CN109420179B - 多烯紫杉烷靶向前药及其抗结肠癌药用用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种新型多烯紫杉烷靶向前药及其药用用途，本发明提供了包括通式(1)所代表的新型多烯紫杉烷靶向前药及其抗结肠癌药用用途：本发明的化合物具有药理学研究价值，可用作靶向结肠癌肿瘤部位特异高表达的蛋白酶的抗癌前药。可以治疗基质金属蛋白酶MMP‑7、半胱氨酸组织蛋白酶B、成纤维细胞激活蛋白α等一种或多种特异性高表达的结肠癌疾病。

式(1)中，A为包含但不限于结肠癌组织中显著高表达的基质金属蛋白酶MMP‑7、半胱氨酸组织蛋白酶B、成纤维细胞激活蛋白α等特异识别并水解的底物多肽序列；B为选自(a～i)的可降解的桥接基团，且与A的碳端或氮端通过酰胺键相接；R₁为包含但不限于氟原子、氢原子等。

Description

多烯紫杉烷靶向前药及其抗结肠癌药用用途

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种新型多烯紫杉烷靶向前药及其抗结肠癌药用用途。

背景技术

现有技术公开了结肠癌是常见的恶性肿瘤之一，在欧美发达国家其发病率和死亡率均居恶性肿瘤的第三位，在我国结肠癌的发病率和死亡率已由80年代的第五位和第六位上升至第四位和第五位，每年约有20万人死于结肠癌。临床手术切除是最基本的治疗手段，辅助性化疗是结肠癌Ⅱ和Ⅲ期患者术后的常规疗法。目前，结肠癌辅助化疗药物分为两类：一类是化学小分子药，主要有5-氟尿嘧啶、卡培他滨、替加氟、伊立替康、奥沙利铂等，它们可以单独使用或联合用药，但都不可避免的产生如恶心、口腔炎、呕吐等毒副作用；另一类是具有分子靶向作用的生物药，如表皮生长因子受体抑制剂(EGFR)西妥昔单抗和血管内皮生长因子受体抑制剂(VEGF)贝伐单抗，但由于EGFR和VEGF存在日益严重的耐药性，该类药物疗效低，在辅助治疗模式中对于疾病无进展生存期和总生存期没有显现长远益处，并且使用费用昂贵。因此，研发更加有效、毒副作用小且价格低廉的抗结肠癌小分子药物成为迫切需要解决的重大课题。

在迄今发现的众多抗癌药物中，从天然红豆杉中分离得到的紫杉醇是临床治疗乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌的一线药物，与其Me-better第二代紫杉醇药物——多烯紫杉醇，被认为是迄今为止人类发现的最为有效的抗肿瘤药物。针对它们存在的许多临床缺陷，诸如多药耐药、口服生物利用度低、过敏性反应、水溶性差、代谢稳定性差、药物杂泛性导致的系统毒性大副作用等，开展的第三代高活性紫杉醇类抗肿瘤药物的研发目前已取得了较大进展，如①针对其多药耐药的缺点，2010年Sanofi-Aventis公司在多烯紫杉醇的C-7位和C-10位羟基进行甲基化得到新化合物卡巴他塞(Cabazitaxel，商品名Jevtana)并获FDA上市批准；②针对其口服生物利用度低的缺点，Spectrum公司着重发展的奥兰索(Orataxel)，目前正在进行II期临床实验，该化合物除了口服生物利用度大为提高外，对药敏细胞和多药耐药细胞均表现出有同样出色的细胞毒活性；③针对其过敏性反应的缺点，绿叶思科药业利用脂质体包裹紫杉醇，成功研制的注射用紫杉醇脂质体——力朴素，在2004年获SFDA批准上市；④针对其水溶性差的缺点，Abraxis公司成功研制的第一个非溶剂型纳米白蛋白结合化疗药物Abraxane于2005年获FDA批准上市；Cell Therapeutics公司将紫杉醇的C-2′位OH与聚L-谷氨酸相连得到水溶性和对肿瘤靶向性均较紫杉醇有较大提高的前药Xyotax/Opaxio，目前正在进行III期临床试验。而针对其代谢稳定性差和系统毒性大的缺点，尤其是拓展其新的抗结肠癌新适应症方面，目前已上市的药物还未见报道。

