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CN111184692B - 一种白藜芦醇的制剂及其制备方法 - Google Patents

一种白藜芦醇的制剂及其制备方法 Download PDF

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CN111184692B CN202010091868.2A CN202010091868A CN111184692B CN 111184692 B CN111184692 B CN 111184692B CN 202010091868 A CN202010091868 A CN 202010091868A CN 111184692 B CN111184692 B CN 111184692B
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Abstract

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种基于协同超饱和作用的使难溶性化合物白藜芦醇增溶的制剂及其制备方法。本制剂包括：白藜芦醇、作为结晶抑制的水溶性高分子材料、作为包载剂的环糊精、作为表面活性剂的磷脂和胆酸钠，所述制剂包括以下重量配比的组分：白藜芦醇10～25份、水溶性高分子材料65～83份、环糊精6～21份、磷酯0.6～3份、胆酸钠0.4～1份。

Description

一种白藜芦醇的制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种基于协同超饱和作用的白藜芦 醇制剂及其制备方法。
背景技术
白藜芦醇(Resveratrol，RES)是一种生物活性很强的天然多酚类物质， 主要来源于葡萄、虎杖、花生、桑椹等植物。已有的发现表明，RES具有多 种药理作用，包括抗肿瘤、保护心血管、降血脂、抗菌消炎、抗衰老、抗氧 化、抗血小板凝集、预防动脉粥样硬化以及调节脂质代谢等。近年来的研究 也发现，RES对多种病毒具有较强的抑制作用。
白藜芦醇(RES)的化学名称为3，4'，5-三羟基-1,2-二苯基乙烯(3， 4'，5-芪三酚)，CAS号501-36-0。RES为白色针状结晶，分子式为C14H12O3， 分子量为288.25，在植物体内有顺、反两种结构，其中以反式结构为主。RES 难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、二氯甲烷等有机溶剂中，在避光和中性pH 条件下的稳定性较好。
RES是一种活性多酚物质，具有降低血脂，预防心脑血管疾病以及抗癌 等重要的生理作用，是一种目前在世界上最新的药用保健活性物质，极有期 望发展成为抗癌新药和新型保健品的药用成份。目前，该产品在国际市场上 十分走红,用户需求量很大，市场前景十分看好。研究发现，RES的药理作 用至少有以下几种：(1)抗肿瘤作用，RES是一种天然的抗肿瘤化学预防剂， 在肿瘤发生的起始、增进和扩展3个阶段，都具有较好的防癌活性，并且对 每一阶段的癌细胞都有抑制作用；(2)对心脑血管的保护作用，RES可通过 减少心肌缺血再灌注损伤，抑制动脉粥样硬化和血栓的形成、抗炎、抗氧化、 舒张血管等发挥其心脑血管的保护作用；(3)抗氧化、抗自由基，RES可清 除和抑制自由基的生成，抑制脂质过氧化，调节抗氧化酶相关的活性；(4) 对免疫系统的调节作用，RES可提高机体巨噬细胞的吞噬率。RES还具有抗 病毒、抗衰老、抗变态反应、保肝等一系列作用。
RES功能的发挥需要合适的RES制剂，然而，RES本身的理化性质限 制其作为药物使用。这是由于，粉末状RES水溶性差，性质不稳定，迅速 代谢，口服RES的生物利用度几乎为零，普通制剂难以通过口服给药途径 在体内发挥良好的生物学活性。因此，近年来关于RES的制剂研究引起原 来越多的关注，以期提高RES的溶解度，改善RES的药代动力学参数及制 剂安全性。
