CN111182906A - 处理红斑或皮肤炎症的局部皮肤用组合物 - Google Patents

Abstract

本发明一般涉及用于处理皮肤的方法和组合物。该组合物包含糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚的组合。该组合可用于产生局部皮肤用组合物，其减少红斑、使皮肤清凉、抑制一氧化氮合酶、减少TNF‑α的产生并增加闭合蛋白‑1的产生。

Description

处理红斑或皮肤炎症的局部皮肤用组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年8月7日提交的美国临时申请62/542148的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。

背景技术

A.技术领域

本发明一般涉及局部皮肤护理组合物，其可以减少红斑、减少皮肤炎症、使皮肤清凉、抑制一氧化氮合酶、减少TNF-α的产生并增加闭合蛋白-1的产生。成分的组合可包括糖类同分异构体提取物、密罗木(Myrothamnus flabellifolia)提取物、藻提取物、北艾(Artemisia vulgaris)提取物和/或姜酮酚([6]-paradol)。

B.相关技术说明

衰老、长期暴露于不利的环境因素、营养失调、疲劳等会以被认为是视觉上不期望的方式改变皮肤的视觉外观、物理性能或生理功能。最显著和明显的变化包括发红外观增加、细纹和皱纹的发展、弹性的丧失、下垂的增加、紧致度的丧失、颜色均匀度或色调的损失、粗糙的表面纹理和斑驳的色素沉着。随着皮肤老化或经历长期的环境损害而发生的不太明显但可测量的变化包括细胞和组织活力的普遍降低、细胞复制速率的降低、皮肤血流量的减少、水分含量的降低、结构和功能的累积误差、常见生化途径的正常调节的变化以及皮肤重塑和自我修复能力的降低。皮肤的外观和功能的许多变化由皮肤的外表皮层的改变导致，而其他的变化由下面真皮的改变导致。

可以损伤皮肤的外部因素是难以避免或不可避免的。当暴露于一些外部因素或当皮肤损伤时，角质形成细胞(皮肤最外部的细胞)释放信号分子，例如炎性细胞因子。这些炎性细胞因子的释放可导致不期望后果，如红斑、皮肤炎症、皮肤温度升高、甚至皮肤损伤。其中一些后果甚至会加剧这些情况。例如，由炎性细胞因子的释放引起的皮肤温度升高和皮肤损伤的增加可引起炎性细胞因子的进一步释放，引起皮肤炎症或引起红斑。因此，需要可以减少炎性细胞因子、治疗红斑、减少皮肤炎症并降低皮肤温度的组合物和方法。

其他人已经尝试创建减少皮肤炎症和红斑的组合物和方法。然而，许多尝试都是无效的，这些尝试仅解决了一种或几种不希望的炎症结果，或本身引起了不可接受的副作用，例如皮肤刺激或过敏反应。一些人试图通过在单一组合物中使用多种活性成分来一次性解决皮肤炎症涉及的多种途径。例如，美国专利第8535738号和美国专利第9687517号教导了可能与炎症有关的几种途径，并提供了可以解决其中一些途径的成分清单。但是，在那些专利中，实际上仅测试了几种活性成分组合的相容性和有效性。尚不清楚其中的其他成分组合是否有效，是否可能引起不良副作用，或是否会恶化与皮肤炎症有关的问题。此外，并非每种有效的组合物都与每种皮肤类型相容。因此，需要有效减少红斑和皮肤炎症的新产品。

发明概述

本发明人已经确认了与红斑或皮肤炎症相关的至少一些问题的解决方案。该解决方案在于成分的组合，所述成分可以包括糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚，已发现其可有效减少红斑、减少皮肤炎症、使皮肤清凉、降低一氧化氮合酶活性、降低TNF-α活性、和/或增加闭合蛋白-1的产生。在某些特定情况下，这些成分已显示出减少了促炎性细胞因子、趋化因子和/或诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在人类皮肤细胞中的表达。在某些情况下，提取物可以是水提取物。但是，可以使用其他溶剂例如醇、乙二醇、水醇和/或水乙二醇提取物。

在一些方面，公开了局部用组合物。在一些方面，局部用组合物包含糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚中的任何一种、任何组合或全部。在某些情况下，局部用组合物包含有效量的糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚以减少红斑和/或使皮肤清凉。在某些情况下，局部用组合物包含有效量的糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚以抑制一氧化碳合酶、降低TNF-α产生、和/或增加闭合蛋白产生。在一些情况下，糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物和/或北艾提取物是水提取物。水提取物指可用作提取剂或溶剂以获得提取物的水溶液。除水之外，水溶液还可包含醇、乙二醇或其组合。该水提取物可以是液体形式或粉末形式的。糖类同分异构体提取物可以包含属于海洋浮游生物家族的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的胞外多糖。密罗木提取物可以是密罗木的叶和茎的提取物。藻提取物可以是掌状海带(Laminaria digitata)的提取物。北艾提取物可以是北艾的整株植物的提取物。

本文公开的组合物还可以包含本文所述的一种或多于一种成分。例如，该组合物包含选自调节剂、保湿剂、pH调节剂、结构剂、无机盐和防腐剂的一种或多于一种。在一些情况下，局部用组合物还包含水。所述组合物内成分的量可以改变(例如，该量可以低至0.000001％重量％，高至98％重量％、或是其间的任意范围)。在一些情况下，局部用组合物为乳液、精华、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华。

还公开了本文公开了使用所述组合物的方法。在某些方面中，公开了改善皮肤状况或外观的方法，包括对有需要的皮肤施用本文公开的任一种组合物。在一方面，本文公开的任一种组合物施用于皮肤并且使组合物停留于该皮肤上或者在一段时间之后从该皮肤处移除。在另一方面，本文公开的组合物用于处理和/或减少红斑。在另一方面，本文公开的组合物用于使皮肤清凉。在另一方面，本文公开的组合物用于抑制一氧化碳合酶。在另一方面，本文公开的组合物用于减少TNF-α产生。在另一方面，本文公开的组合物用于增加闭合蛋白-1产生。在一些方面，该方法包括将本文描述的任一种局部用组合物施用于皮肤。在一些方面，该方法包括将任一种局部用组合物施用于面部皮肤。

在具体的方面，本发明的组合物配制为局部皮肤用组合物。该组合物可以具有用于化合物和提取物的皮肤科学上可接受的的载剂或载体。该组合物还可以包含保湿剂或湿润剂、表面活性剂、含硅酮的化合物、UV剂、油和/或本说明书所确定的其他成分或本领域中已知的其他成分。该组合物可以是面膜、露、霜、凝胶、精华、乳液(例如、水包油、油包水、水包硅酮、硅酮包水、水包油包水、油包水包油、硅酮包水包油等)、溶液(例如水溶液或水醇溶液)、无水碱(例如口红或粉末)、软膏、乳、糊、喷雾、固体形式、眼周冻膜、凝胶精华、凝胶乳液等。该组合物可以配制成在使用过程中每天至少1、2、3、4、5、6、7或多于7次用于局部皮肤。在本发明的其它方面中，该组合物可以是储存稳定或颜色稳定的、或是两者均稳定的。还期望可以选择组合物的黏度以达到希望的结果，例如根据希望的组合物类型，这种组合物的黏度可以为1cp至远超过1百万cp，或是其中可得到的任意范围或整数(举例来说，如在25℃下在布氏黏度计上用TC转子以2.5rpm的转速测量的2cp、3cp、4cp、5cp、6cp、7cp、8cp、9cp、10cp、20cp、30cp、40cp、50cp、60cp、70cp、80cp、90cp、100cp、200cp、300cp、400cp、500cp、600cp、700cp、800cp、900cp、1000cp、2000cp、3000cp、4000cp、5000cp、6000cp、7000cp、8000cp、9000cp、10000cp、20000cp、30000cp、40000cp、50000cp、60000cp、70000cp、80000cp、90000cp、100000cp、200000cp、300000cp、400000cp、500000cp、600000cp、700000cp、800000cp、900000cp、1000000cp、2000000cp、3000000cp、4000000cp、5000000cp、10000000cp等)。

在非限制性方面中，该组合物的pH值可以为约6至约9。在其它方面，pH可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。该组合物可以包含甘油三酯。非限制性实例包括短链甘油三酯、中链甘油三酯和长链甘油三酯。在一些方面，甘油三酯是中链甘油三酯(例如辛酸癸酸甘油三酯)。组合物还可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、或对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的混合物。在一些实施方案中，组合物不含防腐剂。

本发明的组合物可以具有UVA和UVB吸收性质。该组合物可以具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或高于60的防晒指数(SPF)，或是其中可以得到的任何整数或衍生数。该组合物可以是防晒露、防晒喷雾或防晒霜。

本发明的组合物还可以包含以下附加成分中的任何一种、任意组合或全部：水、螯合剂、保湿剂、防腐剂、增稠剂、含硅酮的化合物、精油、结构化剂、维生素、药物成分或抗氧化剂，或这些成分的任意组合或这些成分的混合物。在某些方面，该组合物可以包含在之前句子中所指出的这些附加成分的至少二种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或全部。这些附加成分的非限制性实例在本说明书通篇指出并通过引用并入本部分。这类成分的量以组合物的重量或体积计可以为0.0001％至99.9％，或者是在如本说明书其它部分中所公开的范围之间的任何整数或范围，其通过引用并入本段。

还预期了包含本发明的组合物中的任一种或组合的试剂盒。在某些实施方案中，该组合物包含在容器中。该容器可以是瓶子、分配器或包装。该容器可以分配预定量的组合物。在特定的方面，该组合物以喷雾、薄雾、团块或液体分配。该容器可以在其表面上包含标记。该标记可以是词语、缩写、图片或符号。

还涉及的是本说明书通篇所公开的所述组合物可以被用作免洗型或洗去型组合物。举例来说，免洗型组合物可以是被部施用至皮肤并在皮肤上保留一端时间(例如，至少5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、20分钟或30分钟，或至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23分钟或24小时，或者整夜或整个白天)的组合物。或者，洗去型组合物可以是打算施用于皮肤并然后在一段时间内，例如小于5分钟、4分钟、3分钟、2分钟或1分钟内，(例如用水)从皮肤移除或洗去的产品。洗去型组合物的实例可以是皮肤清洁剂、洗发水、护发素或肥皂。免洗型组合物的实例可以是皮肤保湿剂、防晒剂、面膜、晚霜或日霜。

预期对于本发明的任意方法或组合物，可以实施本说明书中所讨论的任何实施方案，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。

在一个实施方案中，本发明的组合物可以是可药用的或可化妆用的、或可以具有舒适的触觉性质。“可药用的”、“可化妆用的”和/或“舒适的触觉性质”描述具有令皮肤感觉舒适的特定的触觉性质的组合物(例如，不是太水或太油的组合物、具有丝滑质地的组合物、非黏性或黏性的组合物等。)。可药用的或可化妆用的还可以涉及组合物的乳脂状或润滑性能，或组合物的水分保留性能。

还预期了一种包含本发明的组合物的产品。在非限制性方面，该产品可以是化妆品。该化妆品可以是本说明书其它部分所述的那些，或是本领域技术人员已知的那些。产品的非限制性实例包括保湿剂、乳霜、化妆水、柔肤水、凝胶、洗面奶、粉底、晚霜、口红、清洁剂、爽肤水、防晒霜、面膜、抗-老化产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。

