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CN110256408B - 一种二芳基吡唑化合物及包含该化合物的组合物及其用途 - Google Patents

一种二芳基吡唑化合物及包含该化合物的组合物及其用途 Download PDF

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CN110256408B CN201910613070.7A CN201910613070A CN110256408B CN 110256408 B CN110256408 B CN 110256408B CN 201910613070 A CN201910613070 A CN 201910613070A CN 110256408 B CN110256408 B CN 110256408B
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Abstract

本发明提供了一种二芳基吡唑化合物及包含该化合物的组合物及其用途，所述的二芳基吡唑化合物如式(I)所示化合物或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物。本发明化合物和组合物可用于治疗BRAF激酶突变的增殖性疾病且具有更优良的药代动力学性质。

Description

一种二芳基吡唑化合物及包含该化合物的组合物及其用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种二芳基吡唑化合物及包含该化合物的组合物及其用途。更具体而言，本发明涉及某些氘取代的(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-异丙基 -1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基)氨基甲酸甲酯，这些氘取代的化合物及其组合物可用于治疗 BRAF激酶突变的增殖性疾病，且这些氘取代的化合物具有更优良的药代动力学性质和/或药效学性质。
背景技术
促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路介导许多协调控制细胞增殖、存活、分化与迁移的效应分子的活性。细胞被例如生长因子、细胞因子或激素导致血浆细胞膜相关Ras与GTP结合并借此被激活以招募Raf。这种相互作用诱导了Raf的激酶活性，导致MAPK/ERK(MEK)的直接磷酸化，其反过来磷酸化细胞外的信号相关激酶(ERK)。活化的ERK则磷酸化一系列效应分子，例如，激酶、磷酸酶、转录因子和细胞骨架蛋白。因此，Ras-Raf-MEK-ERK信号传导通路传输来自细胞表面受体的信号至细胞核，并且在细胞增殖与存活中是基本的。
根据Raf与上游调节因子Ras相互作用的能力，Raf具有三个不同的同种型，即A-Raf、B-Raf 和C-Raf。Ras基因之一的激活突变可在约20％的所有肿瘤中观察到，且Ras-Raf-MEK-ERK通路在约30％的所有肿瘤中被激活。B-Raf激酶结构域中激活突变发生于约70％黑素瘤、40％乳头状癌、 30％低度卵巢癌和10％结肠直肠癌。大多数B-Raf突变发现于激酶结构域中，其中单一取代(V600E) 占80％。突变的B-Raf蛋白质通过针对MEK的升高的激酶活性或通过激活C-Raf，来激活 Raf-MEK-ERK途径。B-Raf抑制剂通过阻断这些癌细胞中的信号级联并最终诱发细胞停滞和/或死亡而抑制涉及B-Raf激酶的细胞。
Encorafenib(又名LGX-818，化学名称为(S)-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基)氨基甲酸甲酯，其具有以下结构式)是诺华和Array制药公司共同研发的一种新型口服BRAF抑制剂，可以抑制B-Raf激酶突变(如V600突变，即氨基酸 600处谷氨酸突变)导致的MAPK通路活化，使用Encorafenib单独或联合MEK抑制剂Binimetinib 治疗晚期BRAFv600突变型黑素瘤患者。2018年6月27日，FDA批准Encorafenib(商业名BRAFTOVI) 胶囊联合Binimetinib(商业名：MEKTOVI)片剂用于治疗带有BRAFV600E或BRAFV600K突变的黑素瘤患者。
Figure RE-GDA0002143247900000021
已知较差的吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)性质是导致许多候选药物临床试验失败的主要原因。当前上市的许多药物也由于较差的ADME性质限制了它们的应用范围。药物的快速代谢会导致许多本来可以高效治疗疾病的药物由于过快的从体内代谢清除掉而难以成药。频繁或高剂量服药虽然有可能解决药物快速清除的问题，但该方法会带来诸如病人依从性差、高剂量服药引起的副作用及治疗成本上升等问题。另外，快速代谢的药物也可能会使患者暴露于不良的毒性或反应性代谢物中。
虽然Encoratenib作为BRAF抑制剂能有效治疗BRAF V600突变的黑素瘤，但是该领域仍存在严重的临床未满足需求，而且Encoratenib化合物为一种在弱酸性和中性pH下水溶性较差的II类 BCS化合物，口服利用度很差，故发现具有治疗BRAF激酶突变疾病且具有很好的口服生物利用度且有成药性的新型化合物还是具有挑战性的工作。因此，本领域仍需开发对适用作BRAF抑制剂具有选择性抑制活性和/或更好地药效学/药代动力学的化合物，本发明提供了这样的化合物。
发明内容
针对以上技术问题，本发明公开了一种新型的氘取代的二芳基吡唑化合物及其包含该化合物的组合物及其用途，其具有更好地BRAF激酶抑制活性，以及对于V600突变(例如V600E和V600K) 具有的更高的抑制活性和选择性，同时具有更低的副作用、更好地药代动力学性能，可用于治疗 BRAF激酶突变增殖性疾病。
如本文所用，术语“本发明化合物”指式(I)-(III)(包括子集，如式(Ia))所示的化合物。该术语还包括其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物。
对此，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一方面，提供了式(I)化合物：
Figure RE-GDA0002143247900000031
其中，
Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自独立地选自氢、氘、卤素或三氟甲基；
R1、R2、R3和R4各自独立地选自氢或氘；
X1、X2、X3、X4和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D；
附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子；
或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物。
在另一方面，本发明提供了含有本发明化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在具体实施方案中，本发明化合物以有效量提供在所述药物组合物中。在具体实施方案中，本发明化合物以治疗有效量提供。在具体实施方案中，本发明化合物以预防有效量提供。在具体实施方案中，所述的药物组合物还含有另外的治疗剂，所述的另外的治疗剂选自抗癌化合物、镇痛剂、止吐剂、抗抑郁剂和抗炎剂。在具体实施方案中，所述的药物组合物还含有另外的治疗剂，所述的另外的治疗剂选自不同的BRAF抑制剂、MEK1/2抑制剂、PI3K抑制剂、CDK4/6抑制剂、c-Met抑制剂、EGFR 抑制剂、FGFR抑制剂、MAPK抑制剂或ERK抑制剂。
在另一方面，本发明提供了一种如上所述的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：将药学上可接受的赋形剂与本发明化合物进行混合，从而形成药物组合物。
在另一方面，本发明还涉及提供一种治疗BRAF激酶突变的增殖性疾病的方法，该方法包括向该受试者给药治疗有效量的本发明化合物或药物组合物。在具体实施方案中，BRAF突变是V600 突变。在具体实施方案中，所述的增殖性疾病是特征为BRAF V600突变的黑素瘤或特征为BRAF V600突变的结直肠癌。在具体实施方案中，口服、皮下、静脉内或肌肉内给药所述化合物。在具体实施方案中，长期给药所述化合物。
由随后的具体实施方式、实施例和权利要求，本发明的其它目的和优点将对于本领域技术人员显而易见。
定义
本文中，如无特别说明，“氘代”指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代；氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语“一个或多个氘代的”与“一次或多次氘代”可互换使用。
本文中，如无特别说明，“非氘代的化合物”是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量(0.015％) 的化合物。
术语“药学上可接受的盐”是指，在可靠的医学判断范围内，适合与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、变态反应等等，并且与合理的益处/危险比例相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域是众所周知的。例如，Berge等人在J.PharmaceuticalSciences(1977)66:1-19中详细描述的药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适无机和有机酸和碱的盐。
本发明化合物可以是无定形或结晶形式。此外，本发明化合物可以以一种或多种结晶形式存在。因此，本发明在其范围内包括本发明化合物的所有无定形或结晶形式。术语“晶型”是指化学药物分子的不同排列方式，一般表现为药物原料在固体状态下的存在形式。一种药物可以多种晶型物质状态存在，同一种药物的不同晶型，在体内的溶解和吸收可能不同，从而会对制剂的溶出和释放产生影响。
术语“晶型”是指化学药物分子的不同排列方式，一般表现为药物原料在固体状态下的存在形式。一种药物可以多种晶型物质状态存在，同一种药物的不同晶型，在体内的溶解和吸收可能不同，从而会对制剂的溶出和释放产生影响。
如本文所用，术语“受试者”包括但不限于：人(即，任何年龄组的男性或女性，例如，儿科受试者(例如，婴儿、儿童、青少年)或成人受试者(例如，年轻的成人、中年的成人或年长的成人)) 和/或非人的动物，例如，哺乳动物，例如，灵长类(例如，食蟹猴、恒河猴)、牛、猪、马、绵羊、山羊、啮齿动物、猫和/或狗。在一些实施方案中，受试者是人。在另一些实施方案中，受试者是非人动物。
“疾病”、“障碍”和“病症”在本文中可以互换地使用。
除非另作说明，否则，本文使用的术语“治疗”包括受试者患有具体疾病、障碍或病症时所发生的作用，它降低疾病、障碍或病症的严重程度，或延迟或减缓疾病、障碍或病症的发展(“治疗性治疗”)，还包括受试者开始患有具体疾病、障碍或疾病之前发生的作用(“预防性治疗”)。
通常，化合物的“有效量”是指足以引起目标生物反应的数量。正如本领域普通技术人员所理解的那样，本发明化合物的有效量可以根据下列因素而改变：例如，生物学目标、化合物的药物动力学、所治疗的疾病、给药模式以及受试者的年龄健康情况和症状。有效量包括治疗和预防性治疗有效量。
除非另作说明，否则，本文使用的化合物的“治疗有效量”是在治疗疾病、障碍或病症的过程中足以提供治疗有益处的数量，或使与疾病、障碍或病症有关的一或多种症状延迟或最小化。化合物的治疗有效量是指单独使用或与其他疗法联用的治疗剂的数量，它在治疗疾病、障碍或病症的过程中提供治疗益处。术语“治疗有效量”可以包括改善总体治疗、降低或避免疾病或病症的症状或病因、或增强其他治疗剂的治疗效能的数量。