RES水溶性极低，影响了其在体内的生物利用度。常见的增加RES水 溶性的办法是将RES用环糊精(cyclodextrin，CD)包裹，形成复合物。以 往的研究表明，CD能有效地增加一些难溶性药物的溶解度。文献报道α-， β-和γ-CD均可与RES形成摩尔比为1∶1的包合物，能显著提高RES的水 溶性。其中，HP-β-CD与白RES形成的包合物水溶性明显增强，通过荧光素探针标记评估包合物的抗氧化能力，发现包合物提高了荧光衰退曲线下面 积至饱和水平，抗氧化能力几乎增加了一倍。RES的抗氧化能力依赖于RES 与羟丙基-β-CD包合物的形成，其中环糊精作为游离RES剂量调控存储池， 保护RES以防止其被自由基快速氧化，从而最大限度地延长了RES的抗氧 化活性。然而，限于环糊精包合作用的原理，RES分子和环糊精仅能理论上 以摩尔量为1:1的形式存在，而在实际中，由于环糊精的包合效率一般低于100％，因此环糊精的摩尔含量一般高于RES的摩尔含量。这带来了一个明 显的问题：由于环糊精的分子量远高于RES，因此最终形成的RES包合物 中RES固含量就被限制在一个较低的水平，一般不高于10％，也就是说， 为了促进RES的增溶而不得不加入将近90％的无任何生理活性的物质，这 并非是一种高效的包载方式。另外，较低的载药量的一个严重缺陷就是对后 续的制剂生产造成不利影响。对于大多数固体制剂，其制剂单位重量一般都 有一个限定值，这个限定值，不仅是制剂生物活性所确定，更是制剂机械锁 决定，通俗的讲，我们既不能把一片药物做成馅饼那么大，也不能指望有一 台压片机把低载药量的RES制剂物料压成馅饼那么大的制剂以增加单位制 剂的药物含量。对通常的办法，就是在一个制剂单位内，提高药物的浓度(也 就是所谓固含量)，以增加单位制剂内的RES含量。
利用超饱和原理设计增加难溶性药物的制剂方式在医药工业中已有运 用。超饱和体系中的药物在原位迅速产生超过其饱和溶解度的浓度，提高药 物在溶剂中的热力学活度，从而增加药物释放及吸收的驱动力，达到增加口 服生物利用度的目的。只要采取合适的制剂辅料和工艺，利用超饱和原理制 成的制剂能也能有效解决载药量问题，而不必如环糊精一样限制在一定范围 内。利用超饱和原理设计增加难溶性药物的制剂最成功的例子是使用固体分 散体(solid dispersion)，但此时药物处于亚稳定状态，在热力学上不稳定， 特别是在溶液中有结晶趋势，因此需要一些制剂策略抑制处于超饱和状态的 药物重新形成结晶。将RES制成固体分散体的报道时常出现，可使用包括 PVP、HPMC等许多常见的制剂辅料与RES形成固体分散体，然而，据我们 调研发现，尚没有任何一个已知案例既能让RES固体分散体制剂在溶于水 形成超饱和体系后，在较长时间内稳定存在，而不发生结晶和沉淀。
已有报道表明，将固体分散体技术(超饱和制剂技术)和环糊精技术联 合使用，能够进一步增加难溶性药物的溶出速度和溶解度。例如，Fatmi等 人报道，将难溶性抗癌药物喜树碱使用环糊精包裹并进一步使用PEG等高 分子材料形成三相物质后，其溶解度和口服生物利用度都得到了进一步提高 (Acta Pol Pharm.2015Jan-Feb；72(1):179-92.)。同样地，Urvi Gala在其公布 于Creighton University大学网站的硕士论文“Preparation,Characterization and Dissolution Study for Curcumin-Resveratrol-CyclodextrinAmorphous Ternary System”中也表明，将固体分散体和环糊精联合使用，能够增加白藜芦醇的 溶出速度。然而，据我们调研，在已有的药物+固体分散体+环糊精形成的三 相物料的研究中，尚没有明确的关于增强难溶性药物的溶液稳定性的有效手 段。开发一种可能解决难溶性药物+固体分散体+环糊精形成的三相物料构成 的RES增溶制剂的水溶液稳定性的有效方法，是本发明的目的所在。
