CN110006878B - 一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法及试剂盒 - Google Patents
一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法及试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法及试剂盒。本发明通过生理盐水空白样、NaF阳性对照样、Na18F待测样、“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液之间的颜色对比即可得到检定结果。其中，生理盐水空白样的颜色为蓝色，NaF阳性对照样的颜色为蓝青色，并且至少满足“Na18F待测样与NaF阳性对照样相比偏蓝色；或Na18F待测样与“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液相比偏蓝色；或“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液不比NaF阳性对照样的颜色更紫”三种情况中的任意一种，说明产品中氟离子浓度满足限度要求，即氟离子浓度低于0.452mg/mL。本发明还公开了上述四种溶液的配制方法，并进一步公开了其试剂盒的制备方法。该显色方法操作简便，灵敏度高，且通过颜色对比判断直观、快速，具有较强的实际应用价值。
Description
技术领域
本发明属于离子检测技术领域，具体的说涉及一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法及试剂盒。
背景技术
Na18F注射液能够高灵敏度、高特异性地针对肿瘤骨转移进行早期诊断、检测复发和预后监测，并协助医生确定最优的治疗方案。另外，近年来的研究显示，Na18F也能够有效鉴别破裂高风险的冠状动脉粥样硬化斑块，有助于早期干预该疾病以防止不良临床事件。因此，商业化生产的Na18F对上述疾病的诊断和治疗均具有很高的价值。
欧洲药典8.0中建议一个剂量的Na18F注射液中氟元素最大剂量为4.52mg，规定Na18F注射液体积为10mL，通过换算可知，注射液中氟离子浓度上限为0.452mg/mL，进一步地换算，Na18F的浓度上限为0.999mg/mL，也就是说当Na18F注射液浓度低于0.999mg/mL时，氟离子含量方能满足限度要求。
在缓冲溶液中，Zr-EDTA能与PV形成蓝色多配体络合物，当向溶液中加入氟离子，由于氟离子与Zr4+离子有更强的络合能力，会与PV形成竞争，导致原有的络合物发生配体交换反应，而解离出来的PV呈橙色，随着氟离子浓度的增大，溶液可呈现蓝靑色-紫色-黄色的变化次序。
发明内容
为了符合欧洲药典对Na18F注射液中氟离子浓度限度的要求，并基于氟离子显色的原理，本发明的目的在于提供一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法，该方法显色过程快速稳定、操作简便、灵活度高，并进一步公开了其试剂盒的制备方法。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法，通过生理盐水空白样、NaF阳性对照样、Na18F待测样以及“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液之间的颜色对比即可得到检定结果。
进一步地，我们公开了所述显色方法至少包含NaF阳性对照样和“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液中的任意一种。
在一些优选地技术方案中，同时包含所述NaF阳性对照样和“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液。
进一步地，我们还公开了生理盐水空白样配制方法为：将Zr-EDTA溶液、邻苯二酚紫(PV)溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与生理盐水摇匀混合；其中，Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与生理盐水体积比为6：1：2：1。
进一步地，我们还公开了NaF阳性对照样配制方法为：将Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与(0.172～0.223)mg/mL NaF标准溶液摇匀混合；其中，Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与NaF溶液体积比为6：1：2：1。
进一步地，我们还公开了Na18F待测样配制方法为：将待测Na18F溶液与生理盐水混合，两者体积比为1：(3.5～4.8)，得到稀释的待测样；再将Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与稀释的待测样摇匀混合；其中，Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与稀释的待测样体积比为6：1：2：1。
进一步地，我们还公开了“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液配制方法为：将待测Na18F溶液与0.999mg/mL NaF标准溶液和生理盐水混合，三者体积比为1：1：(2.5～3.8)，得到稀释的待测样+阳性对照样；再将Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与稀释的待测样+阳性对照样摇匀混合；其中，Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与稀释的待测样+阳性对照样体积比为6：1：2：1。
