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CN108478604A - 一种沙门氏菌抑制剂 - Google Patents

一种沙门氏菌抑制剂 Download PDF

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CN108478604A CN201810400614.7A CN201810400614A CN108478604A CN 108478604 A CN108478604 A CN 108478604A CN 201810400614 A CN201810400614 A CN 201810400614A CN 108478604 A CN108478604 A CN 108478604A
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赵建新
刘俊生
陈卫
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Abstract

本发明涉及一种沙门氏菌抑制剂，属于生物医药技术领域。此抑制剂包含植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058，其既能够避免杀死大量对人体有益的肠道共生菌群，出现成肠道功能紊乱等对人体不利的副作用；又能够避免沙门氏菌产生抗性，致使生态失衡；且具有抑制效果良好，无滞后性的优势。

Description

一种沙门氏菌抑制剂
技术领域
本发明涉及一种沙门氏菌抑制剂，属于生物医药技术领域。
背景技术
沙门氏菌(Salmonella)属于肠杆菌科，是一种全球性的人畜共患病原菌，也是一种重要的食源性致病菌，沙门氏菌感染后的潜伏期一般为12至36小时，由其引起的沙门氏菌病(salmonellosis)，临床表现为腹部痉挛、腹泻、发烧、呕吐、胃肠炎等，严重时甚至可引起败血症，或新生儿致死等情况。
其传播媒介广泛，食源性的感染途径包括被沙门氏菌污染的水，新鲜或加工的肉类、乳品、蛋类、贝类、蔬菜等，发展中国家每年感染沙门氏菌的人数约为2000万，欧美发达国家的人群同样受到沙门氏菌的困扰，仅美国每年感人沙门氏菌的人数就可达140万。
沙门氏菌造成世界各国巨大的经济损失，严重威胁人们的健康，故控制沙门氏菌的感染对保证食品安全和人类公共卫生安全有着重要的意义。
目前应用于治疗沙门氏菌感染的药物以抗生素为主，但使用抗生素的同时也会杀死大量对人体有益的肠道共生菌群，出现成肠道功能紊乱等对人体不利的副作用；另外，长期使用抗生素导致沙门氏菌对常用的抗生素产生抗性，多重耐药性沙门氏菌的出现已经成为普遍现象。而抗生素的过度使用还会使环境中的抗生素含量增加，致使生态失衡；部分中药配方可缓解感染后的症状，但效果不理想，且与抗生素治疗相同的是二者均有滞后性的缺点。
因此，急需找到一种既能够避免杀死大量对人体有益的肠道共生菌群，出现成肠道功能紊乱等对人体不利的副作用；又能够避免沙门氏菌产生抗性，致使生态失衡；且抑制效果良好，无滞后性的沙门氏菌抑制剂。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种沙门氏菌抑制剂。此抑制剂包含植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058，其既能够避免杀死大量对人体有益的肠道共生菌群，出现成肠道功能紊乱等对人体不利的副作用；又能够避免沙门氏菌产生抗性，致使生态失衡；且具有抑制效果良好，无滞后性的优势。
本发明的技术方案如下：
本发明提供了一种沙门氏菌抑制剂，所述抑制剂的成分包含植物乳杆菌和/或其代谢物；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058；所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058已于2006年4月10日保藏于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No.M206033，保藏地址为武汉市武昌路伽山。所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058已于年月日(公开日)公开于公开号为的专利中。