研究显示，肿瘤细胞表面或肿瘤部位的边缘存在许多特异性的蛋白酶，它们在肿瘤的生长、浸润和转移中起着举足轻重的作用。特别是基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMPs)，以及类似MMPs的半胱氨酸组织蛋白酶B(Cathepsin B,Cat B)和成纤维细胞激活蛋白α(Fibroblast activation protein,FAPα)等，都具有特异性分布在结肠癌的细胞部位，且易过度表达，相反，在正常组织或或炎症组织中却低表达，是十分重要的结肠癌肿瘤标志物和治疗靶点。

“前药”设计策略是降低药物毒性最重要的手段之一，以结肠癌组织中特异高表达的蛋白酶(如：机制金属蛋白酶MMP-7、半胱氨酸组织蛋白酶B、成纤维细胞激活蛋白α等)识别并水解的底物多肽作为靶向载体基团，以具有较好抗癌活性的多烯紫杉烷类细胞毒小分子化合物为母药，通过具有降解功能的桥链分子将二者连接组成的前药，是未经报道的化合物。这类靶向前药分子的研发主要是针对多烯紫杉烷类细胞毒小分子化合物选择性差，系统毒性大的缺点，并扩大该类化合物在抗结肠癌肿瘤治疗当中的应用。

发明内容

本发明的目地是提供一种新型多烯紫杉烷靶向前药及其抗结肠癌药用用途。

本发明提供了如下通式(1)所代表的新型多烯紫杉烷类靶向前药，该多烯紫杉烷类靶向前药在紫杉烷类化合物分子中通过桥链分子共价耦连结肠癌组织中特异高表达的蛋白酶识别并水解的底物多肽，能明显提高药物对结肠癌的靶向性。

式(1)中，A为包含但不限于结肠癌组织中显著高表达的基质金属蛋白酶MMP-7、半胱氨酸组织蛋白酶B、成纤维细胞激活蛋白α等特异识别并水解的底物多肽序列，如Fmoc-Gln-Gly-Ala-Ile-Gly-Leu-Pro-Gly、Ac-Gln-Gly-Ala-Ile-Gly-Met-Pro-Gly、Ac-Gln-Gly-Ala--Ile-Ala-Gln-Pro-Gly、Ac-Gln-Met-Ala-Ile-Gly-Gln-Pro-Gly、Ac-Gln-Gly-Ala-Leu-Gly-Gln-Pro--Gly、Gly-Leu-Phe-Gly、Gly-Phe-Leu-Gly、Ala-Leu-Ala-Leu、Mca-Ala-Ser-Gly-Pro-Ala-Gly-Ala--Pro-Dnp、Mca-Glu-Pro-Gly-Pro-Pro-Gly-Pro-Ala-Dnp、Mca-Asp-Arg-Gly-Glu-Thr-Gly-Pro--Ala-Dnp、Mca-Val-Gly-Pro-Ala-Gly-Lys-Dnp、Mca-Asp-Lys-Gly-Glu-Ser-Gly-Pro-Ala、Mca-Ala-Pro-Gly-Ser-Lys-Gly-Asp-Ala等；

B为可降解的桥接基团，包含但不限于(a～i)

等结构，且与多肽序列A的碳端或氮端通过酰胺键相连；

R₁为包含但不限于氟原子、氢原子等。

本发明所述上述新型多烯紫杉烷靶向前药的制备方法包括：先在多烯紫杉烷类化合物的C-2′位羟基引入相应的桥接基团，合成多烯紫杉烷类化合物的衍生物；然后将该含有桥接基团的衍生物与靶向多肽混合，在缩合剂的作用下于5℃搅拌进行偶联，获得所述多烯紫杉烷类靶向前药。

本发明提供了此类多烯紫杉烷类靶向前药体外对人结肠癌细胞株HCT116及SW620的增殖抑制活性，以及对组织正常结肠细胞株CCD18Co和肾细胞株HEK293的毒性。

本发明的化合物具有药理学研究价值，可用作靶向结肠癌肿瘤部位特异高表达的蛋白酶的抗癌前药。可以治疗基质金属蛋白酶MMP-7、半胱氨酸组织蛋白酶B、成纤维细胞激活蛋白α等特异性高表达的结肠癌疾病。

本发明的新型多烯紫杉烷靶向前药可制成包含安全有效量新型多烯紫杉烷前药及药用载体的各种制剂，用于结肠癌疾病的治疗。

本发明所述的“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。安全有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等来确定。

本发明所述的药学上可以接受的载体部分例子有糖(如葡萄糖、蔗糖、乳糖等)，淀粉(如玉米淀粉、马铃薯淀粉等)，纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)，明胶，滑石，固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)，多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)，乳化剂(如