还公开了本发明的以下实施方案1至31。实施方案1是一种处理皮肤的方法，该方法包括向皮肤局部施用有效量的局部用组合物，所述局部用组合物包含糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚，其中所述皮肤被处理。实施方案2是实施方案1所述的方法，其中处理所述皮肤以减少红斑和/或炎症，且其中红斑和/或炎症减少。实施方案3是实施方案1或2所述的方法，其中处理所述皮肤以使皮肤清凉，其中所述皮肤温度降低。实施方案4是实施方案1至3中任一项所述的方法，其中处理所述皮肤以抑制一氧化碳合酶，其中所述一氧化碳合酶被抑制。实施方案5是实施方案1至4中任一项所述的方法，其中处理所述皮肤以减少TNF-α产生，其中TNF-α产生减少。实施方案6是实施方案1至5中任一项所述的方法，其中处理所述皮肤以增加闭合蛋白-1的产生，其中所述闭合蛋白-1的产生增加。实施方案7是根据实施方案1至6中任一项所述的方法，其中局部用组合物还包含水。实施方案8是根据实施方案1至7中任一项所述的方法，其中糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、和/或北艾提取物是水提取物。实施方案9是实施方案8所述的方法，其中所述水提取物是液体形式的。实施方案10是实施方案8所述的方法，其中所述水提取物是粉末形式的。实施方案11是实施方案1至10中任一项所述的方法，其中糖类同分异构体提取物包含属于海洋浮游生物家族的溶藻弧菌的胞外多糖。实施方案12是实施方案1至11中任一项所述的方法，其中密罗木提取物是密罗木的叶和茎的提取物。实施方案13是实施方案1至12中任一项所述的方法，其中藻提取物是掌状海带的提取物。实施方案14是实施方案1至13中任一项所述的方法，其中北艾提取物是北艾的整株植物的提取物。实施方案15是根据实施方案1至14中任一项所述的方法，其中所述局部用组合物为乳液、精华、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华。实施方案16是根据实施方案1至15中任一项所述的方法，其中所述局部用组合物为水包油乳液或油包水乳液。实施方案17是实施方案1至16中任一项所述的方法，其中所述组合物施用于面部皮肤。实施方案18是局部皮肤用组合物，其包含糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚。实施方案19是实施方案18所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物包含有效量的糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚以减少红斑和/或炎症。实施方案20是实施方案18或19所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物包含有效量的糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚以使皮肤清凉。实施方案21是实施方案18至20中任一项所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物包含有效量的糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚以抑制一氧化碳合酶、减少TNF-α产生和/或增加闭合蛋白-1的产生。实施方案22是根据实施方案18至21中任一项所述的局部用组合物，其中糖类同分异构体、密罗木提取物、藻提取物和/或北艾提取物是水提取物。实施方案23是实施方案22所述的局部用组合物，其中所述水提取物是液体形式的。实施方案24是实施方案22所述的局部用组合物，其中所述水提取物是粉末形式的。实施方案25是实施方案18至24中任一项所述的局部用组合物，其中糖类同分异构体提取物包含属于海洋浮游生物家族的溶藻弧菌的胞外多糖。实施方案26是实施方案18至25中任一项所述的局部用组合物，其中密罗木提取物是密罗木的叶和茎的提取物。实施方案27是实施方案18至26中任一项所述的局部用组合物，其中藻提取物是掌状海带的提取物。实施方案28是实施方案18至27中任一项所述的局部用组合物，其中北艾提取物是北艾的整株植物的提取物。实施方案29是根据实施方案18至28中任一项所述的局部用组合物，其还包含水。实施方案30是根据实施方案18至29中任一项所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物为乳液、精华、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华。实施方案31是根据实施方案18至30中任一项所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物为水包油乳液或油包水乳液。

“局部施用”是指施用或涂敷组合物到嘴唇或角质组织的表面上。“局部皮肤用组合物”包括适合在皮肤和/或角质组织局部施用的组合物。这类组合物一般为皮肤科学上可接受，这是因为当施用到皮肤和/或角质组织时，其不具有异常毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。本发明的局部皮肤用组合物可以具有选定的黏度以避免施用到皮肤和/或角质组织后明显的滴落或淤积。

“角质组织”包括配置作为哺乳动物最外保护层的含有角质的层，并且包含但不限于嘴唇、皮肤、毛发和指甲。

术语“约”或“大约”定义为如本领域普通技术人员理解的接近于。在一个非限制性实施方案中，该术语定义为在10％以内，优选在5％以内，更优选在1％以内，最优选在0.5％以内。

术语“基本上”是指在10％以内、在5％以内、在1以内或在0.5％以内。

术语“抑制”或“减少”包括实现期望结果的任何可测量的减少或完全的抑制。术语“促进”或“增加”包括为了达到预期结果的任何可测量的增加或蛋白质或分子(举例来说，基质蛋白，例如纤连蛋白、层黏连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白，或分子，例如透明质酸)的产生。

作为本说明书和/或权利要求所使用的术语，术语“有效的”表示适于实现希望的、期望的或预期的结果。

当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”、“包括”、“具有”或“含有”一起使用时，要素前不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。

如本说明书和权利要求所使用的，词语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。

使用的组合物和方法可以“包含”本说明书通篇所公开的任意成分或步骤、“主要由”或“由”本说明书通篇所公开的任意成分或步骤“组成”。关于短语“基本上由……组成”，本发明的组合物和方法的基本和新颖的性质是减少皮肤红斑和使皮肤清凉的能力。

通过以下详细描述，本发明的其他目的、特征和优点将变得显而易见。然而，应理解详细的描述和实施例在表明本发明的具体实施方案时仅以举例说明的方式给出。另外，期望通过该详细描述，本发明的精神和范围内的变化和修改对于本领域技术人员会变得明显。

附图说明

以下附图形成本说明书的一部分，并被包含以进一步证实本发明的某些方面。通过参照一个或多于一个结合本文所提供的具体实施方案详细说明的这些附图可以更好地理解本发明。

图1-该图显示了在使用本发明的组合物一定时间之前和之后红斑的临床分级结果。与治疗前进行的基线测量相比，具有统计学意义的结果以“*”表示。

图2–该图显示了在使用本发明的组合物一定时间之前和之后皮肤温度的红外(IR)热成像结果。与治疗前进行的基线测量相比，具有统计学意义的结果以“*”表示。

具体实施方案

如上所述，本发明提供了与皮肤红斑或皮肤炎症有关的问题的解决方案。该解决方案在于使用提取物优选水提取物和特定化合物的组合以减少皮肤红斑或使皮肤清凉。皮肤温度的降低表明皮肤炎症的减轻。提取物和化合物的组合包括糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和/或姜酮酚。如在实施例中以非限制性方式说明的，该组合已显示出减少皮肤红斑、使皮肤清凉以及在人皮肤细胞例如人表皮角质形成细胞中降低一氧化氮合酶活性、减少TNF-α的产生并增加闭合蛋白-1的产生。

在以下部分中描述本发明的这些和其它非限制性方面。

A.活性成分

本发明在于确定活性成分(糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和/或姜酮酚)的组合可用于减少红斑和使皮肤清凉。

该成分的组合可被用于不同的产品用以处理多种皮肤状况。作为非限制性实例，成分组合可被配制成乳液(例如水包油乳液、油包水乳液)、凝胶、精华、凝胶乳液、凝胶精华、露、面膜或身体乳。

糖类同分异构体提取物是胞外多糖，其由称为溶藻弧菌的微生物合成并属于海洋浮游生物家族。在一些情况下，糖类同分异构体是可商购获得的。在一些情况下，糖类同分异构体可由Barnet Products以商品名Benoiderm提供。在一些情况中，提取物可以为水提取物或醇提取物。在某些情况下，提取物可以是水提取物。

密罗木提取物是密罗木的提取物，密罗木也被称为还魂草，为原产于非洲南部的开花植物。在一些情况下，密罗木提取物是可商购获得的。在一些情况下，密罗木提取物可由Rahn以商品名

提供。在一些情况中，提取物可以为水提取物或醇提取物。在某些情况下，提取物可以是水提取物。在一些情况下，提取物为整株植物的提取物或一个或多于一个植物部分的提取物。在一些情况下，提取物为植物的叶和茎的提取物。

藻提取物是藻的提取物。在一些情况下，藻提取物是可商购获得的。在一些情况下，藻提取物和北艾提取物可由Barnet Products以商品名Triple A Complex提供。在一些情况下，提取物可以为水提取物或醇提取物。在一些情况下，提取物可以是水提取物。在一些情况下，藻提取物是掌状海带的提取物。

北艾提取物为北艾的提取物，一种原产于欧洲、亚洲、北非和阿拉斯加的高大草本植物。在一些情况下，北艾是可商购获得的。在一些情况下，北艾提取物和藻提取物可由Barnet Products以商品名Triple A Complex提供。在一些情况中，提取物可以为水提取物或醇提取物。在一些情况下，提取物可以是水提取物。在一些情况下，提取物为整株植物的提取物或一个或多于一个植物部分的提取物。在一些情况下，提取物为整株植物的提取物。

姜酮酚，也称为3-癸酮、羟基甲氧基苯基癸酮或1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)癸-3-酮，是一种有机化合物。在某些情况下，姜酮酚是可商购的。在某些情况下，姜酮酚可由Symrise以商品名

提供。姜酮酚的化学结构为：

本文描述的提取物可为通过本领域所熟知的提取方法及其组合而制备的提取物。提取方法的非限制性实例包括使用液-液提取、固相提取、水提取、乙酸乙酯提取、醇提取、丙酮提取、油提取、超临界二氧化碳提取、热提取、压力提取、压降提取、超声波提取等。提取物可为液体、固体、干燥液体、重悬固体等。在特定情况下，提取物为水提取物。

B.成分的量

期望本发明的组合物可以包含任意量的本说明书所讨论的成分。该组合物还可包含任意数目的在本说明书全文中所描述的附加成分(例如，颜料或附加的化妆品或药物成分)的组合。在该组合物中任意成分的浓度可以改变。例如，在非限制性实施方案中，该组合物在其最终形式中可以包含、主要由以下组分组成或由以下组分组成：例如至少约0.0001％、0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0007％、0.0008％、0.0009％、0.0010％、0.0011％、0.0012％、0.0013％、0.0014％、0.0015％、0.0016％、0.0017％、0.0018％、0.0019％、0.0020％、0.0021％、0.0022％、0.0023％、0.0024％、0.0025％、0.0026％、0.0027％、0.0028％、0.0029％、0.0030％、0.0031％、0.0032％、0.0033％、0.0034％、0.0035％、0.0036％、0.0037％、0.0038％、0.0039％、0.0040％、0.0041％、0.0042％、0.0043％、0.0044％、0.0045％、0.0046％、0.0047％、0.0048％、0.0049％、0.0050％、0.0051％、0.0052％、0.0053％、0.0054％、0.0055％、0.0056％、0.0057％、0.0058％、0.0059％、0.0060％、0.0061％、0.0062％、0.0063％、0.0064％、0.0065％、0.0066％、0.0067％、0.0068％、0.0069％、0.0070％、0.0071％、0.0072％、0.0073％、0.0074％、0.0075％、0.0076％、0.0077％、0.0078％、0.0079％、0.0080％、0.0081％、0.0082％、0.0083％、0.0084％、0.0085％、0.0086％、0.0087％、0.0088％、0.0089％、0.0090％、0.0091％、0.0092％、0.0093％、0.0094％、0.0095％、0.0096％、0.0097％、0.0098％、0.0099％、0.0100％、0.0200％、0.0250％、0.0275％、0.0300％、0.0325％、0.0350％、0.0375％、0.0400％、0.0425％、0.0450％、0.0475％、0.0500％、0.0525％、0.0550％、0.0575％、0.0600％、0.0625％、0.0650％、0.0675％、0.0700％、0.0725％、0.0750％、0.0775％、0.0800％、0.0825％、0.0850％、0.0875％、0.0900％、0.0925％、0.0950％、0.0975％、0.1000％、0.1250％、0.1500％、0.1750％、0.2000％、0.2250％、0.2500％、0.2750％、0.3000％、0.3250％、0.3500％、0.3750％、0.4000％、0.4250％、0.4500％、0.4750％、0.5000％、0.5250％、0.0550％、0.5750％、0.6000％、0.6250％、0.6500％、0.6750％、0.7000％、0.7250％、0.7500％、0.7750％、0.8000％、0.8250％、0.8500％、0.8750％、0.9000％、0.9250％、0.9500％、0.9750％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％、8.0％、8.1％、8.2％、8.3％、8.4％、8.5％、8.6％、8.7％、8.8％、8.9％、9.0％、9.1％、9.2％、9.3％、9.4％、9.5％、9.6％、9.7％、9.8％、9.9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或其中可得到的任何范围的在本说明书和权利要求通篇所提及的至少一种成分。在非限制性方面，该百分比可以按整个组合物的重量或体积进行计算。本领域普通技术人员会理解，给定组合物中的浓度可以根据成分的添加、替换和/或减少而改变。

