CN108956843A - 一种半夏白术天麻汤冻干粉快速多信息薄层鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种半夏白术天麻汤冻干粉快速多信息薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，在二块薄层板上，同时鉴别了四味药材，甘草、白术在一块薄层板上，橘红、天麻在另一块薄层板上。薄板展开后，直接在紫外光灯365nm下，检视甘草和橘红的荧光斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液显色后，在紫外光灯365nm下，检视白术增荧光后的荧光斑点；喷以以等体积混合的3％磷钼酸乙醇溶液与10％硫酸乙醇溶液的混合溶液显色后，暗室内透过灯光检视天麻呈色的棕红色斑点，相互重叠，但在各自检视条件下，互不干扰。为半夏白术天麻汤冻干粉的质量控制，提供了简便、快捷的薄层方法。

Description

一种半夏白术天麻汤冻干粉快速多信息薄层鉴别方法

技术领域

本发明涉及一种半夏白术天麻汤冻干粉快速多信息薄层鉴别方法。

背景技术

在中药复方制剂中，特别是传统水煎煮的复方制剂，依据相似相容的提取原则，制剂中脂溶性的成分一部分是很难提取到的，水溶性成分提取的较多，相互干扰严重，水提取之后，原药材项下以脂溶性成分的薄层鉴别，有的已无法采用，必须寻找水溶性成分的鉴别特征点，限于技术的难度，所以其水提取制剂的薄层鉴别增订率低，定量测定指标少。以2015年版中国药典一部为例，收载的水煎煮的乙肝宁颗粒，由十三味中药组成，仅增订了4味药材的薄层鉴别，鉴别增订率为30％。不但鉴别增订率低，且鉴别方法也非常繁琐、复杂，4项鉴别的完成需要样品85g或15g(含乳糖)、仅前处理溶剂386ml、时间10～12小时。4项鉴别要制备4种供试品溶液，在4块薄层板上，4次展开完成；收载的二丁颗粒，由4味药材组成，仅增订了一项薄层鉴别，增订率25％。其前处理需要样品15g或3g(含乳糖)、处理溶剂82ml、时间2小时；收载的儿宝颗粒，由十一味药材组成，增订了4味药材的薄层鉴别，增订率36％。且鉴别方法也非常繁琐、复杂，4项鉴别要制备3种供试品溶液，在4块薄层板上，4次展开完成。共需要样品80g、仅前处理溶剂295ml、时间8小时。如加上展开剂和展开时间，花费的有机溶剂和时间，就更多了，等等，类似例子举不胜举。

综上，薄层鉴别基本都是一个品种，如有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。这样，一个含6～7项薄层鉴别和二项含量测定的质量标准检测完成，一般要花费一周的时间，如遇复试，时间翻倍，检测速度严重制约着中药现代化生产速度。所以寻找传统水提取制剂的简便、快捷检测方法、提高检测效率、降低检测成本，是中药质量控制必须突破的难关。

半夏白术天麻汤是国家中医药管理局公布的经典名方，由清半夏、天麻、茯苓、白术、甘草6味药材组成，加上水煎煮时，加进去的生姜和大枣，在冻干粉中一共含八味药材。其处方配比和制备工艺如下：

处方：半夏一钱五分、天麻、茯苓、橘红各一钱，白术三钱，甘草五分。

制法：取处方中的六味药材，加生姜一片，大枣二枚,水煎煮，煎煮液浓缩，冷冻干燥，得冻干粉。

为确保制剂的质量，对半夏白术天麻汤冻干粉进行了薄层鉴别研究。

发明内容

本发明就是针对目前一个品种，如有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。通过展开剂的不同组合与其比例、显色剂、薄层载体以及检测条件等参数研究，创建了采用同一供试品溶液，在二块薄层板上，4种不同的检视条件下，鉴别4味药材的一测多评薄层鉴别新模式。甘草、白术在另一块薄层板上，橘红、天麻在一块薄层板上。白术水提取制剂的增荧光检测、天麻的显色技术为首次报道。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

A.取半夏白术天麻汤冻干粉0.5g，加甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取白术对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为白术对照药材溶液；再取甘草对照药材0.1g，加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为甘草对照药材溶液；吸取甘草对照药材溶液2～3μl、白术对照药材溶液6～8μl、供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比13∶2∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点(图1)；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点(图2)；

