CN108760450A - 用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统及染色方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种二抗染色系统及染色方法，尤其涉及用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统及染色方法。本发明优化了常规免疫组化实验中所需的试剂成分，提高了免疫组化的染色强度，降低了可能产生的非特异性染色背景，极大的提高了染色质量；并且试剂盛装在试剂瓶中，人工无需接触试剂，在仪器染色时即开即用，具有极大的便捷性和安全性；本发明能够用于免疫组化染色仪的自动染色，染色质量完全满足医院的临床病理诊断和高等院校的科研研究。

Description

用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统及染色方法

技术领域

本发明涉及一种二抗染色系统及染色方法，尤其涉及用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统及染色方法。

背景技术

在临床病理诊断和形态学研究中，免疫组织化学(简称免疫组化)染色是一种很重要的技术和手段。免疫组化技术于上世纪70年代应用于病理诊断始，目前在全球病理界已经得到广泛应用，它已成为病理医生常规工作中不可缺少的部分。免疫组化技术拥有特异性、敏感性强及操作简便等优点，使得免疫组化技术在疾病诊断领域得到了广泛的推广和应用，特别是临床病理诊断和肿瘤转化诊断。免疫组化技术不仅能提高病理诊断的准确性，同时也渗透到了临床和基础学科，在探讨疾病的病因学、发病机制及科研工作中起到了不可估量的作用。

免疫组化是利用抗原抗体的特异性结合，通过标记物的显色，来检测和定位组织或细胞中的抗原蛋白。在免疫组化实验中需要多种试剂配合使用，常规的免疫组化染色通常是通过手工操作进行，过程繁琐耗时又长，而且稳定性较差，重复性较低。手工染色所用试剂的灵敏度、亲和性、稳定性和质量都有所不足，这也导致了手工染色质量参差不齐，很难完全满足临床病理诊断的要求。而全自动免疫组化染色仪的出现极大的提高了染色效率，运行过程中无需人工干预，操作便捷。但是一般的免疫组化试剂仅适用于手工操作的染色要求，而无法应用于全自动免疫组化染色仪，使得染色灵敏度较低。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供结构设计合理、显著提高染色效果的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统及染色方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：

用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，包括用于盛装免疫组化试剂的试剂瓶；

用于装载和固定所述试剂瓶的试剂条，所述试剂条上设置有若干个卡槽；若干个所述试剂瓶安插在所述卡槽中；

设置在所述试剂条上的试剂条标签，用于辨识试剂条的信息；

设置在所述试剂瓶上的试剂瓶标签，用于辨识试剂瓶的信息；

和设置在所述试剂条上的系统标签，用于识别该二抗染色系统的信息。

本发明解决了常规免疫组化试剂无法完全满足仪器染色的缺点，明显的缩短了染色时间，并提高了工作效率。

进一步，所述试剂条标签包括第一试剂条标签和第二试剂条标签，所述第一试剂条标签设置于所述试剂条的左侧底部，所述第二试剂条标签设置于所述试剂条的右侧底部。该设计方便标签的识别。

进一步，所述试剂瓶的数量为8个。

更进一步，所述免疫组化试剂包括封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB浓缩液、DAB Buffer和苏木素复染液。

更进一步，所述免疫组化试剂按照封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB浓缩液、DAB Buffer、DAB Buffer、苏木素复染液的顺序分别盛装在所述试剂瓶中。

更进一步，所述封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB Buffer、DABBuffer、苏木素复染液的体积均为30mL，所述DAB浓缩液的体积为3mL。

更进一步，所述封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB Buffer、DABBuffer和苏木素复染液的体积均为15mL，所述DAB浓缩液的体积为1.5mL。

更进一步，所述封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗中分别含有0.05％-0.20％的叠氮钠。

