CN110833550B - 吡唑并嘧啶衍生物在治疗急性胰腺炎致肝损伤的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物技术领域，特别是吡唑并嘧啶衍生物在治疗急性胰腺炎致肝损伤的用途。本发明吡唑并嘧啶衍生物对急性胰腺炎致肝损伤有较好的治疗作用，能显著降低血清中AMY、AST、ALT的含量，有效减轻胰腺组织、肝脏组织的损伤程度，提高血清中抗炎症因子IL‑10的含量水平，降低血清中致炎因子IL‑6的水平，抑制肝脏组织中NF‑κB的过度表达，从而有效控制肝脏组织中的炎症反应的发展，减轻炎症反应引起的组织损伤。

Description

吡唑并嘧啶衍生物在治疗急性胰腺炎致肝损伤的用途

技术领域

本发明涉及药物技术领域，特别是吡唑并嘧啶衍生物在治疗急性胰腺炎致肝损伤的用途。

背景技术

急性胰腺炎(AP)是临床常见病、多发病，目前根据其临床表现，可分为三类：轻症急性胰腺炎(MAP)、重症急性胰腺炎(SAP)和中度重症急性胰腺炎(MSAP)。临床上，大多数AP患者呈自限性，20％～30％患者经历凶险，总体病死率为5％～10％，SAP病死率较高，可达36％～50％，如后期合并感染则病死率更高。目前对于重症急性胰腺炎的发病机制尚未完全清楚，尤其是对于并发其他器官损害的严重情况，临床上仍缺乏有效的治疗方法。SAP并发多器官损害的患者中，肝功能受损比例高达83％。肝脏的功能有很多，不仅是人体最大的消化腺，也是机体代谢的重要部位。因为其生理位置与胰腺相邻，所以这种生理解剖关系使肝脏在AP病情发展过程中受到的影响更大。

胰腺炎产生的各种有害物质扩散出胰腺，一部分随血液流入肝脏，一部分经肝十二指肠韧带进入到肝门区，进一步激活肝脏炎症反应，产生大量的炎症因子并释放至全身。炎症因子触发的“级联反应”，打破了免疫系统的平衡，发挥出相互交织影响的网络效应，造成肝脏功能以及全身其他系统、器官的损害，严重时甚至造成多器官功能衰竭(MOF)。炎症介质的活化就是导致肝脏功能受损甚至多器官衰竭的加速器。SAP肝功能受损后，会进一步加速炎症的扩散，而炎症的增加又加重了肝脏的负担，最终导致肝脏功能衰竭。

吡唑并嘧啶衍生物(式Ⅰ)是一种靶向作用于FLT3激酶的小分子抑制剂，是申请人自主研发的新型化合物，目前化合物专利已经在中国、美国、日本等地区获得了授权。

目前仅有关于吡唑并嘧啶衍生物在治疗急性髓性白血病及银屑病方面的报道，而未见有在治疗急性胰腺炎致肝损伤方面的用途。

式Ⅰ吡唑并嘧啶衍生物化学结构式

发明内容

为了克服现有技术存在的不足，本发明提供吡唑并嘧啶衍生物在治疗急性胰腺炎致肝损伤的用途。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种如式Ⅰ所示的吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、水合物在制备治疗急性胰腺炎致肝损伤药物方面的用途

优选地，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为血清中AMY、AST、ALT含量升高。

优选地，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为血清中促炎症细胞因子水平升高。

优选地，所述促炎症细胞因子包括IL-6。

优选地，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为血清中抗炎症细胞因子水平下降。

优选地，所述抗炎症细胞因子包括IL-10。

优选地，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为胰腺组织中有炎症细胞浸润。

优选地，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为肝脏组织中有炎症细胞浸润。

优选地，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为肝脏组织中NF-κB表达增强。

优选地，所述药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐。

本发明还提供一种药物组合物制备治疗急性胰腺炎致肝损伤药物方面的用途，其特征在于，所述药物组合物包含如式Ⅰ所示吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、水合物作为有效成分，和药学上可接受的赋形剂。