在本发明的一种实施方式中，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058的含量不低于1×108CFU/g或1×108CFU/mL。
在本发明的一种实施方式中，所述抑制剂的成分还包含低聚糖。
在本发明的一种实施方式中，所述低聚糖为低聚木糖。
在本发明的一种实施方式中，所述低聚糖的含量不低于1％。
在本发明的一种实施方式中，所述抑制剂的成分还包含载体。
在本发明的一种实施方式中，所述载体为药学上可接受的载体。
在本发明的一种实施方式中，所述载体为药学上可接受的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种。
本发明提供了上述一种沙门氏菌抑制剂在抑制、预防沙门氏菌方面的应用。
本发明提供了上述一种沙门氏菌抑制剂在制备药品、食品、保健品方面的应用。
有益效果：
(1)本发明抑制剂使用的植物乳杆菌ZS2058能使小鼠感染沙门氏菌后的存活率从33.3％提高到53.3％，而低聚木糖能增强植物乳杆菌ZS2058对沙门氏菌感染的预防作用，使存活率提高到66.7％，低聚木糖使植物乳杆菌ZS2058的作用效果提高了，低聚木糖使植物乳杆菌对沙门氏菌感染的预防效果提高了67％((66.7％-53.3％)/(53.3％-33.3％)*100％＝67％)；
(2)本发明抑制剂能够避免杀死大量对人体有益的肠道共生菌群，出现成肠道功能紊乱等对人体不利的副作用；
(3)本发明抑制剂能够避免沙门氏菌产生抗性，致使生态失衡；
(4)本发明抑制剂具有抑制效果良好，无滞后性的优势；
(5)本发明抑制剂能够很好的降低沙门氏菌的感染率，将沙门氏菌的感染率降低60％左右。
附图说明
图1不同植物乳杆菌对沙门氏菌感染的抑制作用；
其中，control为PBS灌胃10天，后未经沙门氏菌感染；model为PBS灌胃10天，后经沙门氏菌感染；M3组为植物乳杆菌M3灌胃10天，后经沙门氏菌感染；M6组为植物乳杆菌M6灌胃10天，后经沙门氏菌感染；S2组为植物乳杆菌S2灌胃10天，后经沙门氏菌感染；T组为植物乳杆菌T灌胃10天，后经沙门氏菌感染；ZS2058组为植物乳杆菌ZS2058灌胃10天，后经沙门氏菌感染；LGG组为鼠李糖乳杆菌GG灌胃10天，后经沙门氏菌感染；
图2为葡萄糖(Glucose)对植物乳杆菌ZS2058生长的影响；
图3为低聚果糖(FOS)对植物乳杆菌ZS2058生长的影响；
图4为乳果糖(Lactulose)对植物乳杆菌ZS2058生长的影响；
图5为D-纤维二糖(D-lactulose)对植物乳杆菌ZS2058生长的影响；
图6为异麦芽糖(IMO)对植物乳杆菌ZS2058生长的影响；
图7为低聚甘露糖(MOS)对植物乳杆菌ZS2058生长的影响；
图8为菊粉(Inulin)对植物乳杆菌ZS2058生长的影响；
图9为低聚木糖(XOS)对植物乳杆菌ZS2058生长的影响；
图10为低聚糖对鼠伤寒沙门氏菌SL1344生长的影响；
其中，Glucose为在MRS-培养基中加入葡萄糖，为对照组；FOS为在MRS-培养基中加入低聚果糖；Lactulose为在MRS-培养基中加入乳果糖；D-cellobiose为在MRS-培养基中加入D-纤维二糖；IMO为在MRS-培养基中加入异麦芽糖；MOS为在MRS-培养基中加入低聚甘露糖；Inulin为在MRS-培养基中加入菊粉；XOS为在MRS-培养基中加入低聚木糖；
图11为低聚木糖促进植物乳杆菌ZS2058对沙门氏菌感染的抑制作用；
其中其中，Control组为喂食普通饲料，PBS灌胃，不感染沙门氏菌；Model组为喂食普通饲料，PBS灌胃，感染沙门氏菌；ZS2058组为喂食普通饲料，ZS2058灌胃，感染沙门氏菌；XOS+ZS2058组为喂食含1％低聚木糖的饲料，ZS2058灌胃，感染沙门氏菌。
具体实施方式
本发明涉及的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058已于2006年4月10日保藏于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No.M206033，保藏地址为武汉市武昌路伽山。
