CN108840845A - 从苍耳中提取苍耳亭的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，包括以下步骤：向苍耳粗粉中加入纤维素酶溶液、缓冲溶液，45℃水浴加热，酶解1.5～2.5h后，灭活5～10min，然后加入仿生提取液，在37℃、超声波辅助下提取，即得所述苍耳粗粉提取物，所述苍耳粗粉与纤维素酶溶液、缓冲溶液、仿生提取液的质量体积比为1g:2.5～3.4ml:10～16.7ml:30～35ml；将所述苍耳粗粉提取物进行分离、纯化、浓缩，即得苍耳亭。本发明的从苍耳中提取苍耳亭的方法，获得的苍耳亭纯度可达98％。
Description
技术领域
本发明涉及天然化合物的提取方法，更具体的说，涉及一种从苍耳中提取苍耳亭的方法。
背景技术
苍耳化学成分复杂，其主要活性成分为倍半萜内酯类化合物。目前，现有研究中涉及单个倍半萜内酯化合物的提取与分离方面的成果甚少。苍耳亭是倍半萜内酯类化合物中药理活性最高的一种成分，能有效抑制由于酸碱而引起的溃疡等疾病；但是由于苍耳中含有的苍耳亭含量较低，且不同苍耳样品中苍耳亭含量差别较大，因而导致在苍耳亭提取方面，存在提取技术繁琐，效率低且纯度不高等问题。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种从苍耳中提取苍耳亭的方法，获得的苍耳亭纯度可达98％。
为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了一种从苍耳中提取苍耳亭的方法，包括以下步骤：
向苍耳粗粉中加入纤维素酶溶液、缓冲溶液，45℃水浴加热，酶解1.5～2.5h后，灭活5～10min，然后加入仿生提取液，在37℃、超声波辅助下提取，即得所述苍耳粗粉提取物；
所述苍耳粗粉与纤维素酶溶液、缓冲溶液、仿生提取液的质量体积比为1g:2.5～3.4ml:10～16.7ml:30～35ml；
将所述苍耳粗粉提取物进行分离、纯化、浓缩，即得苍耳亭。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述苍耳粗粉的制备包括以下步骤：
S1、将重量份为10～20份的苍耳用清水冲洗干净后，干燥至恒重，粉碎，并过50～100目筛后，在萃取温度为35～40℃、萃取压力为35～40MPa和二氧化碳流量为40～50L/h的条件下进行超临界二氧化碳萃取1～2h后，制得苍耳萃取物；
S2、将S1中的苍耳萃取物加入重量份10～20份的水，于温度为70～80℃下煎煮2～3h，连续过滤3次，得到滤液和第一滤渣，备用；
S3、将S2中的滤液经离心机在转速4000rpm下离心20～30min，分离出上清液，沉淀物与第一滤渣合并，得第二滤渣；
S4、将S3中的第二滤渣置于体积分数为85～90％的乙醇溶液中浸泡5～10h，过滤，得到浸泡液和第三滤渣；
S5、将S4中的第三滤渣置于渗漉装置中，使用S4中的浸泡液进行渗漉，控制渗漉流速为300～400ml/h，得到渗漉液，然后将渗漉液与S3中的上清液混合，真空浓缩干燥后研磨，即得苍耳粗粉。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述分离、纯化、浓缩包括以下步骤：
A1、将苍耳粗粉提取物与硅胶混合，得苍耳硅胶粉；
A2、将A1中的苍耳硅胶粉上硅胶柱，进行第一次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，减压浓缩，制得苍耳亭浓缩粗样；
A3、将A2中的苍耳亭浓缩粗样上反相硅胶柱，进行第二次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，用石油醚进行脱脂，然后用乙酸乙酯-乙酸丁酯萃取，减压浓缩，即得苍耳亭。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳亭的方中，所述缓冲溶液为NaAc-HAc缓冲溶液,其固液比为1:10～1:12.5，pH为4.5；
