CN110804587A - 采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，包括以下步骤：将去除动静脉的脐带剪碎，充分洗涤；加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液，置于CO2培养箱内培养，定期更换培养基；待间充质干细胞融合达70‑80％，用胰酶溶液消化；将间充质干细胞以2.6‑2.9×105细胞/ml的细胞密度接种于微载体悬液中进行搅拌悬浮培养；细胞长满微载体后，去除上层培养基，加入胰蛋白酶溶液孵育，细胞筛网过滤，收集细胞滤液，离心后收集沉淀。本发明采用改良的微载体细胞培养的方法来培养间充质干细胞，从而达到间充质干细胞规模化生产的目的，为间充质干细胞进一步扩大范围的应用于临床奠定了实验基础。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体是一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法。
背景技术
微载体是指直径在60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微球或者其他形状的物体。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成，其基本类型主要包括液体微载体、大孔明胶微载体、聚苯乙烯微载体、PHEMA微载体、甲壳质微载体、聚氨酯泡沫微载体、藻酸盐凝胶微载体以及磁性微载体等。常用商品化微载体主要有Cytodex1、2、3，Cytopore和Cytoline等。微载体细胞培养技术的基本原理是将对细胞无害的微载体加入到培养容器的培养液中。作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。应用微载体技术可以实现干细胞的规模化获取，为干细胞治疗应用于临床提供现实基础。
间充质干细胞广泛存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，也可从胎儿脐血中分离得到，此外还存在于胎盘，羊水、脐静脉内皮下层、外周血及肝脏、脂肪、肌肉、皮肤等多种组织中。间充质干细胞具有高度增殖、自我更新和多向分化潜能，间充质干细胞不仅能够向多种组织和细胞分化，而且易于分离、培养、扩增，易于外源基因的导入和表达，在体外长期培养过程中始终保持多向分化的潜能，遗传背景相当稳定。
1995年间充质干细胞首次应用于临床应用，2012年Osiris公司申报间充质干细胞作为药品上市得到加拿大FDA的批准，间充质干细胞的临床应用达到一个历史性高度。间充质干细胞目前已顶替胎盘干细胞而成为生物医学研究中首选的种子细胞，并被广泛应用于各种疾病的基础及临床研究。
所以，提供一种将间充质干细胞规模化生产的方法是非常有必要的，也是目前间充质干细胞研究的热点。
发明内容
本发明就是为了将间充质干细胞更广泛的应用于各种疾病的基础和临床研究，所提出一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法。
本发明是按照以下技术方案实现的。
一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，包括以下步骤：
S1.将去除动静脉的脐带剪碎，充分洗涤；
S2.加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液，置于CO2培养箱内培养，24-48h后更换培养基；
S3.待间充质干细胞融合达70-80％，用胰酶溶液消化；
S4.将间充质干细胞以2.6-2.9×105细胞/ml的细胞密度接种于微载体悬液中进行搅拌悬浮培养；
S5.细胞长满微载体后，去除上层培养基，加入胰蛋白酶溶液孵育，细胞筛网过滤，收集细胞滤液，离心后收集沉淀。
进一步的，步骤S3中，所述胰酶溶液为0.25%胰酶+0.02%EDTA。
进一步的，步骤S4中微载体悬液包括无血清培养基和微载体，微载体的密度为2-3mg/ml。
进一步的，所述微载体为 Cytodex1、Cytodex 2、Cytodex 3、Cytopore或Cytoline。
进一步的，步骤S4中搅拌悬浮培养的培养条件为：0-12小时进行间歇搅拌，以20-30rpm的搅拌转速搅拌5-10min，停止搅拌15-25min；12-48h以30rmp转速搅拌培养；49-96h以50rmp转速搅拌培养；溶氧为30-50%空气饱和度。
进一步的，步骤S5中，胰蛋白酶溶液为EDTA-胰蛋白酶溶液，EDTA-胰蛋白酶与间充质干细胞微载体的体积比为2-3：1。
进一步的，步骤S5中，胰蛋白酶溶液孵育的条件为37℃条件下以150rpm-180rpm培养8-12min。
进一步的，步骤S5中，细胞筛网为70μm滤网。
进一步的，步骤S5中，离心条件为150-200g离心8-12min。
本发明获得了如下的有益效果。
本发明采用改良的微载体细胞培养的方法来培养间充质干细胞，从而达到间充质干细胞规模化生产的目的，为间充质干细胞进一步扩大范围的应用于临床奠定了实验基础，也为间充质干细胞的产业化转化奠定的基础。
附图说明
图1是本发明方法生产的间充质干细胞图（40X）；
图2是本发明方法生产的间充质干细胞图（100X）。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1
一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，包括以下步骤：
S1.将去除动静脉的脐带剪碎，充分洗涤；
S2.加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液，置于CO2培养箱内培养，24-48h后更换培养基；
S3.待间充质干细胞融合达70％，用0.25%胰酶+0.02%EDTA溶液消化；
S4.将间充质干细胞以2.6×105细胞/ml的细胞密度接种于微载体悬液中进行搅拌悬浮培养，微载体悬液包括无血清培养基和微载体，微载体的密度为2mg/ml；所述微载体为Cytodex1、Cytodex 2、Cytodex 3、Cytopore或Cytoline。搅拌悬浮培养的培养条件为：0-12小时进行间歇搅拌，以20rpm的搅拌转速搅拌5min，停止搅拌15min；12-48h以30rmp转速搅拌培养；49-96h以50rmp转速搅拌培养；溶氧为30%空气饱和度。
S5.细胞长满微载体后，去除上层培养基，加入EDTA-胰蛋白酶溶液孵育，EDTA-胰蛋白酶与间充质干细胞微载体的体积比为2：1；胰蛋白酶溶液孵育的条件为37℃条件下以150rpm培养8min；70μm细胞筛网过滤，收集细胞滤液，离心后收集沉淀，离心条件为150g离心8min。
实施例2
一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，包括以下步骤：
S1.将去除动静脉的脐带剪碎，充分洗涤；
S2.加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液，置于CO2培养箱内培养，24-48h后更换培养基；
