CN110996960A

CN110996960A - 第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂和raf抑制剂的治疗组合

Info

Publication number: CN110996960A
Application number: CN201880050143.XA
Authority: CN
Inventors: S·穆迪; L·佩特鲁泽利; J·恩格尔曼
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2017-08-03
Filing date: 2018-08-01
Publication date: 2020-04-10
Also published as: US20200237773A1; AU2018311523A1; PH12020500096A1; CL2020000270A1; CA3069564A1; JOP20200014A1; KR20200036880A; EP3661516A1; WO2019026007A1; BR112020001916A2; JP2020529411A; TW201909920A; ZA201908392B; IL272350A; RU2020108192A; MX2020001254A; SG11201913249SA

Abstract

本发明涉及药物组合，所述药物组合包含(a)第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂以及(b)Raf抑制剂，具体地用于治疗癌症、具体地肺癌。本发明也涉及此类组合用于在制备用于治疗癌症的药物中的用途；用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用联合治疗有效量的所述组合；包含此类组合和所述组合的商业包装的药物组合物。

Description

第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂和RAF抑制剂的治疗组合

技术领域

本发明涉及治疗人类受试者的癌症(例如肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC))的方法，并且涉及在此类治疗中有用的药物组合。特别地，本发明提供了药物组合，所述药物组合包含(a)第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，具体地(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰)氮杂环庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基异烟酰胺、或其药学上可接受的盐，以及(b)Raf抑制剂，具体地N-(3-(2-(2-羟基乙氧基)-6-吗啉代吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺、或其药学上可接受的盐。还提供了用于在癌症(具体地肺癌(例如NSCLC))的治疗中使用的此类组合；此类组合用于制备用于治疗癌症(具体地肺癌(例如NSCLC))的药物的用途；用于治疗有需要的人类受试者的癌症(具体地肺癌(例如NSCLC))的方法，所述方法包括向所述受试者施用联合治疗有效量的所述组合；涉及包含此类组合和其商业包装的药物组合物。

背景技术

肺癌是全世界最常见的且致命的癌症，其中非小细胞肺癌(NSCLC)大约占肺癌病例的85％。在西方国家，10％-15％的非小细胞肺癌(NSCLC)患者在他们的肿瘤中表达表皮生长因子受体(EGFR)突变，而亚洲国家已报告的比率高达30％-40％。主要致癌EGFR突变(L858R以及ex19del)大约占EGFR NSCLC的85％。

向EGFR突变型患者给予EFGR抑制剂作为一线疗法。然而，大多数患者通常在10至14月内产生获得性抗性。多达50％的带有原发性EGFR突变的NSCLC患者用第一代可逆EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)来治疗，第一代可逆EGFR酪氨酸激酶抑制剂也称为第一代TKI，例如埃罗替尼、吉非替尼以及埃克替尼，开发次要的“看门人(gatekeeper)”T790M突变。

已经开发出第二代EGFR TKI(例如阿法替尼以及达克替尼)来试图克服这种抗性的机制。这些是不可逆药剂，其在EGFR ATP位点与半胱氨酸797共价结合。第二代EGFR TKI在临床前模型中对激活[L858R、ex19del]以及获得性T790M突变均有效。然而，它们的临床疗效已被证明是有限的，这可能是由于伴随的野生型(WT)EGFR抑制所引起的严重不良反应。对第二代抑制剂的抗性也很快发展，几乎所有接受第一代和第二代TKI的患者在大约9至13个月后都变得具有抗性。

这导致了第三代EGFR TKI的发展，例如纳扎替尼(nazartinib，EGF816)、诺司替尼(rociletinib)、ASP8273以及奥希替尼

第三代EGFR TKI是使WT EGFR不受破坏的，并且在激活EGFR突变(例如L858R和ex19del)以及获得性T790M方面也具有相对相等的效力。最近在美国批准奥希替尼用于治疗在EGFR TKI疗法中或所述疗法后仍有进展的晚期EGFR T790M+NSCLC患者。

然而，对这些第三代药剂的抗性也很快发展。人们认为有多种机制可引起针对第三代EGFR TKI的获得性抗性；这些机制也没有良好表征。在某些情况下，已发现抗性与MET或FGFR1的扩增、或BRAF的突变(Ho等人,Journal of Thoracic Oncology[胸肺肿瘤期刊],2016)、或三级EGFR C797S突变(在接受奥希替尼治疗的患者的血浆样本中被发现)(Thress等人Nature Medicine[自然医学],21(6),2015,第560-562页)有关。

因此，在用EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)(具体地第三代EGFR TKI)的疗程中仍然需要用于预防或延迟抗性的出现(例如，通过诱导更持久的缓解)的治疗选择；和/或克服或逆转在用EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)(具体地第三代EGFR TKI)的疗程中获得的抗性。尽管EGFR TKI有疗效，但由于NSCLC(具体地EGFR突变型NSCLC)仍然无法治愈，因此仍然需要继续开发所述疾病的新的治疗选择。

发明内容

本发明人发现，化合物B(以下具有式(II)的化合物)与第三代EGFR TKI(例如纳扎替尼)的组合延长并加深了对作为单一药剂的第三代EGFR TKI的应答。这为目前尚不存在有效疗法的这种临床环境开辟了有效治疗选择的可能性。

因此，本发明的目标是提供改善癌症(具体地非小细胞肺癌，更具体地EGFR-突变型NSCLC)的治疗的疗法。特别地，本发明的目的是提供安全且可耐受的治疗，所述安全且可耐受的治疗加深了始初应答、和/或预防了或延迟了药物抗性(特别地对EGFR TKI疗法的抗性)的出现。本文所描述的药物组合预期是安全且可耐受的，并且在未进行治疗和/或未进行第三代EGFR-TKI的T790M+EGFR突变型NSCLC(包括T790M+EGFR-突变型晚期NSCLC)中也改善了对EGF816应答的深度和/或反应期。

本发明提供了药物组合作为本发明的一方面，所述药物组合包含(a)第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂以及(b)Raf抑制剂。

本发明还提供了药物组合，所述药物组合包含(a)具有式I的化合物

(也被称为(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰)氮杂环庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基异烟酰胺(本文也称为“化合物A”))、或其药学上可接受的盐，以及(b)Raf抑制剂。

在优选方面，本发明还涉及药物组合，称为本发明的组合，所述本发明的组合包含(a)作为具有下式I的化合物的化合物

(也被称为(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰)氮杂环庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基异烟酰胺(本文也称为“化合物A”))、或其药学上可接受的盐，以及(b)具有式(II)的化合物、

或其药学上可接受的盐。

在另一方面，本发明涉及适合于将第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂与Raf抑制剂组合施用的剂量方案。本发明提供了治疗方案，当肿瘤处于最小残留疾病状态时，所述治疗方案最大化了第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)在EGFR TKI癌症疗法的早期阶段、接着在随后的相对稳定的疾病控制期间施用第三代EGFR TKI与Raf抑制剂的药物组合的治疗效果。

设想可根据涉及第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂的施用的剂量方案，将本发明的治疗药剂作为单一药剂持续并以达到相对稳定的疾病控制(即，最小残留疾病的状态)的一段治疗时间来进行有效施用，随后施用化合物A、或其药学上可接受的盐，与Raf抑制剂(具体地化合物B或其药学上可接受的盐)的组合。

因此，本发明提供了用于治疗有需要的人类的EGFR突变型肺癌(具体地EGFR突变型NSCLC)的方法，所述方法包括：

(a)将治疗有效量的第三代EFGR酪氨酸激酶抑制剂(例如化合物A、或其药学上可接受的盐)作为单一疗法施用直到达到最小残留疾病(即，至少间隔一个月进行的两次评估之间的肿瘤负荷降低小于5％)；随后

(b)施用治疗有效量的所述第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(例如化合物A、或其药学上可接受的盐)以及Raf抑制剂(具体地化合物B或其药学上可接受的盐)的药物组合。

本发明提供了第三代EFGR酪氨酸激酶抑制剂(例如化合物A、或其药学上可接受的盐)，用于在治疗有需要的人类的EGFR突变型肺癌(具体地EGFR突变型NSCLC)中使用，其中

