以加速总计算时间。另外，应注意，图6的步骤和描述可与本申请中所述任何其它系统、装置或方法组合，并且在本申请中所述的任何可摄入装置或系统可用于执行图6中的一个或多个步骤。例如，过程600的一部分可被包含到过程500(图5)的508－516中，并且可以为用于确定可摄入装置的位置的更通常过程的一部分。作为另一示例，探测到的蓝和绿光的比率(例如，在604处测量到并添加到数据组)可以甚至在胃或十二指肠外继续，并且相似信息可由可摄入装置通过其在胃肠道中的转移被记录。测量的绿光和蓝光反射率水平的比率的数据组的示例性线图可通过胃肠道搜集，在下文中参照图7和图8进一步论述。
图7是根据本公开内容的一些实施方式的线图，例示出在可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)的示例性操作过程中收集的数据，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠(GI)道时的位置时使用。
虽然图7出于例示目的可结合可摄入装置100描述，但是这并非意在限制性的，并且线图700和数据组702可为本申请中所述任意装置搜集的典型数据。线图700图示出随时间的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率。例如，可摄入装置100通过以下方式计算数据组702中的每个点的值：在给定时间发出绿色和蓝色光照(例如经由光照器124(图2))，测量形成的绿色和蓝色反射率(例如经由探测器122(图2))，计算形成的反射率的比率，以及将所述比率与指示反射率被搜集时间的时间戳一起存储到数据组中。
在704处，在可摄入装置100开始操作后不久，可摄入装置100确定其至少已到达胃(例如，由于作出与结合过程500(图5)中的506所论述确定相似的确定)。可摄入装置100继续搜集绿光和蓝光反射率水平的额外的测量值，并且在706处，可摄入装置100确定已发生从胃到十二指肠的幽门转移(例如，由于作出与结合过程600(图6)的616－624所述确定相似的确定)。显而易见的，数据组702中的值在706附近突然上跳，这指示出十二指肠中典型的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的更高比率。
数据组702的其余部分图示出穿过胃肠道其余部分测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率。在708处，可摄入装置100已到达空肠(例如，如通过肌肉收缩的测量所确定，如参照图9所述)，并且通过710，可摄入装置100已到达盲肠。应理解，在一些实施方式中，数据组702的整体特性和外观，在小肠(即，十二指肠、空肠和回肠)相比于盲肠内发生变化。在空肠和回肠内，在测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率中典型地可以存在宽的变化，导致具有高标准偏差的相对较多噪声数据。比较而言，在盲肠内，可摄入装置100可测量测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的相对稳定的比率。在一些实施方式中，可摄入装置100可被构造为基于这些不同而确定从小肠到盲肠的转移。例如，可摄入装置100可将最近的数据窗与过去的数据窗比较，并响应于确定最近数据窗中的比率的标准偏差显著小于过去数据窗中的比率的标准偏差而探测出转移到盲肠。
图8是根据本公开内容的一些实施方式的另一线图，例示出在可摄入装置的示例性操作过程中收集的数据，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠(GI)道时的位置时使用。与图7相似，图8出于例示目的可结合可摄入装置100描述。然而，这并非意在限制性的，并且图线800和数据组802可为本申请中所述任意装置搜集的典型数据。
在804处，在可摄入装置100开始操作后不久，可摄入装置100确定其至少已到达胃(例如，由于作出与结合过程500(图5)中的506所论述确定相似的确定)。可摄入装置100继续搜集绿光和蓝光反射率水平的额外的测量值(例如经由传感子单元126(图2))，并且在806处，可摄入装置100确定已发生从胃到十二指肠的幽门转移(例如，由于作出与结合过程600(图6)的616－624所述确定相似的确定)。显而易见的，数据组802中的值在806附近突然上跳，这指示在在此后不久的下落之前，十二指肠中典型的测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的更高比率。由于数据组802中的值减小，因而可摄入装置100确定在808处已发生从十二指肠返回到胃的逆向幽门转移(例如，由于作出与结合过程600(图6)的610－612所述确定类似的确定)。在810处，由于数据组802中的值再次增大，因而可摄入装置100确定已发生从胃到十二指肠的另一幽门转移，且此后不久，可摄入装置100向上行进到空肠、回肠和盲肠。
数据组802的其余部分图示出穿过胃肠道其余部分测量的绿光反射率水平与测量的蓝光反射率水平的比率。显而易见的，在812处，可摄入装置到达回肠与盲肠之间的转移部位。如在上文中结合图7所述，转移到盲肠以随时间推移的测量的绿光反射率与测量的蓝光反射率的比率中的减小的标准偏差被标记，并且可摄入装置100可被构造为：基于确定从空肠或回肠取得的最近测量值组的标准偏差显著小于过去测量值的标准偏差而探测出转移到盲肠。
图9是根据本公开内容的一些实施方式的用于探测从十二指肠到空肠的转移的例示性步骤的流程图，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠(GI)道时的位置时使用。虽然图9出于例示目的可结合可摄入装置100描述，但是这不意在限制性的，并且图9中所述过程900的部分或全部可应用于本申请中所述的任意装置(例如可摄入装置100、300和400)，并且这些可摄入装置中的任意装置可用于执行图9中所述过程的一个或多个部分。另外，图9的特征可以与本申请中所述的任何其它系统、方法或过程组合。例如，图9中的过程所述的部分过程可集成于图5中所述定位过程中(例如作为过程500(图5)的部分520－524)。在一些实施方式中，可摄入装置100当在十二指肠中时或响应于探测到进入十二指肠而执行过程900。在其它实施方式中，可摄入装置100可在胃中时或响应于探测到进入胃肠道中而执行过程900。还可理解的是，过程900可与本公开内容中所述任意其它过程(例如过程600(图6))并行执行，这可使可摄入装置100能够探测到进入胃肠道各个部分中，而不必探测进入胃肠道的在前部分中。
为了例示目的，图9可按照可摄入装置100论述，其基于由单个传感子单元(例如传感子单元126(图2))以单波长产生的单组反射率水平生成并且进行确定。然而，应理解，可摄入装置100可通过沿可摄入装置的周边定位多个不同传感子单元(例如位于可摄入装置100(图1)的窗114之后不同位置的多个传感子单元)产生多个波长的光照，并且形成的反射率的每个均可存储为分立的数据组。另外，这些组反射率水平组中的每组可用于通过运行多版本的过程900而探测肌肉收缩，其中每一组处理于从不同波长测量值或者由不同传感子单元进行的测量值获取的数据组对应的不同组反射率的数据。
在902处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)取回反射率水平组。例如，可摄入装置100可从记忆体(例如从PCB 120(图2)的记忆电路)取回先前记录的反射率水平的数据组。每个反射率水平可对应于从通过可摄入装置100(例如经由光照器124(图2))产生的光照由可摄入装置100先前探测(例如经由探测器122(图2))的反射率，并可体现指示以给定反射率探测到的光量的值。然而，应理解，可使用任意适合频率的光，例如红外、可见、或紫外光谱的光。在一些实施方式中，反射率水平可对应于先前由可摄入装置100以周期性时间间隔探测到的反射率。
在904处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)包括在数据组中的新的反射率水平测量值。例如，可摄入装置100可被构造为：以规律时间间隔或者通过足以探测蠕动波的速度探测新的反射率(例如使用传感子单元126(图2)发出光照并探测结果反射率)。例如，可摄入装置100可被构造为每3秒一次(即，探测0.17Hz信号必需的最小速率)产生光照并测量形成的反射率，并且优选地采用更高速率，快至0.1秒或甚至更快。应理解，各次测量之间的周期性时间间隔可基于主体物种、和待测量蠕动波的预计频率而根据需要适配。每次可摄入装置100在904处进行新的反射率水平测量时，新的数据被包括到数据组(例如存储到PCB 120(图2)的记忆电路内的数据组)。
在906处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)通过将滑动窗过滤器施加于数据组而获取第一子组最近数据。例如，可摄入装置100可从数据组取回1分钟价值的数据。如果数据组包括每秒测量到的反射率值，则这将约为60数据点价值的数据。可使用任何适合类型的窗尺寸，只要窗尺寸足够大以探测到蠕动波(例如对于健康人类主体的0.1Hz至0.2Hz量级的波动)即可。在一些实施方式中，可摄入装置100也可清除数据，例如通过从利用滑动窗过滤器获取的第一子组数据去除异常点。
在908处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)通过对第一子组最近数据进行插值获取第二子组最近数据。例如，可摄入装置100可对第一子组数据插值以产生具有足够数量的数据点(例如，每0.5秒或更大间隔分开的数据点)的第二子组数据。在一些实施方式中，这可使可摄入装置100还能够替换作为在906处施加窗过滤器的一部分可能已被去除的任何异常数据点。
在910处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)从第二子组数据计算归一化频谱。例如，可摄入装置100可被构造为执行快速傅里叶变换，以将第二子组数据从时间域表现转变为频率域表现。应理解，根据所使用的应用和子组数据的性质，可使用任意数量的适合进程(例如傅里叶变换进程)确定第二子组数据的频谱。例如，第二子组数据的采样频率和尺寸可事先已知，并且可摄入装置100可被构造为在记忆体(例如PCB 120(图2)的记忆电路)内具有归一化离散傅里叶变换(DFT)矩阵的预先存储值、或对应于所关注的0.1Hz至0.2Hz频率分量的DFT矩阵行。在此情况下，可摄入装置可使用DFT矩阵与数据组之间的矩阵乘法产生适合的频谱。可通过可摄入装置获取的示例性的数据组和对应的频谱参照图10更详细论述。
在912处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)确定是否归一化频谱的至少一部分在0.1Hz至0.2Hz之间高于0.5Hz的阈值。健康人类主体中的蠕动波以0.1Hz至0.2Hz之间的速率发生，并且经历蠕动波的可摄入装置(例如探测空肠(图4)的壁406中的收缩的可摄入装置400)可在遵照相似的0.1Hz至0.2Hz频率的被探测反射率水平的幅度中探测到正弦变化。如果可摄入装置确定归一化频谱在0.1Hz和0.2Hz之间的部分高于0.5阈值，则此测量值可与健康人类主体中的蠕动波一致，并且过程900行进到914，其中，可摄入装置100存储指示探测到肌肉收缩的数据。可替代地，如果可摄入装置确定归一化频谱在0.1Hz和0.2Hz之间没有高于0.5的阈值的部分，则过程900直接行进到904以进行新的测量并继续监测新的肌肉收缩。应理解，可使用不同于0.5的阈值，并且准确的阈值可取决于可摄入装置100使用的采样频率和所用频谱类型。
在914处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)存储指示探测到肌肉收缩的数据。例如，可摄入装置100可将数据存储到记忆体(例如PCB120(图2)的记忆电路)中，指示探测到肌肉收缩，并指示探测到肌肉收缩的时间。在一些实施方式中，可摄入装置100也可监测探测到的肌肉收缩的总数量、或者在给定时间帧中探测到的肌肉收缩数量。在一些实施方式中，探测到特定数量的肌肉收缩可与在健康人类主体的空肠(例如空肠314(图3))内的可摄入装置100一致。在探测到肌肉收缩之后，过程900行进到916。
在916处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)确定是否肌肉收缩的总数量超过预定阈值数量。例如，可摄入装置100可取回从记忆体(例如从PCB120(图2)的记忆电路)探测到的肌肉收缩的总数量，并将总数量与阈值比较。在一些实施方式中，阈值可为1、或者大于1的任何数。阈值越大，则在可摄入装置100存储指示其已进入空肠的数据之前需要探测到的肌肉收缩越多。在实践中，将阈值设定为3或更高可防止可摄入装置探测到假阳性(例如由于胃肠道器官的自然运动或者由于主体的运动)。如果收缩总数量超过预定阈值数量，则过程900行进到918以存储指示探测到从十二指肠转移到空肠的数据。可替代地，如果收缩总数量未超过预定阈值数量，则过程900行进到904以在数据组中包括新的反射率水平测量值。随时间推移探测到的肌肉收缩的示例性线图参照图11更详细论述。
在918处，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)存储指示探测到从十二指肠转移到空肠的数据。例如，可摄入装置100可将数据存储到记忆体(例如PCB 120(图2)的记忆电路)中，该数据指示已到达空肠。在一些实施方式中，如果可摄入装置100被构造为当在胃中时执行过程900的所有或部分，则可摄入装置100可在918处存储指示探测到从胃直接转移到空肠(例如由于进行使用过程600(图6)探测幽门转移时过快转移通过十二指肠)的数据。
在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)可被构造为响应于识别出可摄入装置位置改变而从可摄入装置壳体外的环境中获取流体样本。例如，可摄入装置100可被构造为：响应于确定可摄入装置位于空肠(例如空肠314(图3))内而从可摄入装置100壳体外的环境中获取流体样本(例如通过使用可选的开口116和可选的旋转组件118(图2))。在一些实施方式中，可摄入装置100还可装备有适合的诊断机构以基于取回的流体样本(例如小肠细菌过度生长(SIBO))而探测特定医疗状况。
在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)可被构造为响应于识别出可摄入装置的位置变化而将预先储存在可摄入装置内的可配发物质从可摄入装置递送到胃肠道中。例如，可摄入装置100可具有预先储存在可摄入装置100内(例如在可选的储存子单元118-3(图2)上的储存室或腔内)的可配发物质，并且可摄入装置100可被构造为：当可摄入装置100探测到可摄入装置100位于空肠(例如空肠314(图3))内时，将物质配发到胃肠道中(例如通过使用可选的开口116和可选的旋转组件118(图2))。在一些实施方式中，这可使可摄入装置100能够将物质(例如治疗剂或药剂)递送到胃肠道内的目标位置处。
在一些实施方式中，可摄入装置(例如可摄入装置100、300或400)可被构造为基于探测到的肌肉收缩总数量执行动作。例如，可摄入装置100可被构造为(例如从PCB 120(图2)的记忆电路)取回指示肌肉收缩总数量的数据，并将其与健康受试者中的肌肉收缩预计数量比较。作为响应，可摄入装置可以(例如通过使用可选的开口116和可选的旋转组件118(图2))将物质配发到胃肠道中，或者可以(例如通过使用可选的开口116和可选的旋转组件118(图2))从可摄入装置100的壳体外的环境中获取流体样本。例如，可摄入装置100可被构造为响应于确定探测到的肌肉收缩数量反常且显著不同于预计数量而获取样本。作为另一示例，可摄入装置100可被构造为响应于确定探测到的肌肉收缩与健康受试者中的活动的胃肠道一致而将物质(例如药剂)递送到胃肠道中。
应理解，本公开内容的流程图(包括图9)的步骤和描述仅为例示性的。流程图(包括图9)的任何步骤和描述可修改、省略、重新布置、和以可替代顺序或并行地执行，两个或更多个步骤可组合，或者可增加任意额外的步骤，而不背离本公开内容的范围。例如，可摄入装置100可并行地计算多个数据组(例如多个数据组，每一个对应于不同波长的反射率或者用于探测反射率的不同传感子单元)的平均值和标准偏差以加速总计算时间。另外，应注意，图9的步骤和描述可与本申请中所述任何其它系统、装置或方法组合，并且在本申请中所述的任何可摄入装置或系统可用于执行图9中的一个或多个步骤。
图10是根据本公开内容的一些实施方式的线图，例示出在可摄入装置的示例性操作过程中收集的数据，其可在探测从十二指肠转移到空肠时使用。示意图1000图示出由可摄入装置测量的反射率水平的数据组(例如参照图9的908论述的第二子组数据)的时间域线图1002。在一些实施方式中，可摄入装置100可被构造为以约分开0.5秒的半正则时间间隔搜集数据点。通过比较，示意图1050图示出由可摄入装置测量的相同的反射率水平的数据组的频率域线图1004(例如由于在图9的910处计算频谱的可摄入装置100)。在一些实施方式中，可摄入装置100可被构造为通过任意方便手段计算频谱。
在示意图1050中，在0.1Hz和0.2Hz之间的频率范围1006可以为可摄入装置100搜寻以探测肌肉收缩的频率范围。如示意图1050中所示，频率域线图1004在0.14Hz附近存在强峰，这与健康人类受试者中蠕动运动的频率一致。在此情况下，分析频率域线图1004的可摄入装置100可构造为确定数据与探测到的肌肉收缩一致(例如使用与过程900(图9)的912相似的过程)，并可存储数据(例如在PCB 120(图2)的记忆电路中)，其指示已探测到肌肉收缩。由于从终止于118分钟处的1分钟窗的数据中探测到肌肉收缩，因而可摄入装置100也可存储数据，其指示出在118分钟标记处探测到肌肉收缩(即，其可指示出可摄入装置100在118分钟前起动并由主体摄入)。
图11是根据本公开内容的一些实施方式的线图，例示出由可摄入装置随时间推移探测的肌肉收缩，其可在确定可摄入装置当其转移通过胃肠(GI)道时的位置时使用。在一些实施方式中，可摄入装置100可被构造为：探测肌肉收缩，并存储指示探测到每次肌肉收缩的时间(例如作为过程900(图9)的部分914)的数据。线图1100图示出随时间推移探测到的肌肉收缩1106，其中每次肌肉收缩通过在y轴上从0到1延伸的竖直线表现。
在1102处，在10分钟标记附近，可摄入装置100首次进入十二指肠中(例如通过可摄入装置100执行过程600(图6)所确定)。此后不久，在1108处，可摄入装置100开始探测到快速连续的多次肌肉收缩1106，这可指示在空肠(例如空肠314(图3))中形成的强蠕动波。此后，在1110附近，可摄入装置100继续探测到间歇的肌肉收缩，这可与可摄入装置100处于回肠内一致。最后，在1104处，可摄入装置100转移出小肠并进入盲肠中。显然，与小肠的回肠部分相比，可摄入装置100在小肠的空肠部件中探测到更频繁的肌肉收缩，并且可摄入装置100在已离开小肠之后未测量到任何肌肉收缩。在一些实施方式中，可摄入装置100可将这种信息包含到定位过程中。例如，可摄入装置100可被构造为响应于确定探测的肌肉收缩的频率(例如在给定10分钟的窗中测量到的肌肉收缩的数量)处于阈值数量以下而探测到从空肠转移到回肠。作为另一示例，可摄入装置100可被构造为响应于确定在阈值时段中未探测到肌肉收缩而探测到从回肠转移到盲肠。应理解，这些示例意在为例示性的，而非限制性的，并且肌肉收缩的测量可与本公开内容中所述的任何其它过程、系统、或方法组合。
图12是用于特定实施方式的流程图1200，用于确定所述装置从空肠转移到回肠。应注意，通常，空肠比回肠更红且具有更多血管。另外，通常，与回肠相比，空肠具有带有更多肠系膜脂肪的更厚的肠壁。在空肠与回肠之间的这些差异预计引起在空肠中相对于回肠的光学响应差异。可选地，一个或多个光学信号可用于研究光学响应的不同。例如，所述过程可包括监测被反射的红光、蓝光、绿光的光学响应的变化、红光与绿光的比率、红光与蓝光的比率、和/或绿光与蓝光的比率。在一些实施方式中，在所述过程中探测到反射的红光。
流程图1200表现出单个滑动窗处理。在步骤1210中，空肠基准信号基于光学反射确定。典型地，经过从确定所述装置进入空肠起的一定时段，此信号作为平均信号(例如反射红光)。所述时段可例如从5分钟到40分钟(例如从10分钟到30分钟、从15分钟到25分钟)。在步骤1220中，恰在步骤1210中所用时段之后探测到的信号(例如反射红光)被归一化为步骤1210中确定的基准信号。在步骤1230中，探测到信号(例如反射红光)。在步骤1240中，基于单个滑动窗探测到的平均信号与信号阈值比较。步骤1240中的信号阈值通常是步骤1210中确定的空肠基准信号的基准信号的分数。例如，信号阈值可以是空肠基准信号的60％至90％(例如70％至80％)。如果平均信号超过信号阈值，则所述过程在步骤1250处确定所述装置已进入回肠。如果平均信号未超过信号阈值，则所述过程返回到步骤1230。
图13是用于特定实施方式的流程图1200，用于使用两个滑动窗处理确定所述装置从空肠转移到回肠。在步骤1310中，空肠基准信号基于光学反射确定。典型地，经过从确定所述装置进入空肠起的一定时段，此信号作为平均信号(例如反射红光)。所述时段可例如从5分钟到40分钟(例如从10分钟到30分钟、从15分钟到25分钟)。在步骤1320中，恰在步骤1310中所用时段之后探测到的信号(例如反射红光)被归一化为步骤1310中确定的基准信号。在步骤1330中，探测到信号(例如反射红光)。在步骤1340中，基于两个滑动窗探测到的信号平均差与信号阈值比较。在步骤1340中的信号阈值基于是否探测到的信号的平均差超过第一窗的探测到的信号的倍数(例如从1.5倍至5倍、从2倍到4倍)。如果超过信号阈值，则所述过程在步骤1350处确定所述装置已进入回肠。如果未超过信号阈值，则所述过程返回到步骤1330。
图14是用于特定实施方式的过程的流程图1400，用于确定所述装置从回肠转移到盲肠。通常，所述过程涉及探测反射的光学信号(例如，红光、蓝光、绿光、红光与绿光的比率、红光与蓝光的比率和/或绿光与蓝光的比率)的变化。在一些实施方式中，所述过程包括探测反射的红光与反射的绿光的比率的变化，并且还包括探测反射的绿光与反射的蓝光的比率的变化。通常，在过程1400中，继续进行关于过程600所论述的滑动窗分析(第一窗和第二窗)。
步骤1410包括：在探测的信号中设定第一阈值，例如，探测的红光与探测的绿光的比率)；对于探测的信号设定关于变化系数的第二阈值，例如用于探测的绿光与探测的蓝光的比率的变化系数。第一阈值可被设定为第一窗中平均信号(例如探测的红光与探测的绿光的比率)的分数(例如从0.5至0.9，从0.6至0.8)，或者为两个窗中的探测信号(例如探测的红光与探测的绿光的比率)之间的平均差的分数(例如从0.4至0.8，从0.5至0.7)。第二阈值可被设定到0.1(例如0.05,0.02)。
步骤1420包括：探测第一和第二窗中的信号，信号待用于将第一阈值和第二阈值比较。
步骤1430包括：将探测的信号与第一和第二阈值比较。如果对应值不低于第一阈值或者对应值不低于第二阈值，则确定所述装置尚未离开回肠并进入盲肠，并且所述过程返回到步骤1420。如果对应值低于第一阈值而且对应值低于第二阈值，则确定所述装置已离开回肠并进入盲肠，并且所述过程行进到步骤1440。
步骤1450包括：确定是否首次确定所述装置离开回肠并进入盲肠。如果是首次确定所述装置离开回肠并进入盲肠，则所述过程行进到步骤1460。如果不是首次所述装置已离开回肠并进入盲肠，则所述过程行进到步骤1470。
步骤1460包括设定基准信号。在此步骤中，光学信号(例如探测的红光与探测的绿光的比率)作为基准信号。
步骤1470包括：确定是否所述装置可能已离开盲肠并返回回肠。如果对应的探测的信号(例如探测的红光与探测的绿光的比率)与基准信号(在步骤1460中确定)在统计学上相当而且对应的探测的信号(例如探测的绿光与探测的蓝光的比率)的变化系数超过第二阈值，则确定所述装置已离开盲肠并返回回肠。如果确定所述装置可能已离开盲肠并返回回肠，则所述过程行进到步骤1480。
步骤1480包括：继续探测相关光学信号一定时段(例如，至少1分钟、从5分钟到15分钟)。
步骤1490包括：确定是否在步骤1480中所确定信号(使用在步骤1470中所述方法)指示所述装置再次进入回肠。如果所述信号指示所述装置再次进入回肠，则所述过程行进到步骤1420。如果所述信号指示所述装置处于盲肠中，则所述过程行进到步骤1492。
步骤1492包括：继续监测相关光学信号持续一定时段(例如，至少30分钟、至少1小时、至少2小时)。
步骤1494包括：确定是否在步骤1492中所确定信号(使用在步骤1470中所述方法)指示所述装置再次进入回肠。如果所述信号指示所述装置再次进入回肠，则所述过程行进到步骤1420。如果所述信号指示所述装置处于盲肠中，则所述过程行进到步骤1496。
在步骤1496处，所述过程确定所述装置处于盲肠中。
图15是用于特定实施方式的流程图1500，其用于确定所述装置从盲肠转移到结肠的过程。通常，所述过程涉及探测反射的光学信号(例如，红光、蓝光、绿光、红光与绿光的比率、红光与蓝光的比率和/或绿光与蓝光的比率)的变化。在一些实施方式中，所述过程包括探测反射的红光与反射的绿光的比率中的变化，并且还包括探测反射的蓝光的比率中的变化。通常，在过程1500中，继续进行关于过程1400所论述的滑动窗分析(第一窗和第二窗)。
在步骤1510中，当所述装置处于盲肠中时(例如在步骤1480的过程中)，收集光学信号(例如，反射的红光信号与反射的绿光信号以及反射的蓝光信号的比率)持续一定时段(例如，至少1分钟、至少5分钟、至少10分钟)。用于所记录光学信号(例如反射的红光信号与反射的绿光信号以及反射的蓝光信号的比率)的平均值建立盲肠基准信号。
在步骤1520中，在已经确定所述装置进入盲肠(例如在步骤1440处)之后，探测光学信号。光学信号被归一化为盲肠基准信号。
步骤1530涉及确定是否所述装置已进入结肠。这包括确定是否满足三个不同准则中的任意准则。如果探测的光学信号的比率(例如探测的红光信号与探测的绿光的比率)中的平均差是第二窗中的对应信号(例如探测的红光信号与探测的绿光的比率)的标准偏差的大于1的倍数(例如2X,3X,4X)，则满足第一准则。如果探测的光学信号(例如探测的红光信号与探测的绿光的比率)的平均值超过给定值(例如超过1)，则满足第二准则。如果在第一窗中的光学信号(例如探测的蓝光)的变化系数超过给定值(例如超过0.2)，则满足第三准则。如果满足三个准则中的任意准则，则所述过程行进到步骤1540。否则，三个准则均不满足，则所述过程返回到步骤1520。
为了例示目的，本公开内容主要着重于可摄入装置的多个不同示例性实施方式和用于确定可摄入装置在胃肠道内位置的方法的示例性实施方式。然而，可被构造的可能的可摄入装置不限于这些实施方式，并且在不显著改变所述装置的功能和操作的情况下，可进行形状和设计上的变化。相似地，用于确定可摄入装置在胃肠道内位置的可能的进程不限于所述的具体进程和实施方式(例如过程500(图5)，过程600(图6)，过程900(图9)，过程1200(图12)，过程1300(图13)，过程1400(图14)和过程1500(图15))。而且，在此所述的可摄入装置的应用不仅限于搜集数据、采样和检测胃肠道部分、或递送药剂。例如，在一些实施方式中，可摄入装置可以被适配为包括多个化学、电或光学的诊断机构以诊断多种疾病。相似地，用于测量身体现象或其它生理量的多个不同传感器可包括在可摄入装置上。例如，可摄入装置可以被适配为测量胃肠道中的特定化学化合物或杂质的升高水平，或者，采样室中包含的定位、采样、和适合的诊断和试验技术的组合可以特别良好适用于确定小肠细菌生长(SIBO)的存在。
在此所述可摄入装置的各个实施方式的至少一些经由软件实现的元件(例如通过PCB 120(图2)内的控制电路执行的软件)可通过高级的过程语言，例如面向对象编程、脚本语言或两者编写。相应地，程序代码可以用C、C++、或任何其它适合的编程语言编写，并且可包括模块或类，如面向对象编程领域中普通技术人员已知的那样。可替代地或另外地，在此所述可摄入装置的实施方式的至少一些经由软件实现的元件可根据需要通过汇编语言、机器语言或者固件编写。在任一情况下，所述语言可为编译或解释语言。
用于实现可摄入装置的至少一些程序代码可存储到存储介质上或者能够由通用或专用目的的可编程计算装置(其具有处理器、操作系统和相关联的硬件和软件，这是实现在此所述的至少一个实施方式的功能所必需的)读取的计算机可读介质上。程序代码当由计算装置读取时配置计算装置以新型特别的预定的方式操作，以执行在此所述的至少一种方法。
另外，与在此所述的示例性实施方式的系统、装置和方法相关联的至少一些程序能够分布在计算机程序产品中，该计算机程序产品包括承载用于一个或多个处理器的计算机可用指令的计算机可读介质。所述介质可通过各种形式设置，包括非暂时形式，例如但不限于：一个或多个磁盘、光盘、磁带、芯片和磁和电子存储存器。在一些实施方式中，所述介质可本质为暂时性的，例如但不限于：有线传送、卫星传送、互联网传送(例如下载)、介质、数字和模拟信号、以及类似物。计算机可用指令也可为不同形式，包括编译和非编译代码。
上述技术可使用软件实现以在计算机上执行。例如，软件形成了在一个或多个计算机程序中的进程，其在一个或多个编程或可编程的计算机系统(其可为各种构架，例如分布式、客户机/服务器、或网格)上执行，每个计算机系统包括至少一个处理器、至少一个数据存储系统(包括易失性或非易失性的记忆体和/或存储元件)、至少一个输入装置或端口、和至少一个输出装置或端口。
软件可设置在存储介质(例如CD-ROM)上，能够由通用或专用目的的可编程计算机读取，或者通过网络通信介质传输(以传播信号编码)到其被执行的计算机。所有功能可在专用目的计算机上执行或者使用专用目的硬件(例如协处理器)执行。软件可通过分布方式实现，其中由软件规定的不同计算部分通过不同计算机执行。每个这样的计算机程序优选地存储在或下载到能够通过通用或专用目的可编程计算机读取的存储介质或装置(例如固态记忆体或介质、或者磁或光学介质)，用于当存储介质或装置通过计算机系统读取时配置和操作计算机以执行在此所述的进程。本发明的系统也可被认为实现为计算机可读存储介质，其配置有计算机程序，其中如此配置的存储介质使得计算机系统以特定和预定方式操作以执行在此所述的功能。
递送方法和机构
图16提供了根据本文所述的一些实施方式的说明用于递送不可溶物质例如本文所述的治疗剂的制剂的可摄入装置1600的结构的多个方面的示例模型图。在一些实施方式中，可摄入装置1600通常呈胶囊、药丸或任何可被个体口服的可吞咽形式的形状。通过这种方式，患者可以摄入可摄入设备1600，并且可以由医疗从业者和患者配制。
图16提供了根据本文所述的一些实施方式的说明用于递送可配发物质的可摄入装置1600的结构的各个方面的示例模型图。在一些实施方式中，可摄入装置1600通常呈胶囊、药丸或任何可被个体口服的可吞咽形式的形状。通过这种方式，患者可以摄入可摄入设备1600，并且可以由医疗从业者和患者配制。
可摄入装置1600包括壳体1601，其形状类似于胶囊、药丸和/或类似物，其可包括两端1602a-b。壳体1601的设计可承受胃肠道的化学和机械环境(例如肌肉收缩力和胃中浓盐酸的影响)。多种材料可用于壳体1601。这些材料的实例包括但不限于在生物相容性方面符合ISO 10993和USP Class VI规范的热塑性塑料、含氟聚合物、弹性体、不锈钢和玻璃，以及任何其它合适的材料及其组合。
在一些实施方式中，壳体1601的壁厚可为0.5mm-1mm，其足以承受内部爆炸(例如由氢点燃或壳体内的超压引起的)。
壳体1601可具有或不具有用于检测或以其它方式敏感于可摄入装置外部环境的pH水平的pH敏感肠衣。如本申请中其它地方更详细地讨论的，可摄入设备1600可另外或可选地包括一个以上的传感器，例如温度传感器、光学传感。
壳体1601可通过将两个壳体部分连接在一起来形成。可摄入装置1600可包括壳体1600内的电子元件。电子元件可以接近壳体的端部1602b放置，并且包括印刷电路板(PCB)、电池、光学感测单元和/或类似部件。
可摄入装置1600还包括气体发生单元1603，其配置成产生气体，从而在壳体1601内产生内部压力。在一些实施方式中，气体发生单元可以包括或连接到可摄入装置的单独通道或阀，以便气体可以通过通道或阀释放，以产生改变可摄入装置在胃肠道内的位置的运动。这种气体释放也可用于定位可摄入装置相对于肠壁的位置。在另一个实施方式中，气体可通过单独的通道或阀释放，以在递送可配发物质之前改变肠组织的表面定向。
移动柱塞1604可放置在壳体1601内的气体发生单元1603的顶部。移动柱塞1604是将气体发生单元1603和存储可配发物质1605的贮存器隔开的膜。在一些实施方式中，移动柱塞1604可以是可移动活塞。在一些实施方式中，移动柱塞1604可以是柔性膜，例如但不限于隔膜。在一些实施方式中，具有柔性隔膜形式的移动柱塞1604可沿壳体1601的轴向放置，而不是放置在气体发生单元1603的顶部。当气体发生单元1603产生气体以产生推动膜1604的内部压力时，移动柱塞或膜1604可能向壳体端部1602a的方向移动(当膜1604是活塞时)或变形(当膜1604是隔膜时)。这样，膜或移动柱塞1604可通过配发出口1607将可配发物质1605推出壳体。
壳体1601可包括储存一种或多种可配发物质1605的贮存器，该贮存器邻近移动柱塞1604。可配发物质1605可以是一种治疗剂或医疗剂，其可以采取粉末、压缩粉末、流体、半液体凝胶或任何其它可配发或可递送的形式。可配发物质1605的递送可采用诸如但不限于团注、半团注、连续、突发药物递送和/或类似形式。在一些实施方式中，将单个团注递送到疾病位置附近。在一些实施方式中，在一个位置或多个位置释放多个团注。在一些实施方式中，根据预先编程的算法触发多个团注的释放。在一些实施方式中，释放行为是连续的。在一些实施方式中，释放行为是基于时间的。在一些实施方式中，释放行为是基于位置的。在一些实施方式中，递送的量以以下方式基于疾病的严重性和/或程度。在一些实施方式中，在以下一个或多个位置递送团注：胃；十二指肠；近端空肠；回肠；盲肠；升结肠；横结肠；降结肠。
在一些实施方式中，可配发物质是在盲肠和/或大肠的其它部分释放的小分子治疗剂。通过典型的口服途径施用的小分子主要被小肠吸收，在大肠(直肠外)发生的吸收要低得多。因此，能够选择性地在大肠(例如盲肠)释放小分子的而产生的系统性水平较低(即使在使用高剂量时)的可摄入装置对大肠炎症性肠病患者具有吸引力。
在一些实施方式中，贮存器可以包括多个室，并且每个室存储不同的可配发物质。例如，通过配发出口1607可以同时释放不同的可配发物质。或者，多个室可以在贮存器中采用不同层的形式，以便从每个室中按顺序输送不同的可配发物质。在一个实例中，多个室中的每一个都由单独的移动柱塞控制，该柱塞可能由气体的产生来推动。电子元件可以控制气体发生单元1603以产生气体(例如通过单独的气体发生室等)来推动特定的移动柱塞，以输送各自的物质。在一些实施方式中，例如，可在释放前混合或组合多个室的内容物以激活药物。
可摄入装置1600可包括位于壳体1601的一端1602a的配发出口1607，以将可配发物质105引导出壳体。配发出口1607可包括出口阀、狭缝或孔、带注射器的喷射喷嘴，和/或类似物。当移动柱塞1604向壳体1601的端部1602a移动时，贮存器内的内部压力可能会升高，并推动配发出口打开，以使可配发物质1605从壳体1601中释放出来。
在一个实施方式中，减压装置1606可放置在壳体1601内，例如在壳体1601的端部1602a处。
在一些实施方式中，壳体1601可包括小孔(例如直径小于2mm)，例如在壳体1601的侧面，或在端部1602a处，以便于将可配发物质装入贮存器。
在一些实施方式中，可添加反馈控制电路(例如反馈电阻等)以将来自气体发生单元1603的反馈发送到电子元件，以便当内部压力达到阈值水平时，电子元件可控制气体发生单元1603以关闭气体发生或激活其它安全机构(如反馈控制的释放阀等)。例如，内部压力传感器可用于测量可摄入装置内的内部压力并对反馈控制电路产生反馈。
图17提供了根据本文所述的一些实施方式的说明用于配置成生成气体以配发物质的气体发生单元1603的机构的各个方面的示例图。如图17所示，气体发生单元1603产生气体1611，该气体1611可将可配发物质1605推出配发出口1607。可变电阻器1608可连接到具有气体发生单元1603的电路，以便可变电阻器1608可用于控制由单元1603产生的强度和/或气体量1611(例如氢气)。具体地说，气体发生单元1603可以是电池形式因子电池，当使用电阻器时能够产生氢气。这样，由于气体发生单元1603只需要使用电阻器，而无需任何有功功率要求，因此气体发生单元1603可集成到可摄入装置中，例如具有有限的可用能量/功率的胶囊。例如，气体发生单元1603可与尺寸为26mmx13mm或更小的胶囊兼容。
在一些实施方式中，基于气体从细胞的洗脱率和可摄入装置的内部体积，可能需要时间产生足够的气体1611以输送物质1605，所需时间可以是30秒或更长。例如，产生相当于500微升液体的氢气体积的时间约为5分钟。根据可摄入装置内的非理想条件(如摩擦等)，可能需要更长的时间。因此，鉴于气体(如氢气)的生产可能需要时间，可能需要在可摄入装置到达递送位点之前开始气体生成，以在装置内形成压力。然后，可摄入装置可能需要知道它何时接近递送位点。例如，该装置可在“入口转换”时开始产生气体(该“入口转换”由温度决定)，以便产生足够的气体，使其接近足以递送可配发物质的压力。然后，可摄入装置只有在到达递送位点时才能再次开始产生气体，这将导致可摄入装置内的内部压力达到配发出口释放可配发物质所需的水平。此外，对于特定区域的递送，可摄入装置可估计在可摄入装置到达特定位置之前，建立足够的压力以输送可配发物质所需的时间，以激活气体生成。
例如，对于系统递送，当可摄入装置的内部体积约为500微升，气体产生时间为2小时时，可产生约300磅/平方英寸绝对值(psia)的初始压力，压力可能更高和更低。当空气进入贮存器时，产生的压力可能会下降，所述贮存器在配发过程中预先被可配发物质占据。对于全身施用，皮肤渗透(例如穿透粘膜或上皮层)可能需要产生压力约为100至360磅/平方英寸(psi)的力。压力也可能因配发出口处的喷嘴设计、流体粘度以及周围组织的接近度和特性而变化。
可用于持续递送药物(例如4小时内1cc H2，0.5L潮气量下每分钟16次呼吸)的气体1611可等于约2000L呼出空气中的1cc氢气，或约0.5ppm H2，低于呼出氢气的生理值。将此时间减少到10分钟相当于约13ppm氢。因此，由于肠道的长度可能在这段时间内被覆盖，可摄入装置可能具有比生理学更高的局部化价值。
图18和图19公开于美国临时申请号62/385,553中(通过引用将其全部并入本文中)，说明了用于根据特定实施方案局部递送本文所公开的药物组合物的可摄入装置的示例。根据本文所述的特定实施方案，可摄入装置1600包括用于推送药物的活塞或驱动元件1634。可摄入装置1600可具有放置在壳体1601的端部1602a的一个或多个电池1631，为可摄入装置1600提供电源。印刷电路板(PCB)1632可放置在电池或其它电源1631附近，并且气体发生单元1603可安装在PCB 1632上或其之上。气体发生单元1603可被密封隔离于可摄入装置1600的底部室(例如包括1631和1632的空间)。可移动活塞1634可接近气体发生单元1603放置。这样，从气体发生单元1603产生的气体可以推动活塞1634向壳体1601的另一端1602b移动，以便通过配发出口1607将贮存器隔室1635中的可配发物质推出壳体，例如，该移动显示在1636，活塞1634在配发物质后位于某位置。配发出口1607包括塞子。贮存器隔室1635可以储存可配发物质(例如药物)，或者贮存器隔室可以容纳包含可配发物质的储存器1661。贮存器隔室1635或储存器1661具有约为600μl或更大体积的可配发物质，该可配发物质可以单次或在一段时间内逐渐地配发。
每个电池单元1631的高度可为1.65mm，可使用一至三个电池。为了节省空间，活塞的高度可以用定制的成型件降低1.5mm左右。如果气体发生单元1603与活塞1634集成，则印刷电路板、电池和气体发生单元的总高度可以降低到5mm左右，从而为药物储存提供更多的空间。例如，对于长度为7.8mm(例如从端部1602a到另一端1602b)的可摄入装置，可使用约600μl的贮存器隔室1635或储存器1661进行药物递送。对于另一实例，对于长度为17.5mm的可摄入装置，可使用约1300μl的贮存器隔室1635或储存器1661来释放药物。
在一些实施方案中，在用于存储治疗有效量的本文所述的任何试剂的贮存器1635或1661处，装置壳体1601的至少一部分。治疗有效量的本文所述的任何试剂可以存储在贮存器1635或1661中的特定压力下，例如，确定高于胃肠道内的压力，使得一旦贮存器1635或1661与胃肠道流体连通，所述试剂就会自动释放。在某些实施方案中，贮存器隔室1635包括多个室，并且多个室中的每一个存储不同的可配发物质或不同的储存器1661。
在某些实施方式中，储存器1661是可压缩组件或具有可压缩侧壁。在具体实施方式中，可压缩组分可至少部分地由聚氯乙烯(PVC)、硅酮、DEHP(邻苯二甲酸二-2-乙基己酯)、特卫强(Tyvek)、聚酯膜、聚烯烃、聚乙烯、聚氨酯或其它材料组成或者用其涂覆，所述其它材料阻止免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)粘附到贮存器并且为免疫调节剂提供无菌贮存环境。储存器1661可以被密封。贮存器隔室1635或储存器1661可被构造为在0.01mL-2mL，诸如0.05mL-2mL，诸如0.05mL-2mL，诸如0.6mL-2mL的范围内的量存储免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)。在一些实施方式中，储存器1661可附接到装置壳体1601，例如，在贮存器隔室中。因此，在放置在和/或耦接到可摄入装置壳体1601之前，可以向储存器1635装填免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)。可摄入装置壳体1601包括一个或多个开口，其配置成装载口，用于将可配发物质装填到贮存器隔室中。在另一个实施方式中，可摄入装置壳体1601包括一个或多个配置成排放口的开口。
在某些实施方式中，可摄入装置壳体1601包括一个或多个驱动系统(例如气体发生单元1603)，用于从贮存器1635中泵送免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)。在一些实施方式中，驱动系统可以包括机械、电气、机电、液压和/或流体驱动系统。例如，化学驱动方式可以使用混合一种或多种试剂的化学反应来产生足够体积的气体推动活塞或驱动元件1634来释放药物。驱动系统可以集成到储存腔1635中，也可以是作用在储存器1635上或外部的辅助系统。例如，驱动系统可以包括泵送系统，用于将免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)推出/拉出贮存器隔室1635外，或者驱动系统可以构造成使贮存器隔室1635的结构发生变化，从而使贮存器隔室1635内的体积发生变化，从而从贮存器隔室1635中配发免疫调节剂。驱动系统可以包括储能部件，例如电池或为驱动系统供电的电容器。驱动系统可以通过气体压力或系统存储势能来驱动，例如，能量来自在贮存器加载过程中以及在放置在可摄入装置壳体1601中之后被扩充的弹性贮存器元件，当可摄入装置壳体位于在胃肠道内释放的位置时，能量从扩充状态中释放。在某些实施方式中，贮存器隔室1635可包括膜部分，因此免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)经由渗透压从贮存器隔室1635或储存器1661中被配发。
在具体实施方式中，储存器1661呈波纹管的形式，其配置成通过来自气体发生单元的压力进行压缩。免疫调节剂可装入波纹管中，波纹管可通过气体发生单元的气体产生或其它驱动装置进行压缩，以将可配发物质配发通过出口1607并且配发到壳体1601外。在一些实施方式中，可摄入装置包括放置在气体发生单元和壳体的第一端之间的毛细管板，以及位于气体发生单元和贮存器之间的蜡封，其中蜡封配置成熔化，然后可配发物质被来自气体发生单元的压力推动通过毛细管板。波纹管的形状有助于控制递送。根据具体实施方案，储存腔1635包括配发出口，例如从壳体1601端部伸出的阀或圆顶缝隙1662。因此，当波纹管被压缩时，可配发物质可以通过阀或圆顶缝隙从波纹管中被推出。
在某些实施方式中，储存腔1635包括一个或多个阀门(例如配发出口1607中的阀门)，其配置成移动或打开以将储存腔1635流体耦合到胃肠道。在某些实施方式中，壳体1601的壳体壁可以形成储存腔1635的一部分。在某些实施方式中，贮存器的壳体壁用作垫圈。根据具体实施方案，一个或多个阀门中的一个或多个位于装置壳体1601的壳体壁中。在某些实施方案中，一个或多个导管可从贮存器1635延伸至一个或多个阀门。
在某些实施方式中，壳体1601的壳体壁可以由配置成例如为响应疾病位点的接触而溶解的材料形成。在某些实施方式中，壳体1601的壳体壁可配置成响应化学反应或电信号而溶解。一个或多个阀门和/或导致壳体1601壳体壁溶解或消散的信号可由位于装置壳体1601中的PCB 1632上的一个或多个处理器或控制器控制。控制器与配置成确定壳体1601何时接近疾病位点的一个或多个传感器或检测器通信耦合。在某些实施方式中，传感器或检测器包括包含涂层的多个电极。从贮存器隔室1635释放免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)是由来自电极的电信号触发的，该电信号由涂层与一个或多个疾病位点的位点相互作用产生。一个或多个传感器可以包括化学传感器、电传感器、光学传感器、电磁传感器、光传感器、气体传感器和/或射频传感器。从生物样品中检测挥发性有机化合物(VOC)和其它气体的方法包括电阻式金属氧化物气体传感器/混合金属氧化物气体传感器、电化学气体传感器、光学/IR气体传感器、导电聚合物/复合聚合物电阻/电容式气体传感器、石英晶体微天平气体传感器、碳纳米管、和载体催化/量热气体传感器。可摄入气体传感器的实例描述于在2013年10月31日公开的美国专利公开号US20130289368、2017年10月5日公开的美国专利公开号US20170284956和2016年12月15日公开的PCT专利公开号WO2016197181中。可以使用传感器在胃肠道中探测到的气体的实例包括但不限于氧气、氢气和二氧化碳。
在具体实施方式中，装置壳体1601可以包括一个或多个泵，配制成从贮存器隔室1635中泵送治疗有效量的免疫调节剂。泵与一个或多个控制器通信耦合。控制器配置成根据疾病位点的一个或多个探测器的检测和阀门的激活来激活泵，以使贮存器1635与胃肠道进行流体联通。该泵可包括流体驱动泵、电动泵或机械泵。
在某些实施方式中，装置壳体1601包括一个或多个锚定系统，用于将装置壳体1601或其一部分锚定在胃肠道中疾病位点附近的特定位置。在一些实施方式中，储存器包括锚定系统，并且包含可释放物质的储存器锚定到胃肠道。锚定系统可由控制器激活，以响应预期释放部位的一个或多个探测器的探测。在某些实施方式中，锚定系统包括配置成从装置壳体1601的壳体壁延伸的支腿或钉。该钉可以配置成收缩和/或可以配置成随时间溶解。PCT专利申请PCT/US2015/012209“胃肠道传感器植入系统”中描述了固定到胃肠道内表面的可连接装置的示例，该专利申请于2015年1月21日提交，其通过引用整体并入本文中。
图20提供了具有柔性隔膜1665的示例结构图，当气体发生单元1603产生气体时，该柔性隔膜1665可向配发出口1607变形。然后可通过配发出口1607，由变形的隔膜将可配发物质推出壳体。图20所示的配发出口1607是环形阀的形式，但是，可以采用任何出口设计。
在一些实施方式中，可摄入装置可以具有伞形出口阀结构作为可摄入装置的配发出口。任选地，可摄入装置可具有可变形用于药物递送的柔性隔膜和/或集成活塞和气体发生单元，使得气体发生单元可与活塞一起移动以推动药物递送。
在某些实施方式中，可摄入装置进入感兴趣区域后，可通过从可摄入装置伸出钩子来锚定在肠内。例如，当可摄入装置确定其已到达胃肠道内的某个位置时，可启动钩子，使其延伸至可摄入装置的外部，以捕获肠壁并将可摄入装置固定在相应位置。在一些实施方式中，钩子可以刺穿肠壁以将可摄入装置100固定到适当位置。钩子可以是空心的。空心钩子可用于固定可摄入装置和/或从可配发物质中配发物质，例如进入肠壁。
在一些实施方式中，可摄取装置包括用于夹持肠壁的一部分以递送可配发物质的肠夹。这种夹持器可以包括两个或多个臂，其配置成在装置外并接近夹持肠壁的一部分。
注射针可与锚臂配合使用，以在肠壁的一部分被夹持后，将可配发物质注入肠壁。
在一些实施方式中，当气体发生单元产生气体以推动活塞向喷嘴移动时，可配发物质可在压力下被推动以打破爆破隔膜，从而通过喷嘴被注入。
在一些实施方式中，可摄入装置具有喷射输送机构，其具有增强的可配发物质的可用体积。例如，喷嘴可放置在可摄入装置的中心，并且气体通道可沿可摄入装置的壁纵向放置，以从气体发生单元输送气体以推动活塞，活塞位于可摄入装置的端部。
在一些实施方式中，可摄入装置可以使用渗透压将可摄入装置的抽吸装置粘附到肠壁上。例如，可摄入装置可能具有渗透机构，其具有储存盐晶体的室。该室可以包括设置在室的一端的爆破阀附近的网，以及设置在室的另一端的阀门附近的反渗透(RO)膜。抽吸装置，例如两个或多个抽吸指，放置在室的外部，所述室具有暴露于胃肠道内的管腔液体中的开口。当渗透机构失活时，例如阀门关闭，使得没有管腔流体被吸入渗透室。当通过打开阀门激活渗透机构时，管腔流体通过吸入装置的出口进入可吸入装置，并通过阀门进入渗透室。然后，室中的盐溶解到液体中。反渗透膜防止任何流体反向流动，例如从室内流向阀门。液体连续流动，直到室内所含的所有盐溶解或肠道组织被卷入吸入装置。随着管腔流体不断流入室内，室内含有溶解盐的管腔流体溶液可降低渗透压，从而吸入力也可降低。这样，在组织与瓣膜接触之前，肠道组织的抽吸可能会停止，以避免损坏肠道组织。
使用渗透机构的可摄入装置还可以包括如图所示的吸入装置。吸入装置可以是两个或多个吸入指347a-b，其布置在接近出口。出口可以连接到存储可配发物质(例如治疗剂)的储存器。储存器可以接触活塞(类似于图16中的104)，活塞可以通过渗透泵产生的压力推动活塞向出口移动。渗透泵可以是类似于前款所述的渗透机理。分离部分可放置在可摄入装置的另一端(与设置出口107的一端相对)的附近。
在一些实施方式中，使用可摄入装置的翻滚抽吸。这种可摄入装置不需要任何电子元件或其它驱动元件。这种可摄入装置在通过肠道时可能会持续、间歇或周期性地翻滚。当可摄入装置跌落到出口与肠壁直接接触的位置时，可能发生类似于前文所述的抽吸过程。可摄入装置100的外壁可添加额外的结构元件，例如翼片或凹槽等，以促进翻转运动。
在某些实施方式中，贮存器是可锚定的贮存器，其是包括一个或多个用于将贮存器锚定在胃肠道中临近免疫调节剂的预期递送位点的特定位置的锚定系统。在某些实施方式中，锚定系统包括支腿或钉或其它固定装置，例如穿孔元件、夹持元件、磁通量引导元件或粘合材料，其配置成从装置壳体的可锚定的贮存器延伸。该钉可以配置成收缩和/或可以配置成随时间溶解。在一些实施方式中，可锚定的贮存器适于定位、放置和/或锚定。在一些实施方式中，可锚定的贮存器适于通过内窥镜定位、和放置和/或锚定。在一些实施方式中，可锚定的贮存器连接到内窥镜。在一些实施方式中，可锚定的贮存器以适于口服施用的方式连接到内窥镜。在一些实施方式中，可锚定的贮存器以适于直肠施用的方式连接到内窥镜。因此，在一些实施方式中，本文提供的是连接到内窥镜的可锚定的贮存器，其中可锚定的贮存器包含治疗有效量的本文所述的试剂中的任一种。在一些实施方式中，内窥镜装配有喷雾导管。
可锚定的贮存器的示例性实施方式如下。在以下示例性实施方式的更具体实例中，贮存器连接到内窥镜。
在一个实施方式中，可固定的贮存器包括用于插入体部管道的植入囊，以对体部管道的选定部分实施辐射治疗。贮存器包括限定至少一个治疗材料接收室的身体构件和与身体构件关联的至少一个弹性臂构件，其用于当装置定位在其中时可拆卸地接合身体管道。
在一个实施方式中，可锚定的贮存器具有多个吸入口，允许通过装置的单一定位将多个组织皱褶捕获在吸入口中，并通过组织固定机构(例如缝合线、钉或组织粘合的其它形式)连接在一起。吸入口可在贮存器上以各种配置布置，以最适合所需的组织定向。
在一些实施方式中，公开了一种可锚定的贮存器，其包括一个束刺激器和/或监视器IMD，所述束刺激器和/或监视器IMD包括封闭电刺激和/或监测电路和电源的壳体，以及从壳体延伸到适于固定到胃肠道壁的主动固定机构的细长柔性构件。固定完成后，细长柔性构件弯曲成一个预成型形状，将壳体压向粘膜，从而尽量减少可能移动固定机构的力。IMD安装在食道导管管腔中，固定机构朝向导管远端开口，从而使柔性构件中的弯曲变直。导管体经食道插入胃肠道腔，以引导导管远端至植入部位，并且将固定机构固定于胃肠道壁。IMD从管腔中弹出，并且柔性构件呈弯曲形状并使密封壳体紧贴粘膜。第一刺激/感应电极优选是壳体的外露导电部分，该部分与柔性构件的弯曲部分对齐，以便将其压在粘膜上。第二刺激/感应电极位于固定位置。
在一些实施方式中，用于感测患者的一个或多个参数的贮存器锚定在组织的特定位置上，并且使用在单个运行期间操作的单个执行器从装置释放。例如，在执行器的单次运行期间，递送装置可将胶囊锚定至组织部位并从递送装置释放贮存器。
在一些实施方式中，提供了一种装置，其包括：配置成包含流体的贮存器，其具有至少一个出口，流体可通过该出口流出贮存器；包含在贮存器中的流体；包含在贮存器中且在流体中具有可控有效浓度的主要材料；以及至少一种电磁响应控制元件，其位于贮存器中或贮存器壁中，用于改变流体中携带的第一活性形式和贮存器内的第二形式之间的主要材料的分布，以响应入射的电磁控制信号，有效浓度是流体中第一种活性形式的浓度，因此流出贮存器的流体以有效浓度携带第一种活性形式的主要材料。
在一些实施方式中，提供了用于实施或部署医疗或兽医装置或贮存器的系统和方法，其(a)可操作用于至少部分地锚定在消化道内，(b)足够小，以能够通过自然途径通过管道，并且包括无线控制组件，(c)具有一个或多个可定位于粘膜附近的突出部，(d)配置成促进锚定的冗余模式，(e)促进“主要”材料在胃内供应一段延长的和/或可控制的时间，(f)由受试者头部或颈部支持的一个或多个适应性延长模块锚定，和/或(g)配置成促进在受试者的体腔中支撑至少有一个传感器达一天或更长时间。
在某些实施方式中，贮存器可连接到可摄入装置。在某些实施方式中，可摄入装置包括壳体，并且贮存器可连接到壳体。在某些实施方式中，可连接的贮存器也是可锚定的贮存器，例如包括一个或多个锚系统用于将贮存器锚定在上文所公开的胃肠道中的特定位置的可锚定贮存器。
因此，在某些实施方式中，本文提供用于治疗如本文公开的在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法中的免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)，其中免疫调节剂包含在适于连接到装置壳体的贮存器中，并且其中该方法包括将贮存器连接到装置壳体以在向受试者口服施用可摄入装置之前形成可摄入装置。
在某些实施方式中，本文还提供一种含有免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)的可附接贮存器，其用于治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法中，其中所述方法包括将所述贮存器连接到装置壳体上以形成可摄入装置并且将所述可摄入装置口服施用于受试者，其中通过装置在所述受试者的胃肠道中接近免疫调节剂的预期释放部位的位置处释放所述免疫调节剂。
在某些实施方式中，本文提供的是含有免疫调节剂的可连接的贮存器，其中贮存器可连接到装置壳体上，以形成适于经口施用给受试者的可摄入装置，并且能够在受试者胃肠道中的接近预期释放部位的位置释放免疫调节剂。
在具体实施方案中，可摄入装置包括摄像机(例如摄影机)，该摄像机能够在不感到不适或不需要镇静的情况下检查整个胃肠道，从而避免传统内镜检查的许多潜在风险。可以使用视频成像帮助确定胃肠道的一个或多个特征。在一些实施方式中，可摄入设备101可包括用于生成胃肠道视频成像数据的摄像机，该摄像机可用于确定设备的位置(除了其它之外)。视频成像胶囊的示例包括美敦力公司的PillCamTM、奥林巴斯公司的
Figure BDA0002449116230004871
和Intromedic公司的MicroCamTM。有关成像胶囊的回顾，请参见Basar等“Ingestible Wireless Capsule Technology:A Review of Development and FutureIndication”International Journal of Antennas and Propagation(2012)；1-14。通过装置101实施的其它成像技术可包括热成像摄像机，以及利用超声波或多普勒原理产生不同图像的成像技术(参见中国专利申请CN104473611：“具有超声定位功能的胶囊内窥镜系统”)。
可摄入装置可配备产生反射光的光源，包括紫外线、可见光、近红外和/或中红外光谱中的光，以及用于光谱和高光谱成像的相应探测器。同样，可以使用自荧光来表征胃肠道组织(例如皮下血管信息)，或者可以使用低剂量辐射(参见Check CapTM)来获得三维重建图像。
装置组件
根据本发明具体实施方式的可摄入装置可包含由不可消化材料制成的组件并且含有免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)。在一些实施方式中，该材料是塑料。
可以设想的是，该装置为一次性使用。在施用时间之前，给装置装填药物。在一些实施方式中，优选提供包含预先装填药物的装置的医药产品。
锚定组件
几个系统可以主动地驱使和控制胶囊在胃肠道的不同部分中的位置和方向。例如，实例包括可由可摄入装置部署以抵抗胃肠道狭窄部分(如肠道)的蠕动力，并将装置固定到某个位置的腿状或锚状机构。其它系统采用不同形状的磁屏，其可以与外部磁场相互作用来移动装置。这些机构在小肠以外的区域(如盲肠和大肠)可能特别有用。
锚定机构可以是机械机构。例如，装置可以是包括多个配置用于引导胶囊的支腿的胶囊。例如，胶囊中的支腿数可以是2条、4条、6条、8条、10条或12条。装置的支腿之间的孔径可高达约35mm；约30mm至约35mm；约35mm至约75mm；或约70mm至约75mm。每条支腿的接触面积可以改变，以减少对组织的影响。胶囊中的一个或多个电机可以各自独立地驱动一组支腿。电机可以是电池驱动的电机。
锚定机构可以是非机械机构。例如，装置可以是包含位于胶囊内部的永磁体的胶囊。胶囊可通过外部磁场锚定在胃肠道的所需位置。
锚定机构可以包括非机械机构和机械机构。例如，装置可以是包含一个或多个支腿的胶囊，其中一个或多个支腿涂有粘合材料。
运动组件
可摄入装置可以是主动的或被动的，这取决于它们是否有受控或非受控的运动。考虑到实施运动模块的挑战，被动(非受控)运动在可摄入设备中更常用。主动(受控)运动在内镜下可摄入胶囊中更常见。例如，胶囊可包含小型化运动系统(内部运动)。内部运动机构可采用由直流刷电机驱动的独立微型螺旋桨，或使用水刺头。作为一个实例，机构可能包括基于鞭毛或皮瓣的游动机构。作为一个实例，机构可以包括循环压缩/伸展形状记忆合金(SMA)弹簧执行器和基于定向微针的锚定系统。作为一个实例，机构可包括六个SMA驱动单元，每个单元配备两个SMA执行器，以实现双向运动。作为一个实例，机构可以包括适合于电刺激胃肠肌肉以在肠道中产生暂时性限制的电机。
作为一个实例，胶囊可以包括磁铁，并且胶囊的运动是由外部磁场引起的。例如，运动系统可以包括可摄入胶囊和外部磁场源。例如，该系统可包括可摄入胶囊和磁制导设备，例如，耦合到专用控制接口的磁共振成像和计算机断层扫描。
在一些实施方式中，药物释放机构也可由外部条件触发，例如温度、pH、运动、声学或其组合。
在活组织检查和外科中使用内窥镜或可摄入装置
取样
可摄入装置可包括适于收集组织样本的机构。在一些实例中，这是通过使用机电方案来收集样本并将其存储在可摄入设备中实现的。作为一个实例，活检机构可包括固定在扭转弹簧上的旋转组织切割剃刀，或使用微夹钳折叠和收集小的活检组织切片。作为一个实例，可以使用超范围夹
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执行内窥镜手术和/或活检。作为本文所公开方法的实例，所述方法可以包括释放免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)和在装置内收集样品。作为一个实例，该方法可包括在单个程序中释放免疫调节剂并且在装置内收集样品。
图21示出在壳体中具有多个开口的可摄入装置2100的示例。可摄入装置2100具有壳体，其具有第一端2102A、第二端2102B和从第一端2102A纵向延伸至第二端2102B的壁2104。可摄入装置2100在壳体中具有第一开口2106，该第一开口2106连接到壳体中的第二开口2108。可摄入装置2100的第一开口2106大体上垂直于第二开口2108，并且第一开口2106和第二开口2108之间的连接在可摄入装置2100内形成弯曲室2110。
可摄入装置2100或本发明中讨论的任何其它可摄入装置的整体形状可能类似于细长的药丸或胶囊。
在一些实施方式中，弯曲室2110的一部分可用作采样室，其可容纳从胃肠道获得的样品。在一些实施方式中，弯曲室2110被细分为子室，每个子室可以由一系列的一个或多个阀门或联锁装置分开。
在一些实施方式中，第一开口2106、第二开口2108或弯曲室2110包括亲水或疏水材料、海绵、阀门或透气膜中的一个或多个。
使用亲水性材料或海绵可使样品保留在弯曲腔2110内，并可减少流体通过第一开口2106并排出弯曲腔2110内的空气或气体所需的压力的量。可并入可摄入装置2100中的亲水性材料的实例包括亲水性聚合物，例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮等。同样，经过多种类型处理(例如等离子体处理)的材料可具有适当的亲水性，并可并入可摄入装置2100中。海绵可由任何合适的材料或材料组合制成，例如棉纤维、人造丝、玻璃、聚酯、聚乙烯和聚氨酯等。海绵通常可由市售材料诸如由
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生产的那些制成。
如下文更详细地讨论的，在一些实施方式中，可以对海绵进行处理以改变其吸收性或帮助保存样品。
在一些实施方式中，可以切割或研磨海绵以改变其吸收性或其它物理性质。
位于第二开口2108附近的疏水材料可排斥液体，阻止液体样品通过第二开口2108进入或离开弯曲室2110。这可以起到类似透气膜的作用。可并入可摄入装置2100中的疏水材料的实例包括聚碳酸酯、丙烯酸树脂、碳氟化合物、苯乙烯、某些形式的乙烯基等。
以上列出的各种材料作为示例提供，并且不受限制。在实践中，任何类型的适当亲水性、疏水性或样品保存材料可用于可摄入装置2100。
在一些实施方式中，可摄入装置包括作为隔膜阀的可移动阀，其使用机械执行器移动柔性隔膜以密封或打开入口区域的第二部分中的孔，其可以有效地阻塞或疏通入口区域。然而，可以理解，在一些实施方式中，可移动阀可以是不同类型的阀。例如，在一些实施方式中，可移动阀可由泵送机构代替。作为另一个实例，在一些实施方式中，可移动阀被渗透阀取代。
可摄入装置的取样室可以具有允许空气或气体从取样室中排出的出口，同时阻止可摄入装置获得的样品的至少一部分从取样室中排出。例如，出口可包括透气膜。可吸入装置可以包括作为其出口的一部分的单向阀。
可摄入装置可以包括连接到可摄入装置壳体内的体积的出口。出口可以为气体提供一条通道，使其从可吸入装置中排出并释放到可吸入装置周围的环境中。这可以防止可摄入装置的壳体内积聚压力。在一些实施方式中，可摄入装置不包括出口，气体保持在可摄入装置的体积内。在一些实施方式中，出口可包含透气膜、单向阀、疏水通道或一些其它机构，以避免不需要的材料(例如来自胃肠道内的液体和固体颗粒)通过出口进入可摄入装置。
在一些实施方式中，可摄入装置可以包括位于取样室内部或接近所述取样室的传感器。例如，该传感器可用于检测包含在取样室中的样品的多种性质，或者该传感器可用于检测应用于包含在取样室中的样品的检测技术的结果。
在一些实施方式中，亲水性海绵位于取样室中，并且该亲水性海绵可配置成在样品进入取样室时吸收样品。在一些实施方式中，亲水海绵填充取样室的大部分，并将样品保持较长时间。如果在可摄入装置离开身体后从可摄入装置收集样品，这可能特别有利。在一些实施方式中，亲水海绵仅放置在某些表面上或仅填充采样室的某些部分。例如，可以用亲水海绵将取样室的某些墙壁(或所有墙壁)与之对齐，以帮助提取样品，同时使取样室的一些墙壁(或没有任何墙壁)裸露。留下裸露墙壁可能允许使用需要相对不被遮挡的光路的诊断或检测技术。
在一些实施方式中，可摄入装置可包括连接到出口或者直接或间接连接到取样室的密封真空室。在一些实施方式中，针阀可用作可移动阀(例如作为可摄入装置的可移动阀)。在某些实施方式中，旋转阀可用作可移动阀(例如作为可摄入装置的可移动阀)。在一些实施方式中，柔性隔膜或隔膜阀可用作可移动阀(例如作为可摄入装置的可移动阀)。在某些实施方式中，机构接近隔膜或与隔膜直接接触。弹簧机构可向隔膜施加压力，以对抗机械执行器施加的压力，当机械执行器不向柔性隔膜施加压力时，其可能导致柔性隔膜移动到打开位置。此外，这可以确保当机械执行器没有在柔性隔膜上施加压力时，隔膜阀保持打开状态。在一些实施方式中，将机械执行器从关闭位置移动到打开位置会导致可摄入装置内的入口区域的体积增加。这可能导致入口区域内的压力降低，产生吸力，以将样品吸入入口区域。同样，将机械执行器从打开位置移动到关闭位置可能导致入口区域的体积减小。这可能导致入口区域内的压力增加，将样品推出入口区域。根据入口区域、机械执行器和可移动阀的设计，这可能会将样品推入取样室，而不是将样品通过可吸入装置的开口推回。
图22描绘了可摄入装置3000内部的一部分的横截面图。如图22所示，可摄入装置3000的内部包括阀门系统3100和取样系统3200。阀门系统3100被描述为具有与开口3018齐平的部分，以便阀门系统3100防止可摄入装置2000外部的流体进入取样系统3200。但是，如下文中参考图22-27所述，阀门系统3100可以改变位置，使得阀门系统3100允许可摄入装置3000外部液体进入取样系统3200。
图23和图27更详细地说明了阀门系统3100。如图23所示，阀门系统3100包括驱动机构3110、触发器3120和门3130。在图23和图7中，门3130的支腿3132与壳体壁3016平齐并平行，以便门支腿3132盖住开口3018，以防止可摄入装置3000外部的液体(例如胃肠道中的液体)进入可摄入装置3000的内部。门3130的突出部3134与触发器3120的凸缘3122接合。触发器3120的钉子3124与执行机构3110的蜡罐3112接合。参考图27，偏压机构3140包括压缩弹簧3142，该压缩弹簧向上施力于门3130。偏压机构3140还包括一个扭转弹簧3144，该扭转弹簧以逆时针方向向触发器3120施加力。在图23和图27中，扭转弹簧3144施加的力与罐3112中的固体蜡反向作用，并且压缩弹簧3142施加的力与凸缘3122反向作用。
图24A和图24B显示了驱动机构3110驱动触发器3120移动的方式的实施方式。类似于图23和图27，图24A显示了以下结构：其中由于扭转弹簧3144，钉子3124对固体蜡罐3112施加力，并且蜡罐3112的固体性质抵抗钉子3124施加的力。控制单元3150与阀门系统3100进行信号通信。在使用可摄入装置3000的过程中，控制单元3150接收到信号，指示阀门系统3100的位置应该改变，例如，这样可摄入装置3000可以在胃肠道中采集液体样品。控制单元3150发送信号，该信号使执行系统3100的加热系统3114加热罐3112中的蜡，从而使蜡熔化。如图24B所示，熔化的蜡无法抵抗钉子3124施加的力，因此在扭转弹簧3144的力下，触发器3120以逆时针方式移动。
图25A和25B说明了触发器3120和门3130在驱动前后的相互作用。如图25A所示，当蜡罐3112为固体时(对应于图24A所示的结构)，突出部3134与凸缘3122接合，从而防止压缩弹簧3142的力向上移动门3130。如图25B所示，当罐3112中的蜡熔化时(图24B)，触发器3120逆时针移动，凸缘3122脱离突出部3134。这允许压缩弹簧3142的力向上移动门3130。通过比较图25A和图25B可见，门3130向上移动导致门支腿3132中的开口3136向上移动。
图26a和26b说明了开口3136向上移动对可摄入装置3000获取样品的能力的影响。如图26A所示，当罐3112中的蜡是固体时(图24A和25A)，开口3136与可摄入装置3000的壁3016中的开口3018不对齐。相反，门支腿3132覆盖开口3018，阻止液体进入可吸入装置3000的内部。如图26B所示，当罐3112中的蜡熔化，并且触发器3120和门3130移动时(图24B和42B)，门3130的开口3136与壁3016的开口3018对齐。在此结构中，可摄入装置3000外部的液体(例如在胃肠道中)可通过开口3018和3036进入可摄入装置3000的内部。
图27显示了可摄入装置3000的更详细的视图，该可摄入装置3000包括阀门系统3100和取样系统3200。
虽然上述描述是关于具有一个打开位置和一个关闭位置的阀门系统(例如两级阀门系统)，但在这个意义上，本公开并不限于此。相反，上述关于两级阀门系统的思想可以通过具有两级以上(例如三级、四级、五级等)的阀门系统实现。