C.载剂

本发明的组合物可以包括或被并入到所有类型的载剂和载体中。载剂或载体可为药学或皮肤科学上可接受的载剂或载体。载剂或载体的非限制性实例包括水、甘油、醇、油、含硅化合物、硅酮化合物和蜡。变化方案和其它合适的载剂对于熟练技术人员是明显的，并且适用于本发明。在某些方面，化合物、成分和试剂的浓度和组合以这样的方式进行挑选，以使得组合物是化学相容的并且不形成从最终产品中沉淀出来的络合物。

D.结构

本发明的组合物可以被构建或配制为多种不同形式。非限制性实例包括乳状液(例如，油包水、水包油包水、水包油、水包硅酮、硅酮包水、油包水包油、硅酮包水包油的乳剂)、霜、化妆水、溶液(水的或者水-乙醇溶液)、无水基底(例如口红和粉末)、凝胶、面膜、去角质膏和软膏。变体方案和其它的结构对于熟练技术人员是明显的，并且适用于本发明。

E.附加成分

除了发明人所公开成分的组合之外，组合物还可以包含附加成分，例如化妆品成分和药物活性成分。这些附加成分的非限制性实例在以下子部分中进行描述。

1、化妆品成分

CTFA国际化妆品成分词典和手册(2004和2008)描述了多种可以在本发明的环境下使用的非限制性化妆品成分。这些成分种类的实例包括：芳香剂(人造的和天然的，例如葡糖酸、苯氧乙醇和三乙醇胺)、染料和着色成分(例如蓝色1号、蓝色1号色淀、红色40号、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号和D&C黄色11号)、香料/香味剂(例如，甜叶菊(Stevia rebaudiana)提取物，以及薄荷醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、保湿剂(包括例如润肤剂、湿润剂、成膜剂、闭塞剂和影响皮肤天然保湿机制的试剂)、拒水剂、UV吸收剂(物理和化学吸收剂，例如对氨基苯甲酸(“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(例如A、B、C、D、E和K)、微量金属(例如锌、钙和硒)、抗刺激物(例如类固醇和非固醇类抗炎药)、植物提取物(例如芦荟(Aloe vera)、柑橘、黄瓜提取物、银杏(Ginkgo biloba)、人参和迷迭香)、抗菌剂、抗氧化剂(例如BHT和生育酚)、螯合剂(例如乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸四钠)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、pH调节剂(例如氢氧化钠和柠檬酸)、吸收剂(例如淀粉辛烯琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和光亮剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸盐/酯)、湿润剂(例如山梨醇、脲、甲基葡糖醇聚醚-20、糖类同分异构体和甘露醇)、去角质剂、防水剂(例如氢氧化钠镁/铝硬脂酸盐)、皮肤调节剂(例如芦荟提取物、尿囊素、没药醇、神经酰胺、聚二甲基硅氧烷、透明质酸、生物糖胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、辛基十二烷基油酸酯和甘草酸二钾)。这些附加成分中一些的非限制性实例在以下子部分中提供。

a.UV吸收剂和/或反射剂

可以与本发明的组合物组合使用的UV吸收剂和/或反射剂包括化学和物理防晒物质。可以使用的化学防晒物质的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(PABA甘油酯、戊基二甲醇PABA酯和辛基二甲醇PABA酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、乙基二羟基丙醇PABA酯、二苯甲酮(氧苯酮、磺异苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮-1到12)、肉桂酸盐/酯(甲氧基肉桂酸辛酯(奥西诺酯)、对甲氧基肉桂酸异戊酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、西诺沙酯、二异丙基肉桂酸甲酯、甲氧基肉桂酸DEA盐、二异丙基肉桂酸乙酯、甘油辛酸酯二甲氧基肉桂酸酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯、水杨酸酯(均甲基水杨酸酯、水杨酸苄酯、乙二醇水杨酸酯、异丙基苄醇水杨酸酯等)、邻氨基苯甲酸盐/酯、尿刊酸乙酯、胡莫柳酯、水杨酸辛酯、二苯甲酰基甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、奥克立林、辛基三嗪酮、棓酰棓酸三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、含二羟基丙酮的指甲花醌、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、苯亚甲基丙二酸酯聚硅氧烷、对苯二亚甲基二莰酮磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、双二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸酯、双苯并

唑基苯基乙基己基亚氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧烷、亚甲基双苯并三唑基四甲基丁基苯酚和双乙基己基氧苯酚甲氧苯基三嗪、4-甲基苯亚甲基莰酮和4-甲氧基肉桂酸异戊酯。物理防晒物质的非限制性实例包括高岭土、滑石、凡士林和金属氧化物(例如二氧化钛和氧化锌)。

b.保湿剂

可以与本发明的组合物一起使用的保湿剂的非限制性实例包括氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、乙二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然保湿因子、PEG-15丁二醇、聚甘油山梨醇、吡咯烷酮羧酸的盐、PCA钾、丙二醇、糖类同分异构体、葡糖醛酸钠、PCA钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、脲和木糖醇。

其他实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、丙氨酸、藻提取物、库拉索芦荟(Aloe barbadensis)、库拉索芦荟提取物、库拉索芦荟凝胶、药蜀葵(Althea officinalis)提取物、杏(Prunus armeniaca)仁油、精氨酸、精氨酸天冬氨酸盐/酯、山金车(Arnicamontana)提取物、天冬氨酸、鳄梨(酪梨，Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山萮醇、β-谷甾醇、白桦(垂枝桦，Betula alba)树皮提取物、琉璃苣(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscus aculeatus)提取物、丁二醇、金盏花(Calendula officinalis)提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbia cerifera)蜡、菜籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、豆蔻(Elettaria cardamomum)油、巴西棕榈(Copernicia erifera)蜡、胡萝卜(Daucus carotasativa)油、蓖麻(Ricinus communis)油、神经酰胺、地蜡、鲸蜡硬脂醇聚醚-5、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇辛酸酯、鲸蜡醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-24、鲸蜡醇乙酸酯、鲸蜡醇辛酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、罗马洋甘菊(白花春黄菊，Anthemis nobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆甾醇羟基硬脂酸酯、柠檬酸、鼠尾草(欧丹参，Salvia sclarea)油、可可(Theobroma cacao)脂、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原蛋白氨基酸、玉米(Zea mays)油、脂肪酸、油酸癸酯、聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚二甲基硅氧烷醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓糖醇、乙氧基二乙二醇、亚油酸乙酯、蓝桉(Eucalyptus globulus)油、夜来香(月见草，Oenotherabiennis)油、脂肪酸、斑点老鹳草(Geranium maculatum)油、葡萄糖胺、葡糖谷氨酸酯、谷氨酸、甘油聚醚-26、甘油、丙三醇、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯SE、甘氨酸、乙二醇硬酯酸酯、乙二醇硬酯酸酯SE、葡糖氨基葡聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、榛子(美洲榛，Corylus americana)坚果油、榛子(欧洲榛，Corylus americana)坚果油、己二醇、透明质酸、杂交红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油酸甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈油甘油酯、氢化棕榈仁油、氢化大豆油、氢化牛脂酸甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解葡糖氨基葡聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、羟基脯氨酸、硬脂酸异鲸蜡醇酯、异鲸蜡醇硬脂酰基硬脂酸酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛脂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂醇乳酸酯、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉(素方花，Jasminum officinale)油、霍霍巴(Buxus chinensis)油、巨藻、石栗(Aleuritesmoluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚醚-10乙酸酯、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandula angustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrus medica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲坚果(Macadamia ternifolia)油、麦芽糖醇、母菊(Chamomilla recutita)油、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA、矿物油、貂油、被孢霉油、肉豆蔻醇乳酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻醇丙酸酯、新戊二醇二辛酸酯/二癸酸酯、辛基月桂醇、辛基月桂醇肉豆蔻酸酯、辛基月桂醇硬脂酰氧基硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、橄榄(Olea europaea)油、橙(Citrus aurantium dulcis)油、棕榈(油棕，Elaeis guineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇基乙基醚、石蜡、PCA、桃(Prunus persica)仁油、花生(Arachis hypogaea)油、PEG-8C12-18酯、PEG-15椰油胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60异硬脂酸甘油酯、PEG-5硬脂酸甘油酯、PEG-30硬脂酸甘油酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG40失水山梨醇全油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五酸内酯、薄荷(辣薄荷，Menthapiperita)油、凡士林、磷脂、浮游生物提取物、多氨基酸多糖缩合物、聚甘油-3二异硬脂酸酯、聚季铵盐-24、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆醇二棕榈酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、米(稻，Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(艾菊)油、玫瑰油、红花(Carthamus tinctorius)油、鼠尾草(Salvia officinalis)油、檀香(Santalum album)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamum indicum)油、牛油果树(Butyrospermum parkii)脂、蚕丝粉、软骨素硫酸钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶性胶原蛋白、失水山梨醇月桂酸酯、失水山梨醇油酸酯、失水山梨醇棕榈酸酯、失水山梨醇倍半油酸酯、失水山梨醇硬脂酸酯、山梨醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯、硬脂酸、硬脂氧基聚二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂醇甘草亭酸酯、硬脂醇庚酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、向日葵(Helianthus annuus)籽油、甜杏仁(Prunusamygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯、三山嵛精、十三烷醇新戊酸酯、十三烷醇硬脂酸酯、三乙醇胺、三硬脂精、脲、植物油、水、蜡、小麦(Triticumvulgare)胚芽油和香油树(Cananga odorata)油。

c.抗氧化剂

可以与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包括乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、半胱氨酸HCI、二戊基氢醌、二叔丁基氢醌、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸酯二钠、二硬脂醇硫代二丙酸酯、双十三烷醇硫代二丙酸酯、没食子酸月桂酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、甲基硅烷醇抗坏血酸酯、天然植物抗氧化剂例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、没食子酸辛酯、苯巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、硫二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚醚-5)、生育酚聚醚-10、生育酚聚醚-12、生育酚聚醚-18、生育酚聚醚-50、生育酚、托可索伦、乙酸生育酚酯、生育酚亚油酸酯、生育酚烟酸酯、生育酚琥珀酸酯和三(壬基酚)亚磷酸酯。

d.结构化剂

在其它非限制性方面，本发明的组合物可以包含结构化剂。在某些方面，结构化剂帮助给组合物提供流变学特征以有助于组合物的稳定性。在其它方面，结构化剂还可以起乳化剂或表面活性剂的作用。结构化剂的非限制性实例包括硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、棕榈酸、具有平均约1个至约21个亚乙基氧单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、具有平均约1到约5个亚乙基氧单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。

e.乳化剂

在本发明的某些方面，组合物不包含乳化剂。然而，在其它方面，组合物可以包含一种或多于一种乳化剂。乳化剂可以降低相间表面张力并改善乳液的剂型和稳定性。乳化剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的和两性离子的乳化剂(参见McCutcheon(1986)的美国专利。第5011681号；第4421769号；第3755560号)。非限制性实例包括甘油酯、丙二醇酯、丙二醇的脂肪酸酯、聚丙二醇的脂肪酸酯、山梨醇的酯、失水山梨醇酐酯、羧酸共聚物、葡萄糖的酯和醚、乙氧基化的酯、乙氧基化的醇、磷酸烷基酯、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯、脂肪酸酰胺、酰基乳酸酯、脂肪酸盐、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚醚-3磷酸酯、聚乙二醇20失水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯(20))、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-21、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13链烷醇聚醚-3、PPG-2甲基葡萄糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡醇聚醚-20、双-PEG/PPG-20/20聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇聚醚-10、聚山梨醇酯(80)、鲸蜡醇磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、二乙醇胺鲸蜡醇磷酸酯、聚山梨醇酯(60)、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、花生醇、花生醇葡糖苷及其混合物。

f.含有硅酮的化合物

在非限制性方面，含硅酮的化合物包括分子主链由交替的硅和氧原子与连接在硅原子上的侧基组成的聚合产物家族中的任何成员。通过改变-Si-O-链的长度、侧基和交联，硅酮可以合成为各种各样的材料。它们的稠度可以从液体到凝胶到固体改变。