(a)将所述第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(例如化合物A、或其药学上可接受的盐)作为单一疗法施用直到达到最小残留疾病(即，至少间隔一个月进行的两次评估之间的肿瘤负荷降低小于5％)；并且

(b)随后施用所述第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(例如化合物A、或其药学上可接受的盐)以及Raf抑制剂(具体地化合物B或其药学上可接受的盐)的药物组合。

在另一方面，本发明涉及本发明的组合，用于同时、分开或顺序使用。

在另一方面，本发明涉及本发明的组合，用于在癌症(具体地非小细胞肺癌，更具体地EGFR突变型NSCLC)的治疗中使用。

在另一方面，本发明涉及治疗癌症(具体地非小细胞肺癌，更具体地EGFR突变型NSCLC)的方法，所述方法包括向有需要的受试者以联合治疗有效对抗所述癌症的量同时、分开或顺序施用本发明的组合。

在另一方面，本发明涉及本发明的组合在用于制备用于治疗癌症(具体地非小细胞肺癌，更具体地EGFR突变型NSCLC)的药物中的用途。

本发明还提供了第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(具体地(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰)氮杂环庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基异烟酰胺、或其药学上可接受的盐)用于与Raf抑制剂(具体地N-(3-(2-(2-羟基乙氧基)-6-吗啉代吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺、或其药学上可接受的盐)一起在组合疗法中使用，用于治疗癌症(具体地肺癌(例如NSCLC))。

还提供了Raf抑制剂(具体地N-(3-(2-(2-羟基乙氧基)-6-吗啉代吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺、或其药学上可接受的盐)用于与第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(具体地(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰)氮杂环庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基异烟酰胺、或其药学上可接受的盐)一起在组合疗法中使用，用于治疗癌症(具体地肺癌(例如NSCLC))。

附图说明

图1A和图1B：在DMSO(图顶部的曲线)或300nM EGF816(图底部的“Cmpd A”曲线)存在的情况下，在EGFR突变型NSCLC细胞系(图1A：HCC4006和HCC827细胞系；图1B：PC9和MGH707细胞系)中针对化合物B的剂量应答曲线。％活性是通过细胞滴度glo读取的细胞数目的量度。0表示第0天的CTG值，且100表示第5天未经处理的生长值。

图2A和图2B：在EGFR突变型NSCLC细胞系中，化合物B(“Cmpd B”)与化合物A(EGF816)(“Cmpd A”)(300nM)(图2A：HCC4006以及HCC827细胞系；图2B：PC9以及MGH707细胞系)组合的剂量应答。将细胞用新鲜药物处理，并每周两次成像以进行汇合测量持续两周。将细胞汇合用作细胞数量的替代指标。结果表明，Raf抑制剂与EGF816组合可减缓药物耐受细胞的生长。

具体实施方式

在一方面，本发明涉及药物组合，所述药物组合包含第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂和Raf抑制剂。这种药物组合在本文中称为“本发明的组合”。

本发明还涉及药物组合，所述药物组合包含(a)具有式(I)的化合物

(也称为(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰)氮杂环庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基异烟酰胺(本文也称为“化合物A”))、或其药学上可接受的盐，以及(b)Raf抑制剂。

在优选方面，本发明还涉及药物组合，所述药物组合还称为本发明的组合，所述本发明的组合包含(a)作为具有下式I的化合物的化合物

或其药学上可接受的盐。

第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂

第三代EGFR TKI是使野生型(WT)EGFR不受破坏的，并且在激活EGFR突变(例如L858R和ex19del)和获得性T790M方面也具有相对相等的效力。

用于本组合的优选的第三代EGFR抑制剂以及本文所描述的优选的剂量是化合物A，所述化合物A也被称为纳扎替尼和“EGF816”。化合物A是表皮生长因子受体(EGFR)的靶向共价不可逆抑制剂，其可选择性抑制激活的和获得性抗性突变型(L858R、ex19del和T790M)，同时使野生型(WT)EGFR不受破坏的(参见Jia等人，Cancer Res[癌症研究]2014年10月1日,74；1734)。化合物A在EGFR突变型(L858R、ex19del和T790M)癌症模型(体外和体内)中已显示出显著疗效，在临床相关有效浓度下未显示出WT EGFR抑制的迹象。在几种异种移植模型中观察到剂量依赖性抗肿瘤疗效，且在有效剂量下，化合物A良好耐受且未观察到体重减轻。

在患有带有T790M的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床研究中发现化合物A显示出持久的抗肿瘤活性(参见Tan等人，Journal of Clinical Oncology[临床肿瘤学期刊]34，第15期增刊(2016年5月))。

包含化合物A或其药学上可接受的盐的药物组合描述于WO2013/184757中，所述专利通过引用以其整体结合在此。化合物A及其制备以及含有化合物A的合适的药物配制品披露于WO 2013/184757中，例如，在实例5中。化合物A或其药学上可接受的盐能以胶囊制剂或片剂的形式作为口服药物组合施用。化合物A的药学上可接受的盐包括其甲磺酸盐和盐酸盐。优选地，药学上可接受的盐是甲磺酸盐。

在本文所描述的组合以及本文所描述的剂量方案中有用的其他第三代TKI包括奥希替尼(AZD9291)、奥莫替尼(BI 1482694/HM61713)、ASP8273、PF-06747775以及艾维替尼(avitinib)。

Raf抑制剂

用于本发明的药物组合的优选的Raf抑制剂是化合物B、或其药学上可接受的盐。化合物B是具有以下结构的化合物：

化合物B是具有式(II)的化合物，也称为N-(3-(2-(2-羟基乙氧基)-6-吗啉代吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺。化合物B是公开的PCT申请WO 2014/151616中的实例1156，所述申请通过引用以其整体结合在此。所述化合物B、化合物B的药学上可接受的盐以及包含化合物B的药物组合物的制备也披露于所述PCT申请WO 2014/151616中，例如参见第739-741页。

化合物B是v-raf鼠肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)和v-raf-1鼠白血病病毒癌基因同源物1(CRAF)蛋白激酶的三磷酸腺苷(ATP)竞争性抑制剂。化合物B是有效的且选择性的Raf抑制剂。它可以类似的亚纳摩尔效能抑制BRAF和CRAF激酶两者，并抑制仅2种其他激酶对所测试的456种激酶(BRAF激酶IC₅₀＝0.00073μM和CRAF激酶IC₅₀＝0.00020μM)中具有相似程度的激酶的结合。

已证明化合物B在多种MAPK途径驱动的人癌细胞系和体内肿瘤异种移植物中有功效，所述体内肿瘤异种移植物包括在KRAS、NRAS和BRAF癌基因中具有活化损伤的模型。

在基于细胞的测定中，化合物B在如下人类癌症细胞系中证明了抗增殖活性，所述细胞系含有激活MAPK信号传导的多种突变。例如，化合物B抑制黑素瘤模型的增殖，包括对这些模型进行A-375(BRAF V600E)和A-375工程化以表达BRAFi/MEKi抗性等位基因、MEL-JUSO(NRAS Q61L)、和IPC-298(NRAS Q61L)、以及非小细胞肺癌细胞系Calu-6(KRAS Q61K)(其IC₅₀值范围为0.2-1.2μM)。相反，具有野生型BRAF和RAS的细胞系对化合物B显示很小的应答(IC₅₀大于20μM)，这表明化合物B在具有MAPK激活的肿瘤细胞中具有选择性活性。

在若干KRAS突变型模型(包括NSCLC衍生的Calu-6(KRAS Q61K)和NCI-H358(KRASG12C)以及卵巢Hey-A8(KRAS G12D、BRAF G464E)异种移植物)和NRAS突变型模型(包括SK-MEL-30黑素瘤模型)中用化合物B体内治疗产生肿瘤消退。在所有情况下，抗肿瘤作用是剂量依赖性的并且耐受性良好(体重减轻最小)。

如本文所示，临床前数据还证明，在一组EGFR突变型NSCLC细胞系中，与单一化合物A相比，向化合物A中添加化合物B导致增加的细胞生长抑制。

总之，观察到化合物B(作为单一药剂以及在本发明的组合中)的体外和体内MAPK通路抑制和抗增殖活性，这表明Raf抑制剂(例如化合物B)在本文所描述的药物组合和剂量方案中是有效的。