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述仿生提取液的配制方法为：每L的水中加入9g的氯化钠、3.2g的胃蛋白酶与0.02mol的盐酸，且将pH值调至6.0。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A2中所述第一次梯度洗脱中所用的洗脱剂为氯仿和甲醇的混合液，氯仿和甲醇的质量比依次为80:1～100:1、18:1～25:1、3:1～5:1、0.8:1～1:1。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A3中所述第二次梯度洗脱中所用的洗脱剂为甲醇溶液，甲醇溶液的质量分数依次为75～85％、85～95％、100％。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述乙酸乙酯-乙酸丁酯中的乙酸乙酯与乙酸丁酯体积比1.5:1～2.5:1。
本发明至少包括以下有益效果：
1、本发明提供了一种从苍耳中提取苍耳亭的方法，获得的苍耳亭纯度可达98％。
2、本发明设计中，通过酶解、超声波辅助等方法提取苍耳亭，可以提高苍耳亭的纯度。
3、本发明设计中，还提供了一种检测苍耳中苍耳亭含量的方法，用以提高苍耳亭的纯度。基于高效液相色谱技术，高效快速检测苍耳样品中是否含有苍耳亭、含量是否符合要求，针对符合要求的样品进行有目的的提取分离，即可获得高纯度的苍耳亭。本检测方法的具体步骤为：将苍耳样品进行提取后，得到苍耳粗粉提取物，进入高效液相色谱仪检测；与苍耳亭对照品相同保留时间的色谱峰峰面积大于50％(积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一化法计算)；或者在没有对照品的情况下，保留时间在9.5-11.5分钟内，同时具有278纳米紫外末端吸收的色谱峰峰面积大于50％，即可作为苍耳亭提取的材料。本检测方法快速准确，操作简单。
4、本发明设计中，还提供了一种苍耳粗粉的制备方法，可以提高苍耳粗粉的提取含量，进而提高苍耳亭的纯度。在苍耳粗粉的制备方法中，运用了超临界二氧化碳萃取法、渗漉法对苍耳进行提取，可以大幅提高苍耳粗粉的产量。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为苍耳亭纯度实验中A1组的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
从苍耳中提取苍耳亭的方法，包括以下步骤：向苍耳粗粉中加入纤维素酶溶液、缓冲溶液，45℃水浴加热，酶解1.5h后，灭活5min，然后加入仿生提取液，在37℃、超声波辅助下提取，即得所述苍耳粗粉提取物，所述苍耳粗粉与纤维素酶溶液、缓冲溶液、仿生提取液的质量体积比为1g:2.5ml:10ml:30ml；将所述苍耳粗粉提取物进行分离、纯化、浓缩，即得苍耳亭。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述分离、纯化、浓缩包括以下步骤：
A1、将苍耳粗粉提取物与硅胶混合，得苍耳硅胶粉；
A2、将A1中的苍耳硅胶粉上硅胶柱，进行第一次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，减压浓缩，制得苍耳亭浓缩粗样；
A3、将A2中的苍耳亭浓缩粗样上反相硅胶柱，进行第二次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，用石油醚进行脱脂，然后用乙酸乙酯-乙酸丁酯萃取，减压浓缩，即得苍耳亭。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述缓冲溶液为NaAc-HAc缓冲溶液,其固液比为1:10，pH为4.5；
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述仿生提取液的配制方法为：每L的水中加入9g的氯化钠、3.2g的胃蛋白酶与0.02mol的盐酸，且将pH值调至6.0。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A2中所述第一次梯度洗脱中所用的洗脱剂为氯仿和甲醇的混合液，氯仿和甲醇的质量比依次为80:1、18:1、3:1、0.8:1。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A3中所述第二次梯度洗脱中所用的洗脱剂为甲醇溶液，甲醇溶液的质量分数依次为75％、85％、100％。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述乙酸乙酯-乙酸丁酯中的乙酸乙酯与乙酸丁酯体积比1.5:1。
实施例2
