CN110819561B - 一株放线菌tl-007及其应用 - Google Patents
一株放线菌tl-007及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110819561B CN110819561B CN201911089241.7A CN201911089241A CN110819561B CN 110819561 B CN110819561 B CN 110819561B CN 201911089241 A CN201911089241 A CN 201911089241A CN 110819561 B CN110819561 B CN 110819561B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- actinomycete
- ginseng
- application
- strain
- actinomycetes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 title abstract description 23
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 claims abstract description 44
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 claims abstract description 41
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 claims abstract description 41
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 claims abstract description 17
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 241001518138 Streptomyces nogalater Species 0.000 claims abstract description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 claims abstract 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 14
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 14
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 11
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 claims description 7
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 6
- 206010027146 Melanoderma Diseases 0.000 claims description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 6
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 claims description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 abstract description 26
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 abstract description 8
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 abstract 1
- 240000004371 Panax ginseng Species 0.000 description 41
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 7
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 3
- 235000002789 Panax ginseng Nutrition 0.000 description 3
- 241000933809 Streptomyces niger Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 3
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 2
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 2
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 2
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 241000168254 Siro Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000541500 Streptomyces sp. G6 Species 0.000 description 2
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 2
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 230000002888 effect on disease Effects 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000000447 pesticide residue Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000184861 Juglans nigra Species 0.000 description 1