发明内容
本发明提供一种基于协同超饱和作用的RES固体制剂及其制备方法， 其目的是提高RES的溶解度，提高RES的口服吸收能力，固含量高(现制 剂使用的环糊精包合工艺，仅能把RES的固含量做到10％，而本发明可做 到20％)；长期稳定性好(相对于其他固体分散体)；溶液稳定性好(相对于 其他固体分散体)，该制剂包含不同类型的超饱和制剂制备方法，通过两种 或两种以上方法的联合使用，促进RES的超饱和制剂的溶液稳定性和长期 稳定性。
为了解决本发明的技术问题，本发明的技术方案为：一种白藜芦醇的制 剂，所述制剂包括以下重量配比的组分：
Figure BDA0002383942350000051
其中所述白藜芦醇的结构式如下：
Figure BDA0002383942350000052
所述水溶性高分子材料是HPMC、PVP、HPMCAS的一种或几种；
所述环糊精为羟丙基-β-环糊精、甲基-β-环糊精中的一种或两种；
所述磷脂为蛋黄磷脂、大豆磷脂中的一种或两种。
进一步的，还包括添加药学上可接受的固体制剂辅料制成片剂、颗粒剂、 胶囊剂。
进一步的，所述的固体制剂辅料为羧甲基纤维素钠、微晶纤维素或乳糖。
进一步的，所述制剂包括以下重量配比的组分：
Figure BDA0002383942350000053
Figure BDA0002383942350000061
进一步的，所述制剂包括以下重量配比的组分：
Figure BDA0002383942350000062
进一步的，能改善白藜芦醇的溶解度，相比于未经过加工的白藜芦醇增 加10倍以上。
进一步的，制剂溶于pH值介于6～8之间的水基缓冲溶液后能保持稳定 1h以上。
为了解决本发明的技术问题，本发明的另一技术方案为：所述白藜芦醇 制剂的制备方法，将各成分溶于乙醇后，可通过减压蒸发或喷雾干燥工艺制 备制剂产品。
有益效果：
为了进一步解决RES溶解度，增强其水溶液稳定性，本发明在充分考 察由水溶性高分子材料(为HPMC、PVP、HPMCAS中的一种或几种)和环 糊精(为羟丙基-β-环糊精或甲基-β-环糊精中的一种或几种)形成的复合物 的基础上，意外发现将磷脂(为蛋黄磷脂或大豆磷脂中的一种或几种)+胆 酸钠(CAS号：361-09-1)添加进入上述制剂后，可大幅度增加RES制剂的 溶液稳定性，因而使得水溶性增强的RES制剂更加具备实用型(换句话说， 比仅能短时增加RES水溶性但无法确保放置时间稍长后的溶液稳定性的制 剂更有利用应用于实际)。我们尚不清楚为何磷脂+胆酸钠的组合物可以改善 RES+水溶性高分子材料+环糊精所形成的三相复合物在溶于水后的溶液稳 定性，据我们推测，可能是磷脂+胆酸钠的组合物改变了该复合物的表面电 荷，改变了原复合物可能形成的氢键的固有潜力。
这种基于协同超饱和作用的RES固体制剂具备以下特征：(1)能改善 RES的溶解度，其中，RES在水基缓冲溶液中的溶解度相比于未经过加工的 RES增加10倍以上；(2)制剂溶于水基缓冲溶液后可形成澄清透明的溶液， 其中，制剂溶于pH值介于6～8之间的水基缓冲溶液后在溶液中的未溶解的 颗粒的粒径小于100nm；(3)制剂溶于pH值介于6～8之间的水基缓冲溶液 后能保持稳定1h以上；(4)具备长期放置的稳定性，其在室温下避光放置0.5年后的主药含量下降不超过5％；(5)通过利用协同超饱和作用，可以最 大程度上稳定RES在溶液中的分子状态，抑制其结晶，因此，在这种固体 制剂中，可以得到固含量(或者载药量)更高的RES制剂。
本制剂的制备方法较为简洁：首先将各物质溶于包含乙醇的有机溶剂 中，随后将有机溶剂迅速挥发，形成的白色固态物质；其中，有机溶剂迅速 挥发的手段包括减压蒸发或喷雾干燥等，这类手段在生产规模的工艺设计上 容易实现。