从苍耳中提取苍耳亭的方法，包括以下步骤：向苍耳粗粉中加入纤维素酶溶液、缓冲溶液，45℃水浴加热，酶解2.0h后，灭活8min，然后加入仿生提取液，在37℃、超声波辅助下提取，即得所述苍耳粗粉提取物，所述苍耳粗粉与纤维素酶溶液、缓冲溶液、仿生提取液的质量体积比为1g:3.0ml:15ml:33ml；将所述苍耳粗粉提取物进行分离、纯化、浓缩，即得苍耳亭。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述分离、纯化、浓缩包括以下步骤：
A1、将苍耳粗粉提取物与硅胶混合，得苍耳硅胶粉；
A2、将A1中的苍耳硅胶粉上硅胶柱，进行第一次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，减压浓缩，制得苍耳亭浓缩粗样；
A3、将A2中的苍耳亭浓缩粗样进行上反相硅胶柱，进行第二次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，用石油醚进行脱脂，然后用乙酸乙酯-乙酸丁酯萃取，减压浓缩，即得苍耳亭。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述缓冲溶液为NaAc-HAc缓冲溶液,其固液比为1:11，pH为4.5；
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述仿生提取液的配制方法为：每L的水中加入9g的氯化钠、3.2g的胃蛋白酶与0.02mol的盐酸，且将pH值调至6.0。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A2中所述第一次梯度洗脱中所用的洗脱剂为氯仿和甲醇的混合液，氯仿和甲醇的质量比依次为90:1、21:1、4:1、0.9:1。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A3中所述第二次梯度洗脱中所用的洗脱剂为甲醇溶液，甲醇溶液的质量分数依次为80％、90％、100％。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述乙酸乙酯-乙酸丁酯中的乙酸乙酯与乙酸丁酯体积比2.0:1。
实施例3
从苍耳中提取苍耳亭的方法，包括以下步骤：向苍耳粗粉中加入纤维素酶溶液、缓冲溶液，45℃水浴加热，酶解2.5h后，灭活10min，然后加入仿生提取液，在37℃、超声波辅助下提取，即得所述苍耳粗粉提取物，所述苍耳粗粉与纤维素酶溶液、缓冲溶液、仿生提取液的质量体积比为1g:3.4ml:16.7ml:35ml；将所述苍耳粗粉提取物进行分离、纯化、浓缩，即得苍耳亭。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述分离、纯化、浓缩包括以下步骤：
A1、将苍耳粗粉提取物与硅胶混合，得苍耳硅胶粉；
A2、将A1中的苍耳硅胶粉上硅胶柱，进行第一次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，减压浓缩，制得苍耳亭浓缩粗样；
A3、将A2中的苍耳亭浓缩粗样进行上反相硅胶柱，进行第二次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，用石油醚进行脱脂，然后用乙酸乙酯-乙酸丁酯萃取，减压浓缩，即得苍耳亭。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述缓冲溶液为NaAc-HAc缓冲溶液,其固液比为1:12.5，pH为4.5；
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述仿生提取液的配制方法为：每L的水中加入9g的氯化钠、3.2g的胃蛋白酶与0.02mol的盐酸，且将pH值调至6.0。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A2中所述第一次梯度洗脱中所用的洗脱剂为氯仿和甲醇的混合液，氯仿和甲醇的质量比依次为100:1、25:1、5:1、1:1。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A3中所述第二次梯度洗脱中所用的洗脱剂为甲醇溶液，甲醇溶液的质量分数依次为85％、95％、100％。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述乙酸乙酯-乙酸丁酯中的乙酸乙酯与乙酸丁酯体积比2.5:1。
实施例4
