CN108685990A - 增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方及其制备方法，属于中药技术领域。解决了猪免疫抑制导致的瘟疫苗免疫后不能有效的达到免疫效果的问题，其由以下重量份的原料组成：黄芪20‑30份，党参15‑25份，酒淫羊藿18‑25份，何首乌10‑20份，炒白术12‑20份，酒女贞子3‑10份。本发明主要用作中药免疫增强剂。

Description

增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方及其制备方法，属于中药技术领域。

背景技术

猪免疫抑制是现在猪场常年存在的问题，从而导致猪场疫苗免疫失败，使机体的特异性免疫功能和非特异性功能降低，致使猪场疫病难以控制。可由多种病原体(主要包括病毒、细菌、寄生虫等)、霉菌毒素、化学治疗剂及环境因素等引起。是兽医临床上疾病难以控制的主要原因。因此，养猪业迫切寻求增强猪瘟疫苗免疫作用的新方法。

中药具有多靶点、低耐药性、无兽药残留等优点，可以从整体上调节机体免疫力达到防治疾病的效果。中医认为免疫抑制是由于机体正气不足引起，防治猪免疫抑制应采用扶助正气的方式，即健脾益气、扶正祛邪。

发明内容

本发明的目的在于提供一种增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方及其制备方法，可有效防治猪的免疫抑制性疾病，提高免疫力，保障猪产品食用安全。

所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方，由以下重量份的的原料组成：黄芪20-30份，党参15-25份，酒淫羊藿18-25份，何首乌10-20份，炒白术12-20份，酒女贞子3-10份。

优选的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方，由以下重量份的的原料组成：黄芪25份，党参20份，酒淫羊藿20份，何首乌15份，炒白术15份，酒女贞子5份。

所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方的制备方法，包括以下步骤：

将白术放入铁锅中，不断翻动，炒至白术外观呈黄褐色，内部不变色，有香气时取出备用；

按照5:1-3的质量比将淫羊藿和黄酒搅拌均匀，用文火炒干，取出放凉备用；

按照5:1-3的质量比将女贞子和黄酒搅拌均匀，待黄酒被全部吸收后，放入铁锅中用文火炒干，取出放凉备用；

分别将黄芪、党参、酒淫羊藿、何首乌、炒白术、酒女贞子打碎过80目筛，然后按照黄芪20-30份，党参15-25份，酒淫羊藿18-25份，何首乌10-20份，炒白术12-20份，酒女贞子3-10份的比例将其粉末混合均匀即可。

与现有技术相比本发明的有益效果是：

本发明主要解决了猪免疫抑制导致的瘟疫苗免疫后不能有效的达到免疫效果的问题，本组方不添加任何激素，在给猪进行猪瘟疫苗免疫时，能够有效地改善各种原因导致猪的免疫抑制，提高猪的机体免疫功能，具有显著增强猪瘟疫苗的免疫效果，促进T淋巴细胞的增殖，增强其免疫力等功效，可有效提高猪瘟疫苗的免疫预防作用，无任何副作用，无残留，绿色无害。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方，由以下重量份的的原料组成：黄芪20份，党参15份，酒淫羊藿18份，何首乌10份，炒白术12份，酒女贞子3份。

所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方的制备方法，包括以下步骤：

将白术放入铁锅中，不断翻动，炒至白术外观呈黄褐色，内部不变色，有香气时取出备用；

按照5:1的质量比将淫羊藿和黄酒搅拌均匀，用文火炒干，取出放凉备用；

按照5:1的质量比将女贞子和黄酒搅拌均匀，待黄酒被全部吸收后，放入铁锅中用文火炒干，取出放凉备用；

分别将黄芪、党参、酒淫羊藿、何首乌、炒白术、酒女贞子打碎过80目筛，然后按照黄芪20份，党参15份，酒淫羊藿18份，何首乌10份，炒白术12份，酒女贞子3份的比例将其粉末混合均匀即可。