用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，包括以下步骤：

S1、加入封阻液，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；

S2、加入封闭剂，封闭非特异性的蛋白结合位点；

S3、加入相应的鼠源或兔源一抗，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；

S4、加入反应增强液，增强聚合物二抗和一抗的特异性结合能力；

S5、加入聚合物二抗，与一抗特异性的结合；

S6、加入DAB浓缩液和DAB Buffer，DAB沉淀着色，室温染色时间3-10min；

S7、加入苏木素复染液，与染色质结合显蓝色，室温复染30秒。

进一步，在步骤S1之前还包括步骤S0，组织切片玻片的制作，步骤为：

步骤一、烤片，烘干玻片上的水分；

步骤二、脱蜡，溶解包埋组织的石蜡，使得组织切片完全暴露；

步骤三、水化，酒精洗去脱蜡液，并使组织切片细胞内充满水。

本发明同现有技术相比具有以下优点及效果：

1、本发明优化了常规免疫组化实验中所需的试剂成分，提高了免疫组化的染色强度，降低了可能产生的非特异性染色背景，极大的提高了染色质量；并且试剂盛装在试剂瓶中，人工无需接触试剂，在仪器染色时即开即用，具有极大的便捷性和安全性；

2、本发明能够用于免疫组化染色仪的自动染色，染色质量完全满足医院的临床病理诊断和高等院校的科研研究；

3、本发明包括了免疫组化染色的必要试剂，配套使用于全自动免疫组化染色仪，具有极高的灵敏度和亲和力；能够封闭内源性的过氧化物酶和非特异性的蛋白结合位点，减少了可能存在的染色背景，使背景着色更加清晰干净无杂质无残留，解决了长期以来影响染色质量的背景着色问题，能够完全满足仪器染色的病理诊断要求；

4、本发明在不同组织不同抗体的仪器染色效果明显。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明的结构示意图。

标号说明：

1、试剂条；2、试剂条标签；3、试剂瓶；4、试剂瓶标签；5、系统标签；6、卡槽。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。

本发明中的全自动免疫组化染色仪属于现有技术，该全自动免疫组化染色仪适用于石蜡、冰冻、穿刺、细胞涂片、骨髓片等多种标本；全自动免疫组化染色仪上设置有控制软件，可编程百余种标准化免疫组化和快速特殊染色程序，且程序可根据要求随时更改、定制特性，在全自动免疫组化染色仪上设置合适的孵育时间即可完成免疫组化染色。全自动免疫组化染色仪的上市极大地提高了病理诊断的工作效率，完全代替了繁琐复杂耗时冗长的手工染色。

如图1所示，本发明的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，包括试剂瓶3、试剂条1、试剂条标签2、试剂瓶标签4和系统标签5。

试剂瓶3用于盛装免疫组化试剂。试剂瓶3上设置有瓶盖，可对使用过的试剂进行密封保存。

试剂条1用于装载和固定试剂瓶3，试剂条1上设置有若干卡槽6，若干个试剂瓶3安插在卡槽6中。卡槽6无特殊结构，现有技术中的可以起到装载和固定试剂瓶3作用的结构均可用于卡槽6。试剂条1上设置有手柄。

试剂条标签2用于辨识试剂条1的信息。优选的，试剂条标签2包括第一试剂条标签和第二试剂条标签，第一试剂条标签设置于试剂条1的左侧底部，第二试剂条标签设置于试剂条1的右侧底部，避免标签较长，不易黏贴或扫描。在本实施例中，以全自动免疫组化染色仪进试剂的先后顺序而言，先进试剂的一侧为试剂条1的左侧底部，后进试剂的一侧为试剂条1的右侧底部。

