CN109247447B - 替代血浆蛋白粉生产教槽料的酵母水解物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及替代血浆蛋白粉生产教槽料的酵母水解物及其制备方法，其中酵母水解物含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，小肽占酵母水解物干物质质量的32％以上，优选35％以上。将酵母菌通过纯培养液体发酵得到的酵母乳，经细胞自溶、定向酶解和调味、浓缩干燥得到酵母水解物，其中定向酶解和调味包括以下工序：控制温度55‑65℃、调节pH至4‑6之间后，依次加入木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、甘露聚糖酶、β‑葡聚糖酶、和中性蛋白酶，进行8‑16小时的酶解。本发明的酵母水解物中小肽含量高，蛋白质、核苷酸、小肽、氨基酸含量平衡，应用于教槽料时能够产生更好的诱食效果，提高仔猪生长性能。
Description
技术领域
本发明涉及酵母水解物生产方法，尤其涉及应用于教槽料的酵母水解物生产方法及产品。
背景技术
目前畜牧养殖行业面临着高端蛋白原料资源的匮乏等诸多问题。鱼粉作为饲料行业最常用的蛋白原料，受制于渔业资源及国际市场，价格波动剧烈。
动物源蛋白原料血浆蛋白粉是收集新鲜猪血，通过消毒灭菌，血液组分分离、浓缩、膜过滤和喷雾干燥等一系列生产工艺获得粉状产品，该产品营养较为全面，蛋白质含量在75%以上，氨基酸的比例较为平衡，同时含有大量的促生长因子、干扰素、激素、溶菌酶等其他免疫物质，具有适口性好、促生长、提高免疫及减少乳仔猪腹泻等特点，被广泛应用于乳猪教槽料中。
然而血浆蛋白粉由于原料来源等问题，导致产品存在生物安全隐患，如可能诱发猪流行性腹泻以及存在同源性病毒感染风险。因此饲料厂对稳定、安全、高品质的新型蛋白原料需求迫切。
酵母菌是具有重要经济价值的单细胞真核微生物，自身是一种优质蛋白原料。酵母水解物是以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）等为菌种，经液体发酵得到的菌体，再经自溶或外源酶催化水解后，浓缩或干燥获得的产品。酵母可溶物未经提取，粗蛋白含量不低于35%（《饲料原料目录》2013）。酵母水解物一般富含核酸（呈味核苷酸）、小肽（诱食肽）、氨基酸、谷胱甘肽等成分。酵母水解物由于其小肽及核酸含量高，可以作为功能性小肽及外源核苷酸营养源，广泛应用于幼龄动物。关于酵母水解物在动物应用上的研究，已成为现代抗病营养的研究热点之一。
《一种乳猪教槽饲料及其生产方法》（CN104642814A），提供一种乳猪教槽饲料及其生产方法，具体是通过添加酵母核酸、功能性蛋白原料、淀粉水解物及均衡油粉等能量原料，提高乳仔猪的采食量、日增重，降低料肉比和腹泻率，显著提高乳猪的生产性能和经济效益，以试验组3为例，酵母核酸添加组仔猪平均日增重提高了15.9%，平均采食量增长8.16%，同时料肉比降低了6.54%，腹泻率降低39%。
《乳猪营养饲料及含有该营养饲料的乳猪混合饲料》（CN102356824A），提供一种乳猪营养饲料及含有该营养饲料的乳猪混合饲料的生产方法，具体是通过在仔猪饲料中添加酵母核酸，提升饲料适口性和诱食性，增加断奶仔猪的采食量，促进肠道发育，提高饲料消化利用率及平均日增重，显著降低断奶仔猪的腹泻率。实施例5采用该饲料饲喂31日龄至60日龄仔猪，仔猪平均日采食量提高了6.15%，平均日增重提高了11.32%，仔猪60日龄十二指肠绒毛高度提高了26.67%，而且未出现腹泻现象。
研究表明，在仔猪日粮中添加酵母水解物能够提高仔猪对断奶应激的抵抗力，增加断奶仔猪采食量及平均日增重，提高饲料利用率。饲料使用酵母水解物，可改善蛋白质原料的营养品质，缓解饲料蛋白质资源紧缺的矛盾。因此，教槽料中采用酵母水解物部分或完全替代血浆蛋白粉等动物蛋白源，不仅能够满足仔猪对蛋白原料营养价值的需求，还能满足仔猪对诱食功能的需求，具有很高的经济价值。
发明内容
目前现有技术中存在的技术问题是，酵母水解物的品质还有待进一步提高，例如小肽含量很难提高，蛋白质、核苷酸、小肽、氨基酸含量有待进一步平衡。
由于小肽具有生物活性，能够促进动物胃肠道的发育和成熟，调节消化、食欲及内分泌，促进蛋白质合成和肌肉生长等作用，如果能够有效提高酵母水解物中的小肽含量，将其用于教槽料，可增加仔猪采食量。
本发明人为解决上述技术问题发现，利用纯培养液体发酵得到的酵母菌体为原料，通过调整发酵工艺，经细胞自溶、定向酶解和调味，浓缩干燥得到的酵母水解物，小肽含量比现有产品有较大提高，蛋白质、小肽、核酸含量高，含有丰富的赖氨酸，氨基酸比例平衡。使其应用于教槽料时能够产生更好的诱食效果，提高仔猪生长性能。