如上所述，除了阀门系统外，可摄入装置还包括取样系统。图28示出了带有取样系统3200和阀门系统3100的某些部件的可摄入装置3000的局部横截面图。取样系统3200包括一系列海绵，该海绵配置成从开口处吸收液体，将液体移动到壳体内的某个位置，并为测试准备液体。为测试的准备工作可能包括过滤流体和将流体与化学测试结合。所述测试可被配置成在过滤样品中染色细胞。该系列海绵包括芯吸海绵3210、转移海绵3220、体积海绵3230和测试海绵3240。取样系统3200还包括位于测试海绵3240和用于气体离开取样系统3200的排放口3280之间的膜3270。细胞过滤器3250位于芯吸海绵3210的远端3214和转移海绵3220的第一端3222之间。膜3270配置成允许一种或多种气体通过开口3280离开取样系统3200，同时将液体保持在取样系统3200中。
图29是可摄入装置4000的高度示意图，该可摄入装置4000包含多个不同的系统，这些系统配合(例如在受试者的胃肠道内)获取样品和分析样品。可摄入装置4000包括电源系统4100(例如一个或多个电池)，其配置成为电子系统4200(例如包括控制系统，任选地与外部基站进行信号通信)、阀门系统4300、采样系统4400和分析系统4500供电。示例性分析系统包括测试系统，例如，包含一个或多个辐射源和/或多个探测器的光学系统。
上述取样系统的部分或全部海绵可能含有一种或多种防腐剂(见上文讨论)。通常，测试海绵和/或体积海绵3230和/或转移海绵含有一种或多种防腐剂。通常，防腐剂是基于感兴趣的分析物而选择的，例如用于胃肠道疾病的分析物(例如蛋白质生物标记物)。
通信系统
可摄入装置可配备适于传输和/或接收数据的通信系统，所述数据包括成像和/或定位数据。例如，通信系统可以采用射频传输。使用射频通信的可摄入装置是有吸引力的，因为它们能有效地通过皮肤层进行传输。这尤其适用于低频传输(UHF-433ISM及以下，包括医疗器械无线电通信服务频段(MDRS)402-406MHz)。在另一个实施方式中，声学用于通信，包括数据传输。例如，可摄入胶囊可以通过向机电传感器或压电(例如PZT、PVDF等)设备施加一个或多个基极电压来传输信息，以使压电设备以特定频率振铃，从而产生声音传输。用于接收声音传输的多传感器阵列可包括多个声音传感器，其接收来自可移动装置(例如于2007年9月6日提交的美国专利申请号11/851214中所述的可摄入胶囊)的声音传输，该专利申请通过引用而全部并入本文中。
作为一个实例，通信系统可以采用人体通信技术。人体通信技术利用人体作为传导介质，通常需要在皮肤上安装大量的传感器电极。作为一个实例，通信系统可以集成数据存储系统。
环境传感器
在一些实施方式中，该装置可包含用于测量pH、温度、传输时间或其组合的环境传感器。环境传感器的其它示例包括但不限于电容传感器、阻抗传感器、心率传感器、声学传感器(例如麦克风或压敏检波器)、图像传感器和/或运动传感器。在一个实施方式中，可摄入装置包括用于生成不同种类环境数据的多个不同环境传感器。
为了避免胶囊滞留的问题，应进行彻底的既往医疗和手术史。此外，还提出了其它几个步骤，包括开展例如钡跟进的调查。如果怀疑患者有很高的滞留风险，则在吞咽可摄入装置之前几天给患者服用探路胶囊。任何可溶解的非内窥镜胶囊可用于确定胃肠道的通畅性。探路胶囊通常与可摄入装置大小相同，并且可以用玻璃纸制成。在一些实施方式中，探路胶囊包含钡和乳糖的混合物，其允许通过X射线可视化。探路胶囊还可以包括放射性标签或其它标签，使其能够被外部的无线电扫描仪探测到。探路胶囊可包含蜡塞，其允许肠液进入并溶解内容物，从而将胶囊分成小颗粒。
因此，在一些实施方式中，本文的方法包括：(a)识别患有在来源于所述内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的受试者，和(b)评估所述受试者是否适合治疗。在一些实施方式中，本文的方法包括评估被确定患有在来源于内胚层的组织中出现的疾病或病状的的受试者是否适合治疗。在一些实施方式中，评估受试者是否适合治疗包括确定受试者胃肠道的通畅性。
在一些实施方式中，可摄入装置包括用于将可摄入装置锚定到受试者组织的组织锚定机构。例如，可摄入装置可被施用于受试者，且一旦达到用于释放免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)的所需位置，组织附接机构可被激活或部署，以使可摄入装置或其一部分锚定至所需位置。在一些实施方式中，组织锚定机构是可逆的，使得在初始锚定之后，组织附着装置被收缩、溶解、分离、灭活或以其它方式而使其不能将可摄入装置锚定到受试者的组织上。在一些实施方式中，通过内窥镜放置连接机构。
在一些实施方式中，组织锚定机构包括渗透驱动的吸管。在一些实施方式中，渗透驱动吸管包括位于渗透驱动吸管近侧(例如邻近受试者的组织)的第一阀和由渗透驱动吸管远侧的渗透压力打开的第二单向阀，以及包含盐晶体和位于两个阀门之间的半渗透膜的内部渗透泵系统。在这样的实施方式中，渗透压用于将可摄入装置粘附到受试者组织，而不在可摄入胶囊内产生真空。通过打开第一个阀激活渗透系统后，液体通过吸管被吸入并通过第二个爆破阀排出。液体连续流动，直到吸管中所含的所有盐溶解或直到组织被吸入吸管中。当阈限的流体通过渗透泵系统吸入时，溶质在组织和第一个阀之间堆积，从而降低渗透压。在一些实施方式中，在组织接触到阀门之前，溶质积聚使泵停止，从而防止组织损伤。在一些实施方式中，在渗透驱动吸管的远侧使用爆破阀，而不是单向阀，使得管腔流体最终清洗盐室，而渗透流反向，主动将受试者的组织推出吸管。在一些实施方式中，可摄入装置可以锚定在形成受试者胃肠道的组织的内表面上。在一个实施方式中，可摄入装置包括用于将装置锚定到胃肠道的内表面的连接器。使用粘合剂、负压和/或紧固件，连接器可将可摄入装置操作至胃肠道内表面。
在一些实施方式中，装置包括束刺激器和/或监护仪IMD，其包括包围电刺激和/或监护仪电路和电源的壳体，以及从壳体延伸到适于固定到胃肠道壁的主动固定机构的加长柔性构件。固定完成后，细长柔性构件弯曲成一个预成型形状，将壳体压向粘膜，从而尽量减少可能移动固定机构的力。IMD安装在食道导管管腔中，固定机构朝向导管远端开口，从而使柔性构件中的弯曲变直。导管体经食道插入胃肠道腔，以引导导管远端至植入部位，并且将固定机构固定于胃肠道壁。IMD从管腔中弹出，并且柔性构件呈弯曲形状并使密封壳体紧贴粘膜。第一刺激/感应电极优选是壳体的外露导电部分，该部分与柔性构件的弯曲部分对齐，以便将其压在粘膜上。第二刺激/感应电极位于固定位置。
在一些实施方式中，装置包括将装置锚定到体腔内组织的固定机构，以及允许从组织锚定位置选择性地解除装置锚定而无需内窥镜或手术干预的机构。电磁装置可设置为机械地驱动脱锚机构。或者，熔丝可以通过电气方式断开装置的锚定。作为另一种选择，可将可快速降解的粘接剂暴露于降解剂中，以从体腔内的粘接剂表面脱锚装置。
在一些实施方式中，装置如专利公开WO2015112575A1中所公开，所述专利通过引用全文并入本文中。该专利公布针对的是胃肠道传感器植入系统。在一些实施方式中，可口服施用胶囊包含可拆卸地耦接到可口服施用胶囊的组织捕获装置或贮存器，其中组织捕获装置包括用于将组织捕获装置锚定到身体内胃肠组织的多个紧固件。
在一些实施方式中，可摄入装置包含电能发射部件、无线电信号发射部件、药剂存储部件和远程可驱动药剂释放部件。胶囊以先前绘制的路线穿过消化道时向远程接收器发送信号，到达指定位置时远程触发以释放药物剂量。因此，在一些实施方式中，释放所述试剂由远程电磁信号触发。
在一些实施方式中，可摄入装置包括可引入体腔的壳体，该壳体是不溶于体腔流体的材料，但是与开口加工成型，所述开口覆盖有可溶于体腔流体的材料。隔膜将壳体内部分为药物室(包括开口)和控制室。当电流通过控制室以由电流控制的速率将药物从药物室通过开口递送到体腔中时，控制室中的电解池产生气体。因此，在一些实施方式中，释放免疫调节剂是通过生成足以排出免疫调节剂的量的气体组成来触发的。
在一些实施方式中，可摄入装置包括口服药物递送装置，其具有壳体，所述壳体具有透水材料的壁和由可置换膜分隔的至少两个室。第一室接收药物并具有一个孔口，通过该孔口，药物在压力下被排出。第二室包含形成电路一部分的两个间隔开的电极中的至少一个，该电路通过离子水溶液进入第二室而闭合。当电流通过电路时，气体产生并作用于可置换膜以压缩第一室，并通过孔口排出活性成分，以逐步输送至胃肠道。
在一些实施方式中，可摄入装置包括用于将物质递送到哺乳动物胃肠道中的所选位置的可摄入装置，可摄入装置包括用于将装置的可打开部分通电至用于配发所述物质的打开位置的电磁辐射接收器。接收器包括连接能量场的盘绕导线，该导线具有空气或铁氧体磁芯。在又一个实施方式中，本发明包括用于产生电磁辐射的设备，该设备包括一对或多对支承在壳体中的场线圈。该装置任选地包括由加热电阻器和可熔约束件定义的锁存器。该装置还可以包括柔性构件，该柔性构件可以起到激活发送器电路以指示物质配发的一个或两个功能，以及抑制用于排出物质的活塞。
在一些实施方式中，可摄入装置包括用于将物质递送到哺乳动物胃肠道中的所选位置的可摄入装置，可摄入装置包括用于将装置的可打开部分通电至用于配发所述物质的打开位置的电磁辐射接收器。接收器包括连接能量场的盘绕导线，该导线具有空气或铁氧体磁芯。在又一个实施方式中，本发明包括用于产生电磁辐射的设备，该设备包括一对或多对支承在壳体中的场线圈。该装置任选地包括由加热电阻器和可熔约束件定义的锁存器。该装置还可以包括柔性构件，该柔性构件可以起到激活发送器电路以指示物质配发的一个或两个功能，以及抑制用于排出物质的活塞。
在一些实施方式中，可摄入装置是可吞咽胶囊的装置。传感模块配置在胶囊中。生物活性物质配发器配置在胶囊中。贮存器和逻辑部件配置在胶囊中，并且与传感模块和配发器通信。
在一些实施方式中，局部施用是经由电子探针实施的，该电子探针被引入活体的肠道并在其中自主操作，适于递送一种或多种治疗剂。在一个实施方式中，该方法包括用一种或多种治疗剂填充探针，并在肠道的所需位置选择性地从探针释放所述制剂，以便提供比传统口服或静脉注射制剂更高的疗效。
在一些实施方式中，根据从特定哺乳动物施用前获得的预先确定的药物释放曲线，可摄入装置包括用于将药物充分地配发到胃肠道预期部位的电子控制部件。因此，在一些实施方式中，释放免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)是由装置内产生的电磁信号触发的。释放可根据预先确定的药物释放情况而发生。
在一些实施方式中，可摄入装置可以包括至少一个导管、定位在导管中的一个或多个组织穿透构件、递送构件、驱动机构和释放元件。释放元件暴露在肠道内的多种条件下会降解，从而释放并驱动驱动机构。本发明实施方式尤其适用于在胃肠道内吸收、耐受和/或降解不良的药物的递送。
在一些实施方式中，可摄入装置包括电子药丸，该电子药丸包括至少一个具有固体粉末或颗粒状药剂或制剂的贮存器、排出口和响应于控制电路以将药物从贮存器移置到排出口的执行器。药剂或制剂包含在惰性载体基质中的一种或多种活性成分(例如粉末状或颗粒状固体)的分散剂。任选地，活性成分通过使用被通过可半渗透的壁部分吸收到药丸中的肠道水分来分散。
在一些实施方式中，可摄入装置包括传感器，其包括多个具有小尺寸和较低功耗的电极和电极外部的涂层，其中涂层与目标条件相互作用，从而产生电极的电性能的变化，其中该变化通过电极转化成电信号。因此，在一些实施方式中，释放免疫调节剂是由电极发出的电信号触发的，该电信号是由涂层与预期释放部位的相互作用产生的。本文进一步提供了一种用于药物递送的系统，包括该传感器和药丸。
在一些实施方式中，可摄入装置包括电子药丸，其包括多个贮存器，所述每个贮存器包括由可移动盖覆盖的排放口。药丸包括至少一个对控制电路作出响应以从排放口移除盖的执行器。执行器例如可以是加载弹簧的活塞，在配发药剂时打破箔盖。或者，盖可以是具有开口的可旋转盘或圆筒，开口可以在执行器的作用下与贮存器的排放口对齐。
在一些实施方式中，可摄入装置包括电子和远程控制的药丸或药物递送系统。药丸包括壳体；用于储存药剂的贮存器；用于在穿过胃肠道时配发储存在贮存器中的一种或多种药剂的电子控制释放阀门或舱门；用于打开和关闭所述阀门的控制和定时电路；以及电池。控制和定时电路根据在控制和定时电路中编程的预设配发定时模式在整个配发时间段打开和关闭阀门。射频(RF)通信电路接收控制信号，用于远程干涉预设配发定时模式、重新编程控制和定时电路或终止身体内的药物配发。该药丸包括用于跟踪、鉴别、存货和其它目的的射频识别标签(RFID)。
在一些实施方式中，可摄入装置包括具有离散驱动元件的电子胶囊，所述离散驱动元件包括：壳体、使电子胶囊可操作的电子器件、用于配量和置换物质的泵送机构、用于给电子胶囊供电并使电子器件和所述泵送机构能够操作的电源、和锁定机构；以及离散的有效载荷元件，其包括：壳体、用于储存物质的贮存器、用于从贮存器释放物质的壳体中的一个或多个开口，以及用于接合驱动元件锁定机构的锁定机构。驱动元件锁定机构与有效载荷元件锁定机构的接合将驱动元件附接于到有效载荷元件，从而使电子胶囊具有可操作性和特定性。
在一些实施方式中，可摄入装置可以是配置成释放活性剂的粘膜粘着装置。
在一些实施方式中，可摄入装置包括包含可摄入医疗装置的设备，所述可摄入医疗装置配置成最初假定体积小于4cm3的收缩状态。该装置包括胃锚，其最初假定收缩尺寸，并且其配置成在与液体接触时充分膨胀，以防止锚通过直径在1cm到3cm之间的圆形开口。该装置还包括十二指肠单元，其配置成穿过开口，并且与胃锚相连，使得十二指肠单元保持在距胃锚1cm到20cm之间。
在一些实施方式中，可摄入装置包括医疗机器人系统，操作该系统的方法包括获取患者解剖的术中外部图像数据，并使用该图像数据为医疗机器人系统的控制系统生成建模调整(例如更新解剖模型和/或改进仪器登记)，和/或调整程序控制方面(例如调节物质或疗法递送、改善靶向和/或跟踪性能)。
在一个实施方式中，可摄入装置还可包括一个或多个环境传感器。环境传感器可用于为受试者胃肠道内装置外部环境生成环境数据。在一些实施方式中，环境数据是在受试者胃肠道内药物被递送的位置或附近生成。环境传感器的示例包括但不限于电容传感器、温度传感器、阻抗传感器、pH传感器、心率传感器、声学传感器、图像传感器(例如压敏检波器)和/或运动传感器(例如加速度计)。在一个实施方式中，可摄入装置包括用于生成不同种类环境数据的多个不同环境传感器。
在一个实施方式中，图像传感器是适用于在活体内获取形成受试者胃肠道的组织的图像的摄像机。在一个实施方式中，环境数据用于帮助确定胃肠道的一个或多个特征，包括疾病的位置(例如炎症组织的存在或位置和/或与炎症性肠病相关的病变)。在一些实施方式中，可摄入装置可包括用于生成胃肠道的视频成像数据的摄像机，该数据可用于确定装置的位置等。
在另一个实施方式中，本文所述的可摄入装置可使用伽马闪烁扫描技术或如Phaeton Research’s EnterionTM胶囊(参见Teng,Renli和Juan Maya."Absolutebioavailability and regional absorption of ticagrelor in healthy volunteers."Journal of Drug Assessment 3.1(2014):43-50)采用的其它无线电跟踪器技术，或监测可摄入装置中永久磁铁的磁场强度(参见T.D.Than等人,“A review of localizationsystems for robotic endoscopic capsules,”IEEE Trans.Biomed.Eng.,第59卷,第9期,第2387-2399页,2012年9月)进行局部定位。
在一个实施方式中，一个或多个环境传感器测量pH、温度、传输时间或其组合。
在一些实施方式中，释放所述免疫调节剂(例如本文所述的免疫调节剂中的任一种)依赖于所述位置处或附近的pH。在一些实施方式中，空肠中的pH为6.1到7.2，例如6.6。在一些实施方式中，小肠中部的pH值为7.0到7.8，例如7.4。在一些实施方式中，回肠中的pH为7.0到8.0，例如7.5。在一些实施方式中，右结肠中的pH值为5.7到7.0，例如6.4。在一些实施方式中，结肠中部的pH值为5.7到7.4，例如6.6。在一些实施方式中，左结肠中的pH值为6.3到7.7，诸如7.0。在一些实施方式中，禁食受试者的胃pH值是从约1.1到2.1，例如从1.4到2.1，例如从1.1到1.6，例如从1.4到1.6。在一些实施方式中，喂食受试者的胃pH值为3.9到7.0，例如从3.9到6.7，例如从3.9到6.4，例如从3.9到5.8，例如从3.9到5.5，例如从3.9到5.4，例如从4.3到7.0，例如从4.3到6.7，例如从4.3到6.4，例如从4.3到5.8，例如从4.3到5.5，例如从4.3到5.4。在一些实施方式中，十二指肠中的pH值是从5.8到6.8，例如从6.0到6.8，例如从6.1到6.8，例如从6.2到6.8，例如从5.8到6.7，例如从6.0到6.7，例如从6.1到6.7，例如从6.2到6.7，例如从5.8到6.6，例如从6.0到6.6，例如从6.1到6.6，例如从6.2到6.6，例如从6.0到6.6，例如从6.1到6.6，例如从6.2到6.6，例如从6.0到6.6，例如从6.1到6.6，例如从6.2到6.6，例如从5.8到6.5，例如从6.0到6.5，例如从6.1到6.5，例如从6.2到6.5。
在一些实施方式中，释放所述免疫调节剂(例如本文所述的免疫调节剂中的任一种)不依赖于所述位置处或附近的pH。在一些实施方式中，释放免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)是由位于胶囊中的释放组分的降解触发的。在一些实施方式中，免疫调节剂的释放不是由位于胶囊中的释放组分降解触发的。在一些实施方式中，释放免疫调节剂不依赖于位置处或其附近的酶活性。在一些实施方式中，释放免疫调节剂不依赖于位置处或其附近的细菌活性。
在一些实施方式中，药物组合物是可摄入装置，其包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于壳体内并且包含免疫调节剂(例如，本文所述的免疫调节剂中的任一种)的贮存器，
其中，贮存器的第一端连接到壳体的第一端；
用于从所述贮存器释放所述免疫调节剂的机构；
和；
出口阀，其被配置成允许所述免疫调节剂从所述贮存器释放到所述壳体之外。
在一些实施方式中，可摄入装置还包括：
位于所述壳体内的电子组件；和
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体。
在一些实施方式中，可摄入装置还包括：
放置在所述壳体内或附接到所述壳体上的安全装置，
其中所述安全装置被配置成当内部压力超过阈值水平时释放所述壳体内的所述内部压力。
在一些实施方式中，药物组合物是可摄入装置，其包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体内的电子组件；
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；
位于所述壳体内的贮存器，
其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；
位于壳体的第一端的出口阀，
其中所述出口阀被配置成允许所述可配发物质从所述贮存器中释放到所述壳体的所述第一端之外；以及
放置在所述壳体内或附接到所述壳体上的安全装置，
其中所述安全装置被配置成当内部压力超过阈值水平时释放所述壳体内的所述内部压力。
在一些实施方式中，药物组合物是可摄入装置，其包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体内的电子组件，
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；
位于所述壳体内的贮存器，
其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；
位于所述壳体的所述第一端的注射装置，
其中所述射流注射装置被配置成将所述可配发物质从所述贮存器注射到所述壳体之外；以及
放置在所述壳体内或附接到所述壳体上的安全装置，
其中所述安全装置被配置成释放所述壳体内的所述内部压力。
在一些实施方式中，药物组合物是可摄入装置，其包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体的侧面的光学感测单元，
其中所述光学感测单元被配置成检测来自所述壳体外部环境的反射率；
位于所述壳体内的电子组件；
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成响应于基于所述反射率识别所述可摄入装置的位置而激活所述气体发生单元以产生气体；
位于所述壳体内的贮存器，
其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；
与所述气体发生单元接触并且配置成通过由所述气体发生单元产生的压力而移动或变形到所述贮存器中的膜；以及
放置在所述壳体的所述第一端的分配出口，
其中所述分配出口被配置成将所述可配发物质从所述贮存器递送到所述壳体之外。
在一个实施方式中，当药物在胃肠道遇到释放位点时触发药物递送。
在一个实施方式中，一个或多个环境传感器测量pH、温度、传输时间或其组合。
在一些实施方式中，释放所述免疫调节剂(例如本文所述的免疫调节剂中的任一种)依赖于所述位置处或附近的pH。在一些实施方式中，空肠中的pH为6.1到7.2，例如6.6。在一些实施方式中，小肠中部的pH值为7.0到7.8，例如7.4。在一些实施方式中，回肠中的pH为7.0到8.0，例如7.5。在一些实施方式中，右结肠中的pH值为5.7到7.0，例如6.4。在一些实施方式中，结肠中部的pH值为5.7到7.4，例如6.6。在一些实施方式中，左结肠中的pH值为6.3到7.7，诸如7.0。在一些实施方式中，禁食受试者的胃pH值是从约1.1到2.1，例如从1.4到2.1，例如从1.1到1.6，例如从1.4到1.6。在一些实施方式中，喂食受试者的胃pH值为3.9到7.0，例如从3.9到6.7，例如从3.9到6.4，例如从3.9到5.8，例如从3.9到5.5，例如从3.9到5.4，例如从4.3到7.0，例如从4.3到6.7，例如从4.3到6.4，例如从4.3到5.8，例如从4.3到5.5，例如从4.3到5.4。在一些实施方式中，十二指肠中的pH值是从5.8到6.8，例如从6.0到6.8，例如从6.1到6.8，例如从6.2到6.8，例如从5.8到6.7，例如从6.0到6.7，例如从6.1到6.7，例如从6.2到6.7，例如从5.8到6.6，例如从6.0到6.6，例如从6.1到6.6，例如从6.2到6.6，例如从6.0到6.6，例如从6.1到6.6，例如从6.2到6.6，例如从6.0到6.6，例如从6.1到6.6，例如从6.2到6.6，例如从5.8到6.5，例如从6.0到6.5，例如从6.1到6.5，例如从6.2到6.5。
在一些实施方式中，释放免疫调节剂不依赖于位置处或其附近的pH值。在一些实施方式中，释放免疫调节剂是由位于胶囊中的释放组分降解触发的。在一些实施方式中，免疫调节剂不是由位于胶囊中的释放组分降解触发的。在一些实施方式中，其中释放免疫调节剂不依赖于位置处或其附近的酶活性。在一些实施方式中，释放免疫调节剂不依赖于位置处或其附近的细菌活性。
在一些实施方式中，药物组合物是可摄入装置，其包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体内并且含有所述免疫调节剂的贮存器，
其中，贮存器的第一端连接到壳体的第一端；
用于从所述贮存器释放所述免疫调节剂的机构；
和；
出口阀，其被配置成允许所述免疫调节剂从所述贮存器释放到所述壳体之外。
在一些实施方式中，可摄入装置还包括：
位于所述壳体内的电子组件；和
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体。
在一些实施方式中，可摄入装置还包括：
放置在所述壳体内或附接到所述壳体上的安全装置，
其中所述安全装置被配置成当内部压力超过阈值水平时释放所述壳体内的所述内部压力。
在一些实施方式中，药物组合物是可摄入装置，其包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体内的电子组件；
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；
位于所述壳体内的贮存器，
其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；
位于壳体的第一端的出口阀，
其中所述出口阀被配置成允许所述可配发物质从所述贮存器中释放到所述壳体的所述第一端之外；以及
放置在所述壳体内或附接到所述壳体上的安全装置，
其中所述安全装置被配置成当内部压力超过阈值水平时释放所述壳体内的所述内部压力。
在一些实施方式中，药物组合物是可摄入装置，其包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体内的电子组件，
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；
位于所述壳体内的贮存器，
其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；
位于所述壳体的所述第一端的注射装置，
其中所述射流注射装置被配置成将所述可配发物质从所述贮存器注射到所述壳体之外；以及
放置在所述壳体内或附接到所述壳体上的安全装置，
其中所述安全装置被配置成释放所述壳体内的所述内部压力。
在一些实施方式中，药物组合物是可摄入装置，其包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体的侧面的光学感测单元，
其中所述光学感测单元被配置成检测来自所述壳体外部环境的反射率；
位于所述壳体内的电子组件；
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成响应于基于所述反射率识别所述可摄入装置的位置而激活所述气体发生单元以产生气体；
位于所述壳体内的贮存器，
其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；
与所述气体发生单元接触并且配置成通过由所述气体发生单元产生的压力而移动或变形到所述贮存器中的膜；以及
放置在所述壳体的所述第一端的分配出口，
其中所述分配出口被配置成将所述可配发物质从所述贮存器递送到所述壳体之外。
在一些实施方式中，药物组合物是美国专利申请序列号62/385,553中公开的可摄入装置，该专利申请以其全部内容通过引用并入本文中。
在一些实施方式中，药物组合物是如以下申请中公开的可摄入装置，所述申请的每一者通过引用全文并入本文中：
USSN 14/460,893；15/514,413；62/376,688；62/385,344；62/478,955；62/434,188；62/434,320；62/431,297；62/434,797；62/480,187；62/502,383；和62/540,873。
在一些实施方式中，药物组合物是包含如国际专利申请PCT/US2015/052500中公开的定位机构的可摄入装置，该国际专利申请以其全部内容通过引用并入本文中。
在一些实施方式中，药物组合物不是飞镖状(dart-like)剂型。
在一些实施方式中，本文提供一种可摄入装置，其包括：
免疫调节剂；
一个或多个处理装置；以及
一个或多个机器可读硬件存储装置，所述机器可读硬件存储装置存储指令，所述指令能够由所述一个或多个处理装置执行从而以至少85％的准确度确定所述可摄入装置在受试者的胃肠道的一部分中的位置。在一些实施方式中，准确度为至少90％。在一些实施方式中，准确度为至少95％。在一些实施方式中，准确度为至少97％。在一些实施方式中，准确度为至少98％。在一些实施方式中，准确度为至少99％。在一些实施方式中，准确度为100％。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含十二指肠。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含空肠。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含末端回肠、盲肠和结肠。在一些实施方式中，可摄入装置还包括第一光源和第二光源，其中所述第一光源配置为发射第一波长的光，并且所述第二光源配置为发射不同于所述第一波长的第二波长的光。在一些实施方式中，可摄入装置还包括第一检测器和第二检测器，其中所述第一检测器配置成检测所述第一波长的光，并且所述第二检测器配置成检测所述第二波长的光。
在一些实施方式中，本文提供一种可摄入装置，其包括：
免疫调节剂；
一个或多个处理装置；以及
一个或多个机器可读硬件存储装置，所述机器可读硬件存储装置存储指令，所述指令能够由所述一个或多个处理装置执行从而以至少70％的准确度确定所述可摄入装置在受试者的盲肠中。在一些实施方式中，准确度为至少75％。在一些实施方式中，准确度为至少80％。在一些实施方式中，准确度为至少85％。在一些实施方式中，准确度为至少88％。在一些实施方式中，准确度为至少89％。
在一些实施方式中，本文提供一种可摄入装置，其包括：
免疫调节剂；
一个或多个处理装置；以及
一个或多个机器可读硬件存储装置，所述机器可读硬件存储装置存储指令，所述指令能够由所述一个或多个处理装置执行以将数据传输到能够执行所述数据从而以至少85％的准确度确定所述医疗设备在受试者的胃肠道的一部分中的位置的装置。在一些实施方式中，准确度为至少90％。在一些实施方式中，准确度为至少95％。在一些实施方式中，准确度为至少97％。在一些实施方式中，准确度为至少98％。在一些实施方式中，准确度为至少99％。在一些实施方式中，准确度为100％。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含十二指肠。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含空肠。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含末端回肠、盲肠和结肠。在一些实施方式中，可摄入装置还包括第一光源和第二光源，其中所述第一光源配置为发射第一波长的光，并且所述第二光源配置为发射不同于所述第一波长的第二波长的光。在一些实施方式中，可摄入装置还包括第一检测器和第二检测器，其中所述第一检测器配置成检测所述第一波长的光，并且所述第二检测器配置成检测所述第二波长的光。在一些实施方式中，所述数据包括至少两种不同波长光的强度数据。
在一些实施方式中，本文提供一种可摄入装置，其包括：
免疫调节剂；
一个或多个处理装置；以及
一个或多个机器可读硬件存储装置，所述机器可读硬件存储装置存储指令，所述指令能够由所述一个或多个处理装置执行以将数据传输到能够执行所述数据从而以至少70％的准确度确定所述可摄入装置在受试者的盲肠中的位置的外部装置。在一些实施方式中，准确度为至少75％。在一些实施方式中，准确度为至少80％。在一些实施方式中，准确度为至少85％。在一些实施方式中，准确度为至少88％。在一些实施方式中，准确度为至少89％。
在一些实施方式中，本文提供一种治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，所述方法包括：在所述受试者的胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，其中所述方法包括向所述受试者口服施用如本文公开的可摄入装置，所述方法还包括以至少85％的准确度确定所述可摄入医疗装置在受试者的胃肠道的一部分中的位置。在一些实施方式中，准确度为至少90％。在一些实施方式中，准确度为至少95％。在一些实施方式中，准确度为至少97％。在一些实施方式中，准确度为至少98％。在一些实施方式中，准确度为至少99％。在一些实施方式中，准确度为100％。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含十二指肠。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含空肠。在一些实施方式中，受试者的胃肠道的所述部分包含末端回肠、盲肠和结肠。在一些实施方式中，确定所述可摄入装置在受试者的胃肠道内的位置包括确定在所述胃肠道内的反射光信号，其中所述反射信号包括至少两种不同波长的光。在一些实施方式中，所述反射信号包括至少三种不同波长的光。在一些实施方式中，反射光包括第一波长和第二波长；第一波长在495-600nm之间；并且第二波长在400-495nm之间。在一些实施方式中，所述第一波长和第二波长相隔至少50nm。
在一些实施方式中，本文提供一种治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，所述方法包括：在所述受试者的胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，其中所述方法包括向所述受试者口服施用如本文公开的可摄入装置，所述方法还包括基于胃肠道内测量的反射光信号确定所述可摄入医疗装置在受试者的胃肠道内的位置，其中所述反射信号包括至少两种不同波长的光。在一些实施方式中，所述反射信号包括至少三种不同波长的光。在一些实施方式中，至少两种不同的波长包括第一波长和第二波长；第一波长在495-600nm之间；并且第二波长在400-495nm之间。在一些实施方式中，所述第一波长和第二波长相隔至少50nm。
在一些实施方式中，本文提供一种可摄入装置，其包括：
壳体；
位于所述壳体内的气体发生单元；以及
位于所述壳体内的储存器，
其中所述储存器储存免疫调节剂，并且所述壳体中的开口被配置成允许所述免疫调节剂经由所述可摄入装置中的开口从所述储存器中释放到所述壳体之外。
在一些实施方式中，所述壳体由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
其中电子组件位于壳体内并且气体发生单元与电子部件相邻，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；
其中储存器的第一端连接到壳体的第一端；
其中出口阀位于壳体的第一端并且被配置成允许免疫调节剂释放到壳体的第一端之外；
并且其中所述可摄入装置还包括放置在所述壳体内或附接到所述壳体的安全装置，
其中所述安全装置被配置成当内部压力超过阈值水平时释放所述壳体内的内部压力。
在一些实施方式中，本文提供一种可摄入装置，其包括：
位于所述壳体内的气体发生单元；
位于所述壳体内的储存器，
其中所述储存器储存免疫调节剂；以及
注射装置，其被配置成将免疫调节剂经由可摄入装置中的开口从储存器注射到壳体之外。
在一些实施方式中，所述壳体由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
其中电子组件位于壳体内并且气体发生单元与电子部件相邻，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；
其中储存器的第一端连接到壳体的第一端；
其中所述注射装置位于所述壳体的第一端处并且被配置成将免疫调节剂经由可摄入装置中的开口注射到壳体之外；并且
并且其中所述可摄入装置还包括放置在所述壳体内或附接到所述壳体的安全装置，
其中所述安全装置被配置成释放所述壳体内的内部压力。
在一些实施方式中，本文提供一种可摄入装置，其包括：
壳体；
由所述壳体的一侧支撑的光学感测单元，
其中所述光学感测单元被配置成检测来自所述壳体外部环境的反射率；
位于所述壳体内的气体发生单元，
其中所述可摄入装置被配置成使得响应于基于由所述光学感测单元探测到的反射率识别所述可摄入装置的位置，所述气体发生单元产生气体；
位于所述壳体内的储存器，
其中所述储存器储存免疫调节剂；
并且其中所述可摄入装置被配置成使得当所述气体发生单元产生气体时，所述免疫调节剂经由所述可摄入装置中的开口从所述储存器被递送到所述壳体之外。
在一些实施方式中，所述壳体由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
其中光学感测单元由所述壳体的一侧支撑，
其中所述可摄入装置还包括位于所述壳体内的电子组件；
其中所述气体发生单元与电子组件相邻，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；
其中储存器的第一端连接到壳体的第一端；
其中所述可摄入装置还包括膜，所述膜与气体发生单元接触，并且配置成通过由气体发生单元产生的压力移动或变形到贮存器中；并且
其中所述可摄入装置还包括分配出口，所述分配出口位于所述壳体的第一端并且被配置成将所述免疫调节剂递送到所述壳体之外。
在本文所公开的包含免疫调节剂的任何可摄入装置的一些实施方式中，免疫调节剂以治疗有效量存在。
如果本说明书与本文通过引用并入的任何主题之间存在冲突，则以本说明书(包括定义)为准。
用于检测胃肠道中分析物的装置和方法
检测胃肠道中的某些分析物可用于鉴定疾病的性质和严重性、准确定位疾病部位，以及评估患者对治疗剂的反应。适当的治疗剂可以在疾病的正确位置、剂量或时间下适当地释放。如本文进一步论述的，分析物可包括与疾病相关或与患者反应相关的生物标记物和/或先前施用以治疗疾病的治疗剂。在一些实施方式中，本公开提供一种用于检测样品中的分析物的可摄入装置，该可摄入装置包括取样室，该取样室被配置成容纳包含以下的组合物：(1)多个供体颗粒，所述多个供体颗粒中的每一个都包含光敏剂并且偶联有与分析物结合的第一抗原结合剂，其中所述光敏剂在其激发态下能够产生单线态氧；和(2)多个受体颗粒，所述多个受体颗粒中的每一个包含化学发光化合物并且偶联有与分析物结合的第二抗原结合剂，其中所述化学发光化合物能够与单线态氧反应以发光。在一些实施方式中，第一和第二分析物结合剂是抗原结合剂(例如抗体)。在一些实施方式中，第一和第二抗原结合剂结合分析物(例如蛋白质)的相同表位。在一些实施方式中，第一和第二抗原结合剂结合在空间上重叠的分析物(例如蛋白质)的单独表位。在一些实施方式中，第一和第二抗原结合剂结合不在空间上重叠的分析物(例如蛋白质)的单独表位。
在一些实施方式中，本公开提供一种用于检测样品中的分析物的可摄入装置，该可摄入装置包括取样室，该取样室被配置成容纳可吸收材料(例如可吸收垫或海绵)，所述可吸收材料其中吸收有包含以下的组合物：(1)多个供体颗粒，所述多个供体颗粒中的每一个都包含光敏剂并且偶联有与分析物结合的第一抗原结合剂，其中所述光敏剂在其激发态下能够产生单线态氧；和(2)多个受体颗粒，所述多个受体颗粒中的每一个包含化学发光化合物并且偶联有与分析物结合的第二抗原结合剂，其中所述化学发光化合物能够与单线态氧反应以发光。在一些实施方式中，第一和第二分析物结合剂是抗原结合剂(例如抗体)。在一些实施方式中，第一和第二抗原结合剂结合分析物(例如蛋白质)的相同表位。在一些实施方式中，第一和第二抗原结合剂结合在空间上重叠的分析物(例如蛋白质)的单独表位。在一些实施方式中，第一和第二抗原结合剂结合不在空间上重叠的分析物(例如蛋白质)的单独表位。
在某些实施方式中，本公开提供了包含如本文所述的可摄入装置的试剂盒。在一些实施方式中，试剂盒还包含例如用于检测或定量样品中的分析物的说明书。
在一些实施方式中，本公开提供了用于确定样品中分析物的方法。在某些实施方式中，本公开提供一种检测受试者流体样品中的分析物的方法，其包括：(1)提供可摄入装置；(2)将受试者的流体样品在体内转移到可摄入装置的取样室中；(3)用光照射容纳在可摄入装置的取样室中的组合物以激发光敏剂；和(4)测量从容纳在可摄入装置的取样室中的组合物发出的总发光或发光变化率随时间的变化，从而确定流体样品中分析物的水平。在一些实施方式中，该方法还包括将流体样品中分析物的水平与参考样品(例如从健康受试者获得的参考样品)中分析物的水平进行比较。在一些实施方式中，样品中分析物的水平用于诊断和/或监测受试者中的疾病或病症。
在一些实施方式中，本公开提供一种检测受试者流体样品中的分析物的方法，其包括：(1)提供可摄入装置，所属装置包括取样室，该取样室被配置为容纳其中吸收组合物的可吸收材料(例如，可吸收垫或海绵)，如本文所述；(2)将受试者的流体样品在体内转移到可摄入装置的取样室中；(3)使容纳在可摄入装置的取样室中的可吸收材料全部或部分地浸入流体样品中；(4)用光照射容纳在可摄入装置的取样室中的可吸收材料以激发光敏剂；和(5)测量从容纳在可摄入装置的取样室中的组合物发出的总发光或发光变化率随时间的变化，从而确定流体样品中分析物的水平。在一些实施方式中，该方法还包括将流体样品中分析物的水平与参考样品(例如从健康受试者获得的参考样品)中分析物的水平进行比较。在一些实施方式中，样品中分析物的水平用于诊断和/或监测受试者中的疾病或病症。
在一些实施方式中，本公开提供一种评估或监测治疗患有或处于胃肠(GI)道中细菌细胞过度生长风险下的受试者的需要的方法，所述方法包括：(1)提供用于检测分析物的可摄入装置；(2)在体内将流体样品从受试者的胃肠道转移到可摄入装置的取样室中；(3)用光照射容纳在可摄入装置的取样室中的组合物以激发光敏剂；(4)测量从容纳在可摄入装置的取样室中的组合物发出的总发光或发光变化率随时间的变化；(5)将步骤(4)中测量的总发光或发光变化率随时间的变化与流体样品中分析物的量相关联；和(6)将流体样品中分析物的量与流体样品中活细菌细胞的数量相关联。在一些实施方式中，步骤(6)中测定的活细菌细胞量大于活细菌细胞的对照量表示需要治疗(例如用本文所述的抗生素剂)。在一些实施方式中，活细菌细胞的对照量是103、104、105、106、107、108、109或更多。例如，在一些实施方式中，步骤(6)中测定的活细菌细胞量大于约103CFU/mL表明需要治疗。在一些实施方式中，步骤(6)中测定的活细菌细胞量大于约104CFU/mL表明需要治疗。在一些实施方式中，步骤(6)中测定的活细菌细胞量大于约105CFU/mL表明需要治疗，例如用如本文所述的抗生素剂。在一些实施方式中，步骤(6)中测定的活细菌细胞量大于约106或更高CFU/mL表明需要治疗。
在一些实施方式中，在步骤(4)中在多个时间点上测量海绵的总发光或发光变化率随时间的变化以达延长的时间段。例如，在一些实施方式中，连续测量样品的总发光或发光变化率随时间的变化以达0-1800分钟、0-1600分钟、0-1500分钟、0-1440分钟、0-1320分钟、0-1000分钟、0-900分钟、0-800分钟、0-700分钟、0-600分钟、0-500分钟、0-400分钟、0-350分钟、0-330分钟、0-300分钟、0-270分钟或0-220分钟。在一些实施方式中，连续测量样品的总发光或发光变化率随时间的变化以达0-330分钟。在一些实施方式中，该方法在体内进行。在一些实施方式中，该方法包括将机载测定的结果传递给离体接收器。在一些实施方式中，在步骤(5)中在多个时间点上测量海绵的总发光或发光变化率随时间的变化以达延长的时间段。例如，在一些实施方式中，连续测量样品的总发光或发光变化率随时间的变化以达0-1800分钟、0-1600分钟、0-1500分钟、0-1440分钟、0-1320分钟、0-1000分钟、0-900分钟、0-800分钟、0-700分钟、0-600分钟、0-500分钟、0-400分钟、0-350分钟、0-330分钟、0-300分钟、0-270分钟或0-220分钟。在一些实施方式中，连续测量样品的总发光或发光变化率随时间的变化以达0-330分钟。在一些实施方式中，该方法在体内进行。在一些实施方式中，该方法包括将机载测定的结果传递给离体接收器。
在一些实施方式中，本公开提供一种评估或监测治疗患有或处于胃肠道中细菌细胞过度生长风险下的受试者的需要的方法，所述方法包括：(1)提供用于检测分析物的可摄入装置，所述装置包括取样室，该取样室被配置为容纳其中吸收组合物的可吸收材料(例如，可吸收垫或海绵)，如本文所述；(2)在体内将流体样品从受试者的胃肠道转移到可摄入装置的取样室中；(3)使容纳在可摄入装置的取样室中的可吸收材料全部或部分地浸入流体样品中；(4)用光照射容纳在可摄入装置的取样室中的可吸收材料以激发光敏剂；(5)测量从容纳在可摄入装置的取样室中的组合物发出的总发光或发光变化率随时间的变化；(6)将步骤(5)中测量的总发光或发光变化率随时间的变化与流体样品中分析物的量相关联；和(7)将流体样品中分析物的量与流体样品中活细菌细胞的数量相关联。在一些实施方式中，步骤(7)中测定的活细菌细胞量大于活细菌细胞的对照量表明需要治疗(例如用本文所述的抗生素剂)。在一些实施方式中，活细菌细胞的对照量是103、104、105、106、107、108、109或更多。例如，在一些实施方式中，步骤(7)中测定的活细菌细胞量大于约103CFU/mL表明需要治疗。在一些实施方式中，步骤(7)中测定的活细菌细胞量大于约104CFU/mL表明需要治疗。在一些实施方式中，步骤(7)中测定的活细菌细胞量大于约105CFU/mL表明需要治疗，例如用如本文所述的抗生素剂。在一些实施方式中，步骤(7)中测定的活细菌细胞量大于约106或更高CFU/mL表明需要治疗。
在一些实施方式中，本公开提供了测量来自胃肠道中一种或多种样品的一种或多种分析物的存在、不存在或量的方法。在一些实施方式中，一种或多种分析物被测量多次，例如，在不同的时间点或在不同的位置。在一个实施方式中，单个装置测量一种或多种分析物或更多时间点或位置；从而产生生理区域的“分子图谱”。可以在胃肠道的任何位置进行测量。例如，在一个方面，可以测量来自十二指肠、空肠、回肠、升结肠、横结肠或降结肠中一种或多种的样品的分析物，以产生小肠和大肠的分子图谱。在一个方面，样品来自十二指肠。在一个方面，在一个方面，样品来自空肠。在一个方面，样品来自回肠。在一个方面，样品来自升结肠。在一个方面，样品来自横结肠。在一个方面，样品来自降结肠。
在另一方面，可以在胃肠道(例如回肠)的较短距离上进行一系列测量以产生更高分辨率的分子图谱。在一些实施方式中，先前的内窥镜成像可以识别用于分子作图(molecular mapping)的患病区域。例如，胃肠病学家可以使用成像(例如配备有照相机的内窥镜)来识别患者的回肠和盲肠中克罗恩病的存在，并且本文的方法和技术可以用于测量病人的该患病区域中的炎症相关分析物。在相关实施方式中，可以每隔一天或多天测量炎症相关分析物或任何分析物，以监测疾病突发或对治疗的反应。
分析物
本文描述的组合物和方法可用于检测、分析和/或定量人受试者中的多种分析物。如本文所用的“分析物”是指待在样品中检测的化合物或组合物。适用于本文的示例性分析物包括美国专利6,251,581中描述的那些，其通过引用整体并入本文。广义地说，分析物可以是能够被检测的任何物质(例如具有一种或多种抗原的物质)。分析物的示例性和非限制性列表包括配体、蛋白质、凝血因子、激素、细胞因子、多糖、粘多糖、微生物(例如细菌)、微生物抗原和治疗剂(包括其片段和代谢物)。
例如，分析物可以是配体，其是单价的(单表位的)或多价的(多表位的)，通常是抗原性的或半抗原的，并且是共有至少一个共同表位或决定位点的单一化合物或多种化合物。分析物可以是细胞诸如细菌或带有血型抗原诸如A、B、D等、人白细胞抗原(HLA)或其它细胞表面抗原的细胞，或微生物例如细菌(例如致病细菌)、真菌、原生动物或病毒(例如蛋白质、核酸、脂质或激素)的一部分。在一些实施方式中，分析物可以是外来体(例如细菌外来体)的一部分。在一些实施方式中，分析物来源于受试者(例如人受试者)。在一些实施方式中，分析物来源于受试者中存在的微生物。在一些实施方式中，分析物是核酸(例如DNA分子或RNA分子)、蛋白质(例如可溶性蛋白质、细胞表面蛋白质)或其片段，其可以使用本文提供的任一种装置和方法检测。
多价配体分析物通常将是聚(氨基酸)，即多肽(即蛋白质)或肽、多糖、核酸(例如DNA或RNA)及其组合。这种组合包括细菌、病毒、染色体、基因、线粒体、细胞核、细胞膜等的组分。
在一些实施方式中，多表位配体分析物具有至少约5000Da，更通常至少约10000Da的分子量。在聚(氨基酸)类别中，目标聚(氨基酸)通常可具有约5000Da至约5000000Da，更通常约20000Da至1000000Da的分子量；在目标激素中，分子量通常在约5000Da至60000Da的范围内。
在一些实施方式中，单表位配体分析物的分子量通常为约100至2000Da，更通常为125至1000Da。
关于具有相似结构特征的蛋白质家族、具有特定生物学功能的蛋白质、与特定微生物相关的蛋白质、特别是引起疾病的微生物等，可以考虑多种蛋白质。这些蛋白质包括例如免疫球蛋白、细胞因子、酶、激素、癌症抗原、营养标记物、组织特异性抗原等。
在一些实施方式中，分析物是蛋白质。在一些实施方式中，分析物是蛋白质、例如酶(例如溶血素、蛋白酶、磷脂酶)、可溶性蛋白质、外毒素。在一些实施方式中，分析物是蛋白质、肽或抗原的片段。在一些实施方式中，分析物是至少5个氨基酸(例如至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少25个、至少50个或至少100个氨基酸)的肽。示例性长度包括6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、50、75或100个氨基酸。蛋白质分析物的示例性类别包括但不限于：鱼精蛋白、组蛋白、白蛋白、球蛋白、硬蛋白、磷蛋白、粘蛋白、色蛋白、脂蛋白、核蛋白、糖蛋白、T细胞受体、蛋白多糖、细胞表面受体、膜锚定蛋白、跨膜蛋白、分泌蛋白、HLA和未分类蛋白。
在一些实施方式中，分析物是亲合体(参见例如Tiede等人(2017)eLife 6:e24903，其通过引用明确并入本文)。
示例性分析物包括：前白蛋白、白蛋白、α1-脂蛋白、α1-抗胰蛋白酶、α1-糖蛋白、皮质素转运蛋白、4.6S-食用白蛋白、α1-糖蛋白、α1X-糖蛋白、甲状腺素结合球蛋白、间α胰蛋白酶抑制剂、Gc-球蛋白(Gc 1-1、Gc 2-1、Gc 2-2)、触珠蛋白(Hp 1-1、Hp 2-1、Hp 2-2)、血浆铜蓝蛋白、胆碱酯酶、α2-脂蛋白、肌红蛋白、C-反应蛋白、α2-巨球蛋白、α2-HS-糖蛋白、Zn-α2-糖蛋白、α2-神经氨酸-糖蛋白、促红细胞生成素、β-脂蛋白、转铁蛋白、血红素结合蛋白、纤维蛋白原、纤溶酶原、β2-糖蛋白I、β2-糖蛋白II、免疫球蛋白G(IgG)或γG-球蛋白、免疫球蛋白A(IgA)或γA-球蛋白、免疫球蛋白M(IgM)或γM-球蛋白、免疫球蛋白D(IgD)或γD-球蛋白(γD)、免疫球蛋白E(IgE)或γE-球蛋白(γE)、游离κ和λ轻链，和补体因子：C'1、(C'1q、C'1r、C'1s、C'2、C'3(β1A、α2D)、C'4、C'5、C'6、C'7、C'8、C'9。
分析物的额外实例包括肿瘤坏死因子-α(TNFα)、白细胞介素-12(IL-12)、IL-23、IL-6、α2β1整联蛋白、α1β1整联蛋白、α4β7整联蛋白、整联蛋白α4β1(VLA-4)、E-选择素、ICAM-1、α5β1整联蛋白、α4β1整联蛋白、VLA-4、α2β1整联蛋白、α5β3整联蛋白、α5β5整联蛋白、αIIbβ3整联蛋白、MAdCAM-1、SMAD7、JAK1、JAK2、JAK3、TYK-2、CHST15、IL-1、IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33、IL-13、CD40L、CD40、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、TCR、TCRα、TCRβ、TCRδ、TCRγ、CD14、CD20、CD25、IL-2、IL-2β链、IL-2γ链、CD28、CD80、CD86、CD49、MMP1、CD89、IgA、CXCL10、CCL11、ELR趋化因子、CCR2、CCR9、CXCR3、CCR3、CCR5、CCL2、CCL8、CCL16、CCL25、CXCR1m CXCR2m CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7和CXCL8，以及编码任何其的核酸(例如mRNA)。
在一些实施方式中，分析物是血液凝固因子。示例性凝血因子包括但不限于：
Figure BDA0002449116230005101
Figure BDA0002449116230005111
在一些实施方式中，分析物是激素。示例性激素包括但不限于：肽和蛋白质激素、甲状旁腺激素、(对色氨酸)、降钙素、胰岛素、胰高血糖素、松弛素、促红细胞生成素、促黑激素(促黑素细胞激素；中介素)、生长激素(生长激素)、促肾上腺皮质激素(促肾上腺皮质激素)、促甲状腺激素、卵泡刺激素、黄体化激素(间质细胞刺激素)、黄体变性激素(促黄体素、催乳素)、促性腺激素(绒毛膜促性腺激素)、促胰液素、胃泌素、血管紧张素I和II、缓激肽和人胎盘催乳素、甲状腺素、皮质醇、三碘甲状腺原氨酸、睾酮、雌二醇、雌酮、孕酮、促黄体激素释放激素(LHRH)和免疫抑制剂诸如环孢菌素、FK506、霉酚酸等。
在一些实施方式中，分析物是肽激素(例如来自神经垂体的肽激素)。来自神经垂体的示例性肽激素包括但不限于：催产素、血管加压素和释放因子(RF)(例如促肾上腺皮质素释放因子(CRF)、促黄体激素释放因子(LRF)、促甲状腺激素释放因子(TRF)、生长激素-RF、生长激素释放因子(GRF)、卵泡刺激素释放因子(FSH-RF)、催乳素抑制因子(PIF)和黑素细胞刺激素抑制因子(MIF))。
在一些实施方式中，分析物是细胞因子或趋化因子。示例性细胞因子包括但不限于：白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、表皮生长因子(EGF)、肿瘤坏死因子(TNF，例如TNF-α或TNF-β)和神经生长因子(NGF)。
在一些实施方式中，分析物是癌抗原。示例性癌抗原包括但不限于：前列腺特异性抗原(PSA)、癌胚抗原(CEA)、α-胎蛋白、酸性磷酸酶、CA19.9和CA125。
在一些实施方式中，分析物是组织特异性抗原。示例性组织特异性抗原包括但不限于：碱性磷酸酶、肌红蛋白、CPK-MB、降钙素和髓磷脂碱性蛋白。
在一些实施方式中，分析物是粘多糖或多糖。
在一些实施方式中，分析物是微生物，或来源于微生物(例如细菌、病毒、朊病毒或原生动物)或由微生物产生的分子。例如，在一些实施方式中，分析物是对特定微生物属、种或菌株(例如特定细菌属、种或菌株)特异的分子(例如蛋白质或核酸)。在一些实施方式中，微生物是致病性的(即引起疾病)。在一些实施方式中，微生物是非致病性的(例如共生微生物)。示例性微生物包括但不限于：
Figure BDA0002449116230005121
Figure BDA0002449116230005131
Figure BDA0002449116230005141
Figure BDA0002449116230005151
Figure BDA0002449116230005161
在一些实施方式中，分析物是细菌。示例性细菌包括但不限于：大肠杆菌(或大肠杆菌)、炭疽芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、肉毒梭菌、艰难梭菌、鼠疫耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、土拉弗朗西斯菌、布鲁氏菌物种、产气荚膜梭菌、鼻疽伯克霍尔德氏菌、伯克霍尔德氏菌假单胞菌、葡萄球菌属物种、分枝杆菌属物种、A组链球菌、B组链球菌、肺炎链球菌、幽门螺杆菌、肠炎沙门氏菌、人型支原体、口腔支原体、唾液支原体、发酵支原体、肺炎支原体、牛分枝杆菌、结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、麻风分枝杆菌、立氏立克次氏体、螨立克次氏体、普氏立克次氏体、加拿大立克次氏体、枯草芽孢杆菌、尼氏枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、贝氏考克斯体、普拉梭菌(也称为普拉梭拟杆菌)、罗斯拜瑞氏菌、直肠真杆菌、小类杆菌、白色瘤胃球菌、伶俐瘤胃球菌和布氏瘤胃球菌。额外的示例性细菌包括厚壁菌门的细菌(例如梭菌属簇XIVa和IV)、拟杆菌门的细菌(例如脆弱拟杆菌或普通拟杆菌)和放线菌门的细菌(例如红蝽菌属或青春双歧杆菌)。梭菌属簇XIVa的细菌包括属于例如梭菌属、瘤胃球菌属、毛螺菌属、罗氏菌属、真杆菌属、粪球菌属、Dorea和丁酸弧菌属的物种。梭菌属簇IV的细菌包括属于例如梭菌属、瘤胃球菌属、真杆菌属和厌氧菌属的物种。在一些实施方式中，分析物是念珠菌，例如白色念珠菌。在一些实施方式中，分析物是来自细菌或其它微生物的副产物，例如蠕虫卵、肠毒素(艰难梭菌毒素A；TcdA)或细胞毒素(艰难梭菌毒素B；TcdB)。
在一些实施方式中，细菌是病原细菌。病原菌的非限制性实例属于芽孢杆菌属、博德特氏菌属、疏螺旋体属、布鲁氏菌属、弯曲杆菌属、衣原体属、嗜衣原体属、梭菌属、棒状杆菌属、肠杆菌属、肠球菌属、埃希氏菌属、弗朗西斯菌属、嗜血杆菌属、螺杆菌属、军团菌属、钩端螺旋体属、李斯特菌属、分枝杆菌属、支原体属、奈瑟菌属、假单胞菌属、立克次氏体、沙门氏菌、志贺氏菌、葡萄球菌、链球菌、密螺旋体、弧菌和耶尔森氏菌。具体致病细菌物种的非限制性实例包括炭疽芽孢杆菌菌株、百日咳博德特氏菌菌株、伯氏疏螺旋菌菌株、流产布鲁氏菌菌株、犬布鲁氏菌菌株、羊布鲁氏菌菌株、猪布鲁氏菌菌株、空肠弯曲菌菌株、肺炎衣原体菌株、沙眼衣原体菌株、鹦鹉热衣原体菌株、肉毒杆菌菌株、艰难梭菌菌株、产气荚膜梭菌菌株、破伤风梭菌菌株、白喉棒杆菌菌株、阪崎肠杆菌菌株、粪肠球菌菌株、屎肠球菌菌株、大肠杆菌菌株(例如大肠杆菌O157 H7)、土拉弗朗西斯菌菌株、流感嗜血杆菌菌株、幽门螺杆菌菌株、嗜肺军团菌菌株、问号钩端螺旋体菌株、单核细胞增生李斯特菌菌株、麻风分枝杆菌菌株、结核分枝杆菌菌株、溃疡分枝杆菌菌株、肺炎支原体菌株、淋病奈瑟菌菌株、脑膜炎奈瑟菌菌株、铜绿假单胞菌菌株、立克次氏体菌株、伤寒沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌菌株、宋内志贺氏菌株、金黄色葡萄球菌菌株、表皮葡萄球菌菌株、腐生葡萄球菌菌株、无乳链球菌菌株、肺炎链球菌菌株、酿脓链球菌菌株、梅毒螺旋体菌株、霍乱弧菌菌株、小肠结肠炎耶尔森菌菌株和鼠疫耶尔森氏菌菌株。
在一些实施方式中，细菌是共生细菌(例如益生菌)。在一些实施方式中，细菌先前已经施用于受试者，例如作为活的生物治疗剂。示例性的共生细菌包括但不限于普拉梭菌(也称为普拉梭拟杆菌)、罗斯拜瑞氏菌、直肠真杆菌、小类杆菌、白色瘤胃球菌、伶俐瘤胃球菌和布氏瘤胃球菌。
在一些实施方式中，分析物是病毒。在一些实施方式中，病毒是病原性病毒。病原性病毒的非限制性实例属于腺病毒科、小核糖核酸病毒科、疱疹病毒科、嗜肝DNA病毒科、黄病毒科、逆转录病毒科、正粘病毒科、副粘病毒科、乳多空病毒科、多瘤病毒科、弹状病毒科和披膜病毒科。
在一些实施方式中，分析物是真菌。在一些实施方式中，真菌是病原真菌。病原真菌的非限制性实例属于曲霉菌属、分生孢子属、隐球菌属、组织胞浆菌属、肺囊虫属和葡萄穗霉属。特定病原真菌物种的非限制性实例包括棒曲霉菌、烟曲霉菌、黄曲霉菌、白色念珠菌、白色隐球菌、加特隐球菌、罗伦隐球菌、新型隐球菌、荚膜组织胞浆菌、耶氏肺孢子虫、卡氏肺孢子虫和纸葡萄穗霉菌株。
在一些实施方式中，分析物是原生动物。在一些实施方式中，分析物是致病性原生动物。病原性原生动物的非限制性实例属于棘阿米巴属、巴拉姆希阿米巴属、隐孢子虫属、双核阿米巴属、内蜒阿米巴属、内阿米巴属、贾第虫属、嗜碘阿米巴属、利什曼原虫属、纳氏虫属、疟原虫属、匀变虫属、弓形虫属、毛滴虫属和锥虫属。特定致病性原生动物物种的非限制性实例包括棘阿米巴属、狒狒巴拉姆希阿米巴、犬隐孢子虫、猫隐孢子虫、人隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、鼠隐孢子虫、微小隐孢子虫、脆弱双核阿米巴、微小内蜒阿米巴、不相称内阿米巴、哈氏内阿米巴、溶组织内阿米巴、结肠内阿米巴、莫氏内阿米巴、蓝氏贾第鞭虫、布氏嗜碘阿米巴、埃塞俄比亚利什曼原虫、巴西利什曼原虫、恰氏利什曼原虫、杜氏利什曼原虫、婴儿利什曼原虫、硕大利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫、热带利什曼原虫、福氏耐格里阿米巴原虫、恶性疟原虫、诺氏疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间日疟原虫、双核匀变虫、刚地弓形虫、阴道毛滴虫、布氏锥虫和克氏锥虫的菌株。
在一些实施方式中，分析物由微生物(例如细菌、结肠细菌、活细菌、死细菌、寄生虫(例如蓝氏贾第鞭虫、隐孢子虫、囊孢子虫和结肠小袋纤毛虫)、病毒(例如疱疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、Epstein-Barr病毒、人乳头瘤病毒、轮状病毒、人疱疹病毒-8；Goodgame(1999)Curr.Gastroenterol.Rep.1(4):292-300)的细胞表面分泌或在细胞表面上表达。在一些实施方式中，分析物由革兰氏阴性细菌(例如大肠杆菌、幽门螺杆菌)的细胞表面分泌或在细胞表面上表达。在一些实施方式中，分析物是由革兰氏阳性细菌(例如金黄色葡萄球菌、肉毒梭菌、艰难梭菌)的细胞表面(例如细菌表面表位)分泌或在细胞表面上表达。
在一些实施方式中，分析物是在细菌细胞表面上表达的分子(例如细菌细胞表面蛋白)。在一些实施方式中，分析物是细菌毒素(例如来自艰难梭菌的TcdA和/或TcdB)。在一些实施方式中，分析物是CFA/I菌毛、鞭毛、脂多糖(LPS)、脂磷壁酸或肽聚糖。可以表达可以使用本文所述的任何装置和方法检测的分析物的细菌的非限制性实例包括：炭疽芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、肉毒杆菌、艰难梭菌、大肠杆菌、鼠疫耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、土拉弗朗西斯菌、布鲁氏菌、产气荚膜梭菌、鼻疽伯克霍尔德氏菌、伯克霍尔德氏菌假单胞菌、幽门螺杆菌、葡萄球菌物种、分枝杆菌物种、A组链球菌、B组链球菌、肺炎链球菌、土拉弗朗西斯菌、肠炎沙门氏菌、人型支原体、口腔支原体、唾液支原体、发酵支原体、肺炎支原体、牛分枝杆菌、结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、麻风分枝杆菌、立氏立克次氏体、螨立克次氏体、普氏立克次氏体、加拿大立克次氏体、枯草芽孢杆菌、尼氏枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、贝氏考克斯体、白色念珠菌、脆弱拟杆菌、问号钩端螺旋体、单核细胞增生李斯特氏菌、多杀巴斯德氏菌、伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、宋内志贺氏菌、霍乱弧菌和副溶血性弧菌。
在一些实施方式中，分析物是来自细菌或另一种微生物的副产物，例如蠕虫卵、肠毒素(艰难梭菌毒素A；TcdA)、细胞毒素(艰难梭菌毒素B；TcdB)、氨。在一些实施方式中，分析物是来自微生物(例如细菌、病毒、朊病毒、真菌、原生动物或寄生虫)的抗原。
在一些实施方式中，分析物包括药物、代谢物、杀虫剂和污染物等。目标药物包括生物碱。生物碱中有吗啡生物碱，包括吗啡、可待因、海洛因、右美沙芬、其衍生物和代谢物；可卡因生物碱，包括可卡因和苄基芽子碱、其衍生物和代谢物；麦角生物碱，包括麦角酰二乙胺；类固醇生物碱；咪唑啉基生物碱；喹唑啉生物碱；异喹啉生物碱；喹啉生物碱，包括奎宁和奎尼丁；二萜生物碱、其衍生物和代谢产物。
在一些实施方式中，分析物是选自雌激素、雄激素、皮质类固醇、胆汁酸，强心糖苷和糖苷配基的类固醇，其包括地高辛和洋地黄毒苷、皂苷和皂苷元、其衍生物和代谢物。还包括类固醇模拟物质，例如己烯雌酚。
在一些实施方式中，分析物是胆汁酸。在一些实施方式中，受试者胃肠道中一种或多种胆汁酸的存在、不存在和/或特定水平指示病症或疾病状态(例如GI病症和/或非GI病症(例如系统性疾病)。例如，在一些实施方式中，本文所述的组合物和方法可用于检测和/或定量受试者胃肠道中的胆汁酸，以诊断病症例如胆汁酸吸收不良(也称为胆汁酸腹泻)。在一些实施方式中，分析物是血清素、色氨酸和/或犬尿氨酸途径中的代谢物，包括但不限于血清素(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、5-羟色氨酸(5-HTP)、犬尿氨酸(K)、犬尿喹啉酸(KA)、3-羟基犬尿氨酸(3-HK)、3-羟基邻氨基苯甲酸(3-HAA)、喹啉酸、邻氨基苯甲酸及其组合。5-HT是在胃肠动力、分泌和感觉调节中起作用的分子。5-HT水平的失衡与几种疾病相关，所述疾病包括炎性肠综合征(IBS)、孤独症、胃溃疡形成、非心脏性胸痛和功能性消化不良(参见例如Faure等人(2010)Gastroenterology 139(1):249-58和Muller等人(2016)Neuroscience 321:24-41，和国际公开号WO 2014/188377，其各自通过引用并入本文)。血清素、色氨酸和/或犬尿氨酸途径中代谢物的转化影响受试者中5-HT的水平。因此，测量该途径中一种或多种代谢物的水平可用于诊断、管理和治疗与5-HT失衡相关的疾病或病症，包括但不限于IBS、自闭症、类癌综合征、抑郁症、高血压、阿尔茨海默病、便秘、偏头痛和血清素综合征。可以使用本领域中的方法和与这些代谢物(包括例如抗体)结合的分析物结合剂检测和/或定量血清素、色氨酸和/或犬尿氨酸途径中的一种或多种分析物(参见例如国际公开号WO2014/188377，其全部内容通过引用明确并入本文)。
在一些实施方式中，分析物是具有5至6个环状成员的内酰胺，选自巴比妥类，例如苯巴比妥和仲巴比妥、二苯基茶黄酮、扑米酮、乙琥胺及其代谢物。
在一些实施方式中，分析物是具有2至3个碳原子烷基的氨基烷基苯，选自安非他明；儿茶酚胺，包括麻黄碱、左旋多巴、肾上腺素；那碎因；罂粟碱；及其代谢产物。
在一些实施方式中，分析物是选自奥沙西泮、氯丙嗪、痛痉宁、其衍生物和代谢物的苯并杂环，该杂环是氮杂环庚烷、二氮杂卓和吩噻嗪。
在一些实施方式中，分析物是选自茶碱、咖啡因、其代谢物和衍生物的嘌呤。
在一些实施方式中，分析物是大麻、大麻酚或四氢大麻酚。
在一些实施方式中，分析物是维生素，诸如维生素A、维生素B(例如维生素B12)、维生素C、维生素D、维生素E和维生素K、叶酸、硫胺素。
在一些实施方式中，分析物选自前列腺素，其因羟化和不饱和的程度和位点而不同。
在一些实施方式中，分析物是选自丙咪嗪、去甲基米帕明、阿米替林、去甲替林、普罗替林、曲米帕明、氯丙咪嗪、多西平和去甲基氧杂环庚烷的三环抗抑郁药。
在一些实施方式中，分析物选自抗肿瘤药，包括甲氨蝶呤。
在一些实施方式中，分析物是如本文所述的抗生素，包括但不限于青霉素、氯霉素、放线菌素、四环素、土霉素及代谢物和衍生物。
在一些实施方式中，分析物是选自ATP、NAD、FMN、腺苷、鸟苷、胸苷和胞苷及其适当的糖和磷酸取代基的核苷和核苷酸。
在一些实施方式中，分析物选自美沙酮、甲氨蝶呤、血清素、哌替啶、利多卡因、普鲁卡因酰胺、乙酰基过敏胺、普萘洛尔、灰黄霉素、丙戊酸、丁酰苯、抗组胺药、氯霉素、抗胆碱能药物例如阿托品、其代谢物和衍生物。
在一些实施方式中，分析物是与患病状态相关的代谢物。这些代谢物包括但不限于精胺、半乳糖、苯丙酮酸和1型卟啉。
在一些实施方式中，分析物是氨基糖苷，例如庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素或阿米卡星。
在一些实施方式中，分析物是农药。在目标农药中有多卤联苯、磷酸酯、硫代磷酸酯、氨基甲酸酯、多卤代亚磺酰胺、其代谢物和衍生物。
在一些实施方式中，分析物的分子量为约500Da至约1000000Da(例如约500至约500000Da，约1000至约100000Da)。
在一些实施方式中，分析物是受体，分子量为10,000至2×108Da，更通常为10,000至106Da。对于免疫球蛋白、IgA、IgG、IgE和IgM，分子量通常为约160,000Da至约106Da。酶的分子量范围通常为约10000Da至约1000000Da。天然受体变化很大，通常具有至少约25,000Da的分子量并且可以是106或更高的Da，包括诸如抗生物素蛋白、DNA、RNA、甲状腺素结合球蛋白、甲状腺素结合前白蛋白、转铁蛋白等的材料。
在一些实施方式中，术语“分析物”还包括多核苷酸分析物，例如下文定义的那些多核苷酸。这些包括m-RNA、r-RNA、t-RNA、DNA、DNA-RNA双链体等。术语分析物还包括多核苷酸结合剂，例如限制酶、转录因子、转录激活因子、转录抑制因子、核酸酶、聚合酶、组蛋白、DNA修复酶、嵌入试剂和化学治疗剂等。
在一些实施方式中，分析物可以是直接存在于样品中的分子，例如来自宿主的体液。可以直接检查样品或者可以预处理样品以使分析物更容易检测。此外，目标分析物可以通过检测检验目标分析物的试剂(即分析物结合剂)来确定，例如与目标分析物互补的特异性结合对成员，其存在将仅在目标分析物存在于样品中时检测。因此，分析物的证明剂成为在测定中检测的分析物。
在一些实施方式中，分析物是核酸(例如细菌DNA分子或细菌RNA分子(例如细菌tRNA、转移信使RNA(tmRNA))。参见例如Sjostrom等(2015)Scientific Reports 5：15329；Ghosal(2017)Microbial Pathogenesis 104：161-163；Shen等(2012)Cell HostMicrobe.12(4)：509-520。
在一些实施方式中，分析物是外膜囊泡(OMV)的组分(例如OmpU蛋白，Elluri等人(2014)PloS One 9:e106731)。参见例如Kulp和Kuehn(2010)Annual Review ofmicrobiology 64:163-184；Berleman和Auer(2013)Environmental microbiology 15:347-354；Wai等人(1995)Microbiology and immunology 39:451-456；Lindmark等人(2009)BMC microbiology 9:220；Sjostrom等人(2015)Scientific Reports 5:15329。
在一些实施方式中，分析物是G-CSF，其可以刺激骨髓以产生粒细胞和干细胞并将它们释放到血流中。