)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)，着色剂，调味剂，稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水等。

与现代技术相比，本发明的有益效果有：

1)与临床治疗结肠癌的阳性对照药5-氟脲嘧啶(5-FU)相比，本发明的紫杉烷类靶向前药具有较好的抗结肠癌活性，例如对结肠癌细胞HCT116的抑制活性可达2.7nmol，表现出较好的抗结肠癌潜力，具有良好的成药前景；

2)与多烯紫杉烷类化合物相比，前药中的靶向多肽能够将紫杉烷类小分子特异的运送到结肠癌肿瘤组织部位，降低对正常细胞的杀伤力，且靶向多肽在细胞内的降解产物为氨基酸，因此具有较低的组织系统毒性和较高的生物相容性。

附图说明

图1为实施例1中多烯紫杉醇或四氟多烯紫杉醇通过桥接基团Leu-PABC(a)与结肠癌靶向多肽A1-A5偶联前药的合成路线图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例绝不是对本发明的任何限制。

实施例1：多烯紫杉醇或四氟多烯紫杉醇通过桥接基团Leu-PABOH(a)与结肠癌靶向多肽A1～A5偶联前药的制备

利用紫杉醇(DTX)或四氟多烯紫杉醇(4FDT)与结肠癌靶向多肽A1～A5偶联制备紫杉烷类靶向前药，其合成路线如图1所示，包括以下步骤：

1)桥接基团Leu-PABOH的合成及活化修饰

参照文献(Elsadek B,Graeser R,Esser N,et al.Development of a novelprodrug of paclitaxel that is cleaved by prostate-specific antigen:An invitro and in vivo evaluation study[J].European Journal of Cancer,2010,46(18):3434-3444)中采用的方法经过两步反应完成桥接基团Leu-PABOH的合成及活化修饰。即：在25mL单颈瓶中，加入1mmol的Fmoc-L-Leu(1)，2mmol的对氨基苯甲醇(PABOH)和2mmol的缩合剂2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，加入14mL的甲醇和7mL的二氯甲烷作为反应溶剂，室温避光条件下反应约48h，TLC(DCM:MeOH＝55:1)监测，反应结束后，减压浓缩除去有机溶剂，经二氯甲烷：甲醇(100:1—70:1)体系纯化，得淡黄色中间体Fmoc-Leu-PABOH(2),产率73％；取两颈瓶，加入1mmol的中间体Fmoc-Leu-PABOH(2)，2mmol的二(对硝基苯)碳酸酯，N₂保护，加入10mL无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解样品后，于零摄氏度条件下，缓慢加入1.5mmol的二异丙基乙胺(DIPEA)，5min后移至室温，TLC(PE:ACE＝3:1)监测反应，约8～12h反应完全；反应结束后，加入大量饱和食盐(NaCl)水溶液终止反应，乙酸乙酯(EA)分层萃取三遍，有机相合并，减压浓缩时有较纯的白色固体析出，过滤，剩余有机相合并,经硅胶柱纯化(PE:ACE＝10:1-7:1)及重结晶，得白色固体Fmoc-Leu-PABC-PNP(3)，总收率为82％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.27(d,J＝8.0Hz,2H),7.76(d,J＝8.0Hz,2H),7.61-7.49(m,4H),7.49-7.44(m,1H),7.41-7.35(m,6H),7.30-7.28(m,1H),5.24(s,2H),4.51-4.45(m,2H),4.29(s,1H),4.21(dd,J＝8.0Hz,12.0Hz,1H),1.80-1.68(m,2H),1.04(d,J＝4.0Hz,1H),0.98-0.95(m,6H)；ESI-MS:m/z 623.6[M+H]+,646.6[M+Na]+；C₃₅H₃₃N₃O₈:HRMScalcd.646.2160[M+Na]+,found 646.2162.

