CN109381427A

CN109381427A - 一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂

Info

Publication number: CN109381427A
Application number: CN201710680273.9A
Authority: CN
Inventors: 张跃华; 赵梦尧
Original assignee: Nanjing Youyi Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Youyi Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2017-08-10
Filing date: 2017-08-10
Publication date: 2019-02-26
Anticipated expiration: 2037-08-10
Also published as: CN109381427B

Abstract

本发明公开了一种具有良好抗癌作用的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂，包含具有式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物，所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物溶于亲脂性介质中，通过表面活性剂的作用以纳米颗粒分散在水相中；或直接通过表面活性剂的作用以纳米颗粒分散在水相中；其中R为C1～C5的烷基；n＝1‑10。本发明的注射剂包括脂质体剂、乳剂和胶束剂，具有毒性小、载药量及稳定性提高以及靶向性递药等特点，从而提高药物的抗肿瘤治疗效果和降低毒性，增加病人耐受性。

Description

一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂

技术领域

本发明涉及一种多西他赛抗癌药物化合物制剂，特别是涉及一种寡聚乙二醇(聚合度n＝1-10)修饰的多西他赛衍生物的注射剂。

背景技术

多西他赛(docetaxel，式1)又名多烯紫杉醇，是一种亲脂性的紫杉烷类抗肿瘤药物，属于细胞抑止剂类药物，通过加强微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，形成稳定的非功能性微管束，从而破坏肿瘤细胞的有丝分裂达到抗肿瘤的效果。多西他赛细胞内浓度比紫杉醇高3倍，在细胞内滞留时间长，因此比紫杉醇具有更强的抗肿瘤活性。临床主要用于治疗主要治疗晚期乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌，头颈部癌、小细胞肺癌；对胃癌、胰腺癌、黑色素瘤等也有一定疗效。

多西他赛抗肿瘤活性高，安全性及耐受性较好，自上市以来其临床应用日趋广泛，但与其他抗肿瘤药物一样，它对肿瘤细胞和正常细胞没有选择性识别作用，使得其副作用表现也尤为凸显，关于其不良反应的报道也逐渐增加，目前发现的主要不良反应有体液潴留，皮肤毒性如全身红斑、瘙痒和皮疹，严重虚弱和麻痹；血液学毒性包括白细胞减少症、中性粒细胞减少症和热性中性粒细胞减少症；非血液毒性有脱发、感觉和运动神经毒性，口炎、虚弱以及恶心、呕吐、腹泻等消化系统反应。

为了降低多西他赛的毒副作用，扩大其临床应用范围，国内外诸多药物研究者致力于多西他赛新剂型的研发。特别是研发新型载体，提高药物的载药量、药物体内循环的稳定性和靶向递药等。所谓载体，可以是一组小分子(如表面活性剂)或生物相容的大分子(如多肽、树枝状高分子)，这些载体分子可在水溶液或体液中形成纳米颗粒，并将药物载入纳米颗粒内部，在体内通过渗透或被巨嗜细胞吞噬后载体被酶类分解而释放药物，从而发挥作用。这些纳米颗粒具有类细胞结构，进入动物体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。例如脂质体技术是被喻为“生物导弹”的第四代靶向给药技术，也是目前国际上最热门的制药技术。

多西他赛不溶于水，导致其临床剂型的载药量小，从而限制了它的给药剂量，影响了临床疗效；其口服生物利用度差，低于8％。目前，多西他赛的临床使用剂型为多西他赛注射液，该制剂中使用Tween 80为溶剂，有一定的毒副作用，且多西他赛在含水溶液中易发生降解、不易保存。为解决以上弊端，很多研究者致力于新型给药系统的研究与开发，如脂质体剂型，多西他赛微乳，胶束制剂，以及多西他赛主动靶向纳米给药系统等。这些新剂型都围绕多西他赛水溶性、降低毒副作用、提高药物的生物利用率，并取得了很大的进展，不仅为提高多西他赛水溶性、降低毒副作用、提高药物的生物利用率提供了可能，也为癌症患者提供了更安全用药的希望。但各种给药系统或多或少存在缺陷，如毒性大、包封率低、药物渗漏和稳定性等问题有待进一步解决。

发明专利201510624350.X提供了一种新的水溶性多西他赛抗癌药物化合物，具有高抗癌活性且毒性低；所述的化合物是将亲脂性的抗癌药物活性部分多西他赛与亲水性的烷氧基聚乙二醇酯通过连接基团二甘醇酰基以酯键共价结合形成的多西他赛衍生物，不仅可以溶于水，而且在水溶液中能够形成纳米颗粒，可直接溶于水、生理盐水或葡萄糖溶液制成注射液。该发明主要是围绕提高多西他赛的水溶性，以期能制得多西他赛抗癌药物化合物的注射制剂。但是，亲水部分烷氧基聚乙二醇通常在乙二醇的聚合度n＞10时方具有较好的亲水性，而且水溶性制剂存在易降解、不易保存和稳定性差等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂，以克服多西他赛和多西他赛衍生物制剂载药量低、稳定性差、毒性大等缺点，并提高药物的抗肿瘤治疗效果。

