CN110812253A - 一种用于水光注射的透明质酸凝胶及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种用于水光注射的透明质酸凝胶，其中所述透明质酸凝胶是二硫键交联透明质酸，且透明质酸在凝胶中的含量不大于10mg/mL。本发明交联透明质酸凝胶用于水光注射时具有独特的优势，易于通过水光针极细针头进行注射，可在皮下浅表层实现良好的均匀分布，不会出现鼓包现象；同时具有比未交联透明质酸更长时间的补水保湿效果，可有效改善肌肤肤质。

Description

一种用于水光注射的透明质酸凝胶及其使用方法

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种用于水光注射的透明质酸凝胶，还涉及所述用于水光注射的透明质酸凝胶的使用方法。

背景技术

近年来国内外医疗美容行业发展迅速，研发了各类新兴美容技术。水光注射是当前国内外开展最为广泛的医疗美容项目之一，能有效解决体表使用护肤品不易透过表皮屏障吸收的问题，可快速有效给予肌肤补水补养，因而可有效改善肤质及延缓衰老。水光注射源于法国医生Michal Pistor于1952年提出的中胚层疗法(Mesotherapy)，其理念是在局部浅表注射微量治疗物质；之后经过几十年的努力开发出了当前的水光针技术。水光注射通过负压技术将数个极细的针头精确刺入皮下约1～2毫米处，透过表皮层直接将修复物质输送入表皮和真皮之间或真皮层，解决了护肤品中有效成分无法有效穿透表皮屏障的问题。

透明质酸又名玻尿酸，是一种人体内固有的酸性黏多糖，被普遍应用于各种护肤品，是人体肌肤中天然存在的超强保湿剂，可维持自身重量1000倍的水份。肌肤的湿润水平与透明质酸含量及分子量密切相关，高分子量的透明质酸具有更强的保水性能。随着年龄的增长以及日常活性氧自由基的破环作用，肌肤中内源性透明质酸不断被降解流失，保水功能逐渐弱化，因而导致了各种肌肤衰老症状，如干燥、粗糙、暗沉、松弛、皱纹等等(Stern等，Clinics in Dermatology 2008,26:106-122；Papakonstantinou等，Dermatoendocrinol 2012,4:253-258)。

补充外源性透明质酸是改善肌肤肤质、延缓衰老症状及恢复年轻态的重要措施。然而由于表皮屏障的存在，涂抹在肌肤表面的透明质酸很难被有效吸收，特别是具有超强保湿能力的高分子量透明质酸。水光注射透明质酸可直接透过表皮屏障，可即刻在肌肤浅表层补充透明质酸，以实现快速补水保湿的功效及达到改善肤质的终极目的。当前水光注射以浅表注射补充外源性透明质酸为主，同时也适当含有其它修复营养物质。CN106074213A公开了一种用于水光注射的透明质酸凝胶，其组成包括10～30份的透明质酸钠、0.5～3份的甘油、0.5～1.5份的甘露醇、1～9份的pH调节剂和25～45份的等渗调节剂。CN 105233270A公开了用于水光治疗的药物组合物及其应用，其组成包括：0.01～0.5wt％的高分子量透明质酸钠、0.01～0.3wt％的中分子量透明质酸钠、0.01～1wt％的低分子量透明质酸钠、0.01～1wt％的寡聚透明质酸钠、0.01～5wt％的胶原蛋白、0.05～1.8wt％的辅剂、重组人表皮生长因子，余量为水，重组人表皮生长因子的浓度为0.5～10μg/ml；高分子量透明质酸钠的分子量为130～200万道尔顿，中分子量透明质酸钠的分子量为50～100万道尔顿，低分子量透明质酸钠的分子量为5～30万道尔顿，寡聚透明质酸钠的分子量为3000～8000道尔顿。