2)多烯紫杉醇C-2′位中间体4的合成

于两颈瓶中，加入1mmol的Fmoc-Val-Cit-PABC-PNP(3)，1mmol的多烯紫杉醇(DTX)，N2保护，加入80mL无水二氯甲烷溶液，零摄氏度下，加入1mmol的缩合剂4-二甲氨基吡啶(DMAP)，5min后移至室温，反应约48h，TLC(DCM:MeOH＝25:1)监测反应，反应结束后，减压浓缩，除去有机溶剂二氯甲烷，硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1)得灰白色固体4，收率为50％左右。¹H NMR(400MHz,Acetone-d₆):δ9.43(s,1H),8.12(d,J＝7.6Hz,2H),7.86(d,J＝7.6Hz,2H),7.76-7.64(m,5H),7.58(t,J＝7.6Hz,2H),7.51(d,J＝7.6Hz,2H),7.46-7.35(m,6H),7.34-7.25(m,3H),7.04(d,J＝9.6Hz,1H),6.83(d,J＝8.0Hz,1H),6.11(d,J＝8.4Hz,1H),5.68(d,J＝7.2Hz,1H),5.40(d,J＝9.2Hz,1H),5.30(d,J＝5.2Hz,1H),5.25(s,1H),5.19(d,J＝11.80Hz,1H),5.11(d,J＝11.80Hz,1H),4.97(d,J＝8.8Hz,1H),4.39-4.30(m,5H),4.27-4.21(m,2H),4.17(s,2H),3.93(d,J＝6.8Hz,1H),3.68(s,1H),2.83(s,1H),2.45(d,J＝17.6Hz,4H),2.38-2.28(m,1H),2.12(d,J＝8.4Hz,1H),1.93-1.77(m,5H),1.75-1.65(m,5H),1.45-1.25(m,20H),1.17(d,J＝12.4Hz,6H),0.96(dd,J＝10.8,6.6Hz,6H),0.88(t,J＝6.6Hz,1H).ESI-MS:m/z 1292.4[M+H]⁺,1314.2[M+Na]⁺；C₇₂H₈₁N₃O₁₉:HRMScalcd.1314.5356[M+Na]⁺,found1314.5366.

3)四氟多烯紫杉醇C-2′位中间体5的合成

合成方法同中间体4，灰白色固体，产率54％。灰白色固体，产率54％。¹H NMR(400MHz,Acetone-d₆):δ9.46(s,1H),7.95(d,J＝7.6Hz,1H),7.86(d,J＝7.6Hz,2H),7.79(d,J＝9.6Hz,1H),7.75-7.67(m,5H),7.67-7.61(m,1H),7.56-7.47(m,3H),7.47-7.35(m,7H),7.34-7.25(m,3H),6.84(d,J＝8.0Hz,1H),6.10(t,J＝9.2Hz,1H),5.66(d,J＝6.8Hz,1H),5.40-5.34(m,1H),5.32(d,J＝5.6Hz,1H),5.24(brs,1H),5.20(d,J＝12.0Hz,1H),5.12(d,J＝12.0Hz,1H),4.98(d,J＝9.2Hz,1H),4.41-4.28(m,7H),4.24(dd,J₁＝6.8Hz,8.0Hz,1H),4.20-4.12(m,2H),3.92(d,J＝7.2Hz,1H),3.79(brs,1H),2.52-2.42(m,5H),2.26(dd,J＝15.6,8.6Hz,2H),2.02-1.95(m,1H),1.90-1.75(m,7H),1.73-1.63(m,6H),1.62-1.50(m,7H),1.44-1.34(m,1H),1.34-1.24(m,5H),1.17(brs,4H),1.00-0.84(m,7H).ESI-MS:m/z 1364.2[M+H]⁺,1386.2[M+Na]⁺；C₇₂H₇₇F4N₃O₁₉:HRMS calcd.1386.4980[M+Na]⁺,found 1386.5001.

4)衍生物6(或7)的合成

取25mL单颈瓶，加入15mg的中间体4(或5)和0.9mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，充分溶解后，于零摄氏度下，加入3.6μL的哌啶，反应5min后移至室温，TLC(DCM:MeOH＝15:1)监测，约36min能完全反应；反应结束后，立即用真空油泵于室温下尽量除去溶剂N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，并用饱和NaCl水溶液除去剩余残留的DMF，二氯甲烷(100mL)萃取三次，迅速减压浓缩有机相，得淡黄色固体6(或7)，直接用于下一步反应。

5)靶向多肽前药的合成

DTX-PABC-Leu-A1(8a)