- 235000013740 Juglans nigra Nutrition 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940107131 ginseng root Drugs 0.000 description 1
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000009335 monocropping Methods 0.000 description 1
- 239000003895 organic fertilizer Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 244000000000 soil microbiome Species 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
一株放线菌TL‑007及其应用，涉及一株放线菌TL‑007及其应用。本发明的目的是要提供一株具有广谱拮抗作用的放线菌TL‑007及其应用。本发明一株放线菌TL‑007为黑胡桃链霉菌(Streptomyces nogalater)TL‑007，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2019年9月29日，保藏编号CGMCC No.18633。本发明的一株放线菌TL‑007的应用是指在作物病害防治上的应用。TL‑007对锈腐病的抑菌率为85.93％，为高效拮抗人参锈腐病的菌株且具有广谱拮抗作用。本发明应用于环境微生物技术领域。
Description
技术领域
本发明涉及一株放线菌TL-007及其应用。
背景技术
近年来，用化学方法防治作物病害虽具有时间短、见效快的特点，但在防治过程中存在严重的化学农药残留问题，而且过量使用化学农药还会造成污染环境、病菌产生抗药性的问题。如人参锈腐病的防治，人参是我国名贵的中药材之一，但栽培过程中常发生各种病害影响人参产量和品质。其中，人参锈腐病是人参根部的一种土传病害，因其厚垣孢子在土壤中以休眠的方式在无寄主的条件下长期存活，造成土壤带菌，直接影响下一茬人参的种植，致使人参产生连作障碍。采用化学方法防治会使参根内积累大量有毒物质，严重影响人参品质；传统的农业防治采用施加有机肥、合理轮作、秋栽改春栽、老参地改农田等措施进行防治，但大多也只能起到预防的作用。因此，生物防治是作物病害防治的主要途径之一，急需一种具有广谱拮抗作用的生防菌。
发明内容
本发明的目的是要提供了一株具有广谱拮抗作用的放线菌TL-007及其应用。
本发明一株放线菌TL-007为黑胡桃链霉菌(Streptomyces nogalater)TL-007，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2019年9月29日，保藏编号CGMCC No.18633。
本发明的一株放线菌TL-007的应用是指在作物病害防治上的应用。
本发明采用平板稀释法分离获得了54株来源与吉林省白山市的人参根际放线菌，并对其进行了拮抗锈腐病的筛选。
放线菌的分离及纯化：取土壤样品1.0g，风干研磨分散均匀，以1：10比例溶入无菌水中，过滤取滤液作为10-1初始液，依次获得10-2和10-3土壤梯度稀释液。分别在高氏1号和PDA分离培养基上进行稀释涂布，28℃培养7d，直至有单个菌落长出，挑取单菌落在培养基上纯化，至最终获得单一菌株。
拮抗放线菌的筛选：采用平板对峙法，先将锈腐病菌接种在PDA培养基上进行活化。在无菌操作台上，用1cm打孔器取锈腐菌菌饼放置在PDA平板中央，挑取拮抗菌菌丝在距离病原菌约2cm处划一条直线，其中以不划拮抗菌菌丝的平板为对照。每组3个重复，置于28℃恒温培养箱中培养，观察菌落长势，并在第5d记录菌的最小半径以及对照菌落的半径。计算公式＝(对照菌落半径-病原菌菌落半径)/对照组菌落半径×100％。TL-007对锈腐病的抑菌率为85.93％。
放线菌TL-007的ITS序列及系统发育分析：获得菌株16S rDNA基因序列与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比对分析，采用MEGA 5.1构建系统进化树TL-007菌株为Streptomyces nogalater属于同一分支，其相似度达到100％。通过形态特征和分子生物学鉴定结果，最终命名为黑胡桃链霉菌(Streptomyces nogalater)TL-007。
本发明公开了人参根际放线菌TL-007菌株，保藏编号为CGMCC NO.18633。在大量的人参根际微生物中，经初筛得到几株可以拮抗人参锈腐病的菌株，再反复复筛得到拮抗效果最佳的菌株，TL-007对锈腐病的抑菌率为85.93％。经鉴定，菌株TL-007为黑胡桃链霉菌属(Streptomyces nogalater)，该高效拮抗菌株能够有效抑制人参的锈腐病，无致病性。为防治人参锈腐病菌肥的开发及其利用奠定了良好的基础。对该菌株进行抑菌谱实验，实验表明TL-007对大豆黑斑、大豆灰霉病白菜黑腐病、人参镰刀病病菌的抑菌率，分别为：80.37％、76.37％、81.48％、82.66％，说明对大豆，白菜，人参等作物疾病有拮抗效果，具有广谱的拮抗效果。本发明菌株TL-007为高效拮抗人参锈腐病的菌株且具有广谱拮抗作用，利用生物防治的手段，即利用生物或其代谢产物对植物病害进行有效防治，相比其他传统的的化学防治更加环保，无农药残留，不产生抗药性。
附图说明
图1为TL-007菌株在PDA培养基上的菌落形态；
图2为TL-007菌株的显微镜图；
图3为TL-007菌株对人参锈腐病的拮抗图；
图4为TL-007菌株的抑菌谱；
图5为TL-007菌株的分子鉴定图谱；
图6为TL-007菌株在人参切片上的初步回接验证。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式的一株放线菌TL-007为黑胡桃链霉菌(Streptomyces nogalater)TL-007，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2019年9月29日，保藏编号CGMCC No.18633。