优选地，所述所述药物组合物为注射制剂、口服制剂、外用制剂、缓释制剂、控释制剂。

优选地，所述所述口服制剂包括片剂、颗粒剂、胶囊剂。

优选地，所述药物组合物为控释制剂、缓释制剂、速释制剂。

在SAP并发肝损伤的发展过程中，IL-6起到了重要的作用。IL-6主要是由单核细胞产生的一种炎症因子，在各种因素刺激下或自发产生。SAP发生过程中，IL-6刺激肝细胞，并诱导了肝细胞CRP的合成。IL-6诱导ICAM-1的产生，并向肝脏募集中性粒细胞而使肝细胞损害。

IL-10主要由T细胞产生，是一种具有抑制多种促炎细胞因子合成的作用。IL-10能抑制TNF-α、IL-6、IL-1β的产生，从而控制炎症反应的发展。IL-10还可以增加重组转化生长因子-B1(TGF-B1)的产生，以起到修复胰腺损伤的作用。

NF-κB是参与免疫反应和淋巴细胞分化的重要的转录因子，目前NF-κB是较公认的参与急性胰腺炎合并其他器官功能损伤的关键因子。在SAP发展过程中，胰酶、肠道毒素、炎症因子等进入肝脏，使肝脏细胞中的NF-κB被活化，进入细胞核与多种目的基因的特定DNA序列结合，启动这些基因的转录，促使大量的炎症因子的产生。有研究表明，SAP大鼠造模成功3小时后，肝组织中NF-κB阳性细胞表达率就可见明显升高。在NF-κB的活化同时也会伴随肝细胞的凋亡数目增多。随着NF-κB继续不断地活化，致使大量的炎症介质不断增多，进一步破坏人体免疫调节网络系统，使肝脏组织损害加重，肝细胞凋亡数目不断增加，而且逐渐变为坏死。所以NF-κB的激活是SAP肝伤发生发展的关键。NF-κB作为信使在SAP肝损伤过程中发挥了中枢的作用。

本发明吡唑并嘧啶衍生物原为FLT3抑制剂，通过研究发现，本发明吡唑并嘧啶衍生物对急性胰腺炎致肝损伤有较好的治疗作用，能显著降低血清中AMY、AST、ALT的含量，有效减轻胰腺组织、肝脏组织的损伤程度，提高血清中抗炎症因子IL-10的含量水平，降低血清中致炎因子IL-6的水平，抑制肝脏组织中NF-κB的过度表达，从而有效控制肝脏组织中的炎症反应的发展，减轻炎症反应引起的组织损伤。

与现有技术比较，本发明的方法具有以下优点：

本发明提供的吡唑并嘧啶衍生物，是一种新的治疗急性胰腺炎致肝损伤的药物，不但扩展了现有治疗急性胰腺炎致肝损伤的药物选择性，为该病的有效治疗提供了更多的药物选择，也进一步扩展了本发明吡唑并嘧啶衍生物作为FLT3抑制剂的应用范围。

附图说明

图1、2、3分别为空白对照组24h、48h、72h时的胰腺组织结构图(×100)。

图4、5、6分别为模型组24h、48h、72h时的胰腺组织结构图(×100)。

图7、8、9分别为吡唑并嘧啶衍生物组24h、48h、72h时的胰腺组织结构图(×100)。

图10、11、12分别为空白对照组24h、48h、72h时的肝脏组织结构图(×100)。

图13、14、15分别为模型组24h、48h、72h时的肝脏组织结构图(×100)。

图16、17、18分别为吡唑并嘧啶衍生物组24h、48h、72h时的肝脏组织结构图(×100)。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1对重症急性胰腺炎大鼠致肝损伤的作用研究

1.实验动物：清洁级SD大鼠，雌雄各半，体质量180～220g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。

