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CN109452495A - 一种防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂及其制备方法与应用 Download PDF

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CN109452495A
CN109452495A CN201811541555.1A CN201811541555A CN109452495A CN 109452495 A CN109452495 A CN 109452495A CN 201811541555 A CN201811541555 A CN 201811541555A CN 109452495 A CN109452495 A CN 109452495A
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chinese herbal
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曲云坤
耿超
王爱民
杨文平
於叶兵
田红艳
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Yangcheng Institute of Technology
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Yangcheng Institute of Technology
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Abstract

本发明公开了一种防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂及其制备方法与应用，该添加剂包括以下组分：了哥王、枳壳、生甘草、青葙子、西瓜皮、蒲公英、生山楂、党参、食盐、载体；其制备方法是将各组分投入混合机中，充分混合后送入超微粉碎机中粉碎，将粉碎后的物料过筛，即得防治克氏原螯虾螺原体病中草药饲料添加剂。本发明的添加剂添加至克氏原螯虾饲料中，能够提高克氏原螯虾的免疫与抗氧化能力，提高应激，增强抗病能力，防治克氏原螯虾螺原体病的发生，适用本饲料预混料添加剂的饲料不需要添加抗生物药物，所生产的克氏原螯虾产品为无公害绿色环保食品。

Description

一种防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂及其制备 方法与应用
技术领域
本发明属于水产配合饲料添加剂技术领域，具体涉及一种防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂及其制备方法与应用。
背景技术
近年来，克氏原螯虾Procambarus clarkii在全国各地人工养殖方兴未艾。据统计，江苏、湖北很多县的养殖规模就已经达到数万亩。但随着人工养殖面积的迅速扩大，病害的发生也越来越频繁和严重。国内已相继报道了克氏原螯虾的一些疾病，这些疾病已经给克氏原螯虾养殖者带来了重大经济损失。
螺原体是一种个体极小、形态多变、没有细胞壁的非常特殊细菌，20世纪70年代首次在植物和昆虫体内发现，有些是农作物(玉米、柑橘等)和有益昆虫(蜜蜂)的致病菌。从患有“颤抖病”的中华绒螯蟹中分离到的螺原体是首次从水生甲壳动物中发现的新型病原，命名为中华绒螯蟹螺原体(Spiroplasma eriocheiris sp.Nov)，它是“颤抖病”的致病菌。这一发现将人们对螺原体的分布由陆地扩大到水域。除河蟹外，螺原体对其他经济水生甲壳动物也具有广泛的侵染性，如克氏原螯虾、南美白对虾、罗氏沼虾、日本沼虾中也相继发现了螺原体。经分子生物学、免疫学分析、交叉感染实验以及超微病理学特征比较等方面的研究，最终确定这些不同宿主来源的螺原体与引起河蟹“颤抖病”的螺原体为同一种类，表明该种螺原体可以在不同的水生甲壳动物物种之间进行交叉感染和传播。