更进一步地，本发明将制备得到的新型高溶解度的速释RES制剂通过 体外细胞水平实验证实其对2019-nCoV具有一定抑制作用，并优于单独使用RES时所产生的抑制作用，具有临床使用的可能性。
本发明将不同的超饱和原理结合起来的方式，制备了稳定的RES高溶 解度、高载药量的制剂。在该制剂中，超饱和形成的方式归纳起来为相互结 合、相互协同的三种原理：即利用水溶性高分子材料将RES形成无定型分 子状态、利用环糊精将分子状态的部分RES包裹起来分布于水溶性高分子 材料表面上、以及利用磷脂、胆酸钠等表面活性剂改善药物-高分子材料复 合物表面电荷。
其中白藜芦醇的制剂选用HPMCAS、羟丙基-β-环糊精、大豆磷脂在增 溶、速释、稳定性和抗病毒效果等几个方面最佳。
附图说明
图1RES对SARS-CoV-2的抑制率
具体实施方式
现在结合附图对本发明作进一步详细的说明。
实施例1：
要解决的问题是我们希望增加RES的水溶性，以期提高其在水中的溶 解度，增加对于冠状病毒的杀伤效果。因此，我们尝试了单独使用数种辅料 和RES形成复合物后的溶解度，发现了几种辅料对于增加RES溶解度的效 果较好。这一步实际上就是用来筛选究竟哪个材料对于RES的增溶效果和 维持溶液稳定性效果较好。
单因素增溶技术的对比(百分数为质量分数)，处方见表1。
表1单因素增溶技术处方对比
Figure BDA0002383942350000081
Figure BDA0002383942350000091
按处方，将各物质按比例称量，得总质量为M的混合物。称量质量为 30倍于M的质量浓度为98％乙醇，将混合物溶于该乙醇中，加热至50℃搅 拌溶解，形成澄清透明的溶液，利用真空旋转蒸发仪将有机溶剂迅速挥发除 去，形成白色粉末状固态产物。
将所得产物过量加入pH6.8的PBS溶液中(37℃)，持续搅拌1h，取混 合液5ml，经0.45um微孔滤膜过滤，取续滤液，经适当稀释后，利用 HPLC-UV测定RES浓度，并计算溶解度。各处方取一定量产物，加入到pH6.8 的PBS溶液中(37℃)，使得RES理论浓度为该处方所得饱和溶解度的1/2， 持续搅拌1h，肉眼观察在物质在溶液中的物理稳定性。结果见表2。
结果表明，通过HP-β-CD和HPMCAS-M可以对RES形成最有效的增 溶。其中HP-β-CD对RES的增溶作用依赖于环糊精包合原理，HPMCAS-M 对RES的增溶作用依赖于形成固体分散体。另外，通过初步溶液稳定性试 验可知，在短时间内(1h)，通过HP-β-CD和HPMCAS-M对RES增溶后形 成的溶液稳定。在此工艺下，磷脂虽然可以与RES形成磷脂复合物，但增 溶效果有限，单因素的胆酸钠对RES的增溶效果也有限。基于上述结果， 选取HP-β-CD和HPMCAS-M对高固含量RES制剂进行进一步研究。
表2单因素增溶技术实验结果
Figure BDA0002383942350000101
“√”表示溶液在1h内未出现浑浊；
“×”表示溶液在1h内出现明显浑浊。
实施例2：
我们利用通过实施例1筛选出来的增溶效果较好的两个材料，即 HP-β-CD或HPMCAS-M制成二元的复合物，即形成RES-HP-β-CD或者 RES-HPMCAS-M，这一步的主要目的是看通过增加RES含量来判断哪个材 料具备更好的RES“容量”，也就是说，哪个材料再容纳更多RES，这主要 是用来考虑制备高固含量的RES而设置。其方法是：按表3所列处方，以 A+B或A+C的方式，将各物质按比例称量，得总质量为M的混合物。称量 质量为30倍于M的质量浓度为98％乙醇，将混合物溶于该乙醇中，加热至 50℃搅拌溶解，形成澄清透明的溶液，利用真空旋转蒸发仪将有机溶剂迅速 挥发除去，得白色粉末状固态产物。RES固含量爬坡试验(百分数为质量分 数)，处方见表3。
表3 RES固含量爬坡试验处方安排
Figure BDA0002383942350000102
Figure BDA0002383942350000111