从苍耳中提取苍耳亭的方法，包括以下步骤：向苍耳粗粉中加入纤维素酶溶液、缓冲溶液，45℃水浴加热，酶解2.0h后，灭活8min，然后加入仿生提取液，在37℃、超声波辅助下提取，即得所述苍耳粗粉提取物，所述苍耳粗粉与纤维素酶溶液、缓冲溶液、仿生提取液的质量体积比为1g:3.0ml:15ml:33ml；将所述苍耳粗粉提取物进行分离、纯化、浓缩，即得苍耳亭。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述苍耳粗粉的制备包括以下步骤：
S1、将重量份为15份的苍耳用清水冲洗干净后，干燥至恒重，粉碎，并过60目筛后，在萃取温度为38℃、萃取压力为38MPa和二氧化碳流量为45L/h的条件下进行超临界二氧化碳萃取1.5h后，制得苍耳萃取物；
S2、将S1中的苍耳萃取物加入重量份15份的水，于温度为75℃下煎煮2.5h，连续过滤3次，得到滤液和第一滤渣，备用；
S3、将S2中的滤液经离心机在转速4000rpm下离心25min，分离出上清液，沉淀物与第一滤渣合并，得第二滤渣；
S4、将S3中的第二滤渣置于体积分数为88％的乙醇溶液中浸泡7h，过滤，得到浸泡液和第三滤渣；
S5、将S4中的第三滤渣置于渗漉装置中，使用S4中的浸泡液进行渗漉，控制渗漉流速为350ml/h，得到渗漉液，然后将渗漉液与S3中的上清液混合，真空浓缩干燥后研磨，即得苍耳粗粉。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述分离、纯化、浓缩包括以下步骤：
A1、将苍耳粗粉提取物与硅胶混合，得苍耳硅胶粉；
A2、将A1中的苍耳硅胶粉上硅胶柱，进行第一次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，减压浓缩，制得苍耳亭浓缩粗样；
A3、将A2中的苍耳亭浓缩粗样上反相硅胶柱，进行第二次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，用石油醚进行脱脂，然后用乙酸乙酯-乙酸丁酯萃取，减压浓缩，即得苍耳亭。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述缓冲溶液为NaAc-HAc缓冲溶液,其固液比为1:11，pH为4.5；
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述仿生提取液的配制方法为：每L的水中加入9g的氯化钠、3.2g的胃蛋白酶与0.02mol的盐酸，且将pH值调至6.0。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A2中所述第一次梯度洗脱中所用的洗脱剂为氯仿和甲醇的混合液，氯仿和甲醇的质量比依次为90:1、21:1、4:1、0.9:1。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，A3中所述第二次梯度洗脱中所用的洗脱剂为甲醇溶液，甲醇溶液的质量分数依次为80％、90％、100％。
所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法中，所述乙酸乙酯-乙酸丁酯中的乙酸乙酯与乙酸丁酯体积比2.0:1。
苍耳亭纯度实验
1、实验原理：先用高效液相色谱仪对苍耳粗粉进行检测，当苍耳粗粉检测合格以后，再进行苍耳亭提取，可以提高苍耳亭的纯度。
2、实验步骤：
步骤一：苍耳粗粉检测
取苍耳粗粉分别编号为A1、A2、A3、A4组，加入纤维素酶溶液、NaAc-HAc缓冲溶液，经45度水浴加热酶解后，高温灭活，再加入仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)超声波辅助提取30min，冷却后过滤，取续滤液20ml水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至容量瓶定容，过滤，进入高效液相色谱仪检测。如果苍耳亭对应的色谱峰面积大于50％，则说明该样品可作为苍耳亭提取的材料。各实验组的实验参数以表格形式呈现如下：
表1苍耳粗粉检测实验参数
| A1 | A2 | A3 | A4 | |
| 苍耳粗粉质量(g) | 2 | 1.5 | 3 | 3 |
| 纤维素酶溶液体积(ml) | 5 | 5 | 10 | 10 |
| 缓冲溶液体积(ml) | 25 | 25 | 30 | 50 |
| 酶解时间(h) | 2 | 1.5 | 2.5 | 2.5 |
| 灭活时间(min) | 8 | 5 | 10 | 10 |