可以在本发明的环境下使用的含硅酮的化合物包括在本说明书中所描述的或本领域普通技术人员已知的那些。非限制性实例包括硅油(例如挥发性和非挥发性油)、凝胶和固体。在特定的方面，含硅酮的化合物包括硅油，例如聚有机硅氧烷。聚有机硅氧烷的非限制性实例包括聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚硅酮-11、苯基聚三甲基硅氧烷、三甲基硅氨基二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷或它们与其他有机硅氧烷材料以任何给定比例的混合物，以根据预期的应用(举例来说，施用至特定区域例如皮肤、毛发或眼睛)达到期望的稠度和应用特征。“挥发性硅油”包括具有低气化热的硅油，即通常低于约50卡每克硅油。挥发性硅油的非限制性实例包括：环聚二甲基硅氧烷，例如Dow Corning 344Fluid、Dow Corning 345Fluid、Dow Corning 244Fluid和Dow Corning 245Fluid、VolatileSilicon 7207(康涅狄格州丹伯里的Union Carbide Corp.)；低黏度聚二甲基硅氧烷，即黏度大约为50cst或低于50cst的聚二甲基硅氧烷(举例来说，聚二甲基硅氧烷，例如DowCorning 200-0.5cst Fluid)。Dow Corning Fluid可以从密歇根州米德兰的Dow CorningCorporation购得。在CTFA化妆品成分词典的第三版中(通过引用并入)，环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷分别被描述为环二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基硅氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷聚合物的混合物。可以在本发明的环境下使用的其它非限制性挥发性硅油包括从纽约州沃特福德的General Electric Co.,Silicone Products Div.和密歇根州艾德里安的SWS Silicones Div.of Stauffer Chemical Co.购得的那些。

g.去角质剂

去角质剂包括去除皮肤外表皮上的死皮肤细胞的成分。这些试剂可以通过机械、化学和/或其他方式起作用。机械去角质剂的非限制性实例包括研磨剂，例如浮石、二氧化硅、织物、纸、壳、珠、固体晶体、固体聚合物等。化学去角质剂的非限制性实例包括酸和酶去角质剂。可用作去角质剂的酸包括但不限于乙醇酸、乳酸、柠檬酸、α-羟基酸、β-羟基酸等。还设想了在本发明的上下文中有用的本领域技术人员已知的其他去角质剂。

h.精油

精油包括来自药草、花朵、树木和其它植物的油。这类油一般以植物细胞间微小的液滴存在，并可以用本领域技术人员已知的若干方法进行提取(例如，蒸气蒸馏、吸香法(即使用脂肪提取)、浸渍、溶剂提取或机械压榨)。当这些类型的油暴露于空气时，其趋于挥发(即挥发性油)。因此，虽然许多精油是无色的，但是随着时间其被氧化并且颜色变得更深。精油不溶于水，但溶于醇、醚、固定油(植物的)和其它有机溶剂。在精油中发现的一般物理特征包括从约160℃到240℃变化的沸点和从约0.759g/ml到约1.096g/ml的密度。

精油一般通过油被发现的来源植物命名。例如，玫瑰油或薄荷油分别来自玫瑰或薄荷植物。可以在本发明的环境下使用的精油的非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、众香果油、玫瑰油、大茴香油、凤仙花油、香柠檬油、玫瑰木油、香柏油、甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏木油、桉油、茴香油、海茴香油、乳香油、香叶油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松子油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、梨莓油、橘子油、甘牛至油、没药油、苦橙花油、橙油、绿叶油、胡椒油、黑胡椒油、橙叶油、松油、奥图玫瑰油、迷迭香油、檀香油、绿薄荷油、甘松油、香根草油、冬青油、或香油树油。还预期本领域技术人员已知的其它精油在本发明的环境下是有用的。

i.增稠剂

包括增稠剂或凝胶剂在内的增稠剂，包括可以增加组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增加组合物黏度而基本上不改变组合物内活性成分功效的那些。增稠剂还可以增加本发明的组合物的稳定性。在本发明的特定方面，增稠剂包括氢化聚异丁烯、三羟硬脂精、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/vp共聚物或其混合物。

可以在本发明的环境下使用的另外的增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或多于一种衍生自丙烯酸的单体的交联化合物、取代的丙烯酸和这些丙烯酸和经取代的丙烯酸的盐和酯，其中所述交联剂含有两个或多于两个碳-碳双键，并衍生自多元醇(参见美国专利第5087445号；第4509949号；第2798053号；CTFA International CosmeticIngredient Dictionary，第四版，1991，第12和80页)。市售羧酸聚合物的实例包括卡波姆，其为丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的均聚物(例如，购自B.F.Goodrich的CarbopolTM900系列)。

交联的聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子型和非离子型聚合物。实例描述于美国专利第5100660号、第4849484号、第4835206号、第4628078号、第4599379号。

聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子的聚丙烯酰胺聚合物，其包括取代支化的或未支化的聚合物)的非限制性实例包括聚丙烯酰胺、异构烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺与被丙烯酸和取代的丙烯酸取代的丙烯酰胺的多嵌段共聚物。

多糖的非限制性实例包括纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、乙酸丙酸羧酸纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠及其混合物。其他实例为烷基取代的纤维素，其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选地羟乙基化或羟丙基化)以形成羟烷基化的纤维素，其然后用C10-C30直链或支链烷基基团通过醚键进行进一步改性。一般这些聚合物为C10-C30直链或支链醇与羟烷基纤维素的醚。其它有用的多糖包括硬葡聚糖类，其包含每三个单元具有一个(1-6)连接的葡萄糖的(1-3)连接的葡萄糖单元的直链。

本发明可以使用的胶的非限制性实例包括阿拉伯树胶、琼脂、藻胶、藻酸、藻酸铵、支化淀粉、藻酸钙、角叉菜胶钙、肉毒碱、角叉菜胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔豆胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合二氧化硅、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、卡拉亚胶、巨藻、角豆胶、纳豆胶、藻酸钾、角叉菜胶钾、藻酸丙二醇酯、菌核胶、羧甲基葡聚糖钠、角叉菜胶钠、黄蓍胶、黄原胶及其混合物。

j.防腐剂

可以在本发明的环境下使用的防腐剂的非限制性实例包括季铵盐防腐剂(例如聚季铵盐-1和苄烷铵卤化物(例如苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵))、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯氧基乙醇、苄醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒或其组合。

2、药物成分

还预期药物活性成分对本发明的组合物是有用的。药物活性成分的非限制性实例包括抗粉刺剂、用于处理酒渣鼻的试剂、止痛剂、麻醉剂、肛门直肠的、抗组胺药、包括非甾族消炎药在内的消炎剂、抗生素、抗菌剂、抗病毒素、抗微生物剂、抗癌活性物、抗疥螨剂、灭虱剂、抗肿瘤药、防汗药、止痒剂、抗牛皮癣药、抗脂溢剂、生物活性蛋白质和多肽、烧伤处理剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹处理剂、酶、毛发生长刺激剂、包括DFMO及其盐和类似物在内的毛发生长抑制剂、止血剂、角质分离剂、口疮处理剂、唇疱疹处理剂、牙科或牙周处理剂、光敏感活性物、皮肤保护剂/屏障剂、包括激素和皮质激素的类固醇、晒伤处理剂、遮光剂、经皮活性物、鼻活性物、阴道活性物、疣处理剂、创伤处理剂、创伤愈合剂等。

F.试剂盒

还预期试剂盒用于本发明的特定方面。例如，本发明的组合物可以包括在试剂盒内。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、高压容器、屏障容器、包装、分室、口红容器、压缩容器、能够保存化妆品组合物的化妆品盘或其它类型的容器，例如注塑或吹塑成型的塑料容器，其中保存分散体或组合物或期望的瓶子、分配器或包装。试剂盒和/或容器在其表面可包含标记。举例来说，标记可以是词语、短语、缩写、图片或符号。

所述容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中，可以挤压容器(例如金属、层压或塑料管)以分配期望量的组合物。组合物可以分配为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体。容器可以具有喷雾、抽吸或挤压机构。试剂盒还可以包含用于使用试剂盒组分以及使用任何包含于容器内的组合物的说明书。说明书可以包含如何施用、使用和保存组合物的解释。

实施例

并入以下实施例以说明本发明的优选实施方式。本领域技术人员应理解，以下实施例中所公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，从而视为构成了其优选的实施方式。然而，根据本公开，本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，在所公开的具体实施方案中可以做许多改变，并仍获得相同或相似的结果。

本文所公开和要求保护的所有组合物和方法可以根据本公开不需要不合适的实验即制成和实现。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选的实施方案进行了描述，但是对于本领域技术人员明显的是，可以对所述组合物和/或方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化，而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地，明显地，化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。

实施例1

(使用材料)

表1中的活性成分用于获得下述体外和体内数据。

表1

实施例2

(体外研究)

已经确定，糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚的组合可以抑制一氧化碳合酶、降低TNF-α产生和增加闭合蛋白-1产生。结果的概要在表2中示出，并在以下提供用于确定成分特性的方法。

表2

一氧化碳合酶活性测试：一氧化氮合酶(NOS)是一类催化L-精氨酸产生一氧化氮(NO)的酶。NOS是血管舒张的重要介质。该生物测定法用于分析糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、姜酮酚以及藻提取物和北艾提取物的组合对NOS活性的影响。在通过NOS生成NO的过程中，在存在或不存在测试化合物、测试提取物或阳性对照的情况下进行生物测定。为了测量NOS的活性，使NO产物氧化为亚硝酸盐和硝酸盐，然后将硝酸盐还原为亚硝酸盐，并使用改进的Griess方法进行测量。结果表明，糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、姜酮酚以及藻提取物和北艾提取物的组合降低的NOS活性大于1μM SIN-1阳性对照。具体而言，糖类同分异构体提取物可将NOS的活性降低约46％，密罗木提取物可将其降低约36％，姜酮酚可将其降低47％，藻提取物和北艾提取物的组合可将其降低33％，而阳性对照只能将NOS的活性降低约29％。参见表2。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分析：TNF超家族的原型配体，TNF-α，是一种在炎症中起主要作用的多效细胞因子。其表达的增加与促炎活性上调有关。该生物测定法用于分析密罗木提取物、糖类同分异构体提取物、以及藻提取物和北艾提取物的组合对人表皮角质形成细胞产生TNF-α的影响。该分析的终点是反映TNF-α的存在和细胞活性的分光光度测量。该分析采用定量的夹心酶免疫分析技术，因此将对TNF-α特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。标准品和样品移液到孔中，存在的所有TNF-α由固定化的抗体结合。冲走所有未结合的物质后，将对TNF-α具有特异性的酶联多克隆抗体添加到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，添加底物溶液到孔中，显色与初始步骤中结合的TNF-α的量成比例。停止显色，测量颜色的强度。使用酶标仪在450nm处检测。