分别取所得产物0.5g，加入到100ml pH6.8的PBS溶液中(37℃)中， 充分搅拌，观察混合液状态。结果见表4。
结果表明，通过HP-β-CD的包合作用，虽然可以有效增加RES的溶解 度，但限于包合原理(即理论上由1分子的HP-β-CD包合1分子的RES)， 故最终形成的制剂中RES的固含量必然有一个上限(即理论包合值)，然而 由于包合效率不可能是100％，且在实验或生产过程中可能存在损耗，因此 HP-β-CD的实际用量肯定要大于理论用量。上述因素使得HP-β-CD对RES 包合后形成的最终制剂中RES的固含量最高仅能做到10％～11％。与之相比， 通过HPMCAS-M对RES形成固体分散体后，通过氢键作用，可有效增加 RES固含量至20％，溶于pH6.8的PBS溶液中(37℃)后，形成了超饱和 溶液，通过HPMCAS-M的结晶抑制作用，能在一定时间内保证溶液中处于 超饱和状态的RES不形成沉淀。因而，通过HPMCAS-M与RES形成固体 分散体系，具有较好的制备高固含量高溶解度的RES制剂的潜力。
表4 RES固含量爬坡试验结果
处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 处方6
A+B √ √- × × × ×
A+C √ √ √ √ √ √
“√”表示溶液在1h内未出现浑浊；
“√-”表示在溶解过程澄清，但在在1h内出现浑浊；
“×”表示物质不能充分溶解。
实施例3
我们通过实施例2，证实了HPMCAS-M比HP-β-CD具备更大的RES 容量，也就是在容纳更多RES后仍能维持溶液澄清。在实施例3中，我们 进一步发现，当HPMCAS-M和HP-β-CD联合使用时，能够比单独使用 HPMCAS-M或单独使用HP-β-CD进一步增加RES的溶出速度，证实了制备 三元的复合物(RES-HP-β-CD-HPMCAS-M)比二元的复合物(RES-HP-β-CD 或RES-HPMCAS-M)在提高溶出速度方面更优，换句话说，具备更好的速 释效果。其做法是：按表5所列处方，将各物质按比例称量，得总质量为M 的混合物。称量质量为30倍于M的质量浓度为98％乙醇，将混合物溶于该 乙醇中，加热至50℃搅拌溶解，形成澄清透明的溶液，利用真空旋转蒸发仪 将有机溶剂迅速挥发除去，得到白色粉末状固体。
表5.溶出速度验证的处方组成
Figure BDA0002383942350000121
利用中国药典所列“浆法”进行溶出度测定。分别取白色粉末状固态产 物0.5g，加入到500ml pH6.8的PBS溶液中(37℃)中，搅拌速度50rpm。 10min后，取混合液5ml，经0.45um微孔滤膜过滤，取续滤液，经适当稀 释后，利用HPLC-UV测定RES浓度，计算各处方在该时间点的溶出百分数。 结果见表6
表6.各处方溶出速度结果
Figure BDA0002383942350000131
结果表明，当HPMCAS-M和HP-β-CD联合使用时，能够比单独使用 HPMCAS-M或单独使用HP-β-CD进一步增加RES的溶出速度，证实了制备 三元的复合物(RES-HP-β-CD-HPMCAS-M)比二元的复合物(RES-HP-β-CD 或RES-HPMCAS-M)在提高溶出速度方面更优。
实施例4：
虽然实施例3通过三元体系既增加了复合物的溶解度，又增加了复合物 的溶出速度，但对于溶解到溶液中后的物理稳定性则有待提高。实施例4正 是为此而设立。即通过在处方中添加极少比例的磷脂+胆酸钠组合物，即可 有效增加复合物溶于缓冲液后的溶液稳定性。其做法是：按表7所列处方， 将各物质按比例称量，得总质量为M的混合物。称量质量为30倍于M的质 量浓度为98％乙醇，将混合物溶于该乙醇中，加热至50℃搅拌溶解，形成澄清透明的溶液，利用喷雾干燥机将有机溶剂迅速挥发除去，得到白色粉末 状固态物质。
表7.磷脂-胆酸钠体系增加复合物溶液物理稳定性