取25mL单颈瓶，加入0.01mmol的中间体4，0.012mmol的靶向载体多肽A1(Gly-Pro-Leu-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln-Fmoc)，0.03mmol的1-羟基苯并三唑(HOBT)，及1.5mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，于0℃下充分溶解后，加入0.04mmol的N-甲基吗啡啉，反应15min后，加入N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)，升温至5℃，继续反应，HPLC监测反应(方法：水/乙腈为流动相，乙腈：5％-100％，30min)，约72h能反应完全；反应结束后，室温下用真空油泵尽可能除去溶剂N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，加少量二甲基亚砜(DMSO)溶解，反相柱纯化(水/乙腈为流动相:依次用100％水洗脱15min除去样品中的DMSO溶液；乙腈0-85％,40min),得到白色固体8a，产率17％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.95(s,1H),8.16-8.05(m,4H),7.99(d,J＝8Hz,1H),7.94(d,J＝6.4Hz,3H),7.90(d,J＝8Hz,2H),7.85(d,J＝7.6Hz,2H),7.68(d,J＝7.6Hz,3H),7.61(d,J＝7.6Hz,3H),7.38(t,J＝7.6Hz,6H),7.29(dd,J＝14.4,7.2Hz,7H),7.13(t,J＝7.2Hz,1H),6.78(s,1H),5.74(t,J＝8.4Hz,1H),5.36(d,J＝7.2Hz,1H),5.11(s,2H),5.04(d,J＝7.2Hz,3H),4.99(d,J＝7.2Hz,2H),4.93(s,1H),4.86(d,J＝10.4Hz,1H),4.45-4.34(m,3H),4.28(d,J＝8.0Hz,1H),4.19(dd,J＝14.8,7.2Hz,9H),4.03-3.92(m,4H),3.88-3.77(m,1H),3.76-3.71(m,2H),3.69(s,3H),3.60(d,J＝6.8Hz,2H),3.44-3.37(m,1H),2.20(s,4H),2.10-2.04(m,2H),1.87-1.79(m,3H),1.68(s,3H),1.62-1.56(m,4H),1.47(s,6H),1.30(s,9H),1.18(d,J＝8Hz,3H),0.94(s,6H),0.87(d,J＝6Hz,3H),0.84-0.81(m,6H),0.80-0.71(m,12H).ESI-MS:m/z 1015.4[M/2+Na]⁺；C₁₀₃H₁₃₂N₁₂O₂₈:HRMScalcd.2007.9166[M+Na]⁺,found 2007.9246.

4FDT-PABC-Leu-A1(8b)

合成方法同8a，白色固体，产率22％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.00(s,1H),8.51(d,J＝8.0Hz,1H),8.28–8.07(m,4H),8.05–7.93(m,3H),7.90(d,J＝8.0Hz,2H),7.82(d,J＝8.0Hz,2H),7.72(d,J＝8.0Hz,3H),7.65(d,J＝8.0Hz,3H),7.49-7.37(m,7H),7.33(d,J＝4.0Hz,5H),7.19(t,J＝8.0,4.0Hz,1H),6.82(s,1H),5.78(t,16,8.0Hz,1H),5.38(d,J＝4.0Hz,1H),5.22-5.08(m,4H),5.06-4.96(m,3H),4.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.54(s,1H),4.41(s,1H),4.34-4.17(m,7H),4.12(d,J＝4.0Hz,6H),4.01(s,3H),3.90-3.49(m,5H),3.17(d,J＝4.6Hz,14H),2.89(s,3H),2.73(s,3H),2.24(s,4H),1.72(s,5H),1.57-1.49(m,10H),1.23(s,5H),0.98(s,5H),0.91(d,J＝8.0Hz,3H),0.87(s,5H),0.80(d,J＝8.0Hz,6H).ESI-MS:m/z 1029.4[M/2+H]⁺；C₁₀₃H₁₂₈F₄N₁₂O₂₈:HRMS calcd.2079.8789[M+Na]⁺,found 2079.8879.

DTX-PABC-Leu-A2(9a)

合成方法同8a，白色固体，产率21％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.99(s,1H),8.19(d,J＝7.9Hz,1H),8.13-7.09(m,3H),8.05-7.92(m,6H),7.86-7.79(m,1H),7.75-7.69(m,1H),7.65(d,J＝7.2Hz,4H),7.41(t,J＝7.2Hz,2H),7.38-7.31(m,4H),7.29(s,1H),7.17(t,J＝7.2Hz 1H),6.82(s,1H),5.78(t,J＝9.6Hz,1H),5.40(d,J＝6.9Hz,1H),5.15(s,2H),5.08(d,J＝8.3Hz,2H),5.03(d,J＝7.3Hz,2H),4.96(s,1H),4.90(d,J＝9.2Hz,1H),4.5-4.37(m,3H),4.33-4.17(m,5H),4.12-4.96(m,4H),3.95-3.89(m,1H),3.87-3.78(m,2H),3.78-3.67(m,4H),3.64(d,J＝6.4Hz,1H),3.53(s,1H),2.24(s,5H),2.15-2.08(m,2H),2.03(s,4H),1.86(s,5H),1.84(s,2H),1.72(s,4H),1.51(s,6H),1.34(s,10H),1.23(d,J＝6.0Hz,6H),0.98(s,7H),0.89(dd,J＝16.4,6.0Hz,7H),0.80(dd,J＝15.0,7.2Hz,7H).ESI-MS:m/z 1843.8[M+Na]⁺；C₈₉H₁₂₂N₁₂O₂₇S:HRMS calcd.1845.8155[M+Na]⁺,found1845.8219.