除非另有说明，或文中明确指出，或不适用，否则引用本发明的组合中有用的治疗药剂包含所述化合物的游离碱、以及所述化合物的所有药学上可接受的盐两者。

在一方面，本发明涉及本发明的组合，用于同时、分开或顺序使用。

在一方面，本发明涉及本发明的组合，用于在癌症(具体地非小细胞肺癌，更具体地EGFR突变型NSCLC)的治疗中使用。

如本文所定义，“术语组合”或“药物组合”是指呈一个剂量单位形式的任一固定组合、用于组合施用的非固定组合或成套药盒，其中治疗剂，例如式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及Raf抑制剂，可在同一时间同时施用或在时间间隔内独立地施用，这优选地允许组合配偶体显示出合协作，例如协同作用。

术语“固定组合”意指以单一实体或剂型的治疗剂，例如具有式I的化合物或其药学上可接受的盐、以及Raf抑制剂。

术语“非固定组合”意指所述治疗药剂(例如，所述具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以及所述Raf抑制剂)在没有特定时间限制的情况下，作为分开的实体或剂型向患者同时、并存或者顺序施用，其中优选地，此类施用在有需要的人体内提供治疗有效水平的两种治疗药剂。

如本文所用，术语“协同作用”是指两种治疗药剂的作用，例如，(a)具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及(b)Raf抑制剂产生的作用，例如，延缓癌症其症状的症状进展、或克服抗性的产生或逆转由于预处理而获得的抗性，这大于自身施用每种治疗药剂的简单相加的效应。例如，可使用合适的方法计算协同作用，如Sigmoid-Emax方程式(Holford,N.H.G.and Scheiner,L.B.,Clin.Pharmacokinet.[临床药物动力学]6:429-453(1981))、Loewe加和性方程式(Loewe,S.和Muischnek,H.,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.[实验病理学以及药理学档案]114：313-326(1926))以及中值效应方程(Chou,T.C.和Talalay,P.,Adv.Enzyme Regul.[酶调节进展]22:27-55(1984))。上面所指的每个方程式都可以应用于实验数据以生成相应的图以帮助评估药物组合的效果。与上述方程式相关的相应的图分别是浓度-效果曲线、等效线图曲线和组合指数曲线。通过根据本领域技术人员已知的方法计算组合的协同作用得分可以进一步显示协同作用。

术语“药学上可接受的盐”是指保留化合物的生物有效性和特性的盐，并且所述盐通常不是生物学上或其他方面不期望的盐。由于氨基基团的存在，所述化合物可能能够形成酸加成盐。

除非本文另外指明或明显与上下文矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其是在以下权利要求的上下文中)，术语“一个”、“一种”和“所述”以及类似的指示词应当被解释为涵盖单数和复数这两者。当复数形式用于化合物、盐等时，这也意指单数的化合物、盐等。

如本文所定义，术语“治疗(treating或treatment)”是指减轻、降低或缓解受试者的至少一种症状或影响疾病进展延迟的治疗。例如，治疗可以是疾病的一种或几种症状的减弱或疾病(例如癌症)的完全根除。在本发明的含义内，术语“治疗(treat)”还表示阻止、延迟所述进展和/或降低对EGFR抑制剂治疗产生抗性或除此以外使疾病恶化的风险。

如本文所用，术语“受试者”或“患者”是指患有癌症，优选肺癌(例如NSCLC，具体地EGFR突变型NSCLC)的人类。

术语“施用”还旨在包括其中不一定通过相同的施用途径或在同一时间施用治疗药剂的治疗方案。

如本文所用，术语“联合治疗活性”或“联合治疗作用”意指向待治疗的人类受试者以他们喜欢的时间间隔分开地(以时间错开的方式，特别是特定顺序的方式)给予治疗药剂仍然显示出有益的(优选地协同的)相互作用(联合治疗作用)。尤其可以通过跟踪血液水平来确定情况是否如此，这表明至少在一定时间间隔内两种治疗药剂均存在于待治疗的人类的血液中。

如本文所定义，术语“有效量”或“治疗有效量”的治疗药剂的组合是指足以对用所述组合治疗的癌症的临床可观察体征和症状提供超越基线的可观察到的改善的量。

术语“约”是指给定值的统计上可接受的变化，且通常为+/-5％或10％，另一方面，当引用数值时不带术语“约”时，应当理解这个数值将包括所述数值的变化，这是本领域统计上可接受的。

如本文所用，表述“直到达到最小残留疾病”意指直到两次至少间隔一个月进行的评估之间的肿瘤负荷降低小于5％。设想如本文所提供的药物组合以及治疗方案对未进行TKI治疗的患者(即先前没有接受任何针对NSCLC(例如晚期NSCLC)治疗的患者)是有用的。也设想这些患者包括未接受第三代EGFR TKI的患者。

因此，本发明提供了如本文所描述的组合的非小细胞肺癌(包括EGFR突变型NSCLC)的一线疗法中使用。

可能从本文提供的药物组合和治疗方案中受益的患者还包括预先治疗的患者，例如先前已经接受用第一代EGFR TKI和/或第二代EGFR TKI治疗的患者。

可以基于RECIST标准(Therasse等人2000年)，New Guidelines to Evaluate theResponse to Treatment in Solid Tumors[评估实体瘤对治疗应答的新指南],Journalof National Cancer Institute[国家癌症研究所杂志],第92卷；205-16，以及修订的RECIST指南(版本1.1)(Eisenhauer等人2009)European Journal of Cancer[欧洲癌症杂志]；45:228-247，进行肿瘤评价和肿瘤负荷评估。

许多应答标准，例如在下表中描述的那些应答标准，可以用于评估肿瘤对治疗的应答。

靶病灶的应答标准

肿瘤负荷(也称为“肿瘤负担”)是指体内癌细胞的数量、肿瘤的大小或癌症的数量。患有癌症的受试者被定义为包括在使用一种或多种药剂的疗法中仍有进展、或者对使用一种或多种药剂的疗法不再产生应答，或者当他或她所患的癌症有进展(即肿瘤负荷增加)时对使用一种或多种药剂的疗法不耐受。癌症(例如NSCLC或肿瘤)的进展可以通过检测新肿瘤或检测转移或肿瘤缩小的停止来指示。可以通过本领域技术人员熟知的方法来监测癌症的进展以及对肿瘤负荷增加或减少的评估。例如，可以通过目视检查来监测所述癌症的进展，例如借助于X射线、CT扫描或MRI或通过肿瘤生物标志物检测。癌症的增长的生长可表明癌症的进展。肿瘤负荷评估的评估可通过靶病灶直径的总和相对于基线的变化百分比来确定。肿瘤负荷评估，从而确定肿瘤负荷的减少或增加，通常将在各种间隔下进行，例如进行至少1、2、3个月(最好相隔一个月)的连续评估。

所述本发明的组合对于治疗肺癌特别地有用。可以通过本发明的组合治疗的肺癌可为非小细胞肺癌(NSCLC)。NSCLC最常见的类型是鳞状细胞癌、大细胞癌和肺腺癌。NSCLC较不常见的类型包括多形性、类癌肿瘤、唾液腺肉瘤和未分类的肉瘤。NSCLC、以及具体地肺腺癌的特征在于EGFR的异常激活，特别地EGFR的扩增或EGFR的体细胞突变。

因此，待治疗的肺癌包括EGFR突变型NSCLC。设想本发明的组合在治疗晚期EGFR突变型NSCLC中将是有用的。晚期NSCLC是指患有或者局部晚期或者转移性NSCLC的患者。局部晚期NSCLC被定义为IIIB期NSCLC，其不适用于包括手术的明确的多模式疗法。转移性NSCLC是指IV期NSCLC。

为了鉴定可以根据本文描述的方法治疗的EGFR突变型癌症，可以通过本领域中可用的测试(例如QIAGEN

EGFR测试或其他FDA批准的测试)来确定EGFR突变状态。therascreen EGFR RGQ PCR试剂盒是FDA批准的、用于EGFR癌基因中特定突变的定性实时PCR检测。可以从现有的本地数据和肿瘤样品的测定中获得EGFR突变的证据。可从任何可用的肿瘤组织中确定EGFR突变状态。

本发明涉及本发明的组合用于在癌症(具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)(例如EGFR突变型NSCLC))的治疗中使用。