不同于其它多西他赛制剂的技术，本发明的特点：1)首先将多西他赛制成一种寡聚乙二醇修饰的衍生物，本发明选用小分子量的聚乙二醇(PEG，聚合度n≤10)修饰的多西他赛(即寡聚乙二醇修饰的多西他赛，分子量小于1500道尔顿，Dalton)。2)利用制剂技术将寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物制成注射剂。选用适当小分子量的聚乙二醇修饰的多西他赛有以下优点：①由于小分子量的聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物具有较高的亲脂性，增加了药物分子在制剂亲脂层(如脂质体双分子亲脂层、乳剂油层和胶束粒亲脂层)中的溶解度，从而提高载药量；②增加药物在注射液中和体内循环的稳定性；③降低因大量使用具有副作用的表面活性剂(如吐温80)所产生的毒性；④由于脂质体、乳剂及胶束注射剂在水溶液中都以纳米颗粒形式存在，具有被动靶向的特点。因此，本发明的新药注射剂具有载药量高、稳定性好、靶向性递药等特点，从而提高治疗效果和降低毒性，增加病人耐受性。

本发明所述的寡聚乙二醇(聚合度n＝1-10)修饰的多西他赛衍生物注射剂，包括脂质体剂、乳剂和胶束剂。

本发明的注射剂中的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(结构如式I)，含有亲脂性的抗癌药物活性部分多西他赛和双亲性的烷氧基寡聚乙二醇酯，其聚合度小于或等于10，即n≤10，所述的多西他赛衍生物可溶于亲脂性介质中且具有双亲性的烷氧基寡聚乙二醇酯，从而利用制剂技术将寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物制成注射剂，适合的制剂包括脂质体剂、乳剂、胶束剂等。

实现本发明目的采用以下技术方案：一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂，其特征在于，包含具有式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物，所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物溶于亲脂性介质中，通过表面活性剂的作用以纳米颗粒分散在水相中；或直接通过表面活性剂的作用以纳米颗粒分散在水相中；

其中，R为C1～C5的烷基，常见及优选以下基团：

a)甲基(-CH₃)；

b)乙基(-CH₂CH₃)；

c)丙基(-CH₂CH₂CH₃)；

d)丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₃)。

其中聚合度n＝1-10。

优选地，所述的注射剂中，寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物聚乙二醇的聚合度为n＝3-8，更优选的聚合度为n＝5-8。

本发明所涉及的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(式I)的合成方法，可参照发明专利申请CN201510624350.X。

本发明的注射剂包括脂质体剂、乳剂、胶束剂等，优选脂质体剂。脂质体剂包括所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物、磷脂(最具有代表性的是卵磷脂、大豆磷脂)、胆固醇或维生素E及其衍生物(如维生素E醋酸酯)、水相。乳剂包括所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物、一种或多种表面活性剂、亲脂性介质、助溶剂(可选)和水相。乳剂可以是水包油型或油包水型。胶束剂包括所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物、一种或多种表面活性剂、助溶剂(可选)和水相。

进一步地，一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的脂质体注射剂，其成分包括：

1)式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物；

2)磷脂；

3)胆固醇或维生素E及其衍生物；

4)水相。

或者，一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的乳剂注射剂，其成分包括：

1)油相，包括：

a)式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物；

b)生物相容的亲脂性介质；

2)表面活性剂和助溶剂；

3)水相。

或者，一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的胶束剂注射剂，其成分包括：

1)式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物；

2)表面活性剂；

3)助溶剂；

4)水相。

所述的亲脂性介质(或载体)可以是任何一种的生物相容的亲脂性介质，具有代表性的生物相容的亲脂性介质包括：

1)胆固醇及其衍生物。

2)可作为亲脂性介质的油脂，包括不同链长的脂肪酸及酯，它们大多是直链的，但也可以是支链的，例如癸酸、辛酸、己酸、月桂酸、肉豆蔻、硬脂酸、油酸、亚油酸、以及其它饱和或不饱和脂肪酸及酯类。