本发明涉及的培养基如下：
MRS液体培养基(每1L)：胰蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、柠檬酸氢二铵2g、无水乙酸钠5g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸镁0.5g、一水硫酸锰0.25g、吐温801mL，加水至1000mL，pH调至6.2-6.4，115℃、20min湿热灭菌。
MRS-培养基：在MRS培养基的基础上减去葡萄糖，从青岛海博生物技术有限公司购买。
mMRS-培养基：在MRS-培养基的基础上添加2％的低聚糖。
MRS固体培养基(每L)：液体培养基中添加琼脂粉15g/L。
LB培养基(每L)：酵母粉5.0g，胰蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g。加水1L，121℃15min湿热灭菌。
本发明涉及的菌种活化方法为：
用接种环从保菌管中挑取少量菌液，乳酸菌(植物乳杆菌M3，植物乳杆菌M6，植物乳杆菌S2，植物乳杆菌T，植物乳杆菌ZS2058，植物乳杆菌ST-III，鼠李糖乳杆菌GG)在MRS固体平板中划线，鼠伤寒沙门氏菌SL1344在LB固体平板中划线。放在37℃恒温培养箱中培养，直至长出单菌落。
本发明涉及的菌种培养方法为：
用接种环挑取MRS固体培养基上的乳酸菌单菌落至MRS液体培养基中，37℃静置培养14-18h。乳酸菌和沙门氏菌以1％接种量转移至液体MRS培养基中，37℃静置培养14-18h。每次活化，都以1％接种量接种，37摄氏度培养14-18h。
实施例1：不同植物乳杆菌对沙门氏菌感染的影响
方法如下：
植物乳杆菌M3、植物乳杆菌M6、植物乳杆菌S2、植物乳杆菌T、植物乳杆菌ZS2058，鼠李糖乳杆菌GG，用PBS重悬至1×109CFU/mL。取0.1mL菌悬液分别给每组小鼠进行灌胃，连续十天。后将鼠伤寒沙门氏菌SL1344用PBS重悬至1×107CFU/mL，取0.1mL以灌胃的方式感染小鼠。
结果如图1所示：感染后15天，各组小鼠存活率分别为：对照组100％，模型组46.7％，植物乳杆菌M3组66.6％％，植物乳杆菌M6组53.3％，植物乳杆菌S2组66.6％，植物乳杆菌T组46.7％，植物乳杆菌ZS2058组80.0％，鼠李糖乳杆菌GG组75.0％。
由此可知，虽然植物乳杆菌都可能具有拮抗沙门氏菌的潜力，但是它们在模型动物体内的作用效果不同。植物乳杆菌T、M6的作用效果较小，在观察终点时显示，植物乳杆菌T对沙门氏菌感染无预防作用；植物乳杆菌M3、S2和ZS2058效果较好，尤其是植物乳杆菌ZS2058，对沙门氏菌感染具有很好的预防作用。
实施例2：不同低聚糖对植物乳杆菌ZS2058生长的影响
方法如下：
(1)植物乳杆菌ZS2058、ST-III、LGG的制备
植物乳杆菌ZS2058、ST-III、LGG传代之后，37℃培养18h后离心，用PBS洗一遍，并用MRS-培养基重悬至1.0×109CFU/ml。
(2)植物乳杆菌ZS2058接种
将上述菌液吸取0.1ml于5ml含有不同低聚糖(低聚木糖XOS、低聚果糖FOS、低聚甘露糖MOS、菊粉Inulin、低聚异麦芽糖IMO、乳果糖Lactulose、D-纤维二糖D-cellobiose)的培养基中。
(3)生长曲线测定
用分光光度计，每隔2小时测定不同培养物的OD600值。
结果如图2-9所示：不同低聚糖对植物乳杆菌ZS2058生长的影响不同。FOS、Lactulose、D-cellobiose对植物乳杆菌ZS2058生长与葡萄糖相似，在36h时，OD600约1.10；根据36h的OD600，其它糖对植物乳杆菌ZS2058生长的促进作用为IMO>MOS>Inulin>XOS。
由此可知，不同低聚糖对植物乳杆菌ZS2058生长的影响不同。
实施例3：不同低聚糖对沙门氏菌生长的影响
(1)鼠伤寒沙门氏菌SL1344的制备
鼠伤寒沙门氏菌SL1344传代之后，37℃培养18h后离心，用PBS洗一遍，并用MRS-培养基重悬至1.0×109CFU/ml。
(2)鼠伤寒沙门氏菌SL1344接种
将上述菌液吸取0.1ml于5ml含有不同低聚糖的培养基中。
(3)生长曲线测定