然而，透明质酸在体内透明质酸酶的作用下，被快速降解成小分子片段进入体液循环被吸收代谢，失去了在肌肤局部补水保湿的功能；在皮肤中，透明质酸的半衰期小于1天(Laurent等，Exp Physiol 1991,76:695-703)。因此，水光注射虽然可在肌肤局部快速补充透明质酸，但只能在短时间内起到补水保湿，难以实现改善肤质、延缓衰老及恢复年轻态等较长期效果。例如，Amin等(Dermatol Surg 2006,32:1467-1472)和El-Domyati等(International Journal of Dermatology 2012,51:913-919)的研究结果均表明透明质酸水光注射的疗效有待进一步提高。

交联改性可延缓透明质酸在体内的降解吸收，例如1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)交联透明质酸凝胶(

等)在皮下的降解吸收时间可长达6个月以上，被广泛用于皱纹注射填充。然而，当前交联透明质酸凝胶产品的含量很高(通常不小于20mg/mL)(Edsman等，Dermatol Surg 2012,38:1170-1179)，亦即含水量通常不大于98％(交联透明质酸自身重量约49倍的含水量)，补水保湿性能较差；并且，该等交联透明质酸凝胶产品还具有较大的凝胶强度，需粉碎为颗粒状后才能使用，且推挤力较大，很难通过水光针极细针头进行浅表层注射；此外，该等交联透明质酸凝胶产品的流动性差，无法在水光注射的浅表层均匀分布，且容易形成鼓包且在短期内无法降解消失。因此，当前交联透明质酸凝胶产品用于水光注射用途存在诸多局限性。

发明内容

为了解决现有技术中水光注射透明质酸在体内由于降解吸收导致补水保湿效果维持时间短的问题，同时也为了解决现有技术中交联透明质酸凝胶虽然降解吸收时间长但不适合于水光注射的问题，本申请提供了一种用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶，具有比现有透明质酸更长的降解吸收时间和更长的补水保湿维持时间，杂质毒性小，同时适合于水光注射用途，且不会产生当前交联透明质酸凝胶产品易出现的鼓包现象，因而可通过水光注射更加有效地改善肌肤肤质。

本发明通过以下技术方案实现：

一种用于水光注射的透明质酸凝胶，其中所述透明质酸是二硫键交联透明质酸，其在透明质酸中的含量不大于10mg/mL。

在本发明中，二硫键交联透明质酸的含量表示为二硫键交联透明质酸凝胶单位体积中含有的交联透明质酸的重量(mg/mL)。本发明所述的用于水光注射的交联透明质酸的含量优选在4～8mg/mL之间，特别优选在5.5～7mg/mL之间。

与当前交联透明质酸凝胶产品的含量(通常不小于20mg/mL)相比较，本发明所述用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶的含量低，仅为当前交联透明质酸凝胶产品的50％以下；因此，本发明所述用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶的强度更低，具有更好的流动性，易于通过水光针极细针头进行注射及实现在皮下浅表层的均匀分布。此外，本发明所述用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶的含水量不小于99％(二硫键交联透明质酸自身重量的99倍及以上)，且可进一步吸水保水至二硫键交联透明质酸自身重量的约1000倍，因此具有与非交联透明质酸相近的保水能力。

在本发明中，可采用类似于本发明申请人在先技术专利文献CN 101721349A所公开的方法来制备本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶。该制备方法通过透明质酸巯基化衍生物水溶液在氧气(空气中的氧气和/或水溶液中的溶解氧)的氧化作用下实现二硫键交联，具有不需要添加交联剂，副产物为水，生产工艺简单以及不含杂质等许多优点，避免了当前交联透明质酸凝胶产品的复杂工艺及交联剂残余引起的潜在毒副作用。

如本领域技术人员所熟知，在当前的交联透明质酸凝胶产品的制备工艺中，常规采用浸泡透析方式进行纯化，亦即通过将交联反应后的凝胶浸泡于大量的水或缓冲盐溶液中，以透析除去交联凝胶中残余的交联剂等杂质；该纯化过程要求交联凝胶具有较高的强度，因此当前交联透明质酸凝胶产品均具有较高的强度，不适合于水光注射用途。与此相反，在本发明中，所述用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶的上述制备方法不需要纯化过程，特别合适于制备强度较低、具有一定流动性的交联凝胶，适合于水光注射用途。

