CN110468087A - 一种简单易制的光合细菌培养基及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种简单易制的光合细菌培养基及其制备方法，每升该培养基包括以下成分：氮磷钾复合肥1.0～2.0g、食盐或粗盐4.0～8.0g、味精0.3～0.5g、红糖0.1～0.5g、复合维生素B0.01～0.03g、酒精75～100ml、补充水至1L。本发明的光合细菌培养基包含适宜的碳源、氮源、微量元素和生长因子，营养全面，可保证光合细菌的正常生长需求，且组分及配制方法简单，原料易得、便宜、来源稳定，特别适用于农户自主活化并扩大培养光合细菌。
Description
技术领域
本发明涉及一种简单易制的光合细菌培养基及其制备方法，属于生物技术领域。
背景技术
光合细菌是一类以光作为能源，能在厌氧光照或好氧黑暗条件下进行光合作用的原核微生物的总称，遍布于土壤、泥潭沼泽、海水、淡水、污泥、植物根系等。其在水体净化、水质监控、饲料添加剂、菌肥等方面发挥着重要作用。基于光合细菌的应用优势，常需要对其进行大规模的培养，但目前用于光合细菌的培养基普遍存在富集时间较长、培养基成分种类较多以及成本较高等不足，极大的限制了光合细菌在生产上的应用。
发明内容
鉴于现有技术的不足，本发明提供一种简单易制的光合细菌培养基及其制备方法。
本发明技术方案如下：
一种简单易制的光合细菌培养基，每升培养基包括以下组分：
补充水至1L。
优选的，每升培养基原料中还含有0.018～0.023g芒果叶、0.015～0.030g金银花和0.0020～0.010g马齿苋。
优选的，所述芒果叶、金银花和马齿苋均为过80～100目筛的粉状药材。
更优选的，金银花和芒果叶通过以下方法加工：
取配方量的金银花和芒果叶，粉碎，过800～100目筛，取粉末，按料液比1:10～20g/L加入质量浓度75～80％的乙醇溶液，以转速5000～8000r/min离心20～30min，取上清，减压浓缩至体积减少70～80％，得金银花与芒果叶混合提取物。
更优选的，所述马齿苋通过以下方法加工：
取配方量的马齿苋，粉碎，过800～100目筛，取粉末，按料液比1:5～10g/L加入0.5～1.0M氢氧化钠，超声处理10～15min，超声功率40～50W，调节pH6.0～6.5，加入质量浓度75～90％的乙醇溶液，以转速3000～5000r/min离心50～60min，取沉淀，60～75℃干燥1～2h，得马齿苋提取物。
本发明的光合细菌培养基适用于沼泽红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、深红红螺菌等多种常见的商用光合细菌菌种的培养。
本发明还提供了光合细菌培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)取水煮沸，冷却至35℃以下备用；
(2)取氮磷钾复合肥、食盐、味精、红糖、复合维生素B、芒果叶、金银花和马齿苋，加入一半量水，混匀；若加入的是中药提取物，则相应将芒果叶、金银花替换为金银花与芒果叶混合提取物，马齿苋替换为马齿苋提取物；
(3)加入酒精和余量水，混匀，即制得光合细菌培养基。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
A.本发明的光合细菌培养基包含适宜的碳源、氮源、微量元素和生长因子，营养全面，可保证光合细菌的正常生长需求，且组分及配制方法简单，原料易得、便宜、来源稳定，特别适用于农户自主活化并扩大培养光合细菌。
B.本发明发现，培养基中加入芒果叶、金银花和马齿苋后，这些中草药不仅具有抑制光合细菌中杂菌生长的作用，且能为光合细菌提供营养物，有效促进光合细菌的快速生长。此外，芒果叶、金银花和马齿苋均为常见中药成分，来源广泛，且在本发明培养基中用量极少，有利于控制生产成本。
C.本发明还进一步发现，将芒果叶、金银花和马齿苋进一步提取获得提取物后再加入至培养基中，可进一步提高光合细菌的生长速度。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
所述氮磷钾复合肥为普通农用氮磷钾复合肥。
