CN108434248A - 一种枸杞活性成分的提取方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种枸杞活性成分的提取方法，将冷冻干燥后的枸杞经超声波水提，过滤得到水提滤液和水提滤渣；水提滤渣微波超声提取，得到乙醇提取混合物Ⅰ；水提滤液经超声波醇提，得到乙醇提取混合物Ⅱ；乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ过滤，得到滤液混合浓缩后浓缩液用乙酸乙酯萃取，通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮；得到的滤渣混合后DEAE‑纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；浓缩渣回流、浓缩、大孔树脂层析、干燥得到枸杞色素。本发明最终的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的提取率较高，极大的提高了枸杞的利用率，同时缩短了提取时间，大幅度降低了生产成本。

Description

一种枸杞活性成分的提取方法及用途

技术领域

本发明属于食品及药品技术领域，具体涉及一种枸杞活性成分的提取方法及用途。

背景技术

枸杞隶属于茄科(Solanaceae)，20世纪70年代路安民等对我国的枸杞属植物进行了调查，确定了中国枸杞属种质资源7种，其中包含了宁夏枸杞和黑果枸杞。枸杞是历史悠久、药食同源、驰名中外的名贵中药材。早在《神农本草经》中就被列为上品，称之为“久服，轻身不老，耐寒暑”，中医学认为，枸杞性平、味甘、微苦、无毒，具有滋补肝肺、益精明目、强健筋骨的功效。现代天然产物化学、生物学、药理学研究发现，枸杞子中含有枸杞多糖、枸杞黄酮、枸杞色素、氨基酸、维生素、微量元素等，被广泛用于抗衰老、抗肿瘤、及抗心血管疾病等，具有极高的药用价值和营养价值。

目前，枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的提取分离方法都有报道，其中以枸杞多糖和枸杞黄酮的提取方法报道居多。但是单纯的从枸杞中提取一种或者两种活性成分，无疑造成很大的资源浪费，并且提取活性成分后剩余的废渣量大，不易处理，会对生态环境造成巨大的压力。

专利申请号CN201310526665.1公开了一种枸杞多维效速粉及其生产方法，首先将枸杞干果经清洗、软化、破碎、超声波提取(水)，离心分离后，分别提取黄酮、甜菜碱和枸杞多糖，然后与酶解后的枸杞果汁混合并调配，加入助干剂，搅拌均匀，均质、浓缩、灭菌、喷雾干燥、过筛、检测、包装，即得到枸杞多维效速粉成品。此发明水提后的滤液直接纯化分离出枸杞多糖，使得多糖和黄酮的提取率降低，提取出枸杞黄酮和枸杞多糖后的剩余废渣量大，不易处理，容易造成资源的浪费，并且对环境造成压力。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种枸杞活性成分的提取方法及用途。

本发明提供了一种枸杞活性成分的提取方法，包括以下步骤：

1)将-10～-20℃冷冻干燥后的枸杞粉碎成粉末，枸杞粉末加入蒸馏水进行超声波提取，提取温度为70-80℃，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；

2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10-15g/ml混合后在室温下微波提取，得到乙醇提取混合物Ⅰ；

3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:5-10g/ml混合，在70-80℃下超声波提取，得到乙醇提取混合物Ⅱ；

4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；

5)浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用 DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；

6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在70-80℃下回流，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。

优选的，步骤1)中所述枸杞为黑果枸杞。

优选的，步骤1)中所述枸杞粉末的粒径为30-50目。

优选的，步骤1)中所述枸杞粉末与蒸馏水的质量体积比为1:10-20g/ml。

优选的，步骤1)中所述超声波提取时间为1.5-3h。

优选的，步骤2)中所述微波超声提取时间为1.5-2.5h。

优选的，步骤3)中所述超声波提取时间为0.5-1.2h。

优选的，步骤5)中所述浓缩液用乙酸乙酯萃取3次。

优选的，步骤6)中所述回流时间为2-4h。

本发明还提供了一种依据上述提取方法得到的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素在非酒精性脂肪肝防治方面的用途。