在本发明中，可采用本发明申请人在先技术专利文献CN 102399295A所公开的透明质酸巯基化衍生物来制备本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶。该等透明质酸巯基化衍生物较好保持了透明质酸的初始结构、生理功能和生物相容性，且可实现有效的二硫键交联，延缓体内的代谢吸收，因此具有比非交联透明质酸更长的补水保湿维持时间。

本发明所述的透明质酸可以是其盐的形式(如钠盐、钾盐、锌盐、钙盐等)和/或其衍生物的形式(如羧甲基化透明质酸、乙酰化透明质酸等)。

在本发明中，所述的透明质酸巯基化衍生物是指含有巯基的透明质酸衍生物，可通过透明质酸的巯基化改性制备，也包括各种透明质酸衍生物进一步通过巯基化改性所制备的巯基化衍生物。透明质酸或其盐或其衍生物的侧链羧基、侧链羟基、以及还原性端基等通常是可进行巯基化改性的活性官能团，WO 2009/006780A1等在先文件所公开的多种透明质酸巯基化衍生物制备方法均可用于制备本发明所述的透明质酸巯基化衍生物。

在本发明中，各种巯基含量的透明质酸巯基化衍生物均可用于制备本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶。巯基含量表示为每克透明质酸巯基化衍生物中含有的巯基的微摩尔数(μmol/g)，优选的巯基含量在10～50μmol/g之间，特别优选的巯基含量在20～40μmol/g之间。

本发明的再一个目的是提供所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶的使用方法。

当本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶的含量较低时(通常小于4mg/mL时)，可直接采用本领域技术人员所熟知水光注射方式进行水光注射，如采用Derma

(德玛莎)等水光注射仪通过五针或九针等极细负压针头进行水光注射。然而，当本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶的含量较高时(如4～10mg/mL时)，直接进行水光注射的推挤力较大，此时可在水光注射前适当稀释至较低含量(通常小于4mg/mL时)，即可顺利进行水光注射。稀释过程可在两通或三通接头连接的注射器中进行，其中一支注射器装有本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶，另一只注射器装有生理盐水、与体液等渗的缓冲液或营养活性物质溶液(如含有生长因子、氨基酸、维生素等的溶液)，两支注射器往复推挤即可实现物理稀释混合。当前水光注射除了补充透明质酸外，通常也希望同时适当补充其它修复营养物质；该需求可方便通过上述物理混合过程实现，以实现协同的水光注射补水保湿等效果。

本发明的有益效果是：

本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶克服了当前交联透明质酸凝胶产品用于水光注射时的缺点，具有更低的含量和更好的流动性，易于通过水光针极细针头进行注射，可在皮下浅表层实现良好的均匀分布，不会出现鼓包现象；同时具有比未交联透明质酸更长时间的补水保湿效果，可有效改善肌肤肤质。

本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶可方便地通过透明质酸巯基化衍生物制备，具有不需要添加交联剂、制备工艺简单、不含杂质等许多优点，可避免了当前交联透明质酸凝胶产品的复杂工艺及交联剂残余引起的毒副作用。

此外，本发明所述的用于水光注射的二硫键交联透明质酸凝胶还可以方便地在使用前与其它营养活性物质进行物理混合，以实现水光治疗的协同效果。

附图说明

图1.二硫键交联透明质酸钠凝胶水光注射后对皮肤含水量的影响

图2.二硫键交联透明质酸钠凝胶水光注射后对皮肤弹性的影响。

图3.二硫键交联透明质酸钠凝胶水光注射后对皮肤皱纹深度的影响。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。

实施例1：二硫键交联透明质酸凝胶的制备

透明质酸巯基化衍生物以180KDa分子量的透明质酸钠为原料，采用Shu等所报道的方法制备(Shu等，Biomacromolecules 2002,3:1304-1311)，其巯基含量分别为24μmol/g、38μmol/g和57μmol/g。