在一些实施方式中，分析物是酶，例如谷胱甘肽S-转移酶。例如，可摄入装置可包括P28GST，其是一种来自血吸虫属的28kDa蠕虫蛋白，具有强效免疫原性和抗氧化性质。P28GST通过与粘膜嗜酸性粒细胞的Th2型反应来预防实验性结肠炎中的肠炎症，并且可以重组产生(例如在酿酒酵母中)。参见例如美国专利号9,593,313，Driss等人,MucosalImmunology,2016 9,322–335；和Capron等人,Gastroenterology,146(5):S-638。
在一些实施方式中，分析物是血清素、色氨酸和/或犬尿氨酸途径中的代谢物，包括但不限于血清素(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、5-羟色氨酸(5-HTP)、犬尿氨酸(K)、犬尿喹啉酸(KA)、3-羟基犬尿氨酸(3-HK)、3-羟基邻氨基苯甲酸(3-HAA)、喹啉酸、邻氨基苯甲酸及其组合。
在一些实施方式中，分析物是治疗剂或药物。在一些实施方式中，分析物是生物标记物。本文公开的治疗剂也可以是分析物。本文提供了生物标记物的实例。
在一些实施方式中，分析物是治疗剂、其片段和其代谢物(例如抗生素)。在一些实施方式中，分析物是抗体。在一些实施方式中，分析物是抗生素。以下提供了另外的示例性分析物(例如抗体和抗生素)。
a.抗体
在一些实施方式中，分析物或分析物结合剂是抗体。“抗体”是能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点与靶标(例如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)特异性结合的免疫球蛋白分子。如本文所用，该术语不仅涵盖完整的多克隆或单克隆抗体，还涵盖其片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(ScFv)和结构域抗体)和融合蛋白，所述融合蛋白包括抗体部分和免疫球蛋白分子的包括抗原识别位点的任何其它修饰构型。术语抗体包括抗体片段(例如抗原结合片段)，诸如Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段和Fab'片段。抗原结合片段的其它实例包括IgG的抗原结合片段(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，如人或人源化IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。抗体包括任何类别的抗体，例如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不需要是任何特定类别。取决于其重链恒定结构域的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白分配到不同的类别。存在五种主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可以进一步分为亚型(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
如本文所用，“单克隆抗体”是指从大体上同源的抗体群体获得的抗体，即除了可能以少量存在的可能天然发生的突变之外，包括群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。修饰语“单克隆”表明抗体的特征是从基本上同源的抗体群体获得的，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过Kohler和Milstein，1975，Nature 256：495首次描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过重组DNA方法制备，如美国专利号4,816,567中所述。单克隆抗体也可以从使用McCafferty等，1990，Nature348：552-554中描述的技术产生的噬菌体文库中分离。
抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链可变区或抗体重链可变区。如本领域已知的，重链和轻链的可变区各自由通过包含高变区的三个互补决定区(CDR)连接的四个框架区(FR)组成。每条链中的CDR由FR紧密靠近地保持在一起，并且来自另一条链的CDR有助于形成抗体的抗原结合位点。存在至少两种用于确定CDR的技术：(1)基于跨物种序列变异性的方法(即Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,(第5版,1991,National Institutes of Health,Bethesda MD))；和(2)基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法(Al-Lazikani等人,1997,J.Molec.Biol.273:927-948)。如本文所用，CDR可以指由任一种方法或两种方法的组合定义的CDR。
如本领域已知的，抗体的“恒定区”是指单独或组合的抗体轻链恒定区或抗体重链恒定区。
“衍生物”是指与天然存在的多肽具有基本相同的氨基酸序列的任何多肽(例如抗体)，其中一个或多个氨基酸在氨基酸的侧基上被修饰(例如生物素化的蛋白质或抗体)。术语“衍生物”还应包括任何多肽(例如抗体)，其具有从天然多肽序列缺失、添加或取代的一个或多个氨基酸，但保留与天然序列基本的氨基酸序列同源性。实质序列同源性是大于50％的任何同源性。
在一些实施方式中，抗体可以是人源化抗体，嵌合抗体，多价抗体或其片段。在一些实施方式中，抗体可以是scFv-Fc(Sokolowska-Wedzina等人,Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050,2017)、VHH结构域(Li等人,Immunol.Lett.188:89-95,2017)、VNAR结构域(Hasler等人,Mol.Immunol.75:28-37,2016)、(scFv)2、微型体(Kim等人,PLoS One 10(1):e113442,2014)、或BiTE。在一些实施方式中，抗体可以是DVD-Ig(Wu等人,Nat.Biotechnol.25(11):1290-1297,2007；WO 08/024188；和WO 07/024715)，和双亲和性重新靶向抗体(DART)(Tsai等人,Mol.Ther.Oncolytics 3:15024,2016)、三功能抗体(Chelius等人,MAbs 2(3):309-319,2010)、具有共同LC的kih IgG(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、crossmab(Regula等人,EMBO Mol.Med.9(7):985,2017)、ortho-Fab IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、2-in-1-IgG(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、IgG-ScFv(Cheal等人,Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812,2014)、scFv2-Fc(Natsume等人,J.Biochem.140(3):359-368,2006)、双纳米抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today20(7):838-847,2015)、串联抗体(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DART-Fc(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、scFv-HSA-scFv(Kontermann等人,Drug Discovery Today 20(7):838-847,2015)、DNL-Fab3(Kontermann等人,DrugDiscovery Today 20(7):838-847,2015)、DAF(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵臼式共同LC、杵臼式组件、电荷对抗体、Fab-臂交换抗体、SEED体、三功能抗体、LUZ-Y、Fcab、kλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)-IgG、IgG(L,H)-Fc、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、纳米抗体(例如，来源于双峰骆驼(Camelus bactrianus)、单峰骆驼(Camelus dromedarius)、或羊驼(Lamapacos)的抗体)(美国专利号5,759,808；Stijlemans等人,J.Biol.Chem.279:1256-1261,2004；Dumoulin等人,Nature 424:783-788,2003；和Pleschberger等人,Bioconjugate Chem.14:440-448,2003)、纳米抗体-HSA、双抗体(例如，Poljak,Structure 2(12):1121-1123,1994；和Hudson等人,J.Immunol.Methods 23(1-2):177-189,1999)、TandAb(Reusch等人,mAbs 6(3):727-738,2014)、scDiabody(Cuesta等人,Trends in Biotechnol.28(7):355-362,2010)、scDiabody-CH3(Sanz等人,Trends in Immunol.25(2):85-91,2004)、双抗体-CH3、三联抗体(Triple Body)、微型抗体、微型体、TriBi微型体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFV2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体(Huston等人,Human Antibodies 10(3-4):127-142,2001；Wheeler等人,Mol.Ther.8(3):355-366,2003；和Stocks,DrugDiscov.Today 9(22):960-966,2004)、对接和锁定双特异性抗体、ImmTAC、HSA体、scDiabody-HSA、串联scFv、IgG-IgG、Cov-X-体和scFv1-PEG-scFv2。
在一些实施方式中，抗体可以是IgNAR、双特异性抗体(Milstein和Cuello,Nature305:537-539,1983；Suresh等人,Methods in Enzymology 121:210,1986；WO 96/27011；Brennan等人,Science 229:81,1985；Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225,1992；Kolstelny等人,J.Immunol.148(5):1547-1553,1992；Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6444-6448,1993；Gruber等人,J.Immunol.152:5368,1994；Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、双特异性双抗体、三联体(Schoonooghe等人,BMC Biotechnol.9:70,2009)、四联体、scFv-Fc杵臼式、scFv-Fc-scFv、(Fab'scFv)2、V-IgG、IvG-V、双V结构域IgG、重链免疫球蛋白或骆驼科(Holt等人,Trends Biotechnol.21(11):484-490,2003)、胞内抗体、单克隆抗体(例如人或人源化单克隆抗体)、异源缀合抗体(例如美国专利号4,676,980)、线性抗体(Zapata等人,Protein Eng.8(10:1057-1062,1995)、三特异性抗体(Tutt等人,J.Immunol.147:60,1991)、Fabs-in-Tandem免疫球蛋白(WO15/103072)、或人源化骆驼抗体。
在一些实施方式中，抗体特异性结合血清素、色氨酸和/或犬尿氨酸途径中的代谢物，包括但不限于血清素(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、5-羟色氨酸(5-HTP)、犬尿氨酸(K)、犬尿喹啉酸(KA)、3-羟基犬尿氨酸(3-HK)、3-羟基邻氨基苯甲酸(3-HAA)、喹啉酸、邻氨基苯甲酸。与这些途径中的代谢物结合的示例性抗体公开于例如国际公开号WO2014/188377中，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方式中，抗体对微生物的特定属、种或菌株具有特异性，因此可以使用下述检测方法用于检测、分析和/或定量微生物。在一些实施方式中，抗体特异性结合存在于微生物的特定属、种或菌株中的表面特异性生物分子(例如菌毛亚基或鞭毛蛋白)，并且不与其它微生物交叉反应。在一些实施方式中，这些抗体可用于本文所述的方法中以诊断患有特定感染或疾病的受试者，或监测感染(例如在治疗期间或之后)。在一些实施方式中，抗体特异性结合存在于微生物的特定属、种或变体中的抗原。示例性抗原、可检测的相应微生物和由微生物引起的疾病(括号内)包括：外膜蛋白A OmpA(鲍曼不动杆菌，不动杆菌感染)；HIV p24抗原、HIV包膜蛋白(Gp120、Gp41、Gp160)(HIV(人类免疫缺陷病毒)，AIDS(获得性免疫缺陷综合症))；半乳糖可抑制的粘附蛋白GIAP、29kDa抗原Eh29、GaVGaINAc凝集素、蛋白质CRT、125kDa免疫显性抗原、蛋白质M17、粘附素ADH112、蛋白质STIRP(溶组织内阿米巴，阿米巴病)；保护性抗原PA、水肿因子EF、致死性因子LF、S层同源蛋白SLH(炭疽芽孢杆菌，炭疽病)；核衣壳蛋白NP、糖蛋白前体GPC、糖蛋白GP1、糖蛋白GP2(Junin病毒，阿根廷出血热)；41kDa过敏原Asp v13、过敏原Asp f3、主要分生孢子表面蛋白小棒A、蛋白酶Pep1p、GPI锚定蛋白Gel1p、GPI锚定蛋白Crf1p(曲霉菌属，曲霉菌病)；外表面蛋白A OspA、外表面蛋白OspB、外表面蛋白OspC、核心蛋白聚糖结合蛋白A DbpA、鞭毛丝41kDa核心蛋白Fla、碱性膜蛋白A前体BmpA(免疫显性抗原P39)、外表面22kDa脂蛋白前体(抗原IPLA7)、可变表面脂蛋白vIsE(疏螺旋体属，疏螺旋体属感染)；含有OmpA样跨膜结构域的蛋白Omp31、免疫原性39-kDa蛋白M5 P39、25kDa外膜免疫原性蛋白前体Omp25、外膜蛋白MotY Omp16、保守外膜蛋白D15、苹果酸脱氢酶Mdh、IV型成分分泌系统(T4SS)VirJ、功能未知的脂蛋白BAB1-0187(布鲁氏菌属，布鲁氏菌病)；主要外膜蛋白PorA、鞭毛蛋白FIaA、表面抗原CjaA、纤连蛋白结合蛋白CadF、天冬氨酸/谷氨酸结合ABC转运蛋白Peb1A、蛋白FspA1、蛋白FspA2(弯曲杆菌属，弯曲杆菌病)；糖酵解酶烯醇酶、分泌天冬氨酰蛋白酶SAP1-10、糖磷脂酰肌醇(GPI)-连接细胞壁蛋白、粘附素Als3p、细胞表面疏水性蛋白CSH(通常为白色念珠菌和其它念珠菌属，念珠菌病)；包膜糖蛋白(gB、gC、gE、gH、gI、gK、gL)(水痘带状疱疹病毒(VZV)，水痘)；主要外膜蛋白MOMP、可能的外膜蛋白PMPC、外膜复合蛋白B OmcB(沙眼衣原体，衣原体)；主要外膜蛋白MOMP、外膜蛋白2Omp2，(肺炎衣原体，肺炎衣原体感染)；外膜蛋白U Porin ompU，(霍乱弧菌，霍乱)；表面层蛋白质SLP、细胞壁蛋白质CwpV、鞭毛蛋白FliC、鞭毛蛋白质FliD(艰难梭菌，艰难梭菌感染)；酸性核糖体蛋白P2 CpP2、粘蛋白抗原Muc1、Muc2、Muc3、Muc4、Muc5、Muc6、Muc7、表面粘附蛋白CP20、表面粘附蛋白CP23、表面蛋白CP12、表面蛋白CP21、表面蛋白CP40、表面蛋白CP60、表面蛋白CP15、表面相关的糖肽gp40、表面相关的糖肽gp15、卵囊壁蛋白AB、抑制蛋白PRF、腺苷三磷酸双磷酸酶(隐孢子虫属，隐孢子虫病)；膜蛋白pp15、衣壳间层近端蛋白pp150(巨细胞病毒，巨细胞病毒感染)；朊病毒蛋白(vCJD朊病毒，变体Creutzfeldt-Jakob疾病(vCJD，nvCJD))；囊壁蛋白CWP1、CWP2、CWP3、变体表面蛋白VSP、VSP1、VSP2、VSP3、VSP4、VSP5、VSP6、56kDa抗原(肠贾第虫，贾第虫病)；次要的菌毛蛋白相关亚基pilC、主要的菌毛蛋白亚基和变体pilE、pilS(淋病奈瑟菌，淋病)；外膜蛋白A OmpA、外膜蛋白C OmpC、外膜蛋白K17 OmpK17(克雷伯氏菌肉芽肿，腹股沟肉芽肿(杜诺凡病))；纤连蛋白结合蛋白Sfb(化脓性链球菌，A组链球菌感染)；外膜蛋白P6(流感嗜血杆菌，流感嗜血杆菌感染)；膜内在蛋白、易聚集蛋白、O-抗原、毒素-抗原Stx2B、毒素-抗原Stx1B、粘附抗原片段Int28、蛋白质EspA、蛋白质EspB、紧密粘附素、蛋白质Tir、蛋白质IntC300、蛋白质Eae(大肠杆菌O157:H7、O111和O104:H4，溶血性尿毒症综合征(HUS))；甲型肝炎表面抗原HBAg(甲型肝炎病毒，甲型肝炎)；乙型肝炎表面抗原HBsAg(乙型肝炎病毒，乙型肝炎)；包膜糖蛋白E1gp32 gp35、包膜糖蛋白E2 NS1 gp68 gp70、衣壳蛋白C，(丙型肝炎病毒，丙型肝炎)；IV型菌毛蛋白PilE、外膜蛋白MIP、主要外膜蛋白MompS(嗜肺军团菌，军团菌病(军团菌病，庞蒂亚克热))；次要菌毛蛋白相关亚基pilC、主要菌毛蛋白亚基和变体pilE、pilS(脑膜炎奈瑟菌，脑膜炎球菌病)；粘附素P1，粘附P30(肺炎支原体，支原体肺炎)；F1胶囊抗原、外膜蛋白酶Pla，(鼠疫耶尔森氏菌，鼠疫)；表面粘附素PsaA、细胞壁表面锚定蛋白psrP(肺炎链球菌，肺炎球菌感染)；鞭毛蛋白FliC、侵袭蛋白SipC、糖蛋白gp43、外膜蛋白LamB、外膜蛋白PagC、外膜蛋白TolC、外膜蛋白NmpC、外膜蛋白FadL、转运蛋白SadA(沙门氏菌属，沙门氏菌病)；胶原粘附素Cna、纤连蛋白结合蛋白A FnbA、分泌抗原SssA(葡萄球菌属，葡萄球菌食物中毒)；胶原粘附素Can(金黄色葡萄球菌属，金黄色葡萄球菌感染)；纤连蛋白结合蛋白AFbpA(Ag85A)、纤连蛋白结合蛋白D FbpD、纤连蛋白结合蛋白C FbpC1、热休克蛋白HSP65、蛋白质PST-S(结核分枝杆菌，结核病)；和外膜蛋白FobA、外膜蛋白FobB、IV型菌毛糖基化蛋白、外膜蛋白tolC、蛋白质TolQ(土拉弗朗西斯菌，兔热病)。另外的示例性微生物和相应的抗原公开于例如美国公开号2015/0118264中，其全部内容通过引用明确并入本文。
在一些实施方式中，多种抗体(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30或更多种抗体)用作本文描述的任一方法(例如检测样品中一种或多种分析物的存在)中的分析物结合剂。在一些实施方式中，多种抗体结合相同的分析物(例如抗原)。在一些实施方式中，多种抗体结合分析物(例如抗原)上存在的相同表位。在一些实施方式中，多种抗体结合存在于相同分析物上的不同表位。在一些实施方式中，多种抗体结合存在于相同分析物上的重叠表位。在一些实施方式中，多种抗体结合存在于相同分析物上的非重叠表位。
抗生素
在一些实施方式中，分析物或分析物结合剂是抗生素。“抗生素”或“抗生素剂”是指具有抑制或减缓细菌和/或其它微生物生长或破坏细菌和/或其它微生物的能力的物质。在一些实施方式中，抗生素剂是抑菌抗生素剂。在一些实施方式中，抗生素是溶菌性抗生素剂。示例性抗生素剂在美国专利公开US2006/0269485中提出，其通过引用整体并入本文。
在一些实施方式中，抗生素剂选自β-内酰胺抗生素、氨基糖苷类、柄型抗生素、蒽醌类、抗生素唑类、抗生素糖肽类、大环内酯类、抗生素核苷类、抗生素肽类、抗生素多烯类、抗生素聚醚类、喹诺酮类、抗生素类固醇、磺胺类、四环素类、二元羧酸类、抗生素类金属、氧化剂、释放自由基和/或活性氧的物质、阳离子抗菌剂、季铵化合物、双胍类、三嗪类、双双胍类及其类似物和聚合物以及天然存在的抗生素化合物。在一些实施方式中、抗生素是利福昔明。
β-内酰胺抗生素包括但不限于2-(3-丙氨酰)克拉霉素、2-羟甲基克拉霉素、8-表-噻吩霉素、乙酰基-硫霉素、阿莫西林、阿莫西林钠、阿莫西林三水合物、阿莫西林-克拉维酸钾组合、氨苄青霉素、氨苄青霉素钠、氨苄西林三水合物、氨苄西林-舒巴坦、阿沙西林、阿曲西林、叠氮西林、阿洛西林、氨曲西林、巴卡西林、比阿培南、羧苄青霉素、羧苄青霉素二钠、卡非西林、卡宾西林、卡培霉素、头孢曲萘、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢噻肟、头孢噻吩、头孢噻吩、头孢孟多、头孢匹林、头孢曲嗪、头孢曲嗪丙二醇、头孢他酮、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢卡品、头孢卡品盐酸匹酯、头孢地尼、头孢托仑、头孢托仑匹酯、头孢吡肟、头孢他美、头孢他美酯、头孢克肟、头孢噻肟、头孢噻唑、头孢米诺、头孢米诺、头孢氨苄、头孢地嗪、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢拉定、头孢噻肟、头孢噻肟、头孢替坦、头孢替安、头孢西丁、头孢唑啉、头孢匹胺、头孢匹罗、头孢泊肟、头孢泊肟酯、头孢丙烯、头孢喹肟、头孢拉定、头孢沙定、头孢磺啶、头孢他啶、头孢特仑、头孢特仑酯、头孢替唑、头孢布烯、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢呋辛酯、头孢菌素、头霉素、希替喔林、环己西林、克拉维酸、氯甲西林、氯唑西林、环丝氨酸、脱氧布拉霉素、双氯西林、二氢拉西霉素、前列腺素、表硫霉素、厄他培南、法罗培南、氟罗沙芬、氟氯西林、海他西林、亚胺培南、仑氨西林、劳拉卡因、美西林、美罗培南、青霉素、甲氧西林、美洛西林、拉氧头孢、乙氧萘青霉素、新硫霉素、苯唑西林、帕尼培南、青霉素、青霉素、苯乙苄青霉素、哌拉西林、他唑巴坦、枢霉素、枢纽霉素、曲美西林、盐酸匹美西林、舒巴霉素、丙苄青霉素、噻虫青霉素、舒巴坦、舒巴西林、他林西林、替莫西林、特康唑、硫霉素、替卡西林及其类似物、盐及其衍生物。
氨基糖苷类包括但不限于1,2'-N-DL-异丝氨酰基-3',4'-二脱氧卡那霉素B、1,2'-N-DL-异丝氨酰基-卡那霉素B、1,2'-N-[(S)-4-氨基-2-羟基丁酰基]-3',4'-二脱氧卡那霉素B、1,2'-N-[(S)-4-氨基-2-羟基丁酰基]-卡那霉素B、1-N-(2-氨基丁磺酰基)卡那霉素A、1-N-(2-氨基乙磺酰基)3',4'-二脱氧核糖霉素、1-N-(2-氨基乙磺酰基)3'-脱氧核糖霉素、1-N-(2-氨基乙磺酰基)3'4'-二脱氧卡那霉素B、1-N-(2-氨基乙磺酰基)卡那霉素A、1-N-(2-氨基乙磺酰基)卡那霉素B、1-N-(2-氨基乙磺酰基)核糖霉素、1-N-(2-氨基丙磺酰基)3'-脱氧卡那霉素B、1-N-(2-氨基丙磺酰基)3'4'-二脱氧卡那霉素B、1-N-(2-氨基丙磺酰基)卡那霉素A、1-N-(2-氨基丙磺酰基)卡那霉素B、1-N-(L-4-氨基-2-羟基-丁酰基)2,'3'-二脱氧基-2'-氟卡那霉素A、1-N-(L-4-氨基-2-羟基-丙酰基)2,'3'-二脱氧基-2'-氟卡那霉素A、1-N-DL-3',4'-二脱氧基-异丝氨酰基卡那霉素B、1-N-DL-异丝氨酰基卡那霉素、1-N-DL-异丝氨酰基卡那霉素B、1-N-[L-(-)-(α-羟基-γ-氨基丁酰基)]-XK-62-2,2',3'-二脱氧基-2'-氟卡那霉素A、2-羟基庆大霉素A3、2-羟基庆大霉素B、2-羟基庆大霉素B1、2-羟基庆大霉素JI-20A、2-羟基庆大霉素JI-20B、3”-N-甲基-4”-C-甲基-3',4'-十二烷氧基卡那霉素A、3”-N-甲基-4”-C-甲基-3',4'-十二烷氧基卡那霉素B、3”-N-甲基-4”-C-甲基-3',4'-十二氧基-6'-甲基卡那霉素B、3',4'-二脱氧基-3'-烯-核糖霉素、3',4'-二脱氧新霉胺(3',4'-dideoxyneamin)、3',4'-二脱氧核糖霉素、3'-脱氧基-6'-N-甲基-卡那霉素B、3'-脱氧新霉胺、3'-脱氧核糖霉素、3'-氧基糖菌素(3′-oxysaccharocin)、3,3'-新海藻糖二胺(3,3′-nepotrehalosadiamine)、3-脱甲氧基-2”-N-亚胺甲基天神霉素B二硫酸盐四水合物(3-demethoxy-2″-N-formimidoylistamycin B disulfate tetrahydrate)、3-脱甲氧基天神霉素B、3-O-去甲基-2-N-亚胺甲基天神霉素B、3-O-去甲基天神霉素B、3-海藻糖胺、4”,6”-二脱氧地贝卡星、4-N-甘氨酰-KA-6606VI、5”-氨基-3',4',5”-三脱氧基-丁酰苷菌素A、6”-脱氧地贝卡星、6'-表阿替米星A、6-脱氧基-新霉素(结构6-脱氧基-新霉素B)、6-脱氧基-新霉素B、6-脱氧基-新霉素C、6-脱氧基-巴龙霉素、抗霉素、AHB-3',4'-二脱氧核糖霉素、AHB-3'-脱氧卡那霉素B、AHB-3'-脱氧新毒胺、AHB-3'-脱氧核糖霉素、AHB-4”-6”-二脱氧地贝卡星、AHB-6”-二脱氧地贝卡星、AHB-二脱氧新毒胺、AHB-卡那霉素B、AHB-甲基-3'-脱氧卡那霉素B、丁胺卡那霉素、硫酸丁胺卡那霉素、安普霉素、阿贝卡星、阿司米星、硫酸阿司米星、卡那霉素B、布鲁霉素、布霍霉素、丁酰苷菌素、丁酰苷菌素B、巴龙霉素、库脒γ1、库脒2、D,L-1-N-(α-羟基-β-氨基丙酰基)-xk-62-2、达地米星、脱-O-氧基-4-N-甘氨酰基-KA-6606VI、脱-O-甲基-KA-6606I、脱-O-甲基-KA-7038I、越霉素A、越霉素B、二-N6',O3-去甲基天神霉素A、地贝卡星、硫酸地贝卡星、二氢链霉素、硫酸二氢链霉素、表-甲酰胺基缩水甘油基福提霉素B(epi-formamidoylglycidylfortimicin B)、表潮霉素(epihygromycin)、甲酰亚胺基-天神霉素A、甲酰亚胺基-天神霉素B、福提霉素B、福提霉素C、福提霉素D、福提霉素KE、福提霉素KF、福提霉素KG、福提霉素KG1(立体异构体KG1/KG2)、福提霉素KG2(立体异构体KG1/KG2)、福提霉素KG3、新霉素B、硫酸新霉素B、庆大霉素、硫酸庆大霉素、球霉素、杂交霉素A1、杂交霉素A2、杂交霉素B1、杂交霉素B2、杂交霉素C1、杂交霉素C2、羟基链霉素、潮霉素、潮霉素B、异帕米星、硫酸异帕米星、天神霉素、卡那霉素、硫酸卡那霉素、春雷霉素、青紫霉素、马可霉素、小诺霉素、硫酸小诺霉素、突变霉素、筋霉素、N-去甲基-7-O-去甲基天青菌素、去甲基天青菌素、天神霉素的甲烷磺酸、暗霉素、暗霉素、新霉素、奈替米星、寡糖酶抑素、巴龙霉素、五氮霉素、核糖霉素、糖酶素、昔尔杜霉素、西索米星、山梨醇菌素、壮观霉素、链霉素、妥布霉素、海藻糖胺(trehalosmaine)、萃他汀、井冈霉素、威大霉素(verdamycin)、木糖霉素(xylostasin)、轭霉素及其类似物、盐和衍生物。
柄型抗生素包括但不限于21-羟基-25-去甲基-25-甲基硫代原曲张链霉素(21-hydroxy-25-demethyl-25-methylthioprotostreptovaricin)、3-甲基硫代利福霉素、安丝菌素、阿托品曲张链霉素(atropisostreptovaricin)、阿瓦霉素、卤霉素、美登素、萘霉素、利福布丁、利福酰胺、利福平、利福霉素、利福喷汀、利福昔明(例如
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)、红迪菌素、链霉素、颗粒霉素及其类似物、盐和衍生物。
抗生素蒽醌类包括但不限于：阿霉素，烬灰红菌素，二三十二碳六烯，双三肉红素C，无花果酸脆霉素，美浓霉素，腊伯罗霉素，鲁多霉素，沙米霉素及其类似物、盐和衍生物。
抗生素唑类包括但不限于阿扎唑，联苯苄唑，丁康唑，氯咪唑，盐酸氯咪唑，克螨唑，氯康唑，一盐酸，克霉唑，二甲硝唑，益康唑，硝酸益康唑，恩硝康唑，苯唑醇，硝酸氟硝唑，化学酶，氟康唑，氟马司唑，异康唑，硝酸异烟肼，伊曲康唑，酮康唑，羊毛康唑，甲硝唑，苯甲酸甲硝唑，咪康唑，硝酸咪康唑，奈利康唑，尼莫唑，尼唑唑，奥康唑，奥硝唑，奥昔康唑，硝酸恶唑唑，丙哌唑，噻唑醇，舍他康唑，硝酸舍他康唑，舒康唑，硝酸康康唑，替硝唑，噻康唑，伏力康唑及其类似物、盐和衍生物。
抗生素糖肽包括但不限于棘阿霉素，阿克他菌素，阿伏霉素，巴利霉素，博来霉素B(铜博来霉素)，氯霉素，氯多孢菌素，去甲万古霉素，恩拉霉素，格拉霉素，胍基真菌，曲古霉素，去甲万古霉素，N-壬酰基-替考拉宁，腐草霉素，普拉妥霉素，瑞斯托菌素，葡萄球菌素，盐霉素，替考拉宁，万古霉素，优胜霉素，木聚霉素，佐尔博霉素及其类似物、盐和衍生物。
大环内酯类包括但不限于乙酰基霉素，乙酰基米霉素，安哥拉霉素，阿奇霉素，巴弗洛霉素，布雷菲德菌素，卡波霉素，查尔霉素，安替霉素，克拉霉素，康那霉素，去甲酰基-尼达霉素，去甲肾上腺素-霉素霉素，二-O-甲基乙酰氨基霉素，地红霉素，红霉素，红霉素交替，红霉素乙基丁二酸酯，红霉素乳糖酸酯，红霉素硬脂酸酯，氟尿嘧啶，焦磷酸，异黄嘌呤，哈特马利特，哈特马利特，交沙霉素，丙酸交沙霉素，幼霉素，幼霉素，吉他霉素，酮黄霉素，兰卡杀菌素，兰卡杀霉素，白霉素，马车辛，麦里多霉素，巨大霉素，甲基亮霉素，酒霉素，麦迪霉素，米欧卡霉素，肌醇内酯，霉霉素，中性霉素，尼达霉素，无活菌素，竹桃霉素，苯乙酰基乙酰霉素，巴马霉素，苦霉素，罗他霉素，罗沙米星，罗红霉素，赛地卡霉素，山科霉素，螺旋霉素，斯瓦尔霉素，他克莫司，泰利霉素，台勾霉素，替米考星，密螺霉素，醋竹桃霉素，泰乐菌素，杀黑星菌素及其类似物、盐和衍生物。
抗生素核苷包括但不限于阿米西汀，安格斯霉素，氮肾上腺素，杀稻瘟素S，依匹罗林，氟胞嘧啶，谷氏菌素，温霉素，尼可霉素，核苷酸，恶苷，恶苷，嘌呤霉素，吡唑霉素，显霉素，西尼霉素，稀疏菌素，辛伐霉素，衣霉素，尿嘧啶多氧霉素，杀菌剂及其类似物、盐和衍生物。
抗生素肽包括但不限于放线菌素、阿库来菌素(actinomycin)、丙氨肽霉素、安福霉素、阿米霉素(amythiamycin)、来自丝状真菌(Zalerion arboricola)的抗真菌剂、安曲霉素(antrimycin)、阿匹德(apid)、蜜蜂抗菌肽、天冬菌素、金大分子霉素(auromomycin)、杆菌素(bacileucin)、杆菌霉素、杆菌肽素、杆菌肽、巴加杀菌素、贝米霉素、β-丙氨酰-L-酪氨酸、波卓霉素、卷曲霉素、卡泊芬净、西帕西丁(cepacidine)、蜡状菌素、西洛芬净、环杆菌素、黏菌素、环羧酚酸肽、细胞吞噬素、放线菌素D、达托霉素、十肽菌素、去氧牟伦多菌素(desoxymulundocandin)、echanomycin、棘白菌素B、棘霉素(echinomycin)、生态霉素、恩镰孢菌素、绿灰菌素、法巴丁(fabatin)、高铁霉素、高铁霉素、非昔罗霉素、氟诺卡硫星(fluoronocathiacin)、镰孢菌素、加迪霉素、谷缬菌素、球肽菌素、甘氨霉素、短杆菌肽、草生欧菌素、异样霉素、伊枯草菌素、异样霉素、伊珠肽素、贾尼霉素、贾那霉素、乔利肽菌素、苦味素、杀虫毒素、脂肽抗生素、来自涛旋孢属的脂胜肽、溶杆菌素(lysobactin)、溶菌酶(lysozyme)、大分子霉素、爪蟾抗菌肽、蜂毒肽、美杀菌素(mersacidin)、蜜柑霉素、莫雷霉素、枝游菌素(mycoplanecin)、抗霉菌枯草杆菌素、新肽氟微素(neopeptifluorin)、新绿灰菌素、纺锤霉素、乳酸链球菌肽、诺卡硫星、诺卡硫星6-脱氧糖苷、诺西肽、八肽霉素、帕卡霉素、十五肽、肽氟、培美素(permetin)、非多爱新、植病链菌素、游硫菌素(planothiocin)、普拉斯巴菌素(plusbacin)、极枯草菌素、多粘菌素抗生素复合物、多粘菌素B、多粘菌素B1、多粘菌素F、新制癌菌素(preneocarzinostatin)、醌霉素、奎奴普丁-达福普汀、番红菌素(safracin)、沙美霉素、沙美霉素、沙美霉素、山卓霉素、萨拉霉素、盐屋霉素、倍他西林、孢霉素、链霉菌化合物、枯草菌素、替考拉宁糖苷配基、远霉素、热硫菌素、硫肽菌素、硫链丝菌素、十三肽菌素、津枝霉素、结核放线菌素、结核放线菌素、短杆菌素、缬氨霉素、紫霉素、维及霉素、泽范霉素及其类似物、盐和衍生物。
在一些实施方式中，抗生素肽是天然存在的肽，其具有抗细菌和/或抗真菌活性。这种肽可以从草药或脊椎动物来源获得。
多烯包括但不限于两性霉素，两性霉素，金色制霉素，抗酵母素，阿扎霉素，杀稻瘟素，杀念珠菌素，杀念珠菌素甲酯，假丝霉素，假丝霉素甲酯，赤诺霉素，菲律宾菌素，黄抗霉素，弗氏菌素，哈霉素，氢霉素，来伏林，光明霉素，鲁克奴霉素，麦迪诺霉素，麦迪诺霉素甲酯，美帕曲星，甲基两性霉素，纳他霉素，尼菲霉素，制霉菌素，制霉菌素甲酯，氧普利霉素，抑念珠菌素，喷他霉素，表霉素，匹马菌素，伯霉素，抗变形菌素，龟裂杀菌素，涎粘菌素，索兰金，曲古霉素及其类似物、盐和衍生物。
聚醚包括但不限于20-脱氧-表-甲基盐霉素，20-去氧盐霉素，腐霉素，猎神霉素，二氢离子霉素，醚霉素，伊屋诺霉素，异拉沙里菌素，拉沙里菌素，雷诺霉素，离子霉素，溶胞菌素，莫能菌素，甲基盐霉素，氧洛霉素，多环醚抗生素，沙利霉素及其类似物、盐和衍生物。
喹诺酮类包括但不限于烷基-亚甲二氧基-4(1H)-氧代亚辛啉-3-羧酸，阿拉曲沙星，西诺沙星，环丙沙星，盐酸环丙沙星，达氟沙星，皮肤癣菌素A，依诺沙星，恩诺沙星，氟罗沙星，氟甲喹，加替沙星，吉米沙星，格帕沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，洛美沙星，盐酸盐，甲氧恶喹酸，莫西沙星，那氟沙星，萘啶酸，硝呋喹酸，诺氟沙星，氧氟沙星，奥比沙星，奥索利酸，帕珠沙星，培氟沙星，培氟沙星甲磺酸盐，吡哌酸，吡咯米酸，帕马沙星，罗索沙星，芦氟沙星，司帕沙星，替马沙星，托氟沙星，曲氟沙星及其类似物、盐和衍生物。
抗生素类固醇包括但不限于氨基甾醇，囊甾糖苷，枝孢菌素A，二氢呋喃二酸，脱氢二氢呋啶酸，脱氢呋喃二酸，夫西地酸，角鲨胺及其类似物、盐和衍生物。
磺酰胺包括但不限于氯胺，氨苯砜，磺胺嘧啶，邻苯二甲酰磺胺，琥珀酰磺胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺哒嗪，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶银，磺胺二甲胺，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺甲恶唑，磺胺甲氧基哒嗪，磺胺甲氧嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺喹恶啉，磺胺琥珀酰胺，磺胺噻唑，磺胺脲，硫酸酯酰胺，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺异恶唑，磺胺异恶唑乙酰磺胺，磺胺脲及其类似物、盐和衍生物。
四环素类包括但不限于二氢黄霉素，去甲基四环素，阿克拉霉素，阿霉素，鲍霉素，溴代四环素，细胞周期素，金霉素，氯米可林，柔红霉素，地美环素，多柔比星，盐酸多柔比星，多西环素，赖氨四环素，麻西罗霉素，甲氯环素，磺基水杨酸甲氯环素，美他环素，米诺环素，盐酸米诺环素，缪雪太霉素，土霉素，红景天苷，吡甲四环素，柔红霉素，丝裂霉素，司替霉素，四环素及其类似物、盐和衍生物。
在其碳原子骨架中具有约6至约14个碳原子的二羧酸特别适用于治疗涉及微生物的皮肤和粘膜病症。合适的二羧酸部分包括但不限于己二酸，庚二酸，辛二酸，壬二酸，癸二酸，1,11-十一烷二酸，1,12-十二烷二酸，1,13-十三烷二酸和1,14-十四烷二酸。因此，在本公开的一个或多个实施方式中，在其碳原子骨架中具有约6至约14个碳原子的二羧酸及其盐和衍生物(例如酯、酰胺、巯基衍生物、脱水剂)在治疗涉及炎症的皮肤和粘膜病症中是有用的免疫调节剂。壬二酸及其盐和衍生物是优选的。它对需氧和厌氧生物，特别是痤疮丙酸杆菌和表皮葡萄球菌具有抗菌作用，使角化正常化，并对恶性或活性过度的黑素细胞具有细胞毒性作用。在优选的实施方式中，二羧酸是浓度大于10％的壬二酸。优选地，壬二酸的浓度为约10％至约25％。在这种浓缩物中，壬二酸适用于治疗各种皮肤病，例如痤疮、红斑痤疮和色素沉着过度。
在一些实施方式中，抗生素剂是抗生素金属。已经显示许多金属离子具有抗生素活性，包括银，铜，锌，汞，锡，铅，铋，镉，铬及其离子。从理论上讲，这些抗生素金属离子通过在吸收到细菌或真菌细胞中时破坏呼吸和电子传递系统而发挥其作用。特别是银、铜、锌和金的抗微生物金属离子被认为对体内使用是安全的。抗微生物银和银离子特别有用，因为它们基本上不被吸收到体内。因此，在一个或多个实施方式中，抗生素金属由选自由银，铜，锌，汞，锡，铅，铋，镉，铬和金的元素金属组成的组，其作为颗粒，微粒，纳米颗粒或胶体颗粒悬浮在组合物中。抗生素金属可以进一步嵌入螯合基质中。
在进一步的实施方式中，抗生素金属是离子的。离子抗生素金属可以作为无机盐或有机盐(与抗衡离子偶联)，有机金属络合物或嵌入物存在。反无机和有机离子的非结合实例是磺胺嘧啶，乙酸盐，苯甲酸盐，碳酸盐，碘酸盐，碘化物，乳酸盐，月桂酸盐，硝酸盐，氧化物和棕榈酸盐，是一种带负电荷的蛋白质。在优选的实施方式中，抗生素金属盐是银盐，例如乙酸银，苯甲酸银，碳酸银，碘酸银，碘化银，乳酸银，月桂酸银，硝酸银，氧化银，棕榈酸银，银蛋白和磺胺嘧啶银。
在一个或多个实施方式中，将抗生素金属或金属离子嵌入基质中，例如聚合物或矿物质(例如沸石、粘土和二氧化硅)。
在一个或多个实施方式中，抗生素剂包括强氧化剂和释放自由基的化合物，诸如氧、过氧化氢、过氧化苯甲酰、元素卤素物质，以及含氧卤素物种、漂白剂(例如次氯酸钠、次氯酸钙或次氯酸镁等)、高氯酸盐、碘、碘酸盐和过氧化苯甲酰。还包括有机氧化剂，例如醌。这些药剂具有有效的广谱活性。
在一个或多个实施方式中，抗生素剂是阳离子抗微生物剂。细菌细胞的最外表面通常带有净负电荷，使其对阳离子物质敏感。阳离子抗生素剂的实例包括：季铵化合物(QAC’s)-QAC’s是表面活性剂，通常含有与至少一个主要疏水部分缔合的一个季氮；烷基三甲基溴化铵是烷基长度为8-18个碳原子的混合物，如西曲酰亚胺(十四烷基三甲基溴化铵)；苯扎氯铵，它是正烷基二甲基苄基氯化铵的混合物，其中烷基(疏水部分)可以是可变长度的；二烷基甲基卤化铵；二烷基苄基卤化铵；和QAC二聚体，它们与间隙疏水区域一起带有双极正电荷。
在一个或多个实施方式中，阳离子抗微生物剂是聚合物。阳离子抗微生物聚合物包括例如胍聚合物，双胍聚合物，或具有含有双胍部分或其它阳离子官能团的侧链的聚合物，例如苯扎铵基或四萘基(例如季胺基)。应理解，本文所用的术语“聚合物”包括任何包括三个或更多个重复单元的有机材料，并且包括低聚物，聚合物，共聚物，嵌段共聚物，三元共聚物等。聚合物主链可以是例如聚乙烯，聚丙烯或聚硅烷聚合物。
在一个或多个实施方式中，阳离子抗微生物聚合物是聚合双胍化合物。当应用于基质时，已知这种聚合物形成可以接合和破坏微生物的阻挡膜。示例性的聚合双胍化合物是聚六亚甲基双胍(PHMB)盐。其它示例性双胍聚合物包括但不限于聚(六亚甲基双胍)，聚(六亚甲基双胍)盐酸盐，聚(六亚甲基双胍)葡糖酸盐，聚(六亚甲基双胍)硬脂酸盐或其衍生物。在一个或多个实施方式中，抗微生物材料基本上不溶于水。
在一些实施方式中，抗生素剂选自双胍、三嗪、双双胍及其类似物。
胍类、双胍类、联胍类和三嗪类是不饱和的含氮分子，其容易获得一种或多种正电荷，这使得它们成为有效的抗微生物剂。以下提供了胍，双胍，联胍和三胍的基本结构。
Figure BDA0002449116230005321
在一些实施方式中，胍、双胍、联胍或三胍在单个分子内提供阳离子和疏水结构域的双极构型。
目前用作抗菌剂的胍类、双胍类、联胍类和三胍类的实例包括氯己定和氯己定盐、类似物和衍生物，例如醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定和盐酸氯己定，甲氧嘧啶，阿来西定和聚己内酯。可以想到根据本公开使用的胍、双胍、联胍和三胍的其它实例是盐酸氯苯胍、盐酸氯胍(目前用作抗疟药)，盐酸美托明，苯乙双胍和盐酸丁福明(目前用作抗糖尿病药)。
然而，在一个或多个实施方式中，抗生素是未分类的抗生素剂，包括但不限于阿博霉素、醋霉素、乙酰氧基环己酰亚胺、乙酰基七尾霉素(acetylnanaomycin)、游动放线菌属化合物、放线菌吡喃酮(actinopyrone)、阿弗拉斯汀(aflastatin)、阿巴卡星(albacarcin)、阿尔巴卡(albacarcin)、白真菌素、白真菌素、阿里沙星(alisamycin)、α-R,S-甲氧基羰基苄基单酸酯、阿托霉素、别霉素、阿霉素(amycin)、阿霉素-去甘露糖基化合物、阿霉素(amycine)、阿考霉素(amycomycin)、阿那迪霉素、茴香霉素、氨曲霉素、抗梅毒免疫物质、抗结核病免疫物质、来自大肠杆菌的抗生素、来自雷福恩链霉菌(Streptomycesrefuineus)的抗生素、抗夹膜菌素、抗霉素、除疟霉素、阿然罗星(aranorosin)、阿然罗星诺(aranorosinol)、阿鲁沟霉素、壳二孢呋喃酮、子囊霉素、杀子囊菌素、黄曲霉抗生素、阿苏克霉素、奥然丁宁(aurantinin)、金霉酸抗生素物质、奥迪霉素(aurodox)、卑霉素、叠氮氯霉素、阿西迪霉素、杆菌烯、幼虫杆菌抗生素、波林菌素、贝那诺霉素、苯并蒽菌素、单胞菌酸苯甲酯(benzylmonate)、二环霉素、博拉霉素(bravomicin)、溴莫普林、布他西丁(butalactin)、卡西霉素、马勃菌酸、肯迪普素(candiplanecin)、卡芦莫南、嗜癌菌素、天青菌素、赛普菌素(cepacin)、浅蓝菌素、塞新霉素(cervinomycin)、教酒菌素、氯霉素、棕榈酸氯霉素、氯霉素琥珀酸钠、氯黄菌素、氯新生霉素、氯瘤菌素、色霉素、环匹罗司、环匹罗司乙醇胺、斯特霉素(citreamicin)、枝孢菌素、克拉沙霉素、柯莱卡霉素(clecarmycin)、克林霉素、类大肠杆菌素、覆盖霉素、丰富霉素、珊瑚黏菌素、克內卡丁(corynecandin)、香豆霉素、屈尔潘(culpin)、铜迈克星、环氨霉素、放线菌酮(cycloheximide)、达克霉素(dactylomycin)、达诺霉素、多瑙霉素、迪氨霉素(delaminomycin)、去甲氧基雷帕霉素、去甲基噻托霉素(demethylscytophycin)、木菌素、甲硫吡丙菌素、去木糖基-贝那诺霉素、假糖苷配基、二氢莫西霉素、二氢南锡霉素、久霉素、达那克星(dnacin)、多里霉素(dorrigocin)、戴内霉素(dynemycin)、三醋酸戴内霉素(dynemycin triacetate)、海鞘素、依罗霉素、内霉素、恩生可霉素、伊快霉素、欧石南霉素、埃斯培拉霉素、乙基单酸酯(ethylmonate)、扁枝衣霉素、非达霉素、弗来巴霉素、黄质霉素、氟苯尼考、河霉素、磷霉素、佛方霉素(fosfonochlorin)、菲特霉素、富伦菌素、复明菌素(fumifungin)、真菌油素、夫散菌素(fusacandin)、夫散霉素(fusafungin)、吉貝菌素(gelbecidine)、滑杆菌素(glidobactin)、格拉菌素(grahamimycin)、榴菌素、灰黄霉素、灰绿菌素、灰诺霉素、海明霉素(hayumicin)、海明霉素、海兹霉素(hazymicin)、赫达霉素、海尼霉素(heneicomycin)、海普特酸(heptelicid acid)、全霉素、湿菌素、异补血酸(isohematinic acid)、卡纳塔菌素、上总霉素、克里斯菌素(kristenin)、L-二氢基苯丙氨酸、L-异亮氨酰基-L-2-氨基-4-(4′-氨基-2′,5′-环己二烯基)衍生物、兰诺霉素、雷纳霉素、莱普霉素、黎巴嫩霉素、洁霉素、洛蒙真菌素、溶血脂质、镁菌素、手霉素、黑质霉素、甲氧基羰基甲基单酸酯(methoxycarbonylmethylmonate)、甲氧基羰基乙基单酸酯、甲氧基羰基苯基单酸酯、假单酸甲酯(methyl pseudomonate)、甲基单酸酯(methylmonate)、小菌素、丝裂马菌素、莫西霉素、默诺霉素、单乙酰基枝孢菌素、单甲基枝孢菌素、莫匹罗星、莫匹罗星钙、杀分枝菌素、多球壳菌素、吡酮黏球菌素(myxopyronin)、拟苷元(pseudoaglycone)、七尾霉素、南锡霉素、那净菌素(nargenicin)、新制癌菌素、尼诺那菌素(neoenactin)、新茴霉素、硝呋妥醇、诺卡菌素、诺加霉素、新生霉素、辛基单酸酯(octylmonate)、橄榄霉素、正糖霉素、小奥德蘑素、奥昔洛芬(oxirapentyn)、甲碘化氧海罂粟碱(oxoglaucine methiodide)、密旋霉素、密旋霉素、阜孢霉素、保洛霉素、色链隔孢属杀真菌剂、芬尼法霉素、苯基、浅蓝菌素、苯基单酸酯(phenylmonate)、福里波霉素、吡利霉素、截短侧耳素、聚内酯衍生物、多硝基菌素(polynitroxin)、多氧菌素、紫菜霉素、普那米星(pradimicin)、帕里奴霉素、丙-2-烯基单酸酯(prop-2-enylmonate)、原虫霉素、假单胞菌抗生素、假单胞菌酸、绛红霉素、比灵菌素(pyrinodemin)、硝吡咯菌素、吡咯霉素、氨基、氯代戊烯二酸、雷帕霉素、蝴蝶霉素、抗霉素、罗氏菌素、逆行霉素(reveromycin)、西左菌素(rhizocticin)、杆孢菌素、红玉黄菌素、萘啶霉素、番红霉素(saframycin)、山芬霉素、肉瘤霉素、肉瘤霉素、斯洛菌素(sclopularin)、月霉素、癣可宁、斯帕坦霉素(spartanamicin)、壮观霉素、海绵抑制素、抗生蛋白菌素、利链菌素、沙生链霉菌(Streptomyces arenae)抗生素复合物、链黑霉素、链丝菌素、链菌生素、链脲佐菌素、嗜球果伞素衍生物、疾病霉素(stubomycin)、磺胺甲基异唑-甲氧苄氨嘧啶、萨卡霉素(sakamycin)、特杰霉素(tejeramycin)、类萜菌素、替曲卡星、嗜温红菌素、嗜热菌杀酵母素、甲砜霉素、硫金黄菌素、硫藤黄菌素、硫代屈大麻酚(thiomarinol)、硫代屈大麻酚、提郎达霉素、单歧藻毒素、木霉菌素、三烯霉素、甲氧苄氨嘧啶、三氧卡星(trioxacarcin)、泰瑞斯霉素(tyrissamycin)、赭褐霉素、恩菲霉素(unphenelfamycin)、乌鲁支霉素(urauchimycin)、地衣酸、溶锈菌素、宛氏霉素、维米菌素(vermisporin)、疣孢菌素及其类似物、盐和衍生物。
在一个或多个实施方式中，抗生素剂是天然存在的抗生素化合物。如本文所用，术语“天然存在的抗生素剂”包括从植物或脊椎动物来源获得、衍生或提取的所有抗生素。天然存在的抗生素剂家族的非限制性实例包括苯酚，间苯二酚，抗生素氨基糖苷类，安霉素，奎宁，蒽醌，抗生素糖肽，唑类，大环内酯类，阿维拉霉素，丙炔类，蓟苦素，桃叶珊瑚苷抗生素皂苷级分，小檗碱(异喹啉生物碱)，弓形藻(倍半萜内酯)，蛇麻酮，葎草酮(苦味酸)，大蒜素，贯叶金丝桃素，松果菊苷，洋茉莉素，特拉姆酸，亚胺素和新亚胺素。
环吡酮和环吡酮胺具有杀真菌、抑制真菌和杀孢子活性。它们对广谱的皮肤真菌、酵母、霉菌和其它真菌，诸如毛癣菌属物种、小孢子菌属物种、表皮癣菌属物种和酵母菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、其它念珠菌物种和新型隐球菌)具有活性。一些曲霉菌属物种对环吡酮敏感，一些青霉菌也是如此。同样，环吡酮对许多革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌(例如大肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、葡萄球菌和链球菌属物种)以及支原体物种、阴道毛滴虫和放线菌有效。
含有抗生素的植物油和提取物也是有用的。含有试剂的植物的非限制性实例包括百里香、紫苏、薰衣草、茶树、Terfezia claveryi、小单孢子菌、Putterlickia verrucosa、Putterlickia pyracantha、Putterlickia retrospinosa、冬青叶美登木(Maytenusilicifolia)、伊馮美登木(Maytenus evonymoides)、阿克美登木(Maytenus aquifolia)、Faenia interjecta、冬虫夏草、偃麦草、水飞蓟(holy thistle)、车前草、牛蒡、啤酒花、紫锥花、香叶木、灌木丛(chaparral)、没药、红三叶草和皱叶酸模、大蒜和圣约翰草(St.John’s wort)。也可以使用如本文所述的抗生素剂的混合物。
组合检测：
可使用本文所述的任何方法检测本文公开的分析物的任何组合。特别地，可以使用本文描述的任何方法检测本文公开的任何组合。
如本文所用的“光敏剂”是指通常通过光激发产生单线态氧的增感剂。适合使用的示例性光敏剂包括美国专利号6,251,581、5,516,636、8,907,081、6,545,012、6,331,530、8,247,180、5,763,602、5,705,622、5,516,636、7,217,531和美国专利公开号2007/0059316中描述的那些，所有这些专利均通过参考明确地整体并入本文中。光敏剂可以是可光活化的(例如染料和芳族化合物)或化学活化的(例如酶和金属盐)。当被光激发时，光敏剂通常是由共价键合的原子组成的化合物，通常具有多个共轭的双键或三键。该化合物应吸收波长范围为200-1100nm，通常为300-1000nm，例如450-950nm的光，其吸收最大值下的消光系数大于500M-1cm-1，例如在激发波长下为至少5000M-1cm-1，或至少50,000M-1cm-1。在不存在氧的情况下吸收光后产生的激发态的寿命通常为至少100纳秒，例如至少1微秒。通常，寿命必须足够长以允许能量转移到氧气，氧气通常取决于介质以10-5至1031 3M范围内的浓度存在。敏化剂激发态将通常具有与其基态不同的自旋量子数(S)，并且在通常情况下基态是单态(S＝O)时，其将通常是三重态(S＝1)。在一些实施方式中，敏化剂将具有高的系统间杂交产率。也就是说，敏化剂的光致激发将产生长寿命状态(通常为三重态)，效率为至少10％，至少40％，例如大于80％。在测定条件下，光敏剂通常至多是弱荧光的(量子产率通常小于0.5，或小于0.1)。
被光激发的光敏剂将是相对光稳定的并且不会与单线态氧有效反应。大多数有用的敏化剂中存在几种结构特征。大多数敏化剂具有至少一个且经常三个或更多个共轭的双键或三键，其保持在刚性的且通常为芳香族的结构中。它们通常含有至少一个加速系统间杂交的基团，如羰基或亚胺基或选自周期表第3-6行的重原子，尤其是碘或溴，或它们可具有延长的芳族结构。典型的敏化剂包括丙酮，二苯甲酮，9-噻吨酮，曙红，9,10-二溴蒽，亚甲基蓝，金属卟啉，例如血卟啉，酞菁，叶绿素，玫瑰红，巴克明斯特富勒烯等，以及这些化合物的衍生物，其具有1至50个原子的取代基以使这些化合物更亲脂或更亲水和/或作为用于连接的连接基团。可以使用的其它光敏剂的实例是具有上述性质并列举在N.J.Turro，“Molecular Photochemistry，”第132页，W.A.Benjamin Inc.，N.Y.1965中的那些。
在一些实施方式中，当光敏剂掺入油滴、脂质体、胶乳颗粒等中时，光敏剂是相对非极性的，以确保溶解到亲脂性分子中。
在一些实施方式中，适用于本文的光敏剂包括其它物质和组合物，其可以在通过外部光源激活或不激活下产生单线态氧。因此，例如，钼酸盐(MoO4 ＝)盐和氯过氧化物酶和髓过氧化物酶加溴化物或氯离子(Kanofsky,J.Biol.Chem.(1983)259 5596)已被证明催化过氧化氢转化为单线态氧和水。这些组合物中的任一种都可以例如包含在颗粒中并用于测定方法，其中包括过氧化氢作为辅助试剂，氯过氧化物酶与表面结合，并且钼酸盐结合在脂质体的水相中。由于光敏剂为非真正的敏化剂但在通过热、光或化学活化激发时会释放单线态氧分子的化合物也包括在本发明范围内。这类化合物中最著名的成员包括内过氧化物，如1,4-二羧乙基-1,4-萘内过氧化物，9,10-二苯基蒽-9,10-内过氧化物和5,6,11,12-四苯基萘5,12-内过氧化物。这些化合物的加热或直接吸收光会释放出单线态氧。
如本文所用的“化学发光化合物”是指与单线态氧发生化学反应以形成亚稳中间体的物质，所述亚稳中间体可以在250至1200nm的波长范围内同时或随后发射光而分解。适合使用的示例性化学发光化合物包括美国专利号6,251,581和7,709,273以及专利合作条约(PCT)国际申请公开号WO1999/042838中描述的那些。示例化学发光化合物包括以下：
Figure BDA0002449116230005361
所有上述申请在此通过引用整体明确地并入本文。通常在没有能量受体或催化剂存在的情况下发生发射以引起分解和发光。在一些实施方式中，中间体在其形成后不加热或添加辅助试剂而自发分解。然而，一些化学发光化合物需要在形成中间体后加入试剂或使用升高的温度来加速分解。化学发光化合物通常是富含电子的化合物，其与单线态氧反应，通常形成二氧杂环丁烷或二氧杂环丁酮。这些化合物的实例是烯醇醚，烯胺，9-烷基邻苯二甲腈，9-亚烷基-N-烷基吖啶，芳基乙烯基醚，二恶烷，芳基咪唑和光泽精。其它化学发光化合物在与单线态氧反应时产生中间体，随后单线态氧与另一种具有光发射的试剂反应。示例性化合物是酰肼，例如鲁米诺和草酸酯。
目标化学发光化合物通常发射波长超过300nm且通常高于400nm。单独或与荧光分子一起发射的化合物在超出血清成分吸收光的区域的波长下发光将是特别有用的。血清的荧光在500nm以上迅速下降，并且在550nm以上变得相对不重要。因此，当分析物在血清中时，发射光高于550nm，例如高于600nm的化学发光化合物可能适合使用。为了避免化学发光化合物的自动敏化，在一些实施方式中，化学发光化合物不吸收用于激发光敏剂的光。在一些实施方式中，敏化剂用长于500nm的光波长激发，因此理想的是化学发光化合物的光吸收在500nm以上非常低。
在需要从化学发光化合物发射长波长的情况下，可以使用与化学发光化合物结合的长波长发射体如芘。或者，荧光分子可以包含在含有化学发光化合物的介质中。在一些实施方式中，荧光分子将被活化的化学发光化合物激发并以比化学发光化合物的发射波长更长的波长发射，通常大于550nm。通常还希望荧光分子不会在用于激活光敏剂的光的波长下吸收。有用染料的实例包括罗丹明、乙锭、丹酰、Eu(fod)3、Eu(TTA)3、Ru(bpy)3++(其中bpy＝2,2'-联吡啶等。这些染料通常在能量转移过程中和在一些实施方式中充当受体，具有高荧光量子产率并且不与单线态氧快速反应。它们可以在将化学发光化合物结合到粒子中的同时掺入粒子中。
在一些实施方式中，本公开提供了衍射光学检测技术，其可以与例如可摄入装置技术一起使用。在某些实施方式中，可摄入装置包括衍射光学技术(例如衍射光学检测系统)。在某些实施方式中，本公开提供了在受试者体外使用的衍射光学技术(例如衍射光学检测系统)。例如，可摄入装置可用于在受试者的身体(例如胃肠道)中获得一个或多个样品，并且衍射光学技术可用于分析样品。这种分析可以在体内进行(例如当可摄入装置包含衍射光学时)。
衍射是由于光的波动性而发生的现象。当光线照射到边缘或通过小孔径时，它会向不同方向散射。但是光波可以干扰以相加(相长地)和相减(相消地)，因此如果光照射到非随机的障碍物图案，随后的相长干涉和相消干涉将产生清晰明显的衍射图案。一个具体的示例是衍射光栅，它是均匀间隔的线，通常是通过在表面上刻划直的平行凹槽来制备的。入射在这种表面上的光产生均匀间隔的高光强度点的图案。这称为布拉格散射，并且点之间的距离(或“布拉格散射峰”)是衍射图案和光源波长的独特函数。衍射光栅(如聚焦光学系统)可以在透射和反射模式下操作。
通常，衍射光学系统中使用的光可以是任何适当的波长。示例性波长包括可见光，红外红(IR)和紫外(UV)。可选地，光可以是单色的或多色的。光可以是相干的或不相干的。光可以是准直的或非准直的。在一些实施方式中，光是相干和准直的。通常，可以使用任何适当的光源，例如激光器(例如激光二极管)或发光二极管。在一些实施方式中，光源是在670nm波长下工作的激光二极管，例如3mW功率。可选地，激光二极管的工作波长可以是780nm，例如当使用较大的光栅周期时。在某些实施方式中，光源是激光器，例如He-Ne激光器、Nd:YVO4激光器或氩离子激光器。在一些实施方式中，光源是低功率连续波动激光器。
可以使用任何适当的光检测器检测衍射光。光检测器的示例包括光检测器，例如位置敏感光电二极管，光电倍增管(PMT)，光电二极管(PD)，雪崩光电二极管(APD)，电荷耦合器件(CCD)阵列和CMOS检测器。在一些实施方式中，通过一个或多个单独的光电二极管检测衍射光。
通常，衍射光栅由在用于照射传感器的辐射波长中透明的材料制成。任何适当的材料可用于衍射光栅基底，例如玻璃或聚合物。示例性聚合物包括聚苯乙烯聚合物(PSE)，环烯烃聚合物(COP)，聚碳酸酯聚合物，聚甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸甲酯苯乙烯共聚物。示例性COP包括Zeonex(例如Zeonex E48R，Zeonex F52R)。
光可以任何适当的角度入射在衍射光栅上。在一些实施方式中，光入射在衍射光栅上，入射角为30°至80°(例如40°至80°，50°至70°，55°至65°，60°)。可选地，系统配置成使得衍射光栅和光源可以相对于彼此移动
通常，光检测器可以相对于衍射光栅定位，使得可以所需的入射角照射衍射光栅和/或使得可以期望的角度检测衍射光和/或使得可检测到期望顺序的衍射光。
可以根据需要选择衍射光栅的周期P。在一些实施方式中，周期P为0.5微米至50微米(例如1微米至15微米，1微米至5微米)。在一些实施方式中，光栅是1.5微米和4.5微米线的重复图案，周期为15微米。
可以根据需要选择衍射光栅的高度h。在某些实施方式中，高度h为1纳米至约1000纳米(例如约5纳米至约250纳米，5纳米至100纳米)。
通常，衍射光学系统可以使用任何适当的方法制备，例如表面烧蚀，光刻(例如UV光刻)，激光蚀刻，电子束蚀刻，纳米压印成型或微接触印刷。
可选地，衍射光学系统可包括一个或多个附加光学元件，例如一个或多个镜子，滤光器和/或透镜。这种光学元件可以例如布置在光源和衍射光栅之间和/或衍射光栅和检测器之间。
在本文所述装置的一些实施方式中，初级结合配偶体通过非共价相互作用(例如静电、范德华、疏水效应)特异性结合第二结合配偶体。在一些实施方式中，初级结合配偶体通过共价键(例如极性共价键或非极性共价键)特异性结合次级结合配偶体。在本文描述的任何装置的一些实施方式中，初级和次级结合配偶体可以互换。例如，初级结合配偶体可以是生物素或其衍生物，并且次级结合配偶体是抗生物素蛋白或其衍生物。在其它实例中，初级结合配偶体可以是抗生物素蛋白或其衍生物，并且次级结合配偶体是生物素。
在一些实施方式中，初级和次级结合配偶体的结合基本上是不可逆的。在一些实施方式中，初级和次级结合配偶体的结合是可逆的。在一些实施方式中，初级结合配偶体是CaptAvidinTM生物素结合蛋白，并且次级结合配偶体是生物素，或反之亦然。在一些实施方式中，初级结合配偶体是DSB-XTM生物素，并且次级结合配偶体是抗生物素蛋白，或反之亦然。.在一些实施方式中，初级结合配偶体是脱硫生物素，并且次级结合配偶体是抗生物素蛋白，或反之亦然(Hirsch等人,AnalBiochem.308(2):343-357,2002)。在一些实施方式中，初级结合配偶体是谷胱甘肽(GSH)或其衍生物，并且次级结合配偶体是谷胱甘肽-S-转移酶(GST)。
在一些实施方式中，初级结合配偶体可以结合作为核酸的靶分析物(例如DNA分子，RNA分子)。在一些实施方式中，初级结合配偶体包含与靶分析物的核酸序列互补的核酸的一部分。
在本文描述的任何装置的一些实施方式中，装置可包括与靶分析物结合并且不阻止靶分析物与初级结合配偶体结合的标记。在一些实施方式中，标记可以放大靶分析物的衍射信号。
在一些实施方式中，标记为约1nm至200nm(例如约50nm至约200nm)。
在一些实施方式中，标记(例如本文所述的任何标记)包括一种或多种抗体(例如本文所述的任何抗体和/或抗体片段)。
在一些实施方式中，标记是纳米颗粒(例如金纳米颗粒)，其包括具有与靶分析物互补的核酸序列的初级结合配偶体，并且与纳米颗粒共价连接。
可以在本文描述的任何方法中执行一个或多个附加步骤。在一些实施方式中，在以下执行一个或多个附加步骤：在初级结合配偶体与次级结合配偶体结合之前，在初级结合配偶体与次级结合配偶体结合之后，在初级结合配偶体与目标分析物结合之前，或在初级结合配偶体与目标分析物结合之后。
在本文所述任何方法的一些实施方式中，确定步骤(在此期间检测到初级结合配偶体与靶分析物的结合)可以在至少15秒内发生。在一些实施方式中，初级结合配偶体与靶分析物的结合可以在例如至少5秒的时间段内发生。
在一些实施方式中，一个或多个附加步骤可包括：阻挡传感器步骤，至少一个洗涤步骤，捕获步骤和/或过滤步骤。在一些实施方式中，阻断步骤可包括用可在缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水(PBS)，Tris缓冲盐水(TBS))中包含至少1％牛血清白蛋白(BSA)的溶液阻断可摄入装置内的传感器。在一些实施方式中，至少一个洗涤步骤可包括用缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水(PBS)，Tris缓冲盐水(TBS))洗涤。通常，在胶囊制造期间而不是在体内进行阻断。
在一些实施方式中，捕获步骤包括富集目标分析物。在一些实施方式中，捕获步骤包括使用过滤器，孔或磁珠将目标分析物与剩余样品物理分离。在一些实施方式中，通过尺寸排阻捕获靶分析物。
在一些实施方式中，本公开提供了在受试者的胃肠(GI)道或生殖道内获得、培养和/或检测体内靶细胞和/或目标分析物的方法。还公开了相关装置。所描述的方法和装置为获得和/或分析来自受试者的流体样品提供了许多优点。在一些实施方式中，稀释流体样品增加了分析物检测的动态范围和/或减少了样品内的背景信号或干扰。例如，干扰可能是由于非目标分析物的存在或样品中染料或标记的非特异性结合。在一些实施方式中，培养样品增加靶细胞和/或靶细胞产生的靶分析物的浓度，从而促进其检测和/或表征。
在某些实施方式中，本文描述的方法和装置可用于获得关于受试者胃肠道中细菌群的信息。这具有许多优点并且比诸如插管或内窥镜检查的外科手术更少侵入性以从胃肠道获得流体样品。如本文所述的可摄入装置的使用还允许获得流体样品并且在来自胃肠道的特定区域的细菌群体上产生数据。
在一些实施方式中，本文所述的方法和装置可用于产生数据，例如通过分析一种或多种靶细胞和/或靶分析物的流体样品，其稀释液或培养的样品。数据可包括但不限于存在于流体样品中的细菌类型或胃肠道特定区域中的细菌浓度。此类数据可用于确定受试者是否具有感染，例如小肠细菌过度生长(SIBO)，或用于表征胃肠道内的细菌群体用于诊断或其它目的。因此，在一些实施方式中，本文公开的分析物指示与异常细菌群体相关的胃肠道疾病。
例如，在一个方面，数据可包括但不限于胃肠道的特定区域中的细菌浓度，所述特定区域是十二指肠、空肠、回肠、升结肠、横结肠或降结肠中的一种或多种。在一个方面，胃肠道的特定区域是十二指肠。在一个方面，胃肠道的特定区域是空肠。在一个方面，胃肠道的特定区域是回肠。在一个方面，胃肠道的特定区域是升结肠。在一个方面，胃肠道的特定区域是横结肠。在一个方面，胃肠道的特定区域是降结肠。在相关的实施方式中，可以每一天或多天产生数据以监测疾病突发或对本文公开治疗剂的反应。
可以在装置离开受试者之后产生数据，或者可以在体内产生数据并将其存储在装置上并离体回收。或者，当装置通过受试者的胃肠道或在受试者的生殖道内就位时，可以从装置无线传输数据。
在一些实施方式中，方法包括：提供包含一个或多个稀释室和稀释流体的装置；将从受试者的胃肠道或生殖道获得的全部或部分流体样品转移到体内的一个或多个稀释室中；并且将流体样品和稀释流体组合以在一个或多个稀释室中产生一个或多个稀释样品。
在某些实施方式中，方法包括：提供包含一个或多个稀释室的可摄入装置；将从胃肠道获得的全部或部分流体样品转移到包含无菌培养基的一个或多个稀释室中；在一个或多个稀释室内在体内培养样品以产生一种或多种培养样品；并且检测一种或多种培养样品中的细菌。
在一些实施方式中，方法包括：提供包含一个或多个稀释室的装置；将从胃肠道或生殖道获得的全部或部分流体样品转移到一个或多个稀释室中；将全部或部分流体样品与稀释流体组合在一个或多个稀释室中；并且检测一个或多个稀释样品中的目标分析物。
在某些实施方式中，装置包括：一个或多个稀释室，用于稀释从胃肠道或生殖道获得的流体样品；和稀释流体，用于在一个或多个稀释室内稀释样品。
在一些实施方式中，装置包括：一个或多个稀释室，用于培养从胃肠道获得的流体样品；无菌培养基，用于在一个或多个稀释室内培养样品；和检测系统，用于检测细菌。
在某些实施方式中，装置包括：一个或多个稀释室，用于培养从胃肠道获得的流体样品；无菌培养基，用于在一个或多个稀释室内培养样品；和检测系统，用于检测细菌。
还提供了如本文所述的装置用于稀释从受试者的胃肠道或生殖道获得的一种或多种样品的用途。在一个实施方式中，提供了如本文所述的可摄入装置用于在受试者的胃肠(GI)道内体内检测靶细胞和/或目标分析物的用途。
还提供了一种系统，包括如本文所述的装置和基站。在一个实施方式中，装置将数据发送到基站，例如指示受试者胃肠道中细菌的浓度和/或类型的数据。在一个实施方式中，装置从基站接收操作参数。本文描述的一些实施方式提供了可摄入装置，用于从受试者的胃肠道或生殖道获得一种或多种样品，并稀释和/或培养一种或多种样品的全部或部分。可摄入装置包括圆柱形可旋转元件，其在圆柱形可旋转元件的壁上具有端口。可摄入装置还包括围绕圆柱形可旋转元件缠绕的壳元件，以在圆柱形可旋转元件和壳元件之间形成第一稀释室。壳元件具有孔，该孔将圆柱形可旋转元件的壁的一部分暴露于可摄入装置的外部。
在某些实施方式中，医疗装置包括一个或多个稀释室，用于从受试者的胃肠道或生殖道接收流体样品或其稀释液。在一些实施方式中，流体样品的一种或多种稀释液在一个或多个稀释室中培养。在某些实施方式中，稀释室各自限定已知体积，任选地相同体积或不同体积。在一些实施方式中，稀释室限定的流体体积为约10μL至约1mL。稀释室可以限定小于或等于约500μL，小于或等于约250μL，小于或等于约100μL，或小于或等于约50μL的流体体积。在某些实施方式中，稀释室限定大于或等于约10μL，大于或等于约20μL，大于或等于约30μL，或大于或等于约50μL的流体体积。在一些实施方式中，稀释室限定介于约10μL和500μL之间，介于约20μL和250μL之间，介于约30μL和100μL之间或约50μL的流体体积。
在一些实施方式中，装置中的稀释流体与全部或部分流体样品或其稀释液组合以产生一种或多种稀释液。在某些实施方式中，稀释液是适于在稀释室内培养一种或多种靶细胞的无菌培养基。
在某些实施方式中，在患者摄入可摄入装置之前，可以用稀释液填充一个或多个稀释室。在一些实施方式中，稀释流体可以从可摄入装置的贮存器中体内添加到一个或多个稀释室中。GI流体样品的取样和稀释可以在体内进行。例如，当确定可摄入装置位于胃肠道内的预定位置时，可摄入装置的致动器可将稀释流体从储存器泵送到稀释室中。在一些实施方式中，稀释室各自含有一定体积的无菌培养基，其适于培养来自胃肠道或生殖道的流体样品。在某些实施方式中，稀释室是至少95％，至少97％，至少98％或至少99％的无菌培养基。在一些实施方式中，稀释室各自含有氧以促进需氧细菌生长。在某些实施方式中，非稀释室包含氧气并添加到一个或多个稀释室中以促进需氧细菌生长。
在一些实施方式中，培养可以在GI流体样品已被稀释后立即在体内进行。或者可替代地，培养可以离体进行，例如当可吸收装置已被抽空和回收时，使得可以提取含有稀释的GI流体样品的稀释室，并且培养可以在实验室中进行。可摄入装置的回收可以与2016年12月14日提交的美国临时申请号62/434,188中描述的实施方式类似的方式进行，该临时申请通过引用整体并入本文。
如本文所用，“培养”是指将靶细胞维持在允许一个或多个靶细胞群通过细胞分裂增加的环境中。例如，在一些实施方式中，“培养”可以包括在允许细胞生长的温度下，任选地在受试者的胃肠道或生殖道内体内发现的温度下，在稀释室中将细胞与培养基组合。在某些实施方式中，细胞在约35℃至42℃的温度下培养。
如本文所用，“稀释流体”是指装置内用于稀释来自胃肠道或生殖道的流体样品的流体。在一些实施方式中，稀释流体是水溶液。在某些实施方式中，稀释液包含一种或多种促进或抑制生物(例如真菌或细菌)生长的试剂。在一些实施方式中，稀释流体包含一种或多种有助于检测靶分析物的试剂，例如用于靶分析物的染料或结合剂。
在一些实施方式中，稀释流体是无菌介质。如本文所用，“无菌培养基”是指不含任何活细菌或其它细胞的培养基，其将通过细胞分裂生长和增加数量。可以通过本领域已知的各种技术使培养基无菌，例如但不限于使用无菌技术高压灭菌和/或制备培养基。在某些实施方式中，介质是液体介质。适用于培养细菌的培养基的实例包括营养肉汤，LysogenyBroth(LB)(也称为Luria Broth)，Wilkins chalgren和胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)，本领域已知的其它生长或培养基也可用于本文描述的方法和装置。在一些实施方式中，培养基具有碳源例如葡萄糖或甘油，氮源例如铵盐或硝酸盐或氨基酸，以及微生物生长所需的盐和/或微量元素和维生素。在某些实施方式中，该培养基适合于维持真核细胞。在一些实施方式中，培养基包含一种或多种促进或抑制细菌生长的试剂，任选地促进或抑制特定类型细菌生长的试剂。