Figure BDA0002383942350000132
Figure BDA0002383942350000141
将所得白色粉末状固态产物以1％浓度(w/v)加入pH6.8的PBS溶液 中(37℃)，持续搅拌4h，观察体系是否在4h内出现沉淀。结果表明，添 加了磷脂-胆酸钠体系后，对于在较长时间内保持溶液稳定性极为有利，其 作用机制尚不明确，但据推测可能是磷脂-胆酸钠体系对RES-HP-β-CD- HPMCAS-M复合物的表面电荷进行某种改善有关。稳定性表现见表8。
表8.磷脂-胆酸钠体系增加复合物溶液物理稳定性结果
Figure BDA0002383942350000142
“√”表示溶液在4h内未出现浑浊；
“×”表示溶液在4h内出现浑浊。
实施例5
证明其他水溶性高分子材料在添加了磷脂胆酸钠体系后也能在一定程 度上维持溶液稳定性。其做法是：按表9所列处方，将各物质按比例称量， 得总质量为M的混合物。称量质量为30倍于M的质量浓度为98％乙醇， 将混合物溶于该乙醇中，加热至50℃搅拌溶解，形成澄清透明的溶液，利用 真空旋转蒸发仪将有机溶剂迅速挥发除去，得白色粉末状固态产物。
表9.其他高分子材料的促进溶液稳定性作用
Figure BDA0002383942350000151
将所得固态产物以1％浓度加入pH6.8的PBS溶液中(37℃)，持续搅 拌4h，观察体系是否在4h内出现沉淀。结果表明，只要在体系中添加合理 浓度的磷脂-胆酸钠体系，都可以在一定程度上保持溶液在较长时间内的溶 液稳定性。稳定性结果见表10.
表10.其他高分子材料的促进溶液稳定性作用结果
Figure BDA0002383942350000152
“√”表示溶液在4h内未出现浑浊；
“×”表示溶液在4h内出现浑浊。
实施例6
按表11所列处方，将各物质按比例称量，得总质量为M的混合物。称 量质量为30倍于M的质量浓度为98％乙醇，将混合物溶于该乙醇中，加热 至50℃搅拌溶解，形成澄清透明的溶液，利用真空旋转蒸发仪将有机溶剂迅 速挥发除去，得白色粉末状固态产物。
表11.检验处方安排
Figure BDA0002383942350000161
将所得产物过量加入pH6.8的PBS溶液中(37℃)，持续搅拌1h，取混 合液5ml，经0.45um微孔滤膜过滤，取续滤液，经适当稀释后，利用 HPLC-UV测定RES浓度，并计算溶解度。各处方取一定量产物，加入到pH6.8 的PBS溶液中(37℃)，使得RES理论浓度为该处方所得饱和溶解度的1/2， 持续搅拌4h，肉眼观察在物质在溶液中的物理稳定性。结果见表12。结果 表明，各处方在端点处可取得较好的溶解度(RES原料药在pH6.8水溶液的 溶解度为仅为23.6μg/ml)，溶于缓冲液后的溶液稳定性也可满足。以上七组 1-7处方中其余部分不变，不同之处在于把大豆磷脂替换成蛋黄磷脂，实验 效果得到的七组处方的溶解度和稳定性和采用大豆磷脂的基本相同。
表12.各处方端点值检验处方安排结果
Figure BDA0002383942350000171
实施例7片剂的制备
处方(以1000片计算处方量)
实施例6中表11处方5中所得物料50g
直压型山梨醇120g
微晶纤维素20g
滑石粉2g
制备方法：将上述各成分过100目筛网后，充分混合，使用旋转压片机直接 压片。
实施例8颗粒剂的制备
处方
实施例6中表11处方5中所得物料50g
微晶纤维素：120g
乳糖：60g
共聚维酮S630：20g
滑石粉：2g
制备方法：将上述各成分过100目筛网后，充分混合，使用干法制粒机进行 预压后制备干颗粒，分装。
实施例9：
体外活性测试
Vero E6细胞用含10％FBS的DMEM培养基于37℃，5％CO2条件下培 养。生长状态良好的细胞用0.25％胰酶消化，重新接种于96孔板(培养基 体积100μl/孔)，在37℃，5％CO2条件下继续培养24h。将细胞密度控制在 约2×104个/孔。分别加入两种RES混合液，及一种空白对照液，各20μl。