待治疗的所述癌症，具体地肺癌，更具体地EGFR突变型非小细胞肺癌(NSCLC)可以带有EGFR C797的突变，所述EGFR C797是EGF816和其他第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂的结合位点。

在临床上已经观察到EGFR中的C797S突变(即，导致797位半胱氨酸变为丝氨酸的单点突变)作为到目前为止用奥希替尼治疗的患者和用EGF816治疗的至少一位患者的耐药机制。假设EGFR C797S突变可破坏第三代EGFR TKI与EGFR的结合，所述C797S突变可以发生在与T790M突变不同的EGFR等位基因上，即所述EGFR突变型NSCLC可以带有反式C797m/T790M。如果C797S突变与T790M突变发生在EGFR的同一等位基因上，则所述突变被称为顺式(顺式C797m/T790M)。

癌症，具体地肺癌，更具体地非小细胞肺癌(NSCLC)也可带有EGFR G719S突变、EGFR G719C突变、EGFR G719A突变、EGFR L858R突变、EGFR L861Q突变、EGFR外显子19缺失、EGFR外显子20插入、EGFR T790M突变、EGFR T854A突变、EGFR D761Y突变、EGFR C797S突变、或其任何组合。

本发明的药物组合特别地在用于治疗带有EGFR L858R突变、EGFR外显子19缺失或两者皆有的NSCLC有效。待治疗的NSCLC也可进一步带有EGFR T790M突变，所述EGFR T790M突变可以是新生突变或获得性突变。在用第一代EGFR TKI(例如厄洛尼替尼、吉非替尼、埃克替尼、或其任何组合)治疗和/或用第二代TKI(例如阿法替尼、达克替尼或两者)治疗后可以产生获得性突变。

本发明的本发明药物组合物相对于未进行第三代TKI(例如奥希替尼)治疗的患者也是有用的。可从组合疗法中受益的患者包括那些患有癌症(例如也带有顺式EGFR C797m/T790M(即顺式C797突变以及T790M)的NSCLC)的患者。C797m是在EGFR C797上的突变且对EGF816以及其他第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂赋予抗性。另外，这些患者还可存在具有选自以下的另外的突变的肿瘤：MET扩增、外显子14跨越突变、BRAF融合或突变、及其任何组合。

在优选的实施例中，待治疗的NSCLC携带EGFR突变，所述EGFR突变选自EGFR外显子19缺失、EGFR T790M突变、或EGFR外显子19缺失和EGFR T790M两者；或选自EGFR L858R突变、或EGFR L858R以及EGFR T790M两者。

在另一实施例中，本发明提供了本发明的组合，用于癌症，具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC(特征在于带有EGFR C797S突变)。

在一个实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症的治疗中使用，具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC(特征在于带有EGFR T790M突变)。

在一个实施例中，EGFR T790M突变是新生突变。如本文所定义，术语“新生突变”是指在用EGFR抑制剂进行任何治疗开始之前在人类中能检测到的或已检测到的基因中的改变。新生突变是通常由于遗传材料复制错误或细胞分裂错误而发生的突变，例如，新生突变可能是由于以下突变而引起：其中一个亲本的生殖细胞(卵子或精子)发生突变、或受精卵本身发生突变或来自体细胞中发生的突变。

“新生”T790M定义为先前未接受任何已知抑制EGFR治疗的NSCLC患者中存在EGFRT790M突变。

在另一实施例中，EGFR T790M突变是获得性突变，例如，在癌症治疗之前不是可检测到的或无法检测到但在癌症治疗(特别地用一种或多种EGFR抑制剂(例如吉非替尼、埃罗替尼或阿法替尼)的治疗)过程中变得可检测到的或检测到的突变。

在一个实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症的治疗中使用，具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC(特征在于带有与选自由以下组成的列表中的任何其他突变组合的EGFR T790M突变：EGFR C797S突变、EGFR G719S突变、EGFRG719C突变、EGFR G719A突变、EGFR L858R突变、EGFR L861Q突变、EGFR外显子19缺失、以及EGFR外显子20插入)。

在一个实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症的治疗中使用，具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC(特征在于带有与选自由以下组成的列表中的任何其他突变组合的EGFR T790M突变：EGFR C797S突变、EGFR G719S突变、EGFRG719C突变、EGFR G719A突变、EGFR L858R突变、EGFR L861Q突变、EGFR外显子19缺失、以及EGFR外显子20插入，其中EGFR T790M突变是新生突变)。

在另一实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症的治疗中使用，具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC(特征在于带有与选自由以下组成的列表中的任何其他突变组合的EGFR T790M突变：EGFR C797S突变、EGFR G719S突变、EGFRG719C突变、EGFR G719A突变、EGFR L858R突变、EGFR L861Q突变、EGFR外显子19缺失、以及EGFR外显子20插入，其中EGFR T790M突变是获得性突变)。

在一个实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症的治疗中使用，具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC(特征在于带有选自由以下组成的组的EGFR突变：C797S、G719S、G719C、G719A、L858R、L861Q、外显子19缺失突变、以及外显子20插入突变)。在优选的实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症的治疗中使用，所述癌症特征在于至少带有一种以下突变：EGFR L858R以及EGFR外显子19缺失。

在一个实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症的治疗中使用，具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如，EGFR突变型NSCLC(特征在于带有选自由以下组成的组的EGFR突变：C797S、G719S、G719C、G719A、L858R、L861Q、外显子19缺失突变、以及外显子20插入突变，并且进一步特征在于带有选自由以下组成的组的至少一种另外的EGFR突变：T790M、T854A以及D761Y突变)。

在优选的实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症的治疗中使用，具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC(特征在于带有EGFR L858R突变或EGFR外显子19缺失，并且进一步带有EGFR T790M突变)。

在一个实施例中，本发明涉及本发明的组合用于在癌症(具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC)的治疗中使用，其中所述癌症对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗具有抗性、或对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗产生抗性、或处于对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗产生抗性的很高的风险中。EGFR酪氨酸激酶抑制剂包括埃罗替尼、吉非替尼、阿法替尼以及奥希替尼。

在另一实施例中，本发明涉及发明的组合用于在癌症(具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC)的治疗中使用，其中所述癌症对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗具有抗性、或对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗产生抗性、或处于对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗产生抗性的很高的风险中，其中所述EGFR酪氨酸激酶抑制剂选自由以下组成的组：埃罗替尼、吉非替尼以及阿法替尼。

本发明的组合也适合于预后不良的患者的治疗，具体地此类预后不良患者患有癌症(具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC)，所述患者对采用EGFR抑制剂治疗变得具有抗性，例如最初对用EGFR抑制剂治疗产生应答然后复发的此类患者的癌症。在另一个实例中，所述患者尚未接受采用Raf抑制剂的治疗。所述癌症在先前用一种或多种EGFR抑制剂治疗期间可能已获得抗性。例如，EGFR靶向疗法可以包含用以下进行治疗：吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、XL-647、HKI-272(诺拉替尼)、BIBW2992(阿法替尼)、EKB-569(培利替尼)、AV-412、卡纽替尼、PF00299804、BMS 690514、HM781-36b、WZ4002、AP-26113、西妥昔单抗、帕尼单抗、马妥珠单抗、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、本发明的化合物A或其药学上可接受的盐。特别地，EGFR靶向疗法可包括用吉非替尼、埃罗替尼、以及阿法替尼治疗。所述获得性抗性机制包括但不限于，在EGFR基因本身中产生第二个突变，例如T790M、EGFR扩增；和/或FGFR失调、FGFR突变、FGFR配体突变、FGFR扩增、MET扩增或FGFR配体扩增。在一个实施例中，所述获得性抗性的特征在于在EGFR中存在T790M突变。

本发明的组合也适合于治疗患有癌症(具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC)的患者，其中所述癌症对采用EGFR抑制剂作为唯一治疗药剂的治疗产生抗性。所述EGFR抑制剂可是第一代抑制剂(例如埃罗替尼、吉非替尼以及埃克替尼)、第二代抑制剂(例如阿法替尼以及达克替尼)或第三代抑制剂(例如奥希替尼或纳扎替尼)。

