CN109045101A - 含中药提取物的中药组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种含中药提取物的中药组合物以及应用，含中药提取物的中药组合物主要由下述重量份的原料制成：黄芪提取物50‑120份，蜂胶提取物30‑80份，猴头菇提取物30‑80份。经动物实验和人体功能试验证明，本发明所提供的含中药提取物的中药组合物具有保护胃黏膜的功能和抗幽门螺杆菌感染的作用。

Description

含中药提取物的中药组合物及其应用

技术领域

本发明涉及医疗保健技术领域，更具体地说，涉及一种含中药提取物的中药组合物及其应用。

背景技术

胃粘膜损伤是临床的常见疾病，现代医学认为本病是由于对胃粘膜有损害作用的侵袭因素和粘膜自身防御因素之间失去平衡的结果，当损害因素增强和(或)保护因素削弱时，胃粘膜就可出现损伤甚至溃疡。损害因素有胃酸、胃蛋白酶、反流的上部小肠液、幽门螺杆菌(HP)等，保护因素包括胃粘膜屏障和胃粘液屏障等。

中医认为，胃黏膜疾病属于“脾胃病”范畴，一般认为其与脾、肝功能失率和寒邪关系最为密切。因此，根据胃粘膜损伤发病的中医病理基础，总结其基本病机为脾胃受纳、运化和升降失常，气血瘀阻不通。

幽门螺杆菌(Hp)是一种革兰氏阴性细菌，具有很强的感染性，全球有一半以上的人群感染Hp，发展中国家感染率较高，儿童感染率超过成人，国内的感染率也在50％左右。作为一种在胃内强酸环境中生活的细菌，它有着独特的结构，可以突破胃内防御屏障而在胃黏膜中长期存活，继而分泌各种致病因子，影响胃肠激素和胃酸的分泌，引发机体的免疫和炎症反应。当损伤的程度超过胃粘膜自我更新、保护的限度，便会引发胃粘膜的损伤。长期的胃粘膜损伤则会带来胃溃疡的发生，甚至诱发胃癌。目前认为根除Hp是治愈和防止胃溃疡复发的关键。

专利WO2013/155715A 1公开了一种健胃保健胶囊，适用人群为轻度胃粘膜损伤者，该保健胶囊具有下列重量百分比的成分组成：灵芝提取物16％，黄芪提取物12％，猴头菇提取物42.2％，蜂胶1％，香菇提取物。同时，该申请人(江苏安惠生物科技有限公司)的产品“安惠牌菇芪灵胶囊”的主要原料为：灵芝提取物、黄芪提取物、猴头菇提取物、蜂胶、香菇提取物；功效成分/标志性成分含量为：每100g含粗多糖23g、总黄酮0.9g。该保健胶囊对轻度胃粘膜损伤具有一定的保护和修复作用，但是其采用的灵芝提取物增加了患者的医药费负担，这就影响了其应用的广泛性。同时，未见“安惠牌菇芪灵胶囊”对幽门螺杆菌有抑制作用的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于现有技术中的用于胃粘膜损伤的药物成本高，不能广泛应用，因此提供一种含中药提取物的中药组合物以及应用，增强了药效和保健功能，提高了其应用范围的广泛性。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种含中药提取物的中药组合物，主要由下述重量份的原料制成：黄芪提取物50份-120份，蜂胶提取物30份-80份，猴头菇提取物30份-80份。

作为优选，所述黄芪提取物为黄芪水提取物或黄芪有机溶剂提取物；所述猴头菇提取物为猴头菇水提取物或猴头菇有机溶剂提取物。

作为优选，含中药提取物的中药组合物还包括有辅料，所述辅料主要由分散介质、吸附介质和助悬剂组成；其中，所述分散介质为植物油，其为花生油、橄榄油、芝麻油、亚麻籽油或大豆油其中一种；所述吸附介质为微晶纤维素；所述助悬剂为蜂蜡。

作为优选，所述辅料的成分及重量份为：植物油250份-350份；微晶纤维素81份-153份；蜂蜡1份-4份。

作为优选，含中药提取物的中药组合物还包括有胶囊皮，所述原料和辅料作为内容物置于胶囊皮内，以形成胶囊制剂。

作为优选，所述胶囊皮主要由明胶、纯化水和甘油组成。

作为优选，所述明胶和甘油的重量范围分别为：明胶150份-450份、甘油50份-200份。

进一步，本发明还提供一种含中药提取物的中药组合物在制备用于治疗胃粘膜损伤和抗幽门螺杆菌感染的药物中的应用。

经动物实验证明，以0.30g/kg.bw、0.60g/kg.bw、1.80g/kg.bw剂量的本发明中的软胶囊制剂给大鼠灌胃30天，用无水乙醇作为急性胃粘膜损伤剂，本发明中的软胶囊制剂的高剂量组大鼠胃粘膜损伤积分指数、胃粘膜病理组织学检查病变总积分明显低于模型对照组(P＜0.05)；各剂量对大鼠体重无明显影响。