除非另作说明，否则，本文使用的化合物的“预防有效量”是足以预防疾病、障碍或病症的数量，或足以预防与疾病、障碍或病症有关的一或多种症状的数量，或防止疾病、障碍或病症复发的数量。化合物的预防有效量是指单独使用或与其它药剂联用的治疗剂的数量，它在预防疾病、障碍或病症的过程中提供预防益处。术语“预防有效量”可以包括改善总体预防的数量，或增强其它预防药剂的预防效能的数量。
“组合”以及相关术语是指同时或依次给药本发明的治疗剂。例如，本发明化合物可以与另一治疗剂以分开的单位剂型同时或依次给药，或与另一治疗剂一起呈单一单位剂型同时给药。
具体实施方式
化合物
在一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物：
Figure RE-GDA0002143247900000051
Figure RE-GDA0002143247900000061
其中，
Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自独立地选自氢、氘、卤素或三氟甲基；
R1、R2、R3和R4各自独立地选自氢或氘；
X1、X2、X3、X4和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D；
附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在一具体实施方案中，氘在氘代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量0.015％，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
在另一具体实施方案中，式(I)化合物中至少含有一个氘原子，更佳地至少含有二个氘原子，更佳地至少含有三个氘原子，更佳地至少含有四个氘原子，更佳地至少含有五个氘原子，更佳地至少含有六个氘原子，更佳地至少含有七个氘原子，更佳地至少含有八个氘原子，更佳地至少含有九个氘原子，更佳地至少含有十个氘原子，更佳地至少含有十一个氘原子，更佳地至少含有十二个氘原子，更佳地至少含有十三个氘原子，更佳地至少含有十四个氘原子，更佳地至少含有十五个氘原子，更佳地至少含有十六个氘原子，更佳地至少含有十七个氘原子，更佳地至少含有十八个氘原子，更佳地至少含有十九个氘原子，更佳地至少含有二十个氘原子，更佳地至少含有二十一个氘原子，更佳地至少含有二十二个氘原子，更佳地至少含有二十三个氘原子，更佳地至少含有二十四个氘原子。
在另一具体实施方案中，“Y1、Y2、Y3、Y4和Y5各自独立地选自氢、氘、卤素或三氟甲基”包括Y1选自氢、氘、卤素或三氟甲基，Y2选自氢、氘、卤素或三氟甲基，Y3选自氢、氘、卤素或三氟甲基，以此类推，直至Y5选自氢、氘、卤素或三氟甲基的技术方案。更具体地，包括Y1为氢、 Y1为氘、Y1为卤素(F、Cl、Br或I)或Y1为三氟甲基，Y2为氢、Y2为氘、Y2为卤素(F、Cl、 Br或I)或Y2为三氟甲基，Y3为氢、Y3为氘、Y3为卤素(F、Cl、Br或I)或Y3为三氟甲基，以此类推，直至Y5为氢、Y5为氘、Y5为卤素(F、Cl、Br或I)或Y5为三氟甲基的技术方案。
在另一具体实施方案中，“R1、R2、R3和R4各自独立地选自氢或氘”包括R1选自氢或氘，R2选自氢或氘，R3选自氢或氘，R4选自氢或氘的技术方案。更具体地，包括R1为氢或R1为氘，R2为氢或R2为氘，R3为氢或R3为氘，R4为氢或R4为氘的技术方案。
在另一具体实施方案中，“X1、X2、X3、X4和X5独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D”包括X1选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，X2选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，X3选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，以此类推，直至X5选自CH3、CD3、CHD2或CH2D的技术方案。更具体地，包括X1为 CH3、X1为CD3、X1为CHD2或X1为CH2D，X2为CH3、X2为CD3、X2为CHD2或X2为CH2D，X3为CH3、X3为CD3、X3为CHD2或X3为CH2D，以此类推，直至X5为CH3、X5为CD3、X5为 CHD2或X5为CH2D的技术方案。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，Y1-Y5各自独立地选自氢或氘，且R1-R4、 X1-X5如上所定义，附加条件是所述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，Y1-Y5各自独立地选自氢，且R1-R4、X1-X5如上所定义，附加条件是所述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，Y1-Y5各自独立地选自氢，且R1-R4各自独立地选自氢或氘，X1-X5各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是所述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，Y1-Y5各自独立地选自氢，X1为CD3，X2-X5各自独立地选自CH3或CD3，R1-R4各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，Y1-Y5各自独立地选自氢，X2为CD3，X1、 X3-X5各自独立地选自CH3或CD3，R1-R4各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，Y1-Y5各自独立地选自氢，X3为CD3，X1、 X2、X4和X5各自独立地选自CH3或CD3，R1-R4各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，Y1-Y5各自独立地选自氢，X4为CD3，X1-X3和X5各自独立地选自CH3或CD3，R1-R4各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，Y1-Y5各自独立地选自氢，X5为CD3，X1-X4各自独立地选自CH3或CD3，R1-R4各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，R1是氘；在另一具体实施方案中，R1是氢。
在另一具体实施方案中，R2是氘；在另一具体实施方案中，R2是氢。
在另一具体实施方案中，R3是氘；在另一具体实施方案中，R3是氢。
在另一具体实施方案中，R2和R3是氘；在另一具体实施方案中，R2和R3是氢。
在另一具体实施方案中，R4是氘；在另一具体实施方案中，R4是氢。
在另一具体实施方案中，X1是CH3；在另一具体实施方案中，X1是CD3。
在另一具体实施方案中，X2是CH3；在另一具体实施方案中，X2是CD3。
在另一具体实施方案中，X3是CH3；在另一具体实施方案中，X3是CD3。
在另一具体实施方案中，X4是CH3；在另一具体实施方案中，X4是CD3。
在另一具体实施方案中，X5是CH3；在另一具体实施方案中，X5是CD3。
在另一具体实施方案中，R2和R3是氘，X2是CD3；在另一具体实施方案中，R2和R3是氢， X2是CH3。
在另一具体实施方案中，R4是氘，X3和X4是CD3；在另一具体实施方案中，R4是氢，X3和 X4是CH3。
在另一实施方案中，本发明涉及式(Ia)化合物：
Figure RE-GDA0002143247900000081
其中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自氢或氘；
X1、X2、X3、X4和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D；
附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子；
或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物。
在另一实施方案中，本发明涉及式(II)或(III)化合物：
Figure RE-GDA0002143247900000091
其中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自氢或氘；
X1、X2、X3、X4和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D；
附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子；
或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X5是CH3，R1-R4各自独立地选自氢或氘，X1-X4各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中， X5是CH3，R1-R4各自独立地选自氢或氘，X1-X4各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1是氢，R2-R4各自独立地选自氢或氘，X1-X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1是氢，R2-R4各自独立地选自氢或氘，X1-X5各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1是氢，X5是CH3， R2-R4各自独立地选自氢或氘，X1-X4各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1是氢，X5是CH3，R2-R4各自独立地选自氢或氘，X1-X4各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R2和R3是氢，X2是 CH3，R1和R4各自独立地选自氢或氘，X1和X3-X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R2和R3是氢，X2是CH3，R1和R4各自独立地选自氢或氘，X1和X3-X5各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R2和R3是氢，X2和 X5是CH3，R1和R4各自独立地选自氢或氘，X1、X3和X4各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或 CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R2和R3是氢，X2和X5是CH3，R1和R4各自独立地选自氢或氘，X1、 X3和X4各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1-R3是氢，X2是CH3， R4各自独立地选自氢或氘，X1和X3-X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III) 的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1-R3是氢，X2是CH3，R4各自独立地选自氢或氘，X1和X3-X5各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1-R3是氢，X2和 X5是CH3，R4各自独立地选自氢或氘，X1、X3和X4各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1-R3是氢，X2和X5是CH3，R4各自独立地选自氢或氘，X1、X3和X4各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R4是氢，X3和X4是 CH3，R1-R3各自独立地选自氢或氘，X1、X2和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R4是氢，X3和X4是CH3，R1-R3各自独立地选自氢或氘，X1、X2和X5各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R4是氢，X3-X5是 CH3，R1-R3各自独立地选自氢或氘，X1和X2各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R4是氢，X3-X5是CH3，R1-R3各自独立地选自氢或氘，X1和X2各自独立地选自 CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1和R4是氢，X3和 X4是CH3，R2和R3各自独立地选自氢或氘，X1、X2和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或 CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1和R4是氢，X3和X4是CH3，R2和R3各自独立地选自氢或氘，X1、 X2和X5各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1和R4是氢，X3-X5是CH3，R2和R3各自独立地选自氢或氘，X1和X2各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1和R4是氢，X3-X5是CH3，R2和R3各自独立地选自氢或氘，X1和X2各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