B.取天麻对照药材和橘红对照药材各0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为各自对照药材溶液；另取天麻素和橙皮苷对照品适量，分别加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为各自对照品溶液；吸取天麻素对照品溶液3～4μl、橙皮苷对照品溶液5～6μl、对照药材溶液各5～6μl、A项下的供试品溶液6～8μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比8∶3∶1∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-丁酮-甲醇-甲酸-水为展开剂，展至约3cm，取出，热风吹干，再置同一展开剂中展至10cm，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与橘红对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点(图3)；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与橙皮苷对照品和橘红对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点(图4)；再喷以体积比1∶1混合的3％磷钼酸乙醇溶液与10％硫酸乙醇溶液的混合溶液，105℃加热至斑点清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与天麻素和天麻对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点(图5)。

本发明的原理如下：

依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再用不同组分、不同比例、不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但通过不同的显色手段，使其在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的颜色斑点，获得多信息的薄层色谱图。实现简便、快捷、低成本、高效率的薄层愿望。

本发明的创新点及有益效果如下：

1.以体积比13∶2∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开甘草和白术，首先在紫外光灯365nm下，检视甘草的荧光主斑点，白术是无任何信息斑点的；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视白术增荧光后的荧光主斑点，斑点清晰鲜亮，很易检视。其创新之处就在于1)白术一直检测的都是脂溶性成分与香草醛硫酸溶液显色的颜色斑点，其灵敏度不高，还未见检视与硫酸乙醇溶液显色后的水溶性成分的高灵敏度荧光斑点；2)本展开剂为碱性的，不但可以使复方制剂中很大一部分酸性成分成盐，减缓其吸附、解吸附能力，降低薄层背景的干扰，使被酸性成分覆盖的白术斑点解除覆盖，还能增强显色后的白术荧光斑点的荧光强度；3)解决了目前为止，白术水煎煮之后，脂溶性成分丢失，寻找不到薄层鉴别信息斑点的难题；4)本鉴别检视到的是白术水溶性最大一个荧光斑点，而且该展开剂正好将对照药材的一些脂溶性荧光点都推到了展开剂的前沿，解决了制剂中白术主要为水溶性成分，而白术对照药材脂溶性成分含量高，致使二者斑点明显不一致，而无法描述难题。5)为水煎煮复方制剂中的白术检测，提供了行之有效的鉴别方法，具有创新性和实用性。

2.以体积比8∶3∶1∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-丁酮-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开天麻和橘红，先在紫外光灯365nm下检视，橘红3个荧光主斑点，再在紫外光灯254nm下检视橘红和橙皮苷的棕褐色斑点，橙皮苷和亮蓝色斑点是紧挨着的两种化学成分(图6)。再喷以以等体积混合的3％磷钼酸乙醇溶液与10％硫酸乙醇溶液的混合溶液，105℃烘烤至斑点清晰，置暗室内，透过灯光检视天麻素和天麻对照药材的棕红色主斑点；综合分析本鉴别，认为：在亮蓝色荧光斑点下方是橙皮苷的棕褐色斑点，与亮兰色荧光斑点重叠的还有显色后的天麻素斑点，它们虽然重叠。但一个观察荧光斑点，一个观察棕褐色斑点，一个观察显色后的斑点，做到了互不干扰，为首次报道。

3.目前为止，有关天麻薄层鉴别的显色剂都是10％的磷钼酸乙醇溶液，它是一个广范围的显色剂，与大部分成分都反应，都呈现出蓝色的斑点，难以从颜色上识别特征斑点。不仅如此，而10％的磷钼酸乙醇溶液是一种蓝色的溶液，对喷雾后的薄层板，有颜色背景干扰，且显色速度非常缓慢，必须长时间加热，很易出现显色不到位的情况，影响鉴别的准确性判断。而本申请采用的是以等体积混合的3％磷钼酸乙醇溶液与10％硫酸乙醇溶液的混合溶液，不但明显提升了天麻的显色速度，还使天麻的有效成分天麻素斑点的颜色，由蓝色变为棕红色，明显与橙皮苷的蓝色斑点相区别，有助于提升检测人员对薄层斑点的判断能力。