具体来说，本发明提出了如下技术方案：
本发明提供了酵母水解物，含有粗蛋白，氨基酸，小肽，和核酸，小肽占酵母水解物干物质质量的32%以上，优选35%以上。
上述任一酵母水解物优选的是，其中，小肽占酵母水解物干物质质量的32-40%，优选35-40%。
本发明提供了酵母水解物制备方法，将酵母菌通过纯培养液体发酵得到的酵母乳，并通过细胞自溶、定向酶解和调味、浓缩干燥得到酵母水解物，其中，所述的定向酶解和调味包括以下工序：控制温度55-65℃、调节pH至4-6，加入木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶、和中性蛋白酶，酶解，优选酶解8-16小时。
上述方法优选的是，其中，加入的酶占酵母乳干物质的质量比，分别为木瓜蛋白酶1-2‰、碱性蛋白酶1-2‰、甘露聚糖酶1-2‰、β-葡聚糖酶1-2‰、中性蛋白酶1-2‰；优选的是木瓜蛋白酶的活力≥6万U/g，碱性蛋白酶活力≥6万U/g，甘露聚糖酶活力≥6万U/g，β-葡聚糖酶活力≥6万U/g，中性蛋白酶活力≥6万U/g；更优选的是木瓜蛋白酶的活力≥10万U/g，碱性蛋白酶活力≥10万U/g，甘露聚糖酶活力≥10万U/g，β-葡聚糖酶活力≥10万U/g，中性蛋白酶活力≥10万U/g。
上述任一方法优选的是，其中，所述细胞自溶包括以下工序：将酵母乳在温度80-95℃进行热击，然后控制温度40-60℃、添加占酵母乳干物质重量1‰-5‰的柠檬酸，优选自溶13-24小时。
上述任一方法优选的是，其中，所述纯培养液体发酵包括以下工序：将酵母菌种接种到灭菌培养液中，发酵温度28-34℃，发酵pH4.5-6.4，获得酵母乳，优选发酵12-24小时。
上述方法优选的是，其中，所述培养液含有以碳元素计690-2000份碳源、以氮元素计120-300份氮源和以磷元素计8-123份磷源。
上述方法优选的是，其中，所述碳源含有糖质原料和/或淀粉质原料，所述氮源含有氨水和/或铵盐，所述磷源含有磷酸盐；优选所述氮源含有氨水和/或硫酸铵和/或磷酸铵，优选所述磷源含有磷酸二氢铵和/或磷酸。
上述方法优选的是，其中，所述糖质原料选自甜菜糖蜜、甘蔗糖蜜、大豆糖蜜、葡萄糖蜜和淀粉水解糖中的一种或两种以上。
上述任一方法优选的是，其中，所述淀粉质原料选自玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、莲藕淀粉、马铃薯淀粉和红薯淀粉中的一种或两种以上。
上述任一方法优选的是，其中，所述酵母菌种选自酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，优选保藏编号为CCTCC NO. M2016418的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeFX-2。
上述任一方法优选的是，其中，所述浓缩干燥包括以下工序：将酶解反应结束后得到的产物升温至70-90℃保温2-5小时。
本发明还提供了上述任一方法生产的酵母水解物。
优选的是，所述酵母水解物含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其中，粗蛋白占酵母水解物干物质质量的50-70%，优选50-60%，更优选53-60%。
优选的是，上述任一酵母水解物含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其中，赖氨酸占酵母水解物干物质质量的3.5-5.0%。
优选的是，上述任一酵母水解物含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其中，小肽占酵母水解物干物质质量的32-40%，优选35-40%。
优选的是，上述任一酵母水解物含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其中，核酸占酵母水解物干物质质量的7-10%。
本发明还提供教槽料，其中，本发明的酵母水解物在教槽料中的含量为1-4wt%。
本发明还提供饲料，含有本发明的酵母水解物。
本发明还提供酶组合物，含有木瓜蛋白酶1-5份、碱性蛋白酶1-5份、甘露聚糖酶1-5份、β-葡聚糖酶1-5份、中性蛋白酶1-5份；优选的是，木瓜蛋白酶的活力≥6万U/g，碱性蛋白酶活力≥6万U/g，甘露聚糖酶活力≥6万U/g，β-葡聚糖酶活力≥6万U/g，中性蛋白酶活力≥6万U/g；更优选的是木瓜蛋白酶的活力≥10万U/g，碱性蛋白酶活力≥10万U/g，甘露聚糖酶活力≥10万U/g，β-葡聚糖酶活力≥10万U/g，中性蛋白酶活力≥10万U/g。
