[go: up one dir, main page]

CN110283906A - 人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用 - Google Patents

人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110283906A
CN110283906A CN201910740318.6A CN201910740318A CN110283906A CN 110283906 A CN110283906 A CN 110283906A CN 201910740318 A CN201910740318 A CN 201910740318A CN 110283906 A CN110283906 A CN 110283906A
Authority
CN
China
Prior art keywords
eif4e
molecular marker
atherosclerosis
early
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910740318.6A
Other languages
English (en)
Inventor
陈仁金
王珍珍
鲜雪梅
陈全刚
韩旭峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xuzhou Medical College
Original Assignee
Xuzhou Medical College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xuzhou Medical College filed Critical Xuzhou Medical College
Priority to CN201910740318.6A priority Critical patent/CN110283906A/zh
Publication of CN110283906A publication Critical patent/CN110283906A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4703—Regulators; Modulating activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/323—Arteriosclerosis, Stenosis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种人类早期动脉粥样硬化诊断分子标记物，所述分子标记物为eIF4E。本发明还公开了检测所述分子标记物的方法，通过蛋白质免疫印迹和实时定量荧光PCR检测RAW264.7细胞，分别由脂多糖和白介素4诱导极化成M1和M2型后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达量。本发明通过小鼠模型发现eIF4E对动脉粥样硬化有促进作用，通过病人血液检测发现，eIF4E在动脉粥样硬化病人早期开始表达升高，并随着病情的发展，而逐渐表达升高。所以，eIF4E可作为早期检测人类动脉粥样硬化的分子标记物进行应用。

Description

人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用
技术领域
本发明涉及一种人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用，属于生物技术领域。
背景技术
动脉粥样硬化是一种对人类健康有害的慢性炎症心血管疾病，也是引起老年人死亡的最普遍的原因之一。其特征在于动脉斑块中胆固醇充血的巨噬细胞的持续存在。这些巨噬细胞“泡沫细胞”通过募集额外的白细胞和血管平滑肌细胞引起斑块扩张，并且通过细胞外基质降解蛋白酶和细胞毒性因子的分泌显着促进斑块不稳定性。引起临床事件（即心肌梗塞和中风）的动脉粥样硬化斑块的特征在于巨噬细胞含量较高。巨噬细胞是斑块中最丰富的炎性细胞类型，在病变中，巨噬细胞感知来自其微环境的信号（例如细胞因子或修饰的脂蛋白），这些信号决定了它们的表型极化。巨噬细胞的表型极化是一个随时间变化的动态过程，主要有M1与M2表型，M1型巨噬细胞产生促炎细胞因子等加速动脉粥样硬化发展；M2型巨噬细胞产生抑炎因子抑制动脉粥样硬化发展。目前仍然缺乏一种早期检测人类动脉粥样硬化的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物，能够早期检测人类动脉粥样硬化。
为解决上述技术问题，本发明提供一种人类早期动脉粥样硬化诊断分子标记物，其特征是，所述分子标记物为eIF4E，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明还提供一种用于检测上述分子标记物的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列为：
上游引物：5’-AGGACGGTGGCTGATCACA-3’，如SEQ ID NO.2所示；
下游引物：5’-TCTCTAGCCAGAAGCGATCGA-3’，如SEQ ID NO.3所示。
本发明还提供一种用于检测上述分子标记物的试剂盒，其特征在于，包含上述的引物对。
本发明还提供一种检测上述分子标记物的方法，其特征在于，通过蛋白质免疫印迹和实时定量荧光PCR检测RAW264.7细胞由脂多糖和白介素4诱导极化成M1和M2型后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达量。
进一步地，所述实时定量荧光PCR的具体方法为：用Trizol法提取细胞样品和组织样品总RNA，使用逆转录试剂盒逆转录成cDNA，然后用premix进行qPCR，使用比较Ct值方法计算相对定量，并将相对表达标准化为内参。
本发明还提供一种上述分子标记物在早期检测人类动脉粥样硬化中的应用。
