CN109232545B

CN109232545B - 一种含喹喔啉的杨梅素衍生物、其制备方法及用途

Info

Publication number: CN109232545B
Application number: CN201811231344.8A
Authority: CN
Inventors: 薛伟; 李普; 夏榕娇; 陈英; 郭涛; 汤旭; 蒋仕春; 张敏; 李向阳; 贺鸣
Original assignee: Guizhou University
Current assignee: Guizhou University
Priority date: 2018-10-22
Filing date: 2018-10-22
Publication date: 2021-09-24
Anticipated expiration: 2038-10-22
Also published as: CN109232545A

Abstract

本发明公开了一种含喹喔啉的杨梅素衍生物、其制备方法及用途，其结构通式（A）如下所示，其中，R为在喹喔啉结构中的3、5、6、7或8位上含有的一个以上的氢原子、羟基、C1‑6的烷基、C1‑6的烷氧基、卤素原子；n为碳链中碳的个数分别为3、4、5、6。本发明对烟草花叶病毒、柑橘溃疡病菌和水稻百叶枯病菌有较好防治效果。

Description

一种含喹喔啉的杨梅素衍生物、其制备方法及用途

技术领域

本发明涉及化工技术领域，具体来说涉及一种含喹喔啉的杨梅素衍生物。同时还涉及该含喹喔啉的杨梅素衍生物的制备方法，及该含喹喔啉的杨梅素衍生物在抗植物病毒和抑植物病菌方面的应用。

背景技术

杨梅素(3',4',5',3,5,7-六羟基黄酮醇，Myricetin(Myr))，属于多羟基黄酮醇类化合物，异名杨梅树皮素、杨梅黄酮、杨梅酮，是一种重要的天然产物，广泛地存在于多种植物中，如：日常食用的水果，蔬菜和饮料，有丰富的来源途径。据现代药理活性研究显示杨梅素具有抑菌、抗病毒、抗过敏、抗炎、抗氧化、降血糖、保护神经等多种药理活性。

2008年，齐等(齐娜,李瑛琦,刘广,于治国.杨梅黄素的体外抑菌活性[J].华西药学杂志,2008,23,681-682.)测试了杨梅素对大肠杆菌1、大肠杆菌2、金黄色葡萄球菌1、金黄色葡萄球菌2以及杨梅素的最小抑菌浓度(MIC)，测试结果表明：杨梅素对以上四种菌具有良好的抑制作用，它的抑制效果也比相同实验条件下黄芩苷的抑菌能力强，并且随着菌液浓度增加，MIC也随之增高。进一步说明了杨梅素具有较强的体外抑菌活性。

2010年，李等(李桥.杨梅叶抑菌活性研究[D].浙江农林大学2010.)采用生长速率法测定了杨梅叶甲醇提取物四个有机萃取相对番茄灰霉病菌，番茄早疫病菌，水稻纹枯病菌，小麦赤霉病菌，黄瓜炭疽病菌，玉米大斑病菌6种植物病原真菌菌丝生长的抑菌作用。结果表明，在供试浓度下，乙酸乙酯相和正丁醇相抑菌活性较好。用乙酸乙酯相和正丁醇相对玉米大斑病菌，番茄灰霉病菌，水稻纹枯病菌，小麦赤霉病菌4种真菌的毒力进行了测定。乙酸乙酯相对4种病原菌的EC₅₀分别是3.32、4.33、2.21、5.42g·L^-1，正丁醇相EC₅₀依次是1.92、0.88、8.86、9.22g·L^-1。

2014年，Rashed等(Rashed,K.；

A.；

J.；etal..Ind.Crop.Prod.2014,59,210-215.)采用微量稀释法比较包括杨梅素在内的8种多酚类化合物对8种细菌和8种真菌的体外抑菌活性测试。以蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、黄微球菌(M.flavus)和大肠杆菌(E.coli)三种细菌为例，杨梅素的MIC分别为2.50±0.30,5.00±0.60,15.00±3.00μg/mL，MFC分别为5.00±0.60,10.00±0.00,20.00±5.00μg/mL。另外以烟曲霉菌(A.fumigatus)、赭绿青霉菌(P.ochro-chloron)和绿色木霉菌(T.viride)三种真菌为例，其MIC分别为2.50±0.03,10.00±6.00,10.00±3.00μg/mL,MFC分别为5.00±0.60,25.00±5.00,15.00±5.00μg/mL。研究结果表明，杨梅素具有较好的抑制细菌和抑制真菌的生物活性，主要得益于杨梅素的C-4羰基和C-3,5,7羟基。