优选的，试剂瓶3的数量为8个，分别标号为Peroxide Block、Immuno Block、Reaction Enchancer、Polymer、DAB Part A、DAB Part B和Hematoxylin。更优选的，免疫组化试剂包括封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB浓缩液、DAB Buffer和苏木素复染液。更有选的，免疫组化试剂按照封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB浓缩液、DAB Buffer、DAB Buffer、苏木素复染液的顺序分别盛装在试剂瓶3中。一种方案，封阻液在试剂瓶3中的体积为30mL，封闭剂在试剂瓶3中的体积为30mL，反应增强液在试剂瓶3中的体积为30mL，聚合物二抗在试剂瓶3中的体积为30mL，DAB Buffer在试剂瓶3中的体积为30mL，DAB Buffer在另一试剂瓶3中的体积仍为30mL，苏木素复染液在试剂瓶3中的体积为30mL，DAB浓缩液在试剂瓶3中的体积为7mL。另一种方案，封阻液在试剂瓶3中的体积为15mL，封闭剂在试剂瓶3中的体积为15mL，反应增强液在试剂瓶3中的体积为15mL，聚合物二抗在试剂瓶3中的体积为15mL，DAB Buffer在试剂瓶3中的体积为15mL，DAB Buffer在另一试剂瓶3中的体积仍为15mL，苏木素复染液在试剂瓶3中的体积为15mL，DAB浓缩液在试剂瓶3中的体积为1.5mL。更有选的，封阻液中含有0.05％-0.20％的叠氮钠，封闭剂中含有0.05％-0.20％的叠氮钠，反应增强液中含有0.05％-0.20％的叠氮钠，聚合物二抗中含有0.05％-0.20％的叠氮钠。

封阻液用于封闭失活内源性的过氧化物酶，是由30％过氧化氢溶液10ml，PH 7.4的PBS溶液90ml，终浓度0.05％的叠氮钠，混合均匀而成。PBS溶液是phosphate buffersaline的缩写，又称磷酸缓冲盐溶液，一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用；叠氮钠亦称“三氮化钠”，化学式NaN₃，分子量65.01。或封阻液是由30％过氧化氢溶液10ml，PH 7.4的PBS溶液90ml，终浓度0.10％的叠氮钠，混合均匀而成。或封阻液是由30％过氧化氢溶液10ml，PH 7.4的PBS溶液90ml，终浓度0.15％的叠氮钠，混合均匀而成。或封阻液是由30％过氧化氢溶液10ml，PH 7.4的PBS溶液90ml，终浓度0.20％的叠氮钠，混合均匀而成。封阻液盛装在标记有Peroxide Block的试剂瓶3中。

封闭液用以封闭非特异性的蛋白结合位点，是由1％BSA，0.5％Triton X-100，0.05％叠氮钠，0.01mol/L(摩尔每升)的PBS 100ml，调溶液PH为7.4，混合均匀而成。其中BSA为牛血清白蛋白，又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白；Triton X-100为聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子型表面活性剂(或称去污剂)，分子量为646.86(C34H62O11)，它能溶解脂质，以增加细胞膜对抗体的通透性。或封闭液是由1％BSA，0.5％Triton X-100，0.10％叠氮钠，0.01mol/L PBS 100ml，调溶液PH为7.4，混合均匀而成。或封闭液是由1％BSA，0.5％Triton X-100，0.15％叠氮钠，0.01mol/L PBS 100ml，调溶液PH为7.4，混合均匀而成。或封闭液是由1％BSA，0.5％Triton X-100，0.20％叠氮钠，0.01mol/L PBS 100ml，调溶液PH为7.4，混合均匀而成。封闭液盛装在标记有Immuno Block的试剂瓶3中。

反应增强液用于增强聚合物二抗与一抗的结合能力，是由终浓度50ug/ml的兔抗鼠IgG，PH 7.4的PBS 100ml，调溶液PH为7.4，加0.05％叠氮钠，混合均匀而成。其中鼠的某种蛋白质(比如某种细胞因子或者膜蛋白)对于兔来说是异物，所以当将鼠的这种蛋白质注入兔体内的时候，兔就会产生针对该抗原的抗体，当然抗体有好几种，其中IgG是最主要的抗体。或反应增强液是由终浓度50ug/ml的兔抗鼠IgG，PH 7.4的PBS 100ml，调溶液PH为7.4，加0.10％叠氮钠，混合均匀而成。或反应增强液是由终浓度50ug/ml的兔抗鼠IgG，PH7.4的PBS 100ml，调溶液PH为7.4，加0.15％叠氮钠，混合均匀而成。或反应增强液是由终浓度50ug/ml的兔抗鼠IgG，PH 7.4的PBS 100ml，调溶液PH为7.4，加0.20％叠氮钠，混合均匀而成。反应增强液盛装在标记有Reaction Enchancer的试剂瓶3中。反应增强液的使用能够增强聚合物二抗和一抗的特异性结合能力，提高了二抗的结合数量，加大了抗原抗体的反应灵敏度，使某些低丰度的蛋白染色也能较为理想，颜色更加鲜亮，这解决了某些免疫组化试剂DAB着色偏暗，颜色不够鲜艳，对于低表达的蛋白染色偏浅，无法达到理想的染色效果。