本发明所达到的有益效果：真核翻译起始因子4E(eIF4E)在依赖性蛋白正常合成的起始阶段起重要的调控作用，eIF4E抑制蛋白能够通过各种炎症趋化因子和通路影响巨噬细胞的活动。本发明通过小鼠模型发现eIF4E对动脉粥样硬化有促进作用，通过病人血液检测发现，eIF4E在动脉粥样硬化病人早期开始表达升高，并随着病情的发展，而逐渐表达升高。所以，eIF4E可作为早期检测人类动脉粥样硬化的分子标记物进行应用。
附图说明
图1是Western-blot检测LPS（200ng/μL）和IL-4（20ng/μL）诱导24h后，eIF4E在M1和M2型巨噬细胞中蛋白表达情况（1:未诱导RAW264.7组；2：由LPS诱导24h后的RAW264.7组；3：由IL-4诱导24h后的RAW264.7组；与未诱导RAW264.7组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=3）；
图2是qPCR检测eIF4E在M1和M2型巨噬细胞中mRNA表达差异（1:未诱导RAW264.7组；2：由LPS诱导24h后的RAW264.7组；3：由IL-4诱导24h后的RAW264.7组；与未诱导RAW264.7组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=3）；
图3是Western-blot检测eIF4E在ApoE-/-和正常对照组C57BL/6J小鼠腹主动脉中蛋白表达差异（1:C57BL/6J对照组；2：ApoE-/-组；与C57BL/6J对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=3）；
图4是qPCR检测eIF4E在ApoE-/-和对照组C57BL/6J小鼠腹主动脉中mRNA表达差异（1:C57BL/6J对照组；2：ApoE-/-组；与C57BL/6J对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=3）；
图5是eIF4E基因在病人血液中的表达变化（*P＜0.05，**P＜0.01；n=3）。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1：细胞水平上的研究
本实施例使用RAW264.7细胞系。复苏RAW264.7细胞，接种于含10%FBS和1%青链霉素的无菌DMEM完全培养基中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。根据细胞生长状态传代并更换新鲜DMEM完全培养基。按每孔约1X106个细胞铺于6孔板中，待贴壁后分别加入200ng/μL脂多糖（LPS）、20ng/μL白介素4（IL-4）诱导24h后提取蛋白和RNA备用。
采用Western Blot（蛋白质免疫印迹）和Real-time PCR（实时定量荧光PCR）检测eIF4E在蛋白和mRNA水平上的表达情况。
Western Blot: RAW264.7经LPS和IL-4分别诱导24h后提取蛋白，考马斯亮蓝试剂盒测蛋白总浓度，计算样品浓度（10μg/μL）。80V电压，100g/LSDS-PAGE凝胶电泳2h；100V转膜120min； 50g/L脱脂奶粉室温封闭1h；PBST洗5min/次，共3次；加入eIF4E抗体 (1：500)、内参β-actin(1：5000)一抗，4℃孵育过夜；PBST洗5min/次，共3次；室温孵育二抗（1：5000）1-2h；PBST洗5min/次，共3次；置强化学发光试剂ECL底物中化学反应；暗室曝光显示特异的蛋白信号。成像系统进行图像处理，记录结果。目的条带与内参（β-actin）条带吸光面积积分的比值分析目的蛋白的表达量。
Real-time PCR:用Trizol法提取细胞样品和组织样品总RNA，使用逆转录试剂盒逆转录成cDNA，然后用premix进行qPCR，使用比较Ct值方法（△△Ct）计算相对定量，并将相对表达标准化为GAPDH（内参）。实验在独立的生物学重复中进行（n = 3次独立实验）；每个样品以技术一式三份进行分析。
根据eIF4E和GAPDH的基因编码序列设计PCR扩增的引物，由上海生物工程有限公司合成。具体引物序列如下：
eIF4E:
上游引物：5’-AGGACGGTGGCTGATCACA-3’，
下游引物：5’-TCTCTAGCCAGAAGCGATCGA-3’。
GAPDH：
上游引物：5’-CAACTTTGGCATTGTGGAAGG-3’，
下游引物：5’-ACACATTGGGGGTAGGAACAC-3’。
结果发现：图1与图2为蛋白免疫印迹和荧光PCR检测RAW264.7细胞由LPS和IL-4诱导极化成M1和M2型后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达量。M1型巨噬细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达高于M2型巨噬细胞。由于M1型巨噬细胞通过促炎细胞因子、活性氧、活性氮产物加速免疫细胞内皮下招募和血管壁重塑。M2型巨噬细胞通过抗炎细胞因子转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、IL-10有抗动脉粥样硬化及稳定斑块的作用。判断eIF4E促进了M1型巨噬细胞的形成，起到促炎作用。
实施例2：动物水平上的研究
ApoE-/-鼠为动脉粥样硬化的模型鼠，高脂喂养12周后，出现动脉粥样硬化症状。如图3与图4所示，应用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR检测eIF4E在ApoE-/-和正常对照组C57BL/6J小鼠腹主动脉中蛋白和mRNA表达差异。结果表明ApoE-/-小鼠腹主动脉中eIF4E 蛋白表达高于正常对照组C57BL/6J（P＜0.05）。其mRNA表达也高于对照组（P＜0.05）。
并取高脂喂养12周的ApoE-/-鼠心脏，应用免疫荧光技术检测eIF4E蛋白和mRNA在组织中的表达情况：组织免疫荧光检测eIF4E在ApoE-/-小鼠主动脉窦部中与M1型巨噬细胞（CD86：M1型巨噬细胞标志物）和M2型巨噬细胞（CD206：M2型巨噬细胞标志物）中的共定位表达情况。结果表明eIF4E与CD86的共定位比eIF4E与CD206的共定位表达多。
从以上结果得出，eIF4E在动脉粥样硬化发展中表达显著升高，促进了动脉粥样硬化的形成。
实施例3：动脉粥样硬化患者血液检测结果