经人体试服试验，采用自身对照组及组间对照法，选择符合试验条件的自愿受试者服用受试物30天后，结果表明：试食组试食前后自身比较，临床症状、体征积分明显减少，差异有显著性(P＜0.5)；与试食后阳性对照组间比较，临床症状和体征积分差异无显著性(P＞0.5)；胃镜复查结果未加重。试食期间未见明显不良反应。根据对《胃粘膜损伤有辅助保护功能评价方法》(国食药监保化[2012]107号)评价标准，因此可以得出，本发明中软胶囊制剂对胃粘膜损伤有辅助保护功能。

经体外动物实验表明，大鼠灌胃给予本发明中软胶囊制剂，对消炎痛引起的大鼠胃出血具有很好保护作用。在同等剂量下，本发明中软胶囊制剂比对比样品“安惠牌菇芪灵胶囊”减轻腹腔注射消炎痛引起的胃腺部出血点数，作用效果更好。可知本发明中软胶囊制剂降低了产品的成本，同时显现出更好的效果。

经体外实验，结果表明：本发明中软胶囊制剂对幽门螺杆菌有明显的抑制作用，在抑菌实验中可形成明显的抑菌圈，其直径随样品中浓度的下降而减小，表明软胶囊制剂具有良好的抗幽门螺杆菌作用，该效应与样品浓度相关。

实施本发明的一种含中药提取物的中药组合物及其应用，具有以下有益健康效果：本发明通过一定重量份的黄芪提取物、蜂胶提取物和猴头菇提取物配成能够保护人体胃粘膜的中药组合物，对胃粘膜损伤者具有很好的辅助治疗功能，对幽门螺杆菌有很好的抑制作用。

附图说明

图1为样品B与安惠牌菇芪灵胶囊、泮托拉唑钠的对比图；

图2为肉眼观察幽门螺杆菌在固体培养基上的形态；

图3为E-test法检测幽门螺杆菌对阿莫西林的敏感性；

图4A-图4D为各组典型的平板，其中，

图4A中，0：阴性对照；1：阿莫西林0.2mg/L；2：阿莫西林0.1mg/L；3：阿莫西林0.05mg/L；

图4B中，0：阴性对照；4：阿莫西林0.025mg/L；5：1.0617g/mL样品B；11：芝麻油；

图4C中，0：阴性对照；6：0.7963g/mL样品B；7：0.5309g/mL样品B；8：0.2654g/mL样品B；

图4D中，0：阴性对照；8：0.2654g/mL样品B；12：0.1327g/mL样品B；13：0.0664g/mL样品B。

具体实施方式

为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现结合具体的实验数据和实施例对本发明进行详细说明。

本发明公开了一种含中药提取物的中药组合物，主要由下述重量份的原料制成：黄芪提取物50份-120份，蜂胶提取物30份-80份，猴头菇提取物30份-80份。黄芪提取物为黄芪水提取物或黄芪有机溶剂提取物；所述猴头菇提取物为猴头菇水提取物或猴头菇有机溶剂提取物。

含中药提取物的中药组合物还包括有化学上可接受的辅料或辅助性成分，所述辅料或辅助性成分主要由分散介质、吸附介质和助悬剂等组成。分散介质为植物油，其为花生油、橄榄油、芝麻油、亚麻籽油或大豆油其中一种，优选地，植物油为芝麻油；所述吸附介质为微晶纤维素；所述助悬剂为蜂蜡。辅料的成分及重量份为：植物油250份-350份；微晶纤维素81份-153份；蜂蜡1份-4份。优选的原料配比为：黄芪提取物60份-100份、蜂胶提取物40份-60份、猴头菇提取物40份-60份，所述植物油280-330份，微晶纤维素81份-100份和蜂蜡1份-3份。

含中药提取物的中药组合物还包括有胶囊皮，原料和辅料作为内容物置于胶囊皮内，以形成胶囊制剂。胶囊皮主要由明胶、纯化水和甘油组成。明胶和甘油的重量份分别为：明胶150份-450份、甘油50份-200份。

本发明还公开了一种含中药提取物的中药组合物可应用于胃粘膜损伤的治疗。

本发明中，由于原料中的黄芪提取物和猴头菇提取物均为固体粉末状态，蜂胶提取物为块状固体，三个原料均可与植物油混合，根据原料的这种性质，因此非常适合制成软胶囊剂，特别是蜂胶提取物，由于蜂胶提取物常温状态下为固态，通常为块状，有辛辣味，但遇热或高温则易变软，易溶于油类溶剂，就更适合制成软胶囊制剂，可以避免受环境温度影响。软胶囊剂的密封性好，能够掩盖内容物蜂胶提取物辛、苦的气味，适宜人群更易接受，且便于携带，服用方便。另外，密封的软胶囊壳可使内容物与空气中的氧气隔绝，减少了氧化过程的发生，有利于产品保存及有效成分的稳定，使之更好的发挥功效作用。