3)脂溶性的维生素E及衍生物。维生素E是指以天然或人工合成的维生素E系列，它们通常称为生育酚和生育三烯酚(tocopherols和tocotrienols)，生育酚包括α-生育酚(D型、DL型、L型)、β-生育酚(D型、DL型、L型)、γ-生育酚(D型、DL型、L型)和δ-生育酚(D型、DL型、L型)。生育三烯酚在结构上与生育酚相似，但生育三烯酚在碳-2的侧链植基(phytyl)上有三个双键。生育三烯酚包括α-生育三烯酚(D型、DL型、L型)、β-生育三烯酚(D型、DL型、L型)、γ-生育三烯酚(D型、DL型、L型)和δ-生育三烯酚(D型、DL型、L型)。维生素E衍生物包括所有生育酚和生育三烯酚的衍生物，如维生素E琥珀酸酯，维生素E醋酸酯等。

4)脂肪酸与甘油酯化反应所形成的甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯，无论它们是合成的还是天然的，都可作为亲脂性介质，例如，甘油酯，如豆油，棉籽油，菜籽油，鱼油，乙酰化单甘酯，甘油单油酸酯，三醋酸甘油酯，和双乙酰酒石酸酯，单甘酯，蓖麻油等。

5)脂肪醇，如苄醇、硬脂醇、月桂醇等，或是它们的酯或醚，如苯甲酸苄酯。

具有代表性的表面活性剂包括：

1)聚乙二醇表面活性剂，如聚氧乙烯蓖麻油EL(Cremophor EL)、吐温系列表面活性剂等。

2)磷脂表面活性剂(phospholipids)，如卵磷脂(lecithin)、大豆磷脂(granulesten or soybean lecithin)聚乙二醇磷脂(pegylated phospholipids)等。

3)聚乙二醇维生素E衍生物，如维生素E琥珀酸酯聚乙二醇(d-α-tocopherolpolyethylene glycol 1000 succinate，TPGS)。

4)聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物：POLOXAMERS或PLURONICS的嵌段共聚物(H(OCH₂CH₂)_a(OCH₂CH₂CH₂)_b(OCH₂CH₂)_aOH)。

具有代表性的有机助溶剂包括：

乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甘油、N-甲基吡咯烷酮等。聚乙二醇(PEG)是亲水性的，重复单元的化学结构组成为-CH₂CH₂O-，通式为H-(CH₂CH₂)_n-OH，分子量范围一般从200至10000。例如，聚乙二醇200、PEG-300、聚乙二醇400等。

此处使用的“乳剂”是指在表面活性剂的作用下，一相液体以液滴状态分散于另一相液体中形成的非均相液体分散体系，如油和水所形成的液滴，其直径一般在0.1至3.0微米。

所述的乳剂可以形成稳定的微乳剂。“微乳”一词是指两个不混溶的液体形成一个热力学稳定的各向同性、透明或半透明的分散体系，如油和水的微乳分散体系是被表面活性剂分子形成的界面膜所稳定。微乳平均液滴直径小于200nm，一般10至50纳米。

乳剂或微乳剂中包括油相和水相。乳剂或微乳剂可以是水包油型乳化或油包水型。

在一个乳剂或微乳剂的实施方案中，亲脂性介质包括豆油，水相介质是水。在另一个乳剂或微乳剂的实施方案中，亲脂性介质包括油溶性维生素E衍生物。

乳剂中还可以包括药物乳剂中常用的其他的成分，这些成分包括表面活性剂和助溶剂。具有代表性的表面活性剂包括非离子表面活性剂，如聚氧乙烯蓖麻油EL(CremophorEL)、吐温80(Tween 80)、聚乙二醇维生素E衍生物表面活性剂及其它表面活性剂聚合物。

合适的聚乙二醇维生素E衍生物表面活性包括维生素E琥珀酸聚乙二醇衍生物(例如维生素E聚乙二醇琥珀酸酯)，在维生素E衍生物分子中，聚乙二醇是由琥珀酸与维生素E的羟基连接而成，这些维生素E的聚乙二醇衍生物中的聚乙二醇包括具有各种分子量(例如，200、300、400、600、1000等)的聚乙二醇。“维生素E聚乙二醇琥珀酸酯”包括维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(如D-α生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯，TPGS，一种非离子型表面活性剂(HLB＝16-18))和维生素E聚乙二醇的各种酯和醚衍生物。

上述各种制剂其配方中都包含有效治疗量的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物。

所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的乳剂或微乳剂中，寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物在制剂配方中所占的重量百分比为0.05％至3.0％；优选的重量百分比为0.1％至2％；更优选的方案中，寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物在制剂配方中所占的重量百分比为0.1％至1％。

所述的乳剂或微乳剂中，亲脂性介质在制剂配方中所占的重量百分比为1％至20％；优选亲脂性介质在制剂配方中所占的重量百分比为3％至12％；更优选的方案中，亲脂性介质在制剂配方中所占的重量百分比为5％至10％。

所述的乳剂或微乳剂中，表面活性剂在配方中的重量百分含量约为1至10％，优选2-8％，更优选4-6％。

所述的乳剂或微乳剂中，助溶剂约占配方重量的0％至20％。

如上文所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的胶束制剂包括所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物、一种或多种表面活性剂、一种或多种助溶剂和水相。