4FDT-PABC-Leu-A2(9b)

合成方法同8a，白色固体，产率23％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.00(s,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),8.11(d,J＝8.0Hz,2H),8.06-7.93(m,3H),7.82(dd,J＝8.0,4.0Hz,2H),7.78-7.61(m,5H),7.47-7.39(m,3H),7.37-7.29(m,4H),7.18(t,J＝7.0Hz,1H),6.82(s,1H),5.78(t,J＝8.0Hz,1H),5.38(d,J＝8.0Hz,1H),5.35-5.29(m,1H),5.21-5.07(m,4H),5.05(d,J＝4.0Hz,1H),5.01(s,2H),4.92(d,J＝8.0Hz,1H),4.54(s,1H),4.51-3.66(m,13H),3.66-3.38(m,1H),3.29-2.96(m,4H),2.89(s,1H),2.73(s,1H),2.24(s,3H),2.15-2.08(m,2H),2.03(s,4H),1.85(d,J＝8.0Hz,5H),1.79-1.62(m,9H),1.55(s,3H),1.52(d,J＝8.0Hz,7H),1.23(s,9H),0.98(s,6H),0.91(d,J＝8.0Hz,3H),0.87(d,J＝8.0Hz,4H),0.83-0.75(m,7H).ESI-MS:m/z948.6[M/2+H]⁺；C₈₉H₁₁₈F₄N₁₂O₂₇S:HRMScalcd.1917.7778[M+Na]⁺,found 1917.7831.

DTX-PABC-Leu-A3(10a)

合成方法同8a，白色固体，产率18％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.97(s,1H),8.22-8.10(m,4H),8.07-7.95(m,6H),7.79-7.61(m,7H),7.47-7.27(m,8H),6.81(s,2H),5.86-5.72(m,1H),5.45-5.36(m,1H),5.17-5.01(m,6H),4.93(d,J＝27.6Hz,2H),4.44(s,2H),4.26(s,4H),4.18-4.11(m,2H),4.07-3.98(m,3H),3.90(s,2H),3.74(s,3H),3.58-3.47(m,2H),2.29-2.20(m,4H),2.17-2.06(m,5H),1.91-1.79(m,8H),1.76-1.68(m,6H),1.67-1.61(m,3H),1.52(s,5H),1.33(s,9H),1.24(s,9H),1.01-0.95(m,6H),0.92-0.87(m,6H),0.83-0.77(m,6H).ESI-MS:m/z 940.2[M/2+Na]⁺；C₉₀H₁₂₃N₁₃O₂₈:HRMS calcd.1856.8493[M+Na]⁺,found 1856.8486.

4FDT-PABC-Leu-A3(10b)

合成方法同8a，白色固体，产率21％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,rotamers):δ9.97(d,J＝12.0Hz,1H),8.52(d,J＝12.0Hz,1H),8.23-7.97(m,12.1Hz,7H),7.82(d,J＝8.0Hz,2H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.74-7.68(m,2H),7.65(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,3H),7.37-7.25(m,5H),7.18(d,J＝4.0Hz,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,2H),5.77(t,J＝16.0,8.0Hz,1H),5.38(d,J＝8.0Hz,1H),5.22-4.95(m,7H),4.91(d,J＝8.0Hz,1H),4.54(s,1H),4.40(s,1H),4.34-4.18(m,4H),4.12(s,7H),4.01(s,2H),3.90(s,1H),3.73(s,1H),3.66-3.46(m,1H),3.17(s,5H),2.88(s,1H),2.72(s,1H),2.23(s,5H),2.16-2.05(m,5H),1.91-1.82(m,6H),1.72(s,6H),1.56-1.48(m,10H),1.22(s,7H),0.98(s,5H),0.88(dd,J＝16.0,4.0Hz,6H),0.84-0.73(m,7H).ESI-MS:m/z954.0[M/2+H]⁺；C₉₀H₁₁₉F₄N₁₃O₂₈:HRMScalcd.1928.8116[M+Na]⁺,found 1928.8183.