在37℃下5％的CO₂中于EpiLife标准生长培养基(Cascade Biologics)中培养的亚汇合的正常人类成熟角质形成细胞(Cascade Biologics)用佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA，10ng/ml，Sigma Chemical，#P1585-1MG)在存在或不存在测试提取物或对照品的情况下处理6小时。PMA导致TNF-α分泌明显的增加，所述TNF-α分泌在处理6小时后达到峰值。孵育之后，收集细胞培养基，并使用上述来自R&D Systems(#DTA00C)的夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)定量TNF-α的分泌量。

表明密罗木提取物、糖类同分异构体提取物、以及藻提取物和北艾提取物的组合降低TNF-α的产生。具体而言，通过密罗木提取物可将TNF-α的产量降低约76％，通过糖类同分异构体提取物可将TNF-α的产量降低约88％，通过藻提取物和北艾提取物的组合降低了98％。参见表2。

闭合蛋白-1的产生：测量了糖类同分异构体提取物引起的角质形成细胞中闭合蛋白产生的变化。闭合蛋白是对于紧密连接和皮肤水分屏障功能的形成至关重要的蛋白质。使用分析角质形成细胞裂解物中闭合蛋白-1浓度的生物测定法来测定经处理和未经处理的角质形成细胞中闭合蛋白-1的产生。使用

Simon^TM蛋白质印迹法进行生物测定。对于样品，在37℃和5％的CO₂下，在含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙并补充有来自Life Technologies(S-101-5)的角质形成细胞生长补充剂(HKGS)的Epilife生长培养基中使来自Life Technologies(C-005-5C)的成年人表皮角质形成细胞(HEKa)生长24小时。然后，将HEKα在含有测试化合物的生长培养基中、用于阴性对照的没有化合物的生长培养基中、或用于阳性对照的含有1mM的CaCl₂的生长培养基中孵育24至48小时。然后，洗涤、收集NEKa细胞并将其储存在冰上或更冷的地方，直到使用裂解缓冲液在冰上裂解并进行超声处理。测定样品的蛋白质浓度并用于使样品标准化。将细胞裂解物存储在-80℃直至用于生物测定。

Simon^TM蛋白质印迹生物分析法采用定量的蛋白质印迹分析技术，该技术使用了对闭合蛋白具有特异性的抗体来定量检测试样中的闭合蛋白。如上所述，裂解细胞样品并标准化蛋白质浓度。加载标准化的样品和分子量标准物，并使用毛细管电泳在变性的蛋白质分离凝胶上运行。然后将凝胶中的蛋白质固定化并使用对闭合蛋白具有特异性的第一抗体进行免疫学检测。然后，用结合第一抗体的酶联检测抗体对固定的蛋白质进行免疫检测。然后，将化学发光底物溶液加入到固定的蛋白质中，以允许与固定化结合的闭合蛋白聚糖的量成比例的化学发光显影。在特定的时间停止化学发光显影，测量化学发光信号的强度，并与阳性和阴性对照进行比较。

表明糖类同分异构体使闭合蛋白-1的产生增加171％。参见表2。

实施例3

(临床)

已经确定，在临床研究中，糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚的组合可以减少红斑并使皮肤清凉。

简要地，向22名面部持续发红的对象提供局部用组合物，该局部用组合物包含糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚。局部用皮肤组合物被设计为这些活性成分的载剂。已经确定，在临床研究中，糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚的组合可以减少或降低红斑和对象皮肤的温度。红斑和皮肤温度的减少/降低可以用以下方法测量。

在为期四周的研究过程中，对象被要求每天两次将组合物涂于面颊区域。

红斑的临床分级-在基线时间以及治疗的第2周和第4周评估对象的红斑。训练有素的临床分级员在每个时间点使用标准0-9评分(0＝无发红，9＝深红色)评估每个对象的左右面颊是否出现红斑。参见图1。

皮肤温度的红外(IR)热成像-在基线时间以及治疗的第2周和第4周评估对象的皮肤温度。使用ICI 9320P热像仪拍摄了每个对象的全脸(正视图)的红外热像图像。通过计算在两颊上选择的目的区域(2厘米×2厘米)内的平均温度并对其进行平均，来分析图像。参见图2。

结果-如图1和图2所示，经过培训的临床评分者对红斑的评估(图1)和皮肤温度的仪器评估(图2)均表明，该包含糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚的组合的组合物明显减少(改善)红斑并使皮肤清凉。与基线测量值相比，在第2周和第4周均显示了统计学显著性。

实施例4

(通用制剂)

活性成分的组合可包含在多种用于皮肤和/或毛发的局部产品制剂中。表3和表4描述了其中可以掺入活性成分的通用制剂或皮肤测试制剂。这些制剂也可用于确定活性成分对皮肤有益的类型。以如此的方式制备这些制剂，使得由对皮肤局部施用所述制剂所产生的所有皮肤益处都可以直接归因于正在试验的皮肤活性成分。在本发明情况下，可被测试的活性成分可以是糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚或其任何组合、或所有这些活性成分、或这些活性成分中的至少1种、2种、3种、4种和/或5种。应认识到，也可以使用其他标准试验载剂以确定活性成分的皮肤益处特性，以下制剂是非限制性试验载剂。

表3^*

成分	％浓度(以重量计)
		相A
水	84.80
		黄原胶	0.1
对羟基苯甲酸甲酯	0.15
		对羟基苯甲酸丙酯	0.1
柠檬酸	0.1
		相B
鲸蜡醇	4.0
		硬脂酸甘油酯+PEG 100	4.0
棕榈酸辛酯	4.0
		聚二甲基硅氧烷	1.0
生育酚乙酸酯	02
		相C
有效成分<sup>**</sup>	2.0
		总计	100

^*制备组合物的过程：^*将黄原胶撒入水中并混合10分钟。然后，添加相A中的所有成分并加热到70℃至75℃。添加相B中的所有项目到单独的烧杯中并加热到70℃至75℃。在70℃至75℃下混合相A和B。继续搅拌并使组合物冷却到30℃。然后，边搅拌边添加相C的成分。

^**本说明书全文所确定的活性成分可以并入该组合物作为活性成分。提取物可以单独地或组合地用在该试验载剂中。根据预期或需要，可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。

表4*

^*将相A中的成分添加到烧杯中并边搅拌边加热到70℃至75℃。然后，将相B的成分与相A添加到一起并随着搅拌冷却到30℃。然后，边搅拌边添加相C的成分。

^**本说明书全文所确定的活性成分可以并入该组合物作为活性成分。活性成分可以单独地或组合地用在该组合物中。根据预期或需要，可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。

实施例5

(示例性制剂)

表5至表10中所述的制剂是可以在本发明的情况下制备的制剂类型的非限制性实施例。可以使用任何标准方法来制备这类制剂。例如，可以使用在烧杯中简单地混合成分。应混合这些成分并在必要时加热以获得均匀的组合物。可用于制剂中的活性成分可包括糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚或其任何组合、或所有这些活性成分、或这些活性成分中的至少1种、2种、3种、4种和/或5种。

表5包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳剂(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等)，本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表5的组合物中(例如通过调节组合物的水含量)。此外，可以根据希望的制剂(例如霜剂、洗剂、保湿剂、清洁剂等)改变表5中所确定的成分的浓度范围。

表5

成分	％浓度(以重量计)
		水	适量
活性成分<sup>*</sup>	0.1％至10％
		甘油	3％至40％
丁二醇	0.0001％至10％
		丙二醇	0.0001％至10％
苯氧乙醇	0.0001％至10％
		EDTA二钠	0.0001％至10％
硬脂醇聚醚-20	0.0001％至10％
		氯己定二葡糖酸盐	0.0001％至10％
山梨酸钾	0.0001％至10％
		防腐剂<sup>**</sup>	0.0001％至2％
总计	100

^*本说明书全文所确定的活性成分可以并入该组合物作为活性成分。活性成分可以单独地或组合地用在该组合物中。根据预期或需要，可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。

^**可以使用本说明书中所确定的或本领域已知的所有防腐剂。

表6包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳剂(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等)，本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表6的组合物中(例如通过调节组合物的水含量)。此外，可以根据希望的制剂(例如霜剂、洗剂、保湿剂、清洁剂等)改变表6中所确定的成分的浓度范围。

表6

^*本说明书全文所确定的活性成分可以并入该组合物作为活性成分。活性成分可以单独地或组合地用在该组合物中。根据预期或需要，可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。

^**可以使用本说明书中所确定的或本领域已知的所有防腐剂。

表7包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳剂(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等)，本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表7的组合物中(例如通过调节组合物的水含量)。此外，可以根据希望的制剂(例如霜剂、洗剂、保湿剂、清洁剂等)改变表7中所确定的成分的浓度范围。在具体的实施方案中，表7的组合物可以是保湿剂。

表7

^*本说明书全文所确定的活性成分可以并入该组合物作为活性成分。活性成分可以单独地或组合地用在该组合物中。根据预期或需要，可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。

表8包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳剂(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等)，本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表8的组合物中(例如通过调节组合物的水含量)。此外，可以根据希望的制剂(例如霜剂、洗剂、保湿剂、清洁剂等)改变表8中所确定的成分的浓度范围。在具体的实施方案中，表8的组合物可以是保湿剂。

表8

成分	％浓度(以重量计)
		水	适量
活性成分<sup>*</sup>	0.1％至10％
		甘油	0.0001至10％
戊二醇	0.0001至10％
		辛二醇	0.0001至10％
EDTA二钠	0.0001至10％
		凡士林	0.0001至10％
角鲨烷	0.0001至10％
		鲸蜡醇	0.0001至10％
ARLACEL<sup>TM</sup> 165	0.0001至10％
		聚二甲基硅氧烷	0.0001至10％
SIMULGEL<sup>TM</sup> 600	0.0001至10％
		总计	100

^*本说明书全文所确定的活性成分可以并入该组合物作为活性成分。活性成分可以单独地或组合地用在该组合物中。根据预期或需要，可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。

表9包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳剂(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等)，本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表9的组合物中(例如通过调节组合物的水含量)。此外，可以根据希望的制剂(例如霜剂、洗剂、保湿剂、清洁剂等)改变表9中所确定的成分的浓度范围。在具体的实施方案中，表9的组合物可以是防晒液。

表9

^*本说明书全文所确定的活性成分可以并入该组合物作为活性成分。活性成分可以单独地或组合地用在该组合物中。根据预期或需要，可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。

**防晒成分可以是本说明书中所确定的(例如UV吸收剂和/或反射剂)或本领域普通技术人员已知的任何防晒成分或这些成分的组合。在一个实施方案中，防晒成分是氧化锌和二氧化钛的组合。

表10包括本发明的组合物的非限制性实例。本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表10的组合物中(例如通过调节组合物的水含量)。此外，可以根据希望的制剂(例如霜剂、洗剂、保湿剂、清洁剂等)改变表10中所确定的成分的浓度范围。在具体的实施方案中，表10的组合物可以是清洁剂。

表10

成分	％浓度(以重量计)
		水	适量
活性成分<sup>*</sup>	0.1％至10％
		EDTA二钠	0.0001％至10％
柠檬酸	0.0001％至10％
		戊二醇	0.0001％至10％
辛二醇	0.0001％至10％
		甲基椰油酰基牛磺酸钠	10％至30％
椰油酰两性基二乙酸钠	1％至10％
		总计	100

^*本说明书全文所确定的活性成分可以并入该组合物作为活性成分。活性成分可以单独地或组合地用在该组合物中。根据预期或需要，可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。

实施例6

(附加分析)

可以用于确定在本说明书全文和权利要求书中所公开的任意成分或任意成分的组合或包含所述成分的组合的组合物功效的分析，可以通过本领域普通技术人员已知的方法进行确定。以下是可以在本发明的环境中使用的非限制性试验。应认识到，可以使用其它测试过程，包括例如客观的和主观的过程。

