CN109369799A - 一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明实施例公开了一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,所述制备方法包括制取自体纤维组织悬浮液、进行消化反应、盐析、蒸发浓缩和冷冻干燥。通过采用本申请方法制备的可溶性胶原蛋白冻干片能够有效解决现有的胶原蛋白保质期短,营养流失严重的问题,且本申请的制备方法简单,适于企业大规模生产,给人们提供了极大方便。
Description
技术领域
本发明实施例涉及医学美容技术领域,具体涉及一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法。
背景技术
胶原蛋白是生物高分子,动物结缔组织中的主要成分,也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白,占蛋白质总量的25%-30%,某些生物体甚至高达80%以上。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性,因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。比如中国传统的胶原保健品"阿胶",主要是以驴皮为原料,具有较高的滋补保健作用,有中药三宝之一的美誉。但是胶原蛋白保质期短,营养流失严重,给人们食用带来不良影响。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,用以解决现有的胶原蛋白保质期短,营养流失严重的问题。
为实现上述目的,本发明实施例的技术方案为:一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡,期间不停搅拌直至成糊状;将糊状的自体纤维组织粉碎并放入10倍体积的超纯水中,获得自体纤维组织悬浮液,向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物,混合物的浓度为0.4mg/mL,备用;
步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应,消化反应结束后静置分层,将上层悬浮液放入离心机中离心,收集上清液,备用;
步骤三、将步骤二收集的上清液与NaCl溶液混合,之后进行离心,收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液;
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩,之后冷冻干燥即制得所述可溶性胶原蛋白冻干片。
在一些实施方案之中,所述的步骤四包括将粗制自体胶原蛋白原液放入温度为60—80℃的浓缩机中浓缩。
在一些实施方案之中,粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩后置于冷冻仓内,将冷冻仓内的温度以0.2-0.6℃/min的速度降至-30℃后,接着将冷冻仓内的温度以0.2-0.6℃/min的速度降至-45℃,当冷肼温度达到-45℃后,保持所述冷肼温度3-6h,之后进行至少四次升温干燥。
在一些较为具体的实施方案之中,所述的四次升温干燥包括首先控制干燥仓内真空度为50-200pa,同时以0.6-1.5℃/h的速度升温至-25℃;之后控制干燥仓内真空度为40-150pa,以3-6℃/h的速度升温至-10℃;然后控制干燥仓内真空度为30-120pa,以3-6℃/h的速度升温至10℃;最后控制干燥仓内真空度为30-100pa,以4-8℃/h的速度升温至35℃。
在一些实施方案之中,还可进行第五次升温干燥,所述第五次升温干燥包括控制干燥仓内真空度为30-40pa,控制温升速度在5.5-6.5℃/h继续升温至45℃。
在一些实施方案之中,向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得的混合物的浓度为0.4mg/mL。
在一些实施方案之中,步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶,之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液。
在一些实施方案之中,所述的步骤二包括将上层悬浮液放入转速为3500—5000r/min的离心机中离心,收集上清液,重复上述离心过程3—5次,收集上清液,备用。
在一些实施方案之中,所述的步骤三包括将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合,在转速为3000-1000r/min的离心机中离心5-30min,弃去上清液,沉淀用乙酸溶解,之后重复离心3—5次,收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液。
在一些较为具体的实施方案之中,沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解。
与现有技术相比,本发明实施例具有如下优点:本发明实施例提供了一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,包括制取自体胶原蛋白原液和冷冻干燥两部分,通过采用本申请方法制备的可溶性胶原蛋白冻干片能够有效解决现有的胶原蛋白保质期短,营养流失严重的问题,且本申请的制备方法简单,适于企业大规模生产。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式,熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语,故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式,然所述描述乃以说明书的一般原则为目的,并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
实施例1
本实施例提供一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡,期间不停搅拌直至成糊状;将糊状的自体纤维组织粉碎并放入10倍体积的超纯水中,获得自体纤维组织悬浮液,向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物,混合物的浓度为0.4mg/mL,备用;
步骤二、制取胃蛋白酶溶液,胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶,之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液,向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应,消化反应结束后静置分层,将上层悬浮液放入转速为3500r/min的离心机中离心,收集上清液,重复上述离心过程3次,收集上清液,备用;
步骤三、将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合,在转速为3000r/min的离心机中离心5min,弃去上清液,沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解,之后重复离心3次,收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液。
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液放入温度为60℃的浓缩机中蒸发浓缩,之后冷冻干燥即制得所述可溶性胶原蛋白冻干片。
进一步的,粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩后置于冷冻仓内,将冷冻仓内的温度以0.2℃/min的速度降至-30℃后,接着将冷冻仓内的温度以0.2℃/min的速度降至-45℃,当冷肼温度达到-45℃后,保持所述冷肼温度3-6h,之后进行至少四次升温干燥,所述的四次升温干燥包括首先控制干燥仓内真空度为50pa,同时以0.6℃/h的速度升温至-25℃;之后控制干燥仓内真空度为40pa,以3℃/h的速度升温至-10℃;然后控制干燥仓内真空度为30pa,以3℃/h的速度升温至10℃;最后控制干燥仓内真空度为30pa,以4℃/h的速度升温至35℃。此外,为提升效果,还可进行第五次升温干燥,所述第五次升温干燥包括控制干燥仓内真空度为30pa,控制温升速度在5.5℃/h继续升温至45℃。
实施例2
本实施例提供一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡,期间不停搅拌直至成糊状;将糊状的自体纤维组织粉碎并放入10倍体积的超纯水中,获得自体纤维组织悬浮液,向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物,混合物的浓度为0.4mg/mL,备用;