聚合物二抗用于特异性的结合与抗原蛋白反应的一抗，由终浓度300U/ml的HRP酶标记的二抗，0.01mol/L PBS 100ml，调溶液PH为7.4，加0.05％叠氮钠，混合均匀而成。其中HRP是horse radish peroxidase的缩写，中文名称辣根过氧化物酶，是植物中研究得最深入的一种过氧化物酶。或聚合物二抗由终浓度300U/ml的HRP酶标记的二抗，0.01mol/L PBS100ml，调溶液PH为7.4，加0.10％叠氮钠，混合均匀而成。或聚合物二抗由终浓度300U/ml的HRP酶标记的二抗，0.01mol/L PBS 100ml，调溶液PH为7.4，加0.15％叠氮钠，混合均匀而成。或聚合物二抗由终浓度300U/ml的HRP酶标记的二抗，0.01mol/L PBS 100ml，调溶液PH为7.4，加0.20％叠氮钠，混合均匀而成。聚合物二抗盛装在标记有Polymer的试剂瓶3中。

DAB浓缩液用于HRP催化的目的蛋白的显色，是由0.08g DAB溶解于10ml去离子水中，调整PH值7.2，混合均匀而成。其中DAB为Diaminobenzidine的缩写，中文名称为二氨基联苯胺，是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物，反应产物因不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物而被广泛地用于蛋白印迹(Western Blot,WB)、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)和免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)、斑点印迹(Dot blot)和生物芯片(Biochip)等的染色和显色反应。或DAB浓缩液是由0.10g DAB溶解于10ml去离子水中，调整PH值7.2，混合均匀而成。或DAB浓缩液是由0.12g DAB溶解于10ml去离子水中，调整PH值7.2，混合均匀而成。DAB浓缩液盛装在标记有DAB Part A的试剂瓶3中。

DAB buffer用于稀释DAB浓缩液与HRP催化的目的蛋白的显色，由0.5ml 30％过氧化氢溶液加入到300mlPH 7.4的PBS中，混合均匀而成。或DAB buffer由0.10ml 30％过氧化氢溶液加入到300mlPH 7.4的PBS中，混合均匀而成。或DAB buffer由0.15ml 30％过氧化氢溶液加入到300mlPH 7.4的PBS中，混合均匀而成。或DAB buffer由0.20ml 30％过氧化氢溶液加入到300mlPH 7.4的PBS中，混合均匀而成。DAB buffer盛装在标记有DAB Part B的试剂瓶3中。常规的DAB浓缩液和DAB Buffer混合后由于会自动氧化而出现沉淀，极大地影响了DAB的染色效果，但是本发明的DAB和DAB buffer混合后不会出现沉淀，因为在试剂中加入了抗氧化成分，能够抑制H₂O₂的自动氧化作用而不影响最终的染色效果，这一改进优化解决了仪器混合DAB后容易出现沉淀这一难题，提高了仪器和试剂的配合稳定性。

苏木素复染液用于染色质的着色，是由硫酸铝钾、苏木精、碘酸钠、和冰醋酸加入到去离子水中，混合均匀而成；其中硫酸铝钾4～7g，苏木精0.08～0.12g，碘酸钠0.01～0.05g，冰醋酸2ml，去离子水100ml。例如4g硫酸铝钾，0.08g苏木精，0.01g碘酸钠，2ml冰醋酸加入到100ml去离子水中，混合均匀；或5g硫酸铝钾，0.10g苏木精，0.03g碘酸钠，2ml冰醋酸加入到100ml去离子水中，混合均匀；或7g硫酸铝钾，0.12g苏木精，0.05g碘酸钠，2ml冰醋酸加入到100ml去离子水中，混合均匀。苏木素复染液盛装在标记有Hematoxylin的试剂瓶3中。