在某些实施方式中，培养基是选择性培养基。如本文所用，“选择性培养基”是指允许某些类型的靶细胞生长并且抑制其它生物生长的培养基。因此，细胞在选择性培养基中的生长表明培养的样品中存在某些类型的细胞。例如，在一些实施方式中，培养基对革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌具有选择性。在某些实施方式中，培养基含有结晶紫和胆汁盐(例如在MacConkey琼脂中发现的)，其抑制革兰氏阳性生物的生长并且允许选择和分离革兰氏阴性细菌。在一些实施方式中，培养基含有高浓度的盐(NaCl)(例如在甘露醇盐琼脂中发现的)并且对革兰氏阳性细菌具有选择性。在一些实施方式中，培养基选择性地杀死真核细胞或仅生长原核细胞，例如，使用包含TritonTM X-100的培养基。在某些实施方式中，培养基选择性地杀死原核细胞(或者仅生长真核细胞)，例如，使用包含抗生素的培养基。
在一些实施方式中，培养基是指示剂培养基。如本文所用，“指示剂培养基”是指含有特定营养物或指示物(例如但不限于中性红，酚红，曙红或亚甲蓝)的培养基，其在某种类型的细胞在指示剂培养基中培养时产生可检测的信号。
在一些实施方式中，本公开提供了包含染料和任选的用于选择性裂解真核细胞的试剂的组合物。在某些实施方式中，组合物包含染料和用于选择性裂解真核细胞的试剂。在一些实施方式中，组合物还包含一种或多种试剂，所述试剂独立地选自由以下组成的组：用于选择性裂解真核细胞的第二试剂(例如Triton X-100)、电解质(例如MgCl2)、抗真菌试剂(例如两性霉素-B)和抗生素。在一些实施方式中，组合物包含水并且是水溶液的形式。在一些实施方式中，组合物是固体或半固体。在一些实施方式中，本文描述的组合物适用于试剂盒或装置中以用于检测或定量样品中的活细菌细胞。在一些实施方式中，这种装置是用于在体内(例如在胃肠道中)检测或定量活细菌细胞的可摄入装置。在一些实施方式中，在一种或多种抗生素的存在下检测或定量样品中的活细菌细胞，以确定样品中细菌的抗生素抗性。在一些实施方式中，可以检测或定量样品中的异常细菌群，例如通过使用包含本文公开的染料的组合物，以确定受试者是否患有感染，例如小肠细菌过度生长(SIBO)，或用于表征胃肠道内的细菌群以用于诊断或其它目的。
在一些实施方式中，一种方法包括：(a)使样品与如本文所述的组合物接触；和(b)测量样品的总荧光或荧光变化率随时间的变化，从而检测所述样品中的活细菌细胞。在一些实施方式中，可以在该方法中使用如本文所述的对照。在一些实施方式中，在步骤(b)中在多个时间点上测量样品的总荧光或荧光变化速率随时间的变化以达延长的时间段，从而检测所述样品中的活细菌细胞。在一些实施方式中，该方法还包括将步骤(b)中确定的总荧光或荧光变化率随时间的变化与样品中活细菌细胞的数量相关联。在一些实施方式中，确定在多个时间点上测量的样品的荧光变化率随时间的变化，并将其与在相同时间点上测量的对照的荧光变化率随时间的变化进行比较，以确定样品中存活细菌细胞的数量。在一些实施方式中，该方法不需要离体铺板或培养。在一些实施方式中，该方法不需要抽吸。在一些实施方式中，该方法在体内进行(例如在体内可摄入装置中)。在一些实施方式中，该方法包括将机载测定的结果传递给离体接收器。
在某些实施方式中，试剂盒包含如本文所述的组合物和说明书，例如用于检测或定量样品中的活细菌细胞。在一些实施方式中，装置包含如本文所述的组合物，例如用于检测或定量样品中的活细菌细胞。与检测可存在于样品环境中并导致相互矛盾结果的细菌成分(例如内毒素)相反，活细胞的检测是可行平板计数的金标准，并且代表了本文描述的组合物和方法的优点之一。
该系统采用的方法，组合物和检测系统发现为准确且可靠地将荧光与自主可摄入装置或其它类似尺寸装置中的总细菌数(TBC)相关联。该组合物包括染料，缓冲剂和洗涤剂的新组合，其允许对包含非细菌细胞和其它组分的样品中的活细菌细胞进行选择性染色，否则其使得检测或定量活细菌细胞具有挑战性。在一些实施方式中，该系统允许细菌近乎实时地量化，并且结果在装置外遥测共享。
在某些实施方式中，本公开提供一种评估或监测治疗患有或处于胃肠道中细菌细胞过度生长风险下的受试者的需要的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者的胃肠道获得样品；(b)使样品与如本文所述的组合物接触；(c)测量所述样品的总荧光或荧光变化率随时间的变化；和(d)将步骤(c)中测量的总荧光或荧光变化率随时间的变化与样品中活细菌细胞的数量相关联，其中在步骤(e)中测定的活细菌细胞量大于约105CFU/mL表明需要治疗，例如用如本文所述的抗生素剂。在一些实施方式中，可以在该方法中使用如本文所述的对照。在一些实施方式中，在步骤(c)中在多个时间点上测量样品的总荧光或荧光变化速率随时间的变化以达延长的时间段。在一些实施方式中，确定在多个时间点上测量的样品的荧光变化率随时间的变化，并将其与在相同时间点上测量的对照的荧光变化率随时间的变化进行比较，以确定样品中存活细菌细胞的数量。在一些实施方式中，该方法不需要离体铺板或培养。在一些实施方式中，该方法不需要抽吸。在一些实施方式中，该方法在体内进行(例如在体内可摄入装置中)。在一些实施方式中，该方法包括将机载测定的结果传递给离体接收器。在一些实施方式中，该方法可进一步用于在治疗后监测受试者(例如用抗生素)。在一些实施方式中，该方法可用于评估治疗的功效。例如，有效治疗可以通过来自受试者治疗后胃肠道的样品中活细菌细胞数量的减少来指示。可以通过来自受试者后处理的胃肠道的样品中活细菌细胞数量的减少速率来评估治疗的功效。在一些实施方式中，该方法可用于检测受试者中抗生素抗性细菌菌株的感染。例如，其中来自受试者的胃肠道的样品中的活细菌细胞的数量在抗生素治疗后基本上没有降低可以指示这种感染。
在一些实施方式中，本公开提供了可吸收材料(例如可吸收海绵)，其吸收有如本文所述的组合物。在一些实施方式中，可吸收海绵是Ahlstrom Grade6613H(Lot 150191)或Porex PSU-567，其中吸收有如本文所述的组合物。在一些实施方式中，可吸收海绵可通过将包含如本文所述组合物的水溶液注入可吸收海绵中来制备，并任选地还包括干燥所得可吸收海绵的步骤。
在某些实施方式中，本公开提供一种检测样品中活细菌细胞存在的方法，该方法包括：(a)用样品使如本文所述的可吸收海绵，或如本文所述制备的可吸收海绵完全或部分饱和；和(b)测量在步骤(a)中制备的完全或部分饱和的海绵的总荧光或荧光变化率随时间的变化，从而检测活细菌细胞。在一些实施方式中，可以在该方法中使用如本文所述的对照。在一些实施方式中，在步骤(b)中在多个时间点测量完全或部分饱和海绵的总荧光或荧光变化速率随时间的变化以达延长的时间段，从而检测所述样品中的活细菌细胞。在一些实施方式中，该方法还包括将步骤(b)中测量的总荧光或荧光变化率随时间的变化与样品中活细菌细胞的数量相关联。在一些实施方式中，确定在多个时间点上测量的完全或部分饱和海绵的荧光变化率随时间的变化，并与在相同时间点上测量的对照的荧光变化率随时间的变化进行比较，以确定样品中活细菌细胞的数量。在一些实施方式中，该方法不需要离体铺板或培养。在一些实施方式中，该方法不需要抽吸。在一些实施方式中，该方法在体内进行(例如在体内可摄入装置中)。在一些实施方式中，该方法包括将机载测定的结果传递给离体接收器。
在一个方面，本文提供一种试剂盒，其包含如本文所述的可吸收海绵和说明书，例如用于检测或定量样品中的活细菌细胞。在另一方面，本文提供一种包含如本文所述的可吸收海绵的装置，例如用于检测或定量样品中的活细菌细胞。
在某些实施方式中，本公开提供一种评估或监测治疗患有或处于胃肠道中细菌细胞过度生长风险下的受试者的需要的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者的胃肠道获得样品；(b)用样品使本文所述的可吸收海绵，或如本文所述制备的可吸收海绵完全或部分饱和；(c)测量在步骤(b)中制备的完全或部分饱和海绵的总荧光或荧光变化率随时间的变化；(d)将步骤(c)中测量的总荧光或荧光变化率随时间的变化与样品中活细菌细胞的数量相关联，其中如在步骤(e)中测定的活细菌细胞量大于约105CFU/mL表明需要治疗，例如用如本文所述的抗生素剂。在一些实施方式中，可以在该方法中使用如本文所述的对照。在一些实施方式中，在步骤(c)中在多个时间点上测量完全或部分饱和海绵的总荧光或荧光变化速率随时间的变化以达延长的时间段。在一些实施方式中，确定在多个时间点上测量的完全或部分饱和海绵的荧光变化率随时间的变化，并与在相同时间点上测量的对照的荧光变化率随时间的变化进行比较，以确定样品中活细菌细胞的数量。在一些实施方式中，该方法不需要离体铺板或培养。在一些实施方式中，该方法不需要抽吸。在一些实施方式中，该方法在体内进行(例如在体内可摄入装置中)。在一些实施方式中，该方法包括将机载测定的结果传递给离体接收器。在一些实施方式中，该方法可进一步用于在治疗后监测受试者(例如用抗生素)。在一些实施方式中，该方法可用于评估治疗的功效。例如，有效治疗可以通过来自受试者治疗后胃肠道的样品中活细菌细胞数量的减少来指示。可以通过来自受试者后处理的胃肠道的样品中活细菌细胞数量的减少速率来评估治疗的功效。在一些实施方式中，该方法可用于检测受试者中抗生素抗性细菌菌株的感染。例如，其中来自受试者的胃肠道的样品中的活细菌细胞的数量在抗生素治疗后基本上没有降低可以指示这种感染。
在某些实施方式中，本发明提供了可摄入装置，其包括壳体；在壳体的壁上的第一开口；壳体的第一端的第二开口；连接第一开口和第二开口的腔室，其中腔室的至少一部分在可摄入装置内形成采样腔室。在一些实施方式中，采样室配置成保持本文所述的可吸收海绵。在一些实施方式中，采样室配置成保持从身体的胃肠(GI)道获得的样品。在一些实施方式中，可摄入装置被单独校准(例如通过与如本文所述的阳性或阴性对照比较)，其中保持在装置的采样室中的可吸收海绵的荧光性质在引入样品之前确定。如本文所述的可摄入装置可用于检测或定量体内存活的细菌细胞。在一些实施方式中，本文提供一种使用如本文所述的可摄入装置在体内检测或定量胃肠道样品中的活细菌细胞的方法。在一些实施方式中，本文提供一种评估或监测使用如本文所述的可摄入装置治疗患有或处于体内胃肠道中细菌细胞过度生长风险下的受试者的需要的方法。在一些实施方式中，本文提供一种使用如本文所述的可摄入装置改变患有或处于胃肠道中细菌细胞过度生长风险下的受试者的治疗方案的方法。在一个方面，受试者是患有或有风险于十二指肠中细菌细胞过度生长的受试者。在一个方面，受试者是患有或有风险于空肠中细菌细胞过度生长的受试者。在一个方面，受试者是患有或有风险于回肠中细菌细胞过度生长的受试者。在一个方面，受试者是患有或有风险于升结肠中细菌细胞过度生长的受试者。在一个方面，受试者是患有或有风险于横结肠中细菌细胞过度生长的受试者。在一个方面，受试者是患有或有风险于降结肠中细菌细胞过度生长的受试者。在一些实施方式中，该方法可进一步用于在治疗后监测受试者(例如用抗生素)。在一些实施方式中，该方法可用于评估治疗的功效。例如，有效治疗可以通过来自受试者治疗后胃肠道的样品中活细菌细胞数量的减少来指示。可以通过来自受试者后处理的胃肠道的样品中活细菌细胞数量的减少速率来评估治疗的功效。在一些实施方式中，该方法可用于检测受试者中抗生素抗性细菌菌株的感染。例如，其中来自受试者的胃肠道的样品中的活细菌细胞的数量在抗生素治疗后基本上没有降低可以指示这种感染。在一些实施方式中，该方法是自主执行的，并且在已摄入该装置之后不需要来自身体外部的指令、触发器或其它输入。
如本文所述的“真核生物”涉及除真菌之外的任何类型的真核生物，例如动物，特别是含有血液的动物，并且包括无脊椎动物，例如甲壳类动物和脊椎动物。脊椎动物包括冷血(鱼类，爬行动物，两栖动物)和温血动物(鸟类和哺乳动物)。哺乳动物特别包括灵长类动物，更特别是人。
在治疗后或与如本文所述的组合物或装置接触时，当该样品中保持完整的细菌细胞百分比显著高于(例如2、5、10、20、50、100、250、500或1000倍或更多)该样品中保持完整的真核细胞的百分比时，在样品中获得如本文所用的“选择性裂解”。
在一些实施方式中，适用于本文的染料是能够被活细胞内化、结合活细胞的靶组分或与活细胞的靶组分反应的染料，并且具有当染料与活细胞的靶组分结合或反应时可测量地改变的荧光特性。在一些实施方式中，本文中的染料通过穿过细胞膜的可传递扩散以外的过程穿透活细胞而被主动内化。这种内化包括但不限于通过细胞表面上的细胞受体或通过细胞膜中的通道进行内化。在一些实施方式中，染料所结合或反应的活细胞的靶组分选自：核酸，肌动蛋白，微管蛋白，酶，核苷酸结合蛋白，离子转运蛋白，线粒体，细胞质成分和膜成分。在一些实施方式中，适用于本文的染料是荧光染料，其能够被活细胞内化和代谢，并且其中所述染料在被活细胞代谢时发荧光。在一些实施方式中，染料是化学发光染料，其能够被活细胞内化和代谢，并且其中所述染料在被活细胞代谢时变为化学发光。
在一些实施方式中，组合物包含当与核酸结合时发荧光的染料。这种染料的实例包括但不限于吖啶橙(美国专利号4,190,328)；钙黄绿素-AM(美国专利号5,314,805)；DAPI；Hoechst 33342；Hoechst 33258；PicoGreenTM；
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16；
Figure BDA0002449116230005462
GreenI；
Figure BDA0002449116230005463
Redmond RedTM；
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染料；Oregon GreenTM；溴化乙锭；和碘化丙锭。
在一些实施方式中，组合物包含亲脂性染料，其在被细胞代谢时发荧光。在一些实施方式中，染料在被细胞或细胞组分还原时发荧光。还原时发荧光的染料的实例包括但不限于刃天青；C12-刃天青；7-羟基-9H-(1,3-二氯-9,9-二甲基吖啶-2-醇)N-氧化物；6-氯-9-硝基-5-氧代-5H-苯并[a]吩噁嗪；和四唑盐。在一些实施方式中，染料在被细胞或细胞组分氧化时发荧光。这种染料的实例包括但不限于二氢绿心素AM；二氢罗丹明123；二氢乙锭；2,3,4,5,6-五氟四甲基二氢罗丹明；和3'-(对氨基苯基)荧光素。
在一些实施方式中，组合物包含当被细胞或细胞组分氧化时变为化学发光的染料，例如鲁米诺。
在一些实施方式中，组合物包含当被细胞或细胞组分去乙酰化和/或氧化时发荧光的染料。这种染料的实例包括但不限于二氢罗丹明；二氢荧光素；2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯；5-(和6-)羧基-2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯；和氯甲基-2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸乙酰酯。
在一些实施方式中，组合物包含当与肽酶反应时发荧光的染料。这些染料的实例包括但不限于(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)2-R110弹性蛋白酶2；(CBZ-Ala-Ala-Asp)2-R110颗粒酶B；和7-氨基-4-甲基香豆素，N-CBZ-L-天冬氨酰-L-谷氨酰基-L-缬氨酰基-L-天冬氨酸酰胺。
在一些实施方式中，组合物包含选自刃天青，FDA，钙黄绿素AM和
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9的染料。在一些实施方式中，染料是FDA或
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9。
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9单独使用时，可以标记细菌细胞的核酸。
Figure BDA0002449116230005474
9的激发/发射波长为480/500nm，背景保持无荧光。参见例如，J.Appl.Bacteriol.72,410(1992)；Lett.Appl.Microbiol.13,58(1991)；Curr.Microbiol.4,321(1980)；J.Microbiol.Methods 13,87(1991)；和Microbiol.Rev.51,365(1987)；以及J.Med.Microbiol.39,147(1993)。
FDA是一种非极性非荧光化合物，可以穿过哺乳动物和细菌细胞的膜。乙酰酯酶(仅存在于活细胞内)将FDA水解成荧光化合物荧光素。荧光素是一种荧光极性化合物，保留在这些细胞内。当用494nm的激发波长和518nm的发射波长测定时，活细胞可以在光谱仪中可视化。参见例如，Brunius,G.(1980).Technical aspects of the use of 3’,6’–Diacetyl fluorescein for vital fluorescent staining of bacteria.CurrentMicrobiol.4:321-323；Jones,K.H.和Senft,J.A.(1985).An improved method todetermine cellviability by simultaneous staining with fluorescein diacetate-propidium iodide.J.Histochem.Cytochem.33:77-79；Ross,R.D.,Joneckis,C.C.,Ordonez,J.V.,Sisk,A.M.,Wu,R.K.,Hamburger,A.W.和Nora,R.E.(1989).Estimationofcell survival byflow cytometric quantification of fluorescein diacetate/propidium iodide viable cell number.Cancer Research.49:3776-3782。
钙黄绿素-AM是钙黄绿素的乙酰甲基酯，具有高度亲脂性和细胞渗透性。钙黄绿素-AM本身不是荧光的，但是由活细胞中的酯酶产生的钙黄绿素发出绿色荧光，激发波长为490nm且发射波长为515nm。因此，钙黄绿素-AM只能染色活细胞。参见例如，Kimura,K.等人,Neurosci.Lett.,208,53(1998)；Shimokawa,I.等人,J.Geronto.,51a,b49(1998)；Yoshida,S.等人,Clin.Nephrol.,49,273(1998)；和Tominaga,H.等人,Anal.Commun.,36,47(1999)。
刃天青(也称为阿尔玛蓝)是一种蓝色化合物，可以还原为粉红色的荧光素试剂。该染料主要用于哺乳动物细胞的活力测定。C12-刃天青具有比刃天青更好的细胞渗透性。当亲脂性C12-刃天青穿过细胞膜时，其随后被活细胞还原以制备红色荧光试卤灵。C12-刃天青的吸附/发射为563/587nm。参见例如，Appl Environ Microbiol 56,3785(1990)；J DairyRes 57,239(1990)；J Neurosci Methods 70,195(1996)；J Immunol Methods 210,25(1997)；J Immunol Methods213,157(1998)；Antimicrob Agents Chemother 41,1004(1997)。
在一些实施方式中，组合物任选地还包含用于选择性裂解真核细胞的试剂。在一些实施方式中，组合物包含如本文所述的染料和用于选择性裂解真核细胞的试剂。在一些实施方式中，用于选择性裂解真核细胞的试剂是去污剂，例如非离子或离子去污剂。用于选择性裂解真核细胞的试剂的实例包括但不限于烷基糖苷、Brij 35(C12E23聚氧乙二醇十二烷基醚)、Brij 58(C16E20聚氧乙二醇十二烷基醚)、Genapol、葡聚糖诸如MEGA-8、-9、-10、辛基葡糖苷、Pluronic F127、Triton X-100(C14H22O(C2H4O)n)、Triton X-114(C24H42O6)、吐温20(聚山梨醇酯20)和吐温80(聚山梨醇酯80)、Nonidet P40、脱氧胆酸盐、还原Triton X-100和/或Igepal CA 630。在一些实施方式中，组合物包含如本文所述的染料和脱氧胆酸盐(例如脱氧胆酸钠)作为用于选择性裂解真核细胞的试剂。在一些实施方式中，组合物包含浓度选自0.0001wt％至1wt％的脱氧胆酸盐。在一些实施方式中，组合物包含浓度为0.005wt％的脱氧胆酸盐。在一些实施方式中，组合物可包含一种以上用于选择性裂解真核细胞的试剂。
在一些实施方式中，组合物可包含两种不同的用于选择性裂解真核细胞的试剂。在一些情况下，当使用多于一种选择性裂解试剂时，可以实现样品中真核细胞的更有效和/或完全选择性裂解。例如，组合物可包含脱氧胆酸盐(例如脱氧胆酸钠)和Triton X-100作为两种不同的用于选择性裂解真核细胞的试剂。在一些实施方式中，组合物包含浓度选自0.0001wt％至1wt％(例如0.005wt％)的脱氧胆酸盐(例如脱氧胆酸钠)和浓度选自0.1wt％至0.05wt％的Triton X-100。
在一些实施方式中，在样品(例如生物样品)用包含染料和如本文所述的一种或多种用于选择性裂解真核细胞的试剂的组合物处理或与其接触后，样品中的真核细胞(例如动物细胞)被选择性裂解，由此相同样品中的大量百分比(例如大于20％、40％、60％、80％、90％或甚至大于95％)的细菌细胞保持完整或存活。
在一些实施方式中，组合物不包含用于选择性裂解真核细胞的试剂，并且这种组合物可用于检测或定量不含任何真核细胞的样品(例如环境样品，诸如水样品)中的活细菌细胞。
在一些实施方式中，组合物还包含电解质，诸如二价电解质(例如MgCl2)。在一些实施方式中，组合物包含浓度选自0.1mM至100mM(例如浓度选自0.5mM至50mM)的MgCl2。
在一些实施方式中，组合物还包含水并且是水溶液的形式。在一些实施方式中，组合物具有选自5-8的pH(例如选自6-7.8的pH，诸如pH为6.0)。在一些实施方式中，组合物是固体或半固体。
在一些实施方式中，组合物还包含抗真菌剂。适用于本发明的抗真菌剂包括但不限于杀真菌剂和抑真菌剂，包括特比萘芬，伊曲康唑，硝酸咪唑，噻唑，甲苯磺酸盐，克霉唑和灰黄霉素。在一些实施方式中，抗真菌剂是多烯抗真菌剂，例如两性霉素-B、制霉菌素和匹马菌素。
在一些实施方式中，该组合物不含任何抗真菌剂。在一些实施方式中，组合物含有广谱抗生素但不含任何抗真菌剂。这类不含抗真菌剂但含有广谱抗生素的组合物可用于检测或定量样品中的真菌(例如酵母)。
在一些实施方式中，组合物不含任何抗真菌剂，任何抗生素或任何抗哺乳动物剂。这种不选择性裂解哺乳动物细胞的组合物可用于检测或定量样品中的哺乳动物细胞(例如来自胃肠道的细胞)，因为与细菌或真菌细胞相比，许多染料对哺乳动物具有更高的亲和力。在一些实施方式中，组合物含有广谱抗生素和一种或多种抗真菌剂。含有抗真菌剂和广谱抗生素的此类组合物可用于检测或定量样品中的哺乳动物细胞(例如来自胃肠道的细胞)。哺乳动物细胞的检测或定量可用于确定受试者的细胞更新。高细胞更新有时与GI损伤(例如病变)、肿瘤的存在或辐射诱导的结肠炎或放射性肠病相关。
在一些实施方式中，组合物还包含如本文所述的抗生素剂。这种组合物可用于检测或定量样品中的抗生素抗性细菌菌株。
在某些实施方式中，组合物包含Triton X-100、脱氧胆酸盐、刃天青和MgCl2。在一些实施方式中，组合物包含Triton X-100、脱氧胆酸盐、刃天青、两性霉素-B和MgCl2。在一些实施方式中，组合物包含0.1wt％或0.05wt％的Triton X-100；0.005wt％脱氧胆酸盐；10mM刃天青；2.5mg/L两性霉素-B和50mM MgCl2。在一些实施方式中，组合物的pH为6.0。
在某些实施方式中，组合物适用于试剂盒或装置，例如用于检测或定量样品中的活细菌细胞。在一些实施方式中，这种装置是用于检测或定量在体内(例如在胃肠道中)活细菌细胞的可摄入装置。
图62示出了使用如本文所公开的可摄入装置收集、传送和/或分析关于受试者数据的系统的非限制性示例。例如，可摄入装置可以配置成与外部基站通信。作为示例，可摄入装置可以具有与外部基站通信的通信单元，所述外部基站本身具有通信单元。图62示出了这种可摄入装置的示例性实施方式。如图62所示，受试者摄入如本文所公开的可摄入装置。关于受试者的某些数据(例如基于收集的样本)和/或受试者胃肠道中的可摄入装置的位置被收集或以其它方式可用并提供给移动装置，然后所述移动装置通过互联网和服务器/数据贮存器将数据转发到医生的办公室计算机。由可摄入装置收集的信息被传送到接收器，例如受试者佩戴的手表或其它物体。然后将信息从接收器传送到移动装置，然后移动装置经由互联网和服务器/数据贮存器将数据转发到医生的办公室计算机。然后，医生能够分析关于受试者的一些或所有数据以提供推荐，例如递送治疗剂。而图62示出了收集和传送关于受试者数据的特定方法，但本公开不限于此。作为示例，可以从数据通信信道中排除接收器，移动装置，互联网和/或服务器/数据贮存器中的一个或多个。例如，移动装置可以用作装置数据的接收器，例如通过使用加密狗。在这样的实施方式中，受试者佩戴的物品不需要是通信链的一部分。作为另一个示例，数据通信信道中的一个或多个项目可以用替代项目替换。例如，不是提供给医生的办公室计算机，而是可以将数据提供给服务提供商网络，例如医院网络或HMO网络等。在一些实施方式中，可以在一个位置(例如服务器/数据贮存器)收集和/或存储受试者数据，而可以在不同位置(例如不同的服务器/数据贮存器)收集和/或存储装置数据。
释放位置
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的大肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于大肠的近端部分中。在一些实施方式中，该位置位于大肠的远端部分中。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的升结肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于升结肠的近端部分中。在一些实施方式中，该位置位于升结肠的远端部分中。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的盲肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于盲肠的近端部分中。在一些实施方式中，该位置位于盲肠的远端部分中。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的乙状结肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于乙状结肠的近端部分中。在一些实施方式中，该位置位于乙状结肠的远端部分中。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的横结肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于横结肠的近端部分。在一些实施方式中，该位置位于横结肠的远端部分。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的降结肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于降结肠的近端部分中。在一些实施方式中，该位置位于降结肠的远端部分中。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的小肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于小肠的近端部分中。在一些实施方式中，该位置位于小肠的远端部分中。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的十二指肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于十二指肠的近端部分中。在一些实施方式中，该位置位于十二指肠的远端部分中。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的空肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于空肠的近端部分。在一些实施方式中，该位置位于空肠的远端部分。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的十二指肠中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的近端十二指肠中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的空肠中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的空肠的近端部分中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的空肠的远端部分中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的回肠中的位置递送。在一些实施方式中，该位置位于回肠的近端部分。在一些实施方式中，该位置位于回肠的远端部分。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的回肠中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的回肠的近端部分中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的回肠的远端部分中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，免疫调节剂在受试者的盲肠中的位置递送，并且不在胃肠道中的其它位置递送。
在一些实施方式中，递送免疫调节剂的位置接近免疫调节剂的预期释放部位。在一些实施方式中，免疫调节剂距一个或多个疾病部位150cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距一个或多个疾病部位125cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距一个或多个疾病部位100cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距预期释放部位50cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距预期释放部位40cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距预期释放部位30cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距预期释放部位20cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距预期释放部位10cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距预期释放部位5cm或更少递送。在一些实施方式中，免疫调节剂距预期释放部位2cm或更少递送。在一些实施方式中，该方法还包括使用可摄入装置递送免疫调节剂并使用本文公开的定位方法(例如下文实施例14中所论述的)以确定可摄入装置在胃肠道内的位置。在一些实施方式中，该方法还包括使用可摄入装置递送免疫调节剂并确定自摄入可摄入装置以来的时间段以确定可摄入装置在胃肠道内的位置。在一些实施方式中，所述方法还包括胃肠道的成像。在一些实施方式中，胃肠道的成像包括视频成像。在一些实施方式中，胃肠道的成像包括热成像。在一些实施方式中，胃肠道的成像包括超声成像。在一些实施方式中，胃肠道的成像包括多普勒成像。
在一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过20％的免疫调节剂。在一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过10％的免疫调节剂。在一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过5％的免疫调节剂。在一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过4％的免疫调节剂。在一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过3％的免疫调节剂。在一些实施方式中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过2％的免疫调节剂。
在一些实施方式中，该方法包括在接近疾病部位的位置处释放至少80％的免疫调节剂。在一些实施方式中，该方法包括在接近疾病部位的位置处释放至少90％的免疫调节剂。在一些实施方式中，该方法包括在接近疾病部位的位置处释放至少95％的免疫调节剂。在一些实施方式中，该方法包括在接近疾病部位的位置处释放至少96％的免疫调节剂。在一些实施方式中，该方法包括在接近疾病部位的位置处释放至少97％的免疫调节剂。在一些实施方式中，该方法包括在接近疾病部位的位置处释放至少98％的免疫调节剂。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位150cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位125cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位100cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位50cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位40cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位30cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位20cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位10cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位5cm或更少递送。在一些实施方式中，至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％的免疫调节剂距一个或多个疾病部位2cm或更少递送。在一些实施方式中，该方法还包括使用可摄入装置递送免疫调节剂并使用本文公开的定位方法(例如下文实施例14中所论述的)以确定可摄入装置在胃肠道内的位置(例如相对于疾病部位)。在一些实施方式中，该方法还包括使用可摄入装置递送免疫调节剂并确定自摄入可摄入装置以来的时间段以确定可摄入装置在胃肠道内的位置(例如相对于疾病部位)。
在一些实施方式中，递送的免疫调节剂的量是人等效剂量。
在一些实施方式中，该方法包括在接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，其中免疫调节剂和与免疫调节剂混合的任何载体、赋形剂或稳定剂(如果适用的话)在该部位释放免疫调节剂时相对于将组合物施用于受试者时基本不变。
在一些实施方式中，该方法包括在接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，其中免疫调节剂和与免疫调节剂混合的任何载体、赋形剂或稳定剂(如果适用的话)在该部位释放免疫调节剂时相对于将组合物施用于受试者时基本不受任何生理过程(诸如但不限于胃中的降解)改变。
在一些实施方式中，通过粘膜接触将免疫调节剂递送至部位。
在一些实施方式中，本文公开的治疗方法包括确定在受试者的预期释放部位或胃肠道中接近预期释放部位的位置处免疫调节剂的水平。在一些实例中，如本文所述的治疗方法可包括在施用装置后约10分钟至约10小时的时间段内确定受试者的预期释放部位或胃肠道中接近预期释放部位的位置处免疫调节剂的水平。
在一些实例中，本文公开的治疗方法包括在施用装置后的时间点确定，与在全身施用等量的免疫调节剂后受试者中基本相同时间点的相同释放部位或位置处免疫调节剂的水平相比，受试者的预期释放部位或胃肠道中接近预期释放部位处抗炎的水平升高。
如本文所用，“胃肠道组织”是指胃肠道(GI)中的组织，例如十二指肠、空肠、回肠、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠和直肠中的一种或多种中的组织，更特别地，在十二指肠、空肠、回肠、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠中的一个或多个的近端部分中，或在十二指肠、空肠、回肠、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠中的一个或多个的远端部分中。因此，在一些实施方式中，免疫调节剂可以穿透接近预期释放部位的十二指肠组织。在一些实施方式中，免疫调节剂可以穿透接近预期释放部位的空肠组织。在一些实施方式中，免疫调节剂可以穿透接近预期释放部位的回肠组织。在一些实施方式中，免疫调节剂可以穿透接近预期释放部位的盲肠组织。在一些实施方式中，免疫调节剂可以穿透接近预期释放部位的升结肠组织。在一些实施方式中，免疫调节剂可以穿透接近预期释放部位的横结肠组织。在一些实施方式中，免疫调节剂可以穿透接近预期释放部位的降结肠组织。在一些实施方式中，免疫调节剂可以穿透接近预期释放部位的乙状结肠组织。例如，免疫调节剂可以穿透腔/浅表粘膜、固有层、粘膜下层和肌层/浆膜中的一种或多种(例如两种、三种或四种)。
在一些实例中，使用本文所述的任何组合物或装置施用免疫调节剂导致在约10分钟至约10小时、约10分钟至约9小时、约10分钟至约8小时、约10分钟至约7小时、约10分钟至约6小时、约10分钟至约5小时、约10分钟至约4.5小时、约10分钟至约4小时、约10分钟至约3.5小时、约10分钟至约3小时、约10分钟至约2.5小时、约10分钟至约2小时、约10分钟至约1.5小时、约10分钟至约1小时、约10分钟至约55分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约45分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约35分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约25分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约15分钟、约15分钟至约10小时、约15分钟至约9小时、约15分钟至约8小时、约15分钟至约7小时、约15分钟至约6小时、约15分钟至约5小时、约15分钟至约4.5小时、约15分钟至约4小时、约15分钟至约3.5小时、约15分钟至约3小时、约15分钟至约2.5小时、约15分钟至约2小时、约15分钟至约1.5小时、约15分钟至约1小时、约15分钟至约55分钟、约15分钟至约50分钟、约15分钟至约45分钟、约15分钟至约40分钟、约15分钟至约35分钟、约15分钟至约30分钟、约15分钟至约25分钟、约15分钟至约20分钟、约20分钟至约10小时、约20分钟至约9小时、约20分钟至约8小时、约20分钟至约7小时、约20分钟至约6小时、约20分钟至约5小时、约20分钟至约4.5小时、约20分钟至约4小时、约20分钟至约3.5小时、约20分钟至约3小时、约20分钟至约2.5小时、约20分钟至约2小时、约20分钟至约1.5小时、约20分钟至约1小时、约20分钟至约55分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约45分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约35分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约25分钟、约25分钟至约10小时、约25分钟至约9小时、约25分钟至约8小时、约25分钟至约7小时、约25分钟至约6小时、约25分钟至约5小时、约25分钟至约4.5小时、约25分钟至约4小时、约25分钟至约3.5小时、约25分钟至约3小时、约25分钟至约2.5小时、约25分钟至约2小时、约25分钟至约1.5小时、约25分钟至约1小时、约25分钟至约55分钟、约25分钟至约50分钟、约25分钟至约45分钟、约25分钟至约40分钟、约25分钟至约35分钟、约25分钟至约30分钟、约30分钟至约10小时、约30分钟至约9小时、约30分钟至约8小时、约30分钟至约7小时、约30分钟至约6小时、约30分钟至约5小时、约30分钟至约4.5小时、约30分钟至约4小时、约30分钟至约3.5小时、约30分钟至约3小时、约30分钟至约2.5小时、约30分钟至约2小时、约30分钟至约1.5小时、约30分钟至约1小时、约30分钟至约55分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约45分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约35分钟、约35分钟至约10小时、约35分钟至约9小时、约35分钟至约8小时、约35分钟至约7小时、约35分钟至约6小时、约35分钟至约5小时、约35分钟至约4.5小时、约35分钟至约4小时、约35分钟至约3.5小时、约35分钟至约3小时、约35分钟至约2.5小时、约35分钟至约2小时、约35分钟至约1.5小时、约35分钟至约1小时、约35分钟至约55分钟、约35分钟至约50分钟、约35分钟至约45分钟、约35分钟至约40分钟、约40分钟至约10小时、约40分钟至约9小时、约40分钟至约8小时、约40分钟至约7小时、约40分钟至约6小时、约40分钟至约5小时、约40分钟至约4.5小时、约40分钟至约4小时、约40分钟至约3.5小时、约40分钟至约3小时、约40分钟至约2.5小时、约40分钟至约2小时、约40分钟至约1.5小时、约40分钟至约1小时、约40分钟至约55分钟、约40分钟至约50分钟、约40分钟至约45分钟、约45分钟至约10小时、约45分钟至约9小时、约45分钟至约8小时、约45分钟至约7小时、约45分钟至约6小时、约45分钟至约5小时、约45分钟至约4.5小时、约45分钟至约4小时、约45分钟至约3.5小时、约45分钟至约3小时、约45分钟至约2.5小时、约45分钟至约2小时、约45分钟至约1.5小时、约45分钟至约1小时、约45分钟至约55分钟、约45分钟至约50分钟、约50分钟至约10小时、约50分钟至约9小时、约50分钟至约8小时、约50分钟至约7小时、约50分钟至约6小时、约50分钟至约5小时、约50分钟至约4.5小时、约50分钟至约4小时、约50分钟至约3.5小时、约50分钟至约3小时、约50分钟至约2.5小时、约50分钟至约2小时、约50分钟至约1.5小时、约50分钟至约1小时、约50分钟至约55分钟、约55分钟至约10小时、约55分钟至约9小时、约55分钟至约8小时、约55分钟至约7小时、约55分钟至约6小时、约55分钟至约5小时、约55分钟至约4.5小时、约55分钟至约4小时、约55分钟至约3.5小时、约55分钟至约3小时、约55分钟至约2.5小时、约55分钟至约2小时、约55分钟至约1.5小时、约55分钟至约1小时、约1小时至约10小时、约1小时至约9小时、约1小时至约8小时、约1小时至约7小时、约1小时至约6小时、约1小时至约5小时、约1小时至约4.5小时、约1小时至约4小时、约1小时至约3.5小时、约1小时至约3小时、约1小时至约2.5小时、约1小时至约2小时、约1小时至约1.5小时、约1.5小时至约10小时、约1.5小时至约9小时、约1.5小时至约8小时、约1.5小时至约7小时、约1.5小时至约6小时、约1.5小时至约5小时、约1.5小时至约4.5小时、约1.5小时至约4小时、约1.5小时至约3.5小时、约1.5小时至约3小时、约1.5小时至约2.5小时、约1.5小时至约2小时、约2小时至约10小时、约2小时至约9小时、约2小时至约8小时、约2小时至约7小时、约2小时至约6小时、约2小时至约5小时、约2小时至约4.5小时、约2小时至约4小时、约2小时至约3.5小时、约2小时至约3小时、约2小时至约2.5小时、约2.5小时至约10小时、约2.5小时至约9小时、约2.5小时至约8小时、约2.5小时至约7小时、约2.5小时至约6小时、约2.5小时至约5小时、约2.5小时至约4.5小时、约2.5小时至约4小时、约2.5小时至约3.5小时、约2.5小时至约3小时、约3小时至约10小时、约3小时至约9小时、约3小时至约8小时、约3小时至约7小时、约3小时至约6小时、约3小时至约5小时、约3小时至约4.5小时、约3小时至约4小时、约3小时至约3.5小时、约3.5小时至约10小时、约3.5小时至约9小时、约3.5小时至约8小时、约3.5小时至约7小时、约3.5小时至约6小时、约3.5小时至约5小时、约3.5小时至约4.5小时、约3.5小时至约4小时、约4小时至约10小时、约4小时至约9小时、约4小时至约8小时、约4小时至约7小时、约4小时至约6小时、约4小时至约5小时、约4小时至约4.5小时、约4.5小时至约10小时、约4.5小时至约9小时、约4.5小时至约8小时、约4.5小时至约7小时、约4.5小时至约6小时、约4.5小时至约5小时、约5小时至约10小时、约5小时至约9小时、约5小时至约8小时、约5小时至约7小时、约5小时至约6小时、约6小时至约10小时、约6小时至约9小时、约6小时至约8小时、约6小时至约7小时、约7小时至约10小时、约7小时至约9小时、约7小时至约8小时、约8小时至约10小时、约8小时至约9小时、或约9小时至约10小时的时间段内穿透(例如穿透的可检测水平)胃肠道组织(例如，腔/浅表粘膜、固有层、粘膜下层、和肌层/浆膜中的一种或多种(例如，两种、三种、或四种))。可以通过施用标记的免疫调节剂并且对受试者进行成像(例如超声、计算机断层扫描或磁共振成像)来检测免疫调节剂对胃肠道组织的穿透。例如，标记可以是放射性同位素，重金属，荧光团或发光剂(例如用于本领域已知的成像的任何合适的放射性同位素，重金属，荧光团或发光剂)。
在一些实施方式中，施用免疫调节剂可以提供治疗(例如，降低受试者中本文所述的任何病症的一种或多种症状的数量、严重程度和/或持续时间)，在使用本文所述的任何组合物或装置首次施用免疫调节剂后在受试者中持续在约1小时至约30天、约1小时至约28天、约1小时至约26天、约1小时至约24天、约1小时至约22天、约1小时至约20天、约1小时至约18天、约1小时至约16天、约1小时至约14天、约1小时至约12天、约1小时至约10天、约1小时至约8天、约1小时至约6天、约1小时至约5天、约1小时至约4天、约1小时至约3天、约1小时至约2天、约1小时至约1天、约1小时至约12小时、约1小时至约6小时、约1小时至约3小时、约3小时至约30天、约3小时至约28天、约3小时至约26天、约3小时至约24天、约3小时至约22天、约3小时至约20天、约3小时至约18天、约3小时至约16天、约3小时至约14天、约3小时至约12天、约3小时至约10天、约3小时至约8天、约3小时至约6天、约3小时至约5天、约3小时至约4天、约3小时至约3天、约3小时至约2天、约3小时至约1天、约3小时至约12小时、约3小时至约6小时、约6小时至约30天、约6小时至约28天、约6小时至约26天、约6小时至约24天、约6小时至约22天、约6小时至约20天、约6小时至约18天、约6小时至约16天、约6小时至约14天、约6小时至约12天、约6小时至约10天、约6小时至约8天、约6小时至约6天、约6小时至约5天、约6小时至约4天、约6小时至约3天、约6小时至约2天、约6小时至约1天、约6小时至约12小时、约12小时至约30天、约12小时至约28天、约12小时至约26天、约12小时至约24天、约12小时至约22天、约12小时至约20天、约12小时至约18天、约12小时至约16天、约12小时至约14天、约12小时至约12天、约12小时至约10天、约12小时至约8天、约12小时至约6天、约12小时至约5天、约12小时至约4天、约12小时至约3天、约12小时至约2天、约12小时至约1天、约1天至约30天、约1天至约28天、约1天至约26天、约1天至约24天、约1天至约22天、约1天至约20天、约1天至约18天、约1天至约16天、约1天至约14天、约1天至约12天、约1天至约10天、约1天至约8天、约1天至约6天、约1天至约5天、约1天至约4天、约1天至约3天、约1天至约2天、约2天至约30天、约2天至约28天、约2天至约26天、约2天至约24天、约2天至约22天、约2天至约20天、约2天至约18天、约2天至约16天、约2天至约14天、约2天至约12天、约2天至约10天、约2天至约8天、约2天至约6天、约2天至约5天、约2天至约4天、约2天至约3天、约3天至约30天、约3天至约28天、约3天至约26天、约3天至约24天、约3天至约22天、约3天至约20天、约3天至约18天、约3天至约16天、约3天至约14天、约3天至约12天、约3天至约10天、约3天至约8天、约3天至约6天、约3天至约5天、约3天至约4天、约4天至约30天、约4天至约28天、约4天至约26天、约4天至约24天、约4天至约22天、约4天至约20天、约4天至约18天、约4天至约16天、约4天至约14天、约4天至约12天、约4天至约10天、约4天至约8天、约4天至约6天、约4天至约5天、约5天至约30天、约5天至约28天、约5天至约26天、约5天至约24天、约5天至约22天、约5天至约20天、约5天至约18天、约5天至约16天、约5天至约14天、约5天至约12天、约5天至约10天、约5天至约8天、约5天至约6天、约6天至约30天、约6天至约28天、约6天至约26天、约6天至约24天、约6天至约22天、约6天至约20天、约6天至约18天、约6天至约16天、约6天至约14天、约6天至约12天、约6天至约10天、约6天至约8天、约8天至约30天、约8天至约28天、约8天至约26天、约8天至约24天、约8天至约22天、约8天至约20天、约8天至约18天、约8天至约16天、约8天至约14天、约8天至约12天、约8天至约10天、约10天至约30天、约10天至约28天、约10天至约26天、约10天至约24天、约10天至约22天、约10天至约20天、约10天至约18天、约10天至约16天、约10天至约14天、约10天至约12天、约12天至约30天、约12天至约28天、约12天至约26天、约12天至约24天、约12天至约22天、约12天至约20天、约12天至约18天、约12天至约16天、约12天至约14天、约14天至约30天、约14天至约28天、约14天至约26天、约14天至约24天、约14天至约22天、约14天至约20天、约14天至约18天、约14天至约16天、约16天至约30天、约16天至约28天、约16天至约26天、约16天至约24天、约16天至约22天、约16天至约20天、约16天至约18天、约18天至约30天、约18天至约28天、约18天至约26天、约18天至约24天、约18天至约22天、约18天至约20天、约20天至约30天、约20天至约28天、约20天至约26天、约20天至约24天、约20天至约22天、约22天至约30天、约22天至约28天、约22天至约26天、约22天至约24天、约24天至约30天、约24天至约28天、约24天至约26天、约26天至约30天、约26天至约28天、或约28天至约30天之间的时间段。本文描述的疾病症状的非限制性实例描述如下。
例如，在使用本文所述的任何组合物或装置首次施用免疫调节剂后，治疗可以导致受试者中以下中的一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、或十种)降低(例如，约1％至约99％降低、约1％至约95％降低、约1％至约90％降低、约1％至约85％降低、约1％至约80％降低、约1％至约75％降低、约1％至约70％降低、约1％至约65％降低、约1％至约60％降低、约1％至约55％降低、约1％至约50％降低、约1％至约45％降低、约1％至约40％降低、约1％至约35％降低、约1％至约30％降低、约1％至约25％降低、约1％至约20％降低、约1％至约15％降低、约1％至约10％降低、约1％至约5％降低、约5％至约99％降低、约5％至约95％降低、约5％至约90％降低、约5％至约85％降低、约5％至约80％降低、约5％至约75％降低、约5％至约70％降低、约5％至约65％降低、约5％至约60％降低、约5％至约55％降低、约5％至约50％降低、约5％至约45％降低、约5％至约40％降低、约5％至约35％降低、约5％至约30％降低、约5％至约25％降低、约5％至约20％降低、约5％至约15％降低、约5％至约10％降低、约10％至约99％降低、约10％至约95％降低、约10％至约90％降低、约10％至约85％降低、约10％至约80％降低、约10％至约75％降低、约10％至约70％降低、约10％至约65％降低、约10％至约60％降低、约10％至约55％降低、约10％至约50％降低、约10％至约45％降低、约10％至约40％降低、约10％至约35％降低、约10％至约30％降低、约10％至约25％降低、约10％至约20％降低、约10％至约15％降低、约15％至约99％降低、约15％至约95％降低、约15％至约90％降低、约15％至约85％降低、约15％至约80％降低、约15％至约75％降低、约15％至约70％降低、约15％至约65％降低、约15％至约60％降低、约15％至约55％降低、约15％至约50％降低、约15％至约45％降低、约15％至约40％降低、约15％至约35％降低、约15％至约30％降低、约15％至约25％降低、约15％至约20％降低、约20％至约99％降低、约20％至约95％降低、约20％至约90％降低、约20％至约85％降低、约20％至约80％降低、约20％至约75％降低、约20％至约70％降低、约20％至约65％降低、约20％至约60％降低、约20％至约55％降低、约20％至约50％降低、约20％至约45％降低、约20％至约40％降低、约20％至约35％降低、约20％至约30％降低、约20％至约25％降低、约25％至约99％降低、约25％至约95％降低、约25％至约90％降低、约25％至约85％降低、约25％至约80％降低、约25％至约75％降低、约25％至约70％降低、约25％至约65％降低、约25％至约60％降低、约25％至约55％降低、约25％至约50％降低、约25％至约45％降低、约25％至约40％降低、约25％至约35％降低、约25％至约30％降低、约30％至约99％降低、约30％至约95％降低、约30％至约90％降低、约30％至约85％降低、约30％至约80％降低、约30％至约75％降低、约30％至约70％降低、约30％至约65％降低、约30％至约60％降低、约30％至约55％降低、约30％至约50％降低、约30％至约45％降低、约30％至约40％降低、约30％至约35％降低、约35％至约99％降低、约35％至约95％降低、约35％至约90％降低、约35％至约85％降低、约35％至约80％降低、约35％至约75％降低、约35％至约70％降低、约35％至约65％降低、约35％至约60％降低、约35％至约55％降低、约35％至约50％降低、约35％至约45％降低、约35％至约40％降低、约40％至约99％降低、约40％至约95％降低、约40％至约90％降低、约40％至约85％降低、约40％至约80％降低、约40％至约75％降低、约40％至约70％降低、约40％至约65％降低、约40％至约60％降低、约40％至约55％降低、约40％至约50％降低、约40％至约45％降低、约45％至约99％降低、约45％至约95％降低、约45％至约90％降低、约45％至约85％降低、约45％至约80％降低、约45％至约75％降低、约45％至约70％降低、约45％至约65％降低、约45％至约60％降低、约45％至约55％降低、约45％至约50％降低、约50％至约99％降低、约50％至约95％降低、约50％至约90％降低、约50％至约85％降低、约50％至约80％降低、约50％至约75％降低、约50％至约70％降低、约50％至约65％降低、约50％至约60％降低、约50％至约55％降低、约55％至约99％降低、约55％至约95％降低、约55％至约90％降低、约55％至约85％降低、约55％至约80％降低、约55％至约75％降低、约55％至约70％降低、约55％至约65％降低、约55％至约60％降低、约60％至约99％降低、约60％至约95％降低、约60％至约90％降低、约60％至约85％降低、约60％至约80％降低、约60％至约75％降低、约60％至约70％降低、约60％至约65％降低、约65％至约99％降低、约65％至约95％降低、约65％至约90％降低、约65％至约85％降低、约65％至约80％降低、约65％至约75％降低、约65％至约70％降低、约70％至约99％降低、约70％至约95％降低、约70％至约90％降低、约70％至约85％降低、约70％至约80％降低、约70％至约75％降低、约75％至约99％降低、约75％至约95％降低、约75％至约90％降低、约75％至约85％降低、约75％至约80％降低、约80％至约99％降低、约80％至约95％降低、约80％至约90％降低、约80％至约85％降低、约85％至约99％降低、约85％至约95％降低、约85％至约90％降低、约90％至约99％降低、约90％至约95％降低、或约95％至约99％降低)：胃肠道组织中干扰素K的水平、胃肠道组织中IL-1β的水平、胃肠道组织中IL-6的水平、胃肠道组织中IL-22水平、胃肠道组织中IL-17A的水平、胃肠道组织中TNFI的水平、胃肠道组织中的IL-2水平、派尔集合淋巴结中Th记忆细胞的数量以及肠系膜淋巴结中Th记忆细胞的数量(例如，与治疗前受试者中的水平相比或与患有相似疾病但接受安慰剂或不同治疗的受试者或受试者群体相比)(例如，持续在约1小时至约30天之间的时间段(例如，或此处的任何子范围))。本文描述了用于确定内窥镜检查评分的示例性方法，并且用于确定内窥镜检查评分的其它方法在本领域中是已知的。本文描述了用于确定干扰素-K、IL-1β、IL-6、IL-22、IL-17A、TNFΙ和IL-2的水平的示例性方法。用于确定这些细胞因子水平的其它方法是本领域中已知的。本文描述了用于确定派尔集合淋巴结和肠系膜淋巴结中的Th记忆细胞数量的示例性方法。用于确定派尔集合淋巴结和肠系膜淋巴结中的Th记忆细胞数量的额外方法是本领域中已知的。
在一些实例中，使用本文所述的任何所述组合物或装置首次施用免疫调节剂后，治疗可导致粪便稠度评分和受试者体重中的一者或两者增加(例如，约1％至约500％增加、约1％至约400％增加、约1％至约300％增加、约1％至约200％增加、约1％至约150％增加、约1％至约100％增加、约1％至约90％增加、约1％至约80％增加、约1％至约70％增加、约1％至约60％增加、约1％至约50％增加、约1％至约40％增加、约1％至约30％增加、约1％至约20％增加、约1％至约10％增加、10％至约500％增加、约10％至约400％增加、约10％至约300％增加、约10％至约200％增加、约10％至约150％增加、约10％至约100％增加、约10％至约90％增加、约10％至约80％增加、约10％至约70％增加、约10％至约60％增加、约10％至约50％增加、约10％至约40％增加、约10％至约30％增加、约10％至约20％增加、约20％至约500％增加、约20％至约400％增加、约20％至约300％增加、约20％至约200％增加、约20％至约150％增加、约20％至约100％增加、约20％至约90％增加、约20％至约80％增加、约20％至约70％增加、约20％至约60％增加、约20％至约50％增加、约20％至约40％增加、约20％至约30％增加、约30％至约500％增加、约30％至约400％增加、约30％至约300％增加、约30％至约200％增加、约30％至约150％增加、约30％至约100％增加、约30％至约90％增加、约30％至约80％增加、约30％至约70％增加、约30％至约60％增加、约30％至约50％增加、约30％至约40％增加、约40％至约500％增加、约40％至约400％增加、约40％至约300％增加、约40％至约200％增加、约40％至约150％增加、约40％至约100％增加、约40％至约90％增加、约40％至约80％增加、约40％至约70％增加、约40％至约60％增加、约40％至约50％增加、约50％至约500％增加、约50％至约400％增加、约50％至约300％增加、约50％至约200％增加、约50％至约150％增加、约50％至约100％增加、约50％至约90％增加、约50％至约80％增加、约50％至约70％增加、约50％至约60％增加、约60％至约500％增加、约60％至约400％增加、约60％至约300％增加、约60％至约200％增加、约60％至约150％增加、约60％至约100％增加、约60％至约90％增加、约60％至约80％增加、约60％至约70％增加、约70％至约500％增加、约70％至约400％增加、约70％至约300％增加、约70％至约200％增加、约70％至约150％增加、约70％至约100％增加、约70％至约90％增加、约70％至约80％增加、约80％至约500％增加、约80％至约400％增加、约80％至约300％增加、约80％至约200％增加、约80％至约150％增加、约80％至约100％增加、约80％至约90％增加、约90％至约500％增加、约90％至约400％增加、约90％至约300％增加、约90％至约200％增加、约90％至约150％增加、约90％至约100％增加、约100％至约500％增加、约100％至约400％增加、约100％至约300％增加、约100％至约200％增加、约100％至约150％增加、约150％至约500％增加、约150％至约400％增加、约150％至约300％增加、约150％至约200％增加、约200％至约500％增加、约200％至约400％增加、约200％至约300％增加、约300％至约500％增加、约300％至约400％增加、或约400％至约500％增加)(例如，与治疗前受试者中的水平相比或与患有相似疾病但接受安慰剂或不同治疗的受试者或受试者群体相比)(例如，持续在约1小时至约30天之间的时间段(例如，或者此处的任何子范围))。本文描述了用于确定粪便稠度评分的示例性方法。用于确定粪便稠度评分的额外方法是本领域中已知的。