实施例一：制备具有保护胃黏膜功能的含中药提取物的中药组合物

该实施例中所用的黄芪提取物、蜂胶提取物、猴头菇提取物、芝麻油、微晶纤维素、蜂蜡均可以通过商业途径购买到。

该实施例制备得到的含中药提取物的中药组合物如下：

该实施例具有保护胃黏膜功能的含中药提取物的中药组合物的制备方法如下：

1、备料

按照配方要求配齐质量合格的原料和辅料，去掉外包装转入洁净生产区内。

2、配料和预处理

蜂胶提取物先冷冻24小时，再粉碎过60目筛，加入微晶纤维素搅拌混合均匀，备用；黄芪提取物、猴头菇提取物分别按生产配方量称取，备用；芝麻油、蜂蜡、明胶、甘油、纯化水按生产配方量分别称取。备用。

3、化胶

将纯化水、甘油置化胶罐中，开动搅拌，加热至65-70℃后，缓缓投入配方量的明胶，边投边搅拌，保温搅拌使明胶完全熔融、胶液均匀，静置，-0.06～0.08Mpa抽真空脱泡，过100目筛，得胶液，保温(55～60℃)备用。

4、内容物物料制备

将芝麻油、蜂蜡置调配罐，加热升温至70～80℃，溶解搅拌混匀，冷却，得混合油料；将黄芪提取物、猴头菇提取物、蜂胶提取物微晶纤维素混合物置混合油料中，搅拌混合30分钟，再过胶体磨研磨2-3次后，-0.06～0.08Mpa抽真空脱泡，过80目筛，得内容物物料，备用。

5、压丸、定型

将内容物物料与胶液分别投入到软胶囊机中压丸，生产出的胶丸定型干燥2～4小时。

6、洗丸、干燥

定型干燥后的胶丸用95％的食用乙醇洗丸，再转送温度为20～28℃，相对湿度为20～40％的环境下，干燥24-48小时，干燥后拣丸，剔除异形丸或有气泡的等不合格品，得合格胶丸。

实施例二：通过实施例一制备的含中药提取物的中药组合物的动物安全性评价

1.材料与方法

1.1样品：上述实施例一制备得到的含中药提取物的中药组合物A、B、C、D和E。

1.2实验动物

SPF级昆明种小鼠、SD大鼠和饲料由长沙市天勤生物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号SCXK(湘)2014-0011。实验环境为屏障环境，实验期间实验环境温度23-26℃，湿度52-56％。实验动物使用许可证号SYXK(湘)2015-0012。

1.3实验方法与结果

(1)经口急性毒性试验：

实施例一制备的含中药提取物的中药组合物B对一组小鼠的经口急毒影响如下：

采用最大耐受剂量(MTD)试验法：选取18g～22g的昆明种小鼠20只，雌雄各半，一日两次经口灌胃，累积剂量为18.72g/kg·bw。连续观察两周，观察期末将实验动物进行大体解剖，观察主要脏器改变。结果，两周后实验动物未见有中毒症状、无死亡。实验动物大体解剖发现主要脏器未见明显异常改变，表明本品样品对昆明种雌、雄小鼠的最大耐受剂量(MTD)大于18.72g/kg·bw(相当于本品人体推荐摄入量的312倍)，属无毒级。具体结果见表1和表2。

表1样品急性经口毒性试验小鼠体重结果

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对一组小鼠的经口急毒影响与含中药提取物的中药组合物B的结果无显著差异。

(2)三项遗传毒性试验：

实施例1制备的含中药提取物的中药组合物B的三项遗传毒性试验结果如下：

①Ames试验：采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷性TA97a、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验，设5000μg/皿、1000μg/皿、200μg/皿、40μg/皿、8μg/皿，同时设自发回变对照、溶剂对照和阳性突变剂对照，37℃培养48小时，计数每皿菌落数。结果发现，样品对TA97a、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，加与不加S-9，样品各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量-反应关系。表明本品样品的Ames试验阴性。具体结果见表3和表4。

表3样品Ames试验结果(第一次)

阳性对照：TA97a+S9、TA98+S9、TA100+S9采用2-AF(剂量：10.0μg/皿)；TA97a-S9、TA98-S9采用9-芴酮(剂量：0.2μg/皿)：TA100-S9采用NaN₃(剂量：1.5μg/m)；TA102+S9采用1，8-二羟蒽醌(剂量：50.0μg/皿)；TA102-S9采用MMC(剂量：0.5μg/皿).表4同.