2.实验材料：吡唑并嘧啶衍生物由发明人合成。吡唑并嘧啶衍生物由发明人合成。将蓖麻油与乙醇1：1混合后经过0.22μm的无菌滤膜，得到ELE溶液，称取一定质量的本发明吡唑并嘧啶衍生物粉末，用ELE溶液溶解粉末，待粉末完全溶解后，加入一定体积的灭菌水，混匀待用。ELE溶液与无菌水的体积比为1：3。

3.动物分组、造模、给药：所有动物随机分以下组别：空白对照组(10只)、模型组(30只)、吡唑并嘧啶衍生物组(以下简称受试药物组，30只)。除空白对照组外，大鼠适应性喂养1周后，于实验前12h开始禁食，不禁水。称重后，先用10％水合氯醛(3.5m L/100g)进行腹腔内注射麻醉，待大鼠昏迷后取仰卧位，将大鼠四肢固定在操作台上。于手术区备皮、安尔碘消毒液消毒两次，用手术刀在上腹部正中线处作2cm大小的纵行切口。进入腹腔，找到十二指肠环，显露胰胆管，在近肝门处用脉夹扎住胰胆管后，用1mL注射器连4号加工钝头注射器于从十二指肠乳头对侧肠壁处进入肠管，并逆行进入胰胆管，以0.1mL/min速度缓慢推注5％牛磺胆酸钠(0.1mL/100g)，推药时注意观察胰腺充盈情况。推注完毕后，拔出针头，用左手拇指、食指加压按住胰胆管入十二指肠处，3min后松开夹闭胰胆管的小动脉夹，逐层关腹。术后自由饮水，禁食2h。空白对照组大鼠打开腹腔后只翻动十二指肠与胰腺两次后即刻逐层关腹。术后2h开始，空白对照组只与模型组只大鼠灌胃给予ELE溶液和蒸馏水1:3体积比的混合液(10mL/kg)，并每隔12h灌入。受试药物组大鼠以给药剂量为12mg/kg(1.2mg/mL药液)灌胃本发明吡啶并嘧啶衍生物，并每隔12h灌入。正常饮食。

4.取材：各组在取材前12h停止给药以及喂食，并在首次灌胃后24h、48h、72h分3批进行取材。水合氯醛麻醉后，打开腹腔，首先大体观察大鼠胰腺以及肝脏形态，还有周围组织包括肠腔积气、腹水等的情况；再用腹主动脉穿刺采血法从每只大鼠体内采集两管动脉血，每管约4mL，37℃孵育30min后以3000rmp离心15min，EP管收集血清，最后截取大鼠胰腺及肝脏同一部位组织，分别用10％多聚甲醛固定。

5.观察指标：

(1)病理学观察：常规HE染色，光镜下观察胰腺组织、肝脏组织的病理形态结构。

(2)全自动生化仪检测AMY(血清淀粉酶)、AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)水平：腹主动脉采血，37℃孵育30min后以3000rmp离心15min，EP管收集血清，用全自动生化分析仪自动检测大鼠血清AMY、AST、ALT水平。

(3)酶联免疫法(EILSA)检测血清IL-6、IL-10水平：操作参照试剂盒说明书。

(4)免疫组织化学法测定肝组织NF-κB的表达水平：染色结果通过在高倍显微镜下观察阳性细胞比例以及染色深度来判定。染色后，细胞核内显色有棕黄色或棕色颗粒的细胞即为阳性细胞。随机选取5个视野，然后取各视野内阳性细胞的平均数为计数标准，再根据每张切片的阳性细胞数及细胞核的染色强度。积分进行相乘，得出最后该切片的分数，其中着色细胞数占比﹤30％为1分，30％～60％为2分，﹥60％为3分；无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。用PBS液代替一抗处理的切片作为阴性对照，已知阳性切片作阳性对照进行判定。

6.统计学方法：采用SPSS17.0处理数据，计量数据采用(均数±标准差)表示，组间比较用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