用分光光度计，每隔2小时测定不同培养物的OD600值。
结果如图10所示：不同低聚糖对鼠伤寒沙门氏菌SL1344生长的影响不同。根据36h时OD600，菊粉Inulin促进了鼠伤寒沙门氏菌SL1344的生长；其它低聚糖没有促进甚至抑制了鼠伤寒沙门氏菌SL1344的生长；低聚木糖XOS则明显抑制了沙门氏菌的生长。
由此可知，不同低聚糖对鼠伤寒沙门氏菌SL1344生长的影响不同，低聚糖菊粉Inulin、低聚异麦芽糖IMO、低聚果糖FOS、低聚甘露糖MOS、乳果糖Lactulose和D-纤维二糖D-cellobiose不能抑制鼠伤寒沙门氏菌SL1344生长，低聚糖低聚木糖XOS能抑制鼠伤寒沙门氏菌SL1344生长。
实施例4：低聚木糖促进植物乳杆菌ZS2058对沙门氏菌感染的抑制作用
(1)植物乳杆菌ZS2058的制备
植物乳杆菌ZS2058传代之后，37℃培养18h后离心，用冷的PBS洗三遍，并重悬。
(2)沙门氏菌培养物的制备
鼠伤寒沙门氏菌SL1344的培养基为LB培养基，沙门氏菌以2％(2mL/100mL)的接种量在LB培养基中进行活化培养后，37℃225rpm震荡培养12h。
(3)低聚糖饲料的制备
小鼠辐照饲料打碎成粉末，分别添加质量分数为1％的低聚木糖(XOS)、低聚果糖(FOS)、低聚甘露糖(MOS)、菊粉(Inulin)、葡萄糖(Glucose，对照)，成形。
结果如图11所示：沙门氏菌感染18天后，正常组小鼠存活率为100％；模型组小鼠存活率为33.3％；植物乳杆菌ZS2058处理组小鼠存活率为53.3％；低聚木糖和植物乳杆菌ZS2058处理组小鼠存活率为66.7％；低聚果糖和植物乳杆菌ZS2058处理组小鼠存活率为46.7％；低聚甘露糖和植物乳杆菌ZS2058处理组小鼠存活率为26.7％；菊粉和植物乳杆菌ZS2058处理组小鼠存活率为40.0％；葡萄糖和植物乳杆菌ZS2058处理组小鼠存活率为40.0％。说明有且只有低聚木糖能增强植物乳杆菌ZS2058对沙门氏菌感染的抑制作用。
由实施例2-4可知：虽然低聚木糖对植物乳杆菌ZS2058生长的促进作用较弱，但是低聚木糖能增强植物乳杆菌ZS2058对沙门氏菌感染的抑制作用，两者协同作用于沙门氏菌的效果远优于植物乳杆菌ZS2058单独作用与沙门氏菌的效果。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种沙门氏菌抑制剂，其特征在于，所述抑制剂的成分包含植物乳杆菌和/或其代谢物；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058；所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058已于2006年4月10日保藏于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No.M206033，保藏地址为武汉市武昌路伽山。
2.如权利要求1所述的一种沙门氏菌抑制剂，其特征在于，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZS2058的含量不低于1×108CFU/g或1×108CFU/mL。
3.如权利要求1或2所述的一种沙门氏菌抑制剂，其特征在于，所述抑制剂的成分还包含低聚糖。
4.如权利要求3所述的一种沙门氏菌抑制剂，其特征在于，所述低聚糖为低聚木糖。
5.如权利要求3或4所述的一种沙门氏菌抑制剂，其特征在于，所述低聚糖的含量不低于1％。
6.如权利要求1-5任一所述的一种沙门氏菌抑制剂，其特征在于，所述抑制剂的成分还包含载体。
7.如权利要求6所述的一种沙门氏菌抑制剂，其特征在于，所述载体为药学上可接受的载体。
8.如权利要求6或7所述的一种沙门氏菌抑制剂，其特征在于，所述载体为药学上可接受的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种。
9.权利要求1-8任一所述的一种沙门氏菌抑制剂在抑制、预防沙门氏菌方面的应用。
10.权利要求1-8任一所述的一种沙门氏菌抑制剂在制备药品、食品、保健品方面的应用。
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