本发明所述枸杞活性成分包括枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素。

枸杞黄酮是枸杞中一类重要的活性物质，在枸杞中的含量为千分之五。是枸杞子抗氧化、延缓衰老的主要物质基础。枸杞多糖是枸杞子的主要活性成分之一，占干果的5％～8％。现代科学研究表明，枸杞多糖是枸杞子保护肝脏的主要成分，能够通过缓解细胞炎症和氧化应激损伤发挥作用。枸杞色素是由玉米黄质、叶黄素和玉米黄素二棕榈酸酯类化合物组成的混合物，对缓解视疲劳、预防老年性视网膜病变有良好的效果。

超声波提取方法的提取温度低，提取时间短，能够大大提高提取效率，并且提取液的杂质少，有效成分易于分离、纯化；提取工艺运行成本低，综合效应显著；因此超声波提取方法广泛运用在枸杞活性成分提取。现有技术中运用超声波提取枸杞中的活性成分，主要是提取枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素中的一种或者两种，尚未出现运用水提和醇提相结合的超声波提取方法同步分离得到枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素。但是单纯的从枸杞中提取一种或者两种活性成分，无疑造成很大的资源浪费，并且提取活性成分后剩余的废渣量大，不易处理，会对生态环境造成巨大的压力。与专利申请号CN201310526665.1中直接将超声波水提后的滤液纯化分离出枸杞多糖相比，本发明以冷冻干燥后的枸杞为原料，将超声波水提后的浓缩滤液和滤渣分别进行超声波和微波醇提，然后分别混合两种过滤后得到的乙醇滤液和滤渣，进行后续的分离提纯得到枸杞黄酮和枸杞多糖，再从提取黄酮后的固体残渣中分离提纯出枸杞色素，结合本发明的超声波温度、超声波时间以及乙醇和水的用量，本发明最终的枸杞黄酮和枸杞多糖的提取率较高，极大的提高了枸杞的利用率，同时缩短了提取时间，大幅度降低了生产成本；并且本发明的方法得到的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的纯度高，结构完整，理化性质稳定。

本发明以冷冻干燥后的枸杞为原料，现有技术中常用的干燥方法是在较高的温度下恒温干燥或者是风干，恒温干燥中高温会使得活性成分流失及活性物质失活，风干会使得活性成分流失及引入细菌。而本发明通过在-10～-20℃下冷冻干燥，将各种营养物质和活性成分的损失降低到最低限度，比普通冷冻保存的好；在真空和低温下操作，微生物的生长和酶作用受到抑制；排除95％～99％以上的水分，脱水彻底，得到的干制品重量轻，体积小，贮藏时占地面积少，携带方便，能长期保存而不变质，且便于运输，对于营养成分的保存达到90％以上。

本发明的有益效果是：

1、本发明首次将超声波水提、微波醇提、DEAE-纤维素柱层析、硅胶柱层析和大孔树脂柱层析的现代生产工艺结合，同步提取分离出枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素，极大地提高了枸杞利用率，同时明显缩短了提取时间，大幅度节约成本。

2、本发明以冷冻干燥后的枸杞为原料，将超声波水提后的浓缩滤液和滤渣分别进行超声波和微波醇提，然后分别混合两种过滤后得到的乙醇滤液和滤渣，进行后续的分离提纯得到枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素，结合本发明的超声波温度和超声波时间，本发明最终的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的提取率较高，极大的提高了枸杞的利用率，同时缩短了提取时间，大幅度降低了生产成本。

3、本发明的提取方法提取的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素纯度高，活性结构完整，理化性质稳定，可以用于食品、保健食品、特殊医学用途食品和药品的原料。