表4样品Ames试验结果(第二次)

②小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：采用间隔24小时两次经口灌胃法进行试验，选取25g～30g小鼠50只，随机分为5组，每组10只、雌雄各半，设0.04g/kg·bw环磷酰胺阳性对照组、食用植物油阴性对照组和2.50g/kg·bw样品低剂量组、5.00g/kg·bw样品中剂量组、10.00g/kg·bw样品高剂量组(分别相当于人体推荐摄入量的42倍、83倍和167倍)，末次给药后6小时处死动物取胸骨骨髓制片，光镜下观察并计数PCE、NCE。结果，样品各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性(P＞0.05)，而阳性对照组与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.01)。样品各剂量组噬多红细胞占红细胞总数的比例不少于阴性对照组的20％，未见明显细胞毒性。表明本品样品的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验阴性。具体结果见表5。

表5样品对小鼠骨髓微核发生率的影响

^*与阴性对照组比较，P＜0.01

③小鼠精子畸形试验：选取25g～35g雄性昆明种小鼠25只，随机分为5组，每组5只，设0.04g/kg·bw环磷酰胺阳性对照组、食用植物油阴性对照组、2.50g/kg·bw样品低剂量组、5.00g/kg·bw样品中剂量组、10.00g/kg·bw样品高剂量组(分别相当于人体推荐摄入量的42倍、83倍和167倍)，每日灌胃1次，连续5天，末次灌胃后第30天处死动物，取附睾制片，每只动物计数1000个完整精子。结果，样品各剂量组小鼠精子畸形发生率与阴性对照组比较差异无显著性(P＞0.05)，而阳性对照组与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.01)，表明小鼠精子畸形试验结果阴性。具体结果见表6。

表6样品对小鼠精子畸形发生率的景响

*与阴性对照组比较，P＜0.01

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E的三项遗传毒性试验与组合物B的结果无显著差异。

(3)30天喂养试验：

实施例一制备的含中药提取物的中药组合物B对SD大鼠的30天喂养试验结果如下。

选取SD大鼠80只，随机分成4组，每组20只、雌雄各半，设对照组、1.50g/kg·bw样品低剂量组、3.00g/kg·bw样品中剂量组、6.00g/kg·bw样品高剂量组(分别相当于人体推荐摄入量的25倍、50倍、100倍)。其中对照组给予等体积的食用植物油，其他组采用将样品掺入食用植物油给样法，连续喂养30天，试验期间动物单笼饲养，并观察动物的活动和生长情况，记录给食量和剩食量，计算进食量和食物利用率，给样品30天后禁食16h采血进行血常规指标及生化指标检验，采血后处死动物进行大体解剖，称主要脏器重量并计算脏/体比值。结果发现，试验期间动物生长发育良好，无异常行为和中毒症状，无死亡，各剂量组体重、增重、食物利用率、血常规指标、血生化指标、脏器重量及脏器/体重比值与对照组比较，无显著性差异(P＞0.05)。大体解剖和组织病理检查未见明显与样品有关的异常改变。表明本品样品30天喂养对大鼠未见明显毒副作用。具体结果见下表。

1，样品对大鼠体重及食物利用率的影响，见表7-12，喂养期间，各剂量组雌雄鼠各时点体重、末重和增重、每周及总进食量、每周及总食物利用率与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。

表7样品对大鼠体重的影响

表8样品对大鼠食物利用率(第1周)的影响

表9样品对大鼠食物利用率(第2周)的影响

表10样品对大鼠食物利用率(第3周)的影响

表11样品对大鼠食物利用率(第4周)的影响

表12样品对大鼠总食物利用率的影响

2.样品对大鼠血常规指标的影响见表13-15，各剂量组雌雄大鼠的血红蛋白、红细胞总数、红细胞压积、网织红细胞、血小板数、白细胞总数及分类与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。

表13样品30天喂养试验血液学检查结果

表14样品对大鼠WBC计数及其分类的影响

表15样品对大鼠WBC计数及其分类的影响

3.样品对大鼠生化指标的影响见表16-17，各剂量组雌雄大鼠的总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆固醇、甘油三脂、尿素氮、肌酐、血糖与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。

表16样品30天喂养试验末期生化检验结果

表17样品30天喂养试验末期生化检验结果

4.样品对大鼠实验未禁食后体重、脏器重量和脏器/体重比值的影响见表18-19，各剂量组大鼠的实验未禁食后体重及肝脏、肾脏、脾脏、睾丸的绝对重量和肝/体、脾/体、肾/体、雄鼠睾/体比值与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。

表18样品对大鼠实验末禁食后体重及脏器重量的影响

表19样品对大鼠脏体比的影响

5.大体解剖及组织学检查结果

5.1大体解剖检查

共检查对照组和各剂量组共80只大鼠，雌性各半。剖检后肉眼观察，心、肺、肝、脾、胃、肠、睾丸(卵巢)等主要脏器的色泽、大小、形态结构等均为未见明显异常。

5.2镜下检查

检查高剂量组及对照组大鼠各20只，雌雄各半。

肝脏：被膜完整，肝小叶结构清楚，其中对照组雌鼠1只干细胞点状坏死，对照组雄鼠1只肝细胞轻度脂肪变性，肝间质少量炎性细胞浸润。

肾脏：被膜完整，肾小球、肾小管结构正常，其中高剂量组雌鼠1只肾间质见少量炎性细胞浸润。

胃肠：各层结构清楚，粘膜上层完整，粘膜下各层无异常。

脾脏：被膜完整，脾小梁结构正常，红、自髓比例正常。

卵巢：上皮与白膜正常，各级卵泡发育良好，无异常。

上述检查结果表明，高剂量组雌、雄大鼠的肝、脾、肾、胃、肠、睾丸(卵巢)均未见明显与试验因素有关的病理组织学变化。

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对SD大鼠的30天喂养试验与组合物B的结果结果无显著差异。