B16色素沉着测定：黑素生成是黑素细胞产生黑色素的过程，黑色素是一种天然产生的给予皮肤、毛发和眼睛颜色的色素。抑制黑素生成有益于预防皮肤变黑和减轻与老化有关的黑斑。该生物分析采用B16-F1黑素细胞(ATCC)，一种永生化的小鼠黑色素瘤细胞系，来分析化合物对黑素产生的效果。该分析的终点是黑色素产生和细胞活性的分光光度测量。可在37℃、10％CO₂下，将B16-F1黑素细胞在具有10％的胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中培养，然后用本说明书公开的活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种处理6天。孵育之后，通过在405nm处的吸收测量黑色素分泌，定量细胞活性。

弹性蛋白刺激测定：弹性蛋白是一种结缔组织蛋白，其帮助皮肤在拉伸或收缩之后恢复形状。弹性蛋白也是一种重要的负载蛋白，其用于需要储存机械能之处。通过在由赖氨酰氧化酶催化的反应中连接许多可溶性原弹性蛋白分子而制备弹性蛋白。通过使用针对弹性蛋白的免疫荧光抗体对培养的人成纤维细胞进行染色，可在培养的人成纤维细胞中监测弹性蛋白分泌和弹性蛋白纤维。

层黏连蛋白和纤连蛋白刺激测定：层黏连蛋白和纤维黏连蛋白是真皮-表皮连接区(DEJ)(也被称为基膜)中主要的蛋白质。DEJ位于真皮和表皮联结之间，形成叫做网脊的指状突出。细胞和表皮从真皮的血管中接收其养分。网脊增大暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织区室的黏连，并控制皮肤的结构完整性。层黏连蛋白和纤维黏连蛋白是位于DEJ中的两种糖蛋白。考虑到将细胞保持在一起的胶，真皮成纤维细胞分泌层黏连蛋白和纤连蛋白以帮助促进表皮细胞到DEJ的细胞内和细胞间黏连。可通过定量在培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的层黏连蛋白和纤连蛋白来监测层黏连蛋白和纤连蛋白的分泌，培养的人成纤维细胞用具有或不具有1.0％最终浓度的果梅提取物的培养基处理3天。培养之后，可在酶联免疫吸附分析(ELISA)中，使用针对每种蛋白的免疫荧光抗体，测定层黏连蛋白和纤连蛋白含量。通过3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑(MTS)的生物转化测定，对细胞代谢活性进行标准化测量。

抗氧化(AO)测定：体外生物测定测量本说明书公开的成分、成分组合或具有所述组合的组合物中的任一种的总抗氧化能力。所述分析依赖样品中抗氧化剂的能力抑制

(2,2'-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])被正铁肌红蛋白氧化成

·+。活生物体的抗氧化系统包含酶，例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶；大分子，例如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白；和大量的小分子，包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。内源的源自食物的抗氧化剂的总数表示细胞外液的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协作提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此，总的抗氧化能力与测量单独组分获得的相比可以给出更相关的生物信息，因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。样品中抗氧化剂预防ABTS氧化的能力与Trolox，一种水溶性生育酚类似物的进行比较，并以Trolox的摩尔当量进行定量。可以使用来自Cayman Chemical(密歇根州安阿伯，USA)的抗氧化能力试剂盒#709001作为测量本说明中所公开的成分、成分的组合或具有所述组合的组合物中的任一种的总抗氧化能力的体外生物测定。方案可以根据制造商的建议进行。

ORAC测定：还可以通过测量该成分或组合物的抗氧化活性来分析本说明书公开的活性成分、活性成分组合或具有所述组合的组合物的任一种氧自由基吸附(或吸收)能力(ORAC)。抗氧化活性说明减少氧化试剂(氧化剂)的能力。该测定量化了抑制氧化剂例如氧自由基作用所需的程度和时间长度，已知该氧化剂会对细胞(例如皮肤细胞)造成损伤。可通过本领域普通技术人员已知的方法(参见美国专利公布号2004/0109905和2005/0163880，以及通常可获得的试剂盒例如Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2))来确定本说明书公开的活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种的ORAC值。Zen-BioORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2)测定了由于AAPH(2,2'-偶氮双-2-甲基丙脒二盐酸盐)分解而形成过氧自由基随时间的荧光素荧光的损失。将Trolox，一种水溶性维生素E类似物，以剂量依赖的方式作为抑制荧光素衰减的阳性对照。

蘑菇酪氨酸酶活性测定：在哺乳动物细胞中，酪氨酸酶在来自酪氨酸(和来自多巴色素聚合)的黑色素生物多步合成中催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中，并产生给予皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素(芳香醌化合物)。在存在或不存在本说明书公开的每种活性成分、成分组合或具有所述组合的任一种的情况下，纯净蘑菇酪氨酸酶(Sigma)可以与其底物L-Dopa(Fisher)一起孵育。色素形成可通过在490nm测定的比色板进行评估。蘑菇络氨酸酶活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照相比较来计算，以确定测试成分或其组合抑制纯化酶的活性的能力。测试提取物的抑制与曲酸(Sigma)的进行比较。

基质金属蛋白酶3和9的活性测定：体外的基质金属蛋白酶(MMP)抑制分析。MMP是胞外蛋白酶，其凭借宽的底物特异性在许多正常的和疾病状态起作用。MMP3底物包括胶原蛋白、纤维黏连蛋白和层黏连蛋白；而MMP9底物包括胶原蛋白VII、纤维黏连蛋白和层黏连蛋白。使用来自BioMol International的用于MMP3(AK-400)和MMP-9(AK-410)的比色药物发现试剂盒，该测定设计用于测量MMP的蛋白酶活性，使用含硫多肽作为显色底物(Ac-PLG-[2-巯基-4-甲基-戊酰基]-LG-OC2H5)5,6。MMP裂解位点的肽键由含硫多肽中的硫酯键替代。该键被MMP水解产生巯基，其与DTNB[5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，埃尔曼试剂]反应生成2-硝基-5-硫代苯甲酸，可以通过其在412nm处的吸光度进行检测(在pH 6.0和高于7时，ε＝13600M-1cm-1)。可以测定活性成分、成分组合中的任一个或具有本说明书公开的该组合的组合物

基质金属蛋白酶1(MMP1)活性测定：体外的基质金属蛋白酶(MMP)抑制分析。MMP是胞外蛋白酶，其凭借宽的底物特异性在许多正常的和疾病状态起作用。MMP1底物包括胶原蛋白IV。分子探针Enz/Chek白明胶酶/胶原酶分析试剂盒(#E12055)利用荧光明胶底物来检测MMP1蛋白酶活性。在溶蛋白性裂解后，显示亮绿色荧光，并可以使用荧光酶标仪来观测亮绿色荧光以测量酶活性。

将来自Invitrogen的Enz/Chek明胶酶/胶原酶分析试剂盒(#E12055)设计为体外分析以测量MMP1酶活性。可以测定本说明书公开的活性成分、成分组合中的任一个或具有该组合的组合物。该测定依赖于纯净的MMP1酶降解荧光明胶底物的能力。底物被MMP1特异地裂解后，则显示亮绿色荧光，并可以使用荧光酶标仪观测亮绿色荧光。在纯净的酶和底物存在或不存的条件下培养试验材料以确定其蛋白酶抑制能力。

环氧合酶(COX)测定：体外环氧合酶-1和环氧合酶-2(COX-1、-2)抑制分析。COX是一种表现出环氧合酶和过氧化物酶两者活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转化为过氧化氢内过氧化物(前列腺素G2；PGG2)，过氧化物酶组分将内过氧化物(前列腺素H2；PGH2)还原为相应的醇，前列腺素、血栓素和环前列腺素的前体。该COX抑制剂筛选测定测量环氧合酶的过氧化物酶组分。过氧化物酶活性通过监测氧化的N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现比色地进行分析。该抑制筛选分析包括COX-1和COX-2酶两者，以筛选同工酶特异性抑制剂。可以使用比色COX(绵羊)抑制剂筛选测定(#760111，Cayman Chemical)来分析本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合、或具有所述组合的组合物对纯化的环氧合酶(COX-1或COX-2)的影响。根据制造商的用法说明，纯化的酶、血红素和试验提取物可以在分析缓冲液中混合，并在室温下摇动孵育15分钟。孵育之后，可以加入花生四烯酸和比色底物开始反应。颜色变化可以通过在590nm测定的比色板进行评估。COX-1或COX-2活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物比较进行计算，以确定试验提取物抑制纯化酶活性的能力。

脂肪氧合酶(LO)分析：体外的脂肪氧合酶(LO)抑制分析。LO是非血红素的含铁的加双氧酶，其催化分子氧加成到脂肪酸。亚油酸盐/酯和花生四烯酸盐/酯是植物中和动物中LO的主要底物。然后，花生四烯酸可以转化为羟基二十烷三烯(HETE)酸衍生物，其随后转化为有效的炎症介质白三烯。该分析通过测量利用花生四烯酸培养的脂肪氧合酶(5-、12-或15-LO)产生的氢过氧化物提供一种精确的和方便的用于筛选脂肪氧合酶抑制剂的方法。可以使用比色LO抑制剂筛选试剂盒(#760700，Cayman Chemical)来确定本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合、或具有所述组合的组合物抑制酶活性的能力。可以将经纯化的15-脂肪氧合酶和测试成分在分析缓冲液中混合，并在室温下摇动培育10分钟。培育之后，可以加入花生四烯酸开始反应，混合物可在室温下再培育额外的10分钟。可以加入比色底物终止催化，颜色变化可以通过在490nm测定的荧光板进行评估。脂肪氧合酶活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物对比来计算，以确定说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合、或具有所述组合的组合物的每一种抑制纯化酶活性的能力。

胶原蛋白刺激测定：胶原蛋白是对皮肤结构关键的一种细胞外基质蛋白。增加的胶原蛋白合成帮助改善皮肤紧致度和弹性。该生物测定可用于检验本说明书公开的活性成分的每一种、任一种活性成分的组合或具有所述组合的组合物的任一种对于通过人表皮成纤维细胞的前胶原肽(胶原蛋白前体)产生的作用。该测定的终点是反映原胶原蛋白肽的存在和细胞活性的分光光度测量。该测定采用定量的三明治酶免疫分析技术，因此对原胶原蛋白肽特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。标准品和样品移液到孔中，存在的任何前胶原肽由固定化的抗体结合。冲走所有未结合的物质后，添加对原胶原蛋白肽特异的酶联多克隆抗体到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，添加底物溶液到孔中，显色与初始步骤中结合的原胶原肽的量成比例。可以停止显色，并使用酶标仪测定在450nm处的颜色强度。

为了产生样品和对照，将亚汇合的正常人成体表皮成纤维细胞(CascadeBiologics)在含有10％胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中于37℃在10％CO₂中培养。可用每种测试成分和对照处理细胞3天。孵育之后，收集细胞培养基，如上所述，使用来自Takara(#MK101)的三明治酶联免疫吸附分析(ELISA)定量前胶原肽的分泌量。

弹性蛋白酶测定：可以使用Molecular Probes(俄勒冈州尤金，USA)的

弹性蛋白酶分析(试剂盒#E-12056)作为用于测量本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合或具有所述组合的组合物的弹性蛋白酶活性抑制的体外酶抑制测定分析。EnzChek试剂盒含有可溶的牛颈韧带弹性蛋白，其可以用染料标记以使共轭荧光能够被淬灭。非荧光的底物可以被弹性蛋白酶或其他蛋白酶消化以产生高荧光的片段。产生的荧光增强可以用荧光微孔板测定仪进行监测。来自弹性蛋白底物的消化产物在约505nm处具有最大吸收值，在约515nm处具有荧光发射最大值。当使用EnzChek弹性蛋白酶分析试剂盒用于弹性蛋白酶抑制剂的筛选时，可将肽、N-甲氧基琥珀酰基-Ala-Ala-Pro-Val-氯甲基酮用作选择性的、共同的弹性蛋白酶抑制剂。