在一些实施方式中，使用本文所述的任何装置或组合物施用免疫调节剂可以导致免疫调节剂的胃肠道组织浓度与免疫调节剂的血液、血清或血浆浓度的比率高于通过传统方式(例如全身或口服)施用免疫调节剂时的相同比率。免疫调节剂的胃肠道组织浓度与免疫调节剂的血液、血清或血浆浓度的比率的实例包括约2至约600、约2至约580、约2至约560、约2至约540、约2至约520、约2至约500、约2至约480、约2至约460、约4至约440、约2至约420、约2至约400、约2至约380、约2至约360、约2至约340、约2至约320、约2至约300、约2至约280、约2至约260、约2至约240、约2至约220、约2至约200、约2至约190、约2至约180、约2至约170、约2至约160、约2至约150、约2至约140、约2至约130、约2至约120、约2至约110、约2至约100、约2至约90、约2至约80、约2至约70、约2至约60、约2至约50、约2至约40、约2至约30、约2至约20、约2至约15、约2至约10、约2至约5、约5至约600、约5至约580、约5至约560、约5至约540、约5至约520、约5至约500、约5至约480、约5至约460、约5至约440、约5至约420、约5至约400、约5至约380、约5至约360、约5至约340、约5至约320、约5至约300、约5至约280、约5至约260、约5至约240、约5至约220、约5至约200、约5至约190、约5至约180、约5至约170、约5至约160、约5至约150、约5至约140、约5至约130、约5至约120、约5至约110、约5至约100、约5至约90、约5至约80、约5至约70、约5至约60、约5至约50、约5至约40、约5至约30、约5至约20、约5至约15、约5至约10、约10至约600、约10至约580、约10至约560、约10至约540、约10至约520、约10至约500、约10至约480、约10至约460、约10至约440、约10至约420、约10至约400、约10至约380、约10至约360、约10至约340、约10至约320、约10至约300、约10至约280、约10至约260、约10至约240、约10至约220、约10至约200、约10至约190、约10至约180、约10至约170、约10至约160、约10至约150、约10至约140、约10至约130、约10至约120、约10至约110、约10至约100、约10至约90、约10至约80、约10至约70、约10至约60、约10至约50、约10至约40、约10至约30、约10至约20、约10至约15、约15至约600、约15至约580、约15至约560、约15至约540、约15至约520、约15至约500、约15至约480、约15至约460、约15至约440、约15至约420、约15至约400、约15至约380、约15至约360、约15至约340、约15至约320、约15至约300、约15至约280、约15至约260、约15至约240、约15至约220、约15至约200、约15至约190、约15至约180、约15至约170、约15至约160、约15至约150、约15至约140、约15至约130、约15至约120、约15至约110、约15至约100、约15至约90、约15至约80、约15至约70、约15至约60、约15至约50、约15至约40、约15至约30、约15至约20、约20至约600、约20至约580、约20至约560、约20至约540、约20至约520、约20至约500、约20至约480、约20至约460、约20至约440、约20至约420、约20至约400、约20至约380、约20至约360、约20至约340、约20至约320、约20至约300、约20至约280、约20至约260、约20至约240、约20至约220、约20至约200、约20至约190、约20至约180、约20至约170、约20至约160、约20至约150、约20至约140、约20至约130、约20至约120、约20至约110、约20至约100、约20至约90、约20至约80、约20至约70、约20至约60、约20至约50、约20至约40、约20至约30、约30至约600、约30至约580、约30至约560、约30至约540、约30至约520、约30至约500、约30至约480、约30至约460、约30至约440、约30至约420、约30至约400、约30至约380、约30至约360、约30至约340、约30至约320、约30至约300、约30至约280、约30至约260、约30至约240、约30至约220、约30至约200、约30至约190、约30至约180、约30至约170、约30至约160、约30至约150、约30至约140、约30至约130、约30至约120、约30至约110、约30至约100、约30至约90、约30至约80、约30至约70、约30至约60、约30至约50、约30至约40、约40至约600、约40至约580、约40至约560、约40至约540、约40至约520、约40至约500、约40至约480、约40至约460、约40至约440、约40至约420、约40至约400、约40至约380、约40至约360、约40至约340、约40至约320、约40至约300、约40至约280、约40至约260、约40至约240、约40至约220、约40至约200、约40至约190、约40至约180、约40至约170、约40至约160、约40至约150、约40至约140、约40至约130、约40至约120、约40至约110、约40至约100、约40至约90、约40至约80、约40至约70、约40至约60、约40至约50、约50至约600、约50至约580、约50至约560、约50至约540、约50至约520、约50至约500、约50至约480、约50至约460、约50至约440、约50至约420、约50至约400、约50至约380、约50至约360、约50至约340、约50至约320、约50至约300、约50至约280、约50至约260、约50至约240、约50至约220、约50至约200、约50至约190、约50至约180、约50至约170、约50至约160、约50至约150、约50至约140、约50至约130、约50至约120、约50至约110、约50至约100、约50至约90、约50至约80、约50至约70、约50至约60、约60至约600、约60至约580、约60至约560、约60至约540、约60至约520、约60至约500、约60至约480、约60至约460、约60至约440、约60至约420、约60至约400、约60至约380、约60至约360、约60至约340、约60至约320、约60至约300、约60至约280、约60至约260、约60至约240、约60至约220、约60至约200、约60至约190、约60至约180、约60至约170、约60至约160、约60至约150、约60至约140、约60至约130、约60至约120、约60至约110、约60至约100、约60至约90、约60至约80、约60至约70、约70至约600、约70至约580、约70至约560、约70至约540、约70至约520、约70至约500、约70至约480、约70至约460、约70至约440、约70至约420、约70至约400、约70至约380、约70至约360、约70至约340、约70至约320、约70至约300、约70至约280、约70至约260、约70至约240、约70至约220、约70至约200、约70至约190、约70至约180、约70至约170、约70至约160、约70至约150、约70至约140、约70至约130、约70至约120、约70至约110、约70至约100、约70至约90、约70至约80、约80至约600、约80至约580、约80至约560、约80至约540、约80至约520、约80至约500、约80至约480、约80至约460、约80至约440、约80至约420、约80至约400、约80至约380、约80至约360、约80至约340、约80至约320、约80至约300、约80至约280、约80至约260、约80至约240、约80至约220、约80至约200、约80至约190、约80至约180、约80至约170、约80至约160、约80至约150、约80至约140、约80至约130、约80至约120、约80至约110、约80至约100、约80至约90、约90至约600、约90至约580、约90至约560、约90至约540、约90至约520、约90至约500、约90至约480、约90至约460、约90至约440、约90至约420、约90至约400、约90至约380、约90至约360、约90至约340、约90至约320、约90至约300、约90至约280、约90至约260、约90至约240、约90至约220、约90至约200、约90至约190、约90至约180、约90至约170、约90至约160、约90至约150、约90至约140、约90至约130、约90至约120、约90至约110、约90至约100、约100至约600、约100至约580、约100至约560、约100至约540、约100至约520、约100至约500、约100至约480、约100至约460、约100至约440、约100至约420、约100至约400、约100至约380、约100至约360、约100至约340、约100至约320、约100至约300、约100至约280、约100至约260、约100至约240、约100至约220、约100至约200、约100至约190、约100至约180、约100至约170、约100至约160、约100至约150、约100至约140、约100至约130、约100至约120、约100至约110、约110至约600、约110至约580、约110至约560、约110至约540、约110至约520、约110至约500、约110至约480、约110至约460、约110至约440、约110至约420、约110至约400、约110至约380、约110至约360、约110至约340、约110至约320、约110至约300、约110至约280、约110至约260、约110至约240、约110至约220、约110至约200、约110至约190、约110至约180、约110至约170、约110至约160、约110至约150、约110至约140、约110至约130、约110至约120、约120至约600、约120至约580、约120至约560、约120至约540、约120至约520、约120至约500、约120至约480、约120至约460、约120至约440、约120至约420、约120至约400、约120至约380、约120至约360、约120至约340、约120至约320、约120至约300、约120至约280、约120至约260、约120至约240、约120至约220、约120至约200、约120至约190、约120至约180、约120至约170、约120至约160、约120至约150、约120至约140、约120至约130、约130至约600、约130至约580、约130至约560、约130至约540、约130至约520、约130至约500、约130至约480、约130至约460、约130至约440、约130至约420、约130至约400、约130至约380、约130至约360、约130至约340、约130至约320、约130至约300、约130至约280、约130至约260、约130至约240、约130至约220、约130至约200、约130至约190、约130至约180、约130至约170、约130至约160、约130至约150、约130至约140、约140至约600、约140至约580、约140至约560、约140至约540、约140至约520、约140至约500、约140至约480、约140至约460、约140至约440、约140至约420、约140至约400、约140至约380、约140至约360、约140至约340、约140至约320、约140至约300、约140至约280、约140至约260、约140至约240、约140至约220、约140至约200、约140至约190、约140至约180、约140至约170、约140至约160、约140至约150、约150至约600、约150至约580、约150至约560、约150至约540、约150至约520、约150至约500、约150至约480、约150至约460、约150至约440、约150至约420、约150至约400、约150至约380、约150至约360、约150至约340、约150至约320、约150至约300、约150至约280、约150至约260、约150至约240、约150至约220、约150至约200、约150至约190、约150至约180、约150至约170、约150至约160、约160至约600、约160至约580、约160至约560、约160至约540、约160至约520、约160至约500、约160至约480、约160至约460、约160至约440、约160至约420、约160至约400、约160至约380、约160至约360、约160至约340、约160至约320、约160至约300、约160至约280、约160至约260、约160至约240、约160至约220、约160至约200、约160至约190、约160至约180、约160至约170、约170至约600、约170至约580、约170至约560、约170至约540、约170至约520、约170至约500、约170至约480、约170至约460、约170至约440、约170至约420、约170至约400、约170至约380、约170至约360、约170至约340、约170至约320、约170至约300、约170至约280、约170至约260、约170至约240、约170至约220、约170至约200、约170至约190、约170至约180、约180至约600、约180至约580、约180至约560、约180至约540、约180至约520、约180至约500、约180至约480、约180至约460、约180至约440、约180至约420、约180至约400、约180至约380、约180至约360、约180至约340、约180至约320、约180至约300、约180至约280、约180至约260、约180至约240、约180至约220、约180至约200、约180至约190、约190至约600、约190至约580、约190至约560、约190至约540、约190至约520、约190至约500、约190至约480、约190至约460、约190至约440、约190至约420、约190至约400、约190至约380、约190至约360、约190至约340、约190至约320、约190至约300、约190至约280、约190至约260、约190至约240、约190至约220、约190至约200、约200至约600、约200至约580、约200至约560、约200至约540、约200至约520、约200至约500、约200至约480、约200至约460、约200至约440、约200至约420、约200至约400、约200至约380、约200至约360、约200至约340、约200至约320、约200至约300、约200至约280、约200至约260、约200至约240、约200至约220、约220至约600、约220至约580、约220至约560、约220至约540、约220至约520、约220至约500、约220至约480、约220至约460、约220至约440、约220至约420、约220至约400、约220至约380、约220至约360、约220至约340、约220至约320、约220至约300、约220至约280、约220至约260、约220至约240、约240至约600、约240至约580、约240至约560、约240至约540、约240至约520、约240至约500、约240至约480、约240至约460、约240至约440、约240至约420、约240至约400、约240至约380、约240至约360、约240至约340、约240至约320、约240至约300、约240至约280、约240至约260、约260至约600、约260至约580、约260至约560、约260至约540、约260至约520、约260至约500、约260至约480、约260至约460、约260至约440、约260至约420、约260至约400、约260至约380、约260至约360、约260至约340、约260至约320、约260至约300、约260至约280、约280至约600、约280至约580、约280至约560、约280至约540、约280至约520、约280至约500、约280至约480、约280至约460、约280至约440、约280至约420、约280至约400、约280至约380、约280至约360、约280至约340、约280至约320、约280至约300、约300至约600、约300至约580、约300至约560、约300至约540、约300至约520、约300至约500、约300至约480、约300至约460、约300至约440、约300至约420、约300至约400、约300至约380、约300至约360、约300至约340、约300至约320、约320至约600、约320至约580、约320至约560、约320至约540、约320至约520、约320至约500、约320至约480、约320至约460、约320至约440、约320至约420、约320至约400、约320至约380、约320至约360、约320至约340、约340至约600、约340至约580、约340至约560、约340至约540、约340至约520、约340至约500、约340至约480、约340至约460、约340至约440、约340至约420、约340至约400、约340至约380、约340至约360、约360至约600、约360至约580、约360至约560、约360至约540、约360至约520、约360至约500、约360至约480、约360至约460、约360至约440、约360至约420、约360至约400、约360至约380、约380至约600、约380至约580、约380至约560、约380至约540、约380至约520、约380至约500、约380至约480、约380至约460、约380至约440、约380至约420、约380至约400、约400至约600、约400至约580、约400至约560、约400至约540、约400至约520、约400至约500、约400至约480、约400至约460、约400至约440、约400至约420、约420至约600、约420至约580、约420至约560、约420至约540、约420至约520、约420至约500、约420至约480、约420至约460、约420至约440、约440至约600、约440至约580、约440至约560、约440至约540、约440至约520、约440至约500、约440至约480、约440至约460、约460至约600、约460至约580、约460至约560、约460至约540、约460至约520、约460至约500、约460至约480、约480至约600、约480至约580、约480至约560、约480至约540、约480至约520、约480至约500、约500至约600、约500至约580、约500至约560、约500至约540、约500至约520、约520至约600、约520至约580、约520至约560、约520至约540、约540至约600、约540至约580、约540至约560、约560至约600、约560至约580、或约580至约600。
免疫调节剂的胃肠道组织浓度与免疫调节剂的血液、血清或血浆浓度的比率的额外实例包括1.1至600、1.2至600、1.3至600、1.4至600、1.5至600、1.6至600、1.7至600、1.8至600、或1.9至600，诸如1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8或1.9。
在一些实例中，使用本文所述的任何装置或组合物施用免疫调节剂可导致免疫调节剂的胃肠道组织浓度与免疫调节剂的血液、血清、血浆浓度的比率为例如约2.8至约6.0、约2.8至约5.8、约2.8至约5.6、约2.8至约5.4、约2.8至约5.2、约2.8至约5.0、约2.8至约4.8、约2.8至约4.6、约2.8至约4.4、约2.8至约4.2、约2.8至约4.0、约2.8至约3.8、约2.8至约3.6、约2.8至约3.4、约2.8至约3.2、约2.8至约3.0、约3.0至约6.0、约3.0至约5.8、约3.0至约5.6、约3.0至约5.4、约3.0至约5.2、约3.0至约5.0、约3.0至约4.8、约3.0至约4.6、约3.0至约4.4、约3.0至约4.2、约3.0至约4.0、约3.0至约3.8、约3.0至约3.6、约3.0至约3.4、约3.0至约3.2、约3.2至约6.0、约3.2至约5.8、约3.2至约5.6、约3.2至约5.4、约3.2至约5.2、约3.2至约5.0、约3.2至约4.8、约3.2至约4.6、约3.2至约4.4、约3.2至约4.2、约3.2至约4.0、约3.2至约3.8、约3.2至约3.6、约3.2至约3.4、约3.4至约6.0、约3.4至约5.8、约3.4至约5.6、约3.4至约5.4、约3.4至约5.2、约3.4至约5.0、约3.4至约4.8、约3.4至约4.6、约3.4至约4.4、约3.4至约4.2、约3.4至约4.0、约3.4至约3.8、约3.4至约3.6、约3.6至约6.0、约3.6至约5.8、约3.6至约5.6、约3.6至约5.4、约3.6至约5.2、约3.6至约5.0、约3.6至约4.8、约3.6至约4.6、约3.6至约4.4、约3.6至约4.2、约3.6至约4.0、约3.6至约3.8、约3.8至约6.0、约3.8至约5.8、约3.8至约5.6、约3.8至约5.4、约3.8至约5.2、约3.8至约5.0、约3.8至约4.8、约3.8至约4.6、约3.8至约4.4、约3.8约4.2、约3.8至约4.0、约4.0至约6.0、约4.0至约5.8、约4.0至约5.6、约4.0至约5.4、约4.0至约5.2、约4.0至约5.0、约4.0至约4.8、约4.0至约4.6、约4.0至约4.4、约4.0至约4.2、约4.2至约6.0、约4.2至约5.8、约4.2至约5.6、约4.2至约5.4、约4.2至约5.2、约4.2至约5.0、约4.2至约4.8、约4.2至约4.6、约4.2至约4.4、约4.4至约6.0、约4.4至约5.8、约4.4至约5.6、约4.4至约5.4、约4.4至约5.2、约4.4至约5.0、约4.4至约4.8、约4.4至约4.6、约4.6至约6.0、约4.6至约5.8、约4.6至约5.6、约4.6至约5.4、约4.6至约5.2、约4.6至约5.0、约4.6至约4.8、约4.8至约6.0、约4.8至约5.8、约4.8至约5.6、约4.8至约5.4、约4.8至约5.2、约4.8至约5.0、约5.0至约6.0、约5.0至约5.8、约5.0至约5.6、约5.0至约5.4、约5.0至约5.2、约5.2至约6.0、约5.2至约5.8、约5.2至约5.6、约5.2至约5.4、约5.4至约6.0、约5.4至约5.8、约5.4至约5.6、约5.6至约6.0、约5.6至约5.8、或约5.8至约6.0。因此，在一些实施方式中，本文公开的治疗方法可包括确定在施用装置后基本相同时间点受试者的胃肠道组织中的免疫调节剂水平与血液、血清或血浆中的免疫调节剂水平的比率为约2.8至约6.0。本文描述了用于测量受试者的血浆或胃肠道组织中的免疫调节剂的浓度的示例性方法。用于测量受试者的血浆或胃肠道组织中的免疫调节剂的浓度的额外方法是本领域中已知的。
因此，在一些实施方式中，本文公开的治疗方法包括确定胃肠道组织(例如本文所述的任何示例性胃肠道组织中的一种或多种)中的免疫调节剂水平。在一些实施方式中，本文公开的治疗方法可包括确定腔/浅表粘膜、固有层、粘膜下层和肌层/浆膜中的一种或多种(例如两种，三种或四种)中的免疫调节剂水平。
在一些实施方式中，本文公开的治疗方法包括确定在施用所述装置后的时间点胃肠道组织(例如本文所述的任何示例性胃肠道组织中的一种或多种)中的免疫调节剂水平高于在全身施用等量的免疫调节剂后基本相同时间点胃肠道组织中的免疫调节剂水平。在一些实施方式中，本文公开的治疗方法可包括确定施用装置后的时间点腔/浅表粘膜、固有层、粘膜下层和肌层/浆膜中的一种或多种(例如两种、三种或四种)中的免疫调节剂水平高于在全身施用等量的免疫调节剂后基本相同时间点腔/浅表粘膜、固有层、粘膜下层和肌层/浆膜中的一种或多种(例如两种、三种或四种)中的免疫调节剂水平。
在一些实施方式中，本文公开的治疗方法包括确定受试者粪便中的免疫调节剂水平。在一些实施方式中，本文公开的治疗方法包括确定在施用装置后约10分钟至约10小时的时间段内胃肠道组织，例如腔/浅表粘膜、固有层、粘膜下层和肌层/浆膜中的一种或多种(例如两种、三种或四种)中的免疫调节剂水平。
在一些实施方式中，如本文所公开的治疗方法包括确定在施用装置后释放位置处的免疫调节剂水平。
在一些实施方式中，如本文所公开的治疗方法包括确定在施用装置后的时间点释放位置处的免疫调节剂水平高于在全身施用等量免疫调节剂后基本上相同时间点相同释放位置处的免疫调节剂水平。
在一些实施方式中，如本文所公开的治疗方法包括确定在施用装置后约10分钟至10小时的时间段内受试者的组织中的免疫调节剂水平。
本文所述任何方法的一些实例可以例如导致选择性抑制局部炎症反应(例如抑制局部淋巴系统，例如肠系膜淋巴结)，同时维持全身免疫应答(例如血液)。
本文使用的FA，“GI内容物”是指胃肠(GI)道的内容物，例如十二指肠，空肠，回肠，盲肠，升结肠，横结肠，降结肠，乙状结肠和直肠中的一种或多种的内容物，更特别是十二指肠，空肠，回肠，盲肠，升结肠，横结肠，降结肠和乙状结肠中的一种或多种的近端部分的内容物，或十二指肠，空肠，回肠，盲肠，升结肠，横结肠，降结肠和乙状结肠中的一种或多种的远端部分的内容物。
在一些实例中，本文所述的方法可以导致以下中的一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或十种)1％增加至500％增加(例如，1％增加至450％增加、1％增加至400％增加、1％增加至350％增加、1％增加至300％增加、1％增加至250％增加、1％增加至200％增加、1％增加至190％增加、1％增加至180％增加、1％增加至170％增加、1％增加至160％增加、1％增加至150％增加、1％增加至140％增加、1％增加至130％增加、1％增加至120％增加、1％增加至110％增加、1％增加至100％增加、1％增加至90％增加、1％增加至80％增加、1％增加至70％增加、1％增加至60％增加、1％增加至50％增加、1％增加至40％增加、1％增加至30％增加、1％增加至25％增加、1％增加至20％增加、1％增加至15％增加、1％增加至10％增加、1％增加至5％增加、5％增加至500％增加、5％增加至450％增加、5％增加至400％增加、5％增加至350％增加、5％增加至300％增加、5％增加至250％增加、5％增加至200％增加、5％增加至190％增加、5％增加至180％增加、5％增加至170％增加、5％增加至160％增加、5％增加至150％增加、5％增加至140％增加、5％增加至130％增加、5％增加至120％增加、5％增加至110％增加、5％增加至100％增加、5％增加至90％增加、5％增加至80％增加、5％增加至70％增加、5％增加至60％增加、5％增加至50％增加、5％增加至40％增加、5％增加至30％增加、5％增加至25％增加、5％增加至20％增加、5％增加至15％增加、5％增加至10％增加、10％增加至500％增加、10％增加至450％增加、10％增加至400％增加、10％增加至350％增加、10％增加至300％增加、10％增加至250％增加、10％增加至200％增加、10％增加至190％增加、10％增加至180％增加、10％增加至170％增加、10％增加至160％增加、10％增加至150％增加、10％增加至140％增加、10％增加至130％增加、10％增加至120％增加、10％增加至110％增加、10％增加至100％增加、10％增加至90％增加、10％增加至80％增加、10％增加至70％增加、10％增加至60％增加、10％增加至50％增加、10％增加至40％增加、10％增加至30％增加、10％增加至25％增加、10％增加至20％增加、10％增加至15％增加、15％增加至500％增加、15％增加至450％增加、15％增加至400％增加、15％增加至350％增加、15％增加至300％增加、15％增加至250％增加、15％增加至200％增加、15％增加至190％增加、15％增加至180％增加、15％增加至170％增加、15％增加至160％增加、15％增加至150％增加、15％增加至140％增加、15％增加至130％增加、15％增加至120％增加、15％增加至110％增加、15％增加至100％增加、15％增加至90％增加、15％增加至80％增加、15％增加至70％增加、15％增加至60％增加、15％增加至50％增加、15％增加至40％增加、15％增加至30％增加、15％增加至25％增加、15％增加至20％增加、20％增加至500％增加、20％增加至450％增加、20％增加至400％增加、20％增加至350％增加、20％增加至300％增加、20％增加至250％增加、20％增加至200％增加、20％增加至190％增加、20％增加至180％增加、20％增加至170％增加、20％增加至160％增加、20％增加至150％增加、20％增加至140％增加、20％增加至130％增加、20％增加至120％增加、20％增加至110％增加、20％增加至100％增加、20％增加至90％增加、20％增加至80％增加、20％增加至70％增加、20％增加至60％增加、20％增加至50％增加、20％增加至40％增加、20％增加至30％增加、20％增加至25％增加、25％增加至500％增加、25％增加至450％增加、25％增加至400％增加、25％增加至350％增加、25％增加至300％增加、25％增加至250％增加、25％增加至200％增加、25％增加至190％增加、25％增加至180％增加、25％增加至170％增加、25％增加至160％增加、25％增加至150％增加、25％增加至140％增加、25％增加至130％增加、25％增加至120％增加、25％增加至110％增加、25％增加至100％增加、25％增加至90％增加、25％增加至80％增加、25％增加至70％增加、25％增加至60％增加、25％增加至50％增加、25％增加至40％增加、25％增加至30％增加、30％增加至500％增加、30％增加至450％增加、30％增加至400％增加、30％增加至350％增加、30％增加至300％增加、30％增加至250％增加、30％增加至200％增加、30％增加至190％增加、30％增加至180％增加、30％增加至170％增加、30％增加至160％增加、30％增加至150％增加、30％增加至140％增加、30％增加至130％增加、30％增加至120％增加、30％增加至110％增加、30％增加至100％增加、30％增加至90％增加、30％增加至80％增加、30％增加至70％增加、30％增加至60％增加、30％增加至50％增加、30％增加至40％增加、40％增加至500％增加、40％增加至450％增加、40％增加至400％增加、40％增加至350％增加、40％增加至300％增加、40％增加至250％增加、40％增加至200％增加、40％增加至190％增加、40％增加至180％增加、40％增加至170％增加、40％增加至160％增加、40％增加至150％增加、40％增加至140％增加、40％增加至130％增加、40％增加至120％增加、40％增加至110％增加、40％增加至100％增加、40％增加至90％增加、40％增加至80％增加、40％增加至70％增加、40％增加至60％增加、40％增加至50％增加、50％增加至500％增加、50％增加至450％增加、50％增加至400％增加、50％增加至350％增加、50％增加至300％增加、50％增加至250％增加、50％增加至200％增加、50％增加至190％增加、50％增加至180％增加、50％增加至170％增加、50％增加至160％增加、50％增加至150％增加、50％增加至140％增加、50％增加至130％增加、50％增加至120％增加、50％增加至110％增加、50％增加至100％增加、50％增加至90％增加、50％增加至80％增加、50％增加至70％增加、50％增加至60％增加、60％增加至500％增加、60％增加至450％增加、60％增加至400％增加、60％增加至350％增加、60％增加至300％增加、60％增加至250％增加、60％增加至200％增加、60％增加至190％增加、60％增加至180％增加、60％增加至170％增加、60％增加至160％增加、60％增加至150％增加、60％增加至140％增加、60％增加至130％增加、60％增加至120％增加、60％增加至110％增加、60％增加至100％增加、60％增加至90％增加、60％增加至80％增加、60％增加至70％增加、70％增加至500％增加、70％增加至450％增加、70％增加至400％增加、70％增加至350％增加、70％增加至300％增加、70％增加至250％增加、70％增加至200％增加、70％增加至190％增加、70％增加至180％增加、70％增加至170％增加、70％增加至160％增加、70％增加至150％增加、70％增加至140％增加、70％增加至130％增加、70％增加至120％增加、70％增加至110％增加、70％增加至100％增加、70％增加至90％增加、70％增加至80％增加、80％增加至500％增加、80％增加至450％增加、80％增加至400％增加、80％增加至350％增加、80％增加至300％增加、80％增加至250％增加、80％增加至200％增加、80％增加至190％增加、80％增加至180％增加、80％增加至170％增加、80％增加至160％增加、80％增加至150％增加、80％增加至140％增加、80％增加至130％增加、80％增加至120％增加、80％增加至110％增加、80％增加至100％增加、80％增加至90％增加、90％增加至500％增加、90％增加至450％增加、90％增加至400％增加、90％增加至350％增加、90％增加至300％增加、90％增加至250％增加、90％增加至200％增加、90％增加至190％增加、90％增加至180％增加、90％增加至170％增加、90％增加至160％增加、90％增加至150％增加、90％增加至140％增加、90％增加至130％增加、90％增加至120％增加、90％增加至110％增加、90％增加至100％增加、100％增加至500％增加、100％增加至450％增加、100％增加至400％增加、100％增加至350％增加、100％增加至300％增加、100％增加至250％增加、100％增加至200％增加、100％增加至190％增加、100％增加至180％增加、100％增加至170％增加、100％增加至160％增加、100％增加至150％增加、100％增加至140％增加、100％增加至130％增加、100％增加至120％增加、100％增加至110％增加、110％增加至500％增加、110％增加至450％增加、110％增加至400％增加、110％增加至350％增加、110％增加至300％增加、110％增加至250％增加、110％增加至200％增加、110％增加至190％增加、110％增加至180％增加、110％增加至170％增加、110％增加至160％增加、110％增加至150％增加、110％增加至140％增加、110％增加至130％增加、110％增加至120％增加、120％增加至500％增加、120％增加至450％增加、120％增加至400％增加、120％增加至350％增加、120％增加至300％增加、120％增加至250％增加、120％增加至200％增加、120％增加至190％增加、120％增加至180％增加、120％增加至170％增加、120％增加至160％增加、120％增加至150％增加、120％增加至140％增加、120％增加至130％增加、130％增加至500％增加、130％增加至450％增加、130％增加至400％增加、130％增加至350％增加、130％增加至300％增加、130％增加至250％增加、130％增加至200％增加、130％增加至190％增加、130％增加至180％增加、130％增加至170％增加、130％增加至160％增加、130％增加至150％增加、130％增加至140％增加、140％增加至500％增加、140％增加至450％增加、140％增加至400％增加、140％增加至350％增加、140％增加至300％增加、140％增加至250％增加、140％增加至200％增加、140％增加至190％增加、140％增加至180％增加、140％增加至170％增加、140％增加至160％增加、140％增加至150％增加、150％增加至500％增加、150％增加至450％增加、150％增加至400％增加、150％增加至350％增加、150％增加至300％增加、150％增加至250％增加、150％增加至200％增加、150％增加至190％增加、150％增加至180％增加、150％增加至170％增加、150％增加至160％增加、160％增加至500％增加、160％增加至450％增加、160％增加至400％增加、160％增加至350％增加、160％增加至300％增加、160％增加至250％增加、160％增加至200％增加、160％增加至190％增加、160％增加至180％增加、160％增加至170％增加、170％增加至500％增加、170％增加至450％增加、170％增加至400％增加、170％增加至350％增加、170％增加至300％增加、170％增加至250％增加、170％增加至200％增加、170％增加至190％增加、170％增加至180％增加、180％增加至500％增加、180％增加至450％增加、180％增加至400％增加、180％增加至350％增加、180％增加至300％增加、180％增加至250％增加、180％增加至200％增加、180％增加至190％增加、190％增加至500％增加、190％增加至450％增加、190％增加至400％增加、190％增加至350％增加、190％增加至300％增加、190％增加至250％增加、190％增加至200％增加、200％增加至500％增加、200％增加至450％增加、200％增加至400％增加、200％增加至350％增加、200％增加至300％增加、200％增加至250％增加、250％增加至500％增加、250％增加至450％增加、250％增加至400％增加、250％增加至350％增加、250％增加至300％增加、300％增加至500％增加、300％增加至450％增加、300％增加至400％增加、300％增加至350％增加、350％增加至500％增加、350％增加至450％增加、350％增加至400％增加、400％增加至500％增加、400％增加至450％增加、或450％增加至500％增加)：IL-6的血浆、血清或血液水平；IL-2的血浆、血清或血液水平；IL-1β的血浆、血清或血液水平；TNFα的血浆、血清或血液水平；IL-17A的血浆、血清或血液水平；IL-22的血浆、血清或血液水平；干扰素-K的血浆、血清或血液水平；血液Th记忆细胞(CD44+CD45RB-CD4+细胞)的水平；肠系膜淋巴结中血细胞中的α4β7表达水平和Th记忆细胞(CD44+CD45RB-CD4+细胞)中的α4β7表达水平；例如，各自与全身施用相同剂量的相同免疫调节剂的受试者中的相应水平相比。用于测定IL-6的血浆、血清或血液水平；IL-2的血浆、血清或血液水平；IL-1β的血浆、血清或血液水平；TNFα的血浆、血清或血液水平；IL-17A的血浆、血清或血液水平；IL-22的血浆、血清或血液水平；干扰素-K的血浆、血清或血液水平；血液Th记忆细胞(CD44+CD45RB-CD4+细胞)的水平；和血细胞中的α4β7表达水平；以及血细胞中的α4β7表达水平的方法是本领域中已知的。
在一些实例中，本文所述的方法可导致肠系膜淋巴结中的Th记忆细胞(CD44+CD45RB-CD4+细胞)水平和/或派尔集合淋巴结中的Th记忆细胞水平1％降低至99％降低(例如，1％降低至95％降低、1％降低至90％降低、1％降低至85％降低、1％降低至80％降低、1％降低至75％降低、1％降低至70％降低、1％降低至65％降低、1％降低至60％降低、1％降低至55％降低、1％降低至50％降低、1％降低至45％降低、1％降低至40％降低、1％降低至35％降低、1％降低至30％降低、1％降低至25％降低、1％降低至20％降低、1％降低至15％降低、1％降低至10％降低、1％降低至5％降低、5％降低至99％降低、5％降低至95％降低、5％降低至90％降低、5％降低至85％降低、5％降低至80％降低、5％降低至75％降低、5％降低至70％降低、5％降低至65％降低、5％降低至60％降低、5％降低至55％降低、5％降低至50％降低、5％降低至45％降低、5％降低至40％降低、5％降低至35％降低、5％降低至30％降低、5％降低至25％降低、5％降低至20％降低、5％降低至15％降低、5％降低至10％降低、10％降低至99％降低、10％降低至95％降低、10％降低至90％降低、10％降低至85％降低、10％降低至80％降低、10％降低至75％降低、10％降低至70％降低、10％降低至65％降低、10％降低至60％降低、10％降低至55％降低、10％降低至50％降低、10％降低至45％降低、10％降低至40％降低、10％降低至35％降低、10％降低至30％降低、10％降低至25％降低、10％降低至20％降低、10％降低至15％降低、15％降低至99％降低、15％降低至95％降低、15％降低至90％降低、15％降低至85％降低、15％降低至80％降低、15％降低至75％降低、15％降低至70％降低、15％降低至65％降低、15％降低至60％降低、15％降低至55％降低、15％降低至50％降低、15％降低至45％降低、15％降低至40％降低、15％降低至35％降低、15％降低至30％降低、15％降低至25％降低、15％降低至20％降低、20％降低至99％降低、20％降低至95％降低、20％降低至90％降低、20％降低至85％降低、20％降低至80％降低、20％降低至75％降低、20％降低至70％降低、20％降低至65％降低、20％降低至60％降低、20％降低至55％降低、20％降低至50％降低、20％降低至45％降低、20％降低至40％降低、20％降低至35％降低、20％降低至30％降低、20％降低至25％降低、25％降低至99％降低、25％降低至95％降低、25％降低至90％降低、25％降低至85％降低、25％降低至80％降低、25％降低至75％降低、25％降低至70％降低、25％降低至65％降低、25％降低至60％降低、25％降低至55％降低、25％降低至50％降低、25％降低至45％降低、25％降低至40％降低、25％降低至35％降低、25％降低至30％降低、30％降低至99％降低、30％降低至95％降低、30％降低至90％降低、30％降低至85％降低、30％降低至80％降低、30％降低至75％降低、30％降低至70％降低、30％降低至65％降低、30％降低至60％降低、30％降低至55％降低、30％降低至50％降低、30％降低至45％降低、30％降低至40％降低、30％降低至35％降低、35％降低至99％降低、35％降低至95％降低、35％降低至90％降低、35％降低至85％降低、35％降低至80％降低、35％降低至75％降低、35％降低至70％降低、35％降低至65％降低、35％降低至60％降低、35％降低至55％降低、35％降低至50％降低、35％降低至45％降低、35％降低至40％降低、40％降低至99％降低、40％降低至95％降低、40％降低至90％降低、40％降低至85％降低、40％降低至80％降低、40％降低至75％降低、40％降低至70％降低、40％降低至65％降低、40％降低至60％降低、40％降低至55％降低、40％降低至50％降低、40％降低至45％降低、45％降低至99％降低、45％降低至95％降低、45％降低至90％降低、45％降低至85％降低、45％降低至80％降低、45％降低至75％降低、45％降低至70％降低、45％降低至65％降低、45％降低至60％降低、45％降低至55％降低、45％降低至50％降低、50％降低至99％降低、50％降低至95％降低、50％降低至90％降低、50％降低至85％降低、50％降低至80％降低、50％降低至75％降低、50％降低至70％降低、50％降低至65％降低、50％降低至60％降低、50％降低至55％降低、55％降低至99％降低、55％降低至95％降低、55％降低至90％降低、55％降低至85％降低、55％降低至80％降低、55％降低至75％降低、55％降低至70％降低、55％降低至65％降低、55％降低至60％降低、60％降低至99％降低、60％降低至95％降低、60％降低至90％降低、60％降低至85％降低、60％降低至80％降低、60％降低至75％降低、60％降低至70％降低、60％降低至65％降低、65％降低至99％降低、65％降低至95％降低、65％降低至90％降低、65％降低至85％降低、65％降低至80％降低、65％降低至75％降低、65％降低至70％降低、70％降低至99％降低、70％降低至95％降低、70％降低至90％降低、70％降低至85％降低、70％降低至80％降低、70％降低至75％降低、75％降低至99％降低、75％降低至95％降低、75％降低至90％降低、75％降低至85％降低、75％降低至80％降低、80％降低至99％降低、80％降低至95％降低、80％降低至90％降低、80％降低至85％降低、85％降低至99％降低、85％降低至95％降低、85％降低至90％降低、90％降低至99％降低、90％降低至95％降低、或95％降低至99％降低)，例如与全身施用相同剂量的免疫调节剂的受试者中的相应水平相比。用于测定派尔集合淋巴结中的Th记忆细胞(CD44+CD45RB-CD4+细胞)水平，和肠系膜淋巴结中的Th记忆细胞(CD44+CD45RB-CD4+细胞)水平的方法是本领域中已知的。
在一些实施方式中，通过不包含免疫调节剂的全身转运的方法将免疫调节剂递送至位置。
在一些实施方式中，所施用的免疫调节剂的量为约1mg至约650mg。在一些实施方式中，所施用的免疫调节剂的量为约1mg至约600mg。在一些实施方式中，所施用的免疫调节剂的量为约1mg至约500mg。在一些实施方式中，所施用的免疫调节剂的量为约1mg至约100mg。在一些实施方式中，所施用的免疫调节剂的量为约5mg至约40mg。在一些实施方式中，以10mg、之后20mg、之后30mg的递增剂量，或20mg、之后30mg、之后50mg的递增剂量施用免疫调节剂的量。
在一些实施方式中，免疫调节剂的量以例如约1mg至约300mg、约1mg至约250mg、约1mg至约200mg、约1mg至约195mg、约1mg至约190mg、约1mg至约185mg、约1mg至约180mg、约1mg至约175mg、约1mg至约170mg、约1mg至约165mg、约1mg至约160mg、约1mg至约155mg、约1mg至约150mg、约1mg至约145mg、约1mg至约140mg、约1mg至约135mg、约1mg至约130mg、约1mg至约125mg、约1mg至约120mg、约1mg至约115mg、约1mg至约110mg、约1mg至约105mg、约1mg至约100mg、约1mg至约95mg、约1mg至约90mg、约1mg至约85mg、约1mg至约80mg、约1mg至约75mg、约1mg至约70mg、约1mg至约65mg、约1mg至约60mg、约1mg至约55mg、约1mg至约50mg、约1mg至约45mg、约1mg至约40mg、约1mg至约35mg、约1mg至约30mg、约1mg至约25mg、约1mg至约20mg、约1mg至约15mg、约1mg至约10mg、约1mg至约5mg、约5mg至约200mg、约5mg至约195mg、约5mg至约190mg、约5mg至约185mg、约5mg至约180mg、约5mg至约175mg、约5mg至约170mg、约5mg至约165mg、约5mg至约160mg、约5mg至约155mg、约5mg至约150mg、约5mg至约145mg、约5mg至约140mg、约5mg至约135mg、约5mg至约130mg、约5mg至约125mg、约5mg至约120mg、约5mg至约115mg、约5mg至约110mg、约5mg至约105mg、约5mg至约100mg、约5mg至约95mg、约5mg至约90mg、约5mg至约85mg、约5mg至约80mg、约5mg至约75mg、约5mg至约70mg、约5mg至约65mg、约5mg至约60mg、约5mg至约55mg、约5mg至约50mg、约5mg至约45mg、约5mg至约40mg、约5mg至约35mg、约5mg至约30mg、约5mg至约25mg、约5mg至约20mg、约5mg至约15mg、约5mg至约10mg、约10mg至约200mg、约10mg至约195mg、约10mg至约190mg、约10mg至约185mg、约10mg至约180mg、约10mg至约175mg、约10mg至约170mg、约10mg至约165mg、约10mg至约160mg、约10mg至约155mg、约10mg至约150mg、约10mg至约145mg、约10mg至约140mg、约10mg至约135mg、约10mg至约130mg、约10mg至约125mg、约10mg至约120mg、约10mg至约115mg、约10mg至约110mg、约10mg至约105mg、约10mg至约100mg、约10mg至约95mg、约10mg至约90mg、约10mg至约85mg、约10mg至约80mg、约10mg至约75mg、约10mg至约70mg、约10mg至约65mg、约10mg至约60mg、约10mg至约55mg、约10mg至约50mg、约10mg至约45mg、约10mg至约40mg、约10mg至约35mg、约10mg至约30mg、约10mg至约25mg、约10mg至约20mg、约10mg至约15mg、约15mg至约200mg、约15mg至约195mg、约15mg至约190mg、约15mg至约185mg、约15mg至约180mg、约15mg至约175mg、约15mg至约170mg、约15mg至约165mg、约15mg至约160mg、约15mg至约155mg、约15mg至约150mg、约15mg至约145mg、约15mg至约140mg、约15mg至约135mg、约15mg至约130mg、约15mg至约125mg、约15mg至约120mg、约15mg至约115mg、约15mg至约110mg、约15mg至约105mg、约15mg至约100mg、约15mg至约95mg、约15mg至约90mg、约15mg至约85mg、约15mg至约80mg、约15mg至约75mg、约15mg至约70mg、约15mg至约65mg、约15mg至约60mg、约15mg至约55mg、约15mg至约50mg、约15mg至约45mg、约15mg至约40mg、约15mg至约35mg、约15mg至约30mg、约15mg至约25mg、约15mg至约20mg、约20mg至约200mg、约20mg至约195mg、约20mg至约190mg、约20mg至约185mg、约20mg至约180mg、约20mg至约175mg、约20mg至约170mg、约20mg至约165mg、约20mg至约160mg、约20mg至约155mg、约20mg至约150mg、约20mg至约145mg、约20mg至约140mg、约20mg至约135mg、约20mg至约130mg、约20mg至约125mg、约20mg至约120mg、约20mg至约115mg、约20mg至约110mg、约20mg至约105mg、约20mg至约100mg、约20mg至约95mg、约20mg至约90mg、约20mg至约85mg、约20mg至约80mg、约20mg至约75mg、约20mg至约70mg、约20mg至约65mg、约20mg至约60mg、约20mg至约55mg、约20mg至约50mg、约20mg至约45mg、约20mg至约40mg、约20mg至约35mg、约20mg至约30mg、约20mg至约25mg、约25mg至约200mg、约25mg至约195mg、约25mg至约190mg、约25mg至约185mg、约25mg至约180mg、约25mg至约175mg、约25mg至约170mg、约25mg至约165mg、约25mg至约160mg、约25mg至约155mg、约25mg至约150mg、约25mg至约145mg、约25mg至约140mg、约25mg至约135mg、约25mg至约130mg、约25mg至约125mg、约25mg至约120mg、约25mg至约115mg、约25mg至约110mg、约25mg至约105mg、约25mg至约100mg、约25mg至约95mg、约25mg至约90mg、约25mg至约85mg、约25mg至约80mg、约25mg至约75mg、约25mg至约70mg、约25mg至约65mg、约25mg至约60mg、约25mg至约55mg、约25mg至约50mg、约25mg至约45mg、约25mg至约40mg、约25mg至约35mg、约25mg至约30mg、约30mg至约200mg、约30mg至约195mg、约30mg至约190mg、约30mg至约185mg、约30mg至约180mg、约30mg至约175mg、约30mg至约170mg、约30mg至约165mg、约30mg至约160mg、约30mg至约155mg、约30mg至约150mg、约30mg至约145mg、约30mg至约140mg、约30mg至约135mg、约30mg至约130mg、约30mg至约125mg、约30mg至约120mg、约30mg至约115mg、约30mg至约110mg、约30mg至约105mg、约30mg至约100mg、约30mg至约95mg、约30mg至约90mg、约30mg至约85mg、约30mg至约80mg、约30mg至约75mg、约30mg至约70mg、约30mg至约65mg、约30mg至约60mg、约30mg至约55mg、约30mg至约50mg、约30mg至约45mg、约30mg至约40mg、约30mg至约35mg、约35mg至约200mg、约35mg至约195mg、约35mg至约190mg、约35mg至约185mg、约35mg至约180mg、约35mg至约175mg、约35mg至约170mg、约35mg至约165mg、约35mg至约160mg、约35mg至约155mg、约35mg至约150mg、约35mg至约145mg、约35mg至约140mg、约35mg至约135mg、约35mg至约130mg、约35mg至约125mg、约35mg至约120mg、约35mg至约115mg、约35mg至约110mg、约35mg至约105mg、约35mg至约100mg、约35mg至约95mg、约35mg至约90mg、约35mg至约85mg、约35mg至约80mg、约35mg至约75mg、约35mg至约70mg、约35mg至约65mg、约35mg至约60mg、约35mg至约55mg、约35mg至约50mg、约35mg至约45mg、约35mg至约40mg、约40mg至约200mg、约40mg至约195mg、约40mg至约190mg、约40mg至约185mg、约40mg至约180mg、约40mg至约175mg、约40mg至约170mg、约40mg至约165mg、约40mg至约160mg、约40mg至约155mg、约40mg至约150mg、约40mg至约145mg、约40mg至约140mg、约40mg至约135mg、约40mg至约130mg、约40mg至约125mg、约40mg至约120mg、约40mg至约115mg、约40mg至约110mg、约40mg至约105mg、约40mg至约100mg、约40mg至约95mg、约40mg至约90mg、约40mg至约85mg、约40mg至约80mg、约40mg至约75mg、约40mg至约70mg、约40mg至约65mg、约40mg至约60mg、约40mg至约55mg、约40mg至约50mg、约40mg至约45mg、约45mg至约200mg、约45mg至约195mg、约45mg至约190mg、约45mg至约185mg、约45mg至约180mg、约45mg至约175mg、约45mg至约170mg、约45mg至约165mg、约45mg至约160mg、约45mg至约155mg、约45mg至约150mg、约45mg至约145mg、约45mg至约140mg、约45mg至约135mg、约45mg至约130mg、约45mg至约125mg、约45mg至约120mg、约45mg至约115mg、约45mg至约110mg、约45mg至约105mg、约45mg至约100mg、约45mg至约95mg、约45mg至约90mg、约45mg至约85mg、约45mg至约80mg、约45mg至约75mg、约45mg至约70mg、约45mg至约65mg、约45mg至约60mg、约45mg至约55mg、约45mg至约50mg、约50mg至约200mg、约50mg至约195mg、约50mg至约190mg、约50mg至约185mg、约50mg至约180mg、约50mg至约175mg、约50mg至约170mg、约50mg至约165mg、约50mg至约160mg、约50mg至约155mg、约50mg至约150mg、约50mg至约145mg、约50mg至约140mg、约50mg至约135mg、约50mg至约130mg、约50mg至约125mg、约50mg至约120mg、约50mg至约115mg、约50mg至约110mg、约50mg至约105mg、约50mg至约100mg、约50mg至约95mg、约50mg至约90mg、约50mg至约85mg、约50mg至约80mg、约50mg至约75mg、约50mg至约70mg、约50mg至约65mg、约50mg至约60mg、约50mg至约55mg、约55mg至约200mg、约55mg至约195mg、约55mg至约190mg、约55mg至约185mg、约55mg至约180mg、约55mg至约175mg、约55mg至约170mg、约55mg至约165mg、约55mg至约160mg、约55mg至约155mg、约55mg至约150mg、约55mg至约145mg、约55mg至约140mg、约55mg至约135mg、约55m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150mg至约155mg、约155mg至约200mg、约155mg至约195mg、约155mg至约190mg、约155mg至约185mg、约155mg至约180mg、约155mg至约175mg、约155mg至约170mg、约155mg至约165mg、约155mg至约160mg、约160mg至约200mg、约160mg至约195mg、约160mg至约190mg、约160mg至约185mg、约160mg至约180mg、约160mg至约175mg、约160mg至约170mg、约160mg至约165mg、约165mg至约200mg、约165mg至约195mg、约165mg至约190mg、约165mg至约185mg、约165mg至约180mg、约165mg至约175mg、约165mg至约170mg、约170mg至约200mg、约170mg至约195mg、约170mg至约190mg、约170mg至约185mg、约170mg至约180mg、约170mg至约175mg、约175mg至约200mg、约175mg至约195mg、约175mg至约190mg、约175mg至约185mg、约175mg至约180mg、约180mg至约200mg、约180mg至约195mg、约180mg至约190mg、约180mg至约185mg、约185mg至约200mg、约185mg至约195mg、约185mg至约190mg、约190mg至约200mg、约190mg至约195mg、或约195mg至约200mg的剂量施用。
在一些实施方式中，施用的免疫调节剂的量小于当免疫调节剂全身递送时有效的量。
在一些实施方式中，施用的免疫调节剂的量是诱导剂量。在一些实施方式中，此类诱导剂量有效诱导JAK和细胞因子风暴的缓解及急性炎症和损伤的愈合。在一些实施方式中，诱导剂量每天施用一次。在本文所述的方法中的任一种的一些实施方式中，所述诱导剂量每两天一次施用。在一些实施方式中，诱导剂量每三天施用一次。在一些实施方式中，诱导剂量每周施用一次。在一些实施方式中，诱导剂量在约6-8周的时间段内每天施用一次，每三天施用一次或每周施用一次。
在一些实施方式中，该方法包括依次施用(i)一定量的免疫调节剂作为诱导剂量，和(ii)一定量的免疫调节剂作为维持剂量。在一些实施方式中，步骤(ii)重复一次或多次。在一些实施方式中，诱导剂量等于维持剂量。在一些实施方式中，诱导剂量大于维持剂量。在一些实施方式中，诱导剂量比维持剂量大五倍。在一些实施方式中，诱导剂量比维持剂量大两倍。
在一些实施方式中，该诱导剂量与全身施用于受试者治疗相同病症的诱导剂量相同或更高。在更具体的实施方式中，该诱导剂量与全身施用于受试者治疗相同病症的诱导剂量相同或更高，并且该维持剂量比全身施用于受试者治疗相同病症的维持剂量更低。在一些实施方式中，该诱导剂量与全身施用于受试者治疗相同病症的诱导剂量相同或更高，并且该维持剂量比全身施用于受试者治疗相同病症的维持剂量更高。
在一些实施方式中，诱导剂量的免疫调节剂和维持剂量的免疫调节剂各自通过施用包含治疗有效量的免疫调节剂的药物组合物施用于受试者，其中药物组合物是装置。在一些实施方式中，以与维持剂量不同的方式向受试者施用诱导剂量的免疫调节剂。例如，诱导剂量可以全身施用。在一些实施方式中，诱导剂量可以不是口服施用。例如，诱导剂量可以直肠施用。例如，诱导剂量可以静脉内施用。例如，诱导剂量可以皮下施用。在一些实施方式中，诱导剂量可以通过喷雾导管施用。
在一些实施方式中，在胃肠道中的位置递送的免疫调节剂的浓度比血浆中免疫调节剂的浓度大10％、25％、50％、75％、100％、200％、300％、400％、500％、1000％、2000％。
在一些实施方式中，所述方法在作为预期释放部位的位置处提供的所述免疫调节剂的浓度比在并非所述胃肠道中的预期释放部位的位置处提供的浓度高2-100倍。
在一些实施方式中，该方法包括在胃肠道中的位置处递送免疫调节剂作为单次推注。
在一些实施方式中，该方法包括在胃肠道中的位置处递送免疫调节剂作为多于一次的推注。
在一些实施方式中，该方法包括以连续方式在胃肠道中的位置处递送免疫调节剂。
在一些实施方式中，该方法包括在20分钟或更长时间的时间段内在胃肠道中的位置处递送免疫调节剂。
在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂浓度小于10μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂浓度小于3μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂浓度小于1μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂浓度小于0.3μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂浓度小于0.1μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂浓度小于0.01μg/ml。在一些实施方式中，本文提供的受试者血浆中免疫调节剂浓度的值是指C波谷，即在施用下一剂量之前的浓度最低值。
在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中的免疫调节剂抑制剂的浓度为例如约1ng/L至约100ng/mL、约1ng/mL至约95ng/mL、约1ng/mL至约90ng/mL、约1ng/mL至约85ng/mL、约1ng/mL至约80ng/mL、约1ng/mL至约75ng/mL、约1ng/mL至约70ng/mL、约1ng/mL至约65ng/mL、约1ng/mL至约60ng/mL、约1ng/mL至约55ng/mL、约1ng/mL至约50ng/mL、约1ng/mL至约45ng/mL、约1ng/mL至约40ng/mL、约1ng/mL至约35ng/mL、约1ng/mL至约30ng/mL、约1ng/mL至约25ng/mL、约1ng/mL至约20ng/mL、约1ng/mL至约15ng/mL、约1ng/mL至约10ng/mL、约1ng/mL至约5ng/mL、约2ng/L至约100ng/mL、约2ng/mL至约95ng/mL、约2ng/mL至约90ng/mL、约2ng/mL至约85ng/mL、约2ng/mL至约80ng/mL、约2ng/mL至约75ng/mL、约2ng/mL至约70ng/mL、约2ng/mL至约65ng/mL、约2ng/mL至约60ng/mL、约2ng/mL至约55ng/mL、约2ng/mL至约50ng/mL、约2ng/mL至约45ng/mL、约2ng/mL至约40ng/mL、约2ng/mL至约35ng/mL、约2ng/mL至约30ng/mL、约2ng/mL至约25ng/mL、约2ng/mL至约20ng/mL、约2ng/mL至约15ng/mL、约2ng/mL至约10ng/mL、约2ng/mL至约5ng/mL、约5ng/L至约100ng/mL、约5ng/mL至约95ng/mL、约5ng/mL至约90ng/mL、约5ng/mL至约85ng/mL、约5ng/mL至约80ng/mL、约5ng/mL至约75ng/mL、约5ng/mL至约70ng/mL、约5ng/mL至约65ng/mL、约5ng/mL至约60ng/mL、约5ng/mL至约55ng/mL、约5ng/mL至约50ng/mL、约5ng/mL至约45ng/mL、约5ng/mL至约40ng/mL、约5ng/mL至约35ng/mL、约5ng/mL至约30ng/mL、约5ng/mL至约25ng/mL、约5ng/mL至约20ng/mL、约5ng/mL至约15ng/mL、约5ng/mL至约10ng/mL、约10ng/L至约100ng/mL、约10ng/mL至约95ng/mL、约10ng/mL至约90ng/mL、约10ng/mL至约85ng/mL、约10ng/mL至约80ng/mL、约10ng/mL至约75ng/mL、约10ng/mL至约70ng/mL、约10ng/mL至约65ng/mL、约10ng/mL至约60ng/mL、约10ng/mL至约55ng/mL、约10ng/mL至约50ng/mL、约10ng/mL至约45ng/mL、约10ng/mL至约40ng/mL、约10ng/mL至约35ng/mL、约10ng/mL至约30ng/mL、约10ng/mL至约25ng/mL、约10ng/mL至约20ng/mL、约10ng/mL至约15ng/mL、约15ng/L至约100ng/mL、约15ng/mL至约95ng/mL、约15ng/mL至约90ng/mL、约15ng/mL至约85ng/mL、约15ng/mL至约80ng/mL、约15ng/mL至约75ng/mL、约15ng/mL至约70ng/mL、约15ng/mL至约65ng/mL、约15ng/mL至约60ng/mL、约15ng/mL至约55ng/mL、约15ng/mL至约50ng/mL、约15ng/mL至约45ng/mL、约15ng/mL至约40ng/mL、约15ng/mL至约35ng/mL、约15ng/mL至约30ng/mL、约15ng/mL至约25ng/mL、约15ng/mL至约20ng/mL、约20ng/L至约100ng/mL、约20ng/mL至约95ng/mL、约20ng/mL至约90ng/mL、约20ng/mL至约85ng/mL、约20ng/mL至约80ng/mL、约20ng/mL至约75ng/mL、约20ng/mL至约70ng/mL、约20ng/mL至约65ng/mL、约20ng/mL至约60ng/mL、约20ng/mL至约55ng/mL、约20ng/mL至约50ng/mL、约20ng/mL至约45ng/mL、约20ng/mL至约40ng/mL、约20ng/mL至约35ng/mL、约20ng/mL至约30ng/mL、约20ng/mL至约25ng/mL、约25ng/L至约100ng/mL、约25ng/mL至约95ng/mL、约25ng/mL至约90ng/mL、约25ng/mL至约85ng/mL、约25ng/mL至约80ng/mL、约25ng/mL至约75ng/mL、约25ng/mL至约70ng/mL、约25ng/mL至约65ng/mL、约25ng/mL至约60ng/mL、约25ng/mL至约55ng/mL、约25ng/mL至约50ng/mL、约25ng/mL至约45ng/mL、约25ng/mL至约40ng/mL、约25ng/mL至约35ng/mL、约25ng/mL至约30ng/mL、约30ng/L至约100ng/mL、约30ng/mL至约95ng/mL、约30ng/mL至约90ng/mL、约30ng/mL至约85ng/mL、约30ng/mL至约80ng/mL、约30ng/mL至约75ng/mL、约30ng/mL至约70ng/mL、约30ng/mL至约65ng/mL、约30ng/mL至约60ng/mL、约30ng/mL至约55ng/mL、约30ng/mL至约50ng/mL、约30ng/mL至约45ng/mL、约30ng/mL至约40ng/mL、约30ng/mL至约35ng/mL、约35ng/L至约100ng/mL、约35ng/mL至约95ng/mL、约35ng/mL至约90ng/mL、约35ng/mL至约85ng/mL、约35ng/mL至约80ng/mL、约35ng/mL至约75ng/mL、约35ng/mL至约70ng/mL、约35ng/mL至约65ng/mL、约35ng/mL至约60ng/mL、约35ng/mL至约55ng/mL、约35ng/mL至约50ng/mL、约35ng/mL至约45ng/mL、约35ng/mL至约40ng/mL、约40ng/L至约100ng/mL、约40ng/mL至约95ng/mL、约40ng/mL至约90ng/mL、约40ng/mL至约85ng/mL、约40ng/mL至约80ng/mL、约40ng/mL至约75ng/mL、约40ng/mL至约70ng/mL、约40ng/mL至约65ng/mL、约40ng/mL至约60ng/mL、约40ng/mL至约55ng/mL、约40ng/mL至约50ng/mL、约40ng/mL至约45ng/mL、约45ng/L至约100ng/mL、约45ng/mL至约95ng/mL、约45ng/mL至约90ng/mL、约45ng/mL至约85ng/mL、约45ng/mL至约80ng/mL、约45ng/mL至约75ng/mL、约45ng/mL至约70ng/mL、约45ng/mL至约65ng/mL、约45ng/mL至约60ng/mL、约45ng/mL至约55ng/mL、约45ng/mL至约50ng/mL、约50ng/L至约100ng/mL、约50ng/mL至约95ng/mL、约50ng/mL至约90ng/mL、约50ng/mL至约85ng/mL、约50ng/mL至约80ng/mL、约50ng/mL至约75ng/mL、约50ng/mL至约70ng/mL、约50ng/mL至约65ng/mL、约50ng/mL至约60ng/mL、约50ng/mL至约55ng/mL、约55ng/L至约100ng/mL、约55ng/mL至约95ng/mL、约55ng/mL至约90ng/mL、约55ng/mL至约85ng/mL、约55ng/mL至约80ng/mL、约55ng/mL至约75ng/mL、约55ng/mL至约70ng/mL、约55ng/mL至约65ng/mL、约55ng/mL至约60ng/mL、约60ng/L至约100ng/mL、约60ng/mL至约95ng/mL、约60ng/mL至约90ng/mL、约60ng/mL至约85ng/mL、约60ng/mL至约80ng/mL、约60ng/mL至约75ng/mL、约60ng/mL至约70ng/mL、约60ng/mL至约65ng/mL、约65ng/L至约100ng/mL、约65ng/mL至约95ng/mL、约65ng/mL至约90ng/mL、约65ng/mL至约85ng/mL、约65ng/mL至约80ng/mL、约65ng/mL至约75ng/mL、约65ng/mL至约70ng/mL、约70ng/L至约100ng/mL、约70ng/mL至约95ng/mL、约70ng/mL至约90ng/mL、约70ng/mL至约85ng/mL、约70ng/mL至约80ng/mL、约70ng/mL至约75ng/mL、约75ng/L至约100ng/mL、约75ng/mL至约95ng/mL、约75ng/mL至约90ng/mL、约75ng/mL至约85ng/mL、约75ng/mL至约80ng/mL、约80ng/L至约100ng/mL、约80ng/mL至约95ng/mL、约80ng/mL至约90ng/mL、约80ng/mL至约85ng/mL、约85ng/L至约100ng/mL、约85ng/mL至约95ng/mL、约85ng/mL至约90ng/mL、约90ng/L至约100ng/mL、约90ng/mL至约95ng/mL、或约95ng/mL至约100ng/mL。
在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂的浓度Cmax小于10μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂的浓度Cmax小于3μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂的浓度Cmax小于1μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂的浓度Cmax小于0.3μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂的浓度Cmax小于0.1μg/ml。在一些实施方式中，该方法提供的受试者血浆中免疫调节剂的浓度Cmax小于0.01μg/ml。
在一些更加具体的实施方式中，治疗受试者胃肠道的疾病或病状的方法包括施用诱导剂量和后续维持剂量的免疫调节剂。在一些更加具体的实施方式中，给定时间段的总诱导剂量比相同时间段的全身诱导剂量大至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少8倍或至少10倍。在一些更加具体的实施方式中，2周时段的总诱导剂量比相同时间段的全身诱导剂量大至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少8倍或至少10倍。在一些更加具体的实施方式中，4周时段的总诱导剂量比相同时间段的全身诱导剂量大至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少8倍或至少10倍。在一些更加具体的实施方式中，6周时段的总诱导剂量比相同时间段的全身诱导剂量大至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少8倍或至少10倍。在一些更加具体的实施方式中，8周时段的总诱导剂量比相同时间段的全身诱导剂量大至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少8倍或至少10倍。
在一些更加具体的实施方式中，包含免疫调节剂的可摄入装置可以每天一次或每天多于一次，例如每天1、2、3、4次或更多次施用。在一些更加具体的实施方式中，可以同时施用两个或更多个可摄入装置。在一些更加具体的实施方式中，两个或多个可摄入装置可以间隔1分钟、间隔2分钟、间隔3分钟、间隔4分钟、间隔5分钟、间隔10分钟、间隔15分钟、间隔30分钟、或间隔60分钟施用。在一些更加具体的实施方式中，两个或多个可摄入装置可以间隔1小时、间隔2小时、间隔3小时、间隔4小时、间隔5小时、间隔6小时、间隔7小时、间隔8小时、间隔9小时、间隔10小时、间隔11小时、或间隔12小时施用。
在一些更加具体的实施方式中，使用本文所述的任何装置或组合物施用免疫调节剂相对于全身施用相同量的免疫调节剂可以提供受试者的肠系膜淋巴结中的TH记忆细胞计数降低，即至少10％降低、至少20％降低、至少30％降低、至少40％降低或至少50％降低。
在一些更加具体的实施方式中，使用本文所述的任何装置或组合物施用免疫调节剂相对于全身施用相同量的免疫调节剂可以提供受试者的派尔集合淋巴结中的TH记忆细胞计数降低，即至少10％降低。
在一些更加具体的实施方式中，使用本文所述的任何装置或组合物施用免疫调节剂相对于全身施用相同量的免疫调节剂可以提供受试者的血液中的TH记忆细胞计数增加，即至少1％增加、至少5％增加、至少10％增加或至少15％增加。