在所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的胶束剂中，寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物在配方中重量百分含量约为0.01％至2.0％，优选的重量百分含量约为0.05％至1.5％；更优选，寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物在配方中重量百分含量约为0.25％至1.0％。

合适的表面活性剂在本发明的胶束剂配方中的重量百分含量约为0.03％至6％，优选0.1-4％，更优选0.5-2.0％。

胶束剂配方还包括其它的成份，如上面提到的助溶剂，助溶剂约占配方重量的0％至10％。

所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的脂质体剂包括本发明的抗癌药物化合物、一种或多种磷脂(包括PEG化磷脂)、一种或多种亲脂性介质(如胆固醇、维生素E及其衍生物)和水相。

在所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的脂质体剂中，寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物在配方中重量百分含量约为0.01％至4.0％，优选的重量百分含量约为0.05％至2.5％；更优选，寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物在配方中重量百分含量约为0.1％至2.0％。

合适的磷脂在本发明的脂质体剂配方中的重量百分含量约为1至10％，优选2-8％，更优选3-6％。

脂质体剂配方还包括其它的成份，如上面提到的亲脂性介质(如胆固醇)。在一个实施例中，脂质体剂配方中包含胆固醇，在另一个实施例中，脂质体剂配方中包含维生素E，在另一个实施例中，脂质体剂配方中包含维生素E乙酸酯。所述的脂质体剂中，胆固醇或维生素E或其衍生物约占配方重量的0.1％至5％。

上述乳剂、微乳剂、胶束剂和脂质体剂配方中包含水相。水相包括去离子水、氯化钠生理盐水、葡萄糖溶液、蔗糖溶液等，在一个实施例中，水相包括去离子水，在另一个实施例中，水相包括生理盐水，在另一个实施例中，水相包括5％葡萄糖注射液，在另一个实施例中，水相包括5％蔗糖溶液。

本发明所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂可应用于癌症的化学治疗。所述癌症包括但不限于①血液系统的癌症，如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤；②非血液癌症，如实体瘤癌(如乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、胃癌、肝癌等)、肉瘤、皮肤癌和胶质瘤等。

本发明的注射剂的疗效和毒性用体外细胞或体内动物实验来确定，例如ED50(50％effective dose，半数有效量：50％实验对象出现阳性反应时的药量)、LD50(50％lethal dose，半数致死量：杀死一半试验对象的剂量)和GI50(concentration of theanti-cancer drug that inhibits the growth of cancer cells by 50％，抑制50％的实验对象生长的药物浓度)。通常将半数致死量(LD50)/半数有效量(ED50)的比值称为治疗指数，用以表示药物的安全性。治疗指数大的药物相对治疗指数小的药物更安全。

本发明的注射剂旨在提高治疗指数和药物的安全性，同时也提高治疗效果。从体外细胞实验和体内动物实验获得的药物剂量可以用来制定用于人体的剂量范围。这种化合物的剂量最好在很少或根本没有毒性的ED50范围内。剂量变化通常取决于采用的剂型、病人的敏感性和给药途径等。通常可用相同或类似药物，如艾素等。

本发明的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂可以单独使用，也可与一个或多个其它的治疗药物一起使用。例如，在癌症的治疗时，本发明的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂可与以下治疗药物一起使用，包括但不限于：雄激素抑制剂，如氟他胺(flutamide)和鲁珀若利得(luprolide)；抗雌激素，如他莫昔芬(tomoxifen)；抗代谢药物和细胞毒性药物，如道诺红菌素(daunorubicin)、五氟脲嘧啶(fluorouracil)、氟尿苷(floxuridine)、α-干扰素(interferon alpha)、甲氨蝶呤(methotrexate)、光神霉素(plicamycin)、硫基嘌呤(mecaptopurine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、阿霉素(adriamycin)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、阿糖胞苷(cytarabine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿霉素(doxorubicin)、雌莫司汀(estramustine)、六甲蜜胺(altretamine)、羟基脲(hydroxyurea)、异环磷酰胺(ifosfamide)、甲基苄肼(procarbazine)、突变霉素(mutamycin)、白消安(busulfan)、米托蒽醌(mitoxantrone)、卡铂carboplatin)、顺铂(cisplatin)、链脲佐菌素(streptozocin)、博莱霉素(bleomycin)、放线菌素(dactinomycin)、和依达比星(idamycin)；激素，如甲孕酮(medroxyprogesterone)、炔雌二醇(ethinyl estradiol)、雌二醇(estradiol，)、.亮丙瑞林(leuprolide)、甲地孕酮(megestrol)、奥曲肽(octreotide)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、氯烯雌醚(chlorotrianisene)、足叶乙甙(etoposide)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)和戈舍瑞林(goserelin)；氮芥衍生物，如苯丙酸氮芥(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)和塞替派(thiotepa)；类固醇，如倍他米松(betamethasone)；和其他抗肿瘤药物，如活牛分枝杆菌(live Mycobacterium bovis)、达卡巴嗪(dicarbazine)、天冬酰胺酶(asparaginase)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、米托坦(mitotane)、长春新碱(vincristine)、和长春碱(vinblastine)等。