本实施方式采用平板稀释法分离获得了54株来源与吉林省白山市的人参根际放线菌，并对其进行了拮抗锈腐病的筛选。
放线菌的分离及纯化：取土壤样品1.0g，风干研磨分散均匀，以1：10比例溶入无菌水中，过滤取滤液作为10-1初始液，依次获得10-2和10-3土壤梯度稀释液。分别在高氏1号和PDA分离培养基上进行稀释涂布，28℃培养7d，直至有单个菌落长出，挑取单菌落在培养基上纯化，至最终获得单一菌株。
拮抗放线菌的筛选：采用平板对峙法，先将锈腐病菌接种在PDA培养基上进行活化。在无菌操作台上，用1cm打孔器取锈腐菌菌饼放置在PDA平板中央，挑取拮抗菌菌丝在距离病原菌约2cm处划一条直线，其中以不划拮抗菌菌丝的平板为对照。每组3个重复，置于28℃恒温培养箱中培养，观察菌落长势，并在第5d记录菌的最小半径以及对照菌落的半径。计算公式＝(对照菌落半径-病原菌菌落半径)/对照组菌落半径×100％。TL-007对锈腐病的抑菌率为85.93％。
放线菌TL-007的ITS序列及系统发育分析：获得菌株16S rDNA基因序列与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比对分析，采用MEGA 5.1构建系统进化树TL-007菌株为Streptomyces nogalater属于同一分支，其相似度达到100％。通过形态特征和分子生物学鉴定结果，最终命名为黑胡桃链霉菌(Streptomyces nogalater)TL-007。
本实施方式利用生物防治的手段，即利用生物或其代谢产物对植物病害进行有效防治，相比其他传统的的化学防治更加环保，不产生抗药性，为生防微生物资源的开发和有效利用提供了理论依据。从而为绿色有机农业奠定长远发展。
具体实施方式二：本实施方式一株放线菌TL-007的应用是指在作物病害防治上的应用。
本实施方式菌株TL-007为黑胡桃链霉菌属(Streptomyces nogalater)，该高效拮抗菌株能够有效抑制人参的锈腐病，无致病性。为防治人参锈腐病菌肥的开发及其利用奠定了良好的基础。对该菌株进行抑菌谱实验，实验表明TL-007对大豆黑斑、大豆灰霉病白菜黑腐病、人参镰刀病病菌的抑菌率，分别为：80.37％、76.37％、81.48％、82.66％，说明对大豆，白菜，人参等作物疾病有拮抗效果，具有广谱的拮抗效果。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二不同的是：放线菌TL-007应用在对大豆黑斑病原菌的抑制上。其他与具体实施方式二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二或三不同的是：放线菌TL-007应用在对大豆灰霉病原菌的抑制上。其他与具体实施方式二或三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式二至四之一不同的是：放线菌TL-007应用在对白菜黑腐病原菌的抑制上。其他与具体实施方式二至四之一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式二至五之一不同的是：放线菌TL-007应用在对人参镰刀病原菌的抑制上。其他与具体实施方式二至五之一相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式二至六之一不同的是：放线菌TL-007应用在对人参锈腐病原菌的抑制上。其他与具体实施方式二至六之一相同。
具体实施方式八：本实施方式采用平板稀释法分离获得了54株来源与吉林省白山市的人参根际放线菌，并对其进行了拮抗锈腐病的筛选。
放线菌的分离及纯化：取土壤样品1.0g，风干研磨分散均匀，以1：10比例溶入无菌水中，过滤取滤液作为10-1初始液，依次获得10-2和10-3土壤梯度稀释液。分别在高氏1号和PDA分离培养基上进行稀释涂布，28℃培养7d，直至有单个菌落长出，挑取单菌落在培养基上纯化，至最终获得单一菌株(图1)和(图2)。
拮抗放线菌的筛选：采用平板对峙法，先将锈腐病菌接种在PDA培养基上进行活化。在无菌操作台上，用1cm打孔器取锈腐菌菌饼放置在PDA平板中央，挑取拮抗菌菌丝在距离病原菌约2cm处划一条直线，其中以不划拮抗菌菌丝的平板为对照。每组3个重复，置于28℃恒温培养箱中培养，观察菌落长势，并在第5d记录菌的最小半径以及对照菌落的半径(图3)。计算公式＝(对照菌落半径-病原菌菌落半径)/对照组菌落半径×100％。TL-007对锈腐病的抑菌率为85.93％。
具体实施方式五：本实施方式广谱拮抗效果的链霉菌Streptomyces sp.G6的鉴定：
1.生理生化鉴定
参照《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰系统鉴定手册》中推荐的培养基和方法测定TL-007菌株的生理生化特性，测定菌株能够使明胶液化、产过氧化氢酶、淀粉水解素、产吲哚乙酸、NaCl的耐受度7％(表1)。
表1放线菌TL-007生理生化测试
注：放线菌TL-007生理生化测试结果：“+”为阳性；“-”为阴性
2.放线菌TL-007的ITS序列及系统发育分析
获得菌株16S rDNA基因序列，DNA序列如SEQ ID NO：1所示，然后与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比对分析，采用MEGA 5.1构建系统进化树TL-007菌株为Streptomyces nogalater属于同一分支，其相似度达到100％。通过形态特征和分子生物学鉴定结果，TL-007菌株为黑胡桃链霉菌株(Streptomyces nogalater)(图5)。
对本实施方式的链霉菌Streptomyces sp.G6在对防治作物病害上的功能性验证：
试验1、平板对峙法对对大豆黑斑、大豆灰霉病、白菜黑腐病、人参镰刀病拮抗作用
采用平板对峙法，参照拮抗放线菌筛选的方法，计算TL-007对对大豆黑斑、大豆灰霉病、白菜黑腐病、人参镰刀病病菌的抑菌率(图4)，分别为：80.37％、76.37％、81.48％、82.66％。说明对大豆，白菜，人参等作物疾病有拮抗效果，具有广谱的拮抗效果。
试验2：TL-007菌株在人参切片上的初步回接验证