步骤二、制取胃蛋白酶溶液,胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶,之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液,向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应,消化反应结束后静置分层,将上层悬浮液放入转速为5000r/min的离心机中离心,收集上清液,重复上述离心过程5次,收集上清液,备用;
步骤三、将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合,在转速为1000r/min的离心机中离心30min,弃去上清液,沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解,之后重复离心5次,收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液。
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液放入温度为80℃的浓缩机中蒸发浓缩,之后冷冻干燥即制得所述可溶性胶原蛋白冻干片。
进一步的,粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩后置于冷冻仓内,将冷冻仓内的温度以0.6℃/min的速度降至-30℃后,接着将冷冻仓内的温度以0.6℃/min的速度降至-45℃,当冷肼温度达到-45℃后,保持所述冷肼温度6h,之后进行至少四次升温干燥,所述的四次升温干燥包括首先控制干燥仓内真空度为200pa,同时以1.5℃/h的速度升温至-25℃;之后控制干燥仓内真空度为150pa,以6℃/h的速度升温至-10℃;然后控制干燥仓内真空度为120pa,以6℃/h的速度升温至10℃;最后控制干燥仓内真空度为100pa,以8℃/h的速度升温至35℃。此外,为提升效果,还可进行第五次升温干燥,所述第五次升温干燥包括控制干燥仓内真空度为40pa,控制温升速度在6.5℃/h继续升温至45℃。
实施例3
本实施例提供一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡,期间不停搅拌直至成糊状;将糊状的自体纤维组织粉碎并放入10倍体积的超纯水中,获得自体纤维组织悬浮液,向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物,混合物的浓度为0.4mg/mL,备用;
步骤二、制取胃蛋白酶溶液,胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶,之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液,向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应,消化反应结束后静置分层,将上层悬浮液放入转速为4250r/min的离心机中离心,收集上清液,重复上述离心过程4次,收集上清液,备用;
步骤三、将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合,在转速为2000r/min的离心机中离心17.5min,弃去上清液,沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解,之后重复离心4次,收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液。
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液放入温度为70℃的浓缩机中蒸发浓缩,之后冷冻干燥即制得所述可溶性胶原蛋白冻干片。
进一步的,粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩后置于冷冻仓内,将冷冻仓内的温度以0.4℃/min的速度降至-30℃后,接着将冷冻仓内的温度以0.4℃/min的速度降至-45℃,当冷肼温度达到-45℃后,保持所述冷肼温度4.5h,之后进行至少四次升温干燥,所述的四次升温干燥包括首先控制干燥仓内真空度为125pa,同时以1.15℃/h的速度升温至-25℃;之后控制干燥仓内真空度为95pa,以4.5℃/h的速度升温至-10℃;然后控制干燥仓内真空度为75pa,以4.5℃/h的速度升温至10℃;最后控制干燥仓内真空度为65pa,以6℃/h的速度升温至35℃。此外,为提升效果,还可进行第五次升温干燥,所述第五次升温干燥包括控制干燥仓内真空度为35pa,控制温升速度在6℃/h继续升温至45℃。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡,期间不停搅拌直至成糊状;将糊状的自体纤维组织粉碎并放入10倍体积的超纯水中,获得自体纤维组织悬浮液,向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物,混合物的浓度为0.4mg/mL,备用;
步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应,消化反应结束后静置分层,将上层悬浮液放入离心机中离心,收集上清液,备用;
步骤三、将步骤二收集的上清液与NaCl溶液混合,之后进行离心,收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液;
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩,之后冷冻干燥即制得所述可溶性胶原蛋白冻干片。
2.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:所述的步骤四包括将粗制自体胶原蛋白原液放入温度为60—80℃的浓缩机中浓缩。
3.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩后置于冷冻仓内,将冷冻仓内的温度以0.2-0.6℃/min的速度降至-30℃后,接着将冷冻仓内的温度以0.2-0.6℃/min的速度降至-45℃,当冷肼温度达到-45℃后,保持所述冷肼温度3-6h,之后进行至少四次升温干燥。
4.根据权利要求3所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:所述的四次升温干燥包括首先控制干燥仓内真空度为50-200pa,同时以0.6-1.5℃/h的速度升温至-25℃;之后控制干燥仓内真空度为40-150pa,以3-6℃/h的速度升温至-10℃;然后控制干燥仓内真空度为30-120pa,以3-6℃/h的速度升温至10℃;最后控制干燥仓内真空度为30-100pa,以4-8℃/h的速度升温至35℃。
5.根据权利要求3所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:还可进行第五次升温干燥,所述第五次升温干燥包括控制干燥仓内真空度为30-40pa,控制温升速度在5.5-6.5℃/h继续升温至45℃。
6.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得的混合物的浓度为0.4mg/mL。
7.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶,之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液。
8.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:所述的步骤二包括将上层悬浮液放入转速为3500—5000r/min的离心机中离心,收集上清液,重复上述离心过程3—5次,收集上清液,备用。
9.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:所述的步骤三包括将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合,在转速为3000-1000r/min的离心机中离心5-30min,弃去上清液,沉淀用乙酸溶解,之后重复离心3—5次,收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液。
10.根据权利要求9所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法,其特征在于:沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解。
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CN107475337A (zh) * | 2017-08-18 | 2017-12-15 | 合肥丰洁生物科技有限公司 | 一种从动物皮脂中提取胶原蛋白的方法 |
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2018
- 2018-10-31 CN CN201811283630.9A patent/CN109369799A/zh not_active Withdrawn
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