下面结合具体实施例对本发明进行详细描述。本发明的保护范围并不以具体实施方式为限，而是由权利要求加以限定。

附图说明

图1八聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯核磁共振氢谱图；

图2八聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)脂质体剂纳米颗粒粒径分布图。

具体实施方式

下面以实施例说明本发明的新抗癌药物化合物的合成、制剂和动物实验等。所述的实施例有助于对本发明的理解和实施，并不构成对于本发明的限制，保护范围由权利要求加以界定。

实施例1.八聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯的合成

所述多西他赛衍生物的合成包括以下步骤：

1)八聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯的合成

反应式如下式所示：

实验步骤：

方法一：在100mL圆底烧瓶中，加入2.306g(6mmol)干燥后的八聚乙二醇单甲醚(1)、1.044g(9mmol)二甘醇酸酐和200mg 2-乙基己酸锡，再加入30mL甲苯，搅拌，氮气保护下加热回流至反应完成。用旋转蒸发仪除去反应液中的甲苯后，加入20mL乙酸乙酯，搅拌，再加入10mL乙醚，析出白色固体，过虑除去固体物质，用旋转蒸发仪将虑液浓缩至10mL，柱层分离，得2.306g八聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯(2)，收率76.8％。

方法二：在100mL圆底烧瓶中，加入0.644g(4.8mmol)二甘醇酸、1.450g(12mmol)4-二甲氨基吡啶、1.530g(6mmol)2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物和30mL N，N-二甲基乙酰胺，电磁搅拌，慢慢向反应液中滴加2.400g(2.4mmol)干燥后的八聚乙二醇单甲醚和10mL氯仿溶液。在室温和氮气的保护下反应12h，用旋转蒸发仪将虑液浓缩至10mL，柱层分离，得0.784g八聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯(2)，收率65.3％。

2)八聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯的合成

反应式如下式所示：

在100mL圆底烧瓶中，将3.002g(6mmol)八聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯溶解在30mL的无水甲苯中，加入1.428g(12mmol)二氯亚砜，2滴DMF。电磁搅拌，在室温和氮气的保护下反应5h。减压蒸馏除去甲苯和过量的亚硫酰氯，得到粘稠液体，加入10mL无水氯仿得溶液A。

在250mL的反应瓶中，将3.000g(3.712mmol)的多西他赛溶解在90mL的氯仿中，加入0.563g(5.568mmol)的三乙胺，冰盐浴冷却，搅拌，慢慢加入含有2.312g(4.455mmol)化合物(3)的氯仿溶液A，在室温和氮气的保护下反应。反应完毕后，减压蒸馏除去反应液中的氯仿，再向反应瓶中加入20mL的乙酸乙酯，搅拌，过滤除去白色固体，再将虑液浓缩至10mL。柱层分离，得3.140g八聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯(4)的白色固体，产率65.6％。

实施例2.六聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯的合成

所述多西他赛衍生物的合成包括以下步骤：

1)六聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯的合成

反应式如下式所示：

实验步骤：

在100mL圆底烧瓶中，加入1.7787g(6mmol)干燥后的六聚乙二醇单甲醚(5)、1.044g(9mmol)二甘醇酸酐和200mg 2-乙基己酸锡，再加入30mL甲苯，搅拌，氮气保护下加热回流至反应完成。用旋转蒸发仪除去反应液中的甲苯后，加入20mL乙酸乙酯，搅拌，再加入10mL乙醚，析出白色固体，过虑除去固体物质，用旋转蒸发仪将虑液浓缩至10mL，柱层分离，得1.914g六聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯(6)，收率77.5％。

2)六聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯的合成

反应式如下式所示：

在50mL圆底烧瓶中，将1.230g(2.855mmol)六聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯溶解在15mL的无水甲苯中，加入0.679g(5.710mmol)二氯亚砜，2滴DMF。电磁搅拌，在室温和氮气的保护下反应5h。减压蒸馏除去甲苯和过量的亚硫酰氯，得到粘稠液体，加入10mL无水氯仿得溶液A。