所述食盐、味精、红糖为普通食用产品。
所述复合维生素B为药店所售的普通复合维生素B药片。
所述酒精为药店、化工店所售的酒精，纯度75-100％。
实施例1
一种简单易制的光合细菌培养基，每升培养基包括以下组分：
补充水至1L。
光合细菌培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)将粗盐和块状红糖加到水中一起煮沸，然后清除漂浮在表面的固体杂质，冷却至35℃以下备用；
(2)取氮磷钾复合肥、味精、复合维生素B，加入一半量步骤(1)的溶液，混匀；
(3)加入酒精和余量步骤(1)的溶液，混匀，即制得光合细菌培养基。
实施例2
一种简单易制的光合细菌培养基，每升培养基包括以下组分：
补充水至1L。
光合细菌培养基的制备方法：
(1)取水煮沸，冷却至35℃以下备用；
(2)取氮磷钾复合肥、食盐、味精、粉状红糖、复合维生素B，加入一半量水，混匀；
(3)加入酒精和余量水，混匀，即制得光合细菌培养基。
实施例3
一种简单易制的光合细菌培养基，每升培养基包括以下组分：
补充水至1L。
所述芒果叶、金银花和马齿苋均为过80～100目筛的粉状药材。
光合细菌培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)取水煮沸，冷却至35℃以下备用；
(2)取氮磷钾复合肥、食盐、味精、红糖粉、复合维生素B、芒果叶、金银花和马齿苋，加入一半量水，混匀；
(3)加入酒精和余量水，混匀，即制得光合细菌培养基。
实施例4
一种简单易制的光合细菌培养基，每升培养基包括以下组分：
补充水至1L。
所述芒果叶、金银花和马齿苋均为过80～100目筛的粉状药材。
光合细菌培养基的制备方法与实施例3相同。
实施例5
实施例5与实施例4的区别是：
金银花和芒果叶通过以下方法加工：
取配方量的金银花和芒果叶，粉碎，过800目筛，取粉末，按料液比1:10g/L加入质量浓度75％的乙醇溶液，以转速5000r/min离心20min，取上清，减压浓缩至体积减少70％，得金银花与芒果叶混合提取物。
所述马齿苋通过以下方法加工：
取配方量的马齿苋，粉碎，过800目筛，取粉末，按料液比1:5g/L加入0.5M氢氧化钠，超声处理10min，超声功率40W，调节pH6.0，加入质量浓度75％的乙醇溶液，以转速3000r/min离心50min，取沉淀，60℃干燥1h，得马齿苋提取物。
光合细菌培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)取水煮沸，冷却至35℃以下备用；
(2)取氮磷钾复合肥、食盐、味精、红糖粉、复合维生素B、芒果叶与金银花混合提取物和马齿苋提取物，加入一半量水，混匀；
(3)加入酒精和余量水，混匀，即制得光合细菌培养基。
实施例6
实施例6与实施例5的区别是：
金银花和芒果叶通过以下方法加工：
取配方量的金银花和芒果叶，粉碎，过100目筛，取粉末，按料液比1:20g/L加入质量浓度80％的乙醇溶液，以转速8000r/min离心30min，取上清，减压浓缩至体积减少80％，得金银花与芒果叶混合提取物。
所述马齿苋通过以下方法加工：
取配方量的马齿苋，粉碎，过100目筛，取粉末，按料液比1:10g/L加入1.0M氢氧化钠，超声处理15min，超声功率50W，调节pH6.5，加入质量浓度90％的乙醇溶液，以转速5000r/min离心60min，取沉淀，75℃干燥2h，得马齿苋提取物。
光合细菌培养基的制备方法与实施例5相同。
对比例1
一种简单易制的光合细菌培养基，每升培养基包括以下组分：
补充水至1L。
光合细菌培养基的制备方法与实施例2相同。
对比例2
一种简单易制的光合细菌培养基，每升培养基包括以下组分：
补充水至1L。
光合细菌培养基的制备方法与实施例1相同。
对比例3实验室常用培养基1
加冷开水至1L，调节pH至7.4。
对比例4实验室常用培养基2
加冷开水至1L，调节pH至7.4。
复合维生素储备液：维生素B1 0.1g，尼克酸0.1g，生物素1.5mg，加冷开水至100ml。
微量元素储备液：七水硝酸铜0.004g，七水硫酸锌0.024g，二水钼酸钠0.075g，加冷开水至100ml。
试验例1：