将上述透明质酸巯基化衍生物溶解得到10ml水溶液，含量分别为3、4、5.5、6.5、7、8和10mg/mL；调节溶液pH值为7.4，除菌过滤后转移入25ml无菌玻璃容器；室温密闭静置保存4周，溶液失去流动性并形成二硫键交联水凝胶。

实施例2：二硫键交联透明质酸凝胶的可注射性能评价

采用Derma

(德玛莎)2代水光注射仪，测试实施例1所制备凝胶的通过常规水光注射针头(九针)的可注射性，试验结果如下：

当交联透明质酸的含量为3mg/mL和4mg/mL时，通常具有良好的可注射性；而含量≥5.5mg/mL，则很难通过水光注射仪进行注射。

实施例3：二硫键交联透明质酸凝胶稀释后的可注射性能评价

实施例1所制备的凝胶(交联透明质酸的含量分别为：5.5mg/mL、6.5mg/mL、7mg/mL、8mg/mL和10mg/mL；巯基化衍生物的巯基含量为38μmol/g)与生理盐水按照体积比1:1、1:1.5和1:2进行物理混合稀释。稀释过程在两通接头连接的注射器中进行，其中一支注射器装有实施例1所制备的凝胶(1mL)，另一只注射器装有适当体积的生理盐水(1mL、1.5mL、3mL)，往返推挤60～80次进行物理稀释混合。

采用Derma

(德玛莎)2代水光注射仪，测试稀释后凝胶通过常规水光注射针头(九针)的可注射性，试验结果如下：

当稀释至含量≤4mg/mL时，即可实现通过水光注射仪进行注射；稀释后含量越低，可注射性越好。而当前交联透明质酸凝胶产品(

等)的强度大且粒径较大，在同等条件下即使按照更高倍数的体积比进行稀释，仍极易堵塞注射针头。

实施例4：二硫键交联透明质酸凝胶的吸水保水性能评价

采用与实施例3相同的稀释过程，将实施例1所制备的凝胶与生理盐水按照体积比1:2进行物理混合稀释，然后置入玻璃瓶，室温静置1小时，均未观察到明显的水相与凝胶相的分层现象，表明凝胶具有良好的吸水保水性能(可高达交联透明质酸自身重量的约1000倍)。

实施例5：二硫键交联透明质酸凝胶稀释后的可注射性能评价

采用与实施例3相同的混合稀释过程，实施例1所制备的凝胶(含量为6.5mg/mL；巯基化衍生物的巯基含量为57μmol/g)分别与5种水溶液(分别含有0.5mg/mL维生素C、维生素B2、精氨酸、赖氨酸和谷氨酰胺)按照体积比1:1及1:2进行物理混合稀释。采用Derma

(德玛莎)2代水光注射仪，测试各稀释后凝胶通过常规水光注射针头(九针)的可注射性；试验结果表明各稀释后凝胶均具有良好的可注射性能。

实施例6：二硫键交联透明质酸凝胶的制备

透明质酸巯基化衍生物以300KDa和1,500KDa分子量的透明质酸钠为原料，采用Shu等所报道的方法制备(Shu等，Biomacromolecules 2002,3:1304-1311)，其巯基含量分别为33μmol/g和40μmol/g。

将上述透明质酸巯基化衍生物溶解得到10ml水溶液，含量分别为3、4、5.5、6.5、7、8和10mg/mL；调节溶液pH值为7.4，除菌过滤后转移入25ml无菌玻璃瓶；室温密闭静置保存4周，溶液失去流动性并形成二硫键交联水凝胶。

实施例7：二硫键交联透明质酸凝胶的可注射性能

采用Derma

(德玛莎)2代水光注射仪，测试实施例6所制备凝胶的通过常规水光注射针头(九针)的可注射性。本实施例的试验结果表明：当含量为3mg/mL和4mg/mL时，通常具有较好的可注射性；而浓度≥5.5mg/mL，则很难通过水光注射仪进行注射。