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在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R2-R4是氢，X2-X5是CH3，R1各自独立地选自氢或氘，X1各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III) 的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R2-R4是氢，X2-X5是CH3，R1各自独立地选自氢或氘，X1各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1-R4是氢，X2-X4是CH3，X1和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1-R4是氢， X2-X4是CH3，X1和X5各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1-R4是氢，X2-X5是CH3，X1各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，R1-R4是氢，X2-X5是CH3，X1各自独立地选自CH3或CD3，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，R1-R4各自独立地选自氢或氘，X2-X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，R1-R4各自独立地选自氢或氘，X2-X5各自独立地选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X5是CH3， R1-R4各自独立地选自氢或氘，X2-X4各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X5是CH3，R1-R4各自独立地选自氢或氘，X2-X4各自独立地选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，R1是氢， R2-R4各自独立地选自氢或氘，X2-X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，R1是氢，R2-R4各自独立地选自氢或氘，X2-X5各自独立地选自CH3或CD3。
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在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2是CH3， R2和R3是氢，R1和R4各自独立地选自氢或氘，X3-X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2是CH3， R2和R3是氢，R1和R4各自独立地选自氢或氘，X3-X5各自独立地选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2和X5是CH3，R2和R3是氢，R1和R4各自独立地选自氢或氘，X3-X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2和X5是CH3，R2和R3是氢，R1和R4各自独立地选自氢或氘，X3-X5各自独立地选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2是CH3， R1-R3是氢，R4各自独立地选自氢或氘，X3-X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2是CH3，R1-R3是氢，R4各自独立地选自氢或氘，X3-X5各自独立地选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2和X5是CH3，R1-R3是氢，R4各自独立地选自氢或氘，X3和X4各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2和X5是 CH3，R1-R3是氢，R4各自独立地选自氢或氘，X3和X4各自独立地选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X3和X4是CH3，R4是氢，R1-R3各自独立地选自氢或氘，X2和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X3和X4是 CH3，R4是氢，R1-R3各自独立地选自氢或氘，X2和X5各自独立地选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X3-X5是 CH3，R4是氢，R1-R3各自独立地选自氢或氘，X2选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X3-X5是CH3，R4是氢，R1-R3各自独立地选自氢或氘，X2选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X3和X4是CH3，R1和R4是氢，R2和R3各自独立地选自氢或氘，X2和X5各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X3和X4是CH3，R1和R4是氢，R2和R3各自独立地选自氢或氘，X2和X5各自独立地选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X3-X5是 CH3，R1和R4是氢，R2和R3各自独立地选自氢或氘，X2选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X3-X5是CH3，R1和 R4是氢，R2和R3各自独立地选自氢或氘，X2选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2-X4是 CH3，R2-R4是氢，R1各自独立地选自氢或氘，X5选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2-X4是CH3，R2-R4是氢， R1各自独立地选自氢或氘，X5选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2-X5是 CH3，R2-R4是氢，R1各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2-X4是 CH3，R1-R4是氢，X5选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2-X4是CH3，R1-R4是氢，X5选自CH3或CD3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(Ia)、式(II)或式(III)的化合物，或其互变异构体、立体异构体、前药、晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，其中，X1是CD3，X2-X5是CH3， R1-R4是氢。
另一具体优选实施方案，所述化合物为如下任一结构，或其药学上可接受的盐，但不限于下列结构：
Figure RE-GDA0002143247900000161
Figure RE-GDA0002143247900000171
本发明化合物可包括一个或多个不对称中心，且因此可以存在多种立体异构体形式，例如，对映异构体和/或非对映异构体形式。例如，本发明化合物可为单独的对映异构体、非对映异构体或几何异构体(例如顺式和反式异构体)，或者可为立体异构体的混合物的形式，包括外消旋体混合物和富含一种或多种立体异构体的混合物。异构体可通过本领域技术人员已知的方法从混合物中分离，所述方法包括：手性高压液相色谱法(HPLC)以及手性盐的形成和结晶；或者优选的异构体可通过不对称合成来制备。
本领域技术人员将理解，有机化合物可以与溶剂形成复合物，其在该溶剂中发生反应或从该溶剂中沉淀或结晶出来。这些复合物称为“溶剂合物”。当溶剂是水时，复合物称为“水合物”。本发明涵盖了本发明化合物的所有溶剂合物。
术语“溶剂合物”是指通常由溶剂分解反应形成的与溶剂相结合的化合物或其盐的形式。这个物理缔合可包括氢键键合。常规溶剂包括包括水、甲醇、乙醇、乙酸、DMSO、THF、乙醚等。本文所述的化合物可制备成，例如，结晶形式，且可被溶剂化。合适的溶剂合物包括药学上可接受的溶剂合物且进一步包括化学计量的溶剂合物和非化学计量的溶剂合物。在一些情况下，所述溶剂合物将能够分离，例如，当一或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。“溶剂合物”包括溶液状态的溶剂合物和可分离的溶剂合物。代表性的溶剂合物包括水合物、乙醇合物和甲醇合物。
术语“水合物”是指与水相结合的化合物。通常，包含在化合物的水合物中的水分子数与该水合物中该化合物分子数的比率确定。因此，化合物的水合物可用例如通式R·xH2O代表，其中R是该化合物，和x是大于0的数。给定化合物可形成超过一种水合物类型，包括，例如，单水合物(x 为1)、低级水合物(x是大于0且小于1的数，例如，半水合物(R·0.5H2O))和多水合物(x为大于1 的数，例如，二水合物(R·2H2O)和六水合物(R·6H2O))。
本发明化合物可以是无定形或结晶形式(多晶型)。此外，本发明化合物可以以一种或多种结晶形式存在。因此，本发明在其范围内包括本发明化合物的所有无定形或结晶形式。术语“多晶型物”是指特定晶体堆积排列的化合物的结晶形式(或其盐、水合物或溶剂合物)。所有的多晶型物具有相同的元素组成。不同的结晶形式通常具有不同的X射线衍射图、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶体形状、光电性质、稳定性和溶解度。重结晶溶剂、结晶速率、贮存温度和其他因素可导致一种结晶形式占优。化合物的各种多晶型物可在不同的条件下通过结晶制备。