本发明的有益效果包括：
1. 本发明的酵母水解物中蛋白质、小肽、核酸含量高，含有丰富的赖氨酸，氨基酸比例平衡，具有提高仔猪生长性能的特点，教槽料中添加本发明的酵母水解物，能提高教槽料适口性，有效提高断奶仔猪的采食量和饲料利用率。
2. 本发明的酵母水解物能够替代教槽料中血浆蛋白粉的使用，降低仔猪流行性腹泻以及同源性病毒感染风险，同时节约饲养成本。
3. 本发明的酵母水解物相对于酵母抽提物保留了细胞壁成分，细胞壁成分可作为膳食纤维来发挥作用 ，可以促进肠道蠕动，吸收肠内有害物质，促进肠内有用菌的活化。
4. 本发明的酵母水解物相对于酵母抽提物的成本降低。
5. 本发明的方法简单，以本发明方法生产的酵母水解物为天然产物，绿色安全。
6.本发明的酵母水解物能够缓解饲用蛋白资源短缺，增加养殖效益，应用前景广阔。
菌株保藏信息及获取鉴定信息
本发明所用的菌种酿酒酵母FX-2（Saccharomyces cerevisiae FX-2）于2016年8月1日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO: M2016418，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：（027）-68754052。酿酒酵母FX-2记载在专利文献201611141122.8《酿酒酵母高密度培养方法及其pH调控方法》中。
本发明所使用的酿酒酵母FX-2来自于发酵面团，发酵面团中含有多种野生菌，以发酵面团为样品，制备面团浸出液，经过稀释涂布平板分离法分离得到纯种的菌株，经鉴定确认该菌株属于酿酒酵母。
菌株鉴定方法为: 将菌株的26S rDNA的D1/D2区序列，与GenBank核酸数据库中的序列进行同源性分析，结果表明序列同源性大于99%，从而确定本发明分离得到的菌株属于酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），生物学分类为酿酒酵母FX-2（Saccharomyces cerevisiae FX-2）。
具体实施方式
如上所述，本发明的目的在于：提供一种稳定、安全、高品质、可替代教槽料中血浆蛋白粉的酵母水解物，该酵母水解物具有提高仔猪生长性能的特点，能有效提高断奶仔猪的采食量和饲料利用率，缓解饲用蛋白资源短缺，增加养殖效益。
本发明的技术方案是用纯培养液体发酵得到的酵母菌体为原料，经细胞自溶、定向酶解和调味，浓缩干燥得到酵母水解物。将本发明的酵母水解物加入教槽料替代血浆蛋白粉用于仔猪饲养。
本发明的酵母水解物具体生产步骤为：
（1）酵母发酵培养
培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源选择20-40%浓度的糖质原料水溶液（6000-8000份）和20-40%浓度的淀粉质原料水溶液（6000-8000份），氮源选择氨水（300-500份 14-18wt%）、硫酸铵（150-400份）和磷酸铵（200-500份），磷源为磷酸二氢铵30-70份。将培养液在121℃灭菌6-10min，上罐流加，采用酵母菌进行发酵培养，发酵温度28-34℃，发酵时间12-24小时，发酵pH4.5-6.4，获得纯培养液体发酵酵母乳。
普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉。因此工程酵母菌可以用淀粉质原料为唯一碳源。
本发明中酵母菌优选保藏编号为CCTCC NO. M2016418的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae FX-2 。
（2）酵母自溶
将酵母乳在温度80-95℃进行热击40~50s，优选热击45s，再控制温度40-60℃、添加占酵母乳干物质加入重量的1‰-5‰的柠檬酸，进行13-24h的自溶。通过热击能够防止杂菌污染，并激活酵母菌内源酶，促进细胞内酶对于自溶的作用。而加入柠檬酸调节pH，能够提高内源酶及外源酶酶活，促进细胞自溶。因此经过上述处理，酵母细胞自溶进行得更为彻底。
（3）定向酶解与调味
控制温度55-65℃、调节pH至4-6后，加入木瓜蛋白酶1-2‰、碱性蛋白酶1-2‰、甘露聚糖酶1-2‰、β-葡聚糖酶1-2‰、中性蛋白酶1-2‰等酶制剂，进行8-16小时酶解作用。