如图5所示，本实验随机抽取了16位病人在动脉粥样硬化形成早期到病人病情加重后的血样，同时抽取了8位正常人的血样作为阴性对照，通过荧光定量PCR技术检测了eIF4E基因的表达变化，结果显示eIF4E基因随着病人病情的加重而表达升高。因此eIF4E基因可作为早期发现动脉粥样硬化病人一个分子标记物进行应用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 徐州医科大学
<120> 人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用
<130> wy2019081202
<141> 2019-08-12
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5031
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
gagcggttgt gcgatcagat cgatctaaga tggcgactgt ggaaccgtgg gagattttaa 60
tgctttgtca atgtactagt attgccgcgt gaactcttag ggacagtggc ttgccactgt 120
aatgtctgtt ctcttcattt caagtgtcac tgaaggcagg gatatctgac tccttataga 180
aaggaaacca cccctaccac taatccccca cctgcagaag aggaaaaaac agagtctaat 240
caggaggttg ctaacccaga gcactatatt aaacaccctc tacagaacag gtgggcactc 300
tggtttttta aaaatgataa aagcaaaact tggcaagcaa accttcgatt gatctctaag 360
tttgatactg ttgaagactt ttgggctcta tacaaccata tccagttgtc tagtaattta 420
atgcctggct gtgactactc actttttaag gacgggattg agcctatgtg ggaagatgag 480
aaaaacaaac gaggaggacg gtggctgatc acactgaaca agcagcagag acggagtgac 540
ctcgatcgct tctggctaga gacactgctg tgccttattg gagaatcttt cgatgactac 600
agtgatgatg tgtgtggagc tgttgttaat gttagagcta aaggtgataa gatagcaata 660
tggactactg agtgtgaaaa cagagatgca gtcacacaca tagggagggt atacaaggaa 720
aggttaggac ttcctccgaa gatagtgatt ggttatcagt cccacgcaga cacagctaca 780
aagagcggct ccaccactaa aaataggttt gttgtttaag aagacacctt ctgagtattc 840
tcacaggaga ctgcgtcacg caatcgagat tgggagctga accaaagcct catcaaagca 900
gagtggactg cactgaagtt gattccatcc aagtgttgct aagatataag agaagtctca 960
ttcgcctttg tcttgtactt ctgtgttcat tctcctcccc cacccccaat ttttgctagt 1020
gtgtccacta tcccaatcaa agaattacag tatacgtcac cccagaaccc gcagatgtgt 1080
tcctggcccg ctctgtaaca gccggttaga attaccatga cacacacatt tgcctttcca 1140
cagtattcga aaaagaactt gcatttctat taccttagca ggaaagatct ggttttgctc 1200
cactccatgc aggagcggac tttgctggtg tgagagtctg agtacagctt tctagcaacc 1260
ttctgtttcc tttcacagca ttgtccttgc tgtcctcttg ctgatggctg ctagatttaa 1320
tttatttgct tccctccttg ataacattag tgattctgat ttcagttttt catttgtttt 1380
gcttttgttt ttttcctcgt gtaacattgg tgaaggatcc aggaatatga cagaaaggtg 1440
gaataaacat taaatttgtg cattctttgg taattttttt gttttttgta actacaaagc 1500
tttgctacaa atttatgcat ttcattcaaa tcagtgatct atgtctgtgt gatccctaaa 1560
cataattgtg gactataaaa atgtaacacc ataattacat tcctaactag aattagtatg 1620
tctgcctttg tatctctatg ctgtacttta acactttgta ttcttaggtt attttgcttt 1680
ggttacaatg gctcaagtag aaaagcggtc ccatccatat taagacagtg tacaaaactg 1740
taaataaaat gtgtacagtg aattgtcttt tagacaacta gatttgtcct ttatttctcc 1800
atctctagaa ggaatctgta cttcgtattg caaggcagtc tcttgtgtct tcttagagtg 1860
tcttccccat gcacagcctc agtttggagc actagtttat tatgtttatt acaattttta 1920
ataaattgac taggtagtat cacatgtaat tacactgatg tggctatctt tttaataaag 1980