实施例8：二硫键交联透明质酸凝胶稀释后的可注射性能评价

实施例6所制备的凝胶(含量分别为：5.5mg/mL、6.5mg/mL、7mg/mL、8mg/mL和10mg/mL)与生理盐水按照体积比1:1、1:1.5和1:2进行物理混合稀释。稀释过程与实施例3相同。

采用Derma (德玛莎)2代水光注射仪，测试稀释后凝胶通过常规水光注射针头(九针)的可注射性。本实施例的试验结果表明当稀释至含量≤4mg/mL时，具有良好的可注射性。

实施例9：二硫键交联透明质酸凝胶的水光注射效果评价

选取健康志愿者8名(试验组4名，对照组4名)分别进行面部水光注射(Derma

2代水光注射仪，常规九针水光注射针头)。

试验组使用的样品为：2mL实施1制备的凝胶(交联透明质酸的含量为6.5mg/mL；巯基化衍生物的巯基含量为38μmol/g)，使用前与3mL生理盐水混合稀释，混合稀释过程与实施例3相同；样品总体积为5mL，交联透明质酸钠的最终含量为2.6mg/mL。对照组使用的样品为相同体积相同浓度的非交联透明质酸钠水溶液(分子量1.5MDa)。

在面部水光注射后的不同时间点，分别在相同部位进行皮肤含水量测试以及皱纹和皮肤弹性的改善测试。

注射前后皮肤水分相对增加量(％)采用皮肤水分测定仪进行测试，注射前后皮肤弹性相对增加量(％)采用皮肤弹性测定仪进行测试，注射前后皱纹平均深度相对减少值采用快速三维成像系统进行评价。

本实施例的试验结果参见图1-3。与非交联透明质酸对照相比较，二硫键交联透明质酸凝胶具有更好水光治疗效果，且维持时间更长；同时治疗组的所有试验对象均未发现鼓包现象，表明二硫键交联透明质酸凝胶具有良好的流动性，可在水光注射的浅表层均匀分布。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于水光注射的透明质酸凝胶，其特征在于，所述透明质酸是二硫键交联的透明质酸，且其中二硫键交联透明质酸的含量不大于10mg/mL。

2.根据权利要求1所述的用于水光注射的透明质酸凝胶，其特征在于，所述的二硫键交联透明质酸的含量在4～8mg/mL之间。

3.根据权利要求2所述的用于水光注射的透明质酸凝胶，其特征在于，所述的二硫键交联透明质酸的含量在5.5～7mg/mL之间。

4.根据权利要求1所述的用于水光注射的透明质酸凝胶，其特征在于，所述用于水光注射的交联透明质酸凝胶通过透明质酸巯基化衍生物制备。

5.根据权利要求4所述的用于水光注射的透明质酸凝胶，其特征在于，所述透明质酸巯基化衍生物的巯基含量在10～50μmol/g之间。

6.根据权利要求5所述的用于水光注射的透明质酸凝胶，其特征在于，所述透明质酸巯基化衍生物的巯基含量在20～40μmol/g之间。

7.根据权利要求1-6之一所述的用于水光注射的透明质酸凝胶的使用方法，其特征在于，在使用前将所述二硫键交联透明质酸凝胶与稀释液进行物理混合稀释至二硫键交联透明质酸的含量不大于4mg/mL。

8.根据权利要求7所述的用于水光注射的透明质酸凝胶的使用方法，其特征在于，所述的稀释液是生理盐水或与体液等渗的缓冲盐溶液。

9.根据权利要求7所述的用于水光注射的透明质酸凝胶的使用方法，其特征在于，所述的稀释液含有营养活性物质。

10.根据权利要求9所述的用于水光注射的透明质酸凝胶的使用方法，其特征在于，所述营养活性物质是氨基酸、维生素或生长因子。

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