试剂瓶3标签用于辨识试剂瓶3的信息。优选的，试剂瓶3标签包括但不限于以下信息：试剂瓶3所盛装试剂的名称、试剂编号、试剂批号、试剂有效期、试剂保存条件。

系统标签5用于辨识该二抗染色系统的信息。优选的，系统标签5设置在试剂条1的手柄处。优选的，系统标签5包括但不限于以下信息：二抗染色系统备案信息、产品编号、产品有效期、产品规格、保存条件。

该用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统在使用前，首先控制软件扫描试剂条标签2注册成功后，全自动免疫组化染色仪即可扫描试剂瓶3标签读取试剂瓶3信息，识别试剂瓶3内盛放的试剂信息；并且本发明在首次注册成功后就能即开即用，无需再注册，用完后放入医用冷藏柜存放。本系统在运行中，全自动免疫组化染色仪自动混合DAB浓缩液及DAB buffer，无需人工操作，避免了致癌物质的直接接触。每个试剂条标签2和试剂瓶3标签由一串规律性的数字组合而成，具有唯一性和不可重复性，不同批次试剂系统具有固定编号的试剂条标签2，方便产品的查找、追踪和溯源。

用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，包括以下步骤：

S1、加入封阻液100ul，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；

S2、加入封闭剂100ul，封闭非特异性的蛋白结合位点；

S3、加入相应的鼠源一抗100ul，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；

S4、加入反应增强液100ul，增强聚合物二抗和一抗的特异性结合能力；

S5、加入聚合物二抗100ul，与一抗特异性的结合；

S6、加入由100ul的DAB浓缩液和100ul的DAB Buffer混合而成的混合液，DAB沉淀着色，室温染色时间3-10min；

S7、加入苏木素复染液100ul，与染色质结合显蓝色，室温复染30秒。

另一种方案，用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，包括以下步骤：

S1、加入封阻液150ul，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；

S2、加入封闭剂150ul，封闭非特异性的蛋白结合位点；

S3、加入相应的兔源一抗150ul，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；

S4、加入反应增强液150ul，增强聚合物二抗和一抗的特异性结合能力；

S5、加入聚合物二抗150ul，与一抗特异性的结合；

S6、加入由150ul的DAB浓缩液和150ul的DAB Buffer混合而成的混合液，DAB沉淀着色，室温染色时间3-10min；

S7、加入苏木素复染液150ul，与染色质结合显蓝色，室温复染30秒。

染色质是遗传物质的载体。染色质是指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构，是间期细胞遗传物质存在的形式。

优选的，在步骤S1中，加入封阻剂后，室温孵育10min，用现有技术中的TBS(中文名称为叔丁基二甲基硅基)清洗三次。

优选的，在步骤S2中，加入封阻剂后，室温孵育10min，用现有技术中的TBS清洗三次。

优选的，在步骤S3中，加热37℃孵育30min，TBS清洗三次。一抗是第一抗体的简称，是能和组织上暴露的抗原进行特异性结合的蛋白。本发明中，使用鼠源或兔源一抗，并将其盛放在其他容器内，通过全自动免疫组化染色仪自动添加到组织切片上。