在100mL的反应瓶中，将1.500g(1.860mmol)的多西他赛溶解在20mL的氯仿中，加入0.282g(2.790mmol)的三乙胺，冰盐浴冷却，搅拌，慢慢加入含有0.961g(2.230mmol)化合物(7)的氯仿溶液A，在室温和氮气的保护下反应。反应完毕后，减压蒸馏除去反应液中的氯仿，再向反应瓶中加入20mL的乙酸乙酯，搅拌，过滤除去白色固体，再将虑液浓缩至10mL。柱层分离，得1.400g六聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯(8)的白色固体，产率62.5％。

实施例3.四聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯的合成

所述多西他赛衍生物的合成包括以下步骤：

1)四聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯的合成

反应式如下式所示：

实验步骤：

在100mL圆底烧瓶中，加入1.250g(6mmol)干燥后的四聚乙二醇单甲醚(9)、1.044g(9mmol)二甘醇酸酐和200mg 2-乙基己酸锡，再加入30mL甲苯，搅拌，氮气保护下加热回流至反应完成。用旋转蒸发仪除去反应液中的甲苯后，加入20mL乙酸乙酯，搅拌，再加入10mL乙醚，析出白色固体，过虑除去固体物质，用旋转蒸发仪将虑液浓缩至10mL，柱层分离，得1.650g四聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯(10)，收率84.8％。

2)四聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯的合成

反应式如下式所示：

在50mL圆底烧瓶中，将0.973g(3mmol)四聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯溶解在15mL的无水甲苯中，加入0.679g(6mmol)二氯亚砜，2滴DMF。电磁搅拌，在室温和氮气的保护下反应5h。减压蒸馏除去甲苯和过量的亚硫酰氯，得到化合物(11)的粘稠液体，加入10mL无水氯仿得溶液A。

在100mL的反应瓶中，将1.616g(2mmol)的多西他赛溶解在20mL的氯仿中，加入0.304g(3mmol)的三乙胺，冰盐浴冷却，搅拌，慢慢加入上面得到的化合物(11)的氯仿溶液A，在室温和氮气的保护下反应。反应完毕后，减压蒸馏除去反应液中的氯仿，再向反应瓶中加入20mL的乙酸乙酯，搅拌，过滤除去白色固体，再将虑液浓缩至10mL。柱层分离，得1.631g四聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯(12)的白色固体，产率73.2％。

实施例4.三聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯的合成

所述多西他赛衍生物的合成包括以下步骤：

1)三聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯的合成

反应式如下式所示：

实验步骤：

在100mL圆底烧瓶中，加入0.985g(6mmol)干燥后的三聚乙二醇单甲醚(13)、1.044g(9mmol)二甘醇酸酐和200mg 2-乙基己酸锡，再加入30mL甲苯，搅拌，氮气保护下加热回流至反应完成。用旋转蒸发仪除去反应液中的甲苯后，加入20mL乙酸乙酯，搅拌，再加入10mL乙醚，析出白色固体，过虑除去固体物质，用旋转蒸发仪将虑液浓缩至10mL，柱层分离，得1.337g三聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯(14)，收率79.5％。

2)三聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯的合成

反应式如下式所示：

在50mL圆底烧瓶中，将0.840g(3mmol)三聚乙二醇单甲醚二甘醇酸酯(14)溶解在15mL的无水甲苯中，加入0.679g(6mmol)二氯亚砜，2滴DMF。电磁搅拌，在室温和氮气的保护下反应5h。减压蒸馏除去甲苯和过量的亚硫酰氯，得到化合物(15)的粘稠液体，加入10mL无水氯仿得溶液A。

在100mL的反应瓶中，将1.616g(2mmol)的多西他赛溶解在20mL的氯仿中，加入0.304g(3mmol)的三乙胺，冰盐浴冷却，搅拌，慢慢加入上面得到的化合物(15)的氯仿溶液A，在室温和氮气的保护下反应。反应完毕后，减压蒸馏除去反应液中的氯仿，再向反应瓶中加入20mL的乙酸乙酯，搅拌，过滤除去白色固体，再将虑液浓缩至10mL。柱层分离，得1.611g三聚乙二醇单甲醚多西他赛-2’-二甘醇酸酯(16)的白色固体，产率75.3％。

实施例5.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的脂质体冻干粉制剂

称取实施例1至4制备的多西他赛衍生物5g、磷脂70g、胆固醇5.5g，加入圆底烧瓶内，加入适量的氯仿溶解为透明液体，置50℃水浴减压干燥成膜，保温1.5h，加入适量5％蔗糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎、用高压均质机进行匀浆，再用0.22μm滤膜过滤，分装于安培瓶内，进行冷冻干燥，通惰性气体封口，得白色固体状多西他赛衍生物脂质体冻干粉制剂。