将上述实施例和对比例的培养基进行光合细菌培养效果的比较。
按比例配制上述培养基100L，装于120L白色塑料圆桶中，每种培养基设置三个平行。分别接种25％已活化的光合细菌菌种，试验所用的光合细菌菌种为发明人从海南对虾养殖池塘中筛选得到的一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。接种后圆桶盖上透明塑料膜，用橡皮筋扎紧，于室外自然条件下进行培养，于刚接种以及培养的第一天、第二天、第三天和第四天分别取样，用分光光度计测定660nm下的吸光值(OD660)，用于反映菌体的生物量。结果见表1。
表1不同培养基对光合细菌(沼泽红假单胞菌)生长速度的影响
将沼泽红假单胞菌替换为荚膜红假单胞菌(Rhodopseudomonas capsulata)后，测试结果相似。
选择深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum)进行测试，试验方法同上。结果见表2。
表2不同培养基对光合细菌(深红红螺菌)生长速度的影响
表1、2结果显示，实施例1-2的光合细菌生长速度略低于对比例3与对比例4，但也能在4天达到较高的浓度，且其成份易得，制备方法简便，可满足农户的使用。
实施例3-4的培养基中加入芒果叶、金银花和马齿苋，光合细菌生长速度均快于对比例1-4，实施例5-6的培养基中加入金银花与芒果叶混合提取物、马齿苋提取物，光合细菌生长速度进一步加快，可在短期内得到大量光合细菌。
此外，对比表1和表2的结果发现，本发明培养基更加适用于深红红螺菌培养，相同培养条件下，深红红螺菌的浓度高于沼泽红假单胞菌和荚膜红假单胞菌。
以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换。
Claims (8)
1.一种简单易制的光合细菌培养基，其特征在于，每升培养基包括以下组分：
2.根据权利要求1所述的简单易制的光合细菌培养基，其特征在于，每升培养基原料中还含有0.018～0.023g芒果叶、0.015～0.030g金银花和0.0020～0.010g马齿苋。
3.根据权利要求2所述的简单易制的光合细菌培养基，其特征在于，所述芒果叶、金银花和马齿苋均为过80～100目筛的粉状药材。
4.根据权利要求2所述的简单易制的光合细菌培养基，其特征在于，金银花和芒果叶通过以下方法加工：
取配方量的金银花和芒果叶，粉碎，过800～100目筛，取粉末，按料液比1:(10～20)g/L加入质量浓度75～80％的乙醇溶液，以转速5000～8000r/min离心20～30min，取上清，减压浓缩至体积减少70～80％，得金银花与芒果叶混合提取物。
5.根据权利要求4所述的简单易制的光合细菌培养基，其特征在于，马齿苋通过以下方法加工：
取配方量的马齿苋，粉碎，过800～100目筛，取粉末，按料液比1:(5～10)g/L加入0.5～1.0M氢氧化钠，超声处理10～15min，超声功率40～50W，调节pH6.0～6.5，加入质量浓度75～90％的乙醇溶液，以转速3000～5000r/min离心50～60min，取沉淀，60～75℃干燥1～2h，得马齿苋提取物。
6.根据权利要求1所述的简单易制的光合细菌培养基，其特征在于，所述光合细菌包括沼泽红假单胞菌、荚膜红假单胞菌或深红红螺菌。
7.权利要求2所述的光合细菌培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取水煮沸，冷却至35℃以下备用；
(2)取氮磷钾复合肥、食盐、味精、红糖、复合维生素B、芒果叶、金银花和马齿苋，加入一半量水，混匀；
(3)加入酒精和余量水，混匀，即制得光合细菌培养基。
8.权利要求5所述的光合细菌培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取水煮沸，冷却至35℃以下备用；
(2)取氮磷钾复合肥、食盐、味精、红糖、复合维生素B、金银花与芒果叶混合提取物、马齿苋提取物，加入一半量水，混匀；
(3)加入酒精和余量水，混匀，即制得光合细菌培养基。
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