本发明还包括同位素标记的化合物，它们等同于式(I)所述的那些，但一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界常见的原子质量或质量数的原子所代替。可以引入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、13C、11C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物、其前体药物和所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐都属于本发明的范围。某些同位素标记的本发明化合物、例如引入放射性同位素(例如3H和14C)的那些可用于药物和/或底物组织分布测定。氚、即3H和碳-14、即14C同位素是特别优选的，因为它们容易制备和检测。进而，被更重的同位素取代，例如氘、即2H，由于代谢稳定性更高可以提供治疗上的益处，例如延长体内半衰期或减少剂量需求，因而在有些情况下可能是优选的。同位素标记的本发明式(I)化合物及其前体药物一般可以这样制备，在进行下述流程和/或实施例与制备例所公开的工艺时，用容易得到的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂。
此外，前药也包括在本发明的上下文内。本文所用的术语“前药”是指在体内通过例如在血液中水解转变成其具有医学效应的活性形式的化合物。药学上可接受的前药描述于T.Higuchi和V. Stella，Prodrugs as Novel Delivery Systems，A.C.S.SymposiumSeries的Vol.14，Edward B.Roche， ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press， 1987，以及D.Fleisher、S.Ramon和H.Barbra“Improved oral drug delivery：solubility limitations overcomeby the use of prodrugs”，Advanced Drug Delivery Reviews(1996)19(2)115-130，每篇引入本文作为参考。
前药为任何共价键合的本发明化合物，当将这种前药给予患者时，其在体内释放母体化合物。通常通过修饰官能团来制备前药，修饰是以使得该修饰可以通过常规操作或在体内裂解产生母体化合物的方式进行的。前药包括，例如，其中羟基、氨基或巯基与任意基团键合的本发明化合物，当将其给予患者时，可以裂解形成羟基、氨基或巯基。因此，前药的代表性实例包括(但不限于)式(I) 化合物的羟基、巯基和氨基官能团的乙酸酯/酰胺、甲酸酯/酰胺和苯甲酸酯/酰胺衍生物。另外，在羧酸(-COOH)的情况下，可以使用酯，例如甲酯、乙酯等。酯本身可以是有活性的和/或可以在人体体内条件下水解。合适的药学上可接受的体内可水解的酯基包括容易在人体中分解而释放母体酸或其盐的那些基团。
药物组合物、制剂和试剂盒
在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含本发明化合物(还称为“活性组分”)和药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含有效量的活性组分。在一些实施方案中，所述药物组合物包含治疗有效量的活性组分。在一些实施方案中，所述药物组合物包含预防有效量的活性组分。
用于本发明的药学上可接受的赋形剂是指不会破坏一起配制的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。可以用于本发明组合物中的药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂包括但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(如人类血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白)、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。
本发明还包括试剂盒(例如，药物包装)。所提供的试剂盒可以包括本发明化合物、其它治疗剂，以及含有本发明化合物、其它治疗剂的第一和第二容器(例如，小瓶、安瓿瓶、瓶、注射器和/或可分散包装或其它合适的容器)。在一些实施方案中，提供的试剂盒还可以任选包括第三容器，其含有用于稀释或悬浮本发明化合物和/或其它治疗剂的药用赋形剂。在一些实施方案中，提供在第一容器和第二容器中的本发明化合物和其它治疗剂组合形成一个单位剂型。
本发明提供的药物组合物可以通过许多途径给药，包括但不限于：口服给药、肠胃外给药、吸入给药、局部给药、直肠给药、鼻腔给药、口腔给药、阴道给药、通过植入剂给药或其它给药方式。例如，本文使用的肠胃外给药包括皮下给药、皮内给药、静脉内给药、肌肉内给药、关节内给药、动脉内给药、滑膜腔内给药、胸骨内给药、脑脊髓膜内给药、病灶内给药、和颅内的注射或输液技术。
通常，给予有效量的本文所提供的化合物。按照有关情况，包括所治疗的病症、选择的给药途径、实际给予的化合物、个体患者的年龄、体重和响应、患者症状的严重程度，等等，可以由医生确定实际上给予的化合物的量。
当用于预防本发明所述病症时，给予处于形成所述病症危险之中的受试者本文所提供的化合物，典型地基于医生的建议并在医生监督下给药，剂量水平如上所述。处于形成具体病症的危险之中的受试者，通常包括具有所述病症的家族史的受试者，或通过遗传试验或筛选确定尤其对形成所述病症敏感的那些受试者。
还可以长期给予本文所提供的药物组合物(“长期给药”)。长期给药是指在长时间内给予化合物或其药物组合物，例如，3个月、6个月、1年、2年、3年、5年等等，或者可无限期地持续给药，例如，受试者的余生。在一些实施方案中，长期给药意欲在长时间内在血液中提供所述化合物的恒定水平，例如，在治疗窗内。
可以使用各种给药方法，进一步递送本发明的药物组合物。例如，在一些实施方案中，可以推注给药药物组合物，例如，为了使化合物在血液中的浓度快速提高至有效水平。推注剂量取决于活性组分的目标全身性水平，例如，肌内或皮下的推注剂量使活性组分缓慢释放，而直接递送至静脉的推注(例如，通过IV静脉滴注)能够更加快速地递送，使得活性组分在血液中的浓度快速升高至有效水平。在其它实施方案中，可以以持续输液形式给予药物组合物，例如，通过IV静脉滴注，从而在受试者身体中提供稳态浓度的活性组分。此外，在其它实施方案中，可以首先给予推注剂量的药物组合物，而后持续输液。
口服组合物可以采用散装液体溶液或混悬剂或散装粉剂形式。然而，更通常，为了便于精确地剂量给药，以单位剂量形式提供所述组合物。术语“单位剂型”是指适合作为人类患者及其它哺乳动物的单元剂量的物理离散单位，每个单位包含预定数量的、适于产生所需要的治疗效果的活性物质与合适药学赋形剂。典型的单位剂量形式包括液体组合物的预装填的、预先测量的安瓿或注射器，或者在固体组合物情况下的丸剂、片剂、胶囊剂等。在这种组合物中，所述化合物通常为较少的组分(约0.1至约50重量％，或优选约1至约40重量％)，剩余部分为对于形成所需给药形式有用的各种载体或赋形剂以及加工助剂。
对于口服剂量，代表性的方案是，每天一个至五个口服剂量，尤其是两个至四个口服剂量，典型地是三个口服剂量。使用这些剂量给药模式，每个剂量提供大约0.01至大约20mg/kg的本发明化合物，优选的剂量各自提供大约0.1至大约10mg/kg，尤其是大约1至大约5mg/kg。
为了提供与使用注射剂量类似的血液水平，或比使用注射剂量更低的血液水平，通常选择透皮剂量，数量为大约0.01至大约20％重量，优选大约0.1至大约20％重量，优选大约0.1至大约10％重量，且更优选大约0.5至大约15％重量。
从大约1至大约120小时，尤其是24至96小时，注射剂量水平在大约0.1mg/kg/小时至至少 10mg/kg/小时的范围。为了获得足够的稳定状态水平，还可以给予大约0.1mg/kg至大约10mg/kg 或更多的预载推注。对于40至80kg的人类患者来说，最大总剂量不能超过大约2g/天。
适于口服给药的液体形式可包括合适的水性或非水载体以及缓冲剂、悬浮剂和分散剂、着色剂、调味剂，等等。固体形式可包括，例如，任何下列组份，或具有类似性质的化合物：粘合剂，例如，微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如，淀粉或乳糖，崩解剂，例如，褐藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如，硬脂酸镁；助流剂，例如，胶体二氧化硅；甜味剂，例如，蔗糖或糖精；或调味剂，例如，薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。
可注射的组合物典型地基于可注射用的无菌盐水或磷酸盐缓冲盐水，或本领域中已知的其它可注射的赋形剂。如前所述，在这种组合物中，活性化合物典型地为较少的组分，经常为约0.05至10％重量，剩余部分为可注射的赋形剂等。
典型地将透皮组合物配制为含有活性组分的局部软膏剂或乳膏剂。当配制为软膏剂时，活性组分典型地与石蜡或可与水混溶的软膏基质组合。或者，活性组分可与例如水包油型乳膏基质一起配制为乳膏剂。这种透皮制剂是本领域中公知的，且通常包括用于提升活性组分或制剂的稳定的皮肤渗透的其它组份。所有这种已知的透皮制剂和组份包括在本发明提供的范围内。
本发明化合物还可通过经皮装置给予。因此，经皮给药可使用贮存器(reservoir)或多孔膜类型、或者多种固体基质的贴剂实现。
用于口服给予、注射或局部给予的组合物的上述组份仅仅是代表性的。其它材料以及加工技术等阐述于Remington's Pharmaceutical Sciences,17th edition,1985,Mack Publishing Company,Easton, Pennsylvania的第8部分中，本文以引用的方式引入该文献。
本发明化合物还可以以持续释放形式给予，或从持续释放给药系统中给予。代表性的持续释放材料的描述可在Remington's Pharmaceutical Sciences中找到。
本发明还涉及本发明化合物的药学上可接受的制剂。在一个实施方案中，所述制剂包含水。在另一个实施方案中，所述制剂包含环糊精衍生物。最常见的环糊精为分别由6、7和8个α-1,4-连接的葡萄糖单元组成的α-、β-和γ-环糊精，其在连接的糖部分上任选包括一个或多个取代基，其包括但不限于：甲基化的、羟基烷基化的、酰化的和磺烷基醚取代。在一些实施方案中，所述环糊精为磺烷基醚β-环糊精，例如，磺丁基醚β-环糊精，也称作Captisol。参见，例如，U.S.5,376,645。在一些实施方案中，所述制剂包括六丙基-β-环糊精(例如，在水中，10-50％)。
适应症
本发明化合物能够调节激酶活性，所以可以用于治疗其中激酶对疾病的病理学和/或症状学起作用的疾病和障碍。本发明化合物和组合物以及针对采用的方法所抑制的激酶的实例包括但不限于 B-Raf，包括B-Raf的突变形式。
在优先实施方案中，本发明涉及治疗特征为BRAF激酶突变的增生性疾病的方法，所述方法包括通过给药方案给予BRAF抑制剂来抑制对BRAF抑制剂治疗的抗性。
优选地，本方法中的BRAF突变是V600突变，如BRAF V600E。
优选地，本方法中的增生性疾病包括癌症，例如但不限于，膀胱癌、乳腺癌、脑癌、头颈癌、肝癌、胆道癌、急性和慢性淋巴细胞白血病、急性和慢性髓细胞性白血病、慢性骨髓单核细胞性白血病、结直肠癌、胃癌、胃肠道间质瘤、胶质瘤、淋巴瘤、黑素瘤、多发性骨髓瘤、骨髓及外骨髓增生性疾病、神经内分泌癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肾细胞癌、肉瘤和甲状腺癌，如甲状腺乳头状癌。其他增生性疾病包括肥大细胞白血病、生殖细胞瘤、小细胞肺癌、胃肠道间质瘤、成神经细胞瘤和骨肉瘤。
更优选地，由本发明化合物治疗的增生性疾病是特征为V600突变(如BRAF V600E)的黑素瘤，或特征为V600突变(如BRAF V600E)的结直肠癌。
联合疗法
本发明化合物可以以治疗有效量与一种或多种治疗剂组合(药物组合)施用。例如，与其它抗肿瘤剂或抗增殖剂可发生协调作用，例如，有丝分裂抑制剂、烷基化剂、抗代谢物、插入抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶类、拓扑酶抑制剂、生物响应调节剂、抗体、细胞毒药物、抗激素类、抗雄激素类、抗血管生成剂、激酶抑制剂、泛激酶抑制剂或生长因子抑制剂。