实施例6.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的脂质体冻干粉制剂

称取实施例1至4制备的多西他赛衍生物5g、磷脂70g、维生素E5.0g，加入圆底烧瓶内，加入适量的氯仿溶解为透明液体，置50℃水浴减压干燥成膜，保温1.5h，加入适量5％蔗糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎、用高压均质机进行匀浆，再用0.22μm滤膜过滤，分装于安培瓶内，进行冷冻干燥，通惰性气体封口，得白色固体状多西他赛衍生物脂质体冻干粉制剂。

实施例7.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的脂质体冻干粉制剂

称取实施例1至4制备的多西他赛衍生物5g、磷脂70g、维生素E乙酸酯5.0g，加入圆底烧瓶内，加入适量的氯仿溶解为透明液体，置50℃水浴减压干燥成膜，保温1.5h，加入适量5％蔗糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎、用高压均质机进行匀浆，再用0.22μm滤膜过滤，分装于安培瓶内，进行冷冻干燥，通惰性气体封口，得白色固体状多西他赛衍生物脂质体冻干粉制剂。

实施例8.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的脂质体冻干粉制剂

称取实施例1至4制备的多西他赛衍生物5g、磷脂70g、胆固醇8.25g，加入圆底烧瓶内，加入适量的氯仿溶解为透明液体，置50℃水浴减压干燥成膜，保温1.5h，加入适量5％蔗糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎、用高压均质机进行匀浆，再用0.22μm滤膜过滤，分装于安培瓶内，进行冷冻干燥，通惰性气体封口，得白色固体状多西他赛衍生物脂质体冻干粉制剂。

实施例9.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的脂质体冻干粉制剂

称取实施例1至4制备的多西他赛衍生物5g、磷脂70g、胆固醇11g，加入圆底烧瓶内，加入适量的氯仿溶解为透明液体，置50℃水浴减压干燥成膜，保温1.5h，加入适量5％蔗糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎、用高压均质机进行匀浆，再用0.22μm滤膜过滤，分装于安培瓶内，进行冷冻干燥，通惰性气体封口，得白色固体状多西他赛衍生物脂质体冻干粉制剂。

实施例10.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的脂质体冻干粉制剂

称取实施例1至4制备的多西他赛衍生物5g、磷脂70g、胆固醇2.75g，加入圆底烧瓶内，加入适量的氯仿溶解为透明液体，置50℃水浴减压干燥成膜，保温1.5h，加入适量5％蔗糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎、用高压均质机进行匀浆，再用0.22μm滤膜过滤，分装于安培瓶内，进行冷冻干燥，通惰性气体封口，得白色固体状多西他赛衍生物脂质体冻干粉制剂。

实施例11.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的脂质体冻干粉制剂

称取实施例1至4制备的多西他赛衍生物2.5g、磷脂70g、胆固醇2.75g，加入圆底烧瓶内，加入适量的氯仿溶解为透明液体，置50℃水浴减压干燥成膜，保温1.5h，加入适量5％蔗糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎、用高压均质机进行匀浆，再用0.22μm滤膜过滤，分装于安培瓶内，进行冷冻干燥，通惰性气体封口，得白色固体状多西他赛衍生物脂质体冻干粉制剂。

实施例12.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的乳剂

本实施例及以下乳剂中，每一组分在配方中的含量按重量百分比计算。

将多西他赛衍生物(I)溶解于豆油、D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)和聚乙二醇PEG(200)的混合物中，再加入去离子水(DI water)，然后搅拌、超声、均质乳化，所生产的乳液的组成如下：

制成的乳液药品通过一个孔径0.22微米的过滤器过滤，再封装于无菌的玻璃瓶。

实施例13.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的乳剂

将多西他赛衍生物溶解于D-α-生育酚乙酸酯、D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)和聚乙二醇PEG(200)的混合物中，再加入生理盐水，然后搅拌、超声、均质乳化，所生产的乳液的组成如下：

实施例14.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的乳剂

将多西他赛衍生物溶解于维生素E、D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)的混合物中，再加入5％葡萄糖注射液，然后搅拌、超声、均质乳化，所生产的乳液的组成如下：

实施例15.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物(I)的胶束剂

本实施例中，每一组分在配方中的含量按重量百分比计算。

将适量的多西他赛衍生物(I)溶解于吐温80(Tween 80)中得到透明的液体，再封装于无菌的玻璃瓶。(使用前)加入适量生理盐水或5％葡萄糖注射液，摇动至形成透明液体。所生产的胶束液的组成如下：

