CN109700952A - 小儿感冒宁制剂在制备抗单纯疱疹病毒药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药领域，具体涉及一种中药制剂在制备抗单纯疱疹病毒药物中的用途。所述小儿感冒宁制剂包括如下重量份的原料药：薄荷70‑90份，荆芥穗60‑75份，苦杏仁70‑90份，牛蒡子70‑90份，黄芩70‑90份，桔梗60‑75份，前胡70‑90份，白芷20‑35份，炒栀子30‑50份，焦山楂20‑35份，焦六神曲20‑35份，焦麦芽20‑35份，芦根100‑140份，金银花100‑140份，连翘70‑90份。本发明所涉及的小儿感冒宁制剂对单纯疱疹病毒具有明显的抑制作用，具有毒性小、作用强、安全有效等优点，为由单纯疱疹病毒引起的疾病的预防和治疗开辟了新的途径，具有重要的社会价值、经济价值。

Description

小儿感冒宁制剂在制备抗单纯疱疹病毒药物中的用途

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种中药制剂在制备抗单纯疱疹病毒药物中的用途。

背景技术

单纯疱疹是一种由单纯疱疹病毒所致的病毒性皮肤病，中医称为热疮。

单纯疱疹病毒属于痗疫病毒科α病毒亚科，为DNA病毒，有I型和II型2种血清型，人类是其唯一宿主。I型单纯疱疹病毒(HSV-1)主要感染面部的皮肤和粘膜，引起疱疹性角膜炎、疱疹性脑炎、口龈炎、咽炎或扁桃体炎和皮肤疱瘆性湿疼等。

据统计，目前人群中HSV-1血清型阳性较高，大约为90％。具有嗜神经性，能在中枢神经系统中建立潜伏感染，且在免疫低下等情况下复发。单纯疱疹病毒性脑炎，是HSV侵犯中枢神经系统引起相应的炎性改变，是中枢神经系统最常见的病毒感染性疾病，研究表明，HSV-1是常见的中枢神经系统感染病原体，由HSV-1感染引起的神经性脑炎的发病率逐年增高，在缺乏治疗的情况下可达70％的致死率，其引起的临床病死率高，预后差，患者常遗留较多的神经功能缺损。

流行病学调查表明病毒性角膜炎以单纯疱疹病毒感染最为常见，其中HSV-1致病率高达90％以上，是疱疹病毒中，引起眼疾最多的病原体。该病病程长、反复发作，最终可以导致角膜白斑、角膜新生血管增生、角膜溃疡甚至穿孔等而严重危害患者的视功能。目前尚无有效控制复发的药物，其治疗困难，已成为眼科最棘手的问题。反复发作后角膜混浊逐渐加重，最终导致失明。

HSV-1感染与神经退行性疾病如阿尔茨海默病等的发生发展密切相关，也是HIV并发感染的主要病原体。

小儿感冒宁制剂是由薄荷、荆芥穗、苦杏仁、牛蒡子、黄芩、桔梗、前胡、白芷、炒栀子、焦山楂、焦六神曲、焦麦芽、芦根、金银花、连翘等中药制成的制剂，具有疏散风热，清热止咳的功效，用于春、秋、冬季小儿感冒发烧，汗出不爽，鼻塞流涕，咳嗽咽痛。但目前尚未有小儿感冒宁制剂抗单纯疱疹病毒的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供小儿感冒宁制剂在制药中的新用途。

小儿感冒宁制剂在制药中的新用途是：

小儿感冒宁制剂在制备抗单纯疱疹病毒药物中的用途。所述小儿感冒宁制剂包括如下重量份的原料药：薄荷70-90份，荆芥穗60-75份，苦杏仁70-90份，牛蒡子70-90份，黄芩70-90份，桔梗60-75份，前胡70-90份，白芷20-35份，炒栀子30-50份，焦山楂20-35份，焦六神曲20-35份，焦麦芽20-35份，芦根100-140份，金银花100-140份，连翘70-90份。

优选的，所述小儿感冒宁制剂包括如下重量份的原料药：薄荷80份，荆芥穗67份，苦杏仁80份，牛蒡子80份，黄芩80份，桔梗67份，前胡80份，白芷27份，炒栀子40份，焦山楂27份，焦六神曲27份，焦麦芽27份，芦根120份，金银花120份，连翘80份。

所述小儿感冒宁制剂的剂型包括颗粒剂、合剂、糖浆剂。

所述小儿感冒宁制剂的剂型优选为合剂。

本发明所涉及的小儿感冒宁制剂对单纯疱疹病毒具有明显的抑制作用，具有毒性小、作用强、安全有效等优点，为由单纯疱疹病毒引起的疾病的预防和治疗开辟了新的途径，具有重要的社会价值、经济价值。