本发明的组合也适合于治疗患有癌症(具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC)的患者，其中所述癌症处于对用EGFR抑制剂作为唯一治疗剂的治疗产生抗性的很高的风险中。由于几乎所有带有EGFR突变的癌症患者(具体地NSCLC患者)，对用例如吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼或奥希替尼等EGFR酪氨酸激酶抑制剂的治疗随时间都会产生抗性，所述患者的癌症总是处于对用EGFR抑制剂作为唯一治疗剂的治疗产生抗性的很高的风险中。因此，带有EGFR C797S、EGFR G719S突变、EGFR G719C突变、EGFRG719A突变、EGFR L858R突变、EGFR L861Q突变、EGFR外显子19缺失、EGFR外显子20插入、EGFR T790M突变、EGFR T854A突变或EGFR D761Y突变、或其任何组合的癌症处于会对用EGFR抑制剂作为唯一治疗剂的治疗产生抗性的很高的风险中。

本文提供的组合物以及治疗方案可适合于以下患者：

-具有EGFR敏感突变(例如L858R和/或ex19del)的局部晚期或转移性NSCLC的未进行治疗的患者；

-在先前用第一代EGFR TKI或第二代EGFR TKI治疗后发展为带有EGFR敏感突变和获得性T790M突变(例如L858R和/或ex19del、T790M+)的局部晚期或转移性NSCLC的患者：这些患者包括未接受任何靶向EGFR T790M突变(即第三代EGFR TKI)的药剂的患者。

-具有EGFR敏感突变和“新生”T790M突变的局部晚期或转移性NSCLC的患者(即，先前未用任何已知可抑制EGFR的药剂(包括EGFR TKI)进行治疗)：这些患者包括先前未接受任何第三代EGFR TKI的患者。

因此，本发明包括用于治疗患有癌症(尤其地肺癌(例如NSCLC))的患者的方法，所述方法包括向先前已确定患有癌症(尤其地患有带有本文所描述的一种或多种突变的肺癌(例如NSCLC))的患者选择性地施用治疗有效量的纳扎替尼或其药学上可接受的盐、和/或治疗有效量的本发明的组合。

本发明还涉及治疗患有癌症(特别是肺癌(例如NSCLC))的患者的方法，所述方法包括：

(a)确定或已经确定患者患有带如本文所描述的有一种或多种突变的癌症；并且

(b)向所述患者施用治疗有效量的纳扎替尼或其药学上可接受的盐、和/或治疗有效量的本发明的组合。

本发明还涉及治疗患有癌症(尤其是肺癌(例如NSCLC))的患者的方法，所述方法包括基于先前已确定具有本文所描述的一种或多种突变的患者选择进行治疗的患者、以及向所述患者施用治疗有效量的纳扎替尼或其药学上可接受的盐、和/或治疗有效量的本发明的组合。

本文中的表述“如本文所描述的一个或多个突变”中包括EGFR C797S突变、EGFRG719S突变、EGFR G719C突变、EGFR G719A突变、EGFR L858R突变、EGFR L861Q突变、EGFR外显子19缺失、EGFR外显子20插入、EGFR T790M突变、EGFR T854A突变或EGFR D761Y突变、或其任何组合。

在另一方面，本发明涉及包含所述本发明的组合的药物组合以及至少一种药学上可接受的载体。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括公认的对患者安全的(GRAS)溶剂、分散介质、涂层、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗细菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、缓冲剂(例如马来酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、碳酸氢钠、磷酸钠等)等及其组合，这对于本领域技术人员来说是已知的(参见，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明顿氏药物科学])。除非任何常规载体与化合物A或化合物B不相容，否则考虑其在药物组合或药物中的用途。

在另一方面，本发明涉及化合物A或其药学上可接受的盐在用于制备与Raf抑制剂组合使用的用于治疗肺癌的药物中的用途。在另一方面，本发明涉及Raf抑制剂用于在制备与化合物A或其药学上可接受的盐组合使用的用于治疗肺癌(具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，更具体地EGFR突变型NSCLC)的药物中的用途。

在另一方面，本发明涉及治疗肺癌(具体地是非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC)的方法，所述方法包括同时、分开或顺序向有需要的受试者以联合治疗有效对抗所述肺癌(具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC)的数量施用“本发明的组合”。

剂量

本文引用的剂量(dosage或dose)，除非另有明确说明，否则是指药物产品中所述化合物A或化合物B的量(以游离碱计算)。

当以本文所描述的剂量方案将化合物A作为单一疗法施用时，化合物A的剂量可以选自50-350mg的范围，更优选地选自50-150mg的范围。化合物A可以按50、75、100、150、200、225、250、300mg每日一次的剂量施用。因此，化合物A可以按50、75、100或150mg每日一次的剂量施用；更优选地，50、75或100mg每日一次。50、75或100mg剂量可以更好地耐受而不会失去疗效。在优选的实施例中，化合物A可以按100mg每日一次的剂量施用。

当作为组合疗法的一部分施用时，化合物A可以按25-150mg、优选25-100mg的剂量施用，优选地每日给药一次。在优选的实施例中，作为组合疗法的一部分，化合物A可以按25、50、75或100mg，例如每日一次的剂量施用。优选地，将剂量选自50、75和100mg的药品称为其游离碱，因为这些剂量可以更好地耐受而不会失去疗效。在优选的实施例中，化合物A作为组合疗法的一部分以100mg每日一次的剂量施用。

化合物B的每日剂量可选自200至1200mg的范围、优选地400-1200mg的范围、更优选地400-800mg的范围。化合物B优选地每日施用一次。化合物B的所述剂量可以是200、300、400mg或800mg。所述剂量可优选地200、400或800mg。

下面列举了本发明的药物组合的一些实施例

本发明的组合的所述个体的治疗药剂，即第三代EGFR抑制剂以及Raf抑制剂，可以在治疗过程中在不同时间分开施用、或者以分离的或单一的组合形式同时施用。例如，根据本发明，用于治疗所述癌症(具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC)的方法可包括：(i)以游离或药学上可接受的盐形式施用化合物A，以及(ii)以游离或药学上可接受的盐形式，同时或以任何顺序依次，以联合治疗有效量(例如每日或间歇地以与如本文所描述相对应的剂量)施用Raf抑制剂(优选地化合物B)。

通过建立的测试模型可显示，本发明的组合产生了本文前面所述的有益作用。本领域技术人员完全能够选择相关的测试模型来证明这样的有益作用。本文所描述的本发明的组合的药理活性和/或剂量方案，例如，可以在下文基本描述中的临床研究或体内或体外测试方法中证明。

在一个重要方面，本发明旨在提供与单一药剂第三代EGFR抑制剂相比或与次要组合配偶体相比具有临床益处的疗法，所述疗法具有预防或延迟治疗难治性疾病出现的潜力。

本发明人已经观察到，在一线环境中对第一/第二代EGFR TKI以及在二线及以上的环境中对EGFR T790M突变型NSCLC中的EGF816的临床应答通常特征在于快速获得最大的肿瘤应答，随后长时间内处于相对稳定的疾病控制。在这个稳定的疾病控制期间，存在最小残留疾病的状态，其中在一种或多种抗药克隆的生长晕之前，肿瘤组织保持相对休眠的状态。设想一旦达到所述肿瘤缩小稳定水平，在癌症的治疗中施用第三代EGFR抑制剂和Raf抑制剂的所述组合将特别有益。在单个药剂治疗的上的组合添加疗法(add-on therapy)将有利于靶向有活力的“存留细胞”肿瘤细胞，因此可以预防一种或多种抗药克隆的出现。

因此，本发明提供了利用EGFR抑制剂(合适地第三代EGFR抑制剂)的初始疗效的剂量方案，以及本发明的所述组合的有益作用。

本发明提供了用于治疗有需要的人类的EGFR突变型(具体地EGFR突变型NSCLC)肺癌的方法，所述方法包括

(a)施用治疗有效量的第三代EFGR抑制剂(例如化合物A、或其药学上可接受的盐作为单一疗法直到达到最小残留疾病(即，直到两次至少间隔一个月进行的评估之间的肿瘤负荷降低小于5％)；随后