7.实验结果

(1)胰腺组织及肝脏组织大体形态变化

空白对照组各时间段大鼠肠管无扩张，无积气、积液，无胃潴留，无肠粘连。胰腺组织结构形态完整，无水肿、充血，无皂化斑块形成。肝脏形态体积正常，颜色鲜红，表面光滑，组织弹性好，无包膜下出血，无包膜紧张、无粘连，各时间段无明显差异。

模型组24h时间段大鼠腹腔内可见较多浑浊血性腹水形成，其它时间段伴随大鼠存活时间延长腹水也较前增多。肠淤血肿胀，肠粘连，肠管扩张积气、积液，胃扩张，胃潴留。48h、72h时间段大鼠可见胃极度扩张，胃内有大量胃内容物潴留。胰腺组织高度水肿，可见皂化斑块形成，大片胰腺组织出血、坏死，与周围组织粘连，且难以分离。胰腺组织周围、肠系膜以及后腹膜可见大量皂化斑块。肝脏形态体积稍增大，颜色深暗红色，组织脆性增加，48h、72h时间段可见肝脏与胰腺组织粘连，包膜紧张，膜下点状出血。

受试药物组24h时间段大鼠腹腔内可见少量的浑浊血性腹水形成，随着治疗时间的增加，其他时间段大鼠腹腔内腹水稍增加，多呈淡黄色。大多数可见肠淤血，肠管扩张积气、积液，少数可见胃扩张，胃潴留。胰腺组织水肿，48h、72h时间段可见部分模型胰腺组织出现出血、坏死，较模型组同时间段的坏死程度较轻。胰腺可见与周围组织粘连。胰腺周围、肠系膜可见少量皂化斑。肝脏组织形态体积无明显变化，颜色暗红，较模型组颜色减轻，组织富有弹性，未见到明显出血点，与胰腺组织无明显粘连。

(2)胰腺组织及肝脏组织光镜下病理改变

空白对照组各时间段大鼠均可见胰腺组织结构完整，胰腺小叶排列整齐，间隔无水肿增宽，无出血、坏死、炎症细胞浸润、血管扩张等病理改变，各时间段模型组织形态结构比较未见明显差异。肝脏组织内肝细胞形态正常，排列整齐，无水肿，间隙正常，无增宽，未见细胞凋亡及坏死，肝小叶及汇管区内未见明显有炎症细胞浸润。各时间段间未见明显差异。

模型组可见胰腺的腺泡细胞肿胀，随着发病时间的延长大量组织发生坏死，48h、72h时间段大鼠胰腺坏死组织内可见出血，伴有大量炎症细胞浸润。胰腺小叶结构紊乱，部分甚至消失，胰腺的腺泡间隔、小叶间隔及叶间隔均明显增宽，间隔内亦可见大量的炎症细胞。部分坏死区内可见钙化灶。肝脏组织内肝细胞可见水肿，组织细胞间隙增宽，24h、48h时间段可见较多细胞嗜酸性变，可见点状细胞坏死，组织间红细胞充盈，肝窦及汇管区内可见较多量的炎症细胞浸润及红细胞堆积。72h时间段可见肝脏细胞结构紊乱，片状细胞坏死。

受试药物组各时间段大鼠胰腺腺泡均可见细胞水肿，但较模型组肿胀要轻，48h、72h隔、小叶间隔及叶间隔增宽。坏死病灶较模型组同时间段减少，可见红细胞及炎症细胞浸润。浸润程度较模型组同时间段明显减轻。各时间段均未见到明显钙化灶。各时间段肝组织细胞水肿，较空白对照组细胞间隙增宽，可见少量细胞嗜酸性变，未见到明显的肝细胞坏死，肝窦及汇管区炎症细胞数较模型组减少，红细胞。

(3)血清AMY、AST、ALT检测结果分析

表1血清AMY(U/L)水平比较

表2血清AST(U/L)水平比较

组别	24h	48h	72h
				空白对照组	138.16±15.62	126.89±8.75	134.62±12.92
模型组	560.52±105.41*	326.20±81.39*	217.90±51.38*
				受试药物组	372.85±62.35△	196.75±21.26△	152.88±19.87△