DTX-PABC-A4(11a)

合成方法同8a，白色固体，产率24％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,rotamers):δ10.03(s,1H),8.29-8.15(m,3H),8.12-7.91(m,8H),7.84-7.61(m,6H),7.47-7.16(m,8H),6.80(s,2H),5.90-5.68(m,1H),5.40(t,J＝4Hz,1H),5.21-4.84(m,8H),4.55-4.37(m,3H),4.35-4.14(m,6H),4.07-3.96(m,3H),3.89-3.54(m,8H),2.24(s,4H),2.18-2.07(m,5H),2.06-2.00(m,3H),1.95-1.82(m,9H),1.77-1.63(m,9H),1.51(s,6H),1.34(s,9H),1.27-1.16(m,6H),1.03-0.95(m,6H),0.93-0.85(m,6H),0.83-0.75(m,6H).ESI-MS:m/z 969.8[M/2+Na]⁺；C₉₂H₁₂₇N₁₃O₂₈S:HRMS calcd.1916.8526[M+Na]⁺,found 1916.8535.

4FDT-PABC-A4(11b)

合成方法同8a，白色固体，产率25％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,rotamers)δ10.01(d,J＝20.8Hz,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),8.14(d,J＝6.4Hz,2H),8.08-7.98(m,3H),7.95-7.91(m,2H),7.78(q,J＝16.4,12.4Hz,2H),7.71-7.66(m,1H),7.66-7.57(m,4H),7.37(t,J＝7.6Hz,2H),7.32(d,J＝7.6Hz,2H),7.29(d,J＝8.6Hz,2H),7.24(s,2H),7.14(t,J＝8.0Hz,1H),6.76(s,2H),5.74(t,J＝8.0Hz,1H),5.34(d,J＝8.0Hz,1H),5.08(dd,J＝16,12Hz,4H),5.01(d,J＝8.0Hz,1H),4.97(d,J＝8.0Hz,2H),4.87(d,J＝8.0Hz,1H),4.43-4.34(m,1H),4.39(s,1H),4.18(ddd,J＝23.7,17.2,9.0Hz,6H),3.98(d,J＝9.0Hz,3H),3.86(dd,J＝16.0,8.0Hz,1H),3.80-3.64(m,2H),3.62-3.42(m,2H),3.34(s,1H),2.85(s,3H),2.69(s,3H),2.43(s,2H),2.20(s,3H),2.16-2.03(m,4H),1.98(s,3H),1.87(s,3H),1.83(d,J＝4.0Hz,4H),1.76-1.69(m,4H),1.68(s,3H),1.65-1.57(m,4H),1.51(s,3H),1.49(s,3H),1.47(d,J＝4.0Hz,3H),1.21-1.14(m,6H),0.94(s,6H),0.87(d,J＝6.2Hz,3H),0.83(d,J＝6.2Hz,3H),0.76(dd,J＝6.4,3.6Hz,6H).ESI-MS:m/z984.2[M/2+H]⁺；C₉₂H₁₂₃F₄N₁₃O₂₈S:HRMS calcd.1988.8150[M+Na]⁺,found 1988.8169.

DTX-PABC-A5(12a)

合成方法同8a，白色固体，产率24％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.96(s,1H),8.14(d,J＝28.0Hz,5),8.03(s,1H),7.95(d,J＝21.6Hz,5H),7.68(dd,J＝24.4,6.4Hz,5H),7.41(d,J＝6.0Hz,2H),7.31(d,J＝26.4Hz,6H),7.17(s,1H),6.81(d,J＝14.8Hz,2H),5.78(t,J＝4Hz,1H),5.39(d,J＝6.0Hz,1H),5.15(s,3H),5.04(dd,J＝22.8,7.2Hz,3H),4.96(s,1H),4.90(d,J＝9.2Hz,1H),4.47-4.37(m,2H),4.35-4.12(m,5H),4.10-3.89(m,4H),3.88-3.77(m,1H),3.72(s,3H),3.67-3.60(m,1H),3.59-3.46(m,2H),3.28(s,1H),2.24(s,3H),2.15-2.02(m,5H),1.94-1.88(m,2H),1.86(s,3H),1.85-1.73(m,3H),1.68-1.53(m,6H),1.51(s,3H),1.47-1.42(m,2H),1.33(s,9H),1.25-1.19(m,4H),0.98(s,6H),0.92-0.82(m,13H).ESI-MS:m/z 1842.8[M+Na]⁺；C₈₉H₁₂₁N₁₃O₂₈:HRMS calcd.1842.8336[M+Na]⁺,found 1842.8347.