将获得的TL-007菌于28℃下高氏一号液体培养3d后，于10000rpm转速下离心获得菌体并加水吹打后再次离心1次，清洗菌体。将获得的菌体用无菌水配制成108cfu/mL。取人参茎块放于已灭菌的培养皿中间，分4组处理，没有任何处理的CK组，在人参茎块上接种锈腐菌，接种锈腐菌后添加人参生防菌悬液，单独加有人参生防菌悬液的处理。将培养皿放入28℃的培养箱中培养5d后，观察人参茎块的腐烂情况(图6)。结果显示：加拮抗菌TL-007的处理，可以显著抑制锈腐菌的生长，而单独加拮抗菌TL-007的菌块没有腐烂，说明拮抗菌TL-007对人参茎块没有破坏的现象，拮抗菌TL-007有生防效果。
序列表
<110>中国科学院东北地理与农业生态研究所
<120>一株放线菌TL-007及其应用
<160> 1
<210> 1
<211> 990
<212> DNA
<213>黑胡桃链霉菌株（Streptomyces nogalater）
<400> 1
agggcgtgcg ggcgtgctta cacatgcaag tcgacgatga acctccttcg ggaggggatt 60
agtggcgaac gggtgagtaa cacgtgggca atctgccctg cactctggga caagccctgg 120
aaacggggtc taataccgga tacgagcctc caccgcatgg tgggggttgg aaagctccgg 180
cggtgcagga tgagcccgcg gcctatcagc ttgttggtga ggtaacggct caccaaggcg 240
acgacgggta gccggcctga gagggcgacc ggccacactg ggactgagac acggcccaga 300
ctcctacggg aggcagcagt ggggaatatt gcacaatggg cgaaagcctg atgcagcgac 360
gccgcgtgag ggatgacggc cttcgggttg taaacctctt tcagcaggga agaagcgaga 420
gtgacggtac ctgcagaaga agcgccggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt 480
agggcgcaag cgttgtccgg aattattggg cgtaaagagc tcgtaggcgg cttgtcacgt 540
cggttgtgaa agcccggggc ttaaccccgg gtctgcagtc gatacgggca ggctagagtt 600
cggtagggga gatcggaatt cctggtgtag cggtgaaatg cgcagatatc aggaggaaca 660
ccggtggcga aggcggatct ctgggccgat actgacgctg aggagcgaaa gcgtggggag 720
cgaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg gtgggcacta ggtgtgggca 780
acattccacg ttgtccgtgc cgcagctaac gcattaagtg ccccgcctgg ggagtacggc 840
cgcaaggcta aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggcgga gcatgtggct 900
taattcgacg caacgcgaag accttaccaa ggcttgacat acaccggaaa gcattagaga 960
tagtgccccc cttgtggtcg gtgtacaggt 990
Claims (2)
1.一株放线菌TL-007，其特征在于它为黑胡桃链霉菌(Streptomyces nogalater)TL-007，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2019年9月29日，保藏编号CGMCC No.18633。
2.如权利要求1所述的一株放线菌TL-007的应用，其特征在于放线菌TL-007应用在对大豆黑斑病原菌、大豆灰霉病原菌、白菜黑腐病原菌、人参镰刀病原菌和人参锈腐病原菌的抑制上。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911089241.7A CN110819561B (zh) | 2019-11-08 | 2019-11-08 | 一株放线菌tl-007及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911089241.7A CN110819561B (zh) | 2019-11-08 | 2019-11-08 | 一株放线菌tl-007及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110819561A CN110819561A (zh) | 2020-02-21 |
| CN110819561B true CN110819561B (zh) | 2021-06-11 |
Family
ID=69553725
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911089241.7A Active CN110819561B (zh) | 2019-11-08 | 2019-11-08 | 一株放线菌tl-007及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110819561B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010028667A1 (en) * | 2008-09-11 | 2010-03-18 | W.C. Heraeus Gmbh | Genetically modified strains for biotransformations in anthracycline production |
| CN108949622A (zh) * | 2018-07-11 | 2018-12-07 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一株产几丁质酶的链霉菌及其应用 |