·混合液1：取实施例5中处方10制剂适量，用PBS溶液(pH6.8)适当 稀释，得到以RES计算的质量体积分数为0.2％、0.5％和0.9％的三种澄 清溶液。
·混合液2：取RES原料适量，用PBS溶液(pH6.8)适当稀释，得到以 RES计算的质量体积分数为0.2％、0.5％和0.9％的三种悬浊液。
·空白对照液：除不加入RES外，制备方法同混合液1的制备方法。
将2019-nCoV病毒加入细胞培养孔中，37℃培养，24h后收集上清液， 检测上清液病毒拷贝数，计算RES制剂对2019-nCoV病毒的抑制率。利用 MTT法测定Vero细胞的存活率，以确定RES对该细胞的毒性。在96孔培 养板中，加入MTT(5mg/ml)20μl，37℃培养4h后，小心吸去培养液， 每孔加入100μl DMSO溶解结晶20min，于酶联仪490nm处测定吸光度值， 以正常细胞组存活率为100％，计算其他各组细胞存活率。
结果表明，实施例5中处方10制剂对于2019-nCoV的抑制率在各浓度 可达约100％，而单纯使用RES原料药是对于该病毒的抑制率只有约30％上 下，这可能是由于未充分溶解的RES无法高效地对2019-nCoV产生抑制(图 1)。通过细胞毒性实验发现，RES原料药及制剂对Vero细胞均不产生明显 毒性(表13)。
表13 RES对Vero细胞的毒性
0.2％RES 0.5％RES 0.8％RES
混合液1 – – –
混合液2 – – –
空白对照液 – – –
“–”未发现明显毒性
以上实施例中所述的白藜芦醇的制剂还包括添加药学人员所熟知的固 体制剂辅料，制成片剂、颗粒剂、胶囊剂。所述的固体制剂辅料如羧甲基纤 维素钠、微晶纤维素、乳糖等，无一定的限制。
在进行更详细的描述前，需要指出的是，本发明不局限于描述的特定实 施方案，因此当然可以进行某些变化；另外，在本发明中所使用的术语仅为 了描述特别的实施方案，并不用于限定，因此本发明的保护范围只受到所附 权利要求书的限定。
还需要说明的是，本发明所描述的每个独立的实施方案虽然具有相互分 离的特征，但是其内在的逻辑联系，使得本领域技术人员很容易地将几个实 施方案组合起来。

Claims (8)

1.一种白藜芦醇的制剂，其特征在于，所述制剂包括以下重量配比的组分：
Figure FDA0002383942340000011
其中所述白藜芦醇的结构式如下：
Figure FDA0002383942340000012
所述水溶性高分子材料是HPMC、PVP、HPMCAS的一种或几种；
所述环糊精为羟丙基-β-环糊精、甲基-β-环糊精中的一种或两种；
所述磷脂为蛋黄磷脂、大豆磷脂中的一种或两种。
2.根据权利要求1所述的白藜芦醇的制剂：其特征在于，还包括添加药学上可接受的固体制剂辅料制成片剂、颗粒剂、胶囊剂。
3.根据权利要求2所述的白藜芦醇的制剂：其特征在于，所述的固体制剂辅料为羧甲基纤维素钠、微晶纤维素或乳糖。
4.根据权利要求1所述的含有白藜芦醇的制剂，其特征在于，所述制剂包括以下重量配比的组分：
Figure FDA0002383942340000013
Figure FDA0002383942340000021
5.根据权利要求1所述的白藜芦醇制剂，其特征在于，所述制剂包括以下重量配比的组分：
Figure FDA0002383942340000022
6.根据权利要求1所述的白藜芦醇制剂，其特征在于，能改善白藜芦醇的溶解度，相比于未经过加工的白藜芦醇增加10倍以上。
7.根据权利要求1所述的白藜芦醇制剂，其特征在于，制剂溶于pH值介于6～8之间的水基缓冲溶液后能保持稳定1h以上。
8.根据权利要求1所述白藜芦醇制剂的制备方法，其特征在于，将各成分溶于乙醇后，可通过减压蒸发或喷雾干燥工艺制备制剂产品。
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