本发明的一个实施方案中，另外的治疗剂选自抗癌药、止痛药、止吐药、抗抑郁药或抗炎药。此外，另外的治疗剂是不同的BRAF抑制剂、MEK1/2抑制剂、PI3K抑制剂、CDK4/6抑制剂、c-Met 抑制剂、EGFR抑制剂、FGFR抑制剂、MAPK抑制剂或ERK抑制剂，并于本发明化合物同时个体施用。例如，MEK1/2抑制剂的加入与Raf抑制剂组合带来ERK信号转导的显著抑制，并因此降低细胞增殖与转化。因为单独MEK1/2抑制剂治疗已在临床导致剂量限制毒性，Raf加MEK1/2 抑制剂组合为更优的治疗策略。
MEK1/2抑制剂的实例是AS703026(EMD Serono)；MSC1936369B(EMD Serono)；GSK1120212 (GlaxoSmithKline)；AZD6244(AstraZeneca)；PD-0325901(Pfizer)；ARRY-438162(Array BioPharma)； RDEA119(Ardea Biosciences)；GDC0941(Genentech)；GDC0973(Genentech)；TAK-733(Millennium Pharma)；RO5126766(Hoffman-La Roche)和XL-518(Exelixis)。
CDK4/6抑制剂为本领域已知的且包括夫拉平度、PI446A-05、LEE011、AT7519、BMS265246、LY2835219和PD-0332991。
PI3K抑制剂为本领域已知的且包括哌立福辛、CAL-101、PX-866、BEZ235、SF1126、INK1117、 GDC-0941、BKM120、XL147、XL765、Palomid529、GSK105965、Zstk474、PTW33597、IC87114、 TG100-115、CAL283、PI-103、BYL719、GNE-477、GUDC-907和AEZS-136。
c-Met抑制剂为本领域已知的且包括克唑替尼、PHA-665752、SU11274、PF-04217903、foretinib、 SGX523、JNJ-38877605、GSK1363089、AMG208和INCB28060。
EGFR抑制剂优选为埃罗替尼、单克隆抗体(例如，西妥昔单抗和帕尼单抗)。
FGFR抑制剂优选地为选择性和ATP竞争性泛FGFR激酶抑制剂，包括AZD4547和BGJ398。
本发明进一步涉及用于单独、同时或序贯施用的包含本发明BARF抑制剂以及选自MEK1/2抑制剂、PI3K抑制剂、CDK4/6抑制剂、c-Met抑制剂、EGFR抑制剂或FGFR抑制剂的第二抑制剂的治疗性组合。更具体地讲，该治疗性组合包含用于单独、同时或序贯施用的本发明的化合物和第二抑制剂，该第二抑制剂选自MEK1/2抑制剂、PI3K抑制剂、CDK4/6抑制剂、c-Met抑制剂、EGFR 抑制剂或FGFR抑制剂或其药学上可接受的盐。
本发明进一步涉及一种治疗特征为B-Raf中的突变的增生性疾病的患者的方法，其包括对患者施用治疗有效量的组合，该组合包含本发明化合物和优选选自MEK1/2抑制剂、PI3K抑制剂、 CDK4/6抑制剂、c-Met抑制剂、EGFR抑制剂或FGFR抑制剂的第二抑制剂。更具体地讲，本发明涉及一种治疗特征为B-Raf中的突变(诸如V600突变)的增生性疾病(例如特征为BRAF V600 突变的黑素瘤)的患者的方法，其包括对患者施用治疗有效量的本发明的组合。优选地，以治疗有效剂量施用这些抑制剂，它们在组合时提供有益的作用。施用可单独、同时或序贯进行。
本发明还关于用于制备治疗或预防有需要的患者中增生性疾病，尤其是特征为B-Raf中的突变、特别是BRAF V600突变的增生性疾病(例如特征为BRAF V600突变的黑素瘤)的药物组合物或药物的本发明的组合。
制备本发明化合物的方法
本发明化合物(包括其盐)可使用已知有机合成技术来制备，且可按照多种可能合成途径中的任一种(诸如下文方案中的那些)来合成。用于制备本发明化合物的反应可在合适的溶剂中进行，有机合成领域的技术人员可容易地选择溶剂。合适的溶剂可在进行反应的温度(例如，在溶剂结冻温度至溶剂沸点温度范围内的温度)下与起始物质(反应物)、中间体或产物实质上不反应。既定反应可在一种溶剂或一种以上溶剂的混合物中进行。技术人员可依据具体反应步骤来选择用于具体反应步骤的溶剂。
本发明化合物的制备可涉及不同化学基团的保护和去除保护。本领域技术人员可容易地判定是否需要保护和去除保护以及适当保护基的选择。保护基的化学性质可参见例如Wuts和Greene， Protective Groups in Organic Synthesis，第4版，John Wiley&Sons：New Jersey，(2006)，其通过引用整体并入本文中。
本发明化合物可通过化合物的消旋混合物与光学活性的拆分剂反应形成一对非对映异构体化合物、分离非对映异构体并回收光学纯度的対映体，制备成其单个立体异构体。对映体拆分时可使用本发明化合物的非对映体衍生物进行，优先可解离的复合物(例如，结晶非对映体盐)。非对映体具有显著不同的物理性质(例如，熔点、沸点、溶解度、反应性等)，并可通过这些不相似性的优势容易地得到分离。非对映体可通过色谱，优选通过基于溶解度的差异的分离/拆分技术进行分离。然后通过不会消旋化的任何实际手段，回收光学纯对映体，连同拆分试剂。适用于从消旋混合物开始拆分得到化合物立体异构体的技术的更详细的描述可见于Jean Jacques，Andre Collet， Samue1H.Wilen，“对映体、消旋体和拆分”(“Enantiomers，Racemates and Resolutions”)，John Wiley And Sons，Inc.,1981。
可按照本领域已知任何合适的方法来监测反应。例如，可通过光谱手段(诸如核磁共振(NMR) 光谱法(例如1H或13C)、红外(IR)光谱法、分光光度法(例如，UV-可见光)、质谱(MS))或通过色谱方法(诸如高效液相色谱法(HPLC)或薄层色谱法(TLC))来监测产物形成。
本发明式(I)化合物可通过像以下反应路线1那样进行制备：
反应路线1
Figure RE-GDA0002143247900000251
其中Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4和X5如本发明发明内容所定义。式(I)化合物可通过式(I-1)化合物与磺化试剂X5SO2Cl在适宜的碱(例如，吡啶、三乙胺、4-(N,N –二甲氨基)吡啶等)和适宜的溶剂(例如，二氯甲烷、THF等)存在下反应。反应在约0℃至约1000℃的温度范围下进行，可能需要长达约20小时完成。反应混合液任选进一步反应以除去任何保护基。
式(I-1)化合物可通过以下反应路线2进行制备：
反应路线2
Figure RE-GDA0002143247900000261
其中Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4和X5如本发明发明内容所定义，M是一个离去基团(例如，碘、溴、氯、三氟甲磺酰氧基等)，每个Z可以是例如氢、甲基等，或两个Z基团可相连形成环硼酸酯。两个P基团可以均为H，或者两个P基团合在一起表示适合的氮保护基团(例如，一个P可以是氢，另一个可以是Boc)。式(I-2)化合物可通过式(I-4)化合物与式(I-3)化合物在适宜的过渡金属催化剂(例如，Pd(PPh3)4或PdCl2(dppf))，适宜的溶剂(例如，DME、dioxane、甲苯、乙醇等)和适宜的碱(例如，无水碳酸钾或碳酸钠等)存在下反应。反应在约20℃至120℃的温度范围进行，可需约2小时完成。式(I)化合物可通过保护基团P从式 (I-2)化合物离去进行合成(例如，通过用强酸例如氯化氢在DME和dioxane存在下处理)。
式(I-4)化合物可通过以下反应路线3进行制备：
反应路线3
Figure RE-GDA0002143247900000262
其中Y1、Y2、R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3和X4如本发明发明内容所定义，M是一个离去基团(例如，碘、溴、氯、三氟甲磺酰氧基等)，V是一个离去基团(例如，碘、溴、氯、三氟甲磺酰氧基等)。式(I-4)化合物可通过式(I-5)的胺化合物和式(I-6)化合物反应制备。反应在适宜的碱(例如，碳酸钠或碳酸钾等)存在下在合适的溶剂(例如，DMSO、NMP、dioxane或异丙醇)中在约 25℃至约120℃的温度范围进行。
实施例
下面结合具体实施例，作进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。
本文所用的缩写具有以下含义：
Figure RE-GDA0002143247900000271
Figure RE-GDA0002143247900000281
中间体A 2-氯-4-(3-碘-1-(丙-2-基-d7)-1H-吡唑-4-基)嘧啶的制备。
Figure RE-GDA0002143247900000282
采用以下路线进行合成：
Figure RE-GDA0002143247900000283
步骤1化合物A-2的合成
将化合物1(5.0g，73.4mmol)加入至47％的氢溴酸(20ml)溶液中，反应液在80℃下反应 3h，在常压下蒸馏，收集60-70℃馏分，得到无色液体6.2g，收率65％。
步骤2化合物A-4的合成
将化合物A-3(3.0g，27.8mmol)加入到DMF(20ml)溶液中，将溶液降至0℃，再加入K2CO3 (4.6g，33.3mmol，10ml)，低温下搅拌0.5h，再慢慢地滴加化合物A-2(4.3g，33.3mmol)，滴加完毕后升至90℃反应10h，反应液用DCM(50ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)，得到白色固体3.1g，收率72％。 LC-MS(APCI):m/z＝158.21.06(M+1)+。
步骤3化合物A-5的合成
氮气保护下，将化合物A-4(3.0g，19.1mmol)加入至无水THF(40ml)溶液中，降至-5℃后滴加CH3MgBr(19.1ml，57.3mmol，3ml/L)的无水THF溶液，滴加完毕后慢慢升温至回流，反应4h，用饱和氯化铵淬灭反应，然后用稀盐酸调pH值至中性，乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:3)，得到黄色固体2.0g，收率61％。LC-MS(APCI):m/z＝175.21.06(M+1)+。
步骤4化合物A-6的合成
依次将化合物A-5(2.0g，11.5mmol)、PTSA(4.2g，23.0mmol)加入至乙腈(15ml)溶液中，降至0℃后再滴加亚硝酸钠(1.43g，20.7mmol)和碘化钾(3.82g，23.0mmol)的水溶液(5 ml)。该反应液在室温下反应3h，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋干得到橙色固体2.5g，收率75％。
步骤5化合物A-8的合成
氮气保护下，将化合物A-6(2.0g，7.01mmol)加入到DMF(15ml)溶液中，升至120℃，然后加入化合物A-7(1.9g，10.5mmol，10ml)，在120℃下搅拌反应0.5h，二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:3)，得到产物1.9g，收率80％。LC-MS(APCI):m/z＝341.06(M+1)+。
步骤6化合物A-9的合成
氮气保护下，依次将化合物A-8(1.9g，5.6mmol)，碳酸胍(1.6g，12.8mmol)加入到NMP (20ml)溶液中，同时架起分水装置，将溶液升至130℃，在130℃下搅拌反应10h，反应完全后，二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:3)，得到产物1.5g，收率81％。LC-MS(APCI):m/z＝336.86(M+1)+。
步骤7化合物A-10的合成
将化合物A-9(1.5g，4.5mmol)加入至TFA(15ml)液中，降至0℃后，加入亚硝酸钠(0.93 g，13.4mmol)固体，该反应液在室温下反应1h，再用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋干油状物用MTBE(10ml)打浆，过滤得到白色固体1.3g，收率87％，LC-MS(APCI):m/z＝338.15(M+1)+。