小结：经口急性毒性、三项遗传毒性试验、30天喂养试验三项实验都表明，本发明实施例一制备的含中药提取物的中药组合物能通过动物安全性评价。

实施例三：本发明实施例一制备的含中药提取物的中药组合物用于保护胃黏膜的动物功能评价

一.材料和方法

1.受试产品：上述实施例一制备得到的含中药提取物的中药组合物A、B、C、D和E，人口服推荐剂量为每日3.6g，成人体重按60kg计算，折合剂量0.06g/kg.bw。

2.试验动物及试验条件

湖南斯莱克景达实验动物有限公司(实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2016-0002)提供的SPF级雄性SD大鼠50只，体重180-220g。饲料由长沙市天勤生物技术有限公司提供。动物于屏幕环境中饲养，实验期间环境温度23～26℃，湿度52％～58％，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2015-0012。

3.实验方法：采用急性胃粘膜损伤酒精模型

3.1剂量分组及受试产品给予时间：实验设3个剂量组、空白对照组和模型对照组。设样品低、中、高剂量分别为：0.30kg.bw、0.60kg.bw、1.80g/kg.bw(分别相当于人体推荐量5、10、30倍)，低、中、高剂量受试液配制时，分别取上述实施例一制备得到的含中药提取物的中药组合物A、B、C、D和E的内容物6.00g、12.00g、36.00g加植物油至100mm，配制成相应浓度的受试液，空白对照、模型对照组给予等体积植物油，分别给予受试动物灌胃，灌胃体积为0.5ml/100kg.bw，每日1次，连续30天。

4.实验操作：各组灌胃30天后，全部动物严格禁食24h(不禁水)，也不给予受试物，除空白对照组外，所有试验组动物给予无水乙醚1.0ml/只，1小时候处死动物，暴露完整胃，结扎幽门，灌注适量10％甲醛溶液，固定20min，然后沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，展开胃粘膜，在体视解剖显微镜下或肉眼下用游标卡尺测量出血点或出血带的长度和宽度。因宽度所代表损伤的严重性远较长度大，故双倍积分。其评分标准见表20。

表20

急性酒精损伤肉眼观查评分标准

观察指标：各实验组胃粘膜损伤程度以损伤发生率(％)、损伤积分指数和损伤抑制率表示。损伤发生率(％)＝某组出现出血或溃疡的大鼠数量/该组大鼠数量x100％；损伤积分指数＝组损伤评分总和/组动物数量；损伤抑制率(％)＝(A-B)/Ax100％(A、B分别为模型组与试验组的损伤积分)。

病理组织学及观察和评分，大体检查完毕，将每只动物胃粘膜损伤最严重的部位切下，固定于10％的甲醛溶液，常规制片，HE染色，镜下观察。注意选择胃粘膜正横切面，包括粘膜全层的区域观察。评分方法：以充血、出血、粘膜细胞变性坏死在整体粘膜上皮层的累及程度分为5级。充血权重为1，出血权重为2，上皮细胞变性坏死权重为3，评分标准及病变总积分公式见表21。

表21

急性胃粘膜损伤镜下评分标准

数据处理：数据可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05；结论：各组均数间差异无显著性。F值≥F0.05，即P≤0.05，用多个实验组和对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计。若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

结果判定：受试物一个或一个以上剂量组与模型对照组进行比较，大体观察评分与病理组织学检查评分结果均表明胃粘膜损伤明显改善，可判定该受试产品动物实验结果为阳性。

二.实验结果

1.受试物对大鼠体重的影响

实施例一制备的含中药提取物的中药组合物B对大鼠体重的影响见表22。

实验期间，各组动物生长正常。各剂量组动物初始体重、中期体重、终末体重及试验期间体重增长值与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。具体结果见表22。

表22

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对大鼠的体重影响结果与组合物B的结果无显著差异。

2.实施例一制备的含中药提取物的中药组合物B对大鼠胃粘膜急性酒精损伤发生率与模型对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；高剂量组大鼠胃粘膜损伤积分指数明显低于模型对照组，差异有显著性(P＜0.05)。见表23。

表23

各组胃粘膜急性酒精损伤肉眼观察评分结果

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对大鼠的大鼠胃粘膜急性酒精损伤发生率结果与组合物B的结果无显著差异。

3.实施例一制备的含中药提取物的中药组合物B对大鼠胃粘膜急性酒精损伤病理组织学检查评分的影响

由表24可见，模型对照组胃粘膜病理组织学检查病变积分明显高于空白对照组，差异有显著性(P＜0.05)；高剂量组大鼠胃粘膜病理组织学检查病变积分明显低于模型对照组，差异有显著性(P＜0.05)。结果见表24。