在一些实施方式中，该方法不包括将免疫调节剂直肠递送给受试者。
在一些实施方式中，该方法不包括通过灌肠将免疫调节剂递送给受试者。
在一些实施方式中，该方法不包括通过栓剂将免疫调节剂递送给受试者。
在一些实施方式中，该方法不包括通过滴注将免疫调节剂递送至受试者的直肠。
在一些实施方式中，本文公开的方法包括在胃肠道中产生治疗有效的免疫调节剂的降解产物。在一些实施方式中，产生治疗有效量的降解产物。
在一些实施方式中，相对于全身施用免疫调节剂的方法，包括以本文公开的方式施用免疫调节剂的方法导致免疫抑制性质降低。
在一些实施方式中，相对于全身施用免疫调节剂的方法，包括以本文公开的方式施用免疫调节剂的方法导致免疫原性降低。
患者病状、诊断和治疗
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病症的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括以下中的一个或多个：
a)识别患有在来源于所述内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的受试者；
b)确定所述疾病的严重程度；和
c)评估受试者是否适合治疗，例如通过确定受试者胃肠道的通畅性，或患者是否有狭窄或瘘管；
d)施用诱导剂量或维持剂量的免疫调节剂；
e)监测疾病的进展一次或多次，例如在约1-14周的时段内，诸如在施用免疫调节剂后约6-8周，包括在6-8周的时间点，或在施用免疫调节剂后约52周的时间段内，包括在52周的时间点。
如本文所用，诱导剂量是可以例如在治疗过程开始时施用的药物剂量，并且其高于在治疗期间施用的维持剂量。也可以在治疗期间施用诱导剂量，例如如果患者的病情变得更糟。
如本文所用，维持剂量是在重复基础上提供的药物剂量，例如以规则的给药间隔。
在一些实施方式中，免疫调节剂从可摄入装置中释放。
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的a)。
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的b)。
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的c)。
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的d)。
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的e)。
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的a)和b)。在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的a)和c)。在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的a)和d)。在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的a)和e)。
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的b)和c)。在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的b)和d)。在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的b)和e)。
在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的c)和d)。在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的c)和e)。在本文的一些实施方式中，治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法包括在胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，所述方法包括上文的d)和e)。
在一些实施方案中，本文的一个或多个步骤a)至e)包括胃肠道的内窥镜检查。在一些实施方式中，本文的一个或多个步骤a)至e)包括胃肠道的结肠镜检查。在一些实施方式中，本文的一个或多个步骤a)至e)进行一次或多次。在一些实施方式中，在胃肠道中接近预期释放部位的位置释放免疫调节剂后，进行这类一个或多个步骤a)至e)中的这种一个或多个。
在一些实施方式中，该方法包括在施用诱导剂量后施用一个或多个维持剂量。在一些实施方式中，诱导剂量的免疫调节剂和维持剂量的免疫调节剂各自通过施用包含治疗有效量的免疫调节剂的药物组合物施用于受试者。在一些实施方式中，以与维持剂量不同的方式向受试者施用诱导剂量的免疫调节剂。例如，维持剂量可以全身给药，而维持剂量则使用装置局部给药。在一个实施方式中，全身施用维持剂量，并且每1、2、3、4、5、6、7、10、15、20、25、30、35、40或45天使用装置施用诱导剂量。在另一个实施方式中，全身施用维持剂量，并且当检测到或怀疑疾病发作时施用诱导剂量。
在一些实施方式中，诱导剂量是在如本文公开的可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。在一些实施方式中，维持剂量是在如本文公开的可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。
在一些实施方式中，诱导剂量是在如本文公开的可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。在一些实施方式中，维持剂量是全身递送的免疫调节剂的剂量，所述全身递送是诸如用片剂或胶囊口服地，或皮下地或静脉内地递送。
在一些实施方式中，诱导剂量是全身递送的免疫调节剂的剂量，所述全身递送是诸如用片剂或胶囊口服地，或皮下地或静脉内地递送。在一些实施方式中，维持剂量是在如本文公开的可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。
在一些实施方式中，诱导剂量是在如本文公开的可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。在一些实施方式中，维持剂量是如本文所公开的全身递送的第二药剂的剂量，所述全身递送是例如用片剂或胶囊口服地，或皮下地或静脉内地。
在一些实施方式中，诱导剂量是如本文所公开的全身递送的第二药剂的剂量，所述全身递送是例如用片剂或胶囊口服地，或皮下地，或静脉内地。在一些实施方式中，维持剂量是在如本文公开的可摄入装置中施用的免疫调节剂的剂量。
在本文提供的方法的一个实施方式中，患者先前未用免疫调节剂治疗。
在一些实施方式中，该方法包括在基本上与释放免疫调节剂同时识别预期释放部位。
在一些实施方式中，该方法包括监测疾病的进展。
在一些实施方式中，该方法包括用喷雾导管施用免疫调节剂。例如，可以在上文的步骤(e)中进行用喷雾导管施用免疫调节剂。
在一些实施方式中，该方法不包括用喷雾导管施用免疫调节剂。
在一些实施方式中，从细胞培养测定和动物研究获得的数据可用于配制任何给定的免疫调节剂的适当剂量。任何免疫调节剂的有效性和剂量可以由健康护理专业人员或兽医专业人员使用本领域中已知的方法确定，以及通过观察受试者(例如人)中的一种或多种疾病症状来确定。某些因素可能影响有效治疗受试者所需的剂量和时间(例如，疾病或病症的严重程度、先前的治疗、受试者的一般健康和/或年龄、以及其他疾病的存在)。
在一些实施方式中，进一步向受试者施用另外的治疗剂(例如，本文所述的任何其他治疗剂)。可以基本上与免疫调节剂或包含其的药物组合物同时和/或在一个或多个其它时间点将额外的治疗剂施用于受试者。在一些实施方式中，额外的治疗剂与免疫调节剂一起配制(例如，使用本文所述的任何制剂实例)。
在一些实施方式中，向受试者每月至少一次(例如，每月至少两次、每月至少三次、每月至少四次、每周至少一次、每周至少两次、每周三次、每天一次、或每天两次)施用一定剂量的免疫调节剂。免疫调节剂可以长期施用于受试者。慢性治疗包括长期重复给药的任何形式，例如重复给药1个月或更多个月、1个月至1年、1年或多年、5年以上、10年以上、15年以上、20年以上、25年以上、30年以上、35年以上、40年以上、45年以上，或更长。可替代地，或另外地，可以施用慢性治疗。慢性治疗可以包括定期给药，例如1天1次或多次、1周1次或多次、或1个月1次或多次。例如，慢性治疗可包括大约每两周(例如，大约每10至18天)给药(例如，静脉内给药)。
合适的剂量可以是有效产生所需治疗效果的最低剂量。这种有效剂量通常取决于本文所述的因素。如果需要，免疫调节剂的有效日剂量可以作为两个、三个、四个、五个或六个或更多个亚剂量在全天中以适当的间隔分开施用，任选地以单位剂型施用。
在一些实例中，使用本文所述的任何组合物或装置施用免疫调节剂可以导致在使用本文所述的任何装置或组合物施用一定剂量的免疫调节剂约10分钟至约10小时、约10分钟至约9小时、约10分钟至约8小时、约10分钟至约7小时、约10分钟至约6小时、约10分钟至约5小时、约10分钟至约4.5小时、约10分钟至约4小时、约10分钟至约3.5小时、约10分钟至约3小时、约10分钟至约2.5小时、约10分钟至约2小时、约10分钟至约1.5小时、约10分钟至约1小时、约10分钟至约55分钟、约10分钟至约50分钟、约10分钟至约45分钟、约10分钟至约40分钟、约10分钟至约35分钟、约10分钟至约30分钟、约10分钟至约25分钟、约10分钟至约20分钟、约10分钟至约15分钟、约15分钟至约10小时、约15分钟至约9小时、约15分钟至约8小时、约15分钟至约7小时、约15分钟至约6小时、约15分钟至约5小时、约15分钟至约4.5小时、约15分钟至约4小时、约15分钟至约3.5小时、约15分钟至约3小时、约15分钟至约2.5小时、约15分钟至约2小时、约15分钟至约1.5小时、约15分钟至约1小时、约15分钟至约55分钟、约15分钟至约50分钟、约15分钟至约45分钟、约15分钟至约40分钟、约15分钟至约35分钟、约15分钟至约30分钟、约15分钟至约25分钟、约15分钟至约20分钟、约20分钟至约10小时、约20分钟至约9小时、约20分钟至约8小时、约20分钟至约7小时、约20分钟至约6小时、约20分钟至约5小时、约20分钟至约4.5小时、约20分钟至约4小时、约20分钟至约3.5小时、约20分钟至约3小时、约20分钟至约2.5小时、约20分钟至约2小时、约20分钟至约1.5小时、约20分钟至约1小时、约20分钟至约55分钟、约20分钟至约50分钟、约20分钟至约45分钟、约20分钟至约40分钟、约20分钟至约35分钟、约20分钟至约30分钟、约20分钟至约25分钟、约25分钟至约10小时、约25分钟至约9小时、约25分钟至约8小时、约25分钟至约7小时、约25分钟至约6小时、约25分钟至约5小时、约25分钟至约4.5小时、约25分钟至约4小时、约25分钟至约3.5小时、约25分钟至约3小时、约25分钟至约2.5小时、约25分钟至约2小时、约25分钟至约1.5小时、约25分钟至约1小时、约25分钟至约55分钟、约25分钟至约50分钟、约25分钟至约45分钟、约25分钟至约40分钟、约25分钟至约35分钟、约25分钟至约30分钟、约30分钟至约10小时、约30分钟至约9小时、约30分钟至约8小时、约30分钟至约7小时、约30分钟至约6小时、约30分钟至约5小时、约30分钟至约4.5小时、约30分钟至约4小时、约30分钟至约3.5小时、约30分钟至约3小时、约30分钟至约2.5小时、约30分钟至约2小时、约30分钟至约1.5小时、约30分钟至约1小时、约30分钟至约55分钟、约30分钟至约50分钟、约30分钟至约45分钟、约30分钟至约40分钟、约30分钟至约35分钟、约35分钟至约10小时、约35分钟至约9小时、约35分钟至约8小时、约35分钟至约7小时、约35分钟至约6小时、约35分钟至约5小时、约35分钟至约4.5小时、约35分钟至约4小时、约35分钟至约3.5小时、约35分钟至约3小时、约35分钟至约2.5小时、约35分钟至约2小时、约35分钟至约1.5小时、约35分钟至约1小时、约35分钟至约55分钟、约35分钟至约50分钟、约35分钟至约45分钟、约35分钟至约40分钟、约40分钟至约10小时、约40分钟至约9小时、约40分钟至约8小时、约40分钟至约7小时、约40分钟至约6小时、约40分钟至约5小时、约40分钟至约4.5小时、约40分钟至约4小时、约40分钟至约3.5小时、约40分钟至约3小时、约40分钟至约2.5小时、约40分钟至约2小时、约40分钟至约1.5小时、约40分钟至约1小时、约40分钟至约55分钟、约40分钟至约50分钟、约40分钟至约45分钟、约45分钟至约10小时、约45分钟至约9小时、约45分钟至约8小时、约45分钟至约7小时、约45分钟至约6小时、约45分钟至约5小时、约45分钟至约4.5小时、约45分钟至约4小时、约45分钟至约3.5小时、约45分钟至约3小时、约45分钟至约2.5小时、约45分钟至约2小时、约45分钟至约1.5小时、约45分钟至约1小时、约45分钟至约55分钟、约45分钟至约50分钟、约50分钟至约10小时、约50分钟至约9小时、约50分钟至约8小时、约50分钟至约7小时、约50分钟至约6小时、约50分钟至约5小时、约50分钟至约4.5小时、约50分钟至约4小时、约50分钟至约3.5小时、约50分钟至约3小时、约50分钟至约2.5小时、约50分钟至约2小时、约50分钟至约1.5小时、约50分钟至约1小时、约50分钟至约55分钟、约55分钟至约10小时、约55分钟至约9小时、约55分钟至约8小时、约55分钟至约7小时、约55分钟至约6小时、约55分钟至约5小时、约55分钟至约4.5小时、约55分钟至约4小时、约55分钟至约3.5小时、约55分钟至约3小时、约55分钟至约2.5小时、约55分钟至约2小时、约55分钟至约1.5小时、约55分钟至约1小时、约1小时至约10小时、约1小时至约9小时、约1小时至约8小时、约1小时至约7小时、约1小时至约6小时、约1小时至约5小时、约1小时至约4.5小时、约1小时至约4小时、约1小时至约3.5小时、约1小时至约3小时、约1小时至约2.5小时、约1小时至约2小时、约1小时至约1.5小时、约1.5小时至约10小时、约1.5小时至约9小时、约1.5小时至约8小时、约1.5小时至约7小时、约1.5小时至约6小时、约1.5小时至约5小时、约1.5小时至约4.5小时、约1.5小时至约4小时、约1.5小时至约3.5小时、约1.5小时至约3小时、约1.5小时至约2.5小时、约1.5小时至约2小时、约2小时至约10小时、约2小时至约9小时、约2小时至约8小时、约2小时至约7小时、约2小时至约6小时、约2小时至约5小时、约2小时至约4.5小时、约2小时至约4小时、约2小时至约3.5小时、约2小时至约3小时、约2小时至约2.5小时、约2.5小时至约10小时、约2.5小时至约9小时、约2.5小时至约8小时、约2.5小时至约7小时、约2.5小时至约6小时、约2.5小时至约5小时、约2.5小时至约4.5小时、约2.5小时至约4小时、约2.5小时至约3.5小时、约2.5小时至约3小时、约3小时至约10小时、约3小时至约9小时、约3小时至约8小时、约3小时至约7小时、约3小时至约6小时、约3小时至约5小时、约3小时至约4.5小时、约3小时至约4小时、约3小时至约3.5小时、约3.5小时至约10小时、约3.5小时至约9小时、约3.5小时至约8小时、约3.5小时至约7小时、约3.5小时至约6小时、约3.5小时至约5小时、约3.5小时至约4.5小时、约3.5小时至约4小时、约4小时至约10小时、约4小时至约9小时、约4小时至约8小时、约4小时至约7小时、约4小时至约6小时、约4小时至约5小时、约4小时至约4.5小时、约4.5小时至约10小时、约4.5小时至约9小时、约4.5小时至约8小时、约4.5小时至约7小时、约4.5小时至约6小时、约4.5小时至约5小时、约5小时至约10小时、约5小时至约9小时、约5小时至约8小时、约5小时至约7小时、约5小时至约6小时、约6小时至约10小时、约6小时至约9小时、约6小时至约8小时、约6小时至约7小时、约7小时至约10小时、约7小时至约9小时、约7小时至约8小时、约8小时至约10小时、约8小时至约9小时、或约9小时至约10小时的时间段内在受试者中治疗起效(例如，本文所述的在来源于内胚层的组织中出现的任何炎性疾病或病状的一种或多种症状和/或标记物的数量、严重程度、或持续时间降低)或药物-靶标结合。药物-靶标结合可以例如如Simon GM,Niphakis MJ,Cravatt BF,Naturechemical biology.2013；9(4):200-205中所公开的方式确定，其通过引用全文并入本文。
在一些实施方式中，在使用本文所述的任何组合物或装置首次施用免疫调节剂后，使用本文所述的任何装置或组合物施用免疫调节剂可以提供的对受试者的治疗(例如，受试者中在来源于内胚层的组织中出现的任何炎性疾病或病状的一种或多种症状和/或标记物的数量、严重程度、或持续时间降低)持续约1小时至约30天、约1小时至约28天、约1小时至约26天、约1小时至约24天、约1小时至约22天、约1小时至约20天、约1小时至约18天、约1小时至约16天、约1小时至约14天、约1小时至约12天、约1小时至约10天、约1小时至约8天、约1小时至约6天、约1小时至约5天、约1小时至约4天、约1小时至约3天、约1小时至约2天、约1小时至约1天、约1小时至约12小时、约1小时至约6小时、约1小时至约3小时、约3小时至约30天、约3小时至约28天、约3小时至约26天、约3小时至约24天、约3小时至约22天、约3小时至约20天、约3小时至约18天、约3小时至约16天、约3小时至约14天、约3小时至约12天、约3小时至约10天、约3小时至约8天、约3小时至约6天、约3小时至约5天、约3小时至约4天、约3小时至约3天、约3小时至约2天、约3小时至约1天、约3小时至约12小时、约3小时至约6小时、约6小时至约30天、约6小时至约28天、约6小时至约26天、约6小时至约24天、约6小时至约22天、约6小时至约20天、约6小时至约18天、约6小时至约16天、约6小时至约14天、约6小时至约12天、约6小时至约10天、约6小时至约8天、约6小时至约6天、约6小时至约5天、约6小时至约4天、约6小时至约3天、约6小时至约2天、约6小时至约1天、约6小时至约12小时、约12小时至约30天、约12小时至约28天、约12小时至约26天、约12小时至约24天、约12小时至约22天、约12小时至约20天、约12小时至约18天、约12小时至约16天、约12小时至约14天、约12小时至约12天、约12小时至约10天、约12小时至约8天、约12小时至约6天、约12小时至约5天、约12小时至约4天、约12小时至约3天、约12小时至约2天、约12小时至约1天、约1天至约30天、约1天至约28天、约1天至约26天、约1天至约24天、约1天至约22天、约1天至约20天、约1天至约18天、约1天至约16天、约1天至约14天、约1天至约12天、约1天至约10天、约1天至约8天、约1天至约6天、约1天至约5天、约1天至约4天、约1天至约3天、约1天至约2天、约2天至约30天、约2天至约28天、约2天至约26天、约2天至约24天、约2天至约22天、约2天至约20天、约2天至约18天、约2天至约16天、约2天至约14天、约2天至约12天、约2天至约10天、约2天至约8天、约2天至约6天、约2天至约5天、约2天至约4天、约2天至约3天、约3天至约30天、约3天至约28天、约3天至约26天、约3天至约24天、约3天至约22天、约3天至约20天、约3天至约18天、约3天至约16天、约3天至约14天、约3天至约12天、约3天至约10天、约3天至约8天、约3天至约6天、约3天至约5天、约3天至约4天、约4天至约30天、约4天至约28天、约4天至约26天、约4天至约24天、约4天至约22天、约4天至约20天、约4天至约18天、约4天至约16天、约4天至约14天、约4天至约12天、约4天至约10天、约4天至约8天、约4天至约6天、约4天至约5天、约5天至约30天、约5天至约28天、约5天至约26天、约5天至约24天、约5天至约22天、约5天至约20天、约5天至约18天、约5天至约16天、约5天至约14天、约5天至约12天、约5天至约10天、约5天至约8天、约5天至约6天、约6天至约30天、约6天至约28天、约6天至约26天、约6天至约24天、约6天至约22天、约6天至约20天、约6天至约18天、约6天至约16天、约6天至约14天、约6天至约12天、约6天至约10天、约6天至约8天、约8天至约30天、约8天至约28天、约8天至约26天、约8天至约24天、约8天至约22天、约8天至约20天、约8天至约18天、约8天至约16天、约8天至约14天、约8天至约12天、约8天至约10天、约10天至约30天、约10天至约28天、约10天至约26天、约10天至约24天、约10天至约22天、约10天至约20天、约10天至约18天、约10天至约16天、约10天至约14天、约10天至约12天、约12天至约30天、约12天至约28天、约12天至约26天、约12天至约24天、约12天至约22天、约12天至约20天、约12天至约18天、约12天至约16天、约12天至约14天、约14天至约30天、约14天至约28天、约14天至约26天、约14天至约24天、约14天至约22天、约14天至约20天、约14天至约18天、约14天至约16天、约16天至约30天、约16天至约28天、约16天至约26天、约16天至约24天、约16天至约22天、约16天至约20天、约16天至约18天、约18天至约30天、约18天至约28天、约18天至约26天、约18天至约24天、约18天至约22天、约18天至约20天、约20天至约30天、约20天至约28天、约20天至约26天、约20天至约24天、约20天至约22天、约22天至约30天、约22天至约28天、约22天至约26天、约22天至约24天、约24天至约30天、约24天至约28天、约24天至约26天、约26天至约30天、约26天至约28天、或约28天至约30天之间的时间段。本文描述的疾病的症状和/或标记物的非限制性实例描述如下。
例如，在使用本文所述的任何组合物或装置首次施用免疫调节剂后，治疗可以导致受试者中以下中的一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种或十二种)的降低(例如，约1％至约99％降低、约1％至约95％降低、约1％至约90％降低、约1％至约85％降低、约1％至约80％降低、约1％至约75％降低、约1％至约70％降低、约1％至约65％降低、约1％至约60％降低、约1％至约55％降低、约1％至约50％降低、约1％至约45％降低、约1％至约40％降低、约1％至约35％降低、约1％至约30％降低、约1％至约25％降低、约1％至约20％降低、约1％至约15％降低、约1％至约10％降低、约1％至约5％降低、约5％至约99％降低、约5％至约95％降低、约5％至约90％降低、约5％至约85％降低、约5％至约80％降低、约5％至约75％降低、约5％至约70％降低、约5％至约65％降低、约5％至约60％降低、约5％至约55％降低、约5％至约50％降低、约5％至约45％降低、约5％至约40％降低、约5％至约35％降低、约5％至约30％降低、约5％至约25％降低、约5％至约20％降低、约5％至约15％降低、约5％至约10％降低、约10％至约99％降低、约10％至约95％降低、约10％至约90％降低、约10％至约85％降低、约10％至约80％降低、约10％至约75％降低、约10％至约70％降低、约10％至约65％降低、约10％至约60％降低、约10％至约55％降低、约10％至约50％降低、约10％至约45％降低、约10％至约40％降低、约10％至约35％降低、约10％至约30％降低、约10％至约25％降低、约10％至约20％降低、约10％至约15％降低、约15％至约99％降低、约15％至约95％降低、约15％至约90％降低、约15％至约85％降低、约15％至约80％降低、约15％至约75％降低、约15％至约70％降低、约15％至约65％降低、约15％至约60％降低、约15％至约55％降低、约15％至约50％降低、约15％至约45％降低、约15％至约40％降低、约15％至约35％降低、约15％至约30％降低、约15％至约25％降低、约15％至约20％降低、约20％至约99％降低、约20％至约95％降低、约20％至约90％降低、约20％至约85％降低、约20％至约80％降低、约20％至约75％降低、约20％至约70％降低、约20％至约65％降低、约20％至约60％降低、约20％至约55％降低、约20％至约50％降低、约20％至约45％降低、约20％至约40％降低、约20％至约35％降低、约20％至约30％降低、约20％至约25％降低、约25％至约99％降低、约25％至约95％降低、约25％至约90％降低、约25％至约85％降低、约25％至约80％降低、约25％至约75％降低、约25％至约70％降低、约25％至约65％降低、约25％至约60％降低、约25％至约55％降低、约25％至约50％降低、约25％至约45％降低、约25％至约40％降低、约25％至约35％降低、约25％至约30％降低、约30％至约99％降低、约30％至约95％降低、约30％至约90％降低、约30％至约85％降低、约30％至约80％降低、约30％至约75％降低、约30％至约70％降低、约30％至约65％降低、约30％至约60％降低、约30％至约55％降低、约30％至约50％降低、约30％至约45％降低、约30％至约40％降低、约30％至约35％降低、约35％至约99％降低、约35％至约95％降低、约35％至约90％降低、约35％至约85％降低、约35％至约80％降低、约35％至约75％降低、约35％至约70％降低、约35％至约65％降低、约35％至约60％降低、约35％至约55％降低、约35％至约50％降低、约35％至约45％降低、约35％至约40％降低、约40％至约99％降低、约40％至约95％降低、约40％至约90％降低、约40％至约85％降低、约40％至约80％降低、约40％至约75％降低、约40％至约70％降低、约40％至约65％降低、约40％至约60％降低、约40％至约55％降低、约40％至约50％降低、约40％至约45％降低、约45％至约99％降低、约45％至约95％降低、约45％至约90％降低、约45％至约85％降低、约45％至约80％降低、约45％至约75％降低、约45％至约70％降低、约45％至约65％降低、约45％至约60％降低、约45％至约55％降低、约45％至约50％降低、约50％至约99％降低、约50％至约95％降低、约50％至约90％降低、约50％至约85％降低、约50％至约80％降低、约50％至约75％降低、约50％至约70％降低、约50％至约65％降低、约50％至约60％降低、约50％至约55％降低、约55％至约99％降低、约55％至约95％降低、约55％至约90％降低、约55％至约85％降低、约55％至约80％降低、约55％至约75％降低、约55％至约70％降低、约55％至约65％降低、约55％至约60％降低、约60％至约99％降低、约60％至约95％降低、约60％至约90％降低、约60％至约85％降低、约60％至约80％降低、约60％至约75％降低、约60％至约70％降低、约60％至约65％降低、约65％至约99％降低、约65％至约95％降低、约65％至约90％降低、约65％至约85％降低、约65％至约80％降低、约65％至约75％降低、约65％至约70％降低、约70％至约99％降低、约70％至约95％降低、约70％至约90％降低、约70％至约85％降低、约70％至约80％降低、约70％至约75％降低、约75％至约99％降低、约75％至约95％降低、约75％至约90％降低、约75％至约85％降低、约75％至约80％降低、约80％至约99％降低、约80％至约95％降低、约80％至约90％降低、约80％至约85％降低、约85％至约99％降低、约85％至约95％降低、约85％至约90％降低、约90％至约99％降低、约90％至约95％降低、或约95％至约99％降低)：在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的一种或多种症状的严重程度、肠系膜淋巴结中存在的记忆Th细胞数量的降低、肠系膜淋巴结中存在的记忆Th细胞中的α4β7整联蛋白表达的降低、派尔集合淋巴结中存在的记忆Th细胞数量的降低、和派尔集合淋巴结中存在的记忆Th细胞中的α4β7整联蛋白表达的降低、与炎性疾病或病状相关的来源于内胚层的组织中的干扰素-K水平的降低、与炎性疾病或病状相关的来源于内胚层的组织中的IL-1β水平的降低、与炎性疾病或病状相关的来源于内胚层的组织中的IL-6水平的降低、与炎性疾病或病状相关的来源于内胚层的组织中的IL-22水平的降低、与炎性疾病或病状相关的来源于内胚层的组织中的IL-17A水平的降低、与炎性疾病或病状相关的来源于内胚层的组织中的TNFΙ水平的降低、与炎性疾病或病状相关的来源于内胚层的组织中的IL-2水平的降低，以及已经迁移到与炎性疾病或病状相关的来源于内胚层的组织中的T淋巴细胞数量的降低(例如，与治疗前的受试者中的水平相比，或与患有类似疾病但接受安慰剂或不同治疗的受试者或受试者群体相比)(例如，持续在约1小时至约30天之间(例如，或此处的任何子范围)的时间段)。如本文所用，“胃肠道组织”是指胃肠道(GI)中的组织，例如十二指肠、空肠、回肠、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠和直肠中的一种或多种中的组织，更特别地，在十二指肠、空肠、回肠、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠中的一个或多个的近端部分中，或在十二指肠、空肠、回肠、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠中的一个或多个的远端部分中。本文描述了用于确定干扰素-K、IL-1β、IL-6、IL-22、IL-17A、TNFΙ和IL-2的水平的示例性方法。用于确定这些细胞因子水平的其它方法是本领域中已知的。本文描述了用于确定派尔集合淋巴结和肠系膜淋巴结中的Th记忆细胞数量的示例性方法。用于确定派尔集合淋巴结和肠系膜淋巴结中的Th记忆细胞数量的额外方法是本领域中已知的。
因此，在一些实施方式中，本文公开的治疗方法包括确定在受试者中在疾病位置处的标记物水平(例如，在施用装置之前和/或之后)。在一些实施方式中，标记物是生物标记物，并且本文公开的治疗方法包括确定施用该装置后在受试者中的疾病位置处的生物标记物水平相比于施用前或在全身施用等量的免疫调节剂后的相同时间点在受试者中的相同疾病位置处的生物标记物水平有所降低。在一些实例中，与施用前或在全身施用等量的免疫调节剂后的相同时间点在受试者中的疾病位置处的生物标记物水平相比，在施用所述装置后在相同疾病位置处的生物标记物水平降低1％至降低99％。在一些实施方式中，标记物的水平是以下中的一种或多种：干扰素-K水平、IL-17A水平、TNFα水平、IL-2水平、派尔集合淋巴结中的Th记忆细胞数量、以及肠系膜淋巴结中的Th记忆细胞数量。
在一些实施方式中，本文公开的治疗方法包括确定在施用装置后的某时间点的标记物水平低于在施用装置后的某时间点的标记物的水平低于施用装置前受试者中或全身施用等量的免疫调节剂后基本上相同的时间点受试者中的标记物水平。在一些实例中，与施用装置之前的受试者中或在全身施用等量的免疫调节剂后在相同的时间点受试者中的标记物水平相比，施用装置后标记物的水平降低1％至降低99％。在一些实施例中，本文公开的治疗方法包括确定在施用装置后约10分钟至10小时的时间段内在受试者中的疾病位置处的生物标记物的水平。
在一些实施方式中，本文所述的治疗方法包括：(i)确定在施用装置后第一时间点的疾病位置处的生物标记物水平L1B与在全身施用等量的免疫调节剂后在基本相同的时间点在受试者中的相同疾病位置处的生物标记物水平L2B的比率RB；(ii)确定在和(i)中相同的位置和基本相同的时间点的免疫调节剂的水平L1D与在全身施用等量的免疫调节剂后在基本相同的时间点受试者中的相同疾病位置处的免疫调节剂的水平L2D的比率RD；以及(iii)确定RB/RD的比率。
在一些实施方式中，本文公开的治疗方法可以包括：(i)确定在施用装置后某一时间点的疾病位置处的生物标记物水平L1B与在全身施用等量的免疫调节剂后在基本相同的时间点在受试者中的相同疾病位置处的生物标记物水平L2B的比率RB；(ii)确定在和(i)中相同的位置和基本相同的时间点的免疫调节剂的水平L1D与在全身施用等量的免疫调节剂后在基本相同的时间点受试者中的相同疾病位置处受试者中的免疫调节剂的水平L2D的比率RD；以及(iii)确定乘积RB×RD。
在一些实施方式中，本文公开的治疗方法可以包括确定在施用装置后的某时间点在受试者中的标记物水平与施用该装置之前在受试者中的标记物水平或者在全身施用等量的免疫调节剂后在基本相同的时间点的受试者中的标记物水平相比有所升高。在一些实例中，在施用装置后的时间点的标记物水平与施用装置之前的受试者中的标记物水平或者在全身施用等量的免疫调节剂后在基本相同的时间点受试者中的水平相比增加1％或增加400％。在一些实施例中，本文公开的治疗方法包括在施用装置后约10分钟至约10小时的时间段内确定受试者中标记物的水平。
在一些实施方式中，本文公开的治疗方法可包括确定受试者的血液、血清或血浆中的标记物水平。
用于胃肠道病症的生物标记物实例的示例性列表包括：干扰素-K、IL-1β、IL-6、IL-22、IL-17A、TNFΙ、IL-2、记忆细胞(CD44+CD45RB-CD4+细胞)；α4β7；VEGF；ICAM；VCAM；SAA；钙防卫蛋白；乳铁蛋白；FGF2；TGFb；ANG-1；ANG-2；PLGF；生物制剂(英夫利昔单抗；修美乐；喜达诺；维多珠单抗；欣普尼；Jak抑制剂；其它)；EGF；IL12/23p40；GMCSF；A4 B7；AeB7；CRP；SAA；ICAM；VCAM；AREG；EREG；HB-EGF；HRG；BTC；TGFα；SCF；TWEAK；MMP-9；MMP-6；CeacamCD66；IL10；ADA；Madcam-1；CD166(AL CAM)；FGF2；FGF7；FGF9；FGF19；ANCA抗中性粒细胞胞浆抗体；ASCAA抗酿酒酵母菌抗体IgA；ASCAG抗酿酒酵母菌抗体IgG；CBir1抗梭菌群XIVa鞭毛蛋白CBir1抗体；A4-Fla2抗梭菌群XIVa鞭毛蛋白2抗体；FlaX抗梭菌群XIVa鞭毛蛋白X抗体；OmpC抗大肠杆菌外膜蛋白C；ANCA核周抗中性粒细胞细胞质抗体；AREG双调蛋白蛋白(Amphiregulin Protein)；BTCβ细胞素蛋白；EGF表皮生长因子EREG上皮调节蛋白；HBEGF；肝素结合表皮生长因子；HGF肝细胞生长因子；HRG神经调节蛋白-1；TGFA转化生长因子α；CRP C-反应蛋白；SAA血清淀粉样蛋白A；ICAM-1细胞间粘附分子1；VCAM-1血管细胞粘附分子1；肠上皮下的成纤维细胞；和HGF。
在一些实施方式中，标记物是IBD生物标记物，例如：抗聚糖；抗酿酒酵母菌抗体(ASCA)；抗海带二糖苷(anti-laminaribioside，ALCA)；抗壳多糖(ACCA)；抗甘露糖苷(AMCA)；抗海带多糖(抗L)；抗几丁质(抗C)抗体：抗外膜孔蛋白C(抗OmpC)，抗Cbir1鞭毛蛋白；抗12抗体；靶向外分泌胰腺(PAB)的自身抗体；和核周抗中性粒细胞抗体(pANCA)；和钙卫蛋白。
在一些实施方式中，生物标记物与膜修复、纤维化、血管生成相关。在某些实施方式中，生物标记物是炎性生物标记物、抗炎生物标记物、MMP生物标记物、免疫标记物或TNF途径生物标记物。在一些实施方式中，生物标记物是肠特异性的。
对于组织样品，HER2可用作与细胞毒性T细胞相关的生物标记物。另外，其他细胞因子水平可用作组织中的生物标记物(例如磷酸STAT 1、STAT 3和STAT 5)、血浆中的生物标记物(例如VEGF、VCAM、ICAM、IL-6)或两者。
在一些实施方式中，一种或多种目标分析物包括一种或多种免疫球蛋白，诸如像免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白E(IgE)和/或免疫球蛋白A(IgA)。在一些实施方式中，IgM是感染和/或炎症的生物标记物。在一些实施方式中，IgD是自身免疫疾病的生物标记物。在一些实施方式中，IgG是阿尔茨海默氏病和/或癌症的生物标记物。在一些实施方式中，IgE是哮喘和/或过敏原免疫疗法的生物标记物。在一些实施方式中，IgA是肾病的生物标记物。
在一些实施方式中，肝脏疾病或病症(例如，本文所述的任何肝脏疾病或病症)的生物标记物或标记物是胆汁酸或胆汁盐(也称为缀合胆汁酸)。胆汁酸是胆固醇合成的产物，这些产物在肝脏中合成，与牛磺酸或甘氨酸缀合，并且储存在胆囊中直至释放到小肠中。初级胆汁酸是胆酸和鹅去氧胆酸，它们通过肠细菌去缀合和去羟基化以分别形成次级胆汁酸脱氧胆汁酸和石胆酸。大部分胆汁酸(约95％)在回肠末端重新吸收并且返回肝脏(参见例如美国公开号2017/0343535，其通过引用并入本文)。回肠中胆汁酸的吸收受损会导致结肠中胆汁酸过量，从而导致胆汁酸吸收不良(BAM；也称为胆汁酸腹泻)症状，包括水样便和大便失禁。有趣的是，多达50％的患有腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的患者也患有BAM(参见例如Camilleri等人(2009)Neurogastroeterol.Motil.21(7):734-43)。在一些实施方式中，受试者胃肠道中一种或多种胆汁酸或胆汁盐的存在、不存在和/或特定水平指示病状或疾病状态(例如胃肠道病症和/或非胃肠道病症(例如系统性病症或肝脏疾病))。在一些实施方式中，将受试者的胃肠道中至少一种胆汁酸或胆汁盐的水平用于诊断胃肠道病症，诸如BAM或IBS(例如，IBS-D)。在一些实施方式中，确定受试者的胃肠道中的胆汁酸或胆汁盐的水平。例如，可以在受试者的胃肠道的特定区域(例如，十二指肠、空肠、回肠、升结肠、横结肠或降结肠中的一种或多种)处确定胆汁酸、胆汁盐或其组合的存在和/或不存在、和/或浓度，以确定受试者是否患有胃肠道病症(诸如BAM或IBS-D)或处于罹患胃肠道病症(诸如BAM或IBS-D)的风险下。在一些实施方式中，可以确定受试者的胃肠道(例如，受试者的胃肠道的特定区域，包括十二指肠、空肠、回肠、升结肠、横结肠或降结肠中的一种或多种)的两种或更多种胆汁酸或胆汁酸盐的比率。在一些实施方式中，在受试者的回肠中确定胆汁酸、胆汁盐或其组合的存在和/或不存在、和/或浓度。在一些实施方式中，在受试者的结肠中确定胆汁酸、胆汁盐或其组合的存在和/或不存在、和/或浓度。在一些实施方式中，在受试者的胃肠道的特定区域中确定胆汁酸、胆汁盐或其组合的浓度，并且例如比较以确定沿着胃肠道化合物积聚的位置。在一些实施方式中，在受试者的胃肠道(例如，结肠或回肠)的特定区域中检测到胆汁酸、胆汁盐或其组合的浓度高于胆汁酸、胆汁盐或其组合的参考水平(例如，健康受试者中胆汁酸的平均水平)可以指示受试者中有BAM和/或IBS-D。在一些实施方式中，胆汁酸选自由鹅去氧胆酸、胆酸、脱氧胆酸、石胆酸和熊去氧胆酸组成的组。在一些实施方式中，胆汁酸包含胆甾烯-3-酮或其结构变体。在一些实施方式中，胆汁酸是胆甾烯-3-酮或其结构变体。在一些实施方式中，胆汁酸是胆甾烯-3-酮。在一些实施方式中，胆汁酸是胆甾烯-3-酮的结构变体。在一些实施方式中，胆汁盐选自由以下组成的组：甘氨胆酸、牛磺胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、葡糖石胆酸和牛磺石胆酸。
肝脏疾病或病症的另一种生物标记物是7α-羟基-4-胆甾烯3-酮(7αC4)。7αC4的测量允许监测肝脏胆固醇7α-羟化酶(胆汁酸合成中的限速酶)的酶活性并且可以用作检测BAM的替代物(参见例如，Galman等人(2003)J.Lipid.Res.44:859-66；和Camilleri等人(2009)Neurogastroeterol.Motil.21(7):734-43，其通过引用全文并入本文中)。
肝脏疾病或病症的生物标记物还包括胆固醇、脂质、脂溶性维生素(例如抗坏血酸、胆钙化醇、麦角钙化醇、生育酚、生育三烯酚、叶氯醌和甲基萘醌)、胆红素、成纤维细胞生长因子19(FGF19)、TGR5(也称为GP-BAR1或M-BAR)、甘氨酸、牛磺酸和胆囊收缩素(CCK或CCK-PZ)。在一些实施方式中，肝脏疾病或病症的生物标记物是胆囊收缩素。胆囊收缩素是一种肽激素，有助于控制肠运动(参见Rehfeld(2017)Front.Endocrinol.(Lausanne)8:47)。在一些实施方式中，肝脏疾病或病症的生物标记物是分泌素。分泌素是一种肽激素，通过控制胃酸分泌来调节十二指肠内容物的pH，调节十二指肠中的胆汁酸和碳酸氢盐分泌，并且调节水体内平衡(参见例如Afroze等人(2013)Ann.Transl.Med.1(3):29)。在一些实施方式中，受试者先前已被施用胆囊收缩素或分泌素以诱导生物标记物或标记物的释放(例如，从肝脏和/或胆囊到胃肠道中)。
可用于检测、诊断或监测肝脏疾病或病症的治疗功效的生物标记物实例的示例性清单包括胆红素、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、触珠蛋白、载脂蛋白A1、α2-巨球蛋白、胆固醇、甘油三酸酯、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、葡萄糖、细胞角蛋白-18(CK18)片段、透明质酸、TGF-β、脂肪酸结合蛋白、羟基类固醇17-β脱氢酶13(17β-HSD13)、谷氨酰二肽、谷氨酰缬氨酸、谷氨酰亮氨酸、谷氨酰苯丙氨酸、谷氨酰酪氨酸、肉碱、丁基肉碱、赖氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、甘油磷脂酰胆碱、甘油基磷酸基乙醇胺、牛磺酸、甘氨酸缀合物、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、乳酸盐、谷氨酸盐、半胱氨酸-谷胱甘肽二硫化物、癸酸盐、10-烯酸甲酯、油酰基-溶血磷脂酰胆碱、氧化和还原的谷胱甘肽、谷氨酸盐、三磷酸腺苷、肌酸、胆酸和甘脱氧胆酸。在一些实施方式中，肝脏疾病或病症的生物标记物可以是本文所述的任何标记物或生物标记物的代谢物。
在一些实施方式中，生物标记物是高灵敏度C-反应蛋白(hsCRP)；7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮(7C4)；抗肌内膜IgA(EMA IgA)；抗人组织转谷氨酰胺酶IgA(tTG IgA)；通过比浊法测定的总血清IgA；粪便钙卫蛋白；或粪便胃肠道病原体。
在一些实施方式中，生物标记物是
a)抗麦醇溶蛋白IgA抗体、抗麦醇溶蛋白IgG抗体、抗组织转谷氨酰胺酶(tTG)抗体、抗肌内膜抗体；
b)i)血清学标记物，其为ASCA-A、ASCA-G、ANCA、pANCA、抗OmpC抗体、抗CBirl抗体、抗FlaX抗体或抗A4-Fla2抗体；
b)ii)VEGF、ICAM、VCAM、SAA或CRP的炎症标记物；
b)iii)遗传标记ATG16L1、ECM1、NKX2-3或STAT3的基因型；
c)细菌抗原抗体标记；
d)肥大细胞标记物；
e)炎症细胞标记物；
f)胆汁酸吸收不良(BAM)标记物；
g)犬尿氨酸标记物；
或者
h)血清素标记物。
在一些实施方式中，细菌抗原抗体标记物选自由下列各项组成的组中：抗Flal抗体、抗Fla2抗体、抗FlaA抗体、抗FliC抗体、抗FHC2抗体、抗FHC3抗体、抗YBaN1抗体、抗ECFliC抗体、抗Ec0FliC抗体、抗SeFljB抗体、抗CjFlaA抗体、抗CjFlaB抗体、抗SfFliC抗体、抗CjCgtA抗体、抗Cjdmh抗体、抗CjGT-A抗体、抗体-EcYidX抗体、抗EcEra抗体、抗EcFrvX抗体、抗EcGabT抗体、抗EcYedK抗体、抗EcYbaN抗体、抗EcYhgN抗体、抗RtMaga抗体、抗RbCpaF抗体、抗RgPilD抗体、抗-LaFrc抗体、抗LaEno抗体、抗LjEFTu抗体、抗BfOmpa抗体、抗PrOmpA抗体、抗Cpl0bA抗体、抗CpSpA抗体、抗EfSant抗体、抗LmOsp抗体、抗SfET-2抗体、抗Cpatox抗体、抗Cpbtox抗体、抗EcSta2抗体、抗Ec0Stx2A抗体、抗CjcdtB/C抗体、抗Cdt cdA/B抗体及其组合。
在一些实施方式中，肥大细胞标记物选自由β-类胰蛋白酶、组胺、前列腺素E2(PGE2)及其组合组成的组中。
在一些实施方式中，炎性标记物选自由CRP、ICAM、VCAM、SAA、GROα及其组合组成的组中。
在一些实施方式中，胆汁酸吸收不良标记物选自由7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮、FGF19及其组合组成的组中。
在一些实施方式中，犬尿氨酸标记物选自由犬尿氨酸(K)、犬尿喹啉酸(KyA)、邻氨基苯甲酸(AA)、3-羟基犬尿氨酸(3-HK)、3-羟基邻氨基苯甲酸(3-HAA)、黄尿酸(XA)、喹啉酸(QA)、色氨酸、5-羟色氨酸(5-HTP)及其组合组成的组中。
在一些实施方式中，5-羟色胺标记物选自由5-羟色胺(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、5-羟色胺-O-硫酸盐、5-羟色胺-O-磷酸盐及其组合组成的组中。
在一些实施方式中，生物标记物是如US 9739786中公开的生物标记物，其通过引用整体并入本文。
以下标记物可由间充质干细胞(MSC)表达：CD105、CD73、CD90、CD13、CD29、CD44、CD10、Stro-1、CD271、SSEA-4、CD146、CD49f、CD349、GD2、3G5、SSEA-3、SISD2、Stro-4、MSCA-1、CD56、CD200、PODXl、Sox11或TM4SF1(例如，这类标记物中的2种或更多种、3种或更多种、4种或更多种、5种或更多种、6种或更多种、7种或更多种、8种或更多种、9种或更多种、或10种或更多种)，并且缺乏CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR中的一种或多种的表达(例如，缺乏这类标记物中的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种、或五种或更多种的表达)。在一些实施方式中，MSC可以表达CD105、CD73和CD90。在一些实施方式中，MSC可以表达CD105、CD73、CD90、CD13、CD29、CD44和CD10。在一些实施方式中，MSC可以表达CD105、CD73和CD90以及一种或多种干细胞标记物，诸如Stro-1、CD271、SSEA-4、CD146、CD49f、CD349、GD2、3G5、SSEA-3、SISD2、Stro-4、MSCA-1、CD56、CD200、PODXl、Sox11或TM4SF1。在一些实施方式中，MSC可以表达CD105、CD73、CD90、CD13、CD29、CD44和CD10以及一种或多种干细胞标记物，诸如Stro-1、CD271、SSEA-4、CD146、CD49f、CD349、GD2、3G5、SSEA-3、SISD2、Stro-4、MSCA-1、CD56、CD200、PODXl、Sox11或TM4SF1。参见，例如Lv等人,Stem Cells,2014,32:1408-1419。
肠干细胞(ISC)针对一种或多种标记物可以是阳性的，所述一种或多种标记物例如是Musashi-1(Msi-1)、Ascl2、Bmi-1、双皮层蛋白和Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶样1(DCAMKL1)和富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)。参见，例如，Mohamed等,Cytotechnology,2015 67(2):177–189。
任何前述生物标记物可以适当地用作一种或多种其他病症的生物标记物。
在本文方法的一些实施方式中，所述方法包括确定在施用所述装置后治疗开始的时间段。
组合疗法
本文公开的抗炎剂可任选地与其它药剂一起用于治疗本文公开的疾病。在这种辅助疗法中用于治疗或预防炎性肠病(例如，克罗恩病、溃疡性结肠炎)的这类药剂的非限制性实例包括抑制细胞因子产生、下调或抑制自身抗原表达或掩盖MHC抗原的物质。这类药剂的实例包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(参见美国专利号4,665,077)；非甾体类抗炎药(NSAID)；更昔洛韦；他克莫司；皮质醇或醛固酮等皮质类固醇；免疫调节剂，诸如环加氧酶抑制剂；5-脂氧合酶抑制剂；或白三烯受体拮抗剂；嘌呤拮抗剂，诸如硫唑嘌呤或霉酚酸酯(MMF)；烷基化剂，诸如环磷酰胺；溴隐亭；达那唑；氨苯砜；戊二醛(掩盖MHC抗原，如美国专利号4,120,649中所述)；MHC抗原和MHC片段的抗独特型抗体；环孢素；6-巯基嘌呤；类固醇，诸如皮质类固醇或糖皮质激素或糖皮质激素类似物，例如强的松、甲基强的松龙，包括
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甲基强的松龙琥珀酸钠和地塞米松；二氢叶酸还原酶抑制剂，诸如甲氨蝶呤(口服或皮下)；抗疟疾药物，诸如氯喹和羟氯喹；柳氮磺胺吡啶；来氟米特；细胞因子或细胞因子受体抗体或拮抗剂，包括抗干扰素α、β或γ抗体、抗肿瘤坏死因子(TNF)α抗体(英夫利昔单抗
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或阿达木单抗)、抗TNFα免疫粘附素(依那西普)、抗TNFβ抗体、抗白细胞介素-2(IL-2)抗体和抗IL-2受体抗体，以及抗白细胞介素-6(IL-6)受体抗体和拮抗剂；抗LFA-1抗体，包括抗CD 11a和抗CD 18抗体；抗L3T4抗体；异源抗淋巴细胞球蛋白；pan-T抗体、抗CD3或抗CD4/CD4a抗体；含有LFA-3结合结构域的可溶性肽(WO 90/08187，1990年7月26日公开)；链激酶；转化生长因子-β(TGF-β)；链道酶；来自宿主的RNA或DNA；FK506；RS-61443；苯丁酸氮芥；脱氧精胍菌素；雷帕霉素；T细胞受体(Cohen等人，美国专利号5,114,721)；T细胞受体片段(Offner等人,Science,251:430-432(1991)；WO 90/11294；Ianeway,Nature,341:482(1989)；和WO 91/01133)；BAFF拮抗剂，诸如BAFF或BR3抗体或免疫粘附素和zTNF4拮抗剂(综述参见Mackay和Mackay,Trends Immunol,23:113-5(2002)，并且参见下文的定义)；干扰T细胞辅助信号的生物制剂，诸如抗CD40受体或抗CD40配体(CD154)，包括阻断CD40-CD40配体的抗体(例如，Durie等人,Science,261:1328-30(1993)；Mohan等人,J.Immunol,154:1470-80(1995))和CTLA4-Ig(Finck等人,Science,265:1225-7(1994))；和T细胞受体抗体(EP 340109)，诸如T10B9。辅助剂的非限制性实例还包括以下：布地奈德；表皮生长因子；氨基水杨酸盐；甲硝唑；美沙拉嗪；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓素抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1单克隆抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂、吡啶基咪唑化合物；TNF拮抗剂；IL-4，IL-10，IL-13和/或TGFP细胞因子或其激动剂(例如，激动剂抗体)；IL-11；葡糖苷酸或葡聚糖结合的强的松龙前药，地塞米松或布地奈德；ICAM-1反义硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸(ISIS 2302；Isis Pharmaceuticals公司)；可溶性补体受体1(TPIO；T Cell Sciences公司)；缓释美沙拉嗪；血小板活化因子(PAF)拮抗剂；环丙沙星；和利多卡因。
在其它实施方式中，如本文所述的免疫调节剂可以与以下中的一种或多种一起施用：IL-12/IL-23抑制剂、CHST15抑制剂、IL-6受体抑制剂、TNF抑制剂、整联蛋白抑制剂、JAK抑制剂、SMAD7抑制剂、IL-13抑制剂、IL-1受体抑制剂、TLR激动剂、免疫抑制剂或干细胞。在其它实施方式中，如本文所述的免疫调节剂可以与维生素C输液，一种或多种皮质类固醇和任选的硫胺素一起施用。
特定组合的实例包括以下。除非另有说明，否则第一组分(组分(1))在可摄入装置中给药，而第二组分(组分(2))既可在可摄入装置(该可摄入装置可以是与第一组分相同或不同的可摄入装置)中给药，也可以通过其他形式给药。
(1)阿达木单抗；(2)甲氨蝶呤。
(1)阿达木单抗；(2)口服施用的甲氨蝶呤。
(1)维多珠单抗；(2)甲氨蝶呤。
(1)维多珠单抗；(2)口服施用的甲氨蝶呤。
(1)他克莫司；(2)维多珠单抗。
(1)他克莫司；(2)可摄入装置中的维多珠单抗。
(1)他克莫司；(2)静脉内或皮下注射的维多珠单抗。
(1)A4抑制剂；(2)维多珠单抗。在一些实施方式中，A4抑制剂是Tysabri(那他珠单抗)。
(1)A4抑制剂；(2)可摄入装置中的维多珠单抗。在一些实施方式中，A4抑制剂是Tysabri。
(1)A4抑制剂；(2)皮下注射的维多珠单抗。在一些实施方式中，A4抑制剂是Tysabri。
(1)反义VCAM抑制剂；(2)Tysabri。
(1)反义VCAM抑制剂；(2)可摄入装置中的Tysabri。
(1)反义VCAM抑制剂；(2)维多珠单抗。
(1)反义VCAM抑制剂；(2)可摄入装置中的维多珠单抗。
(1)反义VCAM抑制剂；(2)静脉内或皮下注射的维多珠单抗。
(1)环孢霉素；(2)维多珠单抗。
(1)环孢霉素；(2)可摄入装置中的维多珠单抗。
(1)环孢霉素；(2)静脉内或皮下注射的维多珠单抗。
(1)TNF抑制剂；(2)MADCAM抑制剂。
(1)TNF抑制剂；(2)可摄入装置中的MADCAM抑制剂。
(1)TNF抑制剂；(2)B7抑制剂。
(1)B7抑制剂；TNF抑制剂。
(1)TNF抑制剂；(2)可摄入装置中的B7抑制剂。
(1)B7抑制剂；可摄入装置中的TNF抑制剂。
(1)TNF抑制剂；(2)静脉内或皮下注射的B7抑制剂。
(1)B7抑制剂；静脉内或皮下注射的TNF抑制剂。
(1)JAK抑制剂；(2)TNF抑制剂。
(1)JAK抑制剂；(2)可摄入装置中的TNF抑制剂。
(1)JAK抑制剂；(2)静脉内或皮下注射的TNF抑制剂。
(1)TNF抑制剂；(2)JAK抑制剂(1)TNF抑制剂；(2)可摄入装置中的JAK抑制剂。
(1)TNF抑制剂；(2)口服的JAK抑制剂。
(1)神经调节蛋白-4；(2)TNF抑制剂。
(1)神经调节蛋白-4；(2)可摄入装置中的TNF抑制剂。
(1)神经调节蛋白-4；(2)静脉内或皮下注射的TNF抑制剂。
(1)神经调节蛋白-4；(2)维多珠单抗。
(1)神经调节蛋白-4；(2)可摄入装置中的维多珠单抗。
(1)神经调节蛋白-4；(2)静脉内或皮下注射的维多珠单抗。
(1)神经调节蛋白-4；(2)
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(1)神经调节蛋白-4；(2)可摄入装置中的
Figure BDA0002449116230006002
(1)神经调节蛋白-4；(2)静脉内或皮下注射的
Figure BDA0002449116230006003
(1)神经调节蛋白-4(Neoregulin-4)；(2)JAK抑制剂。
(1)神经调节蛋白-4；(2)可摄入装置中的JAK抑制剂。
(1)神经调节蛋白-4；(2)静脉内或皮下注射的JAK抑制剂。
(1)TNF抑制剂；(2)S1P抑制剂。在一些实施方式中，S1P抑制剂是奥扎莫德(ozanimod)或依曲莫德(etrasimod)。
(1)TNF抑制剂；(2)口服的S1P抑制剂。在一些实施方式中，S1P抑制剂是奥扎莫德或依曲莫德。
(1)
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(2)S1P抑制剂。在一些实施方式中，S1P抑制剂是奥扎莫德或依曲莫德。
(1)
Figure BDA0002449116230006012
(2)口服的S1P抑制剂。在一些实施方式中，S1P抑制剂是奥扎莫德或依曲莫德。
(1)维多珠单抗；(2)S1P抑制剂。在一些实施方式中，S1P抑制剂是奥扎莫德或依曲莫德。
(1)维多珠单抗；(2)口服的S1P抑制剂。在一些实施方式中，S1P抑制剂是奥扎莫德或依曲莫德。
在一些实施方式中，本文公开的方法包括施用(i)如本文公开的免疫调节剂，和(ii)口服、静脉内或皮下施用的第二药剂，其中(ii)中的第二药剂是(i)中的相同免疫调节剂；不同的免疫调节剂；或具有与免疫调节剂不同的生物学靶标的药剂。
在一些实施方式中，本文公开的方法包括(i)以本文公开的方式施用免疫调节剂，和(ii)口服、静脉内或皮下施用第二药剂，其中(ii)中的第二药剂是适合于治疗炎性肠病的药剂。
在一些实施方式中，免疫调节剂在第二药剂之前施用。在一些实施方式中，免疫调节剂在第二药剂之后施用。在一些实施方式中，免疫调节剂和第二药剂基本上同时施用。在一些实施方式中，免疫调节剂在第二药剂之前递送。在一些实施方式中，免疫调节剂在第二药剂之后递送。在一些实施方式中，免疫调节剂和第二药剂基本上同时递送。
在一些实施方式中，第二药剂是适用于治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病症的药剂。在一些实施方式中，静脉内施用第二药剂。在一些实施方式中，皮下施用第二药剂。
在一些实施方式中，将免疫调节剂递送至所述位置，诸如通过粘膜接触递送至所述位置，导致全身免疫原性水平等于或低于由全身施用免疫调节剂所导致的全身免疫原性水平。在包括以本文公开的方式施用免疫调节剂和全身施用第二药剂的一些实施方式中，将免疫调节剂递送至所述位置，诸如通过粘膜接触递送至所述位置，导致全身免疫原性水平等于或低于由全身施用免疫调节剂和全身施用第二药剂所导致的全身免疫原性水平。在一些实施方式中，该方法包括以本文公开的方式施用免疫调节剂和第二药剂，其中当免疫调节剂和第二药剂都全身施用时第二药剂的量小于第二药剂的量。
实施例
实施例1-临床前鼠类结肠炎模型
结肠炎的实验诱导
通过葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎模型将结肠炎实验性地诱导至小鼠。该模型因其简单性和与人类溃疡性结肠炎的许多相似性而被广泛使用。简而言之，通过盲肠导管插入对小鼠给药DSS(其被认为对基底隐窝的结肠上皮细胞直接有毒)，持续数天直至诱导结肠炎。
分组
根据所施用的药剂，将小鼠分配至下列七组中的一个：
1.对照(无药剂)
2.阿达木单抗(2.5mg/kg)
3.阿达木单抗(5mg/kg)
4.阿达木单抗(10mg/kg)
通过上述剂量水平的盲肠导管给药，将对照或药剂施用于肠的受损粘膜表面。
另外，对于每组，将动物分成两组。一组在第10天或第12天接受单剂量的对照或药剂。另一组接受对照或药剂的每日(或类似)给药。
分析
对于每只动物，确定药效(例如，通过内窥镜检查、组织学等)，并且在血液、粪便和组织中测定细胞毒性T细胞水平(在动物处死后测定组织水平)。对于组织样品，另外测定HER2水平，并将细胞毒性T细胞的水平标准化至HER2的水平。另外，在组织中(例如，磷酸STAT 1、STAT 3和STAT 5)、在血浆中(例如，VEGF、VCAM、ICAM、IL-6)或两者中测定其他细胞因子水平。
全身(例如，在血浆中)和局部(例如，在结肠组织中)测定药代动力学。对于全身药代动力学分析，在给药后的一个或多个时间点从动物收集血液和/或粪便(例如，在施用后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时和/或8小时收集血浆样品)。在动物处死后收集一次局部/结肠组织样品。
实施例2a-临床前猪结肠炎模型的开发
结肠炎的实验诱导
在研究开始时使体重约35至45kg的雌性猪至少禁食24小时，然后在其直肠内施用三硝基苯磺酸(TNBS)。在给药和内窥镜检查过程中将动物轻度麻醉。如有必要，使用清洁结肠的灌肠剂。使用球头导管通过灌肠剂给一只动物施用40ml与稀释在10ml水中的5g TNBS混合的100％EtOH。灌肠剂沉积在刚好经过横结肠的弯曲处的降结肠的近端部分中。通过使用两个Foley导管将TNBS保留在给药部位12分钟，其中60ml球囊置于给药部位下方的降结肠的中间部分。类似地处理第二只动物，但是使用含有10克TNBS的溶液。在TNBS给药之前，使用内窥镜来明确地识别两只动物中的给药部位。给药和内窥镜检查由兽医进行。
TNBS给药后七(7)天，在轻度麻醉后，由兽医使用内窥镜评估给药部位和给药部位上下的粘膜组织。根据兽医的确定，获得必要的夹捏活组织检查。基于内窥镜检查结果，可以对动物实施安乐死以便在当天进行组织采集，或者继续进行1至4天研究，等待随后的内窥镜检查结果。在适当的TNBS剂量下观察到结肠结构的宏观和微观变化、可能的坏死、结肠增厚和显著的组织学变化。
在适应期间和整个研究期间至少每天记录临床症状(例如，健康不良、行为改变等)。额外的笔端(pen-side)观察每天进行两次(周末每天一次)。测量第1天和第7天的动物的体重(如果在第7天之后，则在安乐死的当天)。
在尸检当天，通过注射兽医批准的安乐死溶液使动物安乐死。为了避免自溶性变化，在安乐死之后立即收集结肠组织、打开、用盐水冲洗，并且进行结肠的详细肉眼检查以识别与TNBS损伤相关的肉眼可见的发现。拍照。组织样品取自近端、中部和远端横结肠；给药部位；远端结肠；直肠；和肛管。将样品置于NBF中并由经过委员会(Board)认证的兽医病理学家进行评估。
实施例2b-局部施用之后阿达木单抗的药代动力学/药效动力学和生物利用度
分组
十六(16)只猪(研究开始时约35至45公斤)分配给五组中的一组：
1.载体对照：(3.2mL盐水)；直肠内；(n＝2)
2.治疗对照：阿达木单抗(40mg，在3.2mL盐水中)；皮下；(n＝2)
3.阿达木单抗(低)：阿达木单抗(40mg，在3.2mL盐水中)；直肠内；(n＝4)
4.阿达木单抗(中)：阿达木单抗(80mg，在3.2mL盐水中)；直肠内；(n＝4)
5.阿达木单抗(高)：阿达木单抗(160mg，在3.2mL盐水中)；直肠内；(n＝4)
在第0天，由兽医以上述剂量水平和体积将测试品通过直肠内给药或皮下注射施用于肠的受损粘膜表面。
临床观察和体重
临床观察至少每天进行一次。在实验开始之前和整个研究期间至少每天对所有合适的动物记录临床体征(例如，健康不良、行为改变等)直至结束。如果认为有必要，可以进行额外的临床观察。健康状况需要进一步评估的动物由临床兽医检查。测量所有动物第-6天、第0天以及最后一次采血后的体重。
样品
血液：
在适应期间的第-7天、刚要给药前的第0天以及给药后的0.5、1、2、4、6、8、12、24和48时将血液(头部、颈静脉和/或导管)收集到EDTA管中。将EDTA样品分成两个等分试样，一个离心以获得药代动力学血浆，并且立即分析或冷冻保存(-80℃)用于后续的药代动力学分析。剩余的全血样品用于药效动力学分析。
粪便：
在第-7天、第0天和给药后的第0.5、1、2、4、6、8、12、24和48小时收集粪便，立即分析或在液氮上快速冷冻并在-70℃冷冻保存用于后续分析药物水平和炎性细胞因子。
组织：
为了避免自溶性变化，在安乐死之后立即收集结肠组织、打开、用盐水冲洗，并且进行结肠的详细肉眼检查以识别与TNBS损伤相关的肉眼可见的发现。一式三份的正常和受损组织的样品被立即分析，或者在液氮上快速冷冻并在-70℃下冷冻储存用于后续分析药物浓度、炎性细胞因子和组织学。
分析样品的阿达木单抗水平(局部粘膜组织水平和全身循环水平)，以及炎性细胞因子、包括TNFα的水平。
晚期程序
按照表AA中的方案对动物实施安乐死，其中在给药后6和48小时对每组载体对照和治疗对照的各1只动物实施安乐死，并且每组阿达木单抗组的一只动物在给药后6、12、24和48小时安乐死。在最后一次采血后丢弃动物，除非需保留用于后续研究。
表AA
Figure BDA0002449116230006041
实施例2c-局部施用之后阿达木单抗的药代动力学/药效动力学和生物利用度
分组
DSS诱发的结肠炎约克郡-克罗斯农场猪(Yorkshire-Cross Farm Swine)(研究开始时约5-10公斤)被分配到下列五组中的一组：
1.载体对照：(盐水)；直肠内；
2.治疗对照：阿达木单抗(13mg，在盐水中)；皮下；
3.阿达木单抗：阿达木单抗(13mg，在盐水中)；直肠内；
在t＝0时，通过兽医以上述剂量水平和体积将测试品通过直肠内给药或皮下注射施用于肠的受损粘膜表面。
临床观察
在实验开始之前和整个研究期间至少每天对所有合适的动物记录临床体征(例如，健康不良、行为改变等)直至结束。如果认为有必要，可以进行额外的临床观察。健康状况需要进一步评估的动物由临床兽医检查。
样品
血液：
在适应期间的第-7天、刚要给药前的第0天以及给药后的12小时将血液(头部、颈静脉和/或导管)收集到EDTA管中。将EDTA样品分成两个等分试样，一个离心以获得药代动力学血浆，并且立即分析或冷冻保存(-80℃)用于后续的药代动力学分析。剩余的全血样品用于药效动力学分析。
粪便：
在第-7天、第0天和给药后的第12小时收集粪便，并立即分析或在液氮上快速冷冻并在-70℃冷冻保存用于后续分析药物水平和炎性细胞因子。
组织：
为避免自溶性变化，在安乐死之后立即对结肠组织进行收集、打开、用盐水冲洗，并进行结肠的详细肉眼检查以鉴定与TNBS损伤相关的肉眼可见的发现。一式三份的正常和受损组织的样品被立即分析，或者在液氮上快速冷冻并在-70℃下冷冻储存用于后续分析药物浓度、炎性细胞因子和组织学。
分析样品的阿达木单抗水平(局部粘膜组织水平和全身循环水平)，以及炎性细胞因子、包括TNFα的水平。
晚期程序
在给药后12小时对动物实施安乐死。
实施例3.抗IL-12抗体的全身与盲肠内递送的比较
本研究的目的是比较IL-12抑制剂(抗-IL-12 p40；抗-p40 mAb；BioXCell(目录号：BE0051))在全身给药和盲肠内注射给药治疗葡聚糖硫酸钠(DDS)诱导的雄性C57B1/6小鼠中结肠炎的效果。
材料和方法
小鼠
从查尔斯河实验室(Charles River Laboratories)获得年龄为6-8周龄、体重20-24g的正常雄性C57Bl/6小鼠。将小鼠随机分成十三组(每组十二只动物)和两组(每组八只动物)，并以每笼6-8只的组圈养，并在进入研究前适应环境至少三天。动物室设置为每小时保持最少12至15次换气，自动计时器开启/关闭12小时的明/暗循环，并喂食Labdiet 5053无菌啮齿动物食物，随意施用水。
盲肠插管
将动物置于异氟烷麻醉下，通过腹部中线切口暴露盲肠。在远端盲肠中制造小点切口，其中插入1-2cm的插管。用5-0丝线用荷包缝合线封闭缝合切口。然后在左腹壁上制造切口，通过该切口，插管的远端被皮下插入并推到背部的背侧。然后在关闭腹壁之前用温热的盐水充分洗涤该部位。在肩胛骨之间的背部皮肤上也制造小切口，露出插管的尖端。使用缝合线、伤口夹和组织胶将插管固定在适当位置。所有动物接受1mL温热无菌盐水(皮下注射)并密切监测直至恢复，然后返回其笼中。所有动物在前3天接受0.6mg/kg的BID丁丙诺啡，并且在手术后的前5天每天接受10mg/Kg的
Figure BDA0002449116230006062
结肠炎的诱导
在雄性C57B1/6小鼠中通过从第0天到第5天暴露于3％DSS饮用水(MPBiomedicals#0260110)诱导结肠炎。在第3天再次制备新鲜的DSS/水溶液，并丢弃任何剩余的原始DSS溶液。
结肠炎的评估
每天称重所有动物并在给药时目测评估腹泻和/或血便的存在。小鼠接受两次视频内窥镜检查，一次在第10天，一次在第14天，以评估结肠炎的严重程度。从每只动物中在内窥镜检查期间识别的最严重的疾病区域捕获图像，并使用表1.1中所示的量规评估。此外，在使用该量规的内窥镜检查期间对粪便稠度进行评分(表1.2)(0＝正常，形成良好的颗粒，1＝粪便松散，柔软，保持形状，2＝粪便松散，水分过多的异常形态，3＝水样或腹泻，4＝血性腹泻)。在尸检时，收集肠内容物、外周血和组织以及盲肠/结肠内容物用于分析。
表1.1.内窥镜检查评分
分数 内窥镜检查评分说明
0 正常
1 血管分布损失
2 血管分布和脆性的损失
3 脆性和糜烂
4 溃疡和出血
表1.2.粪便稠度评分
Figure BDA0002449116230006061
Figure BDA0002449116230006071
结肠炎治疗
由于其在治疗DSS诱导的结肠炎中的功效，在结肠炎的急性期期间用抗IL-12 p40治疗小鼠。从第0天到第14天，测试品的剂量为0.1mL/20g。抗IL-12p40每3天以10mg/kg的剂量腹膜内施用，以及以每3天或每天以10mg/kg的剂量盲肠内施用。还有每天盲肠内注射1mg/kg的较低剂量。对照组未给予药物，并且每天腹膜内和盲肠内施用载体(无菌PBS)作为安慰剂药物。这些药物从第5至14天给药，即给药9天。剂量和组的更详细解释见表1.3。
表1.3.动物组
Figure BDA0002449116230006072
Figure BDA0002449116230006081
样品收集
在第14天在处死时收集肠内容物、外周血和组织，如下：在每个研究期结束时，在第14天内窥镜检查后立即通过CO2吸入使小鼠安乐死。通过心脏穿刺将血液收集到K2EDTA包被的管中，并以4000×g离心10分钟。保留血细胞颗粒并快速冷冻。然后将得到的血浆分成两个单独的冷冻管，100μL在一个管中，其余的在第二个管中。还收集血浆和细胞颗粒，快速冷冻，并在-80摄氏度下储存。