为了公众能更好的理解本发明的有益效果，下面将通过实施例和体外细胞实验进一步阐明。

附图说明

图1是药物对单纯疱疹病毒体外抑制作用显微照片对比。

具体实施方式

下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。

实施例1小儿感冒宁合剂制备

受试药物：小儿感冒宁合剂。所述受试药物的具体制备方法由以下步骤组成：

薄荷70g、荆芥穗60g提取挥发油；苦杏仁70g制取杏仁水；牛蒡子70g、黄芩70g、桔梗60g、前胡70g、白芷20g、炒栀子30g、焦山楂20g、焦六神曲20g、焦麦芽20g、芦根100g、金银花100g、连翘70g加6倍水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，静置48小时，取上清液浓缩至适量，加入蔗糖200g、甜菊素及防腐剂适量，煮沸使溶解，加入杏仁水混匀，静置，取上清液，加入挥发油、香精等，随加随搅拌，加水至1000ml，搅匀，滤过，分装，即得。

实施例2小儿感冒宁合剂制备

受试药物：小儿感冒宁合剂。所述受试药物的具体制备方法由以下步骤组成：

薄荷80g、荆芥穗67g提取挥发油；苦杏仁80g制取杏仁水；牛蒡子80g、黄芩80g、桔梗67g、前胡80g、白芷27g、炒栀子40g、焦山楂27g、焦六神曲27g、焦麦芽27g、芦根120g、金银花120g、连翘80g加6倍水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，静置48小时，取上清液浓缩至适量，加入蔗糖200g、甜菊素及防腐剂适量，煮沸使溶解，加入杏仁水混匀，静置，取上清液，加入挥发油、香精等，随加随搅拌，加水至1000ml，搅匀，滤过，分装，即得。

实施例3小儿感冒宁合剂制备

受试药物：小儿感冒宁合剂。所述受试药物的具体制备方法由以下步骤组成：

薄荷90g、荆芥穗75g提取挥发油；苦杏仁90g制取杏仁水；牛蒡子90g、黄芩90g、桔梗75g、前胡90g、白芷35g、炒栀子50g、焦山楂35g、焦六神曲35g、焦麦芽35g、芦根140g、金银花140g、连翘90g加6倍水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，静置48小时，取上清液浓缩至适量，加入蔗糖200g、甜菊素及防腐剂适量，煮沸使溶解，加入杏仁水混匀，静置，取上清液，加入挥发油、香精等，随加随搅拌，加水至1000ml，搅匀，滤过，分装，即得。

实施例4小儿感冒宁合剂体外抗病毒实验

细胞与病毒

Hep-2(人喉癌细胞)由山东省医学科学院微生物室提供；HSV1(单纯疱疹病毒)由山东省医学科学院微生物室提供；利巴韦林(山东鲁抗辰欣药业有限公司，批号：110602304)

主要仪器

超净工作台(济南隆宏公司)；酶标仪(芬兰雷勃公司产品)；低温高速离心机(贺立氏台式低温离心机)；倒置显微镜(Olympus公司)；高压灭菌锅(济南德强仪器有限公司MJ37600)；纯水机(济南太平玛环保有限公司)；CO₂细胞恒温培养箱(美国FOMAS公司)

主要试剂及配置

2％细胞维持液：改良型RPMI-1640液500ml，加入10ml新生牛血清(四季青)。

10％1640细胞培养液：改良型RPMI-1640液500ml，加入50ml新生牛血清，双抗2ml，混匀，置4℃冰箱，备用

双抗：取l00WU链霉素溶于5ml蒸馏水中，弃去1ml；将80WU青霉素溶于76ml蒸馏水中，与余4ml链霉素相混匀，0.22微米滤膜过滤除菌，每管1.5ml分装于EP管，置于-20℃冰箱备用。

PBS：HyClone产品

消化液：0.25％Trypsin-EDTA

MTT染色剂：取MTT粉末0.5g，溶于100ml PBS中，0.22微米滤膜过滤除菌，每管1ml分装于EP管，置于-20℃冰箱备用。

脱色剂：DMSO

细胞的复苏及培养：Hep2冻存管从液氮罐取出，立即投入37℃～42℃温水中融化，超净工作台内将冻存管中液体移入离心管中，800r/min，5min，弃冻存液，加入5ml浓度10％的1640细胞培养液轻轻将下层沉淀细胞吹打混匀，用移液管转移到培养瓶内，在37℃、5％CO₂恒温培养箱中培养。待细胞长成单层后进行传代。