(b)施用治疗有效量的化合物A、或其药学上可接受的盐，以及Raf抑制剂(具体地化合物B或其药学上可接受的盐)的药物组合。

本发明提供了化合物A、或其药学上可接受的盐，用于治疗有需要的人类的EGFR突变型肺癌(具体地EGFR突变型NSCLC)，其中

(a)将化合物A、或其药学上可接受的盐作为单一疗法施用直到达到最小残留疾病(即，直到两次至少间隔一个月进行的评估之间的肿瘤负荷降低小于5％)；并且

(b)随后施用化合物A、或其药学上可接受的盐，以及Raf抑制剂(具体地化合物B或其药学上可接受的盐)药物组合。

可通过本领域熟知的方法监测所述癌症的进展、肿瘤负荷的增加或减少、以及对用EGFR抑制剂治疗的应答。因此，可通过目视检查来监测对癌症的治疗的进展和应答，例如通过X射线、CT扫描或MRI或通过肿瘤生物标志物检测。例如，癌症的增长的生长表明癌症具有进展且对治疗缺乏应答。癌症(例如NSCLC或肿瘤)的进展可以通过检测新肿瘤或检测转移或肿瘤缩小的停止来指示。可以基于RECIST标准(Therasse等人，2000年)，NewGuidelines to Evaluate the Response to Treatment in Solid Tumors[评估实体瘤对治疗应答的新指南],Journal of National Cancer Institute[国家癌症研究所杂志],第92卷；205-16，以及修订的RECIST指南(版本1.1)(Eisenhauer等人2009)European Journalof Cancer[欧洲癌症杂志]；45:228-247，进行肿瘤评价(包括评估肿瘤减少或肿瘤符合增加)。可以通过比较相关治疗在已经开始治疗后的时间点之间的肿瘤状态或通过比较在已经开始治疗后的时间点至治疗之前的时间点之间的肿瘤状态来确定肿瘤进展。

因此，可以通过使用Response Evaluation Criteria In Solid Tumors[实体瘤应答评估标准](RECIST 1.1)或WHO标准来确定是否达到最小残留疾病或稳定疾病应答的状态。稳定疾病(stable disease、Stable Disease或SD)应答可以定义为以下应答：以自治疗开始靶病灶的最长直径(LD)的最小总和为参考，靶病灶既没有显示出符合部分应答(PR)要求的足够的收缩，也没有显示出符合进行性疾病(PD)要求的足够的增加。其他应答标准可以定义为如下。

完全应答(CR)：所有靶病灶消失

部分应答(PR)：以基线总和LD为参考，靶病灶的LD总和至少降低30％。

进行性疾病(PD)：以自治疗开始以来记录的最小LD总和或一个或多个新病灶的出现为参考，靶病灶的LD总和至少增加20％。

将EGFR抑制剂作为单一疗法施用的治疗期是足以达到最小的残留疾病(本领域技术人员因而可以容易地测量)的时间段。所述治疗期可以由1、2、3、4、5、6个或更多个28天周期组成，优选地两个或三个周期。

在另一方面，本发明涉及商业包装，所述商业包装包含本发明的组合，和向有需要的患者同时、分开或顺序施用本发明的组合的说明书。在一个实施例中，本发明提供了用于在癌症(具体地肺癌，具体地非小细胞肺癌(NSCLC)，例如EGFR突变型NSCLC，并且优选地其中所述癌症的特征在于突变型EGFR)的治疗中使用的商业包装，所述商业包装包含以下：第三代EGFR抑制剂化合物A、或其药学上可接受的盐的，以及用于同时、分开或顺序使用Raf抑制剂(优选地化合物B或其药学上可接受的盐)的说明书；例如，其中所述突变型EGFR包含C797S、G719S、G719C、G719A、L858R、L861Q、外显子19缺失突变、外显子20插入突变、EGFRT790M、T854A或D761Y突变、或其任何组合，并且优选地，其中所述癌症在用一种或多种EGFR抑制剂治疗之前期间具有获得性抗性、或对用一种或多种EGFR抑制剂治疗产生抗性或处于对用EGFR抑制剂治疗产生抗性的很高的风险中。

以下实例示出上文所描述的本发明，然而不旨在以任何方式限制本发明的范围。相关领域技术人员已知的其他测试模型也可以确定所要求保护的发明的有益作用。

实例

实例1：短期生存力测定：化合物B增强了EGF816(化合物A)的功效

以下评估了将MAPK通路抑制剂(例如化合物B)添加到第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(例如EGF816)中在EGFR突变型NSCLC中的潜在功效。用固定剂量(300nM)的EGF816(“化合物A”)或与化合物B组合的DMSO在10个剂量范围内处理一组EGFR突变型NSCLC细胞系持续5天。

方法

细胞系：

PC9、HCC827、HCC4006、NCI-H1975以及MGH707均为对EGF816敏感的EGFR突变型NSCLC细胞系。PC9、HCC827、HCC4006和NCI-H1975获得自癌细胞系百科全书(CCLE)数据库。MGH707获得自马萨诸塞州综合医院。将所有细胞系维持在补充有10％胎牛血清的RMPI培养基中。

化合物：

将化合物A(EGF816)和化合物B均以10mM的浓度重新悬浮于DMSO中作为储备溶液，并进一步稀释以用于指示的实验。

实验程序

将以下EGFR突变型(EGFR mt)NSCLC细胞系按以下密度进行接种：将HCC827(外显子19缺失，或简称为ex19del)(500/孔)、HCC4006(ex19del)(500/孔)、PC9(ex19del)(500/孔)、以及MGH707亲本(1000/孔)放入白色384孔板(#3707，康宁公司(Corning)，奥尼昂塔，纽约，美国)，并储存在37℃、95％相对湿度和5％CO₂的培养箱中过夜。使用Biomek液体处理器(贝克曼公司(Beckman)，印第安纳波利斯，印第安纳州，美国)在声学板(acousticplate)(#P-05525，Labcyte公司(Labcyte)，圣何塞，加利福尼亚州，美国)中将化合物在DMSO中进行系列稀释(1:3稀释)。将化合物A分配到Labcyte P-05525源板的第一行中。然后使用声学分配器(Echo-555，Labcyte公司，圣何塞，加利福尼亚州，美国)将化合物板用于将组合递送至测定板。每次分配为50nL，可实现1:1000的稀释(即将10mM化合物的50nL分配变为50uL的细胞溶液中有10uM)。所述组合处理包括将50nL的化合物A进行第二次分配以达到0.3uM的最终浓度。配药完成后，将每个测定板放回培养箱(37℃、95％相对湿度，以及5％CO₂)。使用批量分配器(EL406，Biotek，Winooski，VT，美国)将25uL/孔的CellTiter-GloOne Solution细胞生存力试剂(#G8462，普洛麦格公司(Promega)，麦迪逊，威斯康星州，美国)添加到未处理的板中的每个孔线中，并且在室温下孵育20分钟后，在酶标仪(Envision，珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)，Hopkington，马萨诸塞州，美国)上读板。这些数据用于确定细胞数量(第0天)的基线读数，以评估治疗期内的细胞生长、细胞停滞、或细胞死亡。孵育5天后，使用相同的CellTiter-Glo测定试剂并在Envision酶标仪上读取测定板。

结果

从图1A和图1B可以看出，这些EGFR突变型细胞系的生长受到化合物B单一药剂的抑制(图1A和图1B的顶部曲线)。仅存在EGF816导致所有这些细胞系的生长受到强烈抑制(参见从DMSO值到在化合物B在零浓度下用EGF816获得的值的活性降低)。当还存在EGF816时，添加化合物B导致HCC4006、HCC827和PC9细胞系中细胞生长的抑制作用增强，但在MGH707模型中效果较差(图1A和图1B的底部曲线)。此外，添加EGF816导致这些细胞(HCC4006、HCC827和PC9)对Raf抑制剂(例如化合物B)变得敏感，因为与单一药剂相比，当还存在EGF816时它们在较低剂量下仍具有活性。

实例2：长期生存力测定表明，第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂和Raf抑制剂的组合减缓药物耐受细胞的生长。

在长期药物组合生长测定中进一步检验了化合物A和化合物B的组合。将在上述实例1中所使用的相同的EGFR突变型NSCLC细胞系用单独的EGF816或与化合物B组合的EGF816在5个剂量范围内如下处理14天。