实施例2

所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方，由以下重量份的的原料组成：黄芪30份，党参25份，酒淫羊藿25份，何首乌20份，炒白术20份，酒女贞子10份。

所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方的制备方法，包括以下步骤：

将白术放入铁锅中，不断翻动，炒至白术外观呈黄褐色，内部不变色，有香气时取出备用；

按照5:3的质量比将淫羊藿和黄酒搅拌均匀，用文火炒干，取出放凉备用；

按照5:3的质量比将女贞子和黄酒搅拌均匀，待黄酒被全部吸收后，放入铁锅中用文火炒干，取出放凉备用；

分别将黄芪、党参、酒淫羊藿、何首乌、炒白术、酒女贞子打碎过80目筛，然后按照黄芪30份，党参25份，酒淫羊藿25份，何首乌20份，炒白术20份，酒女贞子10份的比例将其粉末混合均匀即可。

实施例3

所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方，由以下重量份的的原料组成：黄芪25份，党参20份，酒淫羊藿20份，何首乌15份，炒白术15份，酒女贞子5份。

所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方的制备方法，包括以下步骤：

将白术放入铁锅中，不断翻动，炒至白术外观呈黄褐色，内部不变色，有香气时取出备用；

按照5:2的质量比将淫羊藿和黄酒搅拌均匀，用文火炒干，取出放凉备用；

按照5:1.5的质量比将女贞子和黄酒搅拌均匀，待黄酒被全部吸收后，放入铁锅中用文火炒干，取出放凉备用；

分别将黄芪、党参、酒淫羊藿、何首乌、炒白术、酒女贞子打碎过80目筛，然后按照黄芪25份，党参20份，酒淫羊藿20份，何首乌15份，炒白术15份，酒女贞子5份的比例将其粉末混合均匀即可。

实验

1材料与方法

1.1试验材料和试验用猪

1.1.1中药免疫增强剂 即本发明产品，由黄芪、党参、酒淫羊藿、何首乌、炒白术、酒女贞子打碎过80目筛，按比例配方混合而成，塑料袋500g分装备用。

1.1.2猪瘟兔化弱毒苗 山东齐鲁动物药品厂生产，批号：2017.02.08。

1.1.3猪瘟正向间接血凝诊断液(包括阴性、阳性血清和稀释液)购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号为20170304。

1.1.4猪瘟强毒石门系 由农业部动物检疫所青岛易邦生物工程公司研发中心实验室提供。

1.1.5其他材料 96孔110°V型血凝板、50μl微量移液器、微型振荡器等。

1.1.6试验猪 由临沂师范学院郯南养殖基地良种猪繁育示范场提供，选30～35日龄未进行猪瘟疫苗免疫的健康三元杂交仔猪〔杜洛克×(长白×约克夏)〕104头(公母各半)，随机分为6组，每组20头，其中Ⅵ为4头，Ⅰ组为不用药对照组，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组为中药免疫增强剂低、中、高剂量试验组，Ⅴ组为安全试验组，Ⅵ组为攻毒试验对照组。

1.2试验方法

对照组Ⅰ组，接种猪瘟兔化弱毒苗，每头仔猪2头份；

试验组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组，分别接种猪瘟兔化弱毒苗，每头仔猪2头份，在接种疫苗的当日开始，在饲料中分别添加0.5％，1％，1.5％的本发明产品中药免疫增强剂，连续用药3d；

安全试验组Ⅴ组，接种猪瘟兔化弱毒苗，每头仔猪2头份，在接种疫苗的当日开始，在饲料中添加6％的本发明产品，连续用药7d，停药观察10d；

攻毒试验对照组Ⅵ组，不用药，也不接种猪瘟兔化弱毒苗疫苗。

试验期间各组饲养管理条件基本一致。

血样采自于疫苗接种前一天和疫苗接种后的15d、45d、75d和105d，分别由试验组和对照组猪只耳静脉采血5ml，析出血清，供测定血清抗体用。同时，分别取试验组和对照组猪只血样作成血涂片，供检测T淋巴细胞用。