S3.待间充质干细胞融合达80％，用0.25%胰酶+0.02%EDTA溶液消化；
S4.将间充质干细胞以2.9×105细胞/ml的细胞密度接种于微载体悬液中进行搅拌悬浮培养，微载体悬液包括无血清培养基和微载体，微载体的密度为3mg/ml；所述微载体为Cytodex1、Cytodex 2、Cytodex 3、Cytopore或Cytoline。搅拌悬浮培养的培养条件为：0-12小时进行间歇搅拌，以30rpm的搅拌转速搅拌10min，停止搅拌25min；12-48h以30rmp转速搅拌培养；49-96h以50rmp转速搅拌培养；溶氧为50%空气饱和度。
S5.细胞长满微载体后，去除上层培养基，加入EDTA-胰蛋白酶溶液孵育，EDTA-胰蛋白酶与间充质干细胞微载体的体积比为3：1；胰蛋白酶溶液孵育的条件为37℃条件下以180rpm培养12min；70μm细胞筛网过滤，收集细胞滤液，离心后收集沉淀，离心条件为200g离心12min。
实施例3
一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，包括以下步骤：
S1.将去除动静脉的脐带剪碎，充分洗涤；
S2.加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液，置于CO2培养箱内培养，24-48h后更换培养基；
S3.待间充质干细胞融合达80％，用0.25%胰酶+0.02%EDTA溶液消化；
S4.将间充质干细胞以2.6×105细胞/ml的细胞密度接种于微载体悬液中进行搅拌悬浮培养，微载体悬液包括无血清培养基和微载体，微载体的密度为3mg/ml；所述微载体为Cytodex1、Cytodex 2、Cytodex 3、Cytopore或Cytoline。搅拌悬浮培养的培养条件为：0-12小时进行间歇搅拌，以30rpm的搅拌转速搅拌8min，停止搅拌20min；12-48h以30rmp转速搅拌培养；49-96h以50rmp转速搅拌培养；溶氧为40%空气饱和度。
S5.细胞长满微载体后，去除上层培养基，加入EDTA-胰蛋白酶溶液孵育，EDTA-胰蛋白酶与间充质干细胞微载体的体积比为3：1；胰蛋白酶溶液孵育的条件为37℃条件下以180rpm培养10min；70μm细胞筛网过滤，收集细胞滤液，离心后收集沉淀，离心条件为200g离心10min。
获得的间充质干细胞参见1-2。
实施例4 实施例1-3细胞活率
| 细胞活率 | |
| 实施例1 | 96.21±1.97 |
| 实施例2 | 96.87±2.01 |
| 实施例3 | 97.35±1.84 |
实施例5 实施例1-3培养96h细胞密度
| 接种密度 | 96h细胞密度 | |
| 实施例1 | 2.6×10<sup>5</sup> | 3.9×10<sup>6</sup> |
| 实施例2 | 2.9×10<sup>5</sup> | 4.1×10<sup>6</sup> |
| 实施例3 | 2.6×10<sup>5</sup> | 4.8×10<sup>6</sup> |
最后应说明的是以上各实施例仅用以说明本发明的实施例的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明的实施例进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明的各实施例技术方案的范围。
Claims (9)
1.一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.将去除动静脉的脐带剪碎，充分洗涤；
S2.加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液，置于CO2培养箱内培养，24-48h后更换培养基；
S3.待间充质干细胞融合达70-80％，用胰酶溶液消化；
S4.将间充质干细胞以2.6-2.9×105细胞/ml的细胞密度接种于微载体悬液中进行搅拌悬浮培养；
S5.细胞长满微载体后，去除上层培养基，加入胰蛋白酶溶液孵育，细胞筛网过滤，收集细胞滤液，离心后收集沉淀。
2.根据权利要求1所述的一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤S3中，所述胰酶溶液为0.25%胰酶+0.02%EDTA。
3.根据权利要求1所述的一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤S4中微载体悬液包括无血清培养基和微载体，微载体的密度为2-3mg/ml。
4.根据权利要求3所述的一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：所述微载体为 Cytodex1、Cytodex 2、Cytodex 3、Cytopore或Cytoline。
5.根据权利要求1所述的一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤S4中搅拌悬浮培养的培养条件为：0-12小时进行间歇搅拌，以20-30rpm的搅拌转速搅拌5-10min，停止搅拌15-25min；12-48h以30rmp转速搅拌培养；49-96h以50rmp转速搅拌培养；溶氧为30-50%空气饱和度。
6.根据权利要求1所述的一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤S5中，胰蛋白酶溶液为EDTA-胰蛋白酶溶液，EDTA-胰蛋白酶与间充质干细胞微载体的体积比为2-3：1。
7.根据权利要求1所述的一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤S5中，胰蛋白酶溶液孵育的条件为37℃条件下以150rpm-180rpm培养8-12min。
8.根据权利要求1所述的一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤S5中，细胞筛网为70μm滤网。
9.根据权利要求1所述的一种采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤S5中，离心条件为150-200g离心8-12min。
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Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111690604A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-22 | 杭州原生生物科技有限公司 | 一种msc体外扩增方法 |
| CN113106059A (zh) * | 2021-04-07 | 2021-07-13 | 清华大学深圳国际研究生院 | 一种高迁徙间充质干细胞及其制备方法和应用 |
| CN114561348A (zh) * | 2022-03-02 | 2022-05-31 | 北京圣美细胞生命科学工程研究院有限公司 | 一种用于干细胞大规模培养的可溶性微载体 |