表24

各组胃粘膜急性酒精损伤病理组织学检查评分结果

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对大鼠的胃粘膜急性酒精损伤病理组织学检查评分与组合物B的结果无显著差异。

4.结论

在本实验条件下，以0.30kg.bw、0.60kg.bw、1.80g/kg.bw剂量的实施例一制备的含中药提取物的中药组合物B给大鼠灌胃30天，用无水乙醇作为急性胃粘膜损伤剂，本发明中的软胶囊制剂的高剂量组大鼠胃粘膜损伤积分指数、胃粘膜病理组织学检查病变总积分明显低于模型对照组(P＜0.05)；各剂量对大鼠体重无明显影响。实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对各实验组结果无显著差异。因此可以得出，实施例一制备的含中药提取物的中药组合物对胃粘膜损伤具有辅助保护作用。

实施例四：本发明实施例一制备的含中药提取物的中药组合物对胃粘膜损伤有辅助保护功能作用的人体试食实验

一.材料和方法

1.受试产品：上述实施例一制备得到的含中药提取物的中药组合物A、B、C、D和E，人口服推荐量为每日2次，每次3粒。

2.阳性物：美宝牌胃肠胶囊，北京美宝高科技有限公司，批准文号为：卫食健字(2001)第0234号，人口服推荐量为每日2次，每次5粒。市售购买。

3.首试对象：复合慢性浅表性胃炎诊断标准且经胃镜筛选确诊为胃粘膜损伤的自愿受试者。

4.方法：采用组间和自身两种对照设计，按受试者的症状轻重随机分为受食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、病程等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。试食组按推荐食用方法、用量服用受试产品，在试验期间停用其它用于慢性胃病的物品，对照组服用具有相同作用的阳性物。受试者按推荐量服用受试产品，连续30天。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。

二.观察指标

1.安全性指标，包括一般状况：精神、睡眠、饮食、大小便、血压等；血、尿、便常规检查；肝、肾功能检查；胸透、心电图、腹部B超检查(仅在试验开始前检查一次)。

2.功效指标，包括症状观察：胃痛、嗳气、反酸、腹胀、食欲不振、少食等临床症状；体征观察剑突下压痛程度，按症状轻重统计计分(轻1分、中2分、重3分)；胃镜检查与

体征观察：包括剑突下压痛程度检查，根据疼痛程度分为轻(1分)、中(2分)、重(3分)

轻度：用力时才出现疼痛，压痛轻微；

中度：用力即出现疼痛，但疼痛尚能忍受，压痛明显；

重症：稍微用力即出现疼痛，疼痛不能忍受，牙痛剧烈。

三.数据处理和结果判断

统计症状和体征积分值

试验数据为计量资料，用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适量的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验。若转换数据仍然不能满足正太方差齐要求，改用t’检验或秩和检验，但变异系数太大(比如CA＞50％)的资料应用秩和检验。

结果判定：试食前后试食组自身比较，临床症状、体征积分明显减少；试食后试食组与阳性对照组组间比较，临床症状、体征积分差异无显著性；胃镜复查结果有改善或不加重，可判定该受试产品对胃粘膜损伤有辅助保护功能。

四.结果

实施例一制备的含中药提取物的中药组合物B对胃粘膜损伤有辅助保护功能作用的人体试食实验的结果为：

1.一般情况

初始试验人群试食组51例，试食前后受试者精神、睡眠、饮食、大小便情况未见异常，性别、年龄和病程结果见表25。

表25

试食前一般情况

2.体重、血压、尿常规、大便常规、血常规及生化指标，见表26和表27。

表26

试食前后体重、血压、心率、血常规、尿常规、大便常规变化情况

表27

试食前后生化指标变化情况

3.心电图、腹部B超、胸透检查，均在正常范围内。

4.试食期间未见明显不良反应。

5.临床症状改善情况

试食后试食组和阳性对照组临床症状均明显降低，与自身试食前比较，差异均有显著性(P＜0.5)；试食后试食组与阳性对照组比较，积分差异无显著性(P＞0.5)，结果见表28。

表28

注：自身比较*P＜0.05

6.体征改善情况

试食后试食组和阳性对照组体征积分均明显降低，与自身试食前比较，差异均有显著性(P＜0.5)；试食后试食组与阳性对照组比较，积分差异无显著性(P＞0.5)，结果见表29。

表29

注：自身比较*P＜0.05

7.胃镜检查结果

试食前受试者符合浅表性胃炎胃镜诊断标准，试食后胃镜复查未加重。结果见表30。

表30

胃镜检查情况

8.脱失率

经过30天试验后，对照组有0例受试者因间断服用受试品无法判断效果被筛除；试食组有0例受试者因间断服用受试品无法判断效果被筛除。最后有效试验人群对照组51例，试食组51例。结果见表31。