中草药配伍后，不仅可以提高机体的特异性和非特异性免疫力的功能；还具有抗菌、抑制病毒等方面的作用。在水产养殖上，但是各种化学合成药物及激素的长期或大量使用，水产动物会产生抗药性，且残留于水产动物体内的药量亦会影响食用者的健康。而中草药添加剂则没有化学合成药物的弊端，同时兼有营养性和药物性的双重作用。因此，中草药添加剂已日益成为替代化学合成药物和激素的新一代添加剂。
已有一些报道关于大黄、淫羊藿、黄芪、板蓝根组合配方用于克氏原螯虾抗白斑综合征的报道，如CN103494038 B公开了一种克氏原螯虾抗白斑综合征病毒中草药免疫增强剂及其制备方法和应用，主要由下列重量份的原料制成：大黄30-38份、淫羊藿28-35份，黄芪15-25份、板蓝根15-25份。但是该中药组分主要是对提高免疫力，特别是抗白斑综合征病毒有一定的疗效，该病主要有白斑综合征病毒所引起，而对细菌性疾病尚无显著作用。此外还有一些关于增强克氏原螯虾免疫力的报道，如CN103431244B一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料及添加剂，该报道主要以微生物配方为主，对克氏原螯虾螺原体病的也无显著效果，再如CN107996888A一种克氏原螯虾成虾新型抗病添加剂及制备方法，该报道主要以多糖类成分提高免疫力，提高产量，减少死亡率，但是对克氏原螯虾螺原体病的也无显著效果。再如CN101422469B土霉素在制备治疗水生动物螺原体病的药物中的应用，该报道以土霉素为唯一成分治疗水生动物的螺原体病，但唯一成分——土霉素仍然为抗生素类物质，易导致水产动物体内的残留又影响人类的健康，与中草药防治水生动物疾病存在显著差异。目前有关甲壳类动物螺原体病的中草药防治措施未见有关报道。
发明内容
本发明的目的是针对克氏原螯虾及甲壳类动物多发的螺原体病，提供一种防治克氏原螯虾及甲壳类动物螺原体病用中草药饲料添加剂及其制备方法与应用，该添加剂可以提高克氏原螯虾及甲壳类动物的免疫能力，增强体质，减少克氏原螯虾螺原体病发生，有利于克氏原螯虾的健康生长。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂，以重量份计包括以下组分：了哥王5.0- 12.0份、枳壳5.0-15.0份、生甘草7.0-14.0份、青葙子4.0-20.0份、西瓜皮3.0-12.0份、蒲公英3.0-10.0份、生山楂8.0-20.0份、党参5.0-20.0份、食盐3.0-8.0份、载体10.0-30.0份。
了哥王Wikstroemia indica(Linn.)C.A.Mey，别名：南岭荛花、地棉皮、山棉皮、黄皮子、地棉根、山豆了、小金腰带、桐皮子、哥春光、雀儿麻，属瑞香科、荛花属灌木，具有清热解毒，散结逐水。用于肺热咳嗽、痄腮、瘰疬，风湿痹痛，疮疖肿毒，水肿腹胀。
枳壳，为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实。枳壳性苦、辛、酸、温，具有理气宽中、行滞消胀的功效，主治胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，痰饮内停；胃下垂，脱肛，子宫脱垂等病症。
生甘草Radix Glycyrrhizae.别名美草、密甘(蜜甘)、密草、国老、粉草、甜草、甜根子、棒草、系豆科多年生草本植物。功能主治：补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。生甘草有别于炙甘草，炙甘草主要用于补中益气，而且用于调和药物，还有矫正药味的作用。
青葙子，为一年生草本苋科植物青葙的干燥成熟种子。味苦，微寒。有清肝火、祛风热、明目、降血压之功效。
西瓜皮，别名西瓜翠衣，为葫芦科植物西瓜的外层果皮。性凉，味甘，无毒；入脾、胃二经。清暑解热，止渴，利小便。用于暑热烦渴、小便短少、水肿、口舌生疮。西瓜皮含有水生动物所需的糖及粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、叶绿素等营养物质，还含有胡萝卜素、硫胺素、核黄素、尼克酸、抗坏血酸等维生素及钙、磷、铁等矿物盐。用西瓜皮喂养鳙、鲢、草、鲤等水产养殖对象，适口性好，易消化吸收。因此，利用西瓜皮作为水产动物饲料原料，既扩大了饲料来源，可降低生产成本15％～20％，又减少了环境污染。
蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.为菊科，蒲公英属多年生草本植物。具有清热解毒，利尿散结。治急性乳腺炎，淋巴腺炎，瘰疬，疔毒疮肿，急性结膜炎，感冒发热，急性扁桃体炎，急性支气管炎，胃炎，肝炎，胆囊炎，尿路感染。
生山楂Crataegus pinnatifida Bunge，又名山里果、山里红，蔷薇科山楂属，具有消食健胃、活血化淤、收敛止痢等功效。
党参为桔梗科植物党参、素花党参、或川党参等的干燥根。党参味甘，性平。有补中益气、止渴、健脾益肺，养血生津。用于脾肺气虚，食少倦怠，咳嗽虚喘，气血不足，面色萎黄，心悸气短，津伤口渴，内热消渴。懒言短气、四肢无力、食欲不佳、气虚、气津两虚、气血双亏以及血虚萎黄等症。
进一步地，所述载体为麸皮、小麦粉、米糠或沸石粉中的一种或多种混合。
上述防治克氏原螯虾螺原体病中草药饲料添加剂的制备方法，将各组分烘干或晒干后投入混合机中，充分混合后送入超微粉碎机中进行粉碎，将粉碎后的物料过400-800目筛网，得到防治克氏原螯虾螺原体病的中草药饲料添加剂。
进一步地，混合机的混合速度为15-30rpm。
进一步地，超微粉碎机的粉碎速度为300-600rpm。
上述中草药饲料添加剂在制备预防或治疗克氏原螯虾螺原体病的饲料中的应用。
进一步地，所述中草药饲料添加剂在克氏原螯虾饲料中的添加量为2-4kg/t。
上述中草药饲料添加剂在制备鲍鱼、扇贝或生蚝饲料，或者饲养其他的甲壳类水产动物上的应用
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1、了哥王、枳壳、生甘草、青葙子、西瓜皮、蒲公英均为清热解毒类中药材，具有清热解毒、利湿、收敛止血的作用，可用于抗菌，痢疾，抗寒应激及杀害有害菌，降低克氏原螯虾螺原体病的发生。
2、西瓜皮含有多种水生生物所需的糖及粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、叶绿素等营养物质，还含有胡萝卜素、硫胺素、核黄素、尼克酸、抗坏血酸等维生素及钙、磷、铁等矿物盐，同时还具有抗菌、清热解毒等功效，可有效降低克氏原螯虾螺原体病的发生，同时还降低了饲料成本。
3、生甘草、生山楂不仅具有清热解毒之功效，还有较强的诱食开胃作用，在防治克氏原螯虾螺原体病的发生，可增强克氏原螯虾的摄食，促进生长。
4、上述药材均具有提高免疫力的作用，特别是克氏原螯虾这一类不具有先天免疫功能的动物而言，通过摄食提高其免疫力会达到事半功倍的效果。
5、本发明的添加剂添加了食盐并且具有一定的诱食作用，增加适口性，有利于降低克氏原螯虾的饵料系数，提高其成活率。
6、本发明的添加剂能够提高克氏原螯虾的免疫与抗氧化能力，提高应激，增强抗病能力，适用本饲料预混料添加剂的饲料不需要添加抗生物药物，所生产的克氏原螯虾产品为无公害绿色环保食品。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1
配制20kg防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂，所述添加剂的组成如下：了哥王 1.0kg、枳壳1.4kg、生甘草2.0kg、青葙子2.0kg、西瓜皮2.0kg、蒲公英1.2kg、生山楂2.4kg、党参2.0kg、食盐1.0kg、载体5.0kg。所述载体为麸皮。
取上述组分投入混合机中，15r/min充分混合后，在超微粉碎机中粉碎，粉碎速度为： 300r/min；将粉碎后的物料过400目筛网，即得产品防治克氏原螯虾螺原体病中草药饲料添加剂。将上述防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂添加至克氏原螯虾专用饲料，每吨饲料中添加2.0kg添加剂。
江苏盐城市江苏正源创辉农业科技发展有限公司的克氏原螯虾养殖六口池塘，六口养殖池塘的面积为5亩，池塘水深为1.米左右。2018年当年放养克氏原螯虾，6月左右虾体大小平均为5.7g。实验前对六口清塘用生石灰120公斤/亩清塘消毒。后将克氏原螯虾苗种用蛋氨酸碘消毒后，进行试验。其中三口5亩虾塘为对照塘口，使用常规克氏原螯虾商品配合饲料，另三口虾塘为试验塘，使用按上述添加剂的克氏原螯虾专用饲料(饲料由盐城恒兴饲料有限公司)。养殖过程中加强全程管理，根据天气情况，日投喂1次，日投饵量为虾体重的2％左右，并根据吃食情况，做适量的调整。两个月，采集样品分析。