方法

将PC9(6000/孔)、HCC827(4000/孔)、HCC4006(5000/孔)、和MGH707(5000/孔)细胞放在96孔板中，并在第二天用EGF816(300nM)+DMSO或在(0.03、0.1、0.3、1和3uM)剂量范围内的化合物B处理两周。药物每周更新两次。将细胞汇合用作细胞数量的替代指标，并在t＝0、4、7、10和14天处理时通过incucyte zoom来测量。

结果

从图2可以看出，化合物B显著抑制了EGFR突变型持久性细胞的缓慢残留生长。在对单一药剂EGF816更加敏感的PC9细胞系的情况下，单一药剂EGF816与化合物B的组合导致更为明显的细胞数下降。同样，对于EGFR抑制剂和Raf抑制剂的组合，所述MGH707模型最难治。

总结和讨论

在大多数测试模型的短期和更长期测定两者中，与单独的EGF816相比，将Raf抑制剂化合物B添加到EGF816导致细胞生长抑制作用增强。鉴于在这些实验的上下文中在这些细胞中单一药剂EGF816的剂量可导致强烈的生长抑制和细胞凋亡，而留下很小的改善空间，这尤其令人印象深刻。两者合计，实例1和实例2表明，与单一药剂EGF816相比，EGF816与化合物B的组合在临床上可具有增强的功效。因此，用本发明的药物组合靶向药物耐受细胞可以有益于改善针对EGFR突变型NSCLC患者的总体应答和结果。

实例3：EGF816与化合物B组合在患有EGFR突变型NSCLC的患者中的Ib期、开放标签、剂量升级和/或剂量扩张研究。

符合这项研究的患者是患有晚期EGFR突变型NSCLC(目前无法通过任何疗法治愈的疾病)的患者。在一线、未进行治疗的患者，或具有获得性EGFR T790M看门人突变的患者，和/或先前未进行第3代EGFR TKI的患者中，用EGF816(化合物A)作为单一药剂治疗有望为大多数患者带来临床获益。但是，预计所有患者在单一药剂EGF816治疗一段时间后都会产生治疗抗性和最终疾病进展。

在EGF816治疗的情况下，化合物B有望在其中来自BRAF或上游的信号传导(包括激活的RTK和Ras信号传导)驱动抗性或肿瘤细胞持久性的肿瘤中具有活性。如上所示，临床前实验证明EGF816和化合物B在损害EGFR突变型NSCLC细胞的增殖/生存力上具有增强功效。

由于化合物B是CYP3A4/5的抑制剂，因此与之同时使用时具有增加EGF816的暴露的潜力。

因此，这项研究有合理的理由支持瑞博西尼具有改善EGF816的临床疗效的潜力。与单一药剂EGFR TKI相比，本研究的潜在益处是改善临床益处，具有潜力来预防或延迟治疗难治性的疾病的出现。

研究设计

这是在晚期EGFR突变型NSCLC的成年患者中，Ib期、开放标签、非随机的剂量递增研究，所述研究为EGF816与化合物B组合，随后是EGF816与化合物B组合的扩展剂量。患者必须是未进行治疗的晚期患者并且在EGFR中带有敏感突变(ex19del或L858R)，或者在第一代或第二代EGFR TKI(例如，埃罗替尼、吉非替尼、阿法替尼)治疗的基础上具有进展并且在肿瘤中带有EGFR T790M突变的患者。患者先前不应该接受第三代EGFR TKI(例如，奥希替尼、诺司替尼、ASP8273)。

入选标准

符合纳入本研究的患者必须满足以下标准：

-患者(男性或女性)≥18岁。

-患者必须在组织学或细胞学上确定为局部晚期(IIIB期)或转移性(IV期)EGFR突变型(ex19del、L858R)NSCLC。

-EGFR突变状态和先前治疗线的要求：

·未进行治疗的患者(患有具有EGFR敏感突变(例如L858R和/或ex19del)的局部晚期或转移性NSCLC的患者)未接受过任何针对晚期NSCLC的全身抗肿瘤治疗并且符合接受EGFR TKI治疗。具有EGFR外显子20插入/复制的患者不符合条件。注意：仅接受了一个周期晚期化疗的患者是允许的。

·在先前用第一代EGFR TKI(例如埃罗替尼、吉非替尼或埃克替尼)或第二代EGFRTKI(例如阿法替尼或达克替尼)进行治疗后发展为具有EGFR敏感突变和获得性T790M突变(例如L858R和/或ex19del、T790M+)的局部晚期或转移性NSCLC的患者。在晚期的这些患者可能先前没有接受超过4个线的抗肿瘤治疗(包括EGFR TKI)，并且可能没有接受任何靶向EGFR T790M突变的药剂(即第三代EGFR TKI)。EGFR突变测试必须在EGFR TKI进展后进行。

·具有EGFR敏感突变和“新生”T790M突变的局部晚期或转移性NSCLC的患者(即，先前未用任何已知可抑制EGFR的药剂(包括EGFR TKI)进行治疗)。在晚期的这些患者可能先前没有接受超过3个线的抗肿瘤治疗，并且可能没有接受过任何先前第三代EGFR TKI。

-ECOG行为状态：0-1

处于递增和扩展两个部分的所有患者均接受EGF816 100mg qd作为单一药剂治疗大约5个28天周期(治疗期1)，然后接受EGF816 100mg qd结合化合物B(治疗期2)。

组合治疗的分配部分地基于肿瘤样品的靶向基因组谱以及大约4个EGF816治疗周期后收集的cfDNA的结果。

接受组合治疗的患者还包括特征在于EGFR C797突变和/T790M顺式的肿瘤的患者。还包括特征在于C797突变和顺式T790M的肿瘤的患者，这些患者还显示出MET扩增或外显子14跳跃突变和/或BRAF融合或突变。C797突变是对EGF816作用方式的直接抗性机制。除了阻断来自激活的BRAF的信号传导以外，化合物B还可阻断激活的EGFR下游的信号传导。因此，化合物B作为组合配偶体有望成为对此类患者有用的疗法。

疗效评估是在基线以及治疗期间每8周(每2个周期)进行的。因此，在患者开始组合治疗之前将获得至少两次基线后疗效评估。在开始组合治疗之前经历疾病进展的患者将从本研究中中止，除非获得临床益处的患者例外。

起始剂量

^*：“QD”或“qd”意指每日一次

化合物A的每日剂量也可以选自25、50、75、100或150mg。

对于本组合研究，按连续的每日给药方案EGF816(化合物A)施用100mg qd(片剂；与或不与食物一起施用)。在先前的研究中，发现在每日100mg和每日150mg下，对EGF816的总体应答率相似，但是在每日100mg下观察到较低比率的皮疹和腹泻。因此，首选EGF816每日100mg剂量，因为预计它比150mg的更好耐受，特别地在如果所述组合导致重叠的毒性的情况下，同时它又保持了针对EGFR突变型NSCLC的疗效。与单一药剂EGF816相比，预期100mgqd剂量可为组合提供足够大的耐受性边界，其中药物-药物的相互作用可以增加100mg qd的EGF816的暴露。根据尚待确定的推荐方案的组合中一个或多个第一个队列的PK数据，可以降低组合中的EGF816剂量这导致EGF816暴露的增加，以保持它的暴露接近于100mg qd的EGF816单一药剂的暴露。

化合物B的起始剂量为400mg q.d.(片剂；最好没有食物，空腹)按连续剂量方案并且可以上升至800mg qd。预计EGF816不会影响化合物B的暴露。

EGF816与化合物B组合的建议起始方案为100mg的EGF816和400mg的化合物B，一起服用并且每种每日一次连续施用。基于这些先前的安全性数据以及所述药物-药物相互作用(DDI)的假设，所述起始剂量组合符合BLRM内EWOC标准。

连续给药意指在治疗周期的整个过程中不间断地施用所述药剂。因此，连续每日一次施用是指在给定的治疗期内每日一次不间断的施用所述治疗药剂。

选择本研究的所述剂量递增部分的设计是为了表征在具有EGFR突变型NSCLC患者中化合物A与化合物B组合的安全性和耐受性，并确定推荐剂量和方案。必要时，所述剂量递增允许建立化合物A与化合物B组合的MTD(最大耐受剂量)，并将以贝叶斯逻辑回归模型(BLRM)为指导。