杨梅素是一种具有潜力的抗病毒剂，2012年，Yu等(Yu,M.S.；Lee,J.；Lee,J.M.；Bioorg.med.chem.lett.,2012,22(12):4049-4054.)通过进行荧光共振能量转移(FRET)的双链DNA解旋测定法或使用比色为基础水解试验法，研究了杨梅素对体外SARS病毒的抑制作用，研究发现：杨梅素潜在的抑制了SARS病毒解旋酶蛋白，影响了ATP酶的活性，但是没有解旋活性，且杨梅素对于正常的乳房上皮MCF10A细胞没有表现出细胞毒性。进而说明了杨梅素对体外SARS病毒有很好的抑制作用。2013年，Su等(Su,X.W.；D’Souza,D.H.Food.Environ.Virol.2013,5,97-102.)对杨梅素、L-表儿茶素、桔皮素和柚皮素四种化学物质进行体外抗FCV-F9,MNV病毒作用测试，测试结果表明：杨梅素的活性高于桔皮素和柚皮素，而且对抗FCV-F9病毒的效果比抗MNV病毒的效果更显著。

由上可知，杨梅素在医药研究方面具有较好的抑菌活性与抗病毒活性，主要是对杨梅素本身的生物活性进行研究，但目前对杨梅素修饰的研究较少。如：([1]钟新敏.含氮类杨梅素衍生物合成及生物活性研究[D].贵州大学2017.[2]肖维,阮祥辉,李琴,张菊平,钟新敏,谢艳,王晓斌,黄民国,薛伟等.酰胺类杨梅素衍生物的合成及抑菌活性[J].高等学校化学学报2017,38,35-40.[3]阮祥辉.含唑类或查尔酮杨梅素衍生物的合成及生物活性研究[D].贵州大学2018)表明杨梅素衍生物同样具有抑菌和抗病毒的生物活性。但还未有将喹喔啉活性基团引入杨梅素中合成含喹喔啉的杨梅素衍生物并进行农用活性测试的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种对烟草花叶病毒、柑橘溃疡病菌和水稻百叶枯病菌有较好防治效果的含喹喔啉的杨梅素衍生物。

本发明的另一目的在于提供该含喹喔啉的杨梅素衍生物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供该含喹喔啉的杨梅素衍生物在抗植物病毒和抑植物病菌方面的应用。

本发明的一种含喹喔啉的杨梅素衍生物，其结构通式如下所示：

其中，R为在喹喔啉结构中的3、5、6、7或8位上含有的一个以上的氢原子、羟基、C1-6的烷基、C1-6的烷氧基、卤素原子；n为碳链中碳的个数分别为3、4、5、6。

本发明的一种含喹喔啉的杨梅素衍生物的制备方法，包括步骤如下：

(1)以杨梅苷、碘甲烷为原料，以碳酸钾为催化剂，以N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂，通过甲基化保护然后酸性脱苷制备3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素(中间体1)：

(2)以3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素(中间体1)和不同链长的二溴烷烃为原料，以碳酸钾为催化剂、用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)作溶剂，制备3-溴-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(中间体2)：

(3)以3-溴-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(中间体2)和2-羟基取代喹喔啉(中间体3)为原料，以碳酸钾为催化剂，以N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂，制备含取代喹喔啉的杨梅素衍生物A：

本发明的含喹喔啉的杨梅素衍生物在抑制烟草花叶病毒方面的应用。

本发明的含喹喔啉的杨梅素衍生物在抑制柑橘溃疡病菌和水稻白叶枯病菌的应用。

本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本发明以杨梅苷、碘甲烷等为原料生成3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素，3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素再与碳个数分别为3、4、5、6的二溴烷烃反应，生成的产物与取代喹喔啉作用得到含喹喔啉的杨梅素衍生物。本发明将具有优良活性的喹喔啉基团引入杨梅素的结构中，即杨梅素的3-位羟基上连接有不同碳链长的喹喔啉结构，合成了一系列含喹喔啉的杨梅素类化合物，通过对所合成含喹喔啉杨梅素衍生物的抗植物病毒和抑植物病菌活性测试，发现本发明的化合物有较好的抗植物病毒(烟草花叶病毒)活性和优良的抑植物病菌(柑橘溃疡病菌和水稻百叶枯病菌)活性，可用于制备抗植物病毒农药和制备农用杀菌剂。

具体实施方式

实施例1

5,7-二甲氧基-3-(3-(喹喔啉-2-基氧基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₁)的制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

在250mL圆底烧瓶中依次加入4.64g杨梅苷(10mmol)、22.09g K₂CO₃(16mmol)和120mL DMF，常温下搅拌0.5～1h后，缓慢滴加7.50mL碘甲烷(120mmol)，室温搅拌48h，TLC跟踪反应(甲醇:乙酸乙酯＝1:4,V/V)。停止反应后，过滤沉淀，滤渣用二氯甲烷洗涤滤渣，合并滤液，用100mL水稀释，或用二氯甲烷萃取三次，合并有机层，减压浓缩，然后将浓缩物溶于30mL无水乙醇中，升温至回流，待溶液澄清后，回流下加入16mL浓盐酸，随后有黄色固体析出，继续反应2h，冷却，过滤，得到粗产物3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素(中间体1)，产率：58％。

(2)3(3-溴丙氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

在100mL的单口圆底烧瓶中依次加入1.17g(3mmol)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素(中间体1)、1.66g K₂CO₃(12mmol)和30mL DMF，常温搅拌0.5-1h后，加入2.42g 1,3-二溴丙烷(12mmol)，在此温度下继续反应12h，TLC监测反应(乙酸乙酯)。反应停止后，反应液用50mL的水分散，乙酸乙酯萃取(3×25mL)，得到的乙酸乙酯层依次用1mol/L的HCl，饱和NaHCO₃，饱和NaCl水溶液分别洗涤2次后，合并乙酸乙酯层，无水NaSO₄干燥、减压除去溶剂，减压柱层析分离提纯(石油醚：乙酸乙酯＝2:1，V/V)得到中间体2，白色固体，产率：83％。

(3)5,7-二甲氧基-3-(3-(喹喔啉-2-基氧基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

在100mL的单口圆底烧瓶中加入0.253g 2-羟基取代喹喔啉(1.73mmol)、0.651gK₂CO₃(4.71mmol)和30mL DMF，常温搅拌0.5-1h，后缓慢加入0.8g 3-溴-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(1.57mmol)的DMF(10mL)溶液，随后升温至100℃，在此温度下搅拌6-8h。TLC跟踪反应，当反应结束，停止反应，冷却至室温，将混合物倒入200mL冰水中，用二氯甲烷萃取(3×40mL)，合并有机层，用饱和食盐水洗涤(3×40mL)、无水硫酸钠干燥、减压除去溶剂，得粗产物，经柱层析(乙酸乙酯：甲醇＝15:1～10:1,V/V)提纯得到目标化合物。产率：45％。

实施例2

3-(3-(3-羟基喹喔啉-2-基)氧基)丙氧基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₂)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例1第(1)步。

如实施例1第(2)步。

(3)3-(3-(3-羟基喹喔啉-2-基)氧基)丙氧基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例1第(3)步，区别在于以2,3-二羟基喹喔啉为原料。产率：52％。

实施例3

5,7-二甲氧基-3-(3-((3-甲基喹喔啉-2-基)氧基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₃)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例1第(1)步。

如实施例1第(2)步。

(3)5,7-二甲氧基-3-(3-((3-甲基喹喔啉-2-基)氧基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例1第(3)步，区别在于以2-羟基-3-甲基喹喔啉为原料。产率：63％。

实施例4

3-(3-(6-氯喹喔啉-2-基)氧基)丙氧基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₄)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例1第(1)步。

如实施例1第(2)步。

(3)3-(3-(6-氯喹喔啉-2-基)氧基)丙氧基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例1第(3)步，区别在于以2-羟基-6-氯喹喔啉为原料。产率：48％。

实施例5

5,7-二甲氧基-3-(4-(喹喔啉-2-氧基)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₅)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例1第(1)步。

(2)3(4-溴丁氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例1第(2)步，区别在于以1,4-二溴丁烷为原料。

(3)5,7-二甲氧基-3-(4-(喹喔啉-2-氧基)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例1第(3)步，区别在于以3(4-溴丁氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮为原料。产率：47％

实施例6

3-(4-(3-羟基喹喔啉-2-基)氧基)丁氧基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₆)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例5第(1)步。

如实施例5第(2)步。

(3)3-(4-(3-羟基喹喔啉-2-基)氧基)丁氧基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例5第(3)步，区别在于以2,3-二羟基喹喔啉为原料。产率：54％。

实施例7

5,7-二甲氧基-3-(4-((3-甲基喹喔啉-2-基)氧基)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₇)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例5第(1)步。

如实施例5第(2)步。

(3)5,7-二甲氧基-3-(4-((3-甲基喹喔啉-2-基)氧基)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例5第(3)步，区别在于以2-羟基-3-甲基喹喔啉为原料。产率：49％。

实施例8

3-(4-(6-氯喹喔啉-2-基)氧基)丁氧基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₈)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例5第(1)步。

如实施例5第(2)步。

(3)3-(4-(6-氯喹喔啉-2-基)氧基)丁氧基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例5第(3)步，区别在于以2-羟基-6-氯喹喔啉为原料。产率：57％。

实施例9

5,7-二甲氧基-3-((5-(喹喔啉-2-氧基)戊基)氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₉)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例1第(1)步

(2)3((5-溴戊基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮

如实施例1第(2)步，区别在于以1,5-二溴戊烷为原料。

(3)5,7-二甲氧基-3-((5-(喹喔啉-2-氧基)戊基)氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例1第(3)步，区别在于以3((5-溴戊基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮为原料。产率：41％。

实施例10

3((5-((3-羟基喹喔啉-2-基)氧基)戊基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₁₀)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例9第(1)步

(2)3((5-溴戊基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例9第(2)步。

(3)3((5-((3-羟基喹喔啉-2-基)氧基)戊基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例9第(3)步，区别在于以2,3-二羟基喹喔啉为原料。产率：56％。

实施例11

5,7-二甲氧基-3-((5-((3-甲基喹喔啉-2-基)氧基)戊基)氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₁₁)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例9第(1)步

如实施例9第(2)步。

(3)5,7-二甲氧基-3-((5-((3-甲基喹喔啉-2-基)氧基)戊基)氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例9第(3)步，区别在于以2-羟基-3-甲基喹喔啉为原料。产率：51％。

实施例12

3((5-(6-氯喹喔啉-2-基)氧基)戊基氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₁₂)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例9第(1)步

如实施例9第(2)步。

(3)3((5-(6-氯喹喔啉-2-基)氧基)戊基氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例9第(3)步，区别在于以2-羟基-6-氯喹喔啉为原料。产率：60％。

实施例13

5,7-二甲氧基-3-((6-(喹喔啉-2-氧基)己基)氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₁₃)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例1第(1)步

(2)3((6-溴己基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例1第(2)步，区别在于以1,6-二溴己烷为原料。

(3)5,7-二甲氧基-3-((6-(喹喔啉-2-氧基)己基)氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例1第(3)步，区别在于以3((6-溴己基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮为原料。产率：44％。

实施例14

3((6-((3-羟基喹喔啉-2-基)氧基)己基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₁₄)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例13第(1)步

(2)3-((6-溴己基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例13第(2)步。

(3)3-((6-((3-羟基喹喔啉-2-基)氧基)己基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例13第(3)步，区别在于以2,3-二羟基喹喔啉为原料。产率：48％。

实施例15

5,7-二甲氧基-3-((6-((3-甲基喹喔啉-2-基)氧基)己基)氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₁₅)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例13第(1)步

如实施例13第(2)步。

(3)5,7-二甲氧基-3-((6-((3-甲基喹喔啉-2-基)氧基)己基)氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例13第(3)步，区别在于以2-羟基-3-甲基喹喔啉为原料。产率：53％。

实施例16

3((6-((6-氯喹喔啉-2-基)氧基)己基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(目标化合物A₁₆)制备方法，包括以下步骤：

(1)3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素的制备

如实施例13第(1)步

如实施例13第(2)步。

(3)3((6-((6-氯喹喔啉-2-基)氧基)己基)氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制备

如实施例13第(3)步，区别在于以2-羟基-6-氯喹喔啉为原料。产率：57％。

所合成含喹喔啉的杨梅素衍生物的理化性质见表1，核磁共振氢谱(¹H NMR)和碳谱(¹³C NMR)数据见表2和表3。

表1目标化合物理化性质

表2目标化合物核磁共振氢谱数据

表3目标化合物核磁共振碳谱数据

试验例1

抗烟草花叶病毒活性测试：

(1)测试方法

A.病毒提纯

采用周雪平方法(Zhou,X.P.；Xu,Z.X.；Xu,J.；Li,D.B.J.SouthChin.Agric.Univ.1995,16,74-79.)，选取接种3周以上，TMV系统侵染寄主Nicotianatabacum.L植株上部叶片，在磷酸缓冲液中匀浆，双层纱布过滤，8000g离心，经2次聚乙二醇处理，再离心，沉淀用磷酸缓冲液悬浮，即得到TMV的精提液体。整个实验在4℃下进行。用紫外分光光度计测定260nm波长的吸光度值，根据公式计算病毒浓度。

病毒浓度(mg/mL)＝(A₂₆₀×稀释倍数)/E^0.1％ _1cm ^260nm

其中E表示消光系数，即波长260nm时，浓度为0.1％(1mg/mL)的悬浮液，在光程为1cm时的光吸收值。TMV的E^0.1％ _1cm ^260nm是5.0。

B.药剂对TMV侵染的活体治疗作用

采用半叶枯斑法，选长势一致的心叶烟,将金刚砂撒在适龄叶片上，用适宜浓度的烟草花叶病毒(TMV)溶液接种在上面，一段时间后，用清水冲洗。待叶片干时在左半叶涂施化合物溶液,右半叶涂施对应剂量的溶剂作对照。随后在光照培养箱中保湿培养,控制温度(23±1)℃,光照10000Lux,3～4d后观察并记录产生枯斑的数目。每药剂处理设3株，每株3～4片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。

C.药剂对TMV侵染的活体保护作用

选长势一致的心叶烟，在左半叶涂施化合物溶液，右半叶涂施对应剂量的溶剂作对照,并在光照培养箱中保湿培养，控制温度(23±1)℃，光照10000Lux,12h后用适宜浓度的烟草花叶病毒(TMV)溶液接种在撒有金刚砂的适龄叶片上，一段时间后，用清水冲洗。随后在光照培养箱中保湿培养,控制温度(23±1)℃，光照10000Lu,3～4d后观察并记录产生枯斑的数目。每药剂处理设3株，每株3～4片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。

D.药剂对TMV侵染的活体保护作用

选长势一致的心叶烟，将烟草花叶病毒(TMV)稀释至6×10^-3mg/mL，将化合物与等体积的病毒汁液混合钝化30min，接种于撒有金刚砂的适龄心叶烟左半叶，相同剂量的溶剂与病毒汁液混合按种于撒有金刚砂的适龄心叶烟右半叶，一段时间后，用清水冲洗。随后在光照培养箱中保湿培养，控制温度(23±1)℃，光照10000Lux,3～4d后观察并记录产生枯斑的数目。每药剂处理设3株，每株3～4片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。

抑制率Y＝(C-A)/C×100％

C为对照组(右半叶)枯斑数，A为化合物处理组(左半叶)枯斑数(单位:个).

(2)抗烟草花叶病毒的生物活性测试结果

表4目标化合物对抗烟草花叶病毒活体抑制活性(500mg/L)

采用半叶枯斑法，以病毒唑原药和商品药剂宁南霉素为对照，供试浓度为500mg/L时，测试目标化合物A₁～A₁₆抗TMV活性。测试结果(表4)表明，所有目标化合物均具有一定的抗TMV活性。治疗活性方面，化合物A₃、A₅、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁、A₁₂、A₁₃、A₁₄、A₁₅、A₁₆抗TMV活性分别为43.8、41.5、51.6、50.3、47.9、40.5、49.0、44.4、51.4、46.2、50.1、48.7％，超过对照药病毒唑(活性为39.9％)，其中化合物A₇、A₈、A₁₃、A₁₅的活性分别为51.6、50.3、51.4、50.1％，接近于对照药宁南霉素(活性为52.7％)；保护活性方面，化合物A₇、A₈、A₁₁、A₁₃、A₁₄抗TMV活性分别为59.8、52.6、53.0、62.3、54.3％，超过对照药病毒唑(活性为51.8％)，其中化合物A₈、A₁₃的活性分别为59.8、62.3％，接近于对照药宁南霉素(活性为65.7％)；钝化活性方面，化合物A₅、A₇、A₁₁、A₁₃、A₁₄抗TMV活性分别为75.1、77.7、73.6、78.3、74.9％，优于对照药病毒唑(活性为73.3％)。