| CN108977382A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-11 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一株产挥发性抑菌物质的链霉菌及其应用 |
-
2019
- 2019-11-08 CN CN201911089241.7A patent/CN110819561B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010028667A1 (en) * | 2008-09-11 | 2010-03-18 | W.C. Heraeus Gmbh | Genetically modified strains for biotransformations in anthracycline production |
| CN108949622A (zh) * | 2018-07-11 | 2018-12-07 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一株产几丁质酶的链霉菌及其应用 |
| CN108977382A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-11 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一株产挥发性抑菌物质的链霉菌及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Antifungal activity of 3-acetylbenzamide produced by actinomycete WA23-4-4 from the intestinal tract of Periplaneta americana;Xia Fang等;《Journal of Microbiology》;20180628;第56卷;第516-523页 * |
| Enhanced antibacterial metabolite production through the application of statistical methodologies by a Streptomyces nogalater NIIST A30 isolated from Western Ghats forest soil;Jubi Jacob等;《PLos One》;20170430;第12卷(第4期);e0175919，参见全文 * |
| 一株高产抗菌活性物质链霉菌的初步分类鉴定;李德舜等;《山东大学学报》;20060430;第41卷(第2期);第144-148页 * |
| 尖孢镰刀菌人参专化型鉴定及GSK3基因和效应因子的克隆研究;王莹;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20170228;D046-305，参见第1-2页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110819561A (zh) | 2020-02-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113373094B (zh) | 耐寒短杆菌sdb5及其在促进植物生长中的应用 | |
| CN112358984B (zh) | 一种生防菌株yw-1及其生防菌剂的制备和应用 | |
| CN113549578B (zh) | 一株抑制稻瘟病菌和促进种子发芽的暹罗芽孢杆菌BsNlG13及其应用 | |
| CN117586914B (zh) | 一种土壤耐盐解磷固氮菌及其应用 | |
| CN106591154A (zh) | 一株有效防治黄瓜枯萎病的青霉菌 | |
| CN114934002B (zh) | 一株放线菌新物种及其在植物抗旱促生中的应用 | |
| CN111073827B (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌jtb8-2及在瓜列当生物防治中的应用 | |
| CN115960766A (zh) | 一种防治青枯病的微生物及其应用 | |
| CN108277166B (zh) | 一株棘孢木霉及其在铅污染土壤修复中的应用 | |
| CN108977385B (zh) | 一株产几丁质酶的米修链霉菌及其应用 | |
| CN110819561B (zh) | 一株放线菌tl-007及其应用 | |
| CN118028140A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌sf883及其应用 | |
| CN114214236B (zh) | 蝎子链霉菌lss-f01及其在农作物真菌病害防治中的应用 | |
| CN111893068B (zh) | 一种Elizabethkingiaanophelis279-2菌株及应用 | |
| CN108977383B (zh) | 一株分解几丁质的类芽孢杆菌及其应用 | |
| CN106434500B (zh) | 一种防治大豆疫病的生防放线菌菌株及其应用 | |
| CN113373091A (zh) | 一株防治水稻纹枯病的生防菌株苏云金芽孢杆菌fj2b-25 | |
| CN112662591A (zh) | 微生物制剂 | |
| CN104082344A (zh) | 阿萨尔基亚芽孢杆菌在防治棉花黄萎病上的用途 | |
| CN116769667B (zh) | 一种特基拉芽孢杆菌k3-11及其应用 | |
| CN113278551B (zh) | 一株伯克霍尔德氏菌、包括伯克霍尔德氏菌的菌剂、菌肥及制备方法和应用 | |
| CN108977384B (zh) | 一株分解几丁质的绛红产色小单胞菌及其应用 | |
| CN113832074B (zh) | 一种放线菌及其生防菌剂和应用 | |
| CN113151112B (zh) | 一株花生内生细菌洋葱伯克氏菌r-11及其应用 | |
| CN109112084B (zh) | 一株几丁质分解菌及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |