CN110090222A - 一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种如式Ⅰ所示的化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途。白头翁皂苷B4是从中药材白头翁中提取分离的天然有效成分，无毒，无耐药性，本发明的化合物白头翁皂苷B4具有较强的生物活性，对奶牛乳房炎具有优异的治疗效果，在治疗期间和治疗结束均不需弃奶，不仅为养殖户减少了经济损失，同时也减少了耐药性产生的风险。此外，白头翁皂苷B4不仅对临床型乳房炎具有优异的治疗效果，对久治不愈和隐性乳房炎也有优异的治疗效果。同时，白头翁皂苷注射液应用于奶牛乳房炎的治疗时具有安全、高效、无残留、无耐药性、无毒副作用的特点。

Description

一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药 物中的用途

技术领域

本发明涉及一种白头翁提取物在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途。

背景技术

白头翁Pulsatilla Chinensis(Bge.)Regel是毛莨科(Ranunculaceae)白头翁属植物，主要的药用部位是其干燥根。最早关于白头翁的记录是《神农本草经》，其味苦，性凉，归胃、肾、大肠经，功效以消赘、凉血、止泻、去火等为主，传统用于细菌性痢疾的治疗，对寒热温症、眼目赤痛等也有较好的治疗效果。白头翁的药理活性多样，主要可提高机体识别和抵御外来异物入侵的能力，降低肿瘤细胞的繁殖速率，减少病原微生物的数量及有效抑制自由基的氧化反应等，其中，最具有潜力应用是在抗炎抗肿瘤的新药开发方面。

冯秀芝等对白头翁在细胞凋亡方面的作用做了研究，认为白头翁对胃癌细胞有较好的诱导作用。此外，癌细胞增生及DNA复制与白头翁有效成分有关，可以对HL260细胞的生长起到抑制作用，并通过诱导凋亡来抑制乳腺癌(MCF-7)、肺癌(PG)、结肠癌(SW480)、恶性胶质瘤细胞(U87MG)等肿瘤细胞增生。李文超等将白头翁醇提物作用于各致病菌种，并研究了不同溶剂萃取物的抑菌作用，发现均有抑菌作用但效果不同。

奶牛乳房炎是世界公认的奶牛三大疾病之一，泌乳期多发，其发生的主要原因是病原微生物感染，此外还有挤奶操作不当、外伤造成的机械性损伤和化学试剂损伤等。乳房炎不仅影响产奶量，造成经济损失，而且影响乳的品质，危害人的健康。

奶牛乳房炎可分为隐性乳房炎和临床型乳房炎两大类。临床型乳房炎可见明显的临床症状和乳汁的肉眼可见变化，根据发病程度又可分为三级：1级乳房炎：牛奶异常；2级乳房炎：牛奶异常，乳房红肿热痛；3级乳房炎，牛奶异常，乳房红肿热痛，奶牛出现全身感染症状。临床型乳房炎是目前临床中主要的治疗对象，当揭发出临床型乳房炎奶牛时，需进行隔离治疗。隐性乳房炎又称为亚临床乳房炎，是奶牛发病最普遍的乳房炎类型，该类型乳房炎一般无临床症状表现，乳汁肉眼不可看出与正常乳汁的区别，需进行实验室试剂检测才可诊断，且该类乳房炎如果在牛群中未达到一定比例，一般不予治疗，正是因为其发病隐蔽，隐性乳房炎对奶牛造成的经济损失十分严重。

目前，对于奶牛乳房炎的治疗多采用乳房灌注、静脉注射等方法，治疗药物多为抗生素类药物，常见有头孢喹肟、恩诺沙星、青霉素、链霉素等。但长期使用抗生素容易产生耐药性，影响治疗效果；同时，使用抗生素治疗时，容易造成抗生素残留，污染奶源，危害人体健康。值得注意的是，若乳房炎为革兰氏阴性菌感染时，使用内酰胺类抗生素治疗，会破坏细胞壁释放内毒素，造成整个乳区的红、肿、热、痛，加重病情。因此，寻找一种安全且有效的治疗奶牛乳房炎的方法具有重要意义。

目前，未见关于本发明化合物用于治疗病毒性和/或细菌性奶牛乳房炎的报道。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种如式Ⅰ所示的化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途：

进一步地，所述药物是以前述化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

进一步地，所述制剂为注射液、乳房注入剂、散剂、膏剂、洗剂；优选的，所述制剂为注射液、乳房注入剂；更优选的，所述制剂为注射液。

进一步地，所述疾病为奶牛乳房炎。

进一步地，所述奶牛乳房炎为临床型乳房炎、隐性乳房炎。

进一步地，所述临床型乳房炎为初次治疗的临床型乳房炎、久治不愈的临床型乳房炎。

本发明还提供了一种治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物，它是以前述化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

进一步地，所述制剂为注射液、乳房注入剂、散剂、膏剂、洗剂；优选的，所述制剂为注射液、乳房注入剂；更优选的，所述制剂为注射液。

进一步地，所述疾病为奶牛乳房炎。

进一步地，所述奶牛乳房炎为临床型乳房炎、隐性乳房炎；优选的，所述临床型乳房炎为初次治疗的临床型乳房炎、久治不愈的临床型乳房炎。

本发明提供的白头翁提取物为化合物白头翁皂苷B4，其中文别名为白头翁皂甙B4，其英文名称为Anemoside B4。其CAS号为129741-57-7，其分子式为C₅₉H₉₆O₂₆，其分子量为1221.38，其性状为白色结晶状粉末。

目前，乳房炎治疗大多采用抗生素，其中又以广谱杀菌、破坏细胞核酸类抗生素较多常用，在治疗期间和治疗结束后4～5天需要弃奶，为养殖户造成较大经济损失，并有产生耐药性的风险。白头翁皂苷B4是从中药材白头翁中提取分离的天然有效成分，无毒，无耐药性，本发明的化合物白头翁皂苷B4具有较强的生物活性，对奶牛乳房炎具有优异的治疗效果，在治疗期间和治疗结束均不需弃奶，不仅为养殖户减少了经济损失，同时也减少了耐药性产生的风险。此外，白头翁皂苷B4不仅对临床型乳房炎具有优异的治疗效果，对久治不愈和隐性乳房炎也有优异的治疗效果。同时，白头翁皂苷注射液应用于奶牛乳房炎的治疗时具有安全、高效、无残留、无耐药性、无毒副作用的特点。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为白头翁皂苷B4含量测定的标准曲线。

图2为患临床型乳房炎的奶牛使用白头翁皂苷B4注射液治疗前后乳汁对比。

图3为患临床型乳房炎的奶牛使用白头翁皂苷B4注射液治疗前后乳汁对比。

图4为8558号久治不愈奶牛的治疗情况。

图5为隐性乳房炎奶牛的治疗情况。

具体实施方式

实施例1、本发明化合物的制备

取白头翁药材100kg，加10倍量70％乙醇加热回流提取2次，提取液75℃减压浓缩，4000r/min离心10min，上清液过极性大孔吸附树脂柱，依次用水、30％乙醇、70％乙醇洗脱，取70％乙醇洗脱部位75℃减压浓缩后，喷雾干燥得白头翁总皂苷提取物3450g；取提取物加水溶解后，滤液上动态轴向200制备色谱系统(填料为10μm的ODS)，采用50％甲醇洗脱，根据色谱峰收集相应的洗脱液，减压浓缩后，冷冻干燥得白头翁皂苷B4 1700g。

实施例2、本发明化合物的含量测定

1、仪器及试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪、DAD紫外检测器购于安捷伦科技(中国)有限公司，BP211D型电子分析天平购自德国Sartorius公司，KQ-400DB型数控超声波清洗器购于昆山市超声仪器有限公司。

白头翁皂苷B4样品，实施例1制备。

白头翁皂苷B4对照品(批号：111766-201702，含量：94.7％)，购于中国食品药品检定研究院。

2、色谱条件

色谱柱：Sepax Bio-C18(4.6×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水(64：36)；检测波长为201nm；流速：1.0mL/min。

3、对照品溶液的配制

取白头翁皂苷B4对照品适量，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，即得对照品溶液(每1mL含1mg白头翁皂苷B4)。

4、样品溶液的配制

取实施例1制备的白头翁皂苷B4样品10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，即得样品溶液。

5、测定法

分别精密量取对照品溶液和样品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算含量。

6、标准曲线和线性回归方程

取白头翁皂苷B4对照品，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，依次配制浓度约为1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL和20mg/mL的对照品溶液，各精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

表1白头翁皂苷B4对照品含量测定线性回归方程

由实验结果可知，白头翁皂苷B4在浓度为1.04～20.80mg/mL范围内，线性关系良好，R＝0.9999，适用于白头翁皂苷B4的含量测定。

7、白头翁皂苷B4样品含量测定

按照前述“3”所述方法，取白头翁皂苷B4对照品2份，各10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，即得对照品溶液1和对照品溶液2。

按照前述“4”所述方法，取白头翁皂苷B4样品2份，各10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解，定容至刻度，即得样品溶液1和样品溶液2。

按照上述色谱条件各精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

表2白头翁皂苷B4含量测定结果

由试验结果可知，本实验所得白头翁皂苷B4的含量为99.4％。

实施例3、本发明白头翁皂苷B4注射液的制备

1)处方：50g白头翁皂苷B4加水制备成1000mL的注射液。

2)制备方法：称取实施例1制备的白头翁皂苷B4 50g，加注射用水800mL，使其完全溶解，过滤，调pH至7.0，加注射用水至1000mL，精滤，灌装，封口，100℃灭菌30min，即得。

实施例4、本发明白头翁皂苷B4散剂的制备

1)处方：1000g白头翁皂苷B4制备成1000g的散剂。

2)制备方法：称取实施例1制备的白头翁皂苷B4 1000g，粉碎成细粉，过100目筛，混匀，即得。

实施例5、本发明白头翁皂苷B4乳房注入剂的制备

1)处方：50g白头翁皂苷B4制备成1000mL的乳房注入剂。

2)制备方法：称取实施例1制备的白头翁皂苷B4 50g，加蒸馏水800mL，使其完全溶解，过滤，调pH至7.0，加蒸馏水至1000mL，精滤，灌装，封口，100℃灭菌30min，即得。

以下通过试验例的方式来说明本发明的有益效果。

试验例1、本发明化合物不同给药途径对奶牛乳房炎治疗效果的影响

目前治疗乳房炎的给药途径有乳房灌注、肌内注射和静脉注射。

其中，乳房灌注是最常见的给药途径，将治疗药物通过乳头直接注入到患病乳区，达到局部用药，精准治疗的效果。现已有多种用于乳房灌注的商品化药物制剂，如东方澳龙公司的澳乃康(硫酸头孢喹肟乳房注入剂)、美国辉瑞公司的乳畅(头孢噻呋注入剂)等。

肌内注射为将药物通过注入到动物肌肉组织中，经血液循环到达患病乳区，起到治疗效果。肌内注射给药方便，且能够在一定程度上控制由乳房炎引起的全身性的炎症、发热等症状。

静脉注射为将药物直接注入到动物静脉血中，经血液循环到达患病乳区，药物到达有效部位速度快，且能够治疗全身症状，但对药物的性状有一定要求，不能为悬浊液，对血管刺激性小。德国拜尔公司推荐其产品拜有利(恩诺沙星制剂)通过静脉注射的方式治疗乳房炎，药物在患病乳区能达到较高的浓度，起到治疗的效果，同时可控制全身的感染。

以上三种治疗奶牛乳房炎的给药途径各有优缺点，本试验旨在探究白头翁皂苷B4对奶牛乳房炎的治疗作用及最适宜的给药途径，此研究结果将会对如何使白头翁皂苷B4发挥最佳治疗效果、及药物之后的研发和包装提供重要的参考。

1、受试药物

实施例3制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL；实施例5制备的白头翁皂苷B4乳房注入剂，浓度为50mg/mL。

阳性药物：硫酸头孢喹肟乳房注入剂，8g/支(佛山市南海东方澳龙制药有限公司)。

2、受试动物

选取患病奶牛(2级临床型乳房炎)130头，随机分成13组，每组10头奶牛。

3、给药剂量与方式

表3给药剂量与给药方式

患病乳区肌内注射给药：用白头翁皂苷B4注射液对患病乳区进行局部肌内注射，每天早晚各一次，连用7天；

静脉注射给药：将白头翁皂苷B4注射液通过静脉注射给药，每天一次，连用7天；

乳房注入给药：白头翁皂苷B4乳房注入剂和阳性药硫酸头孢喹肟乳房注入剂采用患病乳区乳管内注入给药，每天早晚各一次，连用7天。

本发明白头翁皂苷B4的每种给药途径各设置一组空白对照组，以给药量同等剂量生理盐水给药。

4、评价指南

每次给药前，检查奶牛体温、呼吸、精神、采食状况等指标，观察乳房和乳汁的变化。

完全治愈：患病乳区红、肿、热、痛等临床症状完全消失，泌乳恢复正常。

临床治愈：患病乳区红、肿、热、痛等临床症状基本消失，泌乳基本恢复正常。

无效：患病乳区临床症状无明显改善甚至加重，或者停药两周内复发，两者均视为无效。

5、实验结果

表4不同给药途径治疗奶牛乳房炎的治愈率及治愈时间

白头翁皂苷B4不同给药途径总体治愈率及治愈时间结果见表4：不同给药途径用于治疗奶牛乳房炎时均有显著效果，且各给药途径的高剂量组治愈率均高于阳性药物硫酸头孢喹肟乳房注入剂，其中白头翁皂苷B4注射液肌内注射治愈效果最好，治疗周期最短。

试验例2、本发明白头翁皂苷B4治疗临床型乳房炎的研究

1、受试药物

采用实施例3制备方法制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL。

对照药物为双丁注射液(10mL/支，批号：DV3180701)，河北远征药业有限公司。

2、受试动物

选择体重612±47kg左右，年龄3-5周岁，2-4胎次，临床检查健康、泌乳期自然发生临床型乳房炎的中国荷斯坦奶牛60头，随机分为5组，每组12只。

3、试验方法

3.1给药剂量与方式

表5给药剂量与给药方式

试验奶牛发病后给药前记为D0，根据预先设计的给药品种和给药剂量(表5)，按体重计算给药量，在D1日开始对各组患有临床乳房炎的奶牛，每日按肌内注射的方法给药，1次/日，试验药物(白头翁皂苷B4注射液)和对照药物(双丁注射液)持续用药4～7天，视治愈情况而定。观察用药前后(D0～D12日)各组奶牛的临床症状，并按标准进行评分(详见表6)，并做好给药记录。在试验结束时(D12日)，综合上述各项指标观测结果，按标准判定每头奶牛的疗效，计算各组奶牛的治愈率和有效率。

3.2患临床型乳房炎的奶牛临床症状检查评分标准

分别在D0(揭发临床乳房炎后，给药前)、D1(初次给药后，第二次给药前)、D2～D7(痊愈的奶牛停药，未痊愈的奶牛继续给药)、D8～D12(所有奶牛停药)，定时检查各奶牛的临床症状和乳房局部症状，如精神状态、食欲饮欲等，按下表标准进行评分(见表6)，做好临床症状记录(乳房局部症状评分)。

表6患临床型乳房炎的奶牛临床症状检查评分标准表

3.3奶牛乳汁体细胞数检测方法

分别在试验的D0、D7、D12采集试验患临床型乳房炎奶牛的乳汁，进行体细胞数检测并做好记录。

3.4疗效判定

根据临床症状检查评分标准判断

第2-7天每日治疗的治愈率：在D2开始，如果乳房炎奶牛满足评分总和＜1，则视为治疗痊愈。7天内治愈率为第2-7天每日治疗的治愈率之和。

第2-7天每日治疗的有效率：在D2开始，如果患乳房炎的奶牛满足1≤评分总和≤2，则视为治疗有效。7天内有效率为第2-7天每日治疗的有效率之和。

复发率：在D5～D12期间，如果判定为治疗成功的患病奶牛，停药后满足评分总和＞2，则视为复发。

第12天治疗的治愈率(总治愈率)：在D12，如果患乳房炎的奶牛满足评分总和＜1，则视为第12天治愈。

第12天治疗的有效率(总有效率)：在D12，如果患乳房炎的奶牛满足1≤评分总和≤2，则视为治疗有效。

以治愈率为主要指标，以有效率、临床症状评分、体细胞数为次要指标，综合评价受试药物(白头翁皂苷B4注射液)对自然感染的奶牛临床乳房炎的治疗效果，并与对照药物双丁注射液的治疗效果进行比较，确定受试药物的临床推荐用药剂量。

4、试验结果

4.1各组临床型乳房炎奶牛治疗效果结果

由表7可见，白头翁皂苷B4注射液治疗奶牛临床乳房炎，不论低、中、高剂量，其七天内治愈率和总治愈率均大于使用双丁注射液的对照组，平均治愈时间均短于对照组，说明白头翁皂苷B4注射液对临床乳房炎的治疗效果优于双丁注射液。高剂量组总治愈率高于中、低剂量组，中剂量组与低剂量组总治愈率相同，但未见复发，且平均治愈时间短于低剂量组，表现出一定的量效关系。

表7各组患临床型乳房炎的奶牛的治疗效果结果

4.2各组试验奶牛临床症状检查评分结果

由表8可见，低剂量组乳房炎奶牛临床症状检查评分在D0-D4之间、D5-D12之间差异均分别不显著(p＞0.05)，但在D5-D12与D0-D2之间、D7-D12与D0-D4之间差异均分别显著(p＜0.05)，表明：低剂量组乳房炎奶牛在D5时发生显著好转，且在D7时发生较显著痊愈。中剂量组乳房炎奶牛临床症状检查评分在D0-D1之间、D2-D5之间、D4-D12之间差异均分别不显著(p＞0.05)，但在D3-D12与D0-D2之间、D6-D12与D0-D3之间差异均分别显著(p＜0.05)，表明：中剂量组奶牛在D3时发生较为显著的好转，且在D6时发生显著痊愈。高剂量组乳房炎奶牛临床症状检查评分在D0-D3之间、D1-D5之间、D3-D6之间、D7-D12之间异均分别不显著(p＞0.05)，但在D4-D12与D0之间、D6-D12与D0-D2之间、D7-D12与D0-D6之间差异显著(p＜0.05)，结果显示：高剂量组乳房炎奶牛在D4时普遍开始好转，在D6时痊愈奶牛头数已明显增多，且在D7时有再次有部分奶牛痊愈。对照组乳房炎奶牛临床症状检查评分在D0-D4之间、D2-D6之间、D3-D12之间差异均分别不显著(p＞0.05)，但在D5-D12与D0-D4之间、D7-D12与D0-D6之间差异均分别显著(p＜0.05)，结果显示：对照组奶牛在D5时发生好转，在D7时痊愈一定数量奶牛。

D0时中剂量组临床症状检查评分显著高于低剂量组和高剂量组(p＜0.05)，说明中剂量组奶牛发病较为严重；D1时中剂量组临床症状检查评分显著高于其余3组(p＜0.05)，D2时中剂量组临床症状检查评分显著高于低剂量组和高剂量组(p＜0.05)，说明在治疗初期，中剂量组奶牛对改善乳房炎奶牛临床症状有较明显的效果；D3-D5和D7时四组间奶牛临床症状检查评分差异均不显著(p＞0.05)；D12时对照组奶牛临床症状检查评分显著高于高剂量组(p＜0.05)，说明对照组的治疗效果较白头翁治疗组差。

表8各组奶牛临床症状检查评分结果

注：同行上标有不同大写字母表示差异显著(p＜0.05)，上标有相同大写字母表示差异不显著(p＞0.05)。同列下标有不同大写字母表示差异显著(p＜0.05)，下标有相同大写字母表示差异不显著(p＞0.05)。下表同。

4.3各组试验奶牛乳汁体细胞检测结果

表9各组痊愈奶牛乳汁体细胞结果(万个/mL)

由表9可见，各组奶牛乳汁体细胞D0-D7呈下降趋势，低剂量组、中剂量组和对照组D7与D12之间差异不显著，但与D0差异显著，说明随着药物的治疗，乳汁体细胞在D7时发生显著改善，并在之后没有复发。而高剂量组D0、D7与D12三个时间点间均差异显著，一方面说明乳汁体细胞的显著好转，另一方面也与该组奶牛平均治愈时间较长有关。D0时四组奶牛乳汁体细胞差异不显著，说明各组奶牛发病时从乳汁体细胞的角度来看病情相似；D7时中剂量组奶牛体细胞显著低于高剂量组和对照组，这与中剂量组平均治愈天数较短有关；D12时对照组奶牛乳汁体细胞显著高于中剂量组，说明白头翁皂苷B4注射液治疗奶牛乳房炎较双丁注射液恢复好。

通过白头翁皂苷B4注射液对奶牛临床型乳房炎疗效、乳汁体细胞数量、临床治愈率及治愈试验观察发现，不同浓度白头翁皂苷B4注射液对奶牛临床型乳房炎均有明显治疗作用，效果优于阳性对照药双丁注射液；并且白头翁皂苷B4注射液无毒，无耐药性，在治疗期间和治疗结束均不需弃奶，不仅为养殖户减少了经济损失，同时也减少了耐药性产生的风险。

图2和图3为患临床型乳房炎的奶牛使用白头翁皂苷B4注射液治疗前后乳汁对比。由图2和图3均可知：治疗第一日，患临床型乳房炎奶牛的乳汁中絮状物较多，随着治疗时间增加，絮状物逐渐减少，乳汁逐渐恢复正常，治疗第六日后，乳汁恢复正常。说明白头翁皂苷B4注射液治疗临床型乳房炎，改善牛奶质量有明显的作用。

试验例3、本发明白头翁皂苷B4治疗久治不愈临床型乳房炎和隐性乳房炎的研究

1、受试药物

采用实施例3制备方法制备的白头翁皂苷B4注射液，浓度为50mg/mL。

2、试验奶牛

试验选取石家庄天泉良种奶牛有限公司奶牛牧场现有全部临床型乳房炎奶牛8头，这8头为治疗一个月左右的久治不愈病例(2头接近瞎奶)，这8头奶牛曾接受过牧场兽医治疗，治疗药物及方法有硫酸头孢喹肟乳房注入剂乳区灌注、头孢类注射液静脉注射和公英散灌服等。

试验随机选取天泉奶牛牧场隐性乳房炎奶牛6头，均为兽医上一次LMT检测结果至少一个患病乳区“++”及以上。

3、试验内容

研究白头翁皂苷B4注射液对久治不愈临床型乳房炎的疗效；以及白头翁皂苷B4注射液对隐性乳房炎的疗效。

4、试验药物及用量用法

试验采用实施例3制备方法制备白头翁皂苷B4注射液，对6头久治不愈及2头久治不愈接近瞎奶的临床型乳房炎奶牛进行治疗，不论几个乳区发生炎症，均采取肌内注射60mL，1次/日。

对随机选取的6头隐性乳房炎奶牛，不论几个乳区发生炎症，均采取肌内注射30mL，1次/日。

表10试验药物及用量用法

5、试验结果

5.1久治不愈临床型乳房炎奶牛治疗情况

试验收治8头患临床型乳房炎且久治不愈的奶牛，给药3次后，痊愈4头，明显好转1头，效果不明显1头；2头接近瞎奶奶牛无效。研究结果表明：白头翁皂苷B4对于采用抗生素或其他手段治疗无效的奶牛乳房炎依然有很好的疗效。

部分久治不愈奶牛治疗情况：耳号8558奶牛，该奶牛用药前检查乳汁稀薄，含有少量絮状物，LMT检测结果为“+++”；肌内注射白头翁皂苷B4注射液60mL一次后，乳汁中无肉眼可见絮状物，颜色略黄，用药第二次后乳汁恢复正常，兽医进行LMT检测，结果为“++”，随后牧场兽医转移圈舍。图4为8558号久治不愈奶牛的治疗情况，由图4可知随着治疗时间增加，8558号奶牛分泌乳汁逐渐正常，用药2次后，乳汁恢复正常，达到临床治愈。

5.2隐性乳房炎奶牛治疗情况

依据牧场兽医LMT检测结果，随机选取发生隐性乳房炎奶牛6头，均为至少一个乳区“++”及以上，肌内注射白头翁皂苷B4注射液30mL，三天后，5头奶牛LMT检测结果均明显好转，另一头奶牛(532006号)好转不明显，但未发生加重现象。

表11隐性乳房炎试验结果

注：由于牧场没有体细胞检测仪，需送至其他牧场检测，奶牛场兽医还未完成试验后体细胞检测工作，但给药三天后LMT检测结果表示5头隐性乳房炎奶牛出现明显好转。

特殊牛只说明：1106021号奶牛，给药前左边两个乳区患有隐性乳房炎，LMT检测结果左前为“++”，左后为“+++”，右后为完全瞎奶，无法挤出乳汁，右前头三把奶乳汁粘稠，颜色发黄，再挤出数把后，出现带血黏液状液体，无乳汁特性。每天肌内注射1次白头翁皂苷B4注射液30mL，给药3天后，右前未见好转，左前LMT检测结果为“－”，左后为“++”，体细胞明显降低，有显著疗效。

其他5头患隐性乳房炎的奶牛每天肌内注射1次白头翁皂苷B4注射液30mL，治疗三天后，4头发生好转，LMT检测结果说明体细胞降低，另一头奶牛(532006号)好转不明显。图5为部分患隐性乳房炎的奶牛通过白头翁皂苷B4注射液治疗三天后的治疗情况，由图5可知，通过给药治疗后，患隐性乳房炎的奶牛病情出现好转。

研究结果表明：白头翁皂苷B4对于隐性乳房炎具有很好的疗效。

患病奶牛经牧场兽医用硫酸头孢喹肟乳房注入剂乳区灌注、头孢类注射液静脉注射和公英散灌服等方法治疗一个月左右，但未取得效果，进而转归为慢性乳房炎，表现为乳质稀薄，持续含有大量絮状物，究其原因可能为：一方面该牧场治疗乳房炎使用药物单一，治疗过程中仅使用抗菌药物而未注意抗炎；另一方面使用抗生素种类单一，且未进行致病菌分离鉴定，产生细菌耐药性，对药物不敏感；再一方面同时长期治疗，乳腺组织增生，造成慢性炎症，药物更难到达有效部位，病情顽固。采用白头翁皂苷B4注射液对试验收治8头奶牛进行治疗时，给药3次后，痊愈4头，明显好转1头，效果不明显1头；2头接近瞎奶奶牛无效。研究结果表明：白头翁皂苷B4对于采用抗生素或其他手段治疗无效的奶牛乳房炎依然有很好的疗效。

隐性乳房炎是奶牛发病最普遍的乳房炎类型之一，由于其通常无临床症状表现，乳汁肉眼也不可看出与正常乳汁的区别，需进行实验室试剂检测才可诊断，该类乳房炎如果在牛群中未达到一定比例，一般不予治疗，而正是因为其发病隐蔽，对奶牛造成的经济损失也最严重。应用白头翁皂苷B4注射液治疗6头隐性乳房炎奶牛时，4头奶牛发生好转；1头LMT检测体细胞降低，有显著疗效；1头奶牛好转不明显，研究结果表明：白头翁皂苷B4应用于隐性奶牛乳房炎时具有很好的疗效。

此外，在奶牛乳房炎治疗过程中，随机抽取试验用白头翁皂苷B4注射液委托四川省兽药监察所进行200多种抗生素检测，未检测出抗生素成分；奶牛给药后第二天，在牛场对乳汁进行过抗检测过程中，均能通过牛场抗生素残留检测；白头翁皂苷B4对奶牛乳汁中免疫球蛋白和炎性因子影响较小，能够保证乳汁成份稳定，无残留，不会对奶牛养殖场站鲜乳品质造成影响。

目前，乳房炎治疗大多采用抗生素，其中又以广谱杀菌、破坏细胞核酸类抗生素较多常用，在治疗期间和治疗结束后4～5天需要弃奶，为养殖户造成较大经济损失，并有产生耐药性的风险。白头翁皂苷B4是从中药材白头翁中提取分离的天然有效成分，无毒，无耐药性，本发明的化合物白头翁皂苷B4具有较强的生物活性，对奶牛乳房炎具有优异的治疗效果，在治疗期间和治疗结束均不需弃奶，不仅为养殖户减少了经济损失，同时也减少了耐药性产生的风险。此外，白头翁皂苷B4不仅对临床型乳房炎具有优异的治疗效果，对久治不愈和隐性乳房炎也有优异的治疗效果。同时，白头翁皂苷注射液应用于奶牛乳房炎的治疗时具有安全、高效、无残留、无耐药性、无毒副作用的特点。

Claims (10)

1.一种如式Ⅰ所示的化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐在制备治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物中的用途：

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是以权利要求1所述化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述制剂为注射液、乳房注入剂、散剂、膏剂、洗剂；优选的，所述制剂为注射液、乳房注入剂；更优选的，所述制剂为注射液。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述疾病为奶牛乳房炎。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述奶牛乳房炎为临床型乳房炎、隐性乳房炎。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述临床型乳房炎为初次治疗的临床型乳房炎、久治不愈的临床型乳房炎。

7.一种治疗病毒性和/或细菌性疾病的药物，其特征在于：它是以权利要求1所述化合物白头翁皂苷B4或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述制剂为注射液、乳房注入剂、散剂、膏剂、洗剂；优选的，所述制剂为注射液、乳房注入剂；更优选的，所述制剂为注射液。

9.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述疾病为奶牛乳房炎。

10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于：所述奶牛乳房炎为临床型乳房炎、隐性乳房炎；优选的，所述临床型乳房炎为初次治疗的临床型乳房炎、久治不愈的临床型乳房炎。