ttaaggcaca gttgctcagt cctaggttga gtgatggact ttgactatgt tacagttgat 2040
gaggattggg gttttggtgc atcaccattc ggtaggaaca gcggctagaa actgattgtt 2100
gggtttaaga tgtttttact taatggccag aaaattagcg taaggaaagt atatagagaa 2160
acatgcgtta gggacattag tgttactatc tgaataaaac acaataaaca agtattaaga 2220
actacttata ttggtcaatt gttgcagtat ggttttctgt aaacttgaaa ccttgatcta 2280
ttctttgtat catttaaagc aaacatgaag acattttgtc tgcagtacgt aattgtatag 2340
ttcagatcct gtgagatgag gtgtggctgt taacgccgaa gggtaagctg aactgtgggt 2400
agcagagtgg aaaccattgg ctgagagaaa aatgctcttt aagtggtggt tgttatgaat 2460
tcacactgat aacttgataa agatccttat aaaatacata cggaattaat agcattgctc 2520
ttattatgta cgtcaagaat gtataaccgc ctgctcttgt tgtcacagat aactccctgt 2580
tcagtgcttt ggaaatagcg atgctcacga tctcagcatt ctgtacccta catctactgt 2640
gtggatcatt gagagatctt ttgacattgc aacatgatat ggtctatgtt gggctgcatt 2700
cctggctgtc ttgtatgaga ccccggttgg ctccctgaag ctgattgata cagtgtacag 2760
gcatgaaggt ggctgatgag gctttcttac caacatgtgg gattctagta gttgtatcta 2820
ttagagatta attctcatat tccttttcat tcatttgtaa gaagtatcaa ctttagaagt 2880
gaaaaaagaa tcataaaata cagtttttaa agttaaaaac tttgagtagg atgtatcttt 2940
gttatagaaa gttgaaataa tttgtaatgg atgaataatt ataatggaaa aatgaaaaaa 3000
ctggacagaa agatttagca tatactatat aggaattaat aactacagca cttacataat 3060
aagttaggca gtgttttatt cttgtcacgt gttcataata tatgtaggta tttctccctt 3120
ttataaatga atgagaattg ggatttggtg tatcaccatt tgatacatta agatttaaat 3180
aatttcatag cttctgtcag atacagagta tgaacttgtg aataattctt aatcacataa 3240
atcacacact ccctgaagat gtaataaata ggttgtagta cattagattc taaattccag 3300
ttagactcag ctacaagcta ggcatataaa cagccagcaa agctagtcac aaataaccat 3360
ggagactaag gtacagggtt aaagtatgaa tgtttttatt ggtgctctaa atcaccatct 3420
aagatagatg gtagtgttca acttgacaga aatagacgtt cttgaatgct gctggagttg 3480
catttaaaag gttaaattta gtaaatggcc tgtatggtgg gtacatatct gtaatcacag 3540
tgctgagatg gaatgaccat aaggccaacc tgggttacgt aaacccttta tcaaaaagac 3600
aaggaccagg aatgtgcttc attgagagtg cttgccaagc atgtactatg ttctgtgtgt 3660
gattgccagc actgtcagga agatgaggtg tagtgttggg tctctgtgta tcacgtttct 3720
catgacaccc agctttgtat tctcagtgtg gagtattatg gggcaagtgg atagatattc 3780
tcatttggca ccagccctct aaatacacat caaattgatg agtatacctt gaggccagcc 3840
tggtccataa tgctagttct aggacaacta aggctacaca aaccctgtct cgaaacattg 3900
aatccaaatg aatcccactg tgggaggatg cctgaaagcc agtgcataca aatgccactt 3960
tgtaacatcc cctcccctcc agctgtggtc atgccagtcg tgggtttggt ttggtttggt 4020
tttttaatgt gtatgcatgc atgttttgta tcgtgtggtg cctgaggtgg tcagcagagg 4080
gcatgaaatc cctgcaactg aagttaatta cttagcacag ttgtgagcca ccatgtgagt 4140
gctgggagtc aactggatct tacacaaaac caacgactct gcttactgca gagccattac 4200
tccagcccca tggctcttgt ttatgtgatg gtatgttcat ttgtttttca tgacaggctt 4260