BLRM是用于评估癌症患者中最大耐受剂量(MTD)的良好建立的方法。自适应BLRM将以控制过量用药的剂量递增(EWOC)原则为指导，以在未来研究的患者中控制剂量限制毒性(DLT)的风险。EMEA已接受贝叶斯响应自适应模型在小型数据集上的用途(“Guidelineon clinical trials in small populations[小群体临床试验指南]”，2007年2月1日)，并得到众多出版物的认可(Babb等人1998年；Neuenschwander等人2008年；Neuenschwander等人2010年)，并且其发展和适当使用是FDA的关键路径发端(FDA’s Critical PathInitiative)的一个方面。

选择的剂量水平

后续组合组的EGF816剂量水平(100、75或50mg)的选择将取决于一种或多种早期组合组的EGF816 PK。

表化合物B的暂定剂量水平

*有可能在研究过程中添加其他和/或中间剂量水平，为了更好地了解安全性、PK或PD，可以以低于MTD的任何剂量水平添加组。

**剂量水平-1表示需要从起始剂量水平降低剂量的患者的治疗剂量。此研究不允许将剂量降低至低于剂量水平-1。

治疗持续时间：

患者继续接受分配的治疗直到RECIST 1.1导致的疾病进展、不可接受的毒性、新的抗肿瘤治疗的开始、由研究者或患者决定的治疗的终止、失随访、死亡或研究终止。

本研究的目的和相关终点：

^@部分应答(PR)、完全应答(CR)、稳定疾病(SD)

*ORR定义为使用入组前肿瘤评估作为基线，在整个治疗期间(从EGF816单一疗法开始到研究治疗结束)根据RECIST v1.1具有PR+CR最佳总体响应的患者比例。ORR2定义为使用开始组合治疗前的最新肿瘤评估为基线，根据RECIST v1.1具有PR+CR最佳总体响应的患者比例；

DOR定义为从首次记录的响应(PR或CR)至因任何原因引起的首次记录的疾病进展或死亡之日的时间；DCR定义为具有CR、PR、或SD最佳总体响应的患者比例；

PFS定义为从研究治疗的首次剂量之日至因任何原因引起的首次记录的疾病进展(根据RECIST v1.1)或死亡之日的时间。

Claims

1.一种第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和Raf抑制剂的药物组合。

2.根据权利要求1所述的药物组合，其中所述第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂是纳扎替尼，所述纳扎替尼是具有式(I)的化合物

或其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合，其中所述Raf抑制剂是具有式(II)的化合物(化合物B)

或药学上可接受的盐形式。

4.根据权利要求2或3所述的药物组合，其中所述具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐是甲磺酸盐或盐酸盐，优选地甲磺酸盐。

5.根据前述权利要求中任一项所述的所述药物组合，用于同时、分开或顺序使用。

6.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，用于在患者的癌症的治疗中使用。

7.根据权利要求6所述所使用的药物组合，其中所述癌症是肺癌。

8.根据权利要求7所述所使用的药物组合，其中所述肺癌是非小细胞肺癌，具体地EGFR突变型非小细胞肺癌。

9.根据权利要求6至8中任一项所述所使用的药物组合，其中所述癌症的特征为EGFR的异常激活，具体地EGFR的扩增、或EGFR的体细胞突变。

10.根据权利要求6至9中任一项所述所使用的药物组合，其中患有所述癌症的患者是未进行治疗的患者(即先前未接受过针对EGFR突变型非小细胞肺癌的、用任何全身性抗肿瘤疗法的任何疗法的患者)。

11.根据权利要求6至9中任一项所述所使用的药物组合，其中患有所述癌症的患者先前接受过用酪氨酸激酶抑制剂的疗法，所述酪氨酸激酶抑制剂为例如EGFR TKI或第三代EGFR TKI。

12.根据权利要求6至11中任一项所述所使用的药物组合，其中所述癌症对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂的治疗具有抗性、或对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂的治疗产生抗性、或处于对用EGFR酪氨酸激酶抑制剂的治疗产生抗性的高风险中。

13.根据权利要求6至12中任一项所述所使用的药物组合，其中所述癌症的特征为带有EGFR G719S突变、EGFR G719C突变、EGFR G719A突变、EGFR L858R突变、EGFR L861Q突变、EGFR外显子19缺失、EGFR外显子20插入、EGFR T790M突变、EGFR T854A突变或EGFR D761Y突变、或其任何组合。

14.根据权利要求6至13中任一项所述所使用的药物组合，其中所述癌症是NSCLC且所述NSLC带有EGFR L858R突变、EGFR外显子19缺失或两者。

15.根据权利要求14所述所使用的药物组合，其中所述NSCLC另外带有EGFR T790M突变。

16.根据权利要求15所述所使用的药物组合，其中所述EGFR T790M突变是新生突变。

17.根据权利要求15所述所使用的药物组合，其中所述EGFR T790M突变是获得性突变。

18.根据权利要求11、12、13、14、15、16或17所述所使用的药物组合，其中所述癌症在用第一代EGFR TKI(例如埃洛尼替尼、吉非替尼、埃克替尼或其任何组合)治疗和/或用第二代TKI(例如阿法替尼、达克替尼或两者)治疗后已经进展。

19.根据权利要求6至18中任一项所述所使用的药物组合，其中所述患有癌症的患者未进行关于第三代TKI，例如，奥希替尼的治疗。

20.根据权利要求6至19中任一项所述所使用的药物组合，其中所述癌症特征在于EGFRC797突变和T790M顺式。

21.根据权利要求20所述所使用的药物组合，其中所述癌症的另外特征为具有MET扩增或者外显子14跨越突变和/或BRAF融合或突变。

22.具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐用于在制备用于与Raf抑制剂组合使用的用于治疗EGFR突变型肺癌的药物中的用途。

23.Raf抑制剂用于在制备用于与具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐组合使用的用于治疗EGFR突变型肺癌的药物中的用途。

24.一种用于治疗肺癌的方法，所述方法包括以针对所述肺癌的联合治疗有效的量向有需要的受试者同时、分开或顺序施用根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合。

25.一种用于在肺癌的治疗中使用的商业包装，所述商业包装包含根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合，和用于向有需要的人类患者同时、分开或顺序施用所述药物组合的说明书。

26.一种用于治疗有需要的人类的EGFR突变型肺癌，具体地EGFR突变型NSCLC的方法，所述方法包括

(a)以单一疗法施用治疗有效量的第三代EFGR酪氨酸激酶抑制剂(例如化合物A、或其药学上可接受的盐)直到达到最小残留疾病(即，直到两次至少间隔一个月进行的评估之间的肿瘤负荷降低小于5％)；随后

(b)施用治疗有效量的第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(例如化合物A或其药学上可接受的盐)以及Raf抑制剂(具体地化合物B或其药学上可接受的盐)的药物组合。

27.纳扎替尼、或其药学上可接受的盐，用于在治疗EGFR突变型肺癌，具体地EGFR突变型NSCLC中使用，其中

(a)将纳扎替尼、或其药学上可接受的盐作为单一疗法施用直到达到最小残留疾病；并且

(b)随后施用纳扎替尼、或其药学上可接受的盐，以及Raf抑制剂(具体地化合物B或其药学上可接受的盐)药物组合。

28.纳扎替尼、或其药学上可接受的盐，用于在治疗EGFR突变型肺癌，具体地EGFR突变型NSCLC中使用，其中

(a)将纳扎替尼、或其药学上可接受的盐作为单一疗法施用直到患有所述疾病的患者在两次至少间隔一个月进行的评估之间的肿瘤负荷降低小于5％；并且

(b)随后施用纳扎替尼、或其药学上可接受的盐，以及化合物B、或其药学上可接受的盐的药物组合。

29.一种第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂，具体地纳扎替尼、或其药学上可接受的盐，用于与Raf抑制剂，具体地式(II)化合物或其药学上可接受的盐组合用于治疗癌症、具体地肺癌(例如NSCLC)。

30.一种Raf抑制剂，具体地具有式(II)的化合物或其药学上可接受的盐，用于与第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂，具体地纳扎替尼、或其药学上可接受的盐组合用于治疗癌症、具体地肺癌(例如NSCLC)。