实验结果显示，本添加剂组克氏原螯虾螺原体病病发病率为0.52％，对照组的螺原体病发病率为2.13％(p＜0.05)。
实施例2
配制20kg防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂，所述添加剂的组成如下：了哥王 1.2kg、枳壳1.6kg、生甘草1.8kg、青葙子3.0kg、西瓜皮1.6kg、蒲公英1.0kg、生山楂3.0kg、党参1.6kg、食盐1.2kg、载体4.0kg。所述载体为麸皮、小麦粉和米糠混合而成。
取上述组分投入混合机中，28r/min充分混合后，在超微粉碎机中粉碎，粉碎速度为： 500r/min；将粉碎后的物料过600目筛网，产品防治克氏原螯虾螺原体病中草药饲料添加剂。将上述防治克氏原螯虾螺原体病中草药饲料添加剂。添加至克氏原螯虾专用饲料，每吨饲料中添加3.0kg添加剂。
江苏盐城阜宁某养殖场的克氏原螯虾成虾养殖6口池塘，6口养殖池塘的面积为10亩，池塘水深为1米左右。2018年当年放养克氏原螯虾苗种，6月左右虾体大小平均为5.8g。实验前对清塘用生石灰150公斤/亩清塘消毒。后将克氏原螯虾虾种用蛋氨酸碘消毒后进行试验。随机抽取三口10亩池塘为对照塘口，使用常规克氏原螯虾商品配合饲料，另三口池塘为试验塘，使用按上述配方的克氏原螯虾饲料添加饲料添加剂。养殖过程中加强全程管理，根据天气情况，日投喂1次，日投饵量为虾体重的2％左右，并根据吃食情况，做适量的调整。两个月后，采集样品分析。
本添加剂组克氏原螯虾螺原体病病发病率为0.73％，对照组的螺原体病发病率为2.55％ (p＜0.05)。
实施例3
配制20kg防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂，所述添加剂的组成如下：了哥王 1.4kg、枳壳1.8kg、生甘草2.2kg、青葙子2.4kg、西瓜皮1.8kg、蒲公英1.6kg、生山楂2.6kg、党参2.4kg、食盐0.8kg、载体3.0kg。所述载体为麸皮、小麦粉、米糠和沸石粉混合而成。
取上述组分投入混合机中，30r/min充分混合后，在超微粉碎机中粉碎，粉碎速度为： 600r/min；将粉碎后的物料过800目筛网，产品防治克氏原螯虾螺原体病中草药饲料添加剂。将上述防治克氏原螯虾螺原体病中草药饲料添加剂。添加至克氏原螯虾专用饲料，每吨饲料中添加4.0kg添加剂。
江苏淮安市盱眙小河农业发展有限公司的克氏原螯虾养殖6口池塘，6口养殖池塘的面积为2亩，池塘水深为1.0米左右。2018年当年放养克氏原螯虾苗种，6月左右虾体大小平均为5.8g。实验前清塘用生石灰150公斤/亩清塘消毒。后将克氏原螯虾苗种用蛋氨酸碘消毒后进行试验。随机抽取三口2亩池塘为对照塘口，使用常规克氏原螯虾商品配合饲料，另三口池塘为试验塘，使用常规饲料添加该中草药饲料。养殖过程中加强全程管理，根据天气情况，日投喂1次，日投饵量为虾体重的2％左右，并根据吃食情况，做适量的调整。两个月后，采集样品分析。
本添加剂组克氏原螯虾螺原体病病发病率为0.42％，对照组的螺原体病发病率为2.34％ (p＜0.05)。
对样品其他指标的分析结果如表1所示。
表1中草药饲料添加剂对克氏原螯虾生长和螺原体病发病率的影响
指标 对照组 中草药组
发病率 2.34％±0.25<sup>a</sup> 0.42±0.05％<sup>b</sup>
初始体重(g) 5.8±0.41 5.8±0.52
实验末体重(g) 19.23±1.85<sup>b</sup> 28.75±1.58<sup>a</sup>
增重率 2.32±0.19<sup>b</sup> 3.96±0.41<sup>a</sup>
注：同行不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)
实验结束后，分别取对照组和中草药饲料添加剂组克氏原螯虾血液置于-20℃冰箱中保存。用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定，详细结果见表2。