油控制测定：用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少的测定可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行测定。在一个例子中，可以使用前额。可将本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分组合的任一种或具有该组合的组合物每天一次或两次地施用到前额的一部分一段固定的日子(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或多于14天)，而前额的其他部分不用所述组合物处理。在一段固定的日子期满后，皮脂分泌可以通过将细吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额皮肤上进行分析。这是通过首先用湿的和干的布从处理过的和未处理的区域去除所有皮脂完成的。然后吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额区域，可以绕着前额放置橡皮筋以轻轻地将吸墨纸压到皮肤上。2小时后，吸墨纸可以移去，使其干燥，然后进行透照。越深的吸墨纸对应于越多的皮脂分泌(或较浅的吸墨纸对应于减少的皮脂分泌。

红斑测定：测量皮肤发红减少的测定可以使用Minolta Chromometer进行评估。皮肤红斑可以通过在对象前臂施用0.2％的十二烷基硫酸钠溶液来引发。该区域用封闭的贴片保护24小时。24小时后，除去贴片，可以使用Minolta Chroma Meter的a^*值对刺激引发的发红进行评估。a^*值测量皮肤色调在红色区域的变化。读取之后，立即使用本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合或具有该组合的组合物处理该区域。可定期进行重复测量以确定制剂减少发红和刺激的能力。

皮肤水分/水合测定：皮肤水分/水合的益处可以通过利用以Nova Dermal PhaseMeter进行的阻抗测量进行测量。阻抗计测量皮肤水分含量的变化。皮肤外层具有不同的电性质。当皮肤干燥时，其导电很差。当其变得含水耕更多时，产生增加的导电性。因此，皮肤阻抗(与导电性有关)的变化可以用于评价皮肤水合的变化。装置可以根据仪器说明在每个测试日进行校准。还可以对温度和相对湿度进行标记。对对象可以进行如下评估：测量前其可以在具有确定湿度(例如30％至50％)和温度(例如68℃至72℃)的室内进行平衡。在脸的每一侧进行三个独立的阻抗测定，并对其进行记录和平均。阻抗计可以使用T5设定，其对施用到脸上每五秒的阻抗值进行平均。变化可以以统计方差和显著性进行报道。根据该方法可以测定本说明书中公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合或含有所述组合的组合物。

皮肤清透度和雀斑与老年斑减少的测定：皮肤清透度和雀斑与老年斑减少使用Minolta Chromometer进行评价。皮肤色调的变化可以使用Minolta Chroma Meter的a^*值进行评估以确定由于产品处理引起刺激的可能性。a^*值测量肤色在红色区域的变化。这用于确定本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合或具有该组合的组合物是否诱导刺激。测量可以在脸的每一侧进行并进行平均，作为左边脸和右边脸的值。皮肤清透度也可以使用Minolta Meter进行测量。测量是Minolta Meter的a^*值、b值、和L值的组合，并与皮肤的亮度有关，而且非常好的对应皮肤的光滑度和水合。皮肤读数如上进行。在一个非限制性方面，皮肤清透度可以描述为L/C，其中C是色度并定义为(a²+b²)^1/2。

皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和皮肤色调测定：皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和皮肤颜色可以用临床评分技术进行评估。例如，皮肤干燥的临床评分可以通过五点标准Kligman scale进行确定：(0)皮肤是柔软和湿润的；(1)皮肤呈现正常而没有可见的干燥；(2)皮肤触感轻微干燥而没有可见的剥落；(3)皮肤感觉干燥、坚韧并且具有有些鳞屑的发白的外观；以及(4)皮肤感觉非常干燥、粗糙并且具有有鳞屑的发白的外观。评估可以由两个临床医师独立进行并进行平均。

皮肤色调临床评分测定：皮肤色调的临床评分可以通过十点模拟数值刻度实施：(10)平滑的均匀的皮肤、粉红棕色的颜色。手持放大镜检查时没有暗的、发红的或有鳞的斑块。皮肤的微观纹理摸上去非常均匀；(7)不用放大镜观察均匀的皮肤色调。没有鳞状区域，但是有由于色素淀积或红斑引起的色素异常。没有直径大于1cm的疹斑；(4)轻易地注意到皮肤色素异常和不均匀的纹理。少量鳞片。某些区域摸上去粗糙的皮肤；以及(1)不均匀的皮肤着色和纹理。多个区域的鳞片和疹斑，色素减退型、发红的或黑色的斑点。直径超过1cm的大面积不均匀着色。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。

皮肤光滑度的临床评分测定：皮肤光滑度的临床评分可以通过一个十点模拟数值量表进行分析：(10)光滑的，皮肤是湿润的和闪光的，手指划过表面时没有阻力；(7)一定程度光滑的，微小的阻力；(4)粗糙的、可见地改变的，摩擦时有摩擦力；以及(1)粗糙的、片状的、不均匀的表面。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。

用Packman等人(1978)公开的方法进行的皮肤光滑度和皱纹减少的测定：(1978)：皮肤光滑度和皱纹的减少也可以通过使用Packman等人(1978)公开的方法进行可视化评估。例如，每一名对象就诊时，对每一名对象的表面面纹(SFL)的深度、浅度和总数量都可以进行认真的评分和记录。通过将数量因子乘以深度/宽度/长度因子得到数字的分数。获得眼睛区域和嘴巴区域(左侧和右侧)的分数，加到一起作为总的皱纹分数。

用Hargens Ballistometer进行的皮肤紧致度测定：皮肤紧致度可以用HargensBallistometer，一种通过在皮肤上落下一个小物体并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧致度的装置，进行测量。ballistometry是使用相对钝的探头(4平方毫米-接触面积)的小的轻量探测器。探测器轻轻地穿透进入皮肤，导致依赖于皮肤外层性质的测量，所述皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。

用Gas Bearing Electrodynamometer进行的皮肤柔软度/柔韧性分析：皮肤柔软度/柔韧性可以使用Gas Bearing Electrodynamometer，一种测量皮肤压力/张力性质的仪器，进行评估。皮肤的黏弹性与皮肤保湿有关。可以通过用双面胶将探测器附着在皮肤表面实现对面颊区域指定位点的测量。可以将大约3.5gm的力平行施加于皮肤表面，精确地测量皮肤的位移。然后可以计算皮肤的柔韧性，并表达为DSR(动态弹簧刚度，以gm/mm计)。

用复制品进行的细纹和皱纹的显现测定：皮肤上面纹和皱纹的显现可以使用复制品进行评估，所述复制品是皮肤表面的印模。可以使用如硅橡胶的材料。复制品可以通过图像分析进行分析。面纹和皱纹可见性的变化可以通过利用硅复制品形成对象的脸并用计算机图像分析系统分析复制品图像进行客观地定量。复制品可以从眼睛区域和颈部区域获得，并用数码相机以低照明入射角进行拍摄。数字图像可以用图像处理程序进行分析并确定复制品被皱纹和细纹覆盖的区域。

用表面光度仪/记录针的方法进行的皮肤表面轮廓测定：皮肤表面轮廓可以通过使用表面光度仪/记录针的方法进行测量。这包括闪光或拖动记录针穿过复制品表面。记录针的垂直位移通过距离传感器可以录入计算机，在扫描复制品的一定距离后，皮肤轮廓的分析可以以二维曲面产生。该扫描可以沿着固定的轴重复任意次数以产生模拟的皮肤3-D图像。使用记录针技术可以获得十个随机的复制品截面，并组合产生平均值。目标值包括Ra，其为通过相对于平局轮廓高度计算的轮廓高度积分得到的所有粗糙度(高度)值的算术平均数。Rt，其为最高峰和最低谷之间的最大垂直距离，以及Rz，其为平均峰振幅减去平均峰高度。数值以用mm为单位标定的数值给出。设备应在每次使用前通过扫描已知数值的金属标准物进行标准化。Ra值可以通过下式计算：R_a＝标准化粗糙度；l_m＝横向(扫描)长度；以及y＝轮廓位置相对于平均轮廓高度的绝对值(x-轴)。

MELANODERM^TM测定：在其它非限制性方面，可以通过使用皮肤类似物例如MELANODERM^TM来评价说明书中公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合、或具有所述组合的组合物的功效。黑素细胞，皮肤类似物中细胞的一种，当暴露于黑色素的前体L-二羟苯基丙氨酸(L-DOPA)时阳性着色。皮肤类似物MELANODERM^TM可以如下处理：利用各种包含说明书中公开的活性成分的每一种、任一种成分的组合、或具有所述组合的组合物的基质或将基质单独作为对照。或者，未处理的皮肤类似物样品可以用作对照物。

丝聚合蛋白的产生：可测定在角化细胞中的由于本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分组合或具有该组合的组合物引起的角质细胞中丝聚合蛋白的产生的变化。丝聚合蛋白是皮肤中天然保湿因子(NMF)的前体。NMF增加会增加皮肤中的水分含量。使用分析角质形成细胞裂解物中的丝聚合蛋白浓度的生物测定来确定在经处理和未经处理的角质形成细胞中的丝聚合蛋白的产生。可用于量化丝聚合蛋白产生的生物测定的非限制性实例为

Simon^TM蛋白质印迹方案。对于每个样品，使正常的人表皮角质形成细胞(NHEK)在来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的含有钙的EPI-200–Mattek

生长培养基中生长。在处理之前，在37℃下5％的CO₂中，使NHEK在生长培养基中培养过夜。然后将NHEK在含有1％测试化合物/提取物的生长培养基中或不含化合物/提取物(阴性对照)的生长培养基中孵育24小时至36小时。可以洗涤、收集NHEK并将其储存在冰或冷水中，直到使用裂解缓冲液和超声处理在冰上裂解。可确定试样的蛋白质浓度并用于标准化试样。裂解物可在-80℃下存储直至在定量分析中使用。

Simon^TM免疫印迹生物分析使用定量的免疫印迹免疫测定技术，该技术使用了对丝聚合蛋白具有特异性的抗体来定量检测试样中的丝聚合蛋白。将细胞试样裂解并针对蛋白质浓度进行标准化。然后可将标准化的试样和分子量标准样，并使用毛细血管电泳在变性的蛋白质分离凝胶上运行。使用针对丝聚合蛋白特异性的初代抗体对凝胶内的蛋白质进行结合以及免疫杂交。然后可将经结合的蛋白质和与初代抗体结合的酶联检测抗体免疫杂交。然后可向经结合的蛋白质中添加化学发光底物溶液以使得化学发光显色与在免疫杂交中结合的丝聚合蛋白的量成比例。在特定的时间终止化学发光显色，可测定化学发光信号的强度并与阳性对照和阴性对照比对。

角质形成细胞单层渗透性可测定由于本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分组合或具有该组合的组合物的角化细胞单层的渗透性变化。角质形成细胞单层的渗透性是皮肤屏障的完整性的量度。作为非限制性实例，可使用Millipore(ECM642)的体外血管渗漏分析测定了在经处理和未经处理的角质形成细胞中的角质形成细胞单层的渗透性。该测定分析了内皮细胞吸附、输送和渗透。简略来说，来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角质形成细胞可被接种到在收集孔内的多孔胶原蛋白涂覆的膜上。在37℃下和5％的CO₂中，角质形成细胞在Epilife生长培养基中培养24小时，Epilife生长培养基含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙，并补充以来自Life Technologies(S-101-5)的Keratinocyte Growth Supplement(HKGS)。培养时间使得细胞形成单层并封闭膜孔。然后将培养基替换成含有(测试试样)或不含有(未处理对照)测试化合物/提取物的的新鲜的培养基，该角化细胞在37℃下和5％的CO₂中培养另外48小时。在存在/不存在测试化合物/提取物的培养之后，为了测定角质形成细胞单层的渗透性，培养基被替换成含有高分子量异硫氰酸荧光素(FITC)-Dextran的新鲜的培养基，该角化细胞在37℃下和5％的CO₂中培养另外4小时。在该4小时的培养期间，FITC可以与单层膜的渗透性成比例的速率穿过该角质形成细胞单层和多孔膜进入收集孔。在该4小时的培养之后，可测定细胞活性和收集孔中FITC的含量。对于FITC的含量，收集收集孔中的培养基，当在520nm被激发时，在480nm(Em)确定培养基的荧光性。可通过以下等式确定与未处理的对照组相比，渗透百分比和百分比的变化：渗透百分比＝((测试试样的Ex/Em平均值)/未处理对照的Ex/Em平均值)*100；百分比的变化＝测试试样的渗透性百分比–未处理对照的渗透性百分比。