胶束制剂一：

多西他赛衍生物(I) 1％

吐温80 2％

去离子水至100％

胶束制剂二：

多西他赛衍生物(I) 1％

吐温80 2％

5％葡萄糖注射液至100％

目前多西他赛临床剂型仅为胶束注射液，为黄色或棕黄色粘稠液体，规格有20mg，80mg。例如：每瓶20mg的多西他赛注射液是将无水多西他赛20mg溶于0.5ml的Tween 80(约523mg，吐温80的密度：1.046g/ml)中制成，吐温80与多西他赛的重量比约为26.15/1，即1mg多西他赛需要26.15mg吐温80制成胶束剂。溶剂为13％w/w的注射用乙醇水溶液。使用前加入溶剂振摇混合，稀释后的注射液应在4h内使用。由于使用了大量的表面活性剂，该制剂存在的主要问题为：(1)溶剂的毒性和致敏性。(2)稀释后的不稳定性(参考文献：Thiesen J，I.Physico-chemical stability of docetaxel premix solution and docetaxelinfusion solutions in PVC bags and polyolefine containers[J].Pharm World Sci，1999，21(3)：137.)。

本实施例中的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物胶束剂中表面活性剂的用量极低，吐温80与多西他赛衍生物的重量比约为2/1，这不仅提高了胶束剂的载药量，由于使用的表面活性剂量极少，并且寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物是多西他赛的前药，因此毒副作用降低，增加病人耐受性，提高治疗效果。

实施例16.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物脂质体剂(聚乙二醇的聚合度n＝8)粒径的测定

寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物脂质体冻干粉溶于水后形成纳米颗粒，水相中纳米颗粒的粒径采用马尔文激光粒度仪(型号M2000)测量得到，测量方法为：称取适量脂质体冻干粉样品，分别加入到适量的蒸馏水中，配制成浓度为0.665g/mL的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物脂质体液体进行检测，样品分别平行测量三次取其平均值。结果如图1所示，表明寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物脂质体浓度为0.665g/mL时，其平均粒径为86纳米。

实施例17.寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物制剂对动物移植性肿瘤S180的抑制作用

动物移植性肿瘤S180的抑制作用的药效学试验

1)实验方法

取ICR小鼠，按移植性肿瘤研究法，接种实体型瘤(在无菌操作下取瘤块，称重，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放入无菌容器内，加生理盐水稀释成1∶3的细胞悬液，容器置冰块上，用空针抽吸，每次抽吸前将细胞混匀，每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2ml)，接种后24小时称鼠重，并随机分为10组。各给药组于接种24小时后(d₁)第一次给药，尾静脉注射给药，1次/2天，共给药4次。给药体积均为0.2ml/20g。于接种后第9天(d₈)处死荷瘤小鼠称重，并分离瘤块称重，所得数据进行统计学处理(t检验)，结果见表1。

表1.多西他赛衍生物(I)脂质体和胶束剂与市销售多西他赛注射剂药对小鼠移植瘤S180抑制作用

*P＜0.05 **P＜0.01与模型对照组比较

多西他赛衍生物(I)16mg与多西他赛10mg为等摩尔。

2)实验结论

结果表明，与模型对照组相比，多西他赛衍生物(I)脂质体剂32mg/kg、对S180肿瘤生长具有极显著的抑制作用(P＜0.01)；多西他赛衍生物(I)脂质体剂32mg/kg、16mg/kg和多西他赛衍生物(I)胶束剂32mg/kg对S180肿瘤生长抑制作用比多西他赛注射剂10mg/kg强，多西他赛衍生物(I)胶束剂16mg/kg对S180肿瘤生长抑制作用与多西他赛注射剂10mg/kg相当。给药后，多西他赛注射剂10mg/kg对实验鼠体重有极显著影响(P＜0.01)，多西他赛衍生物(I)胶束剂32mg/kg、多西他赛衍生物(I)脂质体剂32mg/kg及16mg/kg对实验鼠体重有较显著影响(P＜0.05)。

Claims

1.一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂，其特征在于，包含具有式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物，所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物溶于亲脂性介质中，通过表面活性剂的作用以纳米颗粒分散在水相中；或直接通过表面活性剂的作用以纳米颗粒分散在水相中；

其中，R为C1～C5的烷基；聚合度n＝1-10。

2.根据权利要求1所述的多西他赛衍生物的注射剂，其特征在于，所述的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物中聚合度为n＝5-8。

3.根据权利要求1或2所述的多西他赛衍生物的注射剂，其特征在于，所述的注射剂为脂质体剂、乳剂或胶束剂。

4.根据权利要求3所述的多西他赛衍生物的注射剂，其特征在于，所述的脂质体剂包含：

1)具有式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物；

2)磷脂；

3)胆固醇或维生素E及其衍生物；

4)水相。

5.根据权利要求3所述的多西他赛衍生物的注射剂，其特征在于，所述的乳剂包含：

1)油相，包括：

a)式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物；

b)生物相容的亲脂性介质；

2)表面活性剂和助溶剂；

3)水相。

6.根据权利要求3所述的多西他赛衍生物的注射剂，其特征在于，所述的胶束剂包含：

1)式I结构的寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物；

2)表面活性剂；

3)助溶剂；

4)水相。