试验例2

抑制植物细菌活性测试：

(1)测试方法

采用浊度法，在50和25μg/mL浓度下，测试目标化合物对柑橘溃疡病菌和水稻白叶枯病菌的体外抑制活性，实验中对照药剂为叶枯唑和噻菌铜。将柑橘溃疡病菌和水稻白叶枯病菌在NA固体培养基上培养,然后置于28℃的恒温细菌培养箱中培养至长出单菌落。选取适量的中央黄色单菌落,将其放到NB液体培养基中,在28℃、180r/min恒温摇床中振荡培养到对数生长期备用。将化合物和对照药剂配置为50和25μg/mL浓度,取1mL加入到装有4mLNB液体培养基的试管中,再量取40μL含有柑橘溃疡病菌和水稻白叶枯病菌的NB液体培养基加入试管中，于28℃、180r/min恒温摇床振荡培养48h。在分光光度计上,测定595nm波长处加药无菌NB液体培养基的OD₅₉₅值，同时测定各个浓度的菌液OD₅₉₅值。

校正OD₅₉₅值＝含菌培养基OD₅₉₅-无菌培养基OD₅₉₅

抑制率(％)＝(校正后对照培养基菌液OD₅₉₅-校正含药培养基OD₅₉₅)/校正后对照培养基菌液OD值×100％.

(2)抑植物病菌的生物活性测试结果

表5目标化合物A₁～A₁₆的抑菌活性(抑制率％)^a

^a平均三次重复；^b将叶枯唑和噻菌铜(20％可湿性粉剂)用作阳性对照。

采用浊度法，以商品药剂噻菌铜和叶枯唑为阳性对照，在供试浓度为50、25μg/mL时，测试了目标化合物对柑橘溃疡病菌和水稻百叶枯病菌的抑制活性(见表5)。结果显示：所有化合物对柑橘溃疡病菌和水稻白叶枯病菌均有一定的抑制活性。对柑橘溃疡病菌，该系列化合物在50μg/mL和25μg/mL的抑制率均超过对照药叶枯唑和噻菌铜(分别为49.49、36.82，47.94、36.12％)。对水稻白叶枯病菌，该系列化合物在50μg/mL和25μg/mL的抑制率优于对照药叶枯唑和噻菌铜(分别为32.54、27.65，24.12、19.13％)，具有较好的广谱性。

以上实验活性数据表明含喹喔啉的杨梅素衍生物对TMV和植物病菌(柑橘溃疡病菌和水稻百叶枯病菌)具有一定的抑制作用，其中部分目标化合物对植物病毒和植物病菌表现出优良抑制活性，可作为潜在的抗植物病毒药物和抑菌药物，具有较好的应用前景。

综上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种含喹喔啉的杨梅素衍生物，其结构通式如下所示：

其中，R为在喹喔啉结构中的3、5、6、7或8位上含有的一个氢原子、羟基、C1-6的烷基、C1-6的烷氧基、卤素原子；n为碳链中碳的个数分别为3、4、5、6。

2.如权利要求1中所述的一种含喹喔啉的杨梅素衍生物的制备方法，包括步骤如下：

(2)以3-羟基-3’,4’,5’,5,7-五甲氧基杨梅素(中间体1)和不同链长的二溴烷烃为原料，

以碳酸钾为催化剂、用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)作溶剂，制备3-溴-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(中间体2)：

3.如权利要求1中所述的一种含喹喔啉的杨梅素衍生物在抑制烟草花叶病毒方面的应用。

4.如权利要求1中所述的一种含喹喔啉的杨梅素衍生物在抑制柑橘溃疡病菌和水稻白叶枯病菌的应用。