本发明中，所述颜色对比的方法如下：
a.生理盐水空白样的颜色为蓝色；
b.NaF阳性对照样的颜色为蓝青色；
c.当Na18F待测样中Na18F浓度低于0.172mg/mL，颜色为蓝色；当浓度为(0.172～0.223)mg/mL，颜色为蓝青色；当浓度高于0.223mg/mL，颜色变化次序为紫色-黄色；
d.至少满足“Na18F待测样与NaF阳性对照样相比偏蓝色；或Na18F待测样与“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液相比偏蓝色；或“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液不比NaF阳性对照样的颜色更紫”三种情况中的任意一种，说明产品中氟离子浓度限度要求，即氟离子浓度低于0.452mg/mL。
在一些优选地技术方案中，配制Na18F待测样时，所述待测Na18F溶液与生理盐水混合体积比为1：4。
在一些优选地技术方案中，配制“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液时，所述待测Na18F溶液与0.999mg/mL NaF标准溶液和生理盐水三者体积比为1：1：3。
在一些优选地技术方案中，所述Na18F待测样显示蓝青色时，Na18F浓度为0.199mg/mL。
同时，我们还进一步限定了，所述Zr-EDTA溶液的浓度为1.0×10-3mol/L；所述PV溶液的浓度为1.0×10-3mol/L；所述乙酸-乙酸钠缓冲液的pH范围为4.1～4.3，优选缓冲液的pH值为4.2。
进一步地，我们还公开了一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的试剂盒，其采用上述检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法。
本发明所述的Zr-EDTA即为锆(Ⅳ)与乙二胺四乙酸的络合物，PV为邻苯二酚紫。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法及试剂盒。通过本发明提供的技术方案，能准确的检测氟离子含量是否满足药典要求，通过颜色对比判断快速直观，且试剂盒的应用更方便了研发与生产中对Na18F注射液中氟离子浓度的检定需求。
附图说明：
图1为实施例1中空白样、阳性对照样、待测样、待测样+阳性对照样颜色对比图。
具体实施方式：
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下文结合具体实施例对本发明的内容做进一步详细地说明，所述的实施例目的仅用于说明和描述本发明当前的最佳模式，但本发明的保护范围不以任何方式受此处所述实施例的限制。
实施例1
1、生理盐水空白样的配制
用100μL量程微量移液器分别取Zr-EDTA溶液(60μL)、PV溶液(10μL)、乙酸-乙酸钠缓冲液(20μL)与生理盐水(10μL)，一起置于0.25mL离心管内，密闭，室温下摇匀，静置0.5min，观察颜色。
2、NaF阳性对照样的配制
用100μL量程微量移液器分别取Zr-EDTA溶液(60μL)、PV溶液(10μL)、乙酸-乙酸钠缓冲液(20μL)与0.199mg/mLNaF标准溶液(10μL)，一起置于0.25mL离心管内，密闭，室温下摇匀，静置0.5min，观察颜色。
3、Na18F待测样的配制
用100μL量程微量移液器分别取Na18F注射液(10μL)与生理盐水(40μL)，混匀稀释，从中取出10μL，与Zr-EDTA溶液(60μL)、PV溶液(10μL)和乙酸-乙酸钠缓冲液(20μL)一起置于0.25mL离心管内，密闭，室温下摇匀，静置0.5min，观察颜色。
4、“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液配制
用100μL量程微量移液器分别取Na18F(10μL)、0.999mg/mLNaF标准溶液(10μL)与生理盐水(30μL)，混合均匀，从中取出10μL，与Zr-EDTA溶液(60μL)、PV溶液(10μL)和乙酸-乙酸钠缓冲液(20μL)，一起置于0.25mL离心管内，密闭，室温下摇匀，静置0.5min，观察颜色。
现象：以上四种溶液的颜色对比见图1，通过观察可以看出：生理盐水空白样呈蓝色，其作为阴性对照；NaF阳性对照样呈蓝青色；Na18F待测样呈蓝色，与阴性对照颜色接近，与阳性对照样相比偏蓝色，与“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液相比也偏蓝色；“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液与阳性对照样相比，颜色接近。
结论：Na18F浓度低于0.199mg/mL，即Na18F注射液中氟离子浓度低于0.452mg/mL，进一步说明Na18F注射液中氟离子浓度满足浓度限度要求。
实施例2试剂盒的制备
Zr-EDTA溶液的配制：称量112.5±0.5mg Zr(H2O)2EDTA·2H2O，加入至250mL烧杯中，向烧杯中加入100mL去离子水，超声至溶解，将此溶液倒入250mL容量瓶中，向容量瓶中补加去离子水定容，摇匀，即得Zr-EDTA浓度为1.0×10-3mol/L。
PV溶液的配制：称量100±0.5mg PV，置于100mL烧杯中，向烧杯中加入100mL去离子水，超声至溶解，将此溶液倒入250mL容量瓶中，向容量瓶中补加去离子水定容，摇匀，得到PV浓度为1.0×10-3mol/L。