| 仿生提取液(ml) | 70 | 50 | 90 | 100 |
| 色谱峰面积(％) | 90 | 76 | 94 | 95 |
由表1数据可知，A1、A2、A3、A4组中的苍耳粗粉在高效液相色谱仪检测的色谱峰面积全部大于50％，说明四组的苍耳粗粉都是合格的提取样品。
步骤二：苍耳亭提取
分别称取A1、A2、A3、A4组中检测合格的苍耳粗粉500g，编号为B1、B2、B3、B4组，过目筛后，加入纤维素酶溶液、pH为4.5的NaAc-HAc缓冲溶液，经45℃水浴加热酶解后，高温灭活，然后用pH为6.0的仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)在37℃、500W超声波辅助下提取30min，冷却后过滤，合并滤液，50℃水浴加热浓缩，与100-200目硅胶混合，得苍耳硅胶粉。
将苍耳硅胶粉上硅胶柱(硅胶为200-300目)，用氯仿和甲醇的混合液对产物进行梯度洗脱，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光(278nm)下观察显色，与苍耳亭的标准品对比，找出并提取含有苍耳亭的粗样，合并相同样，得苍耳亭粗样，减压浓缩，得到苍耳亭浓缩粗样。
将苍耳亭浓缩粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述苍耳亭浓缩粗样梯度洗脱，继续进行薄层层析，在紫外光(278nm)下观察显色，与苍耳亭的标样对比，将与苍耳亭的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述苍耳亭的纯化产物的甲醇溶液，该溶液用石油醚脱脂后，再用乙酸乙酯-乙酸丁酯萃取，减压浓缩除去溶剂，即得苍耳亭，苍耳亭的化学结构如下：
本实验中，各实验组中氯仿和甲醇的质量比数据如下：
B1组：氯仿和甲醇的质量比依次为100：1、25：1、5：1、1：1；B2组：氯仿和甲醇的质量比依次为80：1、20：1、4：1、1：1；B3组：氯仿和甲醇的质量比依次为90：1、18：1、3：1、0.8：1；B4组:氯仿和甲醇的质量比依次为100：1、25：1、5：1、1：1。
各实验组中甲醇溶液的质量分数的数据如下：
B1组：甲醇溶液的质量分数依次为75％、85％和100％；B2组：甲醇溶液的质量分数依次为80％、90％和100％；B3组：甲醇溶液的质量分数依次为85％、95％和100％；B4组:甲醇溶液的质量分数依次为85％、95％和100％。
各组中的其他实验数据以表格形式呈现如下：
表2苍耳亭提取实验参数
| B1 | B2 | B3 | B4 | |
| 目筛(目) | 40 | 24 | 60 | 70 |
| 纤维素酶溶液体积(L) | 1.25 | 1.7 | 1.7 | 1.7 |
| 纤维素酶活力(U/g) | 20 | 30 | 35 | 35 |
| 缓冲溶液体积(L) | 6.25 | 8.3 | 5 | 8.3 |
| 缓冲溶液的固液比 | 1:12.5 | 1:15 | 1:10 | 1:12 |
| 酶解时间(h) | 2 | 1.5 | 2.5 | 2.5 |
| 灭活时间(min) | 8 | 5 | 10 | 10 |
| 仿生提取液(L) | 17.5 | 16.7 | 15 | 16.7 |
| 乙酸乙酯-乙酸丁酯体积比 | 2:1 | 1.5:1 | 2.5:1 | 2.5:1 |
经实验后，鉴定每组得到的苍耳亭纯度，结果如下：
表3苍耳亭纯度
| B1 | B2 | B3 | B4 | |
| 纯度(％) | 95 | 88 | 96 | 98 |
由表3数据可知，每组的苍耳亭纯度都达到了较高的程度，B4组的纯度已经达到了98％；说明本发明的苍耳中提取苍耳亭的方法，可以获得高纯度的苍耳亭，其纯度高达98％。
苍耳粗粉的制备实验
方法一
S1、将重量份为15g的苍耳用清水冲洗干净后，干燥至恒重，粉碎，并过60目筛后，在萃取温度为38℃、萃取压力为38MPa和二氧化碳流量为45L/h的条件下进行超临界二氧化碳萃取1.5h后，制得苍耳萃取物；
S2、将S1中的苍耳萃取物加入重量份15g的水，于温度为75℃下煎煮2.5h，连续过滤3次，得到滤液和第一滤渣，备用；
S3、将S2中的滤液经离心机在转速4000rpm下离心25min，分离出上清液，沉淀物与第一滤渣合并，得第二滤渣；
S4、将S3中的第二滤渣置于体积分数为88％的乙醇溶液中浸泡7h，过滤，得到浸泡液和第三滤渣；