表31

五.小结

采用自身对照组及组间对照法，选择符合试验条件的自愿受试者服用受试物30天后，结果表明：试食组试食前后自身比较，临床症状、体征积分明显减少，差异有显著性(P＜0.5)；与试食后阳性对照组间比较，临床症状和体征积分差异无显著性(P＞0.5)；胃镜复查结果未加重。试食期间未见明显不良反应。

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对胃粘膜损伤有辅助保护功能作用的人体试食实验各组评价与组合物B的结果无显著差异。

根据对《胃粘膜损伤有辅助保护功能评价方法》(国食药监保化[2012]107号)评价标准，提示本申请实施例一制备的含中药提取物的中药组合物具有对胃粘膜损伤有辅助保护功能。

实施例五：本发明实施例一制备的含中药提取物的中药组合物与安惠牌菇芪灵胶囊对比

1.受试产品：

上述实施例一制备得到的含中药提取物的中药组合物A、B、C、D和E，用芝麻油配置成1.80g/10ml。给药体积10ml/kg。

安惠牌菇芪灵胶囊：市售购买。取安惠牌菇芪灵胶囊内容物，用蒸馏水配成1.80g/10ml，给药体积10ml/kg。

泮托拉唑钠：市售购买。用蒸馏水配成：20mg/10ml，10ml/kg。

消炎痛：市售购买。用蒸馏水配制成25mg/10ml。10ml/kg。

2.试验动物及试验条件

雄性Wistar大鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。动物合格证SCXK(京)20160006。

3.实验方法：采用大鼠消炎痛型急性胃溃疡模型

3.1剂量分组及受试产品给予时间：取禁食48小时的雄性wistar大鼠，按表1随机分组。每组7只。分别灌胃给予样品A、B、C、D和E各1.80g/kg.bw，10.0ml/kg、泮托拉唑钠20.0mg/kg和蒸馏水10.0ml/kg(空白对照)。

3.2实验操作：按新药(西药)《临床前研究指导原则汇编》(药学药理学毒理学)指导原则制定实验方法。0.5小时后腹腔注射消炎痛25.0mg/kg，6.0小时后脱颈椎处死大鼠，取出胃注入10ml水，置3％的甲醛溶液中固定后打开胃，计粘膜部溃疡(出血点)数。用数码相机照像。用t-检验程序进行显著性测验。

3.3实验结果：结果见表32。大鼠给予样品A、B、C、D和E后，溃疡抑制率分别为67％、69％、72％、68％、69％，可见溃疡数明显减少，与对照组比有显著性差异。安惠牌菇芪灵胶囊有一定效果，溃疡抑制率为30％，与对照组比无显著性差异。泮托拉唑钠显示出很好的效果，溃疡抑制率为100％，与对照组比有显著性差异。

表32.样品对大鼠消炎痛型溃疡模型的作用

与对照相比*p＜0.05***p＜0.001。n＝7

如图1所示，图1为样品B与安惠牌菇芪灵胶囊、泮托拉唑钠的对比图。通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对大鼠的消炎痛型溃疡模型损伤与组合物B的结果无显著差异。

3.4.结论

大鼠灌胃给予1.80g/kg.bw中药组合物和安惠牌菇芪灵胶囊，能减轻腹腔注射消炎痛引起的胃腺部出血点数。样品A、B、C、D和E溃疡数明显减少，与对照组比有显著性差异。提示中药组合物对消炎痛引起的大鼠胃出血具有很好保护作用。安惠牌菇芪灵胶囊有一定作用，但是在同等剂量下，中药组合物作用效果更好。安惠牌菇芪灵胶囊采用的灵芝提取物增加了患者的医药费负担，这就影响了其应用的广泛性。可知中药组合物降低了产品的成本，同时显现出更好的效果。

实施例六：本发明实施例一制备的含中药提取物的中药组合物抗幽门螺杆菌实验

1.材料和方法

1.1材料

上述实施例一制备得到的含中药提取物的中药组合物A、B、C、D和E，取组合物B，另设阿莫西林组和阴性对照组(采用0.9％生理盐水替代药物处理)，幽门螺杆菌标准菌株。

1.2幽门螺杆菌的复苏、培养和保存

将幽门螺杆菌标准菌株(保存于冻存液中)于常温下平衡后，用接种环蘸取菌液后，于完全培养基平板上划线，37℃微需氧环境下培养3～5d。细菌在平板上传2～3代后用于实验。保存细菌时，刮取生长良好的幽门螺杆菌置于冻存液(含15％甘油)中，于-80℃保存。

1.3抗菌实验方法

刮取生长良好的幽门螺杆菌制备为一定浊度的菌悬液，用无菌棉拭子涂布于完全培养基平板上。在平板上等距离放置牛津杯，分别加入100μL的生理盐水、样品B、芝麻油、美宝、阿莫西林，每块平板上必须设置生理盐水样品作为阴性质控，37℃微需氧培养3～5d后观察牛津杯周围菌落生长情况，用游标卡尺测定其抑菌直径。