NaF标准溶液的配制：称量199±0.5mg NaF，倒入50mL容量瓶中，向容量瓶中补加生理盐水定容，摇匀，即得3.98mg/mL NaF溶液。将上述3.98mg/mL NaF溶液用生理盐水稀释相应的倍数，即可分别得到0.999mg/mL NaF标准溶液和0.199mg/mL NaF标准溶液。
试剂盒组成：1.0×10-3mol/L Zr-EDTA溶液(10mL)、1.0×10-3mol/L PV溶液(10mL)、pH＝4.2乙酸-乙酸钠缓冲液(10mL)、0.199mg/mL NaF标准溶液(10mL)、0.999mg/mLNaF标准溶液(10mL)、生理盐水(10mL)。
通过实验验证：所有试剂配制完成，并置于4℃保存4周，仍可用于显色反应，且对显色效果没有影响，因此试剂盒中试剂有效期至少为4周。
实施例3不同浓度NaF溶液在不同pH缓冲液条件下的显色情况，见表1。
表1
结论：通过表1可知，当pH为4.0时，显色反应对NaF浓度高低敏感过强，所有NaF样品的颜色均为紫色，不适用于该显色反应；当pH为4.4时，显色反应对NaF浓度高低敏感性减弱，样品的颜色均为蓝色，同样也不适合于该显色反应。
当pH为4.1～4.3时，浓度为0.164mg/mL时，NaF样品的颜色为蓝色；浓度为0.234mg/mL时，NaF样品的颜色为紫色；浓度为(0.172～0.223)mg/mL时，NaF样品呈现蓝青色。因此可认为pH为4.1～4.3时，NaF显色反应的临界浓度范围为(0.172～0.223)mg/mL；特别在pH为4.2、NaF浓度为0.199mg/mL时能观察到更为明显的颜色变化，所以显色反应临界点优选pH为4.2、NaF浓度为0.199mg/mL。
Claims (4)
1.一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的显色方法，其特征在于，通过生理盐水空白样、NaF阳性对照样、Na18F待测样、“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液之间的颜色对比即可得到检定结果；
所述生理盐水空白样配制方法为：将Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与生理盐水摇匀混合；其中，Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与生理盐水体积比为6：1：2：1；
所述NaF阳性对照样配制方法为：将Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与(0.172～0.223)mg/mL NaF标准溶液摇匀混合；其中，Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与NaF溶液体积比为6：1：2：1；
所述Na18F待测样配制方法为：将待测Na18F溶液与生理盐水混合，两者体积比为1：(3.5～4.8)，得到稀释的待测样；再将Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与稀释的待测样摇匀混合；其中，Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与稀释的待测样体积比为6：1：2：1；
所述“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液配制方法为：将待测Na18F溶液与0.999mg/mL NaF标准溶液和生理盐水混合，三者体积比为1：1：(2.5～3.8)，得到稀释的待测样+阳性对照样；再将Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与稀释的待测样+阳性对照样摇匀混合；其中，Zr-EDTA溶液、PV溶液、乙酸-乙酸钠缓冲液与稀释的待测样+阳性对照样体积比为6：1：2：1；
所述颜色对比的方法如下：
a、生理盐水空白样的颜色为蓝色；
b、NaF阳性对照样的颜色为蓝青色；
c、当Na18F待测样中Na18F浓度低于0.172mg/mL，Na18F待测样颜色为蓝色；当浓度为(0.172～0.223)mg/mL，颜色为蓝青色；当浓度高于0.223mg/mL，颜色变化次序为紫色-黄色；
d、至少满足“Na18F待测样与NaF阳性对照样相比偏蓝色；或Na18F待测样与“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液相比偏蓝色；或“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液不比NaF阳性对照样的颜色更紫”三种情况中的任意一种，说明产品中氟离子浓度满足限度要求，即氟离子浓度低于0.452mg/mL。
2.如权利要求1所述的显色方法，其特征在于，至少包含所述NaF阳性对照样和“Na18F待测样+NaF阳性对照样”混合溶液中的任意一种。
3.如权利要求1所述的显色方法，其特征在于，所述Zr-EDTA溶液的浓度为1.0×10- 3mol/L，PV溶液的浓度为1.0×10-3mol/L，乙酸-乙酸钠缓冲液的pH范围为4.1～4.3。
4.一种检定Na18F注射液中氟离子浓度限度的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用前述权利要求中任一项所述的显色方法。
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