与空白对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

表3血清中ALT(U/L)水平比较

组别	24h	48h	72h
				空白对照组	40.56±5.45	48.55±9.44	42.53±8.46
模型组	168.70±42.38*	105.78±21.36*	79.48±15.11*
				受试药物组	112.38±25.32△	70.54±10.46△	50.13±11.54△

与空白对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

由表1～3可知，受试药物组在给药24h、48、72h后均能显著降低血清中AMY、AST、ALT的含量(P＜0.05)。说明本发明吡唑并嘧啶衍生物能有效减轻胰腺组织、肝脏组织的损伤。

(4)对血清中IL-6、IL-10水平的影响

表4对血清中IL-6(pg/mL)水平的影响

组别	24h	48h	72h
				空白对照组	8.42±0.46	7.84±0.95	8.45±0.68
模型组	15.82±1.15*	17.56±1.76*	16.25±1.64*
				受试药物组	11.54±0.82△	13.86±1.28△	10.13±0.95△

与空白对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

表5对血清中IL-10(pg/mL)水平的影响

组别	24h	48h	72h
				空白对照组	18.96±9.08	22.38±11.35	20.15±10.28
模型组	64.15±17.13*	59.48±22.56*	82.16±22.18*
				受试药物组	128.76±34.28△	146.75±51.20△	220.57±65.40△

与空白对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

由表4～5可知，受试药物组在给药24h、48、72h后均能显著降低血清中IL-6的含量(P＜0.05)，同时显著升高IL-10的含量(P＜0.05)。说明本发明吡唑并嘧啶衍生物能有效抑制全身炎症反应的发生。

(5)对肝脏组织中NF-κB表达的影响

表6对肝脏组织中NF-κB(分)表达的影响

组别	24h	48h	72h
				空白对照组	0	0	0
模型组	6.89±1.39	6.47±1.85	5.35±1.26
				受试药物组	4.36±1.46	4.15±1.63	3.86±1.02

与空白对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

由表6可知，受试药物组在给药24h、48、72h后均能显著降低肝脏组织中NF-κB的表达(P＜0.05)。说明本发明吡唑并嘧啶衍生物能有效抑制肝脏中的炎症反应，减轻炎症反应引起的组织损伤。

结论

本发明吡唑并嘧啶衍生物对急性胰腺炎致肝损伤有较好的治疗作用，能显著降低血清中AMY、AST、ALT的含量，有效减轻胰腺组织、肝脏组织的损伤程度，提高血清中抗炎症因子IL-10的含量水平，降低血清中致炎因子IL-6的水平，抑制肝脏组织中NF-κB的过度表达，从而有效控制肝脏组织中的炎症反应的发展，减轻炎症反应引起的组织损伤。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (14)

1.一种如式Ⅰ所示的吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗急性胰腺炎致肝损伤的药物方面的用途

式Ⅰ。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为血清中AMY、AST、ALT含量升高。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为血清中促炎症细胞因子水平升高。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述促炎症细胞因子包括IL-6。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为血清中抗炎症细胞因子水平下降。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述抗炎症细胞因子包括IL-10。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为胰腺组织中有炎症细胞浸润。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为肝脏组织中有炎症细胞浸润。

9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性胰腺炎致肝损伤表现为肝脏组织中NF-κB表达增强。

10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐。

11.一种药物组合物在制备治疗急性胰腺炎致肝损伤的药物方面的用途，其特征在于，所述药物组合物包含如权利要求1中所述的如式Ⅰ所示吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分，和药学上可接受的赋形剂。

12.根据权利要求11所述的用途，所述药物组合物为口服制剂。

13.根据权利要求12所述的用途，所述口服制剂包括片剂、颗粒剂、胶囊剂。

14.根据权利要求11所述的用途，所述药物组合物为控释制剂、缓释制剂、速释制剂。

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