4FDT-PABC-A5(12b)

合成方法同8a，白色固体，产率22％.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.97(s,1H),8.52(d,J＝8Hz,1H),8.17(d,J＝8.0Hz,2H),8.11(dd,J＝6.0,4.0Hz,3H),8.04(t,J＝8Hz,4H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.78–7.58(m,5H),7.43-7.28(m,9H),7.18(t,J＝8.0Hz,1H),6.81(d,J＝16Hz,2H),5.78(t,J＝8.0Hz,1H),5.38(d,J＝8.0Hz,1H),5.21-5.08(m,4H),5.07-4.96(m,3H),4.92(d,J＝8.0Hz,1H),4.54(s,1H),4.51-3.85(m,10H),3.84-3.68(m,4H),3.64(d,J＝8.0Hz,1H),3.60-3.35(m,2H),3.34(s,1H),2.36-2.19(m,4H),2.17-1.99(m,5H),1.98-1.82(m,7H),1.80-1.57(m,10H),1.55(s,3H),1.52(d,J＝4Hz,7H),1.48-1.31(m,4H),1.23(d,J＝4.0Hz,3H),0.98(s,5H),0.91(d,J＝4Hz,3H),0.89-0.85(m,6H),0.94-0.77(m,4H).ESI-MS:m/z 947.2[M/2+H]⁺；C₈₉H₁₁₇F₄N₁₃O₂₈:HRMS calcd.1914.7959[M+Na]⁺,found 1914.7963.。

实施例2：靶向抗结肠癌前药体外对人结肠癌细胞株HCT116及SW620的增殖抑制活性及对组织正常结肠细胞株CCD18Co和肾细胞株HEK293的毒性评价

实验方法：以5-氟脲嘧啶及母药多烯紫杉醇和四氟多烯紫杉醇为阳性对照，采用MTT法测定前药化合物对HCT116及SW620的体外抗肿瘤活性，及其对组织正常结肠细胞株CCD18Co和肾细胞株HEK293的毒性。观察药物在不同浓度下对肿瘤细胞和正常细胞生长的抑制情况，计算其半数抑制率(IC50值)以评价其在体外的抗肿瘤活性及对正常组织的毒性。

取处于对数生长期，状态良好的细胞，加入适量胰酶(购自GIBCO)消化细胞，随后吸除胰酶，用含血清的培养液吹洗收集并重悬细胞，计数，调整细胞密度。取细胞悬液接种于96孔板上(100μL，4000-5000个细胞/孔)，在37℃，5％CO2和95％空气气氛下培养12h。确认细胞贴壁后，吸去培养液，将溶于培养基的前药化合物溶液(浓度为10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11mol/L)分别加入细胞中(200μL/孔)，作为实验组。将含有0.2％DMSO的培养基加入细胞孔中(200μL/孔)，作为培养基对照组。将培养液加入未接种细胞的孔中作为空白组。每个浓度设个6复孔。上述细胞在37℃，5％CO2和95％空气气氛下孵育48或72h后，每孔加入MTT/PBS溶液(20μL，5mg/mL)，继续孵育4h。小心吸去液体，加入150μL的DMSO，使其完全溶解。用酶标仪(Thermo Fisher)中速震荡5分钟，测定490nm处吸光值(OD)。按如下公式计算化合物对细胞增殖的抑制率：

抑制率＝1－[(给药组平均OD值－空白组平均OD值)/(培养液对照组平均OD值－空白组平均OD值)]采用SPSS软件计算IC50值。以上实验重复三次，计算三次实验IC50平均值及标准偏差。

实验结果：靶向抗结肠癌前药对人结肠癌细胞株HCT116的增殖抑制活性，均强于阳性对照药5-氟脲嘧啶，相当或略低于各自对应的母药(多烯紫杉醇或四氟代多烯紫杉醇)；对正常结肠细胞株CCD18Co和肾细胞株HEK293的毒性较低且低于各自对应的母药。

表1 4FDT/DTX-PABC-多肽前药体外抗结肠癌细胞活性测试结果

表2 4FDT/DTX-PABC-多肽前药体外对人源正常细胞毒性测试结果

。

Claims (2)

1.一种多烯紫杉烷类靶向抗结肠癌前药，其特征在于，其结构选自：

。

2.如权利要求1所述的多烯紫杉烷类靶向抗结肠癌前药在制备治疗结肠癌药物中的用途。

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