其中，木瓜蛋白酶（pH 5-7）可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键，从而提高酵母水解物中多肽与氨基酸含量；碱性蛋白酶（pH 9-11）在碱性条件下能够水解蛋白质肽键、酰胺键、酯键以及转酯和转肽；甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶可以酶解酵母细胞壁多糖，打开细胞壁多糖与蛋白结合键，释放蛋白质、甘露糖及葡聚糖，充分提高酵母水解物的营养及免疫功能；中性蛋白酶属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理，能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物，提高氨基酸水平。
（4）浓缩干燥
酶解反应结束后，升温到70-90℃保温2-5小时灭酶并活浓缩干燥，获得酵母水解物产品。
将得到酵母水解物产品进行成分检测，其中粗蛋白参照GB/T 6432-94饲料中粗蛋白测定方法7.2推荐法；赖氨酸参照GB/T 18246-2000 饲料中氨基酸的测定；氨基酸态氮参照GB/T 23530-2009 酵母抽提物6.5氨基酸态氮；酸溶蛋白、游离氨基酸、小肽参照GB/T22492-2008 大豆肽粉附录B；核酸参照定磷法。
下面通过具体实施例来说明本发明的酵母水解物生产方法，以及本发明的酵母水解物在教槽料中的应用。
实施例中所用到各试剂来源如下：
实施例中未注明的仪器和试剂均是本领域技术人员熟知的，可通过正规渠道购买得到的常规产品，也可以是本领域技术人员可以根据需要自制，如何设计和制造这些设备对本领域技术人员来说是熟知的。
实施例1 酵母水解物制备
（1）酵母发酵培养
碳源选择20wt%的糖质原料甘蔗糖蜜6000g和20wt%淀粉质原料玉米淀粉6000g，氮源选择氨水（300mL 14wt%）、硫酸铵（150g）和磷酸铵（200g），磷源为磷酸二氢铵30g，121℃灭菌10min，上罐流加，采用酿酒酵母FX-2（Saccharomyces cerevisiae FX-2）藏编号为CCTCC NO. M2016418进行发酵培养，发酵温度28℃，发酵时间12小时，发酵pH4.5，获得纯培养液体发酵酵母乳。
（2）酵母自溶
将酵母乳在温度80℃进行热击45s，再控制温度40℃、添加1‰的柠檬酸条件下，进行13h的自溶。
（3）定向酶解与调味
控制温度55℃、调节pH至4后，依次加入木瓜蛋白酶1‰、庞博公司碱性蛋白酶1‰、甘露聚糖酶1‰、β-葡聚糖酶1‰、中性蛋白酶1‰等酶制剂，进行8小时酶解作用。
（4）浓缩干燥
酶解反应结束后，升温到70℃保温2小时，喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
经检测，本实施中制得的酵母水解产物成分如下表：
表2 酵母水解物成分表
实施例2 酵母水解物制备
（1）酵母发酵培养
碳源选择40wt%的糖质原料8000g和40wt%淀粉质原料8000g，氮源选择氨水（500mL18%）、硫酸铵（400g）和磷酸铵（500g），磷源为磷酸二氢铵70g，121℃灭菌10min，上罐流加，采用酿酒酵母FX-2（Saccharomyces cerevisiae FX-2）藏编号为 CCTCC NO. M2016418进行发酵培养，发酵温度34℃，发酵时间24小时，发酵pH6.4，获得纯培养液体发酵酵母乳。
（2）酵母自溶
将酵母乳在温度95℃进行热击45s，再控制温度60℃、添加5‰的柠檬酸条件下，进行24h的自溶。
（3）定向酶解与调味
控制温度65℃、调节pH至6后，依次加入木瓜蛋白酶2‰、庞博公司碱性蛋白酶2‰、甘露聚糖酶2‰、β-葡聚糖酶2‰、中性蛋白酶2‰等酶制剂，进行16小时酶解作用。
（4）浓缩干燥
酶解反应结束后，升温到90℃保温5小时，喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
经检测，本实施中制得的酵母水解产物成分如下表：
表3 酵母水解产物成分
实施例3 酵母水解物制备
（1）酵母发酵培养
碳源选择30wt%的糖质原料6000g和30wt%的淀粉质原料6000g，氮源选择氨水（450mL 17wt%）、硫酸铵（240g）和磷酸铵（390g），磷源为磷酸二氢铵55g，121℃灭菌8min，上罐流加，采用酿酒酵母FX-2（Saccharomyces cerevisiae FX-2）藏编号为 CCTCC NO.M2016418进行发酵培养，发酵温度30℃，发酵时间18小时，发酵pH5.3，获得纯培养液体发酵酵母乳。
（2）酵母自溶
将酵母乳在温度90℃进行热击45s，再控制温度50℃、添加3‰的柠檬酸条件下，进行16h的自溶。
（3）定向酶解与调味
控制温度60℃、调节pH至5之间后，依次加入木瓜蛋白酶1.2‰、庞博公司碱性蛋白酶1.7‰、甘露聚糖酶1‰、β-葡聚糖酶2‰、中性蛋白酶1.5‰等酶制剂，进行10小时酶解作用。
（4）浓缩干燥
酶解反应结束后，升温到80℃保温3小时，喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
经检测，本实施中制得的酵母水解产物成分如下表：
表4 酵母水解产物成分
实施例4酵母水解物制备
（1）酵母发酵培养
碳源选择30wt%的糖质原料6000g和30wt%的淀粉质原料6000g，氮源选择氨水（450mL 17wt%）、硫酸铵（240g）和磷酸铵（390g），磷源为磷酸二氢铵55g，121℃灭菌8min，上罐流加，采用酿酒酵母FX-2（Saccharomyces cerevisiae FX-2）藏编号为 CCTCC NO.M2016418进行发酵培养，发酵温度30℃，发酵时间18小时，发酵pH5.3，获得纯培养液体发酵酵母乳。
（2）酵母自溶
将酵母乳在温度90℃进行热击45s，再控制温度50℃、添加3‰的柠檬酸条件下，进行16h的自溶。
（3）定向酶解与调味
控制温度60℃、调节pH至5之间后，依次加入木瓜蛋白酶2‰、庞博公司碱性蛋白酶2‰、甘露聚糖酶2‰、β-葡聚糖酶2‰、中性蛋白酶2‰等酶制剂，进行16h酶解作用。
（4）浓缩干燥
酶解反应结束后，升温到80℃保温3小时，喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
经检测，本实施中制得的酵母水解产物成分如下表：
表4A 酵母水解产物成分
| 粗蛋白，% | 赖氨酸，% | 氨基酸态氮，% | 游离氨基酸，% | 酸溶蛋白，% | 小肽，% | 核酸，% |
| 56.13 | 3.81 | 3.08 | 16.42 | 53.15 | 36.73 | 9.18 |
对比例1
按照专利文件200810006187.0公开的方法制备酵母抽提物：
参照该专利实施例1进行，将原料换成本发明专用原料
（1）通过实施例3中相同的方法获得纯培养液体发酵酵母乳。
（2）将酵母乳稀释至酵母干物质含量为15％， 温度调节至53℃， 调节pH值5.0，加自溶促进剂乙酸乙酯10‰， 作用8小时。让pH值保持自然状态， 加木瓜酶1‰(基于酵母干重)， 诺维信风味蛋白酶1‰(基于酵母干重)， 作用12小时。然后， 升温至55℃， pH值为6.5， 作用6小时。采用离心机离心分离。灭菌(灭菌条件 ： 121℃保持15分钟)， 然后用氢氧化钾溶液调节pH 值至 7。
（3）将酵母抽提物浓缩至含35%干物质后，喷雾干燥得到粉体产品。
经检测，本对比例中制得的酵母抽提物成分如下表：
表5 酵母抽提物成分
酵母抽提物是将酵母水解物中的酵母细胞壁等物质通过过滤除去，通常重量占细胞干重的18%~30%，主要由D-葡聚糖和D-甘露聚糖两类多糖组成，含有少量的蛋白质、脂肪、矿物质。因此除去酵母细胞壁后，蛋白、小肽的百分含量会比酵母水解物中的含量更高。由表5所示，酵母抽提物中的小肽含量只有31.18%，低于本发明酵母水解物中小肽含量。
对比例2
《不同来源酵母水解物替代血浆蛋白粉对早期断奶仔猪生长性能的影响》（饲料工业，2015年第36卷第18期）中使用的酵母水解物（NA100），其制备方法为：
与实施例3制备酵母水解物的区别在于：
定向酶解与调味：控制温度55℃、调节pH至5之间后，依次加入木瓜蛋白酶1‰、诺维信公司碱性蛋白酶1.2‰、庞博公司碱性蛋白酶1‰等酶制剂，进行10小时酶解作用。
经检测，本对比例中制得的酵母水解物成分如下表：
表6 酵母水解物成分
| 粗蛋白，% | 赖氨酸，% | 氨基酸态氮，% | 游离氨基酸，% | 酸溶蛋白，% | 小肽，% | 核酸，% |
| 47.75 | 2.97 | 2.45 | 13.28 | 42.81 | 29.53 | 7.69 |
由表6所示，通过该方法制备得到的酵母水解物各组分含量均低于本发明，小肽含量不到30%。
对比例3
《酵母水解物替代血浆蛋白粉对断奶仔猪生产性能的影响》（中国饲料，2014年第13期）中使用的酵母水解物（NA155），其制备方法与实施例3的区别在于：定向酶解与调味
控制温度55℃、调节pH至5之间后，依次加入诺维信公司碱性蛋白酶1‰、庞博公司碱性蛋白酶1‰等酶制剂，进行10小时酶解作用。
经检测，本对比例中制得的酵母水解物成分如下表：
表7 酵母水解物成分
| 粗蛋白，% | 赖氨酸，% | 氨基酸态氮，% | 游离氨基酸，% | 酸溶蛋白，% | 小肽，% | 核酸，% |
| 61.40 | 3.51 | 3.34 | 20.18 | 45.69 | 25.51 | 7.69 |
由表7所示，通过该方法制备得到的酵母水解物小肽含量不到30%。
实施例4 动物实验（日均采食量）：
选取遗传背景相同、日龄及体重尽量一致、体况良好的断奶仔猪100头。按体重相近，公母各半的原则分为5个重复，每个重复1栏猪，每栏4头猪（两阉公两母）。具体试验设计见表8。
表8试验分组与设计
| 组别 | 处理 |
| A | 基础日粮+4%SDPP |
| B | 基础日粮+3%SDPP +1%酵母水解物 |
| C | 基础日粮+2%SDPP +2%酵母水解物 |
| D | 基础日粮+4%酵母水解物 |
| E | 基础日粮 |
其中，SDPP是喷雾血浆蛋白粉，酵母水解物为实施例1的酵母水解物。
每栏两个料槽，分别装有不同的饲料，各栏舍内两个料槽每天结料，更换新饲料并互换饲料，继续饲喂14天。最后根据两种料的消耗情况来定性判断两种酵母水解物的诱食效果。
检测指标：日采食量，记录每日每圈试验猪教槽料的供给量及剩余量，两者之差即为每日实际采食量。试验组结果见表9。
表9 不同日粮对仔猪日平均采食量的影响（单位：g/(d.头)）
| 项目 | 第一周 | 第二周 | 全 程 |
| A组 | 47.42±8.45<sup>b</sup> | 75.42±10.13<sup>c</sup> | 61.42±9.89<sup>c</sup> |
| B组 | 56.89±12.11<sup>a,b</sup> | 100.16±11.38<sup>b</sup> | 78.53±11.56<sup>b</sup> |
| C组 | 70.74±10.76<sup>a</sup> | 156±8.97<sup>a</sup> | 113.37±9.85<sup>a</sup> |
| D组 | 76.2±13.78<sup>a</sup> | 169.22±7.64<sup>a</sup> | 122.71±8.31<sup>c</sup> |
| E组 | 40.27±9.68<sup>b</sup> | 67.2±11.27<sup>c</sup> | 54.32±10.32<sup>c</sup> |
注：不同分组之间，上标有相同小写字母表示差异不显著，有不同小写字母表示差异显著（P<0.05），B组两个字母角标意思是与其余四组差异均不显著）
从表9中可以看出：两周后，实验组B、C和D三组的平均日采食量显著高于A和E组（P<0.05）。试验结果说明本发明实施例1提供的酵母水解物在教槽料中用量1-4%部分替代或全部代替喷雾血浆蛋白粉（SDPP）对断奶仔猪诱食作用有提升。
实施例5 动物实验（仔猪生长性能）：
选取21日龄左右体重尽量一致、体况良好的断奶仔猪120头。过渡3天，按体重相近，公母各半的原则分为5个处理组，即SDPP组和酵母水解物组，每个处理6个重复，每重复1栏，每栏4头猪（两阉公两母）。具体试验设计见表10。
表10 试验设计
| 组别 | 处理 |
| A | 基础日粮+4%SDPP |
| B | 基础日粮+3%SDPP +1%酵母水解物 |
| C | 基础日粮+2%SDPP +2%酵母水解物 |
| D | 基础日粮+4%酵母水解物 |
| E | 基础日粮 |
其中，SDPP为喷雾血浆蛋白粉，酵母水解物选自实施例2中的酵母水解物。
检测指标：记录初重、末重、日采食量，计算日均增重和料肉比。试验结果见表11。
表11 不同日粮对仔猪生长性能的影响
| 处理 | 初重（kg） | 末重（kg） | 日均增重（g/d） | 日均采食量（g/d） | 料肉比 |
| A组 | 6.49±0.04 | 9.95±0.10<sup>a</sup> | 247.14±23.45<sup>a</sup> | 369.74±21.11<sup>b</sup> | 1.50±0.04 |
| B组 | 6.47±0.05 | 9.99±0.11<sup>a</sup> | 251.43±21.87<sup>a</sup> | 377.29±27.88<sup>b</sup> | 1.50±0.09 |
| C组 | 6.46±0.07 | 10.01±0.09<sup>a</sup> | 253.57±18.66<sup>a</sup> | 386.38±28.44<sup>a,b</sup> | 1.52±0.07 |
| D组 | 6.46±0.03 | 10.09±0.07<sup>a</sup> | 259.29±17.25<sup>a</sup> | 397.49±13.29<sup>a</sup> | 1.53±0.06 |
| E组 | 6.49±0.05 | 9.39±0.12<sup>b</sup> | 207.14±25.82<sup>b</sup> | 327.77±21.17<sup>c</sup> | 1.58±0.05 |
注：不同分组之间，上标有相同小写字母表示差异不显著，有不同小写字母表示差异显著（P<0.05），两个字母角标意思是与含有其中字母的组差异均不显著）
从表11中可以看出：B、C和D组的日增重和采食量均高于A组，但差异不显著（P＞0.05），B、C和D组的日增重和采食量均高于E组，且差异显著（P＜0.05），而E组仔猪的生产性能最差。试验结果说明本发明实施例2提供的酵母细胞水解物，在教槽料中添加1-4%比例的酵母水解物部分替代或全替代喷雾干燥血浆蛋白粉，不影响仔猪生产性能，证明在教槽料中一定量使用酵母水解物替代血浆蛋白粉是可行的。
Claims (36)
1.一种酵母水解物的制备方法，将酵母菌通过纯培养液体发酵得到的酵母乳，并通过细胞自溶、定向酶解和调味、浓缩干燥得到，其特征在于，所述的定向酶解和调味包括以下工序：控制温度55-65℃、调节pH至4-6，加入木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶和中性蛋白酶，酶解；
其中，加入的酶占酵母乳干物质的质量比，分别为木瓜蛋白酶1-2‰、碱性蛋白酶1-2‰、甘露聚糖酶1-2‰、β-葡聚糖酶1-2‰、中性蛋白酶1-2‰；所述木瓜蛋白酶的活力≥6万U/g，碱性蛋白酶活力≥6万U/g，甘露聚糖酶活力≥6万U/g，β-葡聚糖酶活力≥6万U/g，中性蛋白酶活力≥6万U/g。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的活力≥10万U/g，碱性蛋白酶活力≥10万U/g，甘露聚糖酶活力≥10万U/g，β-葡聚糖酶活力≥10万U/g，中性蛋白酶活力≥10万U/g。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞自溶包括以下工序：将酵母乳在温度80-95℃进行热击，然后控制温度40-60℃、添加占酵母乳干物质重量1‰-5‰的柠檬酸。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细胞自溶包括以下工序：将酵母乳在温度80-95℃进行热击，然后控制温度40-60℃、添加占酵母乳干物质重量1‰-5‰的柠檬酸。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述纯培养液体发酵包括以下工序：将酵母菌种接种到灭菌培养液中，发酵温度28-34℃，发酵pH4.5-6.4，获得酵母乳。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养液含有以碳元素计690-2000份碳源、以氮元素计120-300份氮源和以磷元素计8-123份磷源。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述碳源含有糖质原料和/或淀粉质原料，所述氮源含有氨水和/或铵盐，所述磷源含有磷酸盐。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述氮源含有氨水和/或硫酸铵和/或磷酸铵。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述磷源含有磷酸二氢铵和/或磷酸。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述糖质原料选自甜菜糖蜜、甘蔗糖蜜、大豆糖蜜、葡萄糖蜜和淀粉水解糖中的一种或两种以上。
11.根据权利要求7或10所述的方法，其特征在于，所述淀粉质原料选自玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、莲藕淀粉、马铃薯淀粉和红薯淀粉中的一种或两种以上。
12.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述酵母菌种选自酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae。
13.根据权利要求6-10任一项所述的方法，其特征在于，所述酵母菌种选自酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae。
14.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述酵母菌种选自酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae。
15.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述酵母菌种选自保藏编号为CCTCCNO. M2016418的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae FX-2。
16.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述酵母菌种选自保藏编号为CCTCCNO. M2016418的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae FX-2。
17.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述酵母菌种选自保藏编号为CCTCCNO. M2016418的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae FX-2。
18.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述浓缩干燥包括以下工序：将酶解反应结束后得到的产物升温至70-90℃保温2-5小时。
19.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述浓缩干燥包括以下工序：将酶解反应结束后得到的产物升温至70-90℃保温2-5小时。
20.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述浓缩干燥包括以下工序：将酶解反应结束后得到的产物升温至70-90℃保温2-5小时。
21.根据权利要求1-20任一项所述方法生产的酵母水解物。
22.根据权利要求21所述的酵母水解物，含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其特征在于，粗蛋白占酵母水解物干物质质量的50-70%。
23.根据权利要求22所述的酵母水解物，其特征在于，粗蛋白占酵母水解物干物质质量的50-60%。
24.根据权利要求22所述的酵母水解物，其特征在于，粗蛋白占酵母水解物干物质质量的53-60%。
25.根据权利要求22所述的酵母水解物，含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其特征在于，赖氨酸占酵母水解物干物质质量的3.5-5.0%。
26.根据权利要求23所述的酵母水解物，含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其特征在于，赖氨酸占酵母水解物干物质质量的3.5-5.0%。
27.根据权利要求24所述的酵母水解物，含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其特征在于，赖氨酸占酵母水解物干物质质量的3.5-5.0%。
28.根据权利要求21-27任一项所述的酵母水解物，其特征在于，小肽占酵母水解物干物质质量的32-40%。
29.根据权利要求21-27任一项所述的酵母水解物，其特征在于，小肽占酵母水解物干物质质量的35-40%。
30.根据权利要求21-27任一项所述的酵母水解物，含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其特征在于，核酸占酵母水解物干物质质量的7-10%。
31.根据权利要求28所述的酵母水解物，含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其特征在于，核酸占酵母水解物干物质质量的7-10%。
32.根据权利要求29所述的酵母水解物，含有粗蛋白，氨基酸，小肽和核酸，其特征在于，核酸占酵母水解物干物质质量的7-10%。
33.教槽料，其特征在于，权利要求21-32任一项所述的酵母水解物在教槽料中的含量为1-4wt%。
34.饲料，其特征在于，含有权利要求21-32任一项所述的酵母水解物。
35.酶组合物，其特征在于，含有木瓜蛋白酶1-5份、碱性蛋白酶1-5份、甘露聚糖酶1-5份、β-葡聚糖酶1-5份和中性蛋白酶1-5份；
所述木瓜蛋白酶的活力≥6万U/g，碱性蛋白酶活力≥6万U/g，甘露聚糖酶活力≥6万U/g，β-葡聚糖酶活力≥6万U/g，中性蛋白酶活力≥6万U/g。
36.根据权利要求35所述的酶组合物，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的活力≥10万U/g，碱性蛋白酶活力≥10万U/g，甘露聚糖酶活力≥10万U/g，β-葡聚糖酶活力≥10万U/g，中性蛋白酶活力≥10万U/g。
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