透明质酸的产生：可以测量由于说明书中公开的活性成分的每一种、任一种成分组合中或具有所述组合的组合物引起的人真皮成纤维细胞中透明质酸产生的变化。HA是一种与基质结构的稳定性有关的多糖，还与向组织和细胞提供膨压有关。作为一个非限制性实例，可使用来自R&D Systems(DY3614)的透明质酸DuoSet ELISA试剂盒确定在经处理的和未经处理的成人真皮成纤维(HDFa)细胞中的HA的产生。在该测定中，对于试样的产生，在处理之前，在37℃和10％CO₂下于饥饿培养基(在含有0.15％胎牛血清和1％青霉素链霉素的杜皮克氏改良爱哥尔氏培养基中的溶液)中培养由Cascade Biologics获得的亚汇合的HDFa细胞(C-13-5C)72小时。之后使用测试化合物、阳性对照(来自Sigma-Aldrich(P1585)的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯和衍生自来自Sigma-Aldrich(P3201)的生长因子的血小板)或无添加对照用新鲜的饥饿培养基培养该细胞24小时。然后收集培养基并在-80℃下冷冻直至在ELISA测定用使用。

简略来说，该ELISA测定采用定量的夹心酶免疫分析技术，由此可将对HA具有特异性的捕获抗体预先包被在微孔板上。将标准品、来自经处理的细胞和未处理的细胞的培养基移液至微孔板，以使存在的任何HA被固定化抗体结合。冲走所有未结合的物质后，将对HA具有特异性的酶联检测抗体添加到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，将底物溶液添加到孔中，显色与初始步骤中结合的HA的量成比例。在特定时间停止显色，并可使用酶标仪在450nm处测定颜色强度。

透明质酸酶活性的抑制：可测定由于本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分组合或具有该组合的组合物的透明质酸酶活性变化。透明质酸酶是一种分解HA的酶。HA是一种与基质结构的稳定性有关的多糖，还与向组织和细胞提供膨压有关。作为非限制性实例，可以使用修改源自Sigma-Aldrich protocol#EC 3.2.1.35的体外方案测定透明质酸活性。简略来说，向含有测试化合物或对照组的微孔板反应孔中添加来自Sigma-Aldrich(H3506)的1-S型透明质酸。可使用鞣酸作为阳性对照抑制剂，对于对照的酶不添加测试化合物，可使用具有测试化合物或阳性对照但不含透明质酸酶的孔作为背景阴性对照。在底物(HA)的添加之前，孔在37℃下培养10分钟。添加底物，反应在37℃下孵育45分钟。然后将每个反应溶液的一部分转移至醋酸钠溶液中并在其中缓慢混合，醋酸的pH为3.75以终止反应的那部分(终止孔)。在添加反应溶液的一部分至终止孔之后，终止孔和反应孔应当包含相同体积的溶液。终止孔和反应孔二者在室温下培养10分钟。然后，测定终止孔和反应孔二者在600nm处的吸光度。可通过下式计算抑制率：抑制剂(或对照)活性＝(抑制剂终止的孔在600nm处的吸光度–抑制剂反应的孔在600nm处的吸光度)；初始活性＝对照酶在600nm处的吸光度；抑制百分比＝[(初始活性/抑制剂活性)*100]–100。

过氧化物酶体增殖剂-激活的受体γ(PPAR-γ)的活性：可测定由于本说明书中所公开的活性成分的每一种、任一种成分组合或具有该组合的组合物引起的PPAR-γ活性变化。PPAR-γ是一种对皮质产生关键的受体。作为一个非限制性实例，可使用分析测试的化合物或组合物抑制配体结合的能力的生物测试测定确定PPAR-γ的活性。简略来说，可以使用荧光的小分子pan-PPAR配体，由Life Technologies(PV4894)获得的FLUORMONE^TM Pan-PPAR Green，来确定测试的化合物或组合物是否能够抑制配体结合至PPAR-γ。试样孔含有PPAR-γ和荧光配体和二者之一：测试化合物或组合物(测试)；参考抑制剂；罗格列酮(阳性对照)；或者没有测试化合物(阴性对照。)将孔孵育一段时间以使得配体有机会与PPAR-γ结合。然后可测定每个试样孔的荧光偏振，并与阴性对照孔比对以确定测试化合物或组合物的抑制百分比。

细胞因子阵列：人表皮角质形成细胞被培养至70％至80％的汇合度。吸出板中的培养基并加入0.025％的胰蛋白酶/EDTA。当细胞变圆时，轻拍培养皿以释放细胞。从培养皿中去除含有胰蛋白酶/EDTA的细胞并中和。以180×g将细胞离心5分钟以形成细胞沉淀。吸取上清液。获得的团块在EPILIFE^TM培养基(Cascade Biologics)中被再悬浮。该细胞以约1020％的融合度被接种到6孔板中。在细胞变为约80％汇合度之后吸出培养基，添加1.0ml的EPILIFE^TM,以及佛波醇13-肉豆蔻酸酯12-乙酸酯(“PMA”)(一种已知的炎症诱导剂)和测试的组合物稀释物至两个重复的孔中(即1.0％(100μl的100×储备液)和0.1％(10μl的100×储备液)的测试组合物稀释为最终体积为1ml的EpiLife生长培养基)。轻柔地涡旋振荡培养基以确保充分混合。另外，在存在或不存在额外的PMA的情况下，向对照孔中添加1.0ml的EPILIFE^TM。在定量给料之后，将板在37±1℃和5.0±1％CO₂中培养约5小时。在该5小时孵育后，将所有培养基收集在圆锥管中并在-70℃下冷冻。

为进行分析，将16格的杂交盒连接至16格的FAST基片，和16抗细胞因子抗体加实验对照组一式三份排列，将基片置于用于加工的FAST框架中(每框架4个基片)。在室温下，使用70ml S&S蛋白质阵列封闭缓冲液(Whatman Schleicher and Scheull)将阵列封闭15分钟。移除封闭缓冲液，并向每个阵列添加70ml各自的上清液试样。在轻微振动下，阵列在室温下培养3小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。使用70ml混合型抗体处理阵列，混合型抗体含有对应于每个阵列捕获抗体的一个生物素化的抗体。在轻微振动下，阵列在室温下培养1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。在轻微振动下，在室温下使用70ml含有链霉亲和素-Cy5缀合物的溶液培养1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次，在去离子水中快速冲洗并干燥。

基片可在Perkin-Elmer ScanArray 4000共焦荧光成像系统中成像。可以保存阵列图像，并用Imaging Research Array Vision软件对其进行分析。简略来说，通过去除本底信号确定点强度。可平均来自每个试样条件下的点重复，然后和适当的对照组比对。

内皮管形成：内皮管的形成和血管形成和毛细血管形成有关。毛细血管形成和血管形成可以促成皮肤发红和红斑痤疮。在存在或不存在测试提取物和化合物的情况下，在细胞培养系统中，可使用具有预成型的原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的毛细血管小管破裂测定来确定内皮细胞形成管的能力。

简略来说，在细胞外基质体外培养HUVEC，其刺激和内皮细胞的附着和管状形态发生以形成毛细管状的内腔结构在多个方面，这些体外形成的毛细管和人类的毛细血管类似。毛细管测试是基于该现象的，并用于评价潜在的脉管系统靶向剂。

HUVEC培养物在5％CO₂、37℃下在培养箱中生长。用于HUVEC的完整培养基为内皮管细胞基础培养基(EBM)，其补充有2％的牛胎儿血清(FBS)、12μg/ml的牛脑提取液、1μg/ml氢化可的松、和1μg/ml的GA-1000(庆大霉素-两性霉素B)。可将第3代和第8代之间的HUVEC培养物用于所有的分析试验。

使用荧光试剂Calcein AM预标记HUVEC，并将其接种于使用其完整的生长培养基涂覆的96孔培养板的细胞外基质中。在形态发生过程之后约4小时，应形成内皮毛细管。然后，作为处理条件，对形成的毛细管培养物应用50μl体积的设定剂量的测试剂。可向无处理对照组加入测试剂的载剂。索坦(Sutent)，一种FDA认证的抗血管生成药物，可被包含作为分析性能控制。在处理之后的约6小时，通过显微镜成像来检测每个孔中的内皮细胞管形态发生，并可定量分析在测试条件下的毛细管破坏活性。每个测试条件可在重复的孔中实施，包括对照组。

**************

根据本公开，本文所公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以不需要不合适的实验即制成和实现。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选的实施方案进行了描述，但是对于本领域技术人员明显的是，可以对所述组合物和/或方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化，而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地，明显地，化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。

Claims (20)

1.一种处理皮肤以减少红斑、降低皮肤温度、和/或减少炎症的方法，所述方法包括向皮肤局部施用有效量的局部用组合物，所述局部用组合物包含糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚，其中所述组合物减少红斑、降低皮肤温度、和/或减少炎症。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述局部用组合物在皮肤中抑制一氧化碳合酶、降低TNF-α产生、和/或增加闭合蛋白-1的产生。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述局部用组合物还包含水。

4.根据权利要求1所述的方法，其中糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、和/或北艾提取物是水提取物。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述水提取物是液体形式的和/或粉末形式的。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖类同分异构体提取物包含溶藻弧菌的胞外多糖，所述密罗木提取物是密罗木的叶和茎的提取物，所述藻提取物是掌状海带的提取物、和/或所述北艾提取物是北艾整株植物的提取物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述局部用组合物为乳液、精华、凝胶、凝胶乳液、或凝胶精华。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述局部用组合物为水包油乳液或油包水乳液。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物施用于面部皮肤。

10.一种局部皮肤用组合物，其包含糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚。

11.根据权利要求10所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物包含有效量的糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚以减少红斑和/或炎症。

12.根据权利要求10所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物包含有效量的糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚以使皮肤清凉。

13.根据权利要求10所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物包含有效量的糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、北艾提取物和姜酮酚以抑制一氧化碳合酶、减少TNF-α产生、和/或增加闭合蛋白-1的产生。

14.根据权利要求10所述的局部用组合物，其中糖类同分异构体提取物、密罗木提取物、藻提取物、和/或北艾提取物是水提取物。

15.根据权利要求14所述的局部用组合物，其中所述水提取物是液体形式的和/或粉末形式的。

16.根据权利要求10所述的局部用组合物，其中所述糖类同分异构体提取物包含溶藻弧菌的胞外多糖，所述密罗木提取物是密罗木的叶和茎的提取物，所述藻提取物是掌状海带的提取物、和/或所述北艾提取物是北艾整株植物的提取物。

17.根据权利要求10所述的局部用组合物，其还包含水。

18.根据权利要求10所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物为乳液、精华、凝胶、凝胶乳液、或凝胶精华。

19.根据权利要求18所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物为水包油乳液或油包水乳液。

20.根据权利要求10所述的局部用组合物，其中所述糖类同分异构体提取物包含溶藻弧菌的胞外多糖，所述密罗木提取物是密罗木的叶和茎的提取物，所述藻提取物是掌状海带的提取物，并且所述北艾提取物是北艾整株植物的提取物。

Images