tctataagcc caggctgtcc tggaactcac tgtagactag gctgggcacc agaataagtg 4320
ctgggattaa aggttgtgcc cccaacactg cccggtagta ctttgatttt ctttctttgg 4380
gggagagggg agcttggtgt agtggtgcct gcctttaatc ccagcactca ggaggtagaa 4440
acaggcacag cctgatctac agaggctagc ctgatctaca gagctatatc taggacagcc 4500
agggctatac acagattata taaattttgt tattttgaga caggttttct ctgtagcctt 4560
ggctgttctg gaactcattc tgtagaccag gctgagcaac tgcctctgcc tccagagtgc 4620
tgggattaaa ggtgttcacc accactaccc ctacccagtt ttgtattctc agattaagac 4680
tccatggtct aaatgtctag atggcaataa atatttaaat caatgtaaaa atcacttgta 4740
gaaaaaacga aaaacaccgt cttaaaactc aaatgggaga acttgcttat tacctgtatt 4800
ttttgtgggt ttttcttttt cttttgagct taggttctac acagcccaga atggctttaa 4860
acctgcctca gcctcccaaa tgttgggatt acagctgtgt gcctgcttgt ttgttccttt 4920
tgagacctgg tgtcgtttca tatctccggc tgtaatggaa gtcagatcca tcttattgca 4980
gaggattgga attaaatgcg ttcactaccg aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 5031
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aggacggtgg ctgatcaca 19
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tctctagcca gaagcgatcg a 21

Claims (6)

1. 人类早期动脉粥样硬化诊断分子标记物，其特征是，所述分子标记物为eIF4E，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.用于检测权利要求1所述的分子标记物的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列为：
上游引物：5’-AGGACGGTGGCTGATCACA-3’，如SEQ ID NO.2所示；
下游引物：5’-TCTCTAGCCAGAAGCGATCGA-3’，如SEQ ID NO.3所示。
3.用于检测权利要求1所述的分子标记物的试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述的引物对。
4.检测权利要求1所述的分子标记物的方法，其特征在于，通过蛋白质免疫印迹和实时定量荧光PCR检测RAW264.7细胞由脂多糖和白介素4诱导极化成M1和M2型后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达量。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述实时定量荧光PCR的具体方法为：用Trizol法提取细胞样品和组织样品总RNA，使用逆转录试剂盒逆转录成cDNA，然后用premix进行qPCR，使用比较Ct值方法计算相对定量，并将相对表达标准化为内参。
6.权利要求1所述的分子标记物在早期检测人类动脉粥样硬化中的应用。
CN201910740318.6A 2019-08-12 2019-08-12 人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用 Pending CN110283906A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910740318.6A CN110283906A (zh) 2019-08-12 2019-08-12 人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910740318.6A CN110283906A (zh) 2019-08-12 2019-08-12 人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110283906A true CN110283906A (zh) 2019-09-27

Family

ID=68025147

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910740318.6A Pending CN110283906A (zh) 2019-08-12 2019-08-12 人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110283906A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114152752A (zh) * 2021-08-12 2022-03-08 南京市浦口医院 CFIm25在检测或治疗动脉粥样硬化中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1852979A (zh) * 2003-09-18 2006-10-25 Isis药物公司 eIF4E表达的调节
CN109055544A (zh) * 2018-09-28 2018-12-21 新乡医学院 动脉粥样硬化分子标志物及其应用