1.4数据描述和统计分析

数据表示为

2.结果

2.1幽门螺杆菌的鉴定

2.1.1幽门螺杆菌在培养基平板上的形态适当浊度的幽门螺杆菌用无菌棉拭子涂拭于培养基平板上，37℃微需氧环境下培养3d后，平板上出现针尖样透明小菌落，如图2所示。平板表面呈现毛玻璃样外观，细菌菌落沿涂拭的痕迹分布。

2.2阿莫西林敏感的幽门螺杆菌菌株选择

将阿莫西林试纸条放在涂布幽门螺杆菌的平板上，共培养一定时间后，观察试纸条周围的抑菌圈。从图3可以看出，在阿莫西林试纸条周围，幽门螺杆菌均未生长，仅在平板周边边缘处有少量细菌生长，表明该菌对阿莫西林非常敏感，其MIC值小于试纸条上最小浓度(0.016mg/L)，可以用于后续实验。

2.3抗菌实验

根据预定实验方案，分别对阿莫西林(0.2mg/L、0.1mg/L、0.05mg/L、0.025mg/L)、样品B(1.0617g/mL、0.7963g/mL、0.5309g/mL、0.2654g/mL、0.1327g/mL、0.0664g/mL)、芝麻油的抗幽门螺杆菌作用进行了评价。

各组典型的平板如图4A-图4D所示，对牛津杯周围的抑菌圈进行测量，结果见表33。

表33样品B抗幽门螺杆菌试验抑菌圈直径

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对幽门螺杆菌抑制作用无显著差异。具体抑菌圈直径见表34。

表34样品A、C、D、E抗幽门螺杆菌试验抑菌圈直径

3.结论

结果显示：

(1)阴性对照组细菌生长不受抑制，表明细菌生长正常。

(2)芝麻油组细菌生长不受抑制，表明芝麻油对所用幽门螺杆菌无抑菌效果。

(3)阿莫西林0.1mg/L和0.2mg/L组均显示出了明显的抑菌效果，0.05mg/L和0.025mg/L组不能抑制幽门螺杆菌生长。根据2017欧盟药敏试验标准(EUCAST)，幽门螺杆菌对阿莫西林的耐药折点大于0.125mg/L，本实验结果表明阿莫西林对所用的幽门螺杆菌的最低抑菌浓度为0.1mg/L，所用的幽门螺杆菌对阿莫西林敏感。

(4)样品A、B、C、D和E组：1.0617g/mL、0.7963g/mL、0.5309g/mL、0.2654g/mL组均有抑菌效果，其抑菌圈直径呈梯度减少；0.1327g/mL和0.0664g/mL组没有抑菌效果，表明样品A、B、C、D和E对所用的幽门螺杆菌具有良好的抑菌作用，其最低抑菌浓度为0.2654g/mL。

本实验室条件下，1.0617g/mL、0.7963g/mL、0.5309g/mL、0.2654g/mL样品A、B、C、D和E组均有明显的抑菌圈，其直径随样品中样品A、B、C、D和E浓度的下降而减小，表明样品具有良好的抗幽门螺杆菌作用，该效应与样品的浓度相关。

通过上述方法采用实施例一制备的含中药提取物的中药组合物A、C、D和E对幽门螺杆菌抑菌作用与组合物B的结果无显著差异。

上面对本发明的实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护之内。

Claims (8)

1.一种含中药提取物的中药组合物，其特征在于，主要由下述重量份的原料制成：黄芪提取物50份-120份，蜂胶提取物30份-80份，猴头菇提取物30份-80份。

2.根据权利要求1所述的含中药提取物的中药组合物，其特征在于：所述黄芪提取物为黄芪水提取物或黄芪有机溶剂提取物；所述猴头菇提取物为猴头菇水提取物或猴头菇有机溶剂提取物。

3.根据权利要求1所述的含中药提取物的中药组合物，其特征在于，含中药提取物的中药组合物还包括有辅料，所述辅料主要由分散介质、吸附介质和助悬剂组成；其中，所述分散介质为植物油，其为花生油、橄榄油、芝麻油、亚麻籽油或大豆油其中一种；所述吸附介质为微晶纤维素；所述助悬剂为蜂蜡。

4.根据权利要求3所述的含中药提取物的中药组合物，其特征在于，所述辅料的成分及重量份为：植物油250份-350份；微晶纤维素81份-153份；蜂蜡1份-4份。

5.根据权利要求1至4任一项所述的含中药提取物的中药组合物，其特征在于，含中药提取物的中药组合物还包括有胶囊皮，所述原料和辅料作为内容物置于胶囊皮内，以形成胶囊制剂。

6.根据权利要求5所述的含中药提取物的中药组合物，其特征在于，所述胶囊皮主要由明胶、纯化水和甘油组成。

7.根据权利要求6所述的含中药提取物的中药组合物，其特征在于，所述明胶和甘油的重量份分别为：明胶150份-450份、甘油50份-200份。

8.根据权利要求1至7任一项所述的含中药提取物的中药组合物在制备用于治疗胃粘膜损伤和抗幽门螺杆菌感染的药物中的应用。