步骤8中间体化合物A的合成
将化合物A-10(1.3g，3.86mmol)加入到POCl3(15ml)溶液中，升至110℃，在该温度下回流反应10h，反应完全后，旋干反应液，二氯甲烷(30ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1)，得到产物1.0g，收率73％。 LC-MS(APCI):m/z＝356.32(M+1)+。
中间体B (S)-(甲基-d3)(1-氨基丙-2-基)氨基碳酸甲酯的制备。
Figure RE-GDA0002143247900000301
采用以下路线进行合成：
Figure RE-GDA0002143247900000302
步骤1化合物B-2的合成
将化合物B-1(1.3g，4.5mmol)溶于甲苯(15ml)溶液中，降温至0℃，再滴加CD3OD(0.5 g，15mmol)和三乙胺(1.7g，17mmol)的甲苯(10ml)溶液，滴加完毕后室温反应2h，冰水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤得化合物B-2的甲苯液，直接投下一步。
步骤2化合物B-4的合成
在0℃下，依次将化合物B-3的盐酸盐(0.5g，2.4mmol)，三乙胺(0.73g，7.2mmol)加入二氯甲烷(10ml)溶液中，再滴加上一步化合物B-2的甲苯液，加完后室温反应5h，加入水(10 ml)淬灭反应，二氯甲烷(20ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1)，得到白色固体产物0.45g，收率80％。
步骤3中间体化合物B的合成
在0℃下，缓慢地将4M盐酸的二氧六环(4ml)溶液加入至化合物B-4(0.45g，1.9mmol) 的二氯甲烷(10ml)溶液中，升至室温继续反应6h。反应完全后，旋干溶液，石油醚(10ml)打浆，抽滤得产物0.2g，收率77％。
中间体C (1-氨基丙-2-基-1,1,3,3,3-d5)氨基甲酸甲酯的制备。
Figure RE-GDA0002143247900000303
采用以下路线进行合成：
Figure RE-GDA0002143247900000311
步骤1化合物C-3的合成
将化合物C-2(4.6g，61.8mmol)，化合物C-1(11.5g，67.6mmol)和氢氧化钠(7.16g，67.7 mmol)在水(60ml)的混合物在0℃下搅拌反应3h，反应完全后，加入水(60ml)，再用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到油状物11.2g，收率88％。
步骤2化合物C-4的合成
氮气氛围下，在-78℃条件下向草酰氯(6.0g，47.2mmol)的DCM(60ml)溶液中慢慢加入 DMSO(4.8g，61.5mmol),将混合液在-78℃下搅拌半小时，再向混合物中加入化合物C-3(8.0g， 38.2mmol)的DCM(20ml)溶液，混合物继续在-78℃下搅拌1h，然后将三乙胺(16ml)加入混合物中，将混合物升至室温，依次用1N盐酸(50ml)，碳酸氢钠水溶液(50ml)洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，热缩，再用体积比PE:EA＝8:1打浆得到白色固体产物5.3g，收率87％。
步骤3化合物C-5的合成
将1,5,7-三氮杂二环[4.4.0]癸-5-烯(0.27g，1.9mmol)加入至化合物C-4(4.0g，19.3mmol) 的氘代氯仿(30ml)溶液中，反应液在室温搅拌30h后，加入水(10ml)淬灭反应，分出有机相，再用饱和氯化钠洗，有机相干燥旋干得油状物3.9g，收率98％。
步骤4化合物C-6的合成
氮气氛围下，依次将化合物C-5(4.0g，18.9mmol)、叔丁基亚磺酰胺(2.7g，22.6mmol)，加入到THF(60ml)液中，室温下再加入钛酸四异丙酯(11.8g，41.5mmol)，然后再加热至60℃反应3h。反应液冷却至室温，加水淬灭反应，再用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1)，得到产物3.5g，收率 58％。LC-MS(APCI):m/z＝315.80(M+1)+。
步骤5化合物C-7的合成
在-50℃条件下，将NaBH4(0.73g，19.1mmol)加入至化合物C-6(2.0g，6.3mmol)的甲醇(20ml)溶液中，然后继续低温下反应1h。加入1M的盐酸淬灭反应，二氯甲烷(30ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤旋干，得到油状物产物2.1g，直接头下一步。
步骤6化合物C-8的合成
在0℃下，缓慢地将4M盐酸的二氧六环(10ml)溶液加入至化合物C-7(2.0g，6.3mmol) 的二氯甲烷(20ml)溶液中，在0℃下继续反应6h。反应完全后旋干溶剂，直接投下一步，无需再处理。
步骤7化合物C-9的合成
在0℃下，将三乙胺(1.43g，14.1mmol)加入到化合物C-8(1.5g，7.0mmol)的二氯甲烷 (20ml)溶液中，再向混合液中滴加氯甲酸甲酯(0.8g，8.5mmol)液，加完后室温反应5小时，反应完全后，加入水(10ml)淬灭反应，反应液用二氯甲烷(20ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1)，得到白色固体产物 1.1g，收率58％。
步骤8中间体化合物C的合成
在氢气氛围下，将Pd-C(0.2g,10％)加入到化合物C-9(1.0g，3.7mmol)的乙醇(5ml)和1N 盐酸溶液(5ml)中搅拌反应5h，反应完全后，过滤，滤液直接浓缩，得到产物0.4g。
实施例1 (S)-甲基-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-(丙-2- 基-d7)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基)氨基甲酸酯(化合物L-1)的制备。
Figure RE-GDA0002143247900000321
采用以下路线进行合成：
Figure RE-GDA0002143247900000331
步骤1化合物2的合成
氮气保护下，依次将中间体化合物A(1.0g，2.8mmol)，化合物1(0.52g，3.1mmol)，碳酸钠(1.2g，11.2mmol)加入到DMSO(20ml)溶液中，升温至90℃，在该温度下搅拌反应16h，反应完全后，DCM(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:2)，得到产物0.8g，收率63％。LC-MS(APCI):m/z＝452.33(M+1)+。
步骤2化合物4的合成
氮气保护下，依次将化合物2(0.5g，1.11mmol)、化合物3(0.5g，1.33mmol)，碳酸钠(0.47 g，4.43mmol)，Pd(dppf)Cl2(0.09g，0.11mmol)加入到甲苯(20ml)和水(4ml)的混合溶液中，加热至80℃反应2h。反应液冷却至室温，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)，得到产物0.2g，收率31％。 LC-MS(APCI):m/z＝569.09(M+1)+。
步骤3化合物5的合成
在0℃下，缓慢地将4M盐酸的二氧六环(4ml)溶液加入至化合物4(0.2g，0.35mmol)的DCM(10ml)溶液中，升至室温继续反应6h。反应完全后，旋干溶液，直接投下一步，无需再处理。LC-MS(APCI):m/z＝469.27(M+1)+。
步骤4化合物L-1的合成
依次将化合物5(0.15g，0.32mmol)、三乙胺(0.16g，1.6mmol)加入至DCM(10ml)液中，降至0℃后，缓慢滴加MsCl(0.11g，1.0mmol)，滴加完毕后升至室温反应5h，反应完全后直接旋干反应液得到残留物，再依次将甲苯(9ml)，甲醇(1ml)，水(10ml)，碳酸钠(2g)加入该残留物中，升至85℃下反应10h，冷却至室温，乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到产物50mg，收率35％。LC-MS(APCI):m/z＝547.31(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(d,J＝11.4Hz,2H), 7.61(d,J＝6.3Hz,1H),7.42(d,J＝5.6Hz,1H),6.48(d,J＝5.1Hz,1H),5.32(d,J＝18.8Hz,1H),5.17 (s,1H),4.59(d,J＝13.2Hz,1H),3.79(s,1H),3.61(s,3H),3.24(s,1H),2.98(d,J＝16.6Hz,3H), 2.01(s,1H),1.31(s,3H).
实施例2 (S)-(甲基-d3)-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-异 丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基)氨基甲酸酯(化合物L-2)的制备。
Figure RE-GDA0002143247900000341
采用以下路线进行合成：
Figure RE-GDA0002143247900000342
步骤1化合物7的合成
氮气保护下，依次将化合物6(0.5g，1.5mmol)，中间体化合物B(0.2g，1.5mmol)，碳酸钠(0.63g，6.0mmol)加入到DMSO(20ml)溶液中，升温至90℃，在该温度下搅拌反应16h，反应完全后，DCM(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:2)，得到产物0.42g，收率65％。LC-MS(APCI):m/z＝447.80(M+1)+。
步骤2化合物8的合成
氮气保护下，依次将化合物7(0.4g，0.90mmol)、化合物3(0.4g，1.07mmol)，碳酸钠(0.38 g，3.6mmol)，Pd(dppf)Cl2(0.07g，0.09mmol)加入到甲苯(20ml)和水(4ml)的混合溶液中，加热至80℃反应2h。反应液冷却至室温，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)，得到产物0.2g，收率40％。 LC-MS(APCI):m/z＝565.03(M+1)+。
步骤3化合物9的合成
在0℃下，缓慢地将4M盐酸的二氧六环(4ml)溶液加入至化合物8(0.2g，0.35mmol)的DCM(10ml)溶液中，升至室温继续反应6h。反应完全后，旋干溶液，直接投下一步，无需再处理。LC-MS(APCI):m/z＝465.27(M+1)+。
步骤4化合物L-2的合成
依次将化合物9(0.2g，0.43mmol)、三乙胺(0.22g，2.1mmol)加入至DCM(10ml)液中，降至0℃后，缓慢滴加MsCl(0.15g，1.3mmol)，滴加完毕后升至室温反应5h，反应完全后直接旋干反应液得到残留物，再依次将甲苯(9ml)，甲醇(1ml)，水(10ml)，碳酸钠(2g)加入该残留物中，升至85℃下反应10h，冷却至室温，乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到产物70mg，收率 30％。LC-MS(APCI):m/z＝543.21(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(d,J＝11.4Hz,2H),7.63 (d,J＝6.3Hz,1H),7.40(d,J＝5.8Hz,1H),6.58(d,J＝6.1Hz,1H),5.47(d,J＝18.8Hz,1H),5.17(s, 1H),4.59(d,J＝12.2,Hz,1H),3.80(s,1H),3.61(s,1H)3.24(s,1H),3.10(d,J＝16.6Hz,3H),2.21(s, 1H),1.35(s,3H),1.27(d,6H).