1.3检测分析

1.3.1抗体检测 用正向间接血凝试验(IHA)法测定血清抗体效价水平。其操作方法和判定标准，均按《猪瘟正向间接血凝诊断试剂使用说明书》进行。试验数据取几何均数，试验组和对照组的数据比较用t检验分析。

1.3.2 T淋巴细胞计数 应用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色法，检查血涂片中T淋巴细胞占淋巴细胞总数的百分率。

1.3.3攻毒保护试验 为了检验免疫保护效果，于免疫后75d，分别随机选取试验组、对照组和攻毒试验对照组仔猪各10头，攻毒试验对照组4头，作猪瘟强毒攻击保护试验，每头猪肌注猪瘟强毒复壮后的脱纤原血清1.0ml。攻毒后连续观察16d，每天测量体温2次，观察临床表现及食欲情况。

2试验结果

2.1猪瘟抗体水平

猪瘟抗体水平检测结果见表1，可以看出，4个组的母源抗体水平均在1∶8～1∶64之间，比较平稳。试验结果表明，以1％和1.5％添加本发明产品的试验猪，IHA抗体效价水平都显著高于对照组(P<0.05)，而且试验组抗体产生的快，持续时间长。Ⅰ组和Ⅱ组之间差异不显著(P>0.05)，试验Ⅲ组、Ⅳ组之间差异不显著(P>0.05)，说明以1％添加本发明产品对猪瘟抗体产生、免疫抗病能力的提高具有明显的促进作用。低剂量添加效果增加不明显。

表1猪瘟抗体水平检测结果

注：表中效价均以[++]计

2.2 T淋巴细胞

外周血液中T淋巴细胞检查结果见表2，可以看出，疫苗接种后15d，试验中、高剂量组猪只T淋巴细胞的百分率平均值显著高于对照组(P<0.05)；疫苗接种后的45d、75d和105d，3个试验组T淋巴细胞的百分率平均值虽略高于对照组，但组间差异不显著(P>0.05)；对照组和低剂量组之间差异不显著(P>0.05)，试验中、高剂量组之间差异不显著(P>0.05)。说明以1％的剂量添加中药免疫增强剂有较好的免疫增强作用，低剂量添加效果不明显。

表2 T淋巴细胞的百分率(％)

组别	1天	15天	45天	75天	105天
						Ⅰ组	38.5±3.61	48.7±2.45	51.5±5.55	50.7±4.63	46.5±4.35
Ⅱ组	38.6±3.42	50.0±2.23	54.7±5.46	51.0±5.13	46.6±5.65
						Ⅲ组	39.0±3.12	56.8±3.02	57.7±2.52	51.8±5.42	46.8±5.46
Ⅳ组	38.8±4.11	57.1±3.25	57.9±2.84	51.9±4.97	46.9±5.63

2.3攻毒保护试验

试验猪攻毒后，73h对照组有2头仔猪出现明显的猪瘟临床症状，经102h、168h后表现为耐过；2头仔猪体温明显升高且食欲下降，44～79h后恢复正常。试验Ⅱ组于76h后有1头仔猪出现明显的猪瘟临床症状，经112h后表现为耐过；2头猪出现中度发热，食欲下降，52～62h后恢复正常。试验Ⅲ、Ⅳ组猪只未出现明显临床症状和体温变化。攻毒试验对照组于35h后4头仔猪先后出现明显的猪瘟临床症状，体温高达42.8℃，并于46.5h～52h全部死亡，剖检其组织具有明显的猪瘟病变。攻毒保护试验结果见表3。

表3 猪瘟强毒攻击保护试验结果

组别	攻毒头数(头)	最高体温(℃)	高热期(h)	经过(h)	保护率(％)
						对照组	10	41.2～41.7	37～96	44～168	100#
试验Ⅱ组	10	39.5～40.9	49～91	52～112	100※
						试验Ⅲ组	10	－	－	－	100
试验Ⅳ组	10	－	－	－	100
						攻毒对照组	4	41.9～42.8	35～48	46.5～52	0