| CN114703129A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-07-05 | 唐颐惠康干细胞产业平台(天津)有限公司 | 一种无酶化3d培养与扩增治疗性间充质干细胞的方法 |
| CN115404208A (zh) * | 2022-09-16 | 2022-11-29 | 深圳市儿童医院 | 一种混合培养包皮获得间充质干细胞的方法及其应用 |
| CN115466724A (zh) * | 2022-10-21 | 2022-12-13 | 唐颐控股(深圳)有限公司 | 一种用于人间充质干细胞扩增中的最优因子值的筛选方法及应用 |
| WO2023005119A1 (zh) * | 2021-07-27 | 2023-02-02 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种用于自动化可持续大规模3d细胞生产系统装置 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106318906A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-01-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种大规模培养人脐带间充质干细胞的方法 |
| WO2017132358A1 (en) * | 2016-01-26 | 2017-08-03 | Kansas State University Research Foundation | Methods for isolation and expansion of umbilical cord mesenchymal stem cells |
| CN109234231A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-01-18 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种规模化扩增间充质干细胞的方法 |
| CN109385397A (zh) * | 2018-11-12 | 2019-02-26 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种培养间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法 |
| CN109706213A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-05-03 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种快速筛选细胞微载体培养系统的方法 |
-
2019
- 2019-11-27 CN CN201911181799.8A patent/CN110804587A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017132358A1 (en) * | 2016-01-26 | 2017-08-03 | Kansas State University Research Foundation | Methods for isolation and expansion of umbilical cord mesenchymal stem cells |
| CN106318906A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-01-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种大规模培养人脐带间充质干细胞的方法 |
| CN109385397A (zh) * | 2018-11-12 | 2019-02-26 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种培养间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法 |
| CN109234231A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-01-18 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种规模化扩增间充质干细胞的方法 |
| CN109706213A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-05-03 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种快速筛选细胞微载体培养系统的方法 |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111690604A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-22 | 杭州原生生物科技有限公司 | 一种msc体外扩增方法 |
| CN113106059A (zh) * | 2021-04-07 | 2021-07-13 | 清华大学深圳国际研究生院 | 一种高迁徙间充质干细胞及其制备方法和应用 |
| CN113106059B (zh) * | 2021-04-07 | 2023-08-15 | 清华大学深圳国际研究生院 | 一种高迁徙间充质干细胞及其制备方法和应用 |
| WO2023005119A1 (zh) * | 2021-07-27 | 2023-02-02 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种用于自动化可持续大规模3d细胞生产系统装置 |
| CN114561348A (zh) * | 2022-03-02 | 2022-05-31 | 北京圣美细胞生命科学工程研究院有限公司 | 一种用于干细胞大规模培养的可溶性微载体 |
| CN114703129A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-07-05 | 唐颐惠康干细胞产业平台(天津)有限公司 | 一种无酶化3d培养与扩增治疗性间充质干细胞的方法 |
| CN115404208A (zh) * | 2022-09-16 | 2022-11-29 | 深圳市儿童医院 | 一种混合培养包皮获得间充质干细胞的方法及其应用 |
| CN115404208B (zh) * | 2022-09-16 | 2024-09-03 | 深圳市儿童医院 | 一种混合培养包皮获得间充质干细胞的方法及其应用 |
| CN115466724A (zh) * | 2022-10-21 | 2022-12-13 | 唐颐控股(深圳)有限公司 | 一种用于人间充质干细胞扩增中的最优因子值的筛选方法及应用 |
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