CN109182503A (zh) * 2018-09-28 2019-01-11 新乡医学院 动脉粥样硬化分子标志物及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1852979A (zh) * 2003-09-18 2006-10-25 Isis药物公司 eIF4E表达的调节
CN109055544A (zh) * 2018-09-28 2018-12-21 新乡医学院 动脉粥样硬化分子标志物及其应用
CN109182503A (zh) * 2018-09-28 2019-01-11 新乡医学院 动脉粥样硬化分子标志物及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KAROLINA ANDERSSON，ET AL: "Posttranscriptional regulation of TNFa expression via eukaryotic initiation factor 4E (eIF4E) phosphorylation in mouse macrophages", 《CYTOKINE》 *
MUS MUSCULUS EUKARYOTIC TRANSLATION INITIATION FACTOR 4E (EIF4E): "Jeong SJ,et al.", 《NCBI REFERENCE SEQUENCE: NM_001313980.1》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114152752A (zh) * 2021-08-12 2022-03-08 南京市浦口医院 CFIm25在检测或治疗动脉粥样硬化中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mizoguchi et al. Colonic epithelial functional phenotype varies with type and phase of experimental colitis
Zhou et al. Metformin regulates tight junction of intestinal epithelial cells via MLCK-MLC signaling pathway.
CN110484615B (zh) lncRNA在病毒性心肌炎中调控巨噬细胞极化的应用
Zhang et al. Macrophage transcriptional responses following in vitro infection with a highly virulent African swine fever virus isolate
Kuan et al. Identifying the regulatory element for human angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) expression in human cardiofibroblasts
Zhang et al. Long non‐coding RNA AK085865 ablation confers susceptibility to viral myocarditis by regulating macrophage polarization
Justice et al. Ragweed-induced expression of GATA-3, IL-4, and IL-5 by eosinophils in the lungs of allergic C57BL/6J mice
JP2003524366A (ja) ６４個のヒト分泌タンパク質
CN110283906A (zh) 人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用
Wei et al. ATG12 is involved in the antiviral immune response in large yellow croaker (Larimichthys crocea)
Glineur et al. Novel pneumoviruses (PnVs): evolution and inflammatory pathology
CN112691193A (zh) 用于治疗扩张型心肌病的药物及筛选方法及用途
CN110129272B (zh) 稳定表达map3k8蛋白的pk-15细胞株及其构建和应用
CN114317720B (zh) hsa_circ_0066715基因的应用及其检测方法
CN109097358B (zh) 一种lncRNA在预防或治疗高血压中的应用
EP4163379A1 (en) Method for identifying and/or regulating senescence
CN110628728A (zh) 靶向癌症的重组溶瘤基因-腺病毒及其构建方法和应用
CN110257508A (zh) 一种在衰老心肌缺血后处理缺血再灌注损伤治疗用miRNA标志物及其应用
TW200539864A (en) Oxydecahydronaphthalene modulators of HM74
CN116492463B (zh) Cd155分子在肝纤维化领域中的应用
CN113876937B (zh) Pzp的用途以及包括pzp的用于抵抗肥胖的药物组合物
EP4197595A1 (en) Use of biomarker or biomarkers combination in preparing a diagnostic reagent for fulminant myocarditis and a drug for fulminant myocarditis
CN116178533B (zh) 一种广谱中和SARS-CoV-2的中和抗体P5S-1D8及其应用
CN117018041B (zh) 肠乳酸杆菌或视黄酸在调节肠道免疫及炎症状态产品制备中的应用
CN116254340B (zh) 胸主动脉瘤生物标记物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190927