实施例3 (S)-(甲基-d3)-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1- (丙-2-基-d7)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基)氨基甲酸酯(化合物L-3)的制备。
Figure RE-GDA0002143247900000351
采用以下合成路线：
Figure RE-GDA0002143247900000361
步骤1化合物10的合成
氮气保护下，依次将中间体化合物A(0.6g，1.7mmol)，中间体化合物B(0.23g，1.7mmol)，碳酸钠(0.71g，6.8mmol)加入到DMSO(20ml)溶液中，升温至90℃，在该温度下搅拌反应 16h，反应完全后，DCM(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:2)，得到产物0.65g，收率84％。LC-MS(APCI):m/z＝454.92(M+1)+。
步骤2化合物11的合成
氮气保护下，依次将化合物10(0.6g，1.3mmol)、化合物3(0.59g，1.6mmol)，碳酸钠(0.56 g，5.3mmol)，Pd(dppf)Cl2(0.10g，0.13mmol)加入到甲苯(20ml)和水(4ml)的混合溶液中，加热至80℃反应2h。反应液冷却至室温，乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)，得到产物0.32g，收率43％。 LC-MS(APCI):m/z＝572.10(M+1)+。
步骤3化合物12的合成
在0℃下，缓慢地将4M盐酸的二氧六环(4ml)溶液加入至化合物11(0.3g，0.52mmol) 的DCM(10ml)溶液中，升至室温继续反应6h。反应完全后，旋干溶液，直接投下一步，无需再处理。LC-MS(APCI):m/z＝472.09(M+1)+。
步骤4化合物L-3的合成
依次将化合物12(0.25g，0.53mmol)、三乙胺(0.27g，2.6mmol)加入至DCM(10ml)液中，降至0℃后，缓慢滴加MsCl(0.18g，1.6mmol)，滴加完毕后升至室温反应5h，反应完全后直接旋干反应液得到残留物，再依次将甲苯(9ml)，甲醇(1ml)，水(10ml)，碳酸钠(2g)加入该残留物中，升至85℃下反应10h，冷却至室温，乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到产物75mg，收率26％。LC-MS(APCI):m/z＝550.29(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(d,J＝11.4Hz,2H), 7.63(d,J＝6.3Hz,1H),7.40(d,J＝5.8Hz,1H),6.65(d,J＝6.1Hz,1H),5.47(d,J＝18.8Hz,1H),5.17 (s,1H),4.63(d,J＝12.2,Hz,1H),3.70(s,1H),3.54(s,1H),3.16(d,J＝16.6Hz,3H),2.11(s,1H), 1.38(s,3H).
实施例4 (1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡 唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基-1,1,3,3,3-d5)氨基甲酸甲酯(化合物L-4)，
(S)-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4- 基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基-1,1,3,3,3-d5)氨基甲酸甲酯(化合物L-4-S)和
(R)-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4- 基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基-1,1,3,3,3-d5)氨基甲酸甲酯(化合物L-4-R)的制备。
Figure RE-GDA0002143247900000371
采用以下合成路线：
Figure RE-GDA0002143247900000381
步骤1化合物13的合成
氮气保护下，依次将化合物6(0.4g，1.1mmol)，中间体化合物C(0.16g，1.1mmol)，碳酸钠(0.50g，4.6mmol)加入到DMSO(15ml)溶液中，将溶液升至90℃，在该温度下搅拌反应16h，反应完全后，反应液用二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:2)，得到产物0.40g，收率75％。LC-MS(APCI): m/z＝449.53(M+1)+。
步骤2化合物14的合成
氮气氛围下，依次将化合物13(0.4g，0.9mmol)、化合物3(0.5g，1.4mmol)，碳酸钠(0.40 g，3.56mmol)，Pd(dppf)Cl2(0.08g，0.1mmol)加入到甲苯(20ml)和水(4ml)的混合溶液中，加热至80℃反应2h。反应液冷却至室温，再用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)，得到产物0.28g，收率 55％。LC-MS(APCI):m/z＝567.12(M+1)+。
步骤3化合物15的合成
在0℃下，缓慢地将4M盐酸的二氧六环(2ml)溶液加入至化合物14(0.28g，0.50mmol) 的二氯甲烷(10ml)溶液中，升至室温继续反应6h。反应完全后直接旋干溶液，直接投下一步，无需再处理。LC-MS(APCI):m/z＝467.29(M+1)+。
步骤4化合物L-4的合成
将三乙胺(0.13g，1.28mmol)加入至化合物15(0.2g，0.43mmol)的二氯甲烷(10ml)液中，该溶液降至0℃后，然后将甲磺酰氯(0.15g，1.3mmol)慢慢滴加到上溶液中，该反应液在室温下反应5h，反应完全后直接旋干反应液，再往残留物中加入甲苯(9ml)，甲醇(1ml)，水(10 ml)，碳酸钠(2g)，该溶液在85℃下在反应10h，反应液冷却至室温，再用乙酸乙酯(20ml×3) 萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到产物65mg，收率27％。LC-MS(APCI):m/z＝545.08(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.05(d, 2H),7.61(d,1H),7.45(d,1H),6.40(d,1H),5.29(d,1H),5.18(s,1H),4.62(d,1H),3.89 (d,1H),3.58(s,3H),3.10(d,3H),2.05(s,1H)，1.29(d,6H).
步骤5化合物L-4-S和L-4-R的合成
采用手性制备柱将消旋体化合物L-4进行分离得到化合物L-4-S和L-4-R。
实施例5 (1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-(丙-2-基-d7))- 1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基-1,1,3,3,3-d5)氨基甲酸甲酯(化合物L-5)，
(S)-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-(丙-2-基-d7))-1H-吡 唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基-1,1,3,3,3-d5)氨基甲酸甲酯(化合物L-5-S)和
(R)-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-(丙-2-基-d7))-1H-吡 唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基-1,1,3,3,3-d5)氨基甲酸甲酯(化合物L-5-R)的制备。
Figure RE-GDA0002143247900000391
Figure RE-GDA0002143247900000401
采用以下合成路线：
Figure RE-GDA0002143247900000402
步骤1化合物16的合成
氮气保护下，依次将中间体化合物A(0.5g，1.5mmol)，中间体化合物C(0.2g，1.5mmol)，碳酸钠(0.63g，6.0mmol)加入到DMSO(20ml)溶液中，将溶液升至90℃，在该温度下搅拌反应16h，反应完全后，反应液用二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:2)，得到产物0.45g，收率68％。LC-MS(APCI): m/z＝456.68(M+1)+。
步骤2化合物17的合成
氮气氛围下，依次将化合物16(0.45g，0.98mmol)、化合物3(0.55g，1.54mmol)，碳酸钠 (0.42g，3.95mmol)，Pd(dppf)Cl2(0.08g，0.1mmol)加入到甲苯(20ml)和水(4ml)的混合溶液中，加热至80℃反应2h。反应液冷却至室温，再用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)，得到产物0.40g，收率70％。LC-MS(APCI):m/z＝574.16(M+1)+。
步骤3化合物18的合成
在0℃下，缓慢地将4M盐酸的二氧六环(2ml)溶液加入至化合物17(0.40g，0.70mmol) 的二氯甲烷(10ml)溶液中，升至室温继续反应6h。反应完全后直接旋干溶液，直接投下一步，无需再处理。LC-MS(APCI):m/z＝474.21(M+1)+。
步骤4化合物L-5的合成
将三乙胺(0.23g，2.21mmol)加入至化合物18(0.35g，0.74mmol)的二氯甲烷(10ml) 液中，该溶液降至0℃后，然后将甲磺酰氯(0.25g，2.2mmol)慢慢滴加到上溶液中，该反应液在室温下反应5h，反应完全后直接旋干反应液，再往残留物中加入甲苯(9ml),甲醇(1ml),水 (10ml)，碳酸钠(2g),该溶液在85℃下在反应10h，反应液冷却至室温，再用乙酸乙酯(20ml×3) 萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩液进行柱分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到产物120mg，收率30％。LC-MS(APCI):m/z＝552.33(M+1)+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.02 (d,2H),7.61(d,1H),7.45(d,1H),6.40(d,1H),5.22(d,1H),5.18(s,1H),4.59(d,1H),3.58(s, 3H),2.98(d,3H),2.05(s,1H).