注:#含2头耐过；※含1头耐过

由表3可以看出，对照组和本发明产品高、中、低剂量试验组都能提供有效地保护，保护率100％。对照组和低剂量组虽能提供保护，但不能控制猪瘟病毒对部分仔猪的感染。高剂量组和中剂量组既能提供有效地保护又能控制猪瘟病毒的感染。

2.4安全试验

Ⅴ组按6％在饲料中添加中药免疫增强剂，连续用药7d，停药观察10d。期间未发现任何不良反应，试验结束后随机取安全试验组和对照组仔猪各2头剖检观察各脏器无异常变化，安全试验组与对照组间也无肉眼可见的差异，主要器官(肝、胃、十二指肠、空肠、回肠和肾)组织切片亦未见异常变化。说明该药安全且有效。

实验表明，猪瘟疫苗接种的当日，以1％的剂量添加中药免疫增强剂混饲给药，可显著提高猪瘟疫苗免疫的IHA抗体效价水平，与对照组比较差异显著(P<0.05)。而且试验组抗体产生的快，持续时间长，说明中草药免疫增强剂对猪瘟抗体产生具有明显的促进作用，可有效地提高猪的体液免疫作用。

本发明中草药免疫增强剂能使猪只接种猪瘟疫苗后15d，外周血液中T淋巴细胞的百分率比对照组显著增高(P<0.05)，显示中草药免疫增强剂具有促进T淋巴细胞增殖和加强T细胞免疫功能的作用，从而提高机体的细胞免疫水平。有效提高猪瘟疫苗的免疫效果，这对于防止猪瘟的发生，具有较高的临床实用价值。

抗体效价与攻毒保护率成正相关。IHA抗体效价为4log2，攻毒保护率为60％，病毒分离阳性率为100％；IHA抗体效价为5Iog2，攻毒保护率为100％，但病毒分离阳性率为50％；IHA抗体效价为6Iog2以上时，攻毒保护率为100％，病毒分离阴性。表明抗体效价为6Iog2以下时，仅能抗死亡不能抗感染，当抗体效价大于6Iog2时，能抗感染，攻毒获全保护。从表1可以看出，以1％和1.5％的中药免疫增强剂在猪瘟疫苗免疫期间添加饲喂3天，75天血清抗体效价≥6Iog2，其攻毒保护试验也明显优于对照组和低剂量试验组。

本发明中草药免疫增强剂制作方便，价格便宜，每公斤自制中药免疫增强剂成本在4.7元左右，每头仔猪一个疗程用药成本在0.25元左右。

Claims (3)

1.一种增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方，其特征在于由以下重量份的的原料组成：黄芪20-30份，党参15-25份，酒淫羊藿18-25份，何首乌10-20份，炒白术12-20份，酒女贞子3-10份。

2.根据权利要求1所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方，其特征在于由以下重量份的的原料组成：黄芪25份，党参20份，酒淫羊藿20份，何首乌15份，炒白术15份，酒女贞子5份。

3.根据权利要求1所述的增强猪瘟疫苗免疫作用的无抗中药组方的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

将白术放入铁锅中，不断翻动，炒至白术外观呈黄褐色，内部不变色，有香气时取出备用；

按照5:1-3的质量比将淫羊藿和黄酒搅拌均匀，用文火炒干，取出放凉备用；

按照5:1-3的质量比将女贞子和黄酒搅拌均匀，待黄酒被全部吸收后，放入铁锅中用文火炒干，取出放凉备用；

分别将黄芪、党参、酒淫羊藿、何首乌、炒白术、酒女贞子打碎过80目筛，然后按照黄芪20-30份，党参15-25份，酒淫羊藿18-25份，何首乌10-20份，炒白术12-20份，酒女贞子3-10份的比例将其粉末混合均匀即可。