S5、将S4中的第三滤渣置于渗漉装置中，使用S4中的浸泡液进行渗漉，控制渗漉流速为350ml/h，得到渗漉液，然后将渗漉液与S3中的上清液混合，真空浓缩干燥后研磨，最终得到2.15mg的苍耳粗粉。
方法二
S1、将重量份为15g的苍耳用清水冲洗干净后，干燥至恒重，粉碎，并过60目筛后，得到苍耳粉碎物；
S2、向S1中的苍耳粉碎物中加入重量份15g的水，于温度为75℃下煎煮2.5h，连续过滤3次，得到滤液，将滤液真空浓缩干燥后，最终得到1.35mg的苍耳粗粉。
方法一为本发明的苍耳粗粉的提取方法，方法二为传统的提取方法，从上面结果可知本发明的苍耳粗粉的提取方法的产率高于传统提取方法。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (8)
1.从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，包括以下步骤：
向苍耳粗粉中加入纤维素酶溶液、缓冲溶液，45℃水浴加热，酶解1.5～2.5h后，灭活5～10min，然后加入仿生提取液，在37℃、超声波辅助下提取，即得所述苍耳粗粉提取物；
所述苍耳粗粉与纤维素酶溶液、缓冲溶液、仿生提取液的质量体积比为1g:2.5～3.4ml:10～16.7ml:30～35ml；
将所述苍耳粗粉提取物进行分离、纯化、浓缩，即得苍耳亭。
2.如权利要求1所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，所述苍耳粗粉的制备包括以下步骤：
S1、将重量份为10～20份的苍耳用清水冲洗干净后，干燥至恒重，粉碎，并过50～100目筛后，在萃取温度为35～40℃、萃取压力为35～40MPa和二氧化碳流量为40～50L/h的条件下进行超临界二氧化碳萃取1～2h后，制得苍耳萃取物；
S2、将S1中的苍耳萃取物加入重量份10～20份的水，于温度为70～80℃下煎煮2～3h，连续过滤3次，得到滤液和第一滤渣，备用；
S3、将S2中的滤液经离心机在转速4000rpm下离心20～30min，分离出上清液，沉淀物与第一滤渣合并，得第二滤渣；
S4、将S3中的第二滤渣置于体积分数为85～90％的乙醇溶液中浸泡5～10h，过滤，得到浸泡液和第三滤渣；
S5、将S4中的第三滤渣置于渗漉装置中，使用S4中的浸泡液进行渗漉，控制渗漉流速为300～400ml/h，得到渗漉液，然后将渗漉液与S3中的上清液混合，真空浓缩干燥后研磨，即得苍耳粗粉。
3.如权利要求1所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，所述分离、纯化、浓缩包括以下步骤：
A1、将苍耳粗粉提取物与硅胶混合，得苍耳硅胶粉；
A2、将A1中的苍耳硅胶粉上硅胶柱，进行第一次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，减压浓缩，制得苍耳亭浓缩粗样；
A3、将A2中的苍耳亭浓缩粗样上反相硅胶柱，进行第二次梯度洗脱，收集每次含有苍耳亭的洗脱物，并合并，用石油醚进行脱脂，然后用乙酸乙酯-乙酸丁酯萃取，减压浓缩，即得苍耳亭。
4.如权利要求1所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为NaAc-HAc缓冲溶液,其固液比为1:10～1:12.5，pH为4.5。
5.如权利要求1所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，所述仿生提取液的配制方法为：每L的水中加入9g的氯化钠、3.2g的胃蛋白酶与0.02mol的盐酸，且将pH值调至6.0。
6.如权利要求3所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，A2中所述第一次梯度洗脱中所用的洗脱剂为氯仿和甲醇的混合液，氯仿和甲醇的质量比依次为80:1～100:1、18:1～25:1、3:1～5:1、0.8:1～1:1。
7.如权利要求3所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，A3中所述第二次梯度洗脱中所用的洗脱剂为甲醇溶液，甲醇溶液的质量分数依次为75～85％、85～95％、100％。
8.如权利要求3所述的从苍耳中提取苍耳亭的方法，其特征在于，所述乙酸乙酯-乙酸丁酯中的乙酸乙酯与乙酸丁酯体积比1.5:1～2.5:1。
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