从每只动物中取出盲肠和结肠，收集内容物，称重，并在分开的冷冻管中快速冷冻。切除结肠，冲洗，测量，称重，然后修剪至6cm长并分成5个。将最近端1cm的结肠快速冷冻，用于随后对测试品水平的生物分析。在剩余的5cm结肠中，将最远端和近端1.5cm切片置于福尔马林中24小时，然后转移至70％乙醇中用于随后的组织学评估。将中间2cm部分纵向切成两半并放入两个单独的冷冻管中，称重，并在液氮中快速冷冻。
结果
图30中的数据显示，与腹腔内施用抗IL-12 p40抗体的DSS小鼠相比，经盲肠内施用抗IL-12 p40(IgG2A)抗体的DSS小鼠具有降低的体重减轻。
图31中的数据显示，与腹腔内施用抗IL-12 p40抗体的DSS小鼠相比，盲肠内施用抗IL-12 p40抗体的DSS小鼠中的抗-IL-12 p40抗体的血浆浓度降低。图32中的数据显示，与腹腔内施用抗-IL-12 p40抗体的DSS小鼠相比，盲肠内施用抗IL-12 p40抗体的DSS小鼠的抗IL-12 p40抗体的盲肠和结肠浓度增加。
图33和34中的数据显示在盲肠内施用抗IL-12 p40抗体的DSS小鼠中，IL-12 p40抗体能够渗入结肠组织(管腔表面、固有层、粘膜下层和肌层/浆膜层)，而未检测到抗IL-12p40抗体渗透腹腔施用抗IL-12 p40抗体的DSS小鼠的结肠组织。图35中的数据还显示，与腹腔内施用抗-IL-12 p40抗体的DSS小鼠相比，盲肠内施用抗IL-12 p40抗体的DSS小鼠的结肠组织中抗IL-12 p40抗体的浓度和血浆中抗IL-12 p40抗体的浓度的之比增加。
图36中的数据显示，与腹腔内施用抗-IL-12 p40抗体的DSS小鼠中的结肠组织的IL-1β浓度相比，盲肠内施用抗-IL-12 p40抗体的DSS小鼠中的结肠组织的IL-1β浓度降低。图37中的数据显示，与腹腔内施用抗-IL-12 p40抗体的DSS小鼠中的结肠组织的IL-6的浓度相比，盲肠内施用抗-IL-12 p40抗体的DSS小鼠中的结肠组织IL-6浓度降低。图38中的数据显示，与腹腔内施用抗-IL-12p40抗体的DSS小鼠中的结肠组织的IL-17A浓度相比，盲肠内施用抗-IL-12 p40抗体的DSS小鼠中的结肠组织的IL-17A浓度降低。
与载体相比，由于插管或盲肠内治疗，在临床观察或胃肠道特异性不良反应方面(包括粪便稠度和/或血便)没有观察到显著差异。没有报告由治疗产生的毒性。与载体对照和腹膜内给药(10mg/kg，Q3D)相比，通过盲肠内递送抗IL-12 p40抗体(10mg/kg和1mg/kg，QD)治疗组中发现体重减轻(AUC)显著降低。该抗-IL-12 p40抗体(10mg/kg，QD)治疗组中的免疫组织化学染色显示通过盲肠内递送的抗体在结肠组织的所有层中渗透，包括管腔粘膜、固有层、粘膜下层、肌层内膜。在结肠的所有区段中发现抗IL-12 p40抗体的分布，然而，在近端区域中检测到更高水平。与腹膜内给药(抗p40：10mg/kg，Q3D)相比，通过盲肠内给药(抗p40：10mg/kg和1mg/kg，QD)在胃肠道内容物和结肠组织中发现显著更高的抗-IL-12p40抗体平均浓度。与盲肠内给药(Q3D和QD)相比，当通过腹膜内给药(Q3D)递送时，抗IL-12p40抗体的血液水平显著更高。和载体对照组相比，当通过盲肠内施用递送时，抗-IL-12p40抗体(10mg/kg，QD)治疗显著降低了炎性细胞因子(包括IL-1β、IL-6和IL-17)的浓度。
总之，这些数据表明，本文提供的组合物和装置可以抑制肠中的局部免疫应答，同时对动物的全身免疫应答具有较小的抑制作用。这些数据还表明，本发明要求保护的组合物和装置将提供结肠炎和肠的其他促炎性疾病的治疗。
实施例4.抗整联蛋白α4β7抗体的全身与盲肠内递送的比较
本研究的目的是比较整合素抑制剂(抗整合素α4β7；抗LPAM1；DATK-32mAb；BioXCell(目录号：BE0034))在全身给药与盲肠内给药治疗雄性C57B1/6小鼠中葡聚糖硫酸钠盐(DSS)诱导的结肠炎的疗效。
材料和方法
小鼠
从查尔斯河实验室获得年龄为6-8周龄、体重20-24g的正常雄性C57Bl/6小鼠。将小鼠随机分成十三组(每组十二只动物)和两组(每组八只动物)，并以每笼6-8只的组圈养，并在进入研究前适应环境至少三天。动物室设置为每小时保持最少12至15次换气，自动计时器开启/关闭12小时的明/暗循环，并喂食Labdiet 5053无菌啮齿动物食物，随意施用水。
盲肠插管
将动物置于异氟烷麻醉下，通过腹部中线切口暴露盲肠。在远端盲肠中制造小点切口，其中插入1-2cm的插管。用5-0丝线用荷包缝合线封闭缝合切口。然后在左腹壁上制造切口，通过该切口，插管的远端被皮下插入并推到背部的背侧。然后在关闭腹壁之前用温热的盐水充分洗涤该部位。在肩胛骨之间的背部皮肤上也制造小切口，露出插管的尖端。使用缝合线、伤口夹和组织胶将插管固定在适当位置。所有动物接受1mL温热无菌盐水(皮下注射)并密切监测直至恢复，然后返回其笼中。所有动物在前3天接受0.6mg/kg的BID丁丙诺啡，并且在手术后的前5天每天接受10mg/Kg的
Figure BDA0002449116230006091
结肠炎的诱导
在雄性C57B1/6小鼠中通过从第0天到第5天暴露于3％DSS饮用水(MPBiomedicals#0260110)诱导结肠炎。在第3天再次制备新鲜的DSS/水溶液，并丢弃任何剩余的原始DSS溶液。
结肠炎的评估
每天称重所有动物并在给药时目测评估腹泻和/或血便的存在。小鼠接受两次视频内窥镜检查，一次在第10天，一次在第14天，以评估结肠炎的严重程度。从每只动物中在内窥镜检查期间识别的最严重的疾病区域捕获图像，并使用表2.1中所示的量规评估。此外，在使用该量规的内窥镜检查期间对粪便稠度进行评分(表2.2)(0＝正常，形成良好的颗粒，1＝粪便松散，柔软，保持形状，2＝粪便松散，水分过多的异常形态，3＝水样或腹泻，4＝血性腹泻)。在尸检时，收集肠内容物、外周血和组织以及盲肠/结肠内容物用于分析。
表2.1.内窥镜检查评分
分数 内窥镜检查评分说明
0 正常
1 血管分布损失
2 血管分布和脆性的损失
3 脆性和糜烂
4 溃疡和出血
表2.2.粪便稠度评分
分数 粪便稠度说明
0 正常，结构良好的颗粒
1 粪便松散，柔软，保持形状
2 粪便松散，水分过多的异常形态
3 水样或腹泻
4 血性腹泻
结肠炎治疗
由于其在治疗DSS诱导的结肠炎中的功效，在结肠炎的急性期期间用DATK32处理小鼠。从第0天到第14天，测试品的剂量为0.1mL/20g。DATK32每3天以25mg/kg的剂量腹膜内施用，并且每3天或每天以25mg/kg的剂量盲肠内施用。还有每天盲肠内注射5mg/kg的较低剂量。对照组未给予药物，并且每天腹膜内和盲肠内施用载体(无菌PBS)作为安慰剂药物。这些药物从第5至14天给药，即给药9天。剂量和组的更详细解释见表2.3。
表2.3.小鼠组
Figure BDA0002449116230006111
样品收集
在第14天在处死时收集肠内容物、外周血和组织，如下：在每个研究期结束时，在第14天内窥镜检查后立即通过CO2吸入使小鼠安乐死。通过心脏穿刺将血液收集到K2EDTA包被的管中，并以4000×g离心10分钟。保留血细胞颗粒并快速冷冻。然后将得到的血浆分成两个单独的冷冻管，100μL在一个管中，其余的在第二个管中。还收集血浆和细胞颗粒，快速冷冻，并在-80摄氏度下储存。ELISA用于测定大鼠IgG2A的水平。
从每只动物中取出盲肠和结肠，收集内容物，称重，并在分开的冷冻管中快速冷冻。切除结肠，冲洗，测量，称重，然后修剪至6cm长并分成5个。将最近端1cm的结肠快速冷冻，用于随后对抗DATK32水平的生物分析。在剩余的5cm结肠中，将最远端和近端1.5cm切片置于福尔马林中24小时，然后转移至70％乙醇中用于随后的组织学评估。将中间2cm部分纵向切成两半并放入两个单独的冷冻管中，称重，并在液氮中快速冷冻。
从所有动物中额外收集100μL全血，并对T辅助记忆细胞上的α4和β7表达进行FACS分析。立即将组织和血液置于FACS缓冲液(含有2.5％胎牛血清的1x PBS)中，并使用以下抗体组进行分析(表2.4)。
表2.4.用于FACS分析的荧光团标记抗体
Figure BDA0002449116230006121
结果
图39中的数据显示，与腹膜内施用DATK抗体的DSS小鼠相比，盲肠内施用DATK抗体的DSS小鼠体重减轻减少。图40中的数据显示，与腹膜内施用DATK抗体的DSS小鼠相比，盲肠内施用DATK抗体的DSS小鼠具有降低的DATK抗体血浆浓度。图41和42中的数据显示，与腹膜内施用DATK抗体的DSS小鼠相比，盲肠内施用DATK抗体的DSS小鼠在盲肠和结肠内容物中具有增加的DATK抗体浓度。图43和44中的数据显示，与腹膜内施用DATK抗体的DSS小鼠相比，经盲肠内施用DATK抗体的DSS小鼠在结肠组织中具有增加的DATK抗体浓度。图45和46中的数据显示，与盲肠内施用载体对照(PBS)相比，在盲肠内施用DATK抗体的DSS小鼠中进入结肠组织的水平增加。图47中的数据显示，与腹膜内施用DATK抗体的DSS小鼠中结肠组织的DATK抗体的浓度与DATK抗体的血浆浓度的比例相比，在盲肠内施用DATK抗体的DSS小鼠中结肠组织中的该比例增加。
图48中的数据显示，与腹膜内施用DATK抗体的DSS小鼠相比，盲肠内施用DATK抗体的DSS小鼠具有增加的血液Th记忆细胞百分比。
与载体相比，由于插管或盲肠内治疗，在临床观察或胃肠道特异性不良反应方面(包括粪便稠度和/或血便)没有观察到显著差异。没有报告由治疗产生的毒性。在终点(第14天)与载体对照相比，DATK32(5mg/kg，QD)治疗(IC)也发现体重减轻显著减少。DATK32(25mg/kg，QD)治疗组中的免疫组织化学染色显示通过盲肠内递送的DATK32在结肠组织的所有层中渗透，包括管腔粘膜、固有层、粘膜下层、肌层内膜。在结肠的所有区段中发现DATK32的分布，然而，在近端区域中检测到更高水平。与腹膜内给药相比(DATK32：25mg/kg，Q3D)相比，通过盲肠内给药(DATK32：25mg/kg和5mg/kg，QD)在胃肠道内容物和结肠组织中发现显著更高的DATK32平均浓度。当通过腹膜内给药(Q3D)递送时，DATK32的血液水平显著高于盲肠内给药(Q3D和QD)。DATK32(25mg/kg，QD)的药代动力学显示，与腹膜内给药后DATK32的平均浓度相比较，当通过盲肠内给药递送药物时的给药后1、2和4小时的胃肠道内容物以及在1、2、4和24小时的结肠组织中的DATK32的平均浓度显著更高。与通过腹膜内给药DATK32(Q3D 25mg/kg)的治疗组相比，通过盲肠内给药(QD 25mg/kg和QD 5mg/kg)治疗组的血液中的归巢T细胞(Th记忆细胞)的平均数显著更高。与通过腹膜内施用DATK32(Q3D25mg/kg)治疗的组相比，通过盲肠内施用DATK32(QD 25mg/kg和5mg/kg)治疗的组的派尔集合淋巴结中的Th记忆细胞的平均数量显著更低。与通过腹膜内施用DATK32(Q3D 25mg/kg)治疗的组相比，用DATK32通过盲肠内给药(QD和Q3D25mg/kg和QD 5mg/kg)治疗的组中肠系膜淋巴结(MLN)中的Th记忆细胞的平均数显著降低。
总之，这些数据表明，本文提供的组合物和装置可以抑制肠中的局部免疫应答，同时对动物的全身免疫应答具有较小的抑制作用。这些数据还表明，结肠中DATK-32抗体的释放可以导致白细胞聚集的抑制，并且可以提供结肠炎和肠的其他促炎性疾病的治疗。
实施例5.在雄性C57B1/6小鼠中进行盲肠内施用后DATK32生物分布的评估
本研究的目的是评估当在雄性C57B1/6小鼠中经盲肠内给药时DATK32的生物分布。在实验开始前至少10天，对一组动物进行盲肠插管的手术植入。足够数量的动物被植入，以允许24只插管动物参加主要研究(例如，31只动物)。如表3所示，在第0天通过盲肠内注射(IC)给动物施用载体或测试品。在测试品施用后3小时处死来自所有组的动物用于晚期样品收集。
材料和方法
小鼠
从查尔斯河实验室获得年龄为6-8周龄、体重20-24g的正常雄性C57Bl/6小鼠。将小鼠随机分成两组，每组12只，并按每笼每组12只圈养，并在进入研究前适应环境至少3天。动物室设置为每小时保持最少12至15次换气，自动计时器开启/关闭12小时的明/暗循环，并喂食Labdiet 5053无菌啮齿动物食物，随意施用水。
盲肠插管
将动物置于异氟烷麻醉下，通过腹部中线切口暴露盲肠。在远端盲肠中制造小点切口，其中插入1-2cm的插管。用5-0丝线用荷包缝合线封闭缝合切口。然后在左腹壁上制造切口，通过该切口，插管的远端被皮下插入并推到背部的背侧。然后在关闭腹壁之前用温热的盐水充分洗涤该部位。在肩胛骨之间的背部皮肤上也制造小切口，露出插管的尖端。使用缝合线、伤口夹和组织胶将插管固定在适当位置。所有动物接受1mL温热无菌盐水(皮下注射)并密切监测直至恢复，然后返回其笼中。所有动物在前3天接受0.6mg/kg的BID丁丙诺啡，并且在手术后的前5天每天接受10mg/Kg的
Figure BDA0002449116230006142
给药
如表3所示，在第0天按0.075mL/动物的体积IC施用于动物。
处死
在第0天给药后三小时，通过CO2吸入使所有动物安乐死。
样品收集
收集末梢血并使用K2EDTA作为抗凝剂制备血浆。将血浆分成两个冷冻管，50μL在一个管中(PK分析)，其余的在另一个(其他)管中。将两个样品在液氮中快速冷冻。将血浆储存在-80℃下用于后续分析。收集肠系膜淋巴结(mLN)，称重，并在液氮中快速冷冻。将肠系膜淋巴结储存在-80℃下用于后续分析。切除小肠并冲洗，解剖最远端的1cm髂骨，称重，并在液氮中快速冷冻。将样品储存在-80℃下用于下游分析。从每只动物中取出盲肠和结肠，收集内容物，称重，并在分开的冷冻管中快速冷冻。将样品储存在-80℃下用于下游分析。冲洗结肠，称重最近端1cm的结肠并在液氮中快速冷冻。快速冷冻的组织储存在-80℃。
表3.研究设计
Figure BDA0002449116230006141
结果
图63A-63F中的数据显示临床观察结果无显著差异。与施用载体对照的组相比，在通过盲肠内施用DATK32的组中未发现胃肠特异性作用或副作用。没有报告由治疗产生的毒性。在给药后3小时与施用载体对照的组相比，盲肠内施用DATK32的组中的DATK32水平在盲肠和结肠内容物和结肠组织中明显更高。在盲肠内施用DATK32的组中，在血浆、小肠和肠系膜淋巴结中也检测到少量DATK32。
实施例6.阿达木单抗应用于猪中TNBS损伤的粘膜表面(诱发的结肠炎)的药代动力学/药效动力学和生物利用度
这项非良好实验室规范(GLP)研究的目的是探讨阿达木单抗应用于约克郡-克罗斯农场猪的TNBS损伤的粘膜表面(诱发的结肠炎)时的PK/PD和生物利用度，并确定用于研究将由可摄入装置系统递送药物的适当的剂量和频率。可摄入装置系统将能够将TNF抑制剂(阿达木单抗)局部递送至患有炎性肠病(IBD)的人类患者的受损粘膜。当在第1天使用橡胶导管通过灌肠单次施用40mL与溶解于10mL水中的5g TNBS混合的100％乙醇(EtOH)导致预期的可再现诱导约克郡-克罗斯农场猪受损的粘膜表面(诱发的结肠炎)时，TNBS诱导的结肠炎模型得到验证。
该研究调查了与皮下给药相比，局部递送阿达木单抗是否会导致具有有限的药物到达全身循环的局部粘膜组织水平增加；与正常组织相比，受损组织中药物的局部粘膜组织水平是否更高；是否增加药物剂量会导致局部和远端TNBS受损组织中粘膜组织水平增加；以及局部递送阿达木单抗是否会导致受损组织、粪便和可能的血液中炎性细胞因子如TNFα的减少。
所有动物在第-2天进行直肠内三硝基苯磺酸(TNBS)给药以诱导慢性结肠炎。在结肠炎诱导之前，所有动物都禁食。在第-3天去除垫草并用橡胶垫代替，以防止摄入稻草垫料。剂量为40mL与5g TNBS稀释于10mL水中混合的100％EtOH，然后由兽医使用柔性管饲管直肠内滴注(设置在结肠远端的10cm部分和近端直肠，并使用两个Foley导管和60mL气囊保留12分钟)。诱导后约3天，结肠结构的宏观和微观改变是明显的：观察到一些坏死，结肠增厚和显著的组织学变化(图49和50)。该研究使用15只雌性猪(研究开始时约35至45公斤)分配至以下五组中的一组。第1组使用三只动物作为治疗对照。第1组中的每只动物通过皮下注射施用在0.8mL生理盐水中的40mg阿达木单抗。第2、3、4和5组的每组使用3只动物。将这些组中的动物按在0.8mL生理盐水中的40mg的阿达木单抗直肠内给药。在研究第1天将试验药物(阿达木单抗)施用所有组。直肠内给药(第2-5组)由兽医外科医生施用于肠受损粘膜表面。在第-3天(n＝15)、-1天(n＝15)和给药后6(n＝15)、12(n＝12)、24小时(n＝9)和48小时(n＝6)小时从所有动物(头部、颈静脉或导管)收集血液(EDTA)(总共87次采血)。将EDTA样品分成两等份，并将一个样品离心以作为PK血浆，并冷冻保存(-80℃)用于PK分析和报告。对于相同的时间点收集粪便样品(87次粪便收集)。将粪便样品在液氮中快速冷冻，并且然后在-80℃下储存以分析药物水平和炎性细胞因子水平。对第2、3、4和5组进行安乐死，并分别在给药后6、12、24和48小时进行肉眼尸检和组织收集。类似地对第1组实施安乐死并在给药后48小时进行尸体剖检。按照时间表通过注射兽医批准的安乐死溶液使动物安乐死。为避免自溶变化，在安乐死之后立即收集结肠组织，打开，用盐水冲洗，并进行结肠的详细肉眼检查以鉴定与TNBS损伤相关的肉眼可见的发现。组织样品取自近端、中部和远端横结肠；给药部位；和远端结肠。将每个组织样品分成两个近似的一半；将一个组织切片置于10％中性缓冲福尔马林(NBF)中，并由委员会认证的兽医病理学家评估，并将剩余的组织切片在液氮中快速冷冻并在-80℃下冷冻储存。从第-3天开始每天记录临床症状(健康状况不佳，行为改变等)。每天进行一次或两次额外的笔端观察。兽医检查观察到健康状况不佳的动物。在第-3天和预定的安乐死之前测量所有动物的体重。下面的表4.1显示了研究设计。
材料和方法
测试品
阿达木单抗(EXEMPTIATM)是肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂。将单剂量预装在注射器中(40mg，体积为0.8mL)。
表4.1.研究设计表
Figure BDA0002449116230006171
结果
在血浆中测试的所有时间点都检测到皮下施用的阿达木单抗，而在血浆中几乎不能检测到局部施用的阿达木单抗(图51和52)。阿达木单抗的局部递送和皮下递送均导致TNBS诱导的结肠炎动物的结肠组织中TNFα水平降低，但阿达木单抗的局部递送能够实现TNFα水平的更大降低(图53和54)。
对阿达木单抗的皮下或直肠内给药都具有良好的耐受性，并且不会导致死亡、发病、不良临床观察或体重变化。与皮下递送相比，当应用于受损的肠粘膜表面时，通过直肠内给药的阿达木单抗治疗观察到总TNBS相关炎症反应水平降低。与直肠内给药后的血液浓度相比，皮下递送后在血液中测量到阿达木单抗的浓度显著更高。与阿达木单抗皮下注射相比，阿达木单抗直肠给药随着时间的推移(6～48h)降低了总TNFα和标准化TNFα浓度，并且与给药组相比，在终点(48h)降低TNFα更有效。
总之，这些数据表明，本文提供的组合物和装置可以抑制肠中的局部免疫应答，同时对动物的全身免疫应答具有较小的抑制作用。例如，这些数据显示使用如本文所述的装置进行阿达木单抗的盲肠内施用可以提供阿达木单抗局部递送至疾病位点，而不抑制全身免疫应答。这些数据还表明，使用本文所述的装置局部施用阿达木单抗可导致疾病动物中TNFα水平的显著降低。
实施例7.全身与盲肠内递送环孢菌素A的比较
本研究的目的是比较免疫抑制剂(环孢菌素A；CsA)在全身给药与盲肠内给药施用于葡聚糖硫酸钠盐(DSS)诱导的结肠炎的雄性C57B1/6小鼠中时的疗效。
实验设计
在实验开始前至少10天，一组动物接受盲肠插管的手术植入。足够数量的动物(例如，76只动物)接受植入以允许44只插管动物参加主要研究。从第0天至第5天，通过暴露于3％DSS处理的饮用水，在60只雄性C5B1/6小鼠中诱导结肠炎。八只其他动物的两组(插管和非插管)作为无疾病对照(第1组和第2组)。如表5.1所示，从第0天至第14天通过腹膜内注射(IP)，口服管饲(PO)或盲肠内注射(IC)给动物服用环孢菌素A。每天称重所有动物并在给药时肉眼评估腹泻和/或血便的存在。在第10天和第14天对小鼠进行视频内窥镜检查以评估结肠炎的严重程度。从每只动物在内窥镜检查期间鉴定的最严重疾病区域捕获图像。另外，使用表5.2中定义的参数在内窥镜检查期间对粪便稠度进行评分。在第14天进行内窥镜检查后，处死所有组的动物并进行末端样品采集。
具体地，在给药前的给药时间点或给药后1、2和4小时(n＝3/组/时间点)处死在第14天给药的所有治疗组中的动物。通过心脏穿刺收集末梢血，并使用K2EDTA作为抗凝血剂制备血浆。保留血细胞颗粒并快速冷冻，同时将所得血浆分成两个单独的冷冻管，在一个管中100μL，其余的在第二个管中。另外，从所有动物中取出盲肠和结肠；收集内容物，称重，并在单独的冷冻管中快速冷冻。然后将结肠冲洗，测量，称重，然后修剪至6cm长并分成五块。将最近端1cm的结肠快速冷冻用于随后对环孢菌素A水平的生物分析。在剩余的5cm结肠中，最远端和近端1.5cm切片各自置于福尔马林中24小时，然后转移至70％乙醇用于随后的组织学评估。将中间2cm部分纵向切成两半并放入两个单独的冷冻管中，称重，并在液氮中快速冷冻。将所有血浆和冷冻结肠组织储存在-80℃下以进行选择的终点分析。对于组1-4中的所有对照动物，从所有动物中另外收集100μL全血，然后对其进行处理以对TH记忆细胞上的α4和β7表达进行FACS分析。研究细节见表5.1。
表5.1.研究设计
Figure BDA0002449116230006181
Figure BDA0002449116230006191
实验步骤
盲肠插管
将动物置于异氟烷麻醉下，通过腹部中线切口暴露盲肠。在远端盲肠中制造小点切口，其中插入1-2cm的插管。用5-0丝线用荷包缝合线封闭缝合切口。然后在左腹壁上制造切口，通过该切口，插管的远端被皮下插入并推到背部的背侧。然后在关闭腹壁之前用温热的盐水充分洗涤该部位。在肩胛骨之间的背部皮肤上也制造小切口，露出插管的尖端。使用缝合线、伤口夹和组织胶将插管固定在适当位置。所有动物接受1mL温热无菌盐水(皮下注射)并密切监测直至恢复，然后返回其笼中。所有动物在前3天接受0.6mg/kg的BID丁丙诺啡，并且在手术后的前5天每天接受10mg/Kg的
Figure BDA0002449116230006202
疾病诱导
在第0天通过向饮用水中加入3％DSS(MP Biomedicals，目录号0260110)诱导结肠炎。在第3天制备新鲜的DSS/水溶液，并丢弃任何剩余的原始DSS溶液。
给药
如表5.1所示，在第0-14天，通过口服管饲法(PO)，腹膜内注射(IP)或盲肠内注射(IC)以0.1mL/20g的量向动物给药。
体重和生存
每天观察动物(体重、发病率、存活率、腹泻和/或血便的存在)，以评估治疗组之间可能的差异和/或治疗产生的可能毒性。
动物发现死亡或垂死
每天监测动物，对表现出重量损失大于30％的动物实施安乐死，并且不从这些动物收集样品。
内窥镜检查
在第10天和第14天，在异氟烷麻醉下，使用小动物内窥镜(Karl StorzEndoskope，Germany)对每只小鼠进行视频内窥镜检查。在每次内窥镜检查过程中，记录静止图像以及视频以评估结肠炎的程度和对治疗的反应。此外，我们试图从每只动物在内窥镜检查中发现的最严重疾病区域捕获图像。使用0-4评分对结肠炎严重程度进行评分(0＝正常；1＝血管分布损失；2＝血管分布和脆性损失；3＝脆性和糜烂；4＝溃疡和出血)。另外，使用表5.2中定义的参数在内窥镜检查期间对粪便稠度进行评分。
表5.2.粪便稠度
分数 描述
0 正常，结构良好的颗粒
1 粪便松散，柔软，保持形状
2 粪便松散，水分过多的异常形态
3 水样或腹泻
4 血性腹泻
用于FACS的组织/血液
将组织和血液立即置于FACS缓冲液(含有2.5％胎牛血清(FCS)的1x磷酸盐缓冲盐水(PBS))中，并使用表5.3中的抗体组进行分析。
表5.3.FACS抗体组
Figure BDA0002449116230006201
Figure BDA0002449116230006211
结果
图55中的数据显示，与口服环孢菌素A的DSS小鼠相比，在盲肠内施用环孢菌素A的DSS小鼠中观察到体重减轻的减少。图56中的数据显示，与口服施用环孢菌素A的DSS小鼠相比，在盲肠内施用环孢菌素A的DSS小鼠的环孢菌素A血浆浓度下降。图57-59中的数据显示，与口服环孢菌素A的DSS小鼠结肠组织中环孢菌素A的浓度相比，通过盲肠内施用环孢菌素A的DSS小鼠的结肠组织中环孢菌素A的浓度增加。
图60中的数据显示，与口服环孢菌素A的DSS小鼠相比，通过盲肠内施用环孢菌素A的DSS小鼠在结肠组织中具有增加的IL-2浓度。图61中的数据显示，与口服环孢菌素A的DSS小鼠相比，通过盲肠内施用环孢菌素A的DSS小鼠在结肠组织中具有降低的IL-6浓度。
总之，这些数据表明，本文提供的组合物和装置可以抑制肠中的局部免疫应答，同时对动物的全身免疫应答具有较小的抑制作用。例如，这些数据表明本发明的组合物和装置可用于将环孢菌素A释放到肠中，并且这导致结肠中的选择性免疫抑制，同时对所述组织外的免疫系统具有较小的影响。这些数据还表明，本发明的组合物和装置将提供结肠炎和肠的其他促炎性疾病的治疗。
实施例8.波纹管测试：药物稳定性实验台测试
进行实验以评估波纹管材料对用作可配发物质的药物的功能的影响。实验还评估了由于波纹管中的保质期对药物功能的影响。
阿达木单抗被加载到模拟装置治具(包含渐缩的硅树脂波纹管或平滑PVC波纹管)中并允许在室温且同时避光的情况下培养4、24或336小时。图64例示出渐缩的硅树脂波纹管，并且图65例示出在模拟装置治具中的渐缩的硅树脂波纹管。图66例示出平滑的PVC波纹管，并且图67例示出在模拟装置治具中的平滑的PVC。
药物随后使用相应配发系统提取并通过竞争抑制试验进行检测。检测方法已从文献(Velayudhan等人,“Demonstration of functional similarity of proposedbiosimilar ABP501 to adalimumab”BioDrugs 30:339-351(2016)和Barbeauet等人,“Application Note:Screening for inhibitors of TNFα/s TNFR1 Binding usingAlphaScreenTMTechnology”.PerkinElmer Technical Note ASC-016.(2002))以及使用控制药物的预检测研发工作和使用所提供AlphaLISA检测试剂盒的实验中发展。图68表明在实验中执行的竞争试验的原理。
波纹管加载如下：以70％乙醇无菌清扫模拟可摄入装置治具的配发端口；允许空气干燥1分钟；使用阿达木单抗递送注射器对每组波纹管加载200μL药物；对加载的装置照相；轻轻旋转所述装置而使得药物被允许接触所有波纹管表面；保护波纹管避光；和在室温培养预定时段以允许药物与所有波纹管表面全接触。
药物按如下方法提取：在培养时段完成之后，使装置治具倒转，使得配发端口位于无菌收集微量离心管上方且在培养皿下方；将五立方厘米的空气抽入适合注射器中；将卢尔锁(lure lock)附接到装置治具；注射器用于将正压力轻微施加于具有空气的波纹管，使得在收集微量离心管中回收药物；如果可能，则拍摄药物配发视频；样本从每个波纹管类型中收集；控制药物样本通过将200μL药物从商用配发注射器直接配发到无菌微量离心管而被收集；无控制药物的样本通过使用无菌移液管将200μL磷酸盐缓冲液(PBS)直接配发到无菌微量离心管中而被收集；收集的药物被保护避光；以及药物在无菌PBS中被稀释到以下稀释范围(250、125、25、2.5、0.25、0.025、0.0125、0.0025μg)以确定药物的IC50范围。
为了确定储存条件可对装置中的药物效力具有的任何影响，药物(储存在注射器、硅树脂波纹管、或PVC波纹管中)在室温储存，同时保护避光持续24小时或72小时。样本然后被提取，并重复前述段落中的步骤。
使用AlphaLISA(LOCITM)检测方法。人类TNFα标准稀释范围的制备如表6中所述。
表6
Figure BDA0002449116230006221
Figure BDA0002449116230006231
检测执行如下：以上标准稀释范围处于分立96孔板中；为了确保一致混合，样本以移液管轻轻上下混合5次；根据表7所示的检测布局示意图制备384孔检测板；来自先前做出的稀释板的5微升的10,000pg/ml标准TNFα添加到如表7所示的各相应浓度中；5微升的恢复药物(直接来自商用注射器(A)、来自硅树脂波纹管(B Si)、来自PVC波纹管(B PVC)、或来自PBS控制物(C))添加到对应的表5中所述的孔中；检测板在室温培养1小时，同时避光；10微升受体珠添加到每个先前处理的孔；所述孔在室温培养30分钟，同时避光；10μL的生物素化抗体添加到每个先前处理的孔；所述孔在室温培养15分钟，同时避光；使室内光变暗，并且25微升链霉亲和素(SA)供体珠添加到每个先前处理的孔；所述孔在室温培养30分钟，同时避光；所述板以阿尔法模式读取；并且记录结果。当在各个步骤中添加试剂时，每个孔被上下移液3次以实现良好混合。
表7
Figure BDA0002449116230006232
数据显示在图69-71中。数据表明：在保存期限4小时、24小时或336小时后，波纹管不会负面影响药物功能。从波纹管配发的药物的IC50值与标准配发方法的IC50值(表6)相当。注意到24小时之后的波纹管曲线中有轻微右移(图70)，但是此偏移完全处于曲线的误差棒内。表8-11分别表现出图69-71的数据。应注意，当比较浓度范围中的检测件之间的平均(n＝5)RFU数据时，可看出显著差别(p<0.05)。然而，这些显著差别随时间推移不利于任一检测件，这意味着它们无关于响应于药物的材料性能(图69-71)。
表8
针控制(A) 硅树脂波纹管(B) PVC波纹管(C)
4小时 0.0174 0.0169 0.0172
24小时 0.0180 0.0180 0.0180
336小时 0.0144 0.0159 0.0163
表9
统计(学生T检测，双尾、非成对式，显著性p<0.05)
Figure BDA0002449116230006241
*p<0.5数据组
表10
统计(学生T检测，双尾、非成对式，显著性p<0.05)
Figure BDA0002449116230006242
*p<0.5数据组
表11
统计(学生T检测，双尾、非成对式，显著性p<0.05)
Figure BDA0002449116230006243
Figure BDA0002449116230006251
*p<0.5数据组
实施例9.在雄性C57Bl/6小鼠中DSS诱导的结肠炎中的全身与盲肠内递送SMAD7的生物分布的比较研究
该研究的目的是比较新型测试品(例如，荧光SMAD7反义寡核苷酸(SMAD7 AS)，当在DSS诱导的结肠炎的雄性C57B1/6小鼠中全身给药与盲肠内给药时的功效。
实验设计
在实验开始前至少10天，一组动物接受盲肠插管的手术植入。对足够数量的动物(即16只动物)进行植入以允许12只插管动物参加主要研究。
通过从第0天至第5天暴露于3％DSS处理的饮用水，在12只雄性C57B1/6小鼠(组4-5)中诱导结肠炎。每组另外六只动物共三组(n＝6个插管的；n＝12个非插管的；组1-3)用作无疾病对照(组1-3)。每天称重所有动物并在此期间肉眼评估腹泻和/或血便的存在。
如表12所示，在第9天通过口服管饲法(PO)或盲肠内注射(IC)给动物施用一次测试品。第0组中的动物未给药。第2组和第4组的动物用SMAD7反义物PO给药。第3组和第5组的动物用SMAD7反义物IC给药。
在第10天给药后12小时，通过CO2吸入使所有动物安乐死。将末梢血收集到两个K2EDTA管中并处理用于获得血浆。将血浆和颗粒样品在液氮中快速冷冻并储存在-80℃。移除盲肠内容物，并将内容物分成两等份。将两个等份试样称重并在液氮中的单独冷冻管中快速冷冻。将盲肠切除并纵向切成两半；将每个片分别称重并在液氮中快速冷冻。除去结肠内容物，并将内容物分成两等份。将两个等份试样称重并在液氮中的单独冷冻管中快速冷冻。然后冲洗结肠，收集最近端的2cm结肠。这个2cm的部分纵向被分成两半；将每个片分别称重并在液氮中快速冷冻。将速冻血颗粒、盲肠/结肠内容物和组织样品用于下游荧光测定法或RP-HPLC研究。设计的细节显示在表12中。
表12：研究设计
Figure BDA0002449116230006252
Figure BDA0002449116230006261
*每小鼠。TA以0.075mL/动物施用。
**动物在第9天给药，12小时后进行采集。
材料和方法
小鼠
从查尔斯河实验室获得年龄为6-8周龄、体重20-24g的正常雄性C57Bl/6小鼠。将小鼠随机分成5组，每组6只小鼠，每笼圈养8-15只，并在进入研究前适应环境至少3天。动物室设置为每小时保持最少12至15次换气，自动计时器开启/关闭12小时的明/暗循环，并喂食Labdiet 5053无菌啮齿动物食物，随意施用水。
盲肠插管
将动物置于异氟烷麻醉下，通过腹部中线切口暴露盲肠。在远端盲肠中制造小点切口，其中插入1-2cm的插管。用5-0丝线用荷包缝合线封闭缝合切口。然后在左腹壁上制造切口，通过该切口，插管的远端被皮下插入并推到背部的背侧。然后在关闭腹壁之前用温热的盐水充分洗涤该部位。在肩胛骨之间的背部皮肤上也制造小切口，露出插管的尖端。使用缝合线、伤口夹和组织胶将插管固定在适当位置。所有动物接受1mL温热无菌盐水(皮下注射)并密切监测直至恢复，然后返回其笼中。所有动物在前3天接受0.6mg/kg的BID丁丙诺啡，并且在手术后的前5天每天接受10mg/Kg的
Figure BDA0002449116230006262
疾病诱导
在第0天通过在饮用水中添加3％DSS(MP Biomedicals，目录号0260110)诱导结肠炎。在第3天提供新鲜的DSS/水溶液，并丢弃任何剩余的原始DSS溶液。
体重和生存
每天观察动物(体重、发病率、存活、腹泻和/或血便的存在)，以评估治疗组之间可能的差异和/或治疗产生的可能的毒性。
动物发现死亡或垂死
每天监测动物。将表现出体重减轻大于30％的动物安乐死，并且不从这些动物收集样品。
给药
如表12所示，在第9天通过口服管饲法(PO)或盲肠内注射(IC)给动物施用一次测试品。第0组的动物未给药。第2组和第4组中的动物用SMAD7反义物PO给药。第3组和第5组的动物用SMAD7反义物IC给药。
处死
在第10天给药后12小时，通过CO2吸入使所有动物安乐死。
样品收集
在第10天处死时按如下方法收集肠内容物、外周血和组织：
血液/血浆
将末梢血收集到两个K2EDTA管中并处理用于获得血浆。在离心之前记录每个血液样品的大致体积。将血浆和颗粒样品在液氮中快速冷冻并储存在-80℃。第一颗粒样品(样品1)用于荧光测定。第二颗粒样品(样品2)用于RP-HPLC。
盲肠内容物
移除盲肠内容物，并将内容物分成两等份。将两个等份试样称重并在液氮中的单独冷冻管中快速冷冻。第一份样品(样品1)用于荧光测定。第二份样品(样品2)用于RP-HPLC。
盲肠
将盲肠切除并纵向切成两半；将每个片分别称重并快速冷冻。第一份样品(样品1)用于荧光测定。第二份样品(样品2)用于RP-HPLC。
结肠内容物
移除结肠内容物，并将内容物分成两等份。将两个等份试样称重并在液氮中的单独冷冻管中快速冷冻。第一份样品(样品1)用于荧光测定。第二份样品(样品2)用于RP-HPLC。
结肠
冲洗结肠，收集最近端的2cm结肠并纵向切成两半。将每个片分别称重并在液氮中快速冷冻。第一份样品(样品1)用于荧光测定。第二份样品(样品2)用于RP-HPLC。
SMAD7反义生物分析
将速冻以用于荧光测定的样品在0.5mL缓冲液RLT+(Qiagen)中匀浆。将匀浆物离心(4000×g；10分钟)，收集上清液。将40微升样品在200μL碳酸氢盐溶液中1：6稀释，并在荧光板读数器(485激发；535发射)上分析100μL稀释的上清液，重复2次。
在上述之前，如下进行测定开发。从未给药动物收获样品(如样品收集中所示)并快速冷冻。然后将样品在0.5mL缓冲液RLT+中匀浆，将匀浆物离心(4000×g；10分钟)并收集上清液并用碳酸氢盐溶液1：6稀释(即，将0.5mL上清液加入到2.5mL PBS中)。将每个稀释样品的等分试样(0.200mL(每个复制品90μL)移液到15(14稀释的FAM-AS-SAMD7+空白对照)Eppendorf管中。放置一个管以用作空白样品。然后将10微升荧光标记的SMAD7反义物掺入所有其他样品中，以分别达到50μg/mL、16.67μg/mL、5.56μg/mL、1.85μg/mL、0.62μg/mL、0.21μg/mL、0.069μg/mL、0.023μg/mL、7.6ng/mL、2.5ng/mL、0.847ng/mL、0.282ng/mL、0.094ng/mL和0.024ng/mL的终浓度。制备荧光标记的SMAD7反义物并连续稀释，使得加入每个器官匀浆样品的体积对于上述每个浓度是相同的。在荧光板读数器(485激发；535发射)上分析这些样品，重复2次。
用于RP-HPLC的处理
将速冻用于RP-HPLC的样品在缓冲液RLT+(Qiagen)中匀浆。将匀浆物离心(4000×g；10分钟)，并使用上清液进行RP-HPLC分析。
结果
图73和74中的数据显示，与口服施用SMAD7反义寡核苷酸的经或不经DSS处理的小鼠相比，盲肠内施用SMAD7反义寡核苷酸的经或不经DSS处理的小鼠的盲肠组织和结肠组织中存在明显更多的SMAD7反义寡核苷酸。图75中的数据显示，口服或盲肠内施用SMAD7反义寡核苷酸治疗经或不经DSS处理的小鼠的盲肠内容物中的SMAD7反义寡核苷酸具有大约相同的水平。在SMAD7反义寡核苷酸治疗的小鼠的血浆或白细胞颗粒中未发现SMAD7反义寡核苷酸。通过PO与IC，在临床观察、由于FAM-AS-SMAD7治疗引起的胃肠道特异性副作用或毒性方面没有观察到显著差异。在所有治疗组中，在血浆和全血细胞颗粒中均未发现FAM-AS-SMAD7的荧光检测。在正常和DSS诱导的模型中，与PO相比，在盲肠内递送时在盲肠组织中发现FAM-AS-SMAD7的荧光信号(RFU)明显更高(图83)。在盲肠内递送时，在结肠组织中也发现了略微更高的RFU；然而，总信号低10倍(图84)。在正常小鼠模型中，与PO相比，盲肠内递送时在结肠内容物中发现RFU明显更高(图85)。在所有治疗组中在盲肠内容物中均未观察到此结果(图86)，这表明盲肠内递送时对来自盲肠内容物的盲肠组织中的寡核苷酸更好的组织吸收性，但是在治疗后12小时结肠内容物中并不如此。
实施例10.在约克郡-克罗斯农场猪中通过口服vs盲肠内可摄入装置递送的他克莫司的组织、血浆和胃肠道内容物的药代动力学的比较
这项研究的主要目的是比较在正常约克郡-克罗斯农场猪中通过口服和盲肠内可摄入装置递送他克莫司的组织、血浆和胃肠道内容物的药代动力学。
本研究比较了如下给药效果：单次盲肠使用含有0.8mL无菌载体溶液(80％乙醇，20％蓖麻油(HCO-60))的可摄入装置；单次口服剂量的他克莫司，4mg/0.8mL(在无菌载体溶液中)；单次盲肠内施用可摄入装置，该装置含有1mg/0.8mL(在无菌载体溶液中)、2mg/0.8mL(在无菌载体溶液中)或4mg/0.8mL(在无菌载体溶液中)。
该研究在研究开始时使用五组的三只雌性猪，体重约45至50kg。将猪随机放入动物室/围栏中，因为它们从递送载体转移而不考虑组。组号按室号顺序分配到室。没有采用进一步的随机化程序。研究设计见表13。
表13.研究设计表
Figure BDA0002449116230006291
Figure BDA0002449116230006301
注释：
*对于建议的药物剂量，动物体重为约45-50千克。
**在所有动物中手术放置IC端口以对照。
***组织样品[药物](五个胃肠道部分盲肠(CAC)；近端结肠(PCN)；横结肠(TCN)；远端结肠(DCN)；直肠(RTM)，加肠系膜淋巴结和派尔集合淋巴结)。
****管腔内容物(盲肠(CAC)；近端结肠(PCN)；横结肠(TCN)；远端结肠(DCN)；直肠(RTM))。
组1中的动物接受含有0.8mL介质溶液(80％乙醇，20％HCO-60)的可摄入装置。第2组动物口服4mL他克莫司液体制剂，每只动物按4mg/0.8mL(Prograf：5mg/mL)。第3组中的动物盲肠内接受每个可摄入装置含有1mg/0.8mL他克莫司的可摄入装置。第4组中的动物盲肠内接受每个可摄入装置含有2mg/0.8mL他克莫司的可摄入装置。第5组中的动物盲肠内接受每个可摄入装置含有4mg/0.8mL他克莫司的可摄入装置。为了控制手术的潜在混杂效应，所有组在第-11天禁食至少24小时，然后进行麻醉，然后在第-10天由兽医通过外科手术放置盲肠端口。在第1天给药前，所有动物禁食至少12小时。在第1天(下午6-8点)通过盲肠内给药(IC)或口服给药(PO)给动物给药。所有动物在给药后约4小时(给药后11-12点)恢复喂食。
组1(载体对照)的动物在第1天给予含有0.8mL载体溶液(80％酒精，20％蓖麻油(HCO-60))的单个盲肠内可摄入装置。在第-10天，将动物麻醉，并且兽医外科医生在每只动物中手术放置盲肠内端口。在第1天，将每只动物放入吊索中，然后由兽医将一个含有0.8mL载体溶液(80％酒精，20％蓖麻油(HCO-60))的单个盲肠内可摄入装置通过每只动物的盲肠端口引入盲肠中。在可摄入装置放入后，将动物从吊索中取出并放回其围栏中并提供水。所有动物都在给药后4小时恢复饲养。使用粪便拭子(直肠拭子)收集来自可摄入装置放置后1、3、6和12小时的每一个动物的直肠内容物样品，用于药代动力学分析。共收集了60个样品。
如果有的话，用粪便拭子(Copan Diagnostics Nylon Flocked Dry Swabs，502CS01)收集大约200-400mg的直肠内容物。将粪便拭子预先称重并在收集管(无菌管和Cap No Media，PFPM913S)中收集后称重，并记录样品重量。粪便拭子通过断点破裂，并储存在收集管中，并立即冷冻在-70℃下。在给药前和给药后1、2、3、4、6和12小时的每个时间点，将全血(2mL)收集到K2EDTA包被的管中以进行药代动力学。在安乐死之后立即收集组织。共收集了105个样品。
对于组织尸检，将小肠液和盲肠液分别从所有动物收集到两个单独的方形塑料瓶中，并储存在-20℃。从每组中的一只动物测量盲肠和结肠的长度和直径并记录以供参考。收集组织用于药代动力学分析，包括肠系膜淋巴结、派尔集合淋巴结和五个胃肠节段(包括盲肠、近结肠、横结肠、远结肠和直肠)。称重所有样品，并记录组织样品重量。在五个胃肠节段的每一个中，通过使用8.0mm穿孔活检工具在三个不同区域收集组织样品，该区域中粘膜表面可见并且未被管腔内容物覆盖。将约3克总穿孔样品收集到预先称重的15mL锥形管中，记录组织重量。从不同区域收集三个肠系膜淋巴结并称重。收集至少一个派尔集合淋巴结并称重。将组织在液氮中快速冷冻并在约-70℃或更低温度下冷冻储存(总共105个样品)。
收集来自五个胃肠节段(盲肠、近结肠、横结肠、远结肠和直肠)中每一个的组织表面的管腔内容物(总共75个)用于药代动力学分析。在预先称重的15mL锥形管中收集内容物并记录样品重量。将样品快速冷冻在液氮中，在约-70℃或更低温度下冷冻保存。
在除去管腔内容物后，在上述五个组织胃肠节段的每个节段中通过8.0mm穿孔活组织检查收集来自3个不同区域的另一组组织样品。将约3克总穿孔样品收集到预先称重的15mL锥形管中，记录组织重量(总共75个)。将组织在液氮中快速冷冻并在约-70℃或更低温度下冷冻储存。
在每组处理的一只动物中将30cm长的空肠(分成两个15cm长度)和剩余的远端和横向结肠组织样品(在收集组织和管腔内容物用于PK后)收集，快速冷冻在液氮中，在约-70℃或更低温度下冷冻保存。在分析之前，将用于药代动力学分析的所有样品储存在干冰上。
在第1天给组2动物单次口服剂量的他克莫司4mg/0.8mL(0.08mg/kg)(在载体溶液中)。血浆、直肠内容物样品、组织收集、GI内容物收集和相关程序/储存/运输与组1中使用的相同。
在第1天由兽医向组3动物施用含有他克莫司1mg/0.8mL(0.02mg/kg)(在载体溶液中)的单个盲肠内可摄入装置。血浆、直肠内容物样品、组织收集、GI内容物收集和相关程序/储存/运输与组1中使用的相同。分析所有样品的他克莫司。
在第1天由兽医向组4动物施用2mg/0.8mL(0.04mg/kg)的他克莫司(在无菌载体溶液中)的单个盲肠内可摄入装置。血浆、直肠内容物样本、组织收集、GI内容收集及相关程序/存储/装运与组1中使用的相同。分析所有样品的他克莫司。
在第1天由兽医向组5动物施用含有他克莫司4mg/0.8mL(0.08mg/kg)(在载体溶液中)的单个盲肠内可摄入装置。血浆、直肠内容物样本、组织收集、GI内容收集及相关程序/存储/装运与组1中使用的相同。分析所有样品的他克莫司。
从第-10天至第-5天的每天和第1天进行详细的临床观察。每天至少进行一次额外的笔端观察。从给药到安乐死，动物在整个12小时内保持恒定的临床观察。在第-10天、第-5天和第1天的给药前收集体重。通过注射兽医批准的安乐死制剂使动物安乐死。
测试品和配方
1.载体溶液，20mL
描述：80％酒精，20％PEG-60蓖麻油
物理特征：澄清的液体溶液。
2.Prograf(他克莫司注射液)，10安瓿
描述：含有相当于1mL中5mg无水他克莫司的无菌溶液。他克莫司是大环内酯类免疫抑制剂和Prograf的活性成分。0.8mL的Prograf(5mg/mL)通过口服管饲法施用于第2组的每只动物。通过使用载体溶液将Prograf(5mg/mL)稀释2倍(2.5mg/mL)和4倍(1.25mg/mL)。将各0.8mL的每一浓度(1.25mg/mL、2.5mg/mL和5mg/mL)的Prograf注射到DSS可摄入装置中，用于组3、4和5。
配方：每mL含有聚氧乙烯60氢化蓖麻油(HCO-60)200mg，和脱水醇，USP，80.0％v/v。
物理特征：澄清的液体溶液。
3.含有他克莫司的DDS可摄入装置
描述：对于第1组，含有载体溶液的三(3)个DDS可摄入装置；对于第3组，含有1mg他克莫司的三(3)个DSS可摄入装置；对于第4组，含有2mg他克莫司的三(3)个DDS可摄入装置；以及对于第5组，含有4mg他克莫司的三(3)个DDS可摄入装置。
适应
在研究开始前使动物适应至少7天。健康状况不佳的动物不参加研究。
同时用药
除了兽医批准的麻醉剂和手术期间用于安装回盲肠端口的药物，或用于载体或测试品给药，以及手术后的镇痛和抗生素，不再使用其他药物。
饲养
在给药前，所有猪在麻醉前至少禁食24小时或过夜，并适当地为手术用药。否则，动物随意喂食。在供应到自动供水系统之前，将自来水减压并通过颗粒过滤器，然后通过碳过滤器。水随意供应。饲料或水中没有已知会干扰本研究的污染物。
结果
图76中的数据显示，与口服他克莫司的猪相比，通过盲肠内施用他克莫司的猪的盲肠组织和近结肠组织中他克莫司的平均浓度更高。所有血谷浓度都<10ng/mL并且暴露AUC<2000-12ng.h/mL(图87-89)。与PO递送他克莫司后的Cmax值(0.09mg/kg)相比，当通过IC胶囊递送时在用高(0.09mg/kg)和中等(0.04mg/kg)剂量的他克莫司治疗的组中观察到显著更高的Cmax值(9.20±3.30和21.80±4.73ng/mL)。与通过PO施用他克莫司的动物中观察到的水平相比，在用通过IC胶囊递送的高和中等剂量他克莫司治疗的组中观察到显著更高的组织(螺旋和横结肠)和管腔内容物(螺旋、横和远端结肠)浓度。尽管全身浓度相当于低剂量IC组(0.02mg/kg)，但在通过PO向动物递送他克莫司时，在组织中未检测到可测量的他克莫司水平(图90和91)。在IC胶囊组中，在治疗后12小时观察到较高的直肠内容物浓度(图92)，而在PO组中未观察到可检测的水平。
这些数据表明，他克莫司的盲肠内给药能够将他克莫司局部递送至哺乳动物胃肠道中的组织，同时不会降低哺乳动物的全身免疫系统。
实施例11.在DSS诱导的结肠炎中在约克郡-克罗斯农场猪中通过SC vs盲肠内可摄入装置递送的阿达木单抗的组织、血浆和胃肠道内容物的药代动力学的比较
这项非良好实验室规范(GLP)研究的目的是探讨当应用于约克郡-克罗斯农场猪中的(硫酸葡聚糖)DSS诱导结肠炎时，阿达木单抗的PK/PD和生物利用度，以及评估猪中DSS结肠炎中的局部修美乐(Humira)(阿达木单抗或ADA)。通过经由口服胃内插管每天一次施用DSS持续连续7天，在断奶的约克郡-克罗斯农场猪中诱导结肠炎。基于用于在断奶仔猪中诱导结肠炎的剂量和方案选择剂量水平。第2组和第3组的DSS剂量分别为1.275或2.225g/k/天。
这项研究使用了一组19至21天龄的断奶仔猪，以及2组3只、19至20天龄的断奶仔猪，它们在到达时体重为6.5到7.5kg。为了诱导结肠炎，在研究的第1天到第7天(包括第7天)，对第2组和第3组中的动物每天施用一次口服(胃内插管)剂量的8.5％或15％w/v的DSS，剂量水平分别为1.275或2.25g/kg/天(分别是第2组和第3组，早晨喂食前2小时)。第1组对照动物仅施用无菌盐水。将每只动物放在吊索中给药。在每次给药前将动物禁食至少6小时。参见下文研究表。
Figure BDA0002449116230006341
1.动物重约6.5-7.5kg。
2.在整个研究过程中密切监测每日临床体征和体重。如果在给药后第1-3天观察到严重的临床体征或体重减轻，则将DSS给药缩短至5天。
3.通过内窥镜将0.8mL的ADA溶液直肠给药至结肠。
4.进行尸检以观察胃肠道炎症和整体组织病理学。
5.根据尸检结果，从回肠末端、盲肠、近端结肠、螺旋结肠、横结肠、远端结肠、直肠以及包括其它胃肠道炎症部位中收集5cm长的打开组织样品以进行免疫组织化学分析。
6.将约3g穿孔活检样品和约200mg官腔内容物速冻用于阿达木单抗测量，以及在施用ADA的部位取下另外三个5cm长的打开组织样品以进行ADA的免疫组织化学分析。从每只动物的近端结肠和横结肠的近端区域的3个不同区域收集额外的组织活组织检查样品。
在最后一次DSS给药后的第二天，使用内窥镜检查和导管将13mg阿达木单抗/0.8mL/猪(将一个40mg阿达木单抗/0.8mL剂量注射器分成3份并且用PBS稀释)放置在降结肠正好经过横结肠的弯曲处的近端部分中。可替代地，将13mg的阿达木单抗用PBS稀释至适合于向断奶后猪给药的体积。在给药之前，对结肠的粘膜表面进行内窥镜照相。在阿达木单抗给药期间将动物麻醉。在阿达木单抗给药之前，将动物圈养在橡胶垫上以防止摄取垫料，并禁食至少24小时。在程序前用灌肠剂清洗结肠。
在阿达木单抗给药后约3小时对所有动物进行适当的安乐死以收集组织，并进行肉眼尸检，重点在于结肠炎的严重程度(安乐死后立即进行，以避免自溶性变化)。将所有用于组织学的样品固定在固定介质中，并且将穿孔活检样品在液氮中速冻并冷冻保存(-70℃)。
为了测量药物含量，通过首先轻轻移出并收集管腔内容物，然后使用8.0mm穿孔活检工具来收集组织样品和管腔内容物。在每只动物中收集来自阿达木单抗施用部位的三个不同区域的活组织检查切片。从每只动物的近端结肠和横结肠的近端区域的三个不同区域收集额外的组织活组织检查样品。在预先称重的锥形管中收集大约3g的总穿孔样品和200mg的管腔内容物，并记录称重的组织。
收集大约5-cm长的打开胃肠道组织样品(包括回肠末端，盲肠(CAC)；近端结肠(PCN)；横结肠(TCN)；螺旋结肠，远端结肠(DCN)和直肠)，在盐水中轻轻冲洗以除去管腔物质，并且分别固定在固定缓冲液(10％中性缓冲福尔马林)中。另外，从阿达木单抗施用部位附近的3个不同区域收集5-cm长的打开胃肠道组织，并且以相同方式固定在福尔马林中以对阿达木单抗进行免疫组织化学染色。将用于组织病理学的组织样品在10％中性缓冲福尔马林中固定18-24小时，并且转移至70％乙醇中。
将
Figure BDA0002449116230006351
提供在一次性使用的1mL预先填充的玻璃注射器中，作为用于皮下施用的无菌、无防腐剂的溶液。
Figure BDA0002449116230006361
溶液是澄清无色的，pH为约5.2。每个注射器递送0.8mL(40mg阿达木单抗)的药物产品。每个小瓶含有约0.9mL溶液以递送0.8mL(40mg阿达木单抗)的药物产品。每0.8mL的
Figure BDA0002449116230006362
含有40mg阿达木单抗、4.93mg氯化钠、0.69mg一水磷酸二氢钠、1.22mg二水磷酸氢二钠、0.24mg柠檬酸钠、1.04mg柠檬酸一水合物、9.6mg甘露醇、0.8mg聚山梨酯80和注射用水。视需要添加氢化钠以调节pH。
将所有动物随机分成三组。通过皮下(SC)、直肠周(PR)或盲肠内(IC)给药向动物施用阿达木单抗一次。
在给药后1、2、3、4、6和12小时，测量阿达木单抗和TNFα在血浆中的浓度。测量在给药后1、3、6和12小时直肠内容物中阿达木单抗的浓度以及在给药后12小时管腔内容物中阿达木单抗的浓度。给药12小时后，在胃肠道组织(例如，盲肠样品(CAC)、近端结肠样品(PCN)、横结肠样品(TCN)、发炎的远端结肠样品(DCNi)、未发炎的远端结肠样品(DCNn)以及直肠样品(RTM))中测量阿达木单抗和TNFα、HER2和总蛋白的浓度。
用8.5％DSS(口服；第1天至第7天)处理诱导猪的轻度体重减轻、出血性腹泻、软血便和中度结肠炎。尸检揭示明显的水肿和从近端结肠到远端直肠整个厚度的粘膜糜烂。在第8天用阿达木单抗治疗8.5％DSS诱导的动物。在临床观察、由于阿达木单抗治疗引起的胃肠道特异性副作用或毒性方面没有观察到显著差异。15％DSS(口服；第1天到第7天)诱导的动物从盲肠到直肠具有明显的粘膜脱落和出血以及严重的结肠炎。在第5天早些时候对所有动物进行安乐死。
在用8.5％DSS处理的动物中发现了明显的结肠炎病变，并且表征为涉及粘膜和粘膜下层、表面上皮丧失(糜烂)和肠隐窝的炎症(图93和94)。几乎没有再生的迹象。回肠和盲肠在所有动物中均无显著异常，但用8.5％DSS处理的一只动物(动物2504)的盲肠除外，所述盲肠有炎症病变和表面和隐窝上皮丧失(图95-99)。在用8.5％DSS处理的动物的大肠的所有其它部位，结肠炎的病变都很明显且一致。这些变化的严重程度和特征在不同片段或这些动物之间没有显著差异。人IgG的染色在阿达木单抗施用部位最一致且最强烈，并且位于粘膜上皮的腔表面或腔表面的炎性渗出液，并且在腔表面附近的固有层中发现了阿达木单抗的渗透(图100)。
实施例12.使用阿达木单抗治疗溃疡性结肠炎的人体临床试验
作为概念论证，本研究的患者群体是(1)患有中度至重度溃疡性结肠炎的患者，无论范围如何，以及(2)对例如常规治疗(例如5-ASA、皮质类固醇和/或免疫抑制剂)的先前治疗或FDA批准的治疗响应不足。在这项安慰剂对照的8周研究中，患者随机分组。所有患者在研究开始时(基线)和第8周进行结肠镜检查。通过大便次数、直肠出血、腹痛、医生的全面评估和生物标记物水平(例如粪便钙卫蛋白和hsCRP)评估参与该研究的患者的疾病临床状态。主要终点是内窥镜检查评分从基线到第8周的转变。次要的和探索的终点包括安全性和耐受性、直肠出血评分的变化、腹痛评分的变化、大便次数的变化、部分梅奥(Mayo)评分的变化、梅奥评分的变化、达到内窥镜检查缓解的受试者比例、达到临床缓解的受试者比例、组织学评分的变化、疾病的生物标记物的变化(例如粪便钙卫蛋白和hsCRP)、血液/组织/粪便中阿达木单抗的水平、血液和组织中细胞因子水平的变化(例如，TNFα、IL-6)。
图72描述了临床实践中将会发生的情形的示例性过程，以及何时、何地以及如何使用可摄入装置。简而言之，患者表现出溃疡性结肠炎的症状，包括但不限于：腹泻、血便、腹痛、高c-反应蛋白(CRP)和/或高粪钙卫蛋白。患者可能会或可能不会进行结肠镜检查，此时诊断为溃疡性结肠炎。患者的初次保健医生会转诊患者。患者接受活组织结肠镜检查、CT扫描和/或MRI检查。基于该测试，患者被诊断患有溃疡性结肠炎。大多数患者通过结肠镜检查和活组织检查被诊断为溃疡性结肠炎。记录基于临床症状和内窥镜外观，以及基于具有或不具有CT/MRI的结肠镜检查涉及的区域的程度的严重程度。根据诊断严重程度和程度确定治疗方案。
例如，对被诊断患有溃疡性结肠炎的患者的治疗是可摄入装置，其被编程为在盲肠中或接近盲肠释放单次团注的治疗剂，例如40mg阿达木单抗。在施用治疗之前，患者禁食过夜并允许饮用透明液体。吞咽可摄入装置四小时后，患者可以恢复正常饮食。每天在同一时间吞下可摄入装置。不回收可摄入装置。
在一些实施方式中，可存在两种不同的可摄入装置：一种包括诱导剂量(前8至12周)和包括不同剂量或不同用药间隔的不同的可摄入装置。
在一些实施例中，可摄入装置可包括映射工具，其可用于在诱导治疗8至12周后使用以评估响应状态(例如，基于以下中的一个或多个：药物水平、药物抗体水平、生物标记物水平和粘膜愈合状态)。取决于由映射工具确定的响应状态，受试者可以继续接受阿达木单抗的诱导方案或维持方案。
在不同的临床研究中，患者可能被诊断患有克罗恩病，并且可摄入装置(含有阿达木单抗)可以被编程为在盲肠中或在盲肠和横结肠二者中释放阿达木单抗。
在不同的临床研究中，患者可能被诊断患有非结肠性克罗恩病，并且可摄入装置(含有阿达木单抗)可以被编程为在晚期空肠或空肠和横结肠中释放阿达木单抗。
实施例13.在约克郡-克罗斯农场猪中口服vs.盲肠内施用他克莫司的药代动力学研究
这项研究的主要目的是研究在正常约克郡-克罗斯农场猪中口服vs.盲肠内施用他克莫司的药代动力学。
本研究比较了如下施用效果：单次盲肠施用含有0.8mL无菌载体溶液(80％乙醇、20％蓖麻油(HCO-60))的装置；单次口服0.09mg/kg(在无菌载体溶液中)的他克莫司剂量；和单次盲肠内施用含有0.02mg/kg(在无菌载体溶液中)、0.04mg/kg(在无菌载体溶液中)或0.09mg/kg(在无菌载体溶液中)的装置。
该研究在研究开始时使用五组的三只雌性猪，体重约45至50kg。将猪随机放入动物室/围栏中，因为它们从递送载体转移而不考虑组。组号按室号顺序分配到室。没有采用进一步的随机化程序。研究设计见表14。
表14.研究设计
Figure BDA0002449116230006381
第1组中的动物盲肠内接受含有载体溶液(80％乙醇，20％HCO-60)的装置。第2组中的动物口服接受他克莫司液体制剂，按每只动物0.09mg/kg。第3组中的动物盲肠内接受每个装置含有0.02mg/kg他克莫司的装置。第4组中的动物盲肠内接受每个装置含有0.04mg/kg他克莫司的装置。第5组中的动物盲肠内接受每个装置含有0.09mg/kg他克莫司的装置。
使用粪便拭子(直肠拭子)收集来自装置放置后1、3、6和12小时的每一个动物的直肠内容物样品，用于药代动力学分析。
在给药后1、2、3、4、6和12小时，测量被测量的他克莫司在血液中的浓度。测量在给药后1、3、6和12小时在直肠内容物中的他克莫司浓度，以及在给药后12小时在胃肠组织和管腔内容物(例如盲肠组织和管腔、近端结肠组织和管腔、螺旋结肠组织和管腔、横结肠组织和管腔以及远端结肠组织和管腔)中的他克莫司浓度。
结果
图77和78中的数据显示，即使在相同浓度(0.09mg/kg)下，与口服施用他克莫司的猪相比，盲肠内施用他克莫司的猪的血液中他克莫司的平均浓度和AUC0-12小时更高。图79中的数据显示，与口服施用他克莫司的猪相比，盲肠内施用他克莫司的猪的螺旋结肠组织和横结肠组织中他克莫司的平均浓度更高。图80中的数据显示，与口服施用他克莫司的猪相比，盲肠内施用他克莫司的猪的螺旋结肠组织、横结肠组织腔、和远端结肠腔中他克莫司的平均浓度更高。图81和82中的数据显示，特别在给药后12小时，即使在相同浓度下，与口服施用他克莫司的猪相比，盲肠内施用他克莫司的猪的直肠内容物中他克莫司的平均浓度更高。
这些数据表明，他克莫司的盲肠内施用能够将他克莫司局部递送至哺乳动物胃肠道中的组织。
结果的总结在表15中示出。
表15.结果总结
Figure BDA0002449116230006391
表16和17提供了第2-5组中动物的组织和血浆比率。
表16-1.组织(平均值)(ng/g)/AUG(0-12小时)(ng·hr/ml)比率
Figure BDA0002449116230006392
表16-2.组织(平均值)(ng/g)/AUG(0-12小时)(ng·hr/ml)比率
Figure BDA0002449116230006393
Figure BDA0002449116230006401
表17-1.组织(平均值)(ng/g)/波谷(12小时)(ng/ml)
Figure BDA0002449116230006402
表17-2.组织(平均值)(ng/g)/波谷(12小时)(ng/ml)
Figure BDA0002449116230006403
实施例14
在20名受试者上测试根据本发明的可摄入医疗装置(“TLC1”)以研究其定位能力。TLCl是一种生物相容的聚碳酸酯可吸收装置，包含电源、电子设备和软件。机载软件算法使用时间、温度和反射光光谱数据来确定可摄入装置在行进胃肠道时的位置。可摄入装置为0.51×1.22英寸，比0.4×0.85英寸的维生素丸大。在参与研究之前，受试者禁食过夜。计算机断层扫描(“CT”)用作确定用TLC1收集的定位数据的准确性的基础。20名受试者中的一名没有遵循禁食规则。20名受试者中的另一名受试者缺乏CT数据。因此，这两个受试者被排除在进一步分析之外。TLC1在进入受试者的胃后的前14个小时每15秒采样一次RGB(径向传输)，然后每隔五分钟采样一次，直到电池耗尽。TLC1在到达受试者的胃之前不开始记录光学数据。因此，对于任何受试者，没有用于口-食道转移的基于RGB的数据。
此外，对57名受试者测试了
Figure BDA0002449116230006411
SB(Given Imaging)装置。在加入研究之前，受试者禁食过夜。在每个受试者中记录PillCam视频。PillCam的采样频率取决于速度。PillCam移动速度越快，采样数据的速度就越快。从可摄入设备被施用至受试者的嘴中开始，每个视频大约七到八个小时。RGB光学数据记录在表格中。医生提供了关于每个视频中发生胃-十二指肠转移和回肠-盲肠转移的说明。计算机断层扫描(“CT”)用作确定用PillCam收集的定位数据的准确性的基础。
食道-胃转移
对于TLC1，假设在患者摄入装置后一分钟发生这种转移。对于PillCam，算法如下：
1.可摄入装置激活/施用后开始口-食道转换检测
2.检查是否是绿色<102.3和蓝色<94.6
a.如果是，则标记为口-食道转移
b.如果不是，继续扫描数据
3.检测到口-食道转移后，如果位置反转，继续监测绿色和蓝色信号30秒
a.如果绿色>110.1或蓝色>105.5，则将其标记为口-食道位置反转
b.重置口-食道标志并循环通过步骤2和3直到确认的口-食道转移被检测到
4.在确认的口-食道转移处加1分钟并将其标记为食道-胃转移。
对于其中一个PillCam受试者，食道和胃之间没有清晰的差异，因此该受试者被排除在未来的胃定位分析之外。在56个有效受试者中，54个具有正确的食道-胃转移定位。总的一致性为54/56＝96％。两个失败的病例中的每一个都具有延长的超过一分钟的食管。因此，对于这两个受试者而言，在口-食管转移中增加一分钟不足以覆盖食道的转移。
胃-十二指肠
对于TLC1和PillCam，使用滑动窗口分析。该算法使用哑铃形状的双滑动窗口方法，在前(第一)和后(第二)窗口之间有两分钟的间隙。两分钟的间隙至少部分地设计为跳过从胃到小肠的快速转移并且在可摄入装置在小肠中沉降后捕获小肠信号。算法如下：
1.在可摄入装置进入胃后开始检查胃-十二指肠转移
2.设置两个窗口(前和后)
a.每个窗口的时间长度：TLC1为3分钟；PillCam为30秒
b.两个窗口之间的时间间隔：两个装置均为2分钟
c.窗口滑动步长两个装置均为0.5分钟
3.比较两个滑动窗口中的信号
a.如果平均值的差值高于后窗中绿/蓝信号的标准偏差的3倍
i.如果这是第一次，则将后窗中信号的平均值和标准差记录为胃参考
ii.如果前窗中的平均信号高于胃参考信号一定阈值(TLC1为0.3，PillCam为0.18)，则将其标记为可能的胃十二指肠转移
b.如果检测到可能的幽门转移，则在误报标志的情况下继续扫描另外10分钟
i.如果在这10分钟内检测到位置反转，则先前的幽门转换标志是误报标志。清除标志并继续检查
ii.如果在可能的幽门转移标志后10分钟内未发现位置反转，请将其标记为确认的幽门转移
c.在位置反转的情况下，在确认幽门转移后再继续监测绿/蓝数据2小时
i.如果识别出位置反转，则标记反转发生时的时间戳，然后重复步骤a-c以查找下一个幽门转移
ii.如果可摄入装置在先前确认的幽门转移后2小时没有回到胃部，停止位置反转监测并假设可摄入装置将留在肠道区域
对于TLC1，18名受试者中的一名由于通过先前开发的定位算法延迟的食道-胃转移鉴定而在胃中采集的样本太少(<3分钟)。因此，该受试者被排除在胃-十二指肠转换算法测试之外。对于其余的TLC1受试者，CT图像证实所有受试者的检测到的幽门转移位于胃和空肠之间的某处。17名受试者中有2名表明，在第一次胃-十二指肠转移后，可摄入装置返回至胃。TLC1算法检测和CT扫描之间的总一致性是17/17＝100％。
对于其中一个PillCam受试者，可摄入装置在视频结束前一直留在受试者的胃中。对于另外两个PillCam受试者，在胃中采集的样本太少而不能运行定位算法。这三个PillCam受试者被排除在胃-十二指肠转移定位算法性能测试之外。PillCam幽门转移定位算法的性能总结如下：
1.良好案例(48名受试者)：
a.对于25名受试者，我们的检测与医生的提示完全匹配
b.对于19名受试者，两次检测之间的差异小于五分钟
c.对于4名受试者，两次检测之间的差异小于10分钟(完整转移可能需要在G/B信号结算前占用10分钟)
2.失败案件(6名受试者)：
a.四名受试者的胃中绿/蓝信号的标准偏差较高
b.一名受试者胃内有胆汁，这极大地影响了胃中的绿/蓝信号
c.一名受试者在幽门转移时没有绿/蓝变化
PillCam胃-十二指肠转换定位算法检测和医师提示的总一致性是48/54＝89％。
十二指肠-空肠转移
对于TLC1，假设装置在确定装置进入十二指肠后三分钟离开十二指肠并进入空肠。在上述关于胃-十二指肠转移的TLC1研究的17名受试者中，提到的16名受试者具有CT图像，其证实十二指肠-空肠转移位于胃和空肠之间的某处。17名受试者中的一名在十二指肠中具有延长的传输时间。算法检测和CT扫描之间的总一致性是16/17＝94％。
对于PillCam，十二指肠-空肠转移未确定。
空肠-回肠转移
值得注意的是，空肠比回肠更红并且具有更多血管，而且空肠具有更厚的肠道壁，更多的肠道脂肪。这些差异可导致空肠和回肠之间的各种光学响应，特别是对于反射的红光信号。对于TLC1和PillCam，探索了两种不同的方法来跟踪空肠-回肠转移时红色信号的变化。第一种方法是单滑动窗口分析，其中窗口是10分钟长，并且在窗口移动时将平均信号与阈值进行比较。第二种方法是双滑动窗口分析，其中每个窗口长10分钟，两个窗口之间的间隔为20分钟。空肠-回肠转移定位的算法如下：
1.在十二指肠-空肠转移后获得20分钟的红色信号，将数据取平均值并将其记录为空肠参考信号
2.在设备进入空肠后20分钟开始检查空肠-回肠转移
a.通过空肠参考信号标准化新接收的数据
b.两种方法：
i.单滑动窗口分析
如果反射红色信号的平均值小于0.8，则设置转移标志
ii.双滑动窗口分析：
如果反射红色的平均差异高于前窗中反射红色信号的标准偏差的2倍，则设置转移标志
对于TLC1，18名受试者中的16名具有CT图像，其证实检测到的空肠-回肠转移落在空肠和盲肠之间。算法和CT扫描之间的总一致性是16/18＝89％。对于单滑动窗口和双滑动窗口方法都是如此，并且在两种方法中相同的两个受试者失败。
PillCam的空肠-回肠转移检测的性能总结如下：
1.单滑动窗口分析：
a.11个案例具有在空肠和盲肠之间某处检测到的空肠-回肠转移
b.24个案例具有在盲肠后检测到的空肠-回肠转移
c.19个案例没有检测到空肠-回肠转移
d.总一致性：11/54＝20％
2.双滑动窗口分析：
a.30个案例具有在空肠和盲肠之间某处检测到的空肠-回肠转移
b.24个案例具有在盲肠后检测到的空肠-回肠转移
c.总一致性：30/54＝56％
回肠-盲肠转移
数据表明，对于TLC1，反射红/绿的平均信号提供了回肠-盲肠转移之前和之后的最大统计学差异。数据也证明，对于TLC1，反射绿/蓝的变异系数在回肠-盲肠转移时提供了最大的统计学对比。基于PillCam视频的分析显示与使用TLC1装置获得的结果非常相似的统计趋势。因此，该算法利用反射的红/绿的平均值和反射的绿/蓝的变化系数的变化。算法如下：
1.在可摄入装置进入胃后开始监测回肠-盲肠转移
2.设置两个窗口(前(第一)和后(第二))
a.每个窗口使用五分钟的时间长度
b.两个窗口之间使用10分钟的间隙
c.使用一分钟的窗口滑动步长
3.比较两个滑动窗口中的信号
a.设置回肠-盲肠转移标志，如果
i.反射的红/绿有显著变化或低于阈值
ii.反射的绿/蓝的变化系数低于阈值
b.如果这是检测到的第一个回肠-盲肠转移，则将小肠中的平均反射红/绿信号记录为小肠参考信号
c.标记位置反转(即可摄入装置返回到回肠末端)，如果
i.反射的红/绿在统计上与小肠参考信号相当
ii.反射的绿/蓝的变化系数高于阈值
d.如果检测到可能的回肠-盲肠转移，则对于TLC1在误报标志的情况下继续再扫描10分钟(对于PillCam为15分钟)
i.如果在这段时间内(TLC1为10分钟，PillCam为15分钟)检测到位置反转，则之前的回肠-盲肠转移标志是误报标志。清除标志并继续检查
ii.如果在该时间范围内(TLC1为10分钟，PillCam为15分钟)在可能的回肠-盲肠转移标志后没有发现位置逆转，将其标记为确认的回肠-盲肠转移
e.在位置反转的情况下，在确认的回肠-盲肠转移后继续监测数据2小时
i.如果识别出位置反转，则标记反转发生时的时间戳，并且然后重复步骤a-d以查找下一个回肠-盲肠转移
ii.如果可摄入装置在先前确认的回肠-盲肠转移后2小时没有回到小肠，则停止位置反转监测并假设可摄入装置将留在大肠区域中