优选的，在步骤S4中，加入反应增强液后，室温孵育15min，TBS清洗三次。

优选的，在步骤S5中，加入HRP酶标记的鼠兔或兔源通用型聚合物二抗后，加热37℃孵育20min，TBS清洗三次。

优选的，在步骤S6中，提前将DAB浓缩液和DAB Buffer混合均匀；室温染色结束后，去离子水清洗三次。

优选的，在步骤S7中，复染结束后，去离子水清洗三次。

优选的，在步骤S1之前还包括步骤S0，组织切片玻片的制作，步骤为：

步骤一、烤片，烘干玻片上的水分；

步骤二、脱蜡，用现有技术中的脱蜡液溶解包埋组织的石蜡，使得组织切片完全暴露；

步骤三、水化，酒精洗去脱蜡液，并使组织切片细胞内充满水。

更优选的，步骤一中包括全自动免疫组化染色仪加热至60℃，烤片30min，烘干玻片上的水分，使组织切片完全附着在载玻片上。

更优选的，步骤二中包括脱蜡液加热到72℃脱蜡2次，溶解包埋组织切片的石蜡，使组织切片完全暴露。

在染色结束后，取出组织切片进行脱水、透明和封片操作。脱水步骤为浸泡在80％酒精中3分钟，然后浸泡在90％酒精中3分钟，随后浸泡在95％酒精中3分钟，再浸泡在100％酒精中5分钟，最后再次浸泡在100％酒精中5分钟，完成梯度脱水。透明步骤为脱蜡液浸泡5分钟，然后再次脱蜡液浸泡5分钟。封片步骤为滴加适量的中性树胶进行封片，显微镜下观察染色效果并拍照。

中性树胶，是一种粘合剂，用于将载玻片和盖玻片粘合在一起，把生物组织切片封起来长久保留，属于现有技术。

此外，需要说明的是，本发明中的标签可以是条形码，可以是二维码，也可以是其他可识别的码。本说明书中所描述的具体实施例，其零、部件的形状、所取名称等可以不同。凡依本发明专利构思所述的构造、特征及原理所做的等效或简单变化，均包括于本发明专利的保护范围内。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，其特征在于：包括用于盛装免疫组化试剂的试剂瓶(3)；

用于装载和固定所述试剂瓶(3)的试剂条(1)，所述试剂条(1)上设置有若干个卡槽(6)；若干个所述试剂瓶(3)安插在所述卡槽(6)中；

设置在所述试剂条(1)上的试剂条标签(2)，用于辨识试剂条(1)的信息；

设置在所述试剂瓶(3)上的试剂瓶标签(4)，用于辨识试剂瓶(3)的信息；

和设置在所述试剂条(1)上的系统标签(5)，用于识别该二抗染色系统的信息。

2.根据权利要求1所述的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，其特征在于：所述试剂条标签(2)包括第一试剂条标签和第二试剂条标签，所述第一试剂条标签设置于所述试剂条的左侧底部，所述第二试剂条标签设置于所述试剂条(1)的右侧底部。

3.根据权利要求1所述的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，其特征在于：所述试剂瓶(3)的数量为8个。

4.根据权利要求3所述的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，其特征在于：所述免疫组化试剂包括封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB浓缩液、DAB Buffer和苏木素复染液。

5.根据权利要求4所述的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，其特征在于：所述免疫组化试剂按照封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB浓缩液、DAB Buffer、DAB Buffer、苏木素复染液的顺序分别盛装在所述试剂瓶(3)中。

6.根据权利要求5所述的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，其特征在于：所述封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB Buffer、DAB Buffer、苏木素复染液的体积均为30mL，所述DAB浓缩液的体积为3mL。

7.根据权利要求5所述的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，其特征在于：所述封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗、DAB Buffer、DAB Buffer和苏木素复染液的体积均为15mL，所述DAB浓缩液的体积为1.5mL。

8.根据权利要求4所述的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色系统，其特征在于：所述封阻液、封闭剂、反应增强液、聚合物二抗中分别含有0.05％-0.20％的叠氮钠。

9.用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、加入封阻液，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；

S2、加入封闭剂，封闭非特异性的蛋白结合位点；

S3、加入相应的鼠源或兔源一抗，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；

S4、加入反应增强液，增强聚合物二抗和一抗的特异性结合能力；

S5、加入聚合物二抗，与一抗特异性的结合；

S6、加入DAB浓缩液和DAB Buffer的混合液，DAB沉淀着色，室温染色时间3-10min；

S7、加入苏木素复染液，与染色质结合显蓝色，室温复染30秒。

10.根据权利要求9所述的用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，其特征在于，在步骤S1之前还包括步骤S0，组织切片玻片的制作，步骤为：

步骤一、烤片，烘干玻片上的水分；

步骤二、脱蜡，溶解包埋组织的石蜡，使得组织切片完全暴露；

步骤三、水化，酒精洗去脱蜡液，并使组织切片细胞内充满水。