病毒的扩增：将HSV-1病毒接种于己经长成单层的Hep-2细胞上，加1640维持液5ml置37℃、5％CO₂病毒培养箱中培养，并设细胞对照，逐日观察。待细胞出现80％以上的病变时，反复冻融3次，用吸管轻轻吹打，1000r/min，5min，取上清液定量分装于冻存管中，封口膜封口，放于-80℃冰箱冻存备用。

病毒毒力的测定：将病毒用1640维持液做10倍比系列稀释不同浓度，纵向重复4孔，依次接种于己长成单层的Hep-2细胞的96孔板中，同时设细胞对照。37℃、5％CO₂病毒培养箱中培养，倒置显微镜下观察24h，加5mg/ml MTT 10μl，37℃、5％CO₂培养箱中4小时，吸弃染液，加DMSO 100μl，室温脱色l0min，用酶标仪在490mn波长测定OD值。根据Reed-Muench公式计算病毒液的半数感染浓度TCID₅₀。

细胞存活率＝各组OD值/正常细胞OD值×100％

细胞病变率＝1－细胞存活率

细胞比距＝(高于50％病变率－50％)/(高于50％病变率－低于50％病变率)×100％

TCID₅₀＝Antilg(Ig高于50％CPE百分率病毒稀释度+比距×稀释对数间的差)

测定结果显示HSV-1病毒TCID₅₀为10^-3.76。

实验时用100个TCID₅₀作为病毒液浓度，因此需将病毒原液稀释100倍用于实验。

药物对细胞毒性测定：将小儿感冒宁合剂用1640维持液按二倍比稀释10个浓度梯度，依次接种于己经长成单层的Hep-2细胞的96孔板中，并设4个复孔及细胞对照孔；37℃、5％CO₂培养箱中培养，逐日观察细胞病变，连续观察3d，计算药物的最大无毒浓度。细胞出现病变者判为药物毒性，MTT染色，用酶标仪在490mn波长测定OD值，应用Reed-Muench公式计算药物半数中毒浓度(TC₅₀)，并确定最小无毒浓度(TC₀)。

TC₅₀＝[Antilog(log高于50％CPE百分率病毒稀释度+比距)]×C

抗HSV-1病毒实验：小儿感冒宁合剂从无毒浓度起用1640二倍比系列稀释10个浓度，每孔100μl接种于已长成单层Hep-2细胞的96板孔中，每孔再加入100μl的HSV-1病毒液，同时设阿昔洛韦阳性对照组、病毒对照组及空白细胞对照组，每设3个复孔。5％CO₂培养箱中培养，观察细胞病变，待病毒对照出现90％以上的病变时，MTT染色，并用酶标仪在490nm波长测定OD值。应用Reed-Muench方法计算药物半数有效浓度(EC₅₀)和治疗指数(TI)。

EC₅₀＝[Antilog(log高于50％CPE百分率药物稀释度的值-比距)]×C

TI＝半数毒性浓度(TC₅₀)/半数有效浓度(EC₅₀)

具体结果如下：

病毒感染24小时后病毒组开始出现病变，药物组也开始显现病变，细胞在无毒浓度范围内随着药物浓度的降低，HSV-1感染细胞表现明显，细胞开始融合、肿胀、脱落，48小时后病毒对照组90％病变，药物组几个浓度梯度孔被完全保护，细胞生长良好。各组药物的治疗指数如下：

	TI指数
		小儿感冒宁合剂样品1	255.7
小儿感冒宁合剂样品2	267.4
		小儿感冒宁合剂样品3	242.4
阿昔洛韦	321.3

Claims (4)

1.小儿感冒宁制剂在制备抗单纯疱疹病毒药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述小儿感冒宁制剂包括如下重量份的原料药：薄荷70-90份，荆芥穗60-75份，苦杏仁70-90份，牛蒡子70-90份，黄芩70-90份，桔梗60-75份，前胡70-90份，白芷20-35份，炒栀子30-50份，焦山楂20-35份，焦六神曲20-35份，焦麦芽20-35份，芦根100-140份，金银花100-140份，连翘70-90份。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述小儿感冒宁制剂包括如下重量份的原料药：薄荷80份，荆芥穗67份，苦杏仁80份，牛蒡子80份，黄芩80份，桔梗67份，前胡80份，白芷27份，炒栀子40份，焦山楂27份，焦六神曲27份，焦麦芽27份，芦根120份，金银花120份，连翘80份。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，所述小儿感冒宁制剂的剂型为如下剂型中的一种：颗粒剂、合剂、糖浆剂。