步骤5化合物L-5-S和L-5-R的合成
采用手性制备柱将消旋体化合物L-4进行分离得到化合物L-5-S和L-5-R。
生物活性测试。
(1)激酶活性实验
使用ADP-GloTM Kinase Assay kit(Promega，V9102)试剂盒，测定待测物对BRAF(Invitrogen， PV3848)、cRAF(BPS Bioscience，40008)和BRAF(V600E)(Invitrogen，40533)的抑制活性。
用DMSO(MP，196055)分别将化合物按3倍浓度梯度稀释，各10个剂量。384孔板(Perkin Elmer，6007290)每孔加入100nl化合物稀释液与2.5μL BRAF或cRAF或BRAF(V600E)，双复孔。25℃孵育15分钟后，加入2.5μL底物启动反应，25℃孵育60分钟。体系中最终反应浓度为： 5nM BRAF或1.5nM cRAF或5nM BRAF(V600E)，10mM ATP，200nM MEK1，HEPES50mM， EGTA 1mM，MgCl2 10mM，Brij35 0.01％。待测化合物浓度:300,100,33.33,11.11,3.7,1.23,0.412, 0.137,0.046,0.015,0nM，DMSO终浓度为1％。然后加入10μL ADP Gloreagent，25℃继续孵育 40分钟。再加入20μL检测试剂，25℃孵育40分钟后，通过Envision酶标仪(Perkin Elmer 2104) 检测，测定在各浓度化合物存在下的酶活力，并计算不同浓度的化合物对酶活力的抑制活性。之后根据四参数方程，根据Graphpad 5.0软件对不同浓度化合物下酶活力的抑制活性进行拟合，计算出 IC50值。
在上述酶抑制实验中测试了本发明化合物，发现与非氘代的母型化合物Encorafenib相比，本发明化合物对BRAF和cRAF激酶具有相当甚者更强的抑制作用，表明本发明化合物对BRAF V600E突变具有更强效的活性。代表性的实施例化合物的结果归纳于下表1中。
表1:
实施例化合物 BRAF IC<sub>50</sub>(nM) cRAF IC<sub>50</sub>(nM) BRAF(V600E)IC<sub>50</sub>(nM)
Encorafenib 2.95 1.49 4.98
L-1 3.49 2.31 3.64
L-2 1.57 1.36 2.43
L-3 2.22 1.26 2.14
L-4-S 3.77 1.66 3.58
L-5-S 7.41 3.74 11.98
(2)细胞毒性实验
A375是包含BRAF V600E突变的黑色素瘤细胞系，HT-29是包含BRAF V600E突变的结直肠癌细胞系。
取A375(贴壁，细胞数量/孔：3000，培养基：RPMI-1640+10％FBS)及HT-29(贴壁，细胞数量/孔：3000，培养基：RPMI-1640+10％FBS)对数生长期细胞，用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。将细胞接种到96孔板中，37℃、5％CO2培养过夜。配制10倍药物溶液，最高浓度为1μM，9个浓度，3.16倍稀释。96孔板中每孔加入10μL药物溶液，三个复孔，继续培养72小时。每孔加入等体积的CTG溶液，定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解，室温放置 20分钟稳定冷光信号后，在SpectraMax多标记微孔板检测仪(MD，2104-0010A)上读取冷光值。使用GraphPad Prism 5.0软件分析数据，利用非线性S曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
在上述细胞毒性实验中测试了本发明化合物，发现与非氘代的母型化合物Encorafenib相比，本发明化合物对A375和HT-29具有更强的抑制作用，表明本发明化合物对BRAF V600E突变具有强效的活性。代表性的实施例化合物的结果归纳于下表2中。
表2
实施例化合物 A375 IC<sub>50</sub>(nM) HT-29 IC<sub>50</sub>(nM)
Encorafenib 4.07 8.96
L-1 5.33 7.74
L-2 3.75 6.79
L-3 3.50 7.20
L-4-S 3.73 7.27
L-5-S 5.58 10.46
(3)代谢稳定性评价
微粒体实验：人肝微粒体(HLM)：0.5mg/mL，Xenotech；大鼠肝微粒体(RLM)：0.5mg/mL，Xenotech；辅酶(NADPH/NADH)：1mM，Sigma Life Science；氯化镁：5mM，100mM磷酸盐缓冲剂(pH为7.4)。
储备液的配制：精密称取一定量的实施例化合物和对照品化合物的粉末，并用DMSO分别溶解至5mM。
磷酸盐缓冲液(100mM，pH7.4)的配制：取预先配好的150mL的0.5M磷酸二氢钾和700mL 的0.5M磷酸氢二钾溶液混合，再用0.5M磷酸氢二钾溶液调节混合液pH值至7.4，使用前用超纯水稀释5倍，加入氯化镁，得到磷酸盐缓冲液(100mM)，其中含100mM磷酸钾，3.3mM氯化镁， pH为7.4。
配制NADPH再生系统溶液(含有6.5mM NADP，16.5mM G-6-P，3U/mL G-6-P D，3.3mM氯化镁)，使用前置于湿冰上。
配制终止液：含有50ng/mL盐酸普萘洛尔和200ng/mL甲苯磺丁脲(内标)的乙腈溶液。取 25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL人肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL SD大鼠肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。
样品的孵育：用含70％乙腈的水溶液将相应化合物的储备液分别稀释至0.25mM，作为工作液，备用。分别取398μL的人肝微粒体或者大鼠肝微粒体稀释液加入96孔孵育板中(N＝2)，分别加入2 μL 0.25mM的的工作液中，混匀。
代谢稳定性的测定：在96孔深孔板的每孔中加入300μL预冷的终止液，并置于冰上，作为终止板。将96孔孵育板和NADPH再生系统置于37℃水浴箱中，100转/分钟震荡，预孵5min。从孵育板每孔取出80μL孵育液加入终止板，混匀，补充20μL NADPH再生系统溶液，作为0min 样品。再向孵育板每孔加入80μL的NADPH再生系统溶液，启动反应，开始计时。相应化合物的反应浓度为1μM，蛋白浓度为0.5mg/mL。分别于反应10、30、90min时，各取100μL反应液，加入终止板中，涡旋3min终止反应。将终止板于5000×g，4℃条件下离心10min。取100μL上清液至预先加入100μL蒸馏水的96孔板中，混匀，采用LC-MS/MS进行样品分析。
数据分析：通过LC-MS/MS系统检测相应化合物及内标的峰面积，计算化合物与内标峰面积比值。通过化合物剩余量的百分率的自然对数与时间作图测得斜率，并根据以下公式计算t1/2和 CLint，其中V/M即等于1/蛋白浓度。
Figure RE-GDA0002143247900000441
对本发明化合物及其没有氘代的化合物同时测验比较，评价其在人和大鼠肝微粒体的代谢稳定性。采用未经氘代的化合物Encorafenib作为对照品。在人和大鼠肝微粒体实验中，通过与未经氘代的化合物Encorafenib对照，本发明化合物可以明显改善代谢稳定性。代表性实施例化合物的结果归纳于下表3中。
表3：
Figure RE-GDA0002143247900000442
(4)大鼠药代动力学实验
6只雄性Sprague-Dawley大鼠，7-8周龄，体重约210g，分成2组，每组3只，经静脉或口服单个剂量的化合物(口服10mg/kg)，比较其药代动力学差异。
大鼠采用标准饲料饲养，给予水。试验前16小时开始禁食。药物用PEG400和二甲亚砜溶解。眼眶采血，采血的时间点为给药后0.083小时，0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、6 小时、8小时、12小时和24小时。
大鼠吸入乙醚后短暂麻醉，眼眶采集300μL血样于试管。试管内有30μL 1％肝素盐溶液。使用前，试管于60℃烘干过夜。在最后一个时间点血样采集完成之后，大鼠乙醚麻醉后处死。
血样采集后，立即温和地颠倒试管至少5次，保证混合充分后放置于冰上。血样在4℃ 5000rpm 离心5分钟，将血浆与红细胞分离。用移液器吸出100μL血浆到干净的塑料离心管中，标明化合物的名称和时间点。血浆在进行分析前保存在-80℃。用LC-MS/MS测定血浆中本发明化合物的浓度。药代动力学参数基于每只动物在不同时间点的血药浓度进计算。
实验表明，本发明化合物在动物体内具有更好的药代动力学性质，因此具有更好的药效学和治疗效果。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (15)

1.式(Ia)化合物：
Figure FDA0003487538530000011
其中，
R1是氢；
R2、R3和R4各自独立地选自氢或氘；
X5是CH3；
X1、X2、X3和X4各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D；
附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子；
或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐。
2.权利要求1所述的化合物，其为式(II)或(III)化合物：
Figure FDA0003487538530000012
其中，
R1是氢；
R2、R3和R4各自独立地选自氢或氘；
X5是CH3；
X1、X2、X3和X4各自独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D；
附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子；
或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐。
3.权利要求2所述的化合物，其中，R2和R3是氢，X2是CH3。
4.权利要求2所述的化合物，其中，R4是氢，X3和X4是CH3。
5.权利要求3所述的化合物，其中，R4是氢，X3和X4是CH3。
6.权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中，X1是CD3。
7.化合物，其选自下式化合物：
Figure FDA0003487538530000021
Figure FDA0003487538530000031
或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐。
8.一种药物组合物，其含有药学上可接受的赋形剂和权利要求1-7中任一项所述的化合物，或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐。
9.权利要求8所述的药物组合物，其还包含另外的治疗剂。
10.权利要求8所述的药物组合物，其中，另外的治疗剂选自不同的BRAF抑制剂、MEK1/2抑制剂、PI3K抑制剂、CDK4/6抑制剂、c-Met抑制剂、EGFR抑制剂、FGFR抑制剂、MAPK抑制剂或ERK抑制剂。
11.权利要求1-7中任一项所述的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或权利要求8-10中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗BRAF突变的增殖性疾病的药物中的用途。
12.权利要求11的用途，其中所述BRAF突变是V600突变。
13.权利要求12的用途，其中所述BRAF突变是V600E突变。
14.权利要求11的用途，其中所述增殖性疾病是特征为BRAF V600突变的黑素瘤或特征为BRAF V600突变的结直肠癌。
15.权利要求14的用途，其中所述增殖性疾病是特征为BRAF V600E突变的黑素瘤或特征为BRAF V600E突变的结直肠癌。
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