表2中草药饲料添加剂对克氏原螯虾血液抗氧化酶活力的影响
指标 对照组 中草药组
超氧化物歧化酶/(U·mg<sup>-1</sup>)SOD 428.33±18.24<sup>b</sup> 520.31±20.69<sup>a</sup>
一氧化氮(μmol·L<sup>-1</sup>)NO 40.56±4.21<sup>b</sup> 70.52±5.25<sup>a</sup>
白蛋白(g·L<sup>-1</sup>)ALB 16.15±1.22<sup>b</sup> 37.23±1.61<sup>a</sup>
溶菌酶/(μg/mL)LZM 90.92±5.34<sup>b</sup> 140.66±9.34<sup>a</sup>
碱性磷酸酶(U/L)AKP 7.12±0.41<sup>b</sup> 12.25+1.16<sup>a</sup>
酸性磷酸酶(U/L)(ACP) 8.24±1.32<sup>b</sup> 14.68±1.68<sup>a</sup>
总蛋白/(g/L)TP 78.25±4.31<sup>b</sup> 121.22±5.65<sup>a</sup>
注：同行不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)
虾体中最主要的抗氧化指标包括SOD，其基本功能是清除超氧化物自由基如超氧阴离子(O2-)和过氧化氢(H2O2)。上述结果表明，中草药组显著增强了克氏原螯虾的抗氧化性。血液中一氧化氮起着信使分子的作用。当内皮要向肌肉发出放松指令以促进血液流通时，它就会产生一些一氧化氮分子，这些分子很小，能很容易地穿过细胞膜。血管周围的平滑肌细胞接收信号后舒张，使血管扩张。白蛋白和总蛋白的升高表明试验组的免疫活性在不断提高。酸性磷酸酶和碱性磷酸酶是甲壳动物体内吞噬溶酶体的重要组成部分，在血细胞进行吞噬和包囊反应中会伴随着酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的释放。试验组中ACP和AKP活力有明显增加，表明试验组中草药对克氏原螯虾具有免疫增强作用。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.一种防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂，其特征在于，以重量份计包括以下组分：了哥王5.0-12.0份、枳壳5.0-15.0份、生甘草7.0-14.0份、青葙子4.0-20.0份、西瓜皮3.0-12.0份、蒲公英3.0-10.0份、生山楂8.0-20.0份、党参5.0-20.0份、食盐3.0-8.0份、载体10.0-30.0份。
2.根据权利要求1所述的防防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂，其特征在于：所述载体为麸皮、小麦粉、米糠或沸石粉中一种或多种混合而成。
3.基于权利要求1所述的防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂的制备方法，其特征在于：将各组分烘干或晒干后投入混合机中，充分混合后送入超微粉碎机中进行粉碎，将粉碎后的物料过400-800目筛网，得到防治克氏原螯虾螺原体病中草药饲料添加剂。
4.根据权利要求3所述的防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂的制备方法，其特征在于：混合机的混合速度为15-30r/min。
5. 根据权利要求3所述的防治克氏原螯虾螺原体病用中草药饲料添加剂的制备方法，其特征在于：超微粉碎机的粉碎速度为300-600 r/min。
6.基于权利要求1所述的中草药饲料添加剂在制备防治或治疗克氏原螯虾螺原体病的饲料中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述中草药饲料添加剂在克氏原螯虾饲料中的添加量为2-4kg/t。
8.基于权利要求6所述的中草药饲料添加剂在制备鲍鱼、扇贝或生蚝饲料中的应用。
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