4.由等体积的3％磷钼酸乙醇溶液与10％硫酸乙醇溶液组成的混合溶液，作为薄层鉴别显色剂，不但显色速度快，而且还能使中药的不同有效成分，产生不同颜色，还未见报道，为薄层鉴别领域提供了一种新的显色剂，具有创新性和推广应用前景。

5.与背景技术项下例举的传统薄层鉴别相比，该鉴别完成，只需样品0.5g、白术、橘红、天麻对照药材各0.2g、甘草对照药材0.1g，有机处理溶剂11ml、展开剂30ml、时间1小时。方法之简便、快捷、高效，检测信息之多，是目前已报道方法都不具备的。为半夏白术天麻汤冻干粉的质量监督，提供了行之有效的质控方法。体现了检测技术创新的必要性以及带来的显著有益效果。

附图说明

图1为半夏白术天麻汤冻干粉在紫外光灯365nm下检视的甘草TLC图。

图2为半夏白术天麻汤冻干粉10％硫酸乙醇溶液显色后，在紫外光灯365nm下检视的白术TLC图。

图3为半夏白术天麻汤冻干粉在紫外光灯365nm下检视的橘红TLC图

图4为半夏白术天麻汤冻干粉在紫外光灯254nm下检视的橘红和橙皮苷TLC图

图5为半夏白术天麻汤冻干粉喷以以体积比1∶1混合的3％磷钼酸乙醇溶液和10％硫酸乙醇溶液的混合溶液显色后，透过灯光检视的天麻和天麻素TLC图

图6为半夏白术天麻汤冻干粉在双光源紫外光灯365nm和254nm下的TLC图

图1、2为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.白术空白 2.白术对照药材 3.4.5样品 6.甘草空白 7.甘草对照药材

图3、4为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中1.天麻素 2.天麻对照药材 3.4.5样品 6.橘红对照药材 7.橙皮苷对照品

图6中1.2.3样品 4.橘红对照药材 5.橙皮苷

本发明具体实施方式如下：

A.取半夏白术天麻汤冻干粉0.5g，加甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取白术对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为白术对照药材溶液；再取甘草对照药材0.1g，加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为甘草对照药材溶液；吸取甘草对照药材溶液2～3μl、白术对照药材溶液6～8μl、供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比13∶2∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；

B.取天麻对照药材和橘红对照药材各0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为各自对照药材溶液；另取天麻素和橙皮苷对照品适量，分别加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为各自对照品溶液；吸取天麻素对照品溶液3～4μl、橙皮苷对照品溶液5～6μl、对照药材溶液各5～6μl、A项下的供试品溶液6～8μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比8∶3∶1∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-丁酮-甲醇-甲酸-水为展开剂，展至约3cm，取出，热风吹干，再置同一展开剂中展至10cm，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与橘红对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与橙皮苷对照品和橘红对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以体积比1∶1混合的3％磷钼酸乙醇溶液与10％硫酸乙醇溶液的混合溶液，105℃加热至斑点清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与天麻素和天麻对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点。

Claims (2)

1.一种半夏白术天麻汤冻干粉快速多信息薄层鉴别方法，其特征在于：

A.取半夏白术天麻汤冻干粉0.5g，加甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取白术对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为白术对照药材溶液；再取甘草对照药材0.1g，加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为甘草对照药材溶液；吸取甘草对照药材溶液2～3μl、白术对照药材溶液6～8μl、供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比13∶2∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；

B.取天麻对照药材和橘红对照药材各0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为各自对照药材溶液；另取天麻素和橙皮苷对照品适量，分别加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为各自对照品溶液；吸取天麻素对照品溶液3～4μl、橙皮苷对照品溶液5～6μl、对照药材溶液各5～6μl、A项下的供试品溶液6～8μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比8∶3∶1∶0.2∶0.2的乙酸乙酯-丁酮-甲醇-甲酸-水为展开剂，展至约3cm，取出，热风吹干，再置同一展开剂中展至10cm，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与橘红对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与橙皮苷对照品和橘红对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以体积比1∶1混合的3％磷钼酸乙醇溶液与10％硫酸乙醇溶液的混合溶液，105℃加热至斑点清晰，置暗室内，透过灯光检视，供试品色谱中，在与天麻素和天麻对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点。

2.根据权利要求1所述的一种半夏白术天麻汤冻干粉快速多信息薄层鉴别方法，其特征在于所述的冻干粉每1g相当原生药材2.4～2.8g。