特别为TLC1装置设计的标志设置和位置反转标准为如下：
1.设置回肠-盲肠转移标志，如果
a.前窗中的平均的反射红/绿小于0.7或两个窗之间的平均差大于0.6
b.并且反射的绿/蓝的变化系数小于0.02
2.定义为位置反转，如果
a.前窗中反射的红/绿的平均值高于小肠参考信号
b.并且反射的绿/蓝的变化系数高于0.086
对于TLC1，18名受试者中的16名具有CT图像，其证实检测到的回肠-盲肠转移落在回肠末端和结肠之间。算法和CT扫描之间的总一致性是16/18＝89％。关于回肠转移定位算法失败的那两个受试者，对于其中一个受试者，当TLC1仍然在受试者的回肠末端时检测到回肠-盲肠转移，而对于另一个受试者，当该装置被检测到回肠-盲肠转移时在结肠。
在57个可用的PillCam内窥镜视频中，对于三个受试者，内窥镜检查视频在PillCam到达盲肠之前结束，另外两个受试者在大肠中仅具有非常有限的视频数据(少于五分钟)。这5个受试者被排除在回肠-盲肠转移定位算法性能测试之外。PillCam的回肠-盲肠转换检测的性能总结如下：
1.良好案例(39名受试者)：
a.对于31名受试者，PillCam检测与医生提示之间的差异不到五分钟
b.对于3名受试者，PillCam检测与医生提示之间的差异不到10分钟
c.对于5名受试者，PillCam检测与医生提示之间的差异小于20分钟(在信号确定之前，完全转移可能占用20分钟)
2.边缘(Marginal)/差案例(13名受试者)
a.边缘案例(9名受试者)
i.PillCam回肠-盲肠转移检测出现在回肠末端或结肠，但两次检测之间的差异在一小时内
b.失败案例(4名受试者)
i.失败原因
1.信号已经稳定在回肠末端
2.从入口到出口的信号变化很大
3.回肠-盲肠转移时的反射的红/绿没有统计学意义的变化
如果仅考虑良好病例，回盲转移定位算法检测与医生提示之间的总一致性为39/52＝75％。包括边缘案例案件在内的总一致性是48/52＝92.3％。
盲肠-结肠转移
数据证明，对于TLC1，反射的红/绿的平均信号提供了盲肠-结肠转移之前和之后的最大统计学差异。数据也证明，对于TLC1，反射蓝的变化系数在盲肠-结肠转移时提供了最大的统计学对比。PillCam使用了相同的信号。盲肠结肠转移定位算法如下：
1.在回肠-盲肠转移后获得10分钟的反射红/绿和反射蓝信号，平均数据并将其记录为盲肠参考信号
2.在可摄入装置进入盲肠后开始检查盲肠-结肠转移(盲肠-结肠转移算法依赖于回肠-盲肠转移标志)
a.通过盲肠参考信号标准化新接收的数据
b.双滑动窗口分析：
i.使用两个相邻的10分钟窗口
ii.如果满足以下任何条件，设置转移标志：
反射红/绿的平均差异超过背面(第二)窗口反射红/绿的标准偏差的4倍
前(第一)窗口中反射红/绿的平均值高于1.03
前(第一)窗口中反射蓝信号的变化系数大于0.23
基于TLC1采集的数据的统计分析来选择上述阈值。
对于TLC1，18名受试者中的15名在盲肠和结肠之间的某处检测到盲肠-结肠转移。其中一名受试者在TLC1仍在盲肠中时检测到了盲肠结肠转移。其他两名受试者均有错误的回肠-盲肠转移检测和错误的盲肠-结肠转移检测。算法和CT扫描之间的总一致性是15/18＝83％。
对于PillCam，对于三个受试者，内窥镜检查视频在PillCam到达盲肠之前结束，而另外两个受试者在大肠中的视频数据非常有限(少于五分钟)。这五个受试者被排除在盲肠-结肠转换定位算法性能测试之外。PillCam的盲肠结肠转换检测的性能总结如下：
1. 27个案例在盲肠和结肠之间的某处检测到盲肠-结肠转移
2.一个案例在回肠中检测到盲肠-结肠转移
3. 24个案例没有定位到盲肠-结肠转移
总一致性：27/52＝52％。
下表总结了定位准确性结果。
Figure BDA0002449116230006461
实施例16.在先前已接受过继T细胞转移的结肠炎动物模型中治疗性抗体的盲肠内施用
进行了一组实验，以比较抗IL12 p40抗体和抗TNFα抗体在全身与盲肠内给药时在治疗通过将从C57BI/6供体小鼠分离的CD44-/CD62L+T细胞亚群过继转移到RAG2-/-受体诱导的结肠炎方面的功效。
材料
测试系统
物种/品种小鼠，C57Bl/6(供体)和RAG2-/-(受体；C57Bl/6背景)
生理状态：正常/免疫缺陷
研究开始时的年龄/体重范围6-8周(20-24g)
动物供应商：Taconic
随机化：将小鼠随机分为每组15只小鼠的七组，和每组八只小鼠的两组。
论证：将从雄性C57Bl/6野生型供体中分离的T细胞转移到雄性RAG2-/-受体小鼠中以诱导结肠炎。
替换：在研究过程期间不替换动物。
动物圈养和环境
圈养：在插管手术之前，将小鼠以每笼8-15只动物的组圈养。插管手术之后，将插管的动物在手术后单独圈养七天。此后，将动物再次如上所述分组饲养。将未插管动物(第9组)以每笼8只小鼠圈养。使用
Figure BDA0002449116230006472
垫料。在结肠炎诱导之前(即在插管手术期间)，每周至少更换一次垫料。在结肠炎诱导之后，每两周更换一次垫料，捕获1/4的脏笼材料并将其转移到新笼子中。另外，在更换笼子时，将第9组动物的垫料用于补充所有其它组的垫料。
适应环境：在研究开始之前，使动物适应环境至少7天。在此时段期间，每天观察动物以排除状况较差的动物。
环境条件：这项研究在动物房间内进行，该房间提供有过滤空气，温度为70+/-5℉并且相对湿度为50％+/-20％。动物房间设置为每小时保持至少12到15次换气。房间有自动定时器以实现亮/暗循环，12小时打开和12小时关闭，没有黄昏。
食物/水和污染物：用Labdiet 5053无菌啮齿动物食物饲养动物。任意提供无菌水。
测试品
Figure BDA0002449116230006471
Figure BDA0002449116230006481
制剂：
对于第3组：在给药的每一天，稀释储备pAb以达到2.145mL的5.68mg/mL溶液。
对于第4组：在给药的每一天，稀释储备pAb以达到2.145mL的5.68mg/mL溶液
Figure BDA0002449116230006482
制剂：
对于第5组：在每个给药日，稀释储备mAb以达到1.716mL的5.68mg/mL溶液。
对于第6组：在每个给药日，稀释储备mAb以达到1.716mL的5.68mg/mL溶液。
Figure BDA0002449116230006483
Figure BDA0002449116230006491
制剂：
对于第7组：在每个给药日，稀释储备mAb以达到1.716mL的5.68mg/mL溶液。
对于第8组：在每个给药日，稀释储备mAb以达到1.716mL的5.68mg/mL溶液。
方法
研究设计的细节总结在表18中。用于这项研究中的方法的详细描述也提供在下文。
表18.研究设计
Figure BDA0002449116230006492
Figure BDA0002449116230006501
在实验开始前至少10-14天，一组动物接受盲肠插管的手术植入。对足够数量的动物进行植入以允许足够插管动物参加主要研究。另外n＝8只动物(第9组)用作无手术/无疾病对照。
在第0天，通过IP注射从C57Bl/6受体中分离和纯化的0.5×106个CD44-/CD62L+T细胞，在雄性RAG2-/-小鼠中诱导结肠炎。通过首先从80只C57Bl/6小鼠中收获脾脏并且然后使用Miltenyi磁激活细胞分选(MACS)柱分离CD44-/CD62L+T细胞来处理供体细胞。另外八只小鼠(第1组)用作无疾病对照，并且八只小鼠(第9组)用作无插管和无疾病对照(用于垫料的前哨动物)。每天称重所有受体小鼠并肉眼评估腹泻和/或血便的存在。从第7天开始，每两周更换一次笼子，注意收集1/4脏笼子材料以转移到新笼子中。在第13天，通过RO眼睛流血收集血液，离心，并等分血浆(50μL和剩余量)并冷冻以用于下游分析。将形成颗粒的细胞重新悬浮在缓冲液中以通过CD45+/CD4+事件的FACS分析确定T细胞的存在。
如表18所概述，在第0天开始使用测试品进行治疗，并持续到第42天。第1组和第9组中的动物(每组n＝8；原始对照)未用测试品进行治疗。第2组中的动物用载体(PBS)3X/周经IP和用载体QD经IC治疗。第3组中的动物用IgG对照3x/周经IP和用载体(PBS)QD经IC治疗。第4组中的动物用载体(PBS)3x/周经IP和用IgG对照QD经IC治疗。第5组中的动物用抗IL12p40抗体3X/周经IP和用载体QD经IC治疗。第6组中的动物用载体3X/周经IP和用抗IL12p40抗体QD经IC治疗。第7组中的动物用抗TNFα抗体3X/周经IP和用载体QD经IC治疗。第8组中的动物用载体3X/周经IP和用抗TNFα抗体QD经IC治疗。
在第14天(给药前；基线)、第28天和第42天(安乐死之前)对小鼠进行高清视频内窥镜检查，以评估结肠炎严重程度。从每只动物在内窥镜检查期间鉴定的最严重疾病区域捕获图像。另外，使用本文所述的参数在内窥镜检查期间对粪便稠度进行评分。在第42天进行内窥镜检查后，处死所有组的动物并收集终点样品。
在第42天给药后三小时，通过CO2吸入使动物安乐死。收集末梢血样品，并且从这些样品中获取血浆。将得到的血浆分成两个单独的冷冻管，50μL在一个管(Bioanalysis)中，其余的在第二个管(TBD)中。移出盲肠和结肠内容物，并且收集内容物，称重，并在分开的冷冻管中速冻。收集肠系膜淋巴结并且在液氮中快速冷冻。切下小肠并冲洗，将回肠最远端的2cm置于福尔马林中24小时，并且然后转移至70％乙醇中，以用于随后的组织学评估。从小肠中收集派尔集合淋巴结，并且在液氮中快速冷冻。如上文实施例中所述，冲洗结肠，测量，称重，并且然后修剪至6cm长并分成5块。将结肠最近端的1cm分别称重，并且快速冷冻以用于随后对测试品水平的生物分析(PK)。在剩余的5cm结肠中，最远端和近端1.5cm切片各自置于福尔马林中24小时，并且然后转移至70％乙醇用于随后的组织学评估。将中间的2cm部分纵向平分，并且将每块称重，放入两个单独的冷冻管中，并在液氮中速冻；样品之一用于细胞因子分析，并且另一个样品用于髓过氧化物酶(MPO)分析。将所有血浆和冷冻结肠组织样品储存在-80℃下，直到用于终点分析为止。
用于这项研究中的方案的更加详细的描述提供在下文。
盲肠插管
将动物置于异氟烷麻醉下，并且通过腹部中线切口暴露盲肠。在远端盲肠中制造小点切口，其中插入1-2cm的插管。用5-0丝线用荷包缝合线封闭缝合切口。然后在左腹壁上制造切口，通过该切口，插管的远端被皮下插入并推到背部的背侧。然后在关闭腹壁之前用温热的盐水充分洗涤该部位。在肩胛骨之间的背部皮肤上也制造小切口，露出插管的尖端。使用缝合线、伤口夹和组织胶将插管固定在适当位置。所有动物接受1mL温热无菌盐水(皮下注射)并密切监测直至完全恢复，然后返回其笼中。所有动物在前3天接受0.6mg/kg BID丁丙诺啡，并且在手术后的前5天接受10mg/Kg QD的Baytril。
疾病诱导
在第0天，通过IP注射(200μL)从C57Bl/6受体中分离和纯化的0.5×106个CD44-/CD62L+T细胞(在PBS中)，在雄性RAG2-/-小鼠中诱导结肠炎。
供体细胞收获
从C57Bl/6小鼠切下整个脾脏，并立即置于冰冷的PBS中。分离脾脏以产生单细胞悬液，并裂解红细胞。对脾进行处理以实现CD4+富集，然后通过MACS分选CD44-CD62L+。
给药
如表18所概述，在第0天开始使用测试品进行治疗，并持续到第42天。第1组和第9组中的动物(每组n＝8；原始对照)未用测试品进行治疗。第2组中的动物用载体(PBS)3X/周经IP和用载体QD经IC治疗。第3组中的动物用IgG对照3x/周经IP和用载体(PBS)QD经IC治疗。第4组中的动物用载体(PBS)3x/周经IP和用IgG对照QD经IC治疗。第5组中的动物用抗IL12p40抗体3X/周经IP和用载体QD经IC治疗。第6组中的动物用载体3X/周经IP和用抗IL12p40抗体QD经IC治疗。第7组中的动物用抗TNFα抗体3X/周经IP和用载体QD经IC治疗。第8组中的动物用载体3X/周经IP和用抗TNFα抗体QD经IC治疗。
体重和生存
每天观察动物(体重、发病率、存活、腹泻和/或血便的存在)，以评估治疗组之间可能的差异和/或治疗产生的可能的毒性。
被发现死亡或濒死的动物每天监测动物，并且对表现出重量损失大于30％的动物实施安乐死，并且不收集样品。
内窥镜检查
在第14天(给药前；基线)、第28天和第42天(在安乐死之前)，在异氟烷麻醉下，使用小动物内窥镜(Karl Storz Endoskope，Germany)对每只小鼠进行视频内窥镜检查。在每次内窥镜检查程序期间，记录静止图像以及视频以评估结肠炎的程度和对治疗的反应。此外，从每只动物在内窥镜检查期间识别的最严重疾病区域捕获图像。使用0-4评分对结肠炎严重程度进行评分(0＝正常；1＝血管分布损失；2＝血管分布和脆性损失；3＝脆性和糜烂；4＝溃疡和出血)。另外，使用本文所述的评分系统在内窥镜检查期间对粪便稠度进行评分。
处死
在第42天和测试品给药后3小时内窥镜检查后，通过CO2吸入使所有动物安乐死。
样品收集
如下在安乐死时收集末梢血(血浆和细胞颗粒)、派尔集合淋巴结(仅第1-8组)、小肠和结肠mLN(仅第1-8组)、盲肠内容物、结肠内容物、小肠和结肠。
血液
通过心脏穿刺收集末梢血并且由这些样品产生血浆。将得到的血浆分成两个单独的冷冻管，50μL在一个管(Bioanalysis)中，其余的在第二个管(TBD)中。
肠系膜淋巴结
收集肠系膜淋巴结，称重，在液氮中速冻，并储存在-80℃下。
小肠
切下小肠并冲洗，将回肠最远端的2cm置于福尔马林中24小时，并且然后转移至70％乙醇中，以用于随后的组织学评估。
派尔集合淋巴结
从小肠收集派尔集合淋巴结。将收集的派尔集合淋巴结称重，在液氮中速冻，并储存在-80℃下。
盲肠/结肠内容物
从每只动物中取出盲肠和结肠，并且收集内容物，称重，并在分开的冷冻管中速冻。
结肠
如上文所概述，冲洗每个结肠，测量，称重，并且然后修剪至6cm长并分成5块。将结肠最近端的1cm分别称重，并且速冻以用于随后对测试品水平的生物分析(PK)。在剩余的5cm结肠中，最远端和近端1.5cm切片置于福尔马林中24小时，并且然后转移至70％乙醇用于随后的组织学评估。将中间的2cm部分纵向平分，并且将每块称重，放入两个单独的冷冻管中，并在液氮中速冻；这些样品之一用于细胞因子分析，并且另一个样品用于MPO分析。
结肠组织中的细胞因子水平
通过多重分析评估结肠组织匀浆(所有组)中的细胞因子水平(IFNγ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-1β、IL-6、IL-12 p40和TNFα)。通过ELISA评估结肠组织匀浆(所有组)中的MPO水平。
结果
使用来自下文所述的评分系统的总评分，在每只小鼠中确定疾病活动性指数(Disease Activity Index)。
Figure BDA0002449116230006531
图103中的数据显示，在研究第42天，与腹膜内施用抗TNFα抗体的小鼠(第7组)相比，经盲肠内施用抗TNFα抗体的小鼠(第8组)的疾病活动性指数(DAI)降低。图104中的数据显示，当在研究第42天评估时，与腹膜内施用抗TNFα抗体的结肠组织(第7组)中的水平相比，经盲肠内施用抗TNFα抗体的小鼠(第8组)的结肠组织中的TNFα、IL-17A和IL-4水平降低。图105中的数据显示，在研究第28天和第42天，与腹膜内施用抗IL12 p40抗体的小鼠(第5组)相比，经盲肠内施用抗IL12 p40抗体的小鼠(第6组)的疾病活动性指数(DAI)降低。图106中的数据显示，与施用载体的对照小鼠(第2组)中的结肠组织中的水平相比，经盲肠内施用抗IL12 p40抗体的小鼠(第6组)的结肠组织中的IFN-γ、IL-6、IL-17A、TNFα、IL-22和IL-1b水平降低。
示例性实施方式
1.一种治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，所述方法包括：
向所述受试者施用包含免疫调节剂的药物制剂，
其中所述药物制剂在所述受试者的胃肠道中的位置释放。
2.根据实施方式1所述的方法，其中所述药物制剂在可摄入装置中施用。
3.根据实施方式1所述的方法，其中所述药物制剂从可摄入装置中释放。
4.根据实施方式2或3所述的方法，其中所述可摄入装置包括壳体、容纳所述药物制剂的贮存器、以及用于从所述装置释放所述药物制剂的释放机构，
其中所述贮存器可释放地或永久地连接到所述壳体的外部或所述壳体的内部。
5.根据实施方式2或3所述的方法，其中所述可摄入装置包括壳体、容纳所述药物制剂的贮存器、以及用于从所述装置释放所述药物制剂的释放机构，
其中所述贮存器在所述装置的内部。
6.一种治疗受试者的胃肠道疾病的方法，包括：
向所述受试者施用可摄入装置，所述可摄入装置包括壳体、容纳药物制剂的贮存器、以及用于从所述装置释放所述药物制剂的释放机构；
其中所述贮存器可释放地或永久地连接到所述壳体的外部或所述壳体的内部；
其中所述药物制剂包含免疫调节剂，并且
所述可摄入装置在所述受试者的胃肠道中接近一个或多个疾病位点的位置释放所述药物制剂。
7.一种治疗受试者中胃肠道疾病的方法，包括：
向所述受试者施用可摄入装置，所述可摄入装置包括壳体、容纳药物制剂的贮存器、以及用于从所述装置释放所述药物制剂的释放机构；
其中所述贮存器在所述装置的内部；
其中所述药物制剂包含免疫调节剂，并且
所述可摄入装置在所述受试者的胃肠道中接近一个或多个疾病位点的位置释放所述药物制剂。
8.根据实施方式4至7中任一项所述的方法，其中所述壳体在胃肠道中是不可生物降解的。
9.根据实施方式2至8中任一项所述的方法，其中所述制剂的释放是自动触发的。
10.根据实施方式2至9中任一项所述的方法，其中所述装置被编程为以一种或多种释放曲线释放所述制剂，所述释放曲线在胃肠道中的一个或多个位置处可以是相同或不同的。
11.根据实施方式2至10中任一项所述的方法，其中所述装置被编程为在接近一个或多个疾病位点的位置释放所述制剂。
12.根据实施方式11所述的方法，其中预先确定所一个或多个疾病位点的位置。
13.根据实施方式4至12中任一项所述的方法，其中所述贮存器由允许所述制剂离开所述贮存器的材料制成。
14.根据实施方式13所述的方法，其中所述材料是可生物降解的材料。
15.根据实施方式2至14中任一项所述的方法，其中所述制剂的释放由预编程算法触发。
16.根据实施方式2至15中任一项所述的方法，其中所述制剂的释放由来自传感器或检测器的用以识别所述装置的位置的数据触发。
17.根据实施方式16所述的方法，其中所述数据不只基于生理参数。
18.根据实施方式2-17中任一项所述的方法，其中所述装置包括检测器，所述检测器被配置为检测来自所述壳体外部环境的光反射率。
19.根据实施方式18所述的方法，其中所述释放自动触发或基于所检测的反射率触发。
20.根据实施方式2至19中任一项所述的方法，其中所述装置基本上在检测到一个或多个疾病位点的同时释放所述制剂。
21.根据实施方式4至20中任一项所述的方法，其中所述释放机构是驱动系统。
22.根据实施方式21所述的方法，其中所述驱动系统是化学驱动系统。
23.根据实施方式21所述的方法，其中所述驱动系统是机械驱动系统。
24.根据实施方式21所述的方法，其中所述驱动系统是电驱动系统。
25.根据实施方式21所述的方法，其中所述驱动系统包括泵并且释放所述制剂包括将所述制剂泵送出所述贮存器之外。
26.根据实施方式21所述的方法，其中所述驱动系统包括气体发生单元。
27.根据实施方式2至26中任一项所述的方法，其中所述装置包括锚定机构。
28.根据实施方式1至27中任一项所述的方法，其中所述制剂包含治疗有效量的免疫调节剂。
29.根据前述实施方式中任一项所述的方法，其中所述制剂包含人等效剂量(HED)的所述免疫调节剂。

Claims (229)

1.一种治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，所述方法包括：
在所述受试者的胃肠道中的位置处释放免疫调节剂，
其中所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的所述免疫调节剂的药物组合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述药物组合物是可摄入装置，并且所述方法包括向所述受试者口服施用所述药物组合物。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过10％的所述免疫调节剂。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述方法在作为预期释放部位的位置处提供的所述免疫调节剂的浓度比在并非所述预期释放部位的位置处提供的所述免疫调节剂的浓度高2-100倍。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法提供小于3μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的浓度。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述方法提供小于0.3μg/ml的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的浓度。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述方法提供小于0.01μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的浓度。
8.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述方法提供小于3μg/ml的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的C24值。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述方法提供小于0.3μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的C24值。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述方法提供小于0.01μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的C24值。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂是抑制性核酸。
12.根据权利要求1或10所述的方法，其中，所述免疫调节剂是小分子。
13.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是反义核酸。
14.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是核酶。
15.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是siRNA。
16.根据权利要求2至15中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂存在于所述装置内的药物制剂中。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述制剂是所述免疫调节剂于液体介质中的溶液。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述制剂是所述免疫调节剂于液体介质中的悬浮液。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中，来源于所述内胚层的所述组织选自由以下组成的组：胃、结肠、肝脏、胰腺、膀胱、气管的上皮部分、肺、咽、甲状腺、甲状旁腺、肠和胆囊。
20.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中，来源于所述内胚层的所述炎性疾病或病状选自由以下组成的组：胃炎、乳糜泻、肝炎、酒精性肝病、脂肪性肝病(肝脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝病(NASH)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胰腺炎、间质性膀胱炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、咽炎、甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状旁腺炎、肾炎、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫斯氏病、干燥综合征、1型糖尿病、盆腔炎性疾病、耳道炎、耳鸣、前庭神经炎、中耳炎、耳道炎、气管炎、胆汁淤积肝病、原发性胆汁性硬化症、肝实质、遗传性肝代谢紊乱、拜勒综合征、脑腱、黄瘤病、泽尔韦格氏综合征、新生儿肝炎、囊性纤维化、ALGS(阿拉吉欧综合征)、PFIC(进行性家族性肝内胆汁淤积症)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝纤维症、NAFLD、门静脉高压、一般性胆汁淤积诸如因药物引起的或怀孕期间的黄疸、肝内和肝外胆汁淤积诸如遗传形式的胆汁淤积如PFIC1、胆结石和胆总管结石、导致胆道系统阻塞的恶性肿瘤、由于胆汁淤积/黄疸引起的症状(抓挠、瘙痒)、导致进行性胆汁淤积的慢性自身免疫性肝病、和胆汁淤积性肝病、十二指肠溃疡、肠炎(放射性、化学疗法或感染诱导的肠炎)、憩室炎、结肠袋炎、胆囊炎和胆管炎的瘙痒。
21.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中，在来源于所述内胚层的组织中出现的所述炎性疾病或病状是肝脏炎症。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的大肠中的位置处释放。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述位置位于所述大肠的近端部分中。
24.根据权利要求22所述的方法，其中，所述位置位于所述大肠的远端部分中。
25.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的升结肠中的位置处释放。
26.根据权利要求25所述的方法，其中，所述位置位于所述升结肠的近端部分中。
27.根据权利要求25所述的方法，其中，所述位置位于所述升结肠的远端部分中。
28.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的盲肠中的位置处释放。
29.根据权利要求28所述的方法，其中，所述位置位于所述盲肠的近端部分中。
30.根据权利要求28所述的方法，其中，所述位置位于所述盲肠的远端部分中。
31.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的乙状结肠中的位置处释放。
32.根据权利要求31所述的方法，其中，所述位置位于所述乙状结肠的近端部分中。
33.根据权利要求31所述的方法，其中，所述位置位于所述乙状结肠的远端部分中。
34.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的横结肠中的位置处释放。
35.根据权利要求34所述的方法，其中，所述位置位于所述横结肠的近端部分中。
36.根据权利要求34所述的方法，其中，所述位置位于所述横结肠的远端部分中。
37.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的降结肠中的位置处释放。
38.根据权利要求37所述的方法，其中，所述位置位于所述降结肠的近端部分中。
39.根据权利要求37所述的方法，其中，所述位置位于所述降结肠的远端部分中。
40.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的小肠中的位置处释放。
41.根据权利要求40所述的方法，其中，所述位置位于所述小肠的近端部分中。
42.根据权利要求40所述的方法，其中，所述位置位于所述小肠的远端部分中。
43.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的十二指肠中的位置处释放。
44.根据权利要求43所述的方法，其中，所述位置位于所述十二指肠的近端部分中。
45.根据权利要求43所述的方法，其中，所述位置位于所述十二指肠的远端部分中。
46.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的空肠中的位置处释放。
47.根据权利要求46所述的方法，其中，所述位置位于所述空肠的近端部分中。
48.根据权利要求46所述的方法，其中，所述位置位于所述空肠的远端部分中。
49.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述受试者的回肠中的位置处释放。
50.根据权利要求49所述的方法，其中，所述位置位于所述回肠的近端部分中。
51.根据权利要求49所述的方法，其中，所述位置位于所述回肠的远端部分中。
52.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂的位置为距离预期释放部位10cm或更小处。
53.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂的位置距离预期释放部位5cm或更小处。
54.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂的位置距离预期释放部位2cm或更小处。
55.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂通过粘膜接触来释放。
56.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂通过不包含所述免疫调节剂的全身转运的过程递送到所述位置。
57.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括：使用包括对所述胃肠道进行成像的方法识别所述免疫调节剂的预期释放部位。
58.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法包括：在施用所述药物组合物之前识别所述免疫调节剂的预期释放部位。
59.根据权利要求58所述的方法，其中，所述方法包括：与识别所述免疫调节剂的所述预期释放部位基本上同时释放所述免疫调节剂。
60.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括：(a)识别患有在来源于所述内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的受试者，和(b)评估所述受试者是否适合于治疗。
61.根据权利要求1或3至15或17至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂通过以下中的一者或多者触发：在空肠中从6.1至7.2的pH、在中小肠中从7.0至7.8的pH、在回肠中从7.0至8.0的pH、在右结肠中从5.7至7.0的pH、在中结肠中从5.7至7.4的pH、在左结肠中从6.3至7.7诸如7.0的pH。
62.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂不依赖于所述位置处或附近的pH。
63.根据权利要求1或3至15或17至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂通过位于所述装置中的释放组分的降解来触发。
64.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂不通过位于所述装置中的释放组分的降解来触发。
65.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂不依赖于所述位置处或所述位置附近的酶活性。
66.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂不依赖于所述位置处或所述位置附近的细菌活性。
67.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中所述组合物包含多个包含涂层的电极，并且释放所述免疫调节剂通过所述涂层与所述免疫调节剂的预期释放部位的相互作用所引起的所述电极的电信号来触发。
68.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂由远程电磁信号来触发。
69.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂通过在所述组合物中产生足以排出所述免疫调节剂的量的气体来触发。
70.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，释放所述免疫调节剂通过根据预定的药物释放曲线在所述装置内产生的电磁信号来触发。
71.根据权利要求2至60中任一项所述的方法，其中，所述可摄入装置包括可摄入壳体，其中储存所述免疫调节剂的贮存器附接到所述壳体。
72.根据权利要求71所述的方法，还包括：
检测何时所述可摄入壳体接近预期释放部位，
其中释放所述免疫调节剂包括：响应于所述检测，从接近相应的预期释放部位的所述贮存器释放治疗有效量的所述免疫调节剂。
73.根据权利要求72所述的方法，其中，检测包括通过耦接至所述可摄入壳体的一个或多个传感器进行检测。
74.根据权利要求73所述的方法，其中，所述一个或多个传感器包括多个涂覆的电极，并且其中检测包括：通过所述涂覆的电极中的一个或多个而响应于所述一个或多个电极接触所述相应的预期释放部位来接收电信号。
75.根据权利要求72所述的方法，其中，释放包括打开与所述贮存器流体连通的一个或多个阀。
76.根据权利要求0所述的方法，其中，所述一个或多个阀可通信地耦接至位于所述壳体中的处理器，所述处理器可通信地耦接至被配置成检测所述预期释放部位的一个或多个传感器。
77.根据权利要求72所述的方法，其中，释放包括通过位于所述可摄入壳体中的泵从所述贮存器泵送治疗有效量的所述免疫调节剂。
78.根据权利要求0所述的方法，其中所述泵可通信地耦接至位于所述壳体中的处理器，所述处理器可通信地耦接至被配置成检测所述免疫调节剂的预期释放部位的一个或多个传感器。
79.根据权利要求71所述的方法，其中，所述治疗有效量的所述免疫调节剂在高于所述受试者的胃肠道中的压力的贮存器压力下储存在所述贮存器中。
80.根据权利要求71所述的方法，其进一步包括：响应于所述检测，将所述可摄入壳体锚定在接近所述预期释放部位的位置处。
81.根据权利要求0所述的方法，其中，锚定所述可摄入壳体包括：一个或多个支腿从所述可摄入壳体延伸。
82.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，被施用的所述免疫调节剂的量为约1mg至约500mg。
83.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是抗体或抗原结合抗体片段。
84.根据权利要求83所述的方法，其中，所述抗体是人源化抗体。
85.根据权利要求1至84中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂的量小于在全身施用所述免疫调节剂时有效的量。
86.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括：施用(i)作为诱导剂量的量的所述免疫调节剂。
87.根据权利要求86所述的方法，其还包括：(ii)在施用所述诱导剂量后施用作为维持剂量的量的所述免疫调节剂。
88.根据权利要求86或87所述的方法，其中，所述诱导剂量每天施用一次。
89.根据权利要求86或87所述的方法，其中，所述诱导剂量每三天施用一次。
90.根据权利要求86或87所述的方法，其中，所述诱导剂量每周施用一次。
91.根据权利要求87所述的方法，其中，步骤(ii)重复一次或多次。
92.根据权利要求87所述的方法，其中，步骤(ii)在约6-8周的时间段内每天重复一次。
93.根据权利要求87所述的方法，其中，步骤(ii)在约6-8周的时间段内每三天重复一次。
94.根据权利要求87所述的方法，其中，步骤(ii)在约6-8周的时间段内每周重复一次。
95.根据权利要求87所述的方法，其中，所述诱导剂量等于所述维持剂量。
96.根据权利要求87所述的方法，其中，所述诱导剂量大于所述维持剂量。
97.根据权利要求87所述的方法，其中，所述诱导剂量比所述维持剂量大5倍。
98.根据权利要求87所述的方法，其中，所述诱导剂量比所述维持剂量大2倍。
99.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法包括以单次团注在所述胃肠道中的位置处释放所述免疫调节剂。
100.根据权利要求1至98中任一项所述的方法，其中，所述方法包括以超过一次的团注在所述胃肠道中的位置处释放所述免疫调节剂。
101.根据权利要求1至98中任一项所述的方法，其中，所述方法包括以连续方式在所述胃肠道中的位置处递送所述免疫调节剂。
102.根据权利要求101所述的方法，其中，所述方法包括：在20分钟或更多分钟的时间段内在所述胃肠道中的位置处递送所述免疫调节剂。
103.根据权利要求1至102中任一项所述的方法，其中，所述方法不包括将免疫调节剂直肠递送至所述受试者。
104.根据权利要求1至102中任一项所述的方法，其中，所述方法不包括通过灌肠剂将免疫调节剂递送至所述受试者。
105.根据权利要求1至102中任一项所述的方法，其中，所述方法不包括通过栓剂将免疫调节剂递送至所述受试者。
106.根据权利要求1至102中任一项所述的方法，其中，所述方法不包括通过滴注将免疫调节剂递送至所述受试者的直肠。
107.根据权利要求1至102中任一项所述的方法，其中，所述方法不包括手术植入。
108.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是IL-12/IL-23抑制剂。
109.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是TNFα抑制剂。
110.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是IL-6受体抑制剂。
111.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是CD40/CD40L抑制剂。
112.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂是IL-1抑制剂。
113.根据权利要求1至67或69至112中任一项所述的方法，其中，所述组合物是自动装置。
114.根据权利要求1至113中任一项所述的方法，其中，所述组合物包含能够释放所述免疫调节剂的机构。
115.根据权利要求1至114中任一项所述的方法，其中，所述组合物包括用于将所述组合物锚定到所述位置的组织锚定机构。
116.根据权利要求115所述的方法，其中，所述组织锚定机构能够激活以锚定到所述位置。
117.根据权利要求115至116所述的方法，其中，所述组织锚定机构包括渗透驱动的吸管。
118.根据权利要求115、116或117所述的方法，其中，所述组织锚定机构包括可操作用于将所述组合物锚定到所述位置的连接器。
119.根据权利要求118所述的方法，其中，所述连接器可操作用于利用粘合剂、负压和/或紧固件将所述组合物锚定到所述位置。
120.根据权利要求71所述的方法，其中，所述贮存器是可锚定的贮存器。
121.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，所述药物组合物是可摄入装置，包括：
壳体；
位于所述壳体内并且含有所述免疫调节剂的贮存器，
用于从所述贮存器释放所述免疫调节剂的机构；
和；
出口阀，其被配置成允许所述免疫调节剂从所述贮存器释放到所述壳体之外。
122.根据权利要求121所述的方法，其中，所述可摄入装置还包括：
位于所述壳体内的电子组件；和
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中，所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体。
123.根据权利要求121或122所述的方法，其中所述可摄入装置还包括：
放置在所述壳体内或附接到所述壳体的安全装置，
其中，所述安全装置被配置成当所述壳体内的内部压力超过阈值水平时释放所述内部压力。
124.根据权利要求1至60所述的方法，其中，所述药物组合物是可摄入装置，包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体内的电子组件；
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中，所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；位于所述壳体内的贮存器，
其中，所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；位于所述壳体的所述第一端的出口阀，
其中所述出口阀被配置成允许所述可配发物质从所述贮存器释放到所述壳体的所述第一端之外；以及
放置在所述壳体内或附接到所述壳体的安全装置，
其中所述安全装置被配置成当所述壳体内的内部压力超过阈值水平时释放所述内部压力。
125.根据权利要求1至60所述的方法，其中，所述药物组合物是可摄入装置，包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体内的电子组件，
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中所述电子组件被配置成激活所述气体发生单元以产生气体；位于所述壳体内的贮存器，
其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；位于所述壳体的所述第一端的注射装置，
其中所述射流注射装置被配置成将所述可配发物质从所述贮存器注射到所述壳体之外；以及
放置在所述壳体内或附接到所述壳体的安全装置，
其中所述安全装置被配置成释放所述壳体内的内部压力。
126.根据权利要求1至60所述的方法，其中，所述药物组合物是可摄入装置，包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体的侧面的光学感测单元，
其中，所述光学感测单元被配置成检测来自所述壳体外部环境的反射率；
位于所述壳体内的电子组件；
位于所述壳体内并且与所述电子组件相邻的气体发生单元，
其中，所述电子组件被配置成响应于基于所述反射率识别所述可摄入装置的位置而激活所述气体发生单元以产生气体；位于所述壳体内的贮存器，
其中所述贮存器储存可配发物质，并且所述贮存器的第一端附接到所述壳体的所述第一端；
与所述气体发生单元接触并且被配置成通过由所述气体发生单元产生的压力而移动或变形到所述贮存器中的膜；以及
放置在所述壳体的所述第一端的分配出口，
其中，所述分配出口被配置成将所述可配发物质从所述贮存器递送到所述壳体之外。
127.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，所述药物组合物是如美国专利申请序列号62/385,553中所公开的可摄入装置，所述美国专利申请以其全部内容通过引用并入本文。
128.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中，所述药物组合物是可摄入装置，其包含如国际专利申请PCT/US2015/052500中公开的定位机构，所述国际专利申请以其全部内容通过引用并入本文。
129.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中所述药物组合物不是镖状剂型。
130.一种治疗在来源于受试者的内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，所述方法包括：
在所述受试者的大肠中的位置处释放免疫调节剂，
其中，所述方法包括在内窥镜下向所述受试者施用治疗有效量的所述免疫调节剂，其中，所述方法不包括在并非预期释放部位的位置处释放超过所述免疫调节剂的20％。
131.一种治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的疾病或病状的方法，所述方法包括：
在所述受试者的大肠的近端部分中的位置处释放免疫调节剂，其中，所述方法包括在内窥镜下向所述受试者施用包含治疗有效量的所述免疫调节剂的药物组合物，其中所述药物组合物是可摄入装置。
132.根据权利要求130或131所述的方法，其中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过所述免疫调节剂的20％。
133.根据权利要求130、131或132所述的方法，其中，所述方法不包括在不接近预期释放部位的位置处释放超过所述免疫调节剂的10％。
134.根据权利要求130、131或132中任一项所述的方法，其中，所述方法在作为预期释放部位的位置处提供的所述免疫调节剂的浓度比在并非所述预期释放部位的位置处提供的所述免疫调节剂的浓度高2-100倍。
135.根据权利要求130至134中任一项所述的方法，其中，所述方法提供小于3μg/mL的、所述受试者血浆中所述免疫调节剂的浓度。
136.根据权利要求135所述的方法，其中，所述方法提供小于0.3μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的浓度。
137.根据权利要求136所述的方法，其中，所述方法提供小于0.01μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的浓度。
138.根据权利要求130至134中任一项所述的方法，其中，所述方法提供小于3μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的C24值。
139.根据权利要求130至134中任一项所述的方法，其中，所述方法提供小于0.3μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的C24值。
140.根据权利要求130至134中任一项所述的方法，其中，所述方法提供小于0.01μg/mL的、所述受试者的血浆中所述免疫调节剂的C24值。
141.根据权利要求130至134中任一项所述的方法，其中，所述组合物不包含肠溶包衣。
142.根据权利要求130至141中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂不是环肽。
143.根据权利要求130至141中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂存在于所述装置内的药物制剂中。
144.根据权利要求143所述的方法，其中，所述制剂是所述免疫调节剂于液体介质中的溶液。
145.根据权利要求143所述的方法，其中所述制剂是所述免疫调节剂于液体介质中的悬浮液。
146.根据权利要求130至145中任一项所述的方法，其中来源于所述内胚层的所述组织选自由以下组成的组：胃、结肠、肝脏、胰腺、膀胱、气管的上皮部分、肺、咽、甲状腺、甲状旁腺、肠和胆囊。
147.根据权利要求130至145中任一项所述的方法，其中在来源于所述内胚层的组织中出现的所述炎性疾病或病状选自由以下组成的组：胃炎、乳糜泻、肝炎、酒精性肝病、脂肪性肝病(肝脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝病(NASH)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胰腺炎、间质性膀胱炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、咽炎、甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状旁腺炎、肾炎、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫斯氏病、干燥综合征、1型糖尿病、盆腔炎性疾病、耳道炎、耳鸣、前庭神经炎、中耳炎、耳道炎、气管炎、胆汁淤积肝病、原发性胆汁性硬化症、肝实质、遗传性肝代谢紊乱、拜勒综合征、脑腱、黄瘤病、泽尔韦格氏综合征、新生儿肝炎、囊性纤维化、ALGS(阿拉吉欧综合征)、PFIC(进行性家族性肝内胆汁淤积症)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝纤维症、NAFLD、门静脉高压、一般性胆汁淤积诸如因药物引起的或怀孕期间的黄疸、肝内和肝外胆汁淤积诸如遗传形式的胆汁淤积如PFIC1、胆结石和胆总管结石、导致胆道系统阻塞的恶性肿瘤、由于胆汁淤积/黄疸引起的症状(抓挠、瘙痒)、导致进行性胆汁淤积的慢性自身免疫性肝病、和胆汁淤积性肝病、十二指肠溃疡、肠炎(放射性、化学疗法或感染诱导的肠炎)、憩室炎、结肠袋炎、胆囊炎和胆管炎的瘙痒。
148.根据权利要求130至145中任一项所述的方法，其中在来源于所述内胚层的组织中出现的所述炎性疾病或病状是肝脏炎症。
149.根据权利要求130至148中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在升结肠的近端部分中的位置处释放。
150.根据权利要求130至148中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在盲肠的近端部分中的位置处释放。
151.根据权利要求130至148中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在乙状结肠的近端部分中的位置处释放。
152.根据权利要求130至148中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在横结肠的近端部分中的位置处释放。
153.根据权利要求130至148中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节剂在降结肠的近端部分中的位置处释放。
154.根据权利要求130至148中任一项所述的方法，其中，所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的所述免疫调节剂的贮存器，其中所述贮存器连接到内窥镜。
155.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括口服、静脉内或皮下施用第二药剂，其中所述第二药剂是相同的免疫调节剂、不同的免疫调节剂、或具有与所述免疫调节剂不同的生物学靶标的药剂，其中所述第二药剂是适于治疗在来源于所述内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的药剂。
156.根据权利要求155所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述第二药剂之前施用。
157.根据权利要求155所述的方法，其中，所述免疫调节剂在所述第二药剂之后施用。
158.根据权利要求155所述的方法，其中，所述免疫调节剂和所述第二药剂基本上同时施用。
159.根据权利要求155中任一项所述的方法，其中，静脉内施用所述第二种药剂。
160.根据权利要求155中任一项所述的方法，其中，皮下施用所述第二药剂。
161.根据权利要求155至160中任一项所述的方法，其中，当所述免疫调节剂和所述第二药剂二者都全身施用时所述第二药剂的量小于所述第二药剂的量。
162.根据权利要求161所述的方法，其中，所述第二药剂是另一种免疫调节剂。
163.根据权利要求1至154中任一项所述的方法，其中，所述方法不包括施用第二药剂。
164.根据权利要求119至163中任一项所述的方法，其中，所述方法包括在内窥镜施用之前识别预期释放部位。
165.根据权利要求119至164中任一项所述的方法，其中，所述方法包括与释放所述免疫调节剂基本上同时识别预期释放部位。
166.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法包括监测所述疾病的进展。
167.根据权利要求1至164中任一项所述的方法，其中，所述方法不包括用喷雾导管施用免疫调节剂。
168.根据权利要求1至164中任一项所述的方法，其中，所述方法包括用喷雾导管施用免疫调节剂。
169.一种治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法，所述方法包括：
在所述受试者的胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放免疫调节剂，其中所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的所述免疫调节剂的药物组合物，所述方法包括以下步骤中的一个或多个：
a)识别患有在来源于所述内胚层的组织中出现的疾病或病状的受试者；
b)确定所述疾病的严重程度；
c)确定所述疾病的位置；
d)评估所述受试者是否适合于治疗；
e)施用诱导剂量的所述免疫调节剂；
f)监测所述疾病的进展；和/或
g)任选地重复步骤e)和f)一次或多次。
170.根据权利要求169所述的方法，其中，所述药物组合物是可摄入装置，并且所述方法包括向所述受试者口服施用所述药物组合物。
171.根据权利要求169或170所述的方法，其中所述方法包括在步骤e)中施用所述诱导剂量后施用一个或多个维持剂量。
172.根据权利要求171所述的方法，其中，所述诱导剂量是在可摄入装置中施用的所述免疫调节剂的剂量。
173.根据权利要求171或172所述的方法，其中，所述维持剂量是在如本文公开的可摄入装置中施用的所述免疫调节剂的剂量。
174.根据权利要求171或172所述的方法，其中，所述维持剂量是全身递送的所述免疫调节剂的剂量。
175.根据权利要求171所述的方法，其中，所述诱导剂量是全身递送的所述免疫调节剂的剂量。
176.根据权利要求171或175所述的方法，其中，所述维持剂量是在可摄入装置中施用的所述免疫调节剂的剂量。
177.根据权利要求171所述的方法，其中，所述诱导剂量是全身递送的第二药剂的剂量。
178.根据权利要求171或175所述的方法，其中，所述维持剂量是在可摄入装置中施用的所述免疫调节剂的剂量。
179.一种免疫调节剂递送设备，包括：
包含具有药物组合物的贮存器的可摄入壳体，所述药物组合物包含储存在所述贮存器中的治疗有效量的所述免疫调节剂；
耦接至所述可摄入壳体的检测器，所述检测器被配置成检测所述可摄入壳体何时接近相应预期释放部位；
与所述贮存器系统流体连通的阀门系统；以及
可通信地耦接至所述阀门系统和所述检测器的控制器，所述控制器被配置成响应于所述检测器检测到所述可摄入壳体接近所述相应预期释放部位而使阀门系统打开，以在所述相应预期释放部位释放治疗有效量的所述免疫调节剂。
180.根据权利要求179所述的免疫调节剂递送设备，其还包括位于所述可摄入壳体中的泵，所述泵被配置成响应于由所述控制器响应于所述检测器检测到所述可摄入壳体接近所述预期释放部位而激活所述泵从而从所述贮存器泵送治疗有效量的所述免疫调节剂。
181.根据权利要求180所述的免疫调节剂递送设备，其中，所述控制器被配置成使所述泵根据以下方案从所述贮存器中泵送治疗有效量的所述免疫调节剂。
182.根据权利要求179所述的免疫调节剂递送设备，其中，所述阀门系统包括可溶解的涂层。
183.根据权利要求179所述的抗炎剂递送设备，其中，所述阀门系统包括配置成通过滑动、枢转和旋转中的至少一种来驱动的一个或多个门。
184.根据权利要求179所述的免疫调节剂递送设备，其中，所述阀门系统包括静电屏。
185.根据权利要求179所述的免疫调节剂递送设备，其中，所述贮存器包括加压单元。
186.根据权利要求179所述的免疫调节剂递送设备，其还包括至少一个可驱动锚，其被配置成在驱动时将所述可摄入壳体保持在所述相应预期释放部位。
187.根据权利要求179所述的抗炎抑制剂递送设备，其中，所述可驱动锚是可伸缩的。
188.一种组合物，其包含治疗有效量的根据前述权利要求中任一项所述的免疫调节剂，其中所述组合物能够在所述受试者的所述胃肠道中的位置处释放所述免疫调节剂。
189.根据权利要求188所述的组合物，其中，所述组合物包含用于将所述组合物锚定到所述位置的组织锚定机构。
190.根据权利要求189所述的组合物，其中，所述组织锚定机构能够进行锚定以锚定到所述位置。
191.根据权利要求189或190所述的组合物，其中，所述组织锚定机构包括渗透驱动的吸管。
192.根据权利要求189、190或191所述的组合物，其中，所述组织锚定机构包括可操作用于将所述组合物锚定到所述位置的连接器。
193.根据权利要求192所述的组合物，其中，所述连接器可操作用于利用粘合剂、负压和/或紧固件将所述组合物锚定到所述位置。
194.一种免疫调节剂，其用于治疗受试者中在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法中，其中，所述方法包括向所述受试者口服施用装载有所述免疫调节剂的可摄入装置，其中所述免疫调节剂由所述装置在所述受试者的胃肠道中接近所述免疫调节剂的预期释放部位的位置处释放。
195.根据权利要求194所用的免疫调节剂，其中，所述免疫调节剂包含在适于附接至装置壳体的贮存器中，并且其中所述方法包括在向所述受试者口服施用所述可摄入装置之前将所述贮存器附接到所述装置壳体以形成所述可摄入装置。
196.一种含有免疫调节剂的可附接贮存器，其用于治疗在来源于内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状的方法中，其中，所述方法包括将所述贮存器附接到装置壳体以形成可摄入装置，并且将所述可摄入装置口服施用于受试者，其中通过装置在所述受试者的胃肠道中接近所述预期释放部位的位置处释放所述免疫调节剂。
197.一种包含装载有治疗有效量的免疫调节剂的可摄入装置或由所述可摄入装置组成的组合物，其用于治疗方法中，其中，所述方法包括将所述组合物口服施用于受试者，其中通过所述装置在所述受试者的胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放所述免疫调节剂。
198.根据权利要求194或195所使用的免疫调节剂，根据权利要求196所使用的可附接贮存器隔室，或根据权利要求197所使用的组合物，其中所述预期释放部位是已经预先确定的。
199.根据权利要求194或195所使用的免疫调节剂，根据权利要求196所使用的可附接贮存器隔室，或根据权利要求197所使用的组合物，其中，所述可摄入装置还包括环境传感器，并且所述方法还包括使用所述环境传感器识别所述预期释放部位的位置。
200.根据权利要求199所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、所使用的组合物，其中，所述环境传感器是成像传感器，并且所述方法还包括对所述胃肠道成像以识别所述预期释放部位。
201.根据权利要求200所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、或所使用的组合物，其中所述成像检测预期释放部位。
202.根据权利要求194至201中任一项所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、或所使用的组合物，其中在来源于所述内胚层的组织中出现的所述炎性疾病或病状选自以下的组：胃炎、乳糜泻、肝炎、酒精性肝病、脂肪性肝病(肝脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝病(NASH)、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胰腺炎、间质性膀胱炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、咽炎、甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状旁腺炎、肾炎、桥本氏病、艾迪生氏病、格雷夫斯氏病、干燥综合征、1型糖尿病、盆腔炎性疾病、耳道炎、耳鸣、前庭神经炎、中耳炎、耳道炎、气管炎、胆汁淤积肝病、原发性胆汁性硬化症、肝实质、遗传性肝代谢紊乱、拜勒综合征、脑腱、黄瘤病、泽尔韦格氏综合征、新生儿肝炎、囊性纤维化、ALGS(阿拉吉欧综合征)、PFIC(进行性家族性肝内胆汁淤积症)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝纤维症、NAFLD、门静脉高压、一般性胆汁淤积诸如因药物引起的或怀孕期间的黄疸、肝内和肝外胆汁淤积诸如遗传形式的胆汁淤积如PFIC1、胆结石和胆总管结石、导致胆道系统阻塞的恶性肿瘤、由于胆汁淤积/黄疸引起的症状(抓挠、瘙痒)、导致进行性胆汁淤积的慢性自身免疫性肝病、和胆汁淤积性肝病、十二指肠溃疡、肠炎(放射性、化学疗法或感染诱导的肠炎)、憩室炎、结肠袋炎、胆囊炎和胆管炎的瘙痒。
203.一种可摄入装置，其装载有治疗有效量的免疫调节剂，其中所述装置可控制用于在受试者的胃肠道中接近预期释放部位的位置处释放所述免疫调节剂。
204.根据权利要求203所述的装置，其用于治疗人体或动物身体的方法中。
205.根据权利要求194至202中任一项所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室或所使用的组合物，或根据权利要求203或权利要求204所述的装置，其中所述可摄入装置包括：
壳体，由第一端、与所述第一端基本相对的第二端、以及从所述第一端纵向延伸到所述第二端的壁限定；
位于所述壳体内并且含有所述免疫调节剂的贮存器，其中所述贮存器的第一端连接到所述壳体的所述第一端；
用于从所述贮存器中释放抗炎剂的机构；以及
出口阀，其被配置成允许所述免疫调节剂从所述贮存器释放到所述壳体之外。
206.根据权利要求194至202中任一项所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室或所使用的组合物，或根据权利要求203或权利要求204所述的装置，其中所述可摄入装置包括：
包含贮存器隔室的可摄入壳体，在所述贮存器隔室中储存治疗有效量的所述免疫调节剂；
释放机构，其具有将所述免疫调节剂保留在所述贮存器中的闭合状态和将所述免疫调节剂从所述贮存器释放到所述装置外部的打开状态；以及
将所述释放机构的状态从关闭状态改变为打开状态的驱动器。
207.根据权利要求205或206所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、所使用的组合物、或装置，其中所述可摄入装置还包括环境传感器，其用于检测所述装置在所述肠道中的位置。
208.根据权利要求207所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、所使用的组合物、或装置，其中所述可摄入装置还包括用于将数据从所述环境传感器传输到外部接收器的通信系统。
209.根据权利要求207或208所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、所使用的组合物、或装置，其中所述可摄入装置还包括处理器或控制器，所述处理器或控制器耦接到所述环境传感器和所述驱动器，并且当确定所述装置位于所述预期释放部位处或接近所述预期释放部位时，触发所述驱动器以使所述释放机构从其闭合状态转换到其打开状态。
210.根据权利要求208所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、所使用的组合物、或装置，其中所述通信系统还包括用于接收来自外部发射器的信号的器具，并且其中所述驱动器适于响应于所述信号而被触发。
211.根据权利要求205至210中任一项所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、所使用的组合物、或装置，其中所述可摄入装置还包括用于将定位数据传输到外部接收器的通信系统。
212.根据权利要求205至208中任一项所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、所使用的组合物、或装置，其中所述可摄入装置还包括用于将定位数据传输至外部接收器和用于接受来自外部发射器的信号的通信系统；其中所述驱动器适于响应于所述信号而被触发。
213.根据权利要求114至212中任一项所使用的免疫调节剂、所使用的可附接贮存器隔室、所使用的组合物、或装置，其中所述可摄入装置还包括可展开的锚定系统和用于展开所述锚定系统的驱动器，其中所述锚定系统能够将所述可摄入装置锚定或附接到所述受试者的组织。
214.根据权利要求1-178中任一项所述的方法，其中，所述受试者先前已经被识别为患有在来源于所述内胚层的组织中出现的炎性疾病或病状。
215.根据权利要求1-107或113-178中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂选自由以下组成的组：IL-12/IL-23抑制剂、TNFα抑制剂、IL-6受体抑制剂、CD40/CD40L抑制剂、IL-1抑制剂、IL-13抑制剂、IL-10受体抑制剂、和整联蛋白抑制剂。
216.一种配制包含免疫调节剂的药物组合物的方法，所述方法包括：
(a)向哺乳动物的小肠和/或结肠局部施用一定剂量的免疫调节剂；
(b)选择免疫调节剂，已经确定各自与全身施用相同剂量的所述免疫调节剂的对照哺乳动物中的对应水平相比，所述免疫调节剂在步骤(a)中的局部施用导致(i)所述哺乳动物中肠系膜淋巴结中的T细胞水平和派尔集合淋巴结中的T细胞水平中的一者或两者降低，和/或(ii)所述哺乳动物中的血液中的T细胞水平增加；和
(c)配制包含所述所选择的免疫调节剂的药物组合物。
217.一种配制包含免疫调节剂的药物组合物的方法，所述方法包括：
(a)选择免疫调节剂，已经确定各自与全身施用相同剂量的所述免疫调节剂的对照哺乳动物中的对应水平相比，向哺乳动物的小肠和/或结肠局部施用所述免疫调节剂导致(i)所述哺乳动物中肠系膜淋巴结中的T细胞水平和派尔集合淋巴结中的T细胞水平中的一者或两者降低，和/或(ii)所述哺乳动物的中血液中的T细胞水平增加；和
(b)配制包含所述所选择的免疫调节剂的药物组合物。
218.一种配制包含免疫调节剂的药物组合物的方法，所述方法包括配制包含免疫调节剂的药物组合物，确定各自与全身施用相同剂量的所述免疫调节剂的对照哺乳动物中的对应水平相比，所述免疫调节剂在将一定剂量的所述免疫调节剂局部施用于所述哺乳动物的小肠和/或结肠的哺乳动物中导致：(i)哺乳动物中肠系膜淋巴结中的T细胞水平和派尔集合淋巴结中的T细胞水平中的一者或两者降低，和/或(ii)所述哺乳动物中的血液中的T细胞水平增加。
219.根据权利要求216-218中任一项所述的方法，其中，所述肠系膜淋巴结中的所述T细胞水平是所述肠系膜淋巴结中的Th记忆细胞水平。
220.根据权利要求216-218中任一项所述的方法，其中，所述派尔集合淋巴结中的所述T细胞水平是所述派尔集合淋巴结中的Th记忆细胞水平。
221.根据权利要求216-218中任一项所述的方法，其中，所述血液中的所述T细胞水平是所述血液中的Th记忆细胞水平。
222.根据权利要求216-218中任一项所述的方法，其中，已经确定各自与全身施用相同剂量的所述免疫调节剂的对照哺乳动物中的对应水平相比，所述免疫调节剂的所述局部施用导致所述哺乳动物中肠系膜淋巴结中的所述T细胞水平和派尔集合淋巴结中的所述T细胞水平中的一者或两者降低。
223.根据权利要求216-218中任一项所述的方法，其中，已经确定与全身施用相同剂量的所述免疫调节剂的对照哺乳动物中的对应水平相比，所述免疫调节剂的所述局部施用导致所述哺乳动物中的血液中的所述T细胞水平增加。
224.根据权利要求216-218中任一项所述的方法，其中，已经确定各自与全身施用相同剂量的所述免疫调节剂的对照哺乳动物中的对应水平相比，所述免疫调节剂的所述局部施用导致(i)哺乳动物中肠系膜淋巴结中的所述T细胞水平和派尔集合淋巴结中的所述T细胞水平中的一者或两者降低，和(ii)所述哺乳动物中的血液中的所述T细胞水平增加。
225.根据权利要求216-224中任一项所述的方法，其中所述对照哺乳动物是与局部施用所述剂量的所述免疫调节剂的哺乳动物相比具有相似年龄并且具有相似疾病状态的哺乳动物。
226.根据权利要求216-225中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂选自由以下组成的组：IL-12/IL-23抑制剂、TNFα抑制剂、IL-6受体抑制剂、CD40/CD40L抑制剂、IL-1抑制剂、IL-13抑制剂、IL-10受体抑制剂、和整联蛋白抑制剂。
227.根据权利要求216-226中任一项的方法，其中所述药物组合物是可摄入装置，所述可摄入装置含有置于其中的治疗有效量的所述免疫调节剂。
228.一种通过根据权利要求216-227中任一项所述的方法制备的药物组合物。
229.一种试剂盒，其包含根据权利要求228所述的药物组合物。
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