4、本发明以冷冻干燥后的枸杞为原料，通过在-10～-20℃下冷冻干燥，将各种营养物质和活性成分的损失降低到最低限度，比普通干燥保存的好；在真空和低温下操作，微生物的生长和酶作用受到抑制；排除95％～99％以上的水分，脱水彻底，得到的干制品重量轻，体积小，贮藏时占地面积少，携带方便，能长期保存而不变质，且便于运输，对于营养成分的保存达到90％以上。

附图说明

图1为经本发明提取的枸杞活性成分干预后NAFLD小鼠肝脏HE染色示意图。

其中，MX：高糖高脂模型组；P：枸杞多糖组；F：枸杞黄酮组；C：枸杞色素组。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。

实施例1

1)将-10～-20℃冷冻干燥后的黑果枸杞粉碎成粒径为30目的粉末，黑果枸杞粉末与蒸馏水以质量体积比1:20g/ml混合后进行超声波提取，提取温度为70℃，提取时间为1.5h，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；

2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10g/ml混合后在室温下微波提取，提取时间为 1.5h，得到乙醇提取混合物Ⅰ；

3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:5g/ml混合，在70℃下超声波提取，提取时间为0.5h，得到乙醇提取混合物Ⅱ；

4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；

5)浓缩液用乙酸乙酯萃取3次，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；

6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在75℃下回流2h，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。

实施例2

1)将-10～-20℃冷冻干燥后的黑果枸杞粉碎成粒径为40目的粉末，黑果枸杞粉末与蒸馏水以质量体积比1:10g/ml混合后进行超声波提取，提取温度为78℃，提取时间为2h，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；

2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10g/ml混合后在室温下微波提取，提取时间为 2h，得到乙醇提取混合物Ⅰ；

3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:6g/ml混合，在78℃下超声波提取，提取时间为1h，得到乙醇提取混合物Ⅱ；

4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；

5)浓缩液用乙酸乙酯萃取3次，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；

6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在70℃下回流3h，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。

实施例3

1)将-10～-20℃冷冻干燥后的黑果枸杞粉碎成粒径为50目的粉末，黑果枸杞粉末与蒸馏水以质量体积比1:15g/ml混合后进行超声波提取，提取温度为80℃，提取时间为3h，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；

2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:15g/ml混合后在室温下微波提取，提取时间为 2.5h，得到乙醇提取混合物Ⅰ；

3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:10g/ml混合，在80℃下超声波提取，提取时间为1.2h，得到乙醇提取混合物Ⅱ；

4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；

5)浓缩液用乙酸乙酯萃取3次，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；

6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在80℃下回流4h，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。

对比例1

1)将-10～-20℃冷冻干燥后的黑果枸杞粉碎成粒径为40目的粉末，黑果枸杞粉末与蒸馏水以质量体积比1:10g/ml混合后进行超声波提取，提取温度为78℃，提取时间为2h，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；

2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10g/ml混合后在室温下超声波提取，提取时间为 2h，然后过滤得到的滤液浓缩得到浓缩液和浓缩渣，浓缩液用乙酸乙酯萃取3次，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮；

3)水提滤液浓缩后用DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；

4)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在70℃下回流3h，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。

对比例2

1)将80℃常温干燥后的黑果枸杞粉碎成粒径为40目的粉末，黑果枸杞粉末与蒸馏水以质量体积比1:10g/ml混合后进行超声波提取，提取温度为78℃，提取时间为2h，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；

2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10g/ml混合后在室温下微波提取，提取时间为 2h，得到乙醇提取混合物Ⅰ；

3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:6g/ml混合，在78℃下超声波提取，提取时间为1h，得到乙醇提取混合物Ⅱ；

4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；

5)浓缩液用乙酸乙酯萃取3次，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；

6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在70℃下回流3h，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。

对比例3

1)将-10～-20℃冷冻干燥后的黑果枸杞粉碎成粒径为40目的粉末；

2)黑枸杞粉末超声波提取，离心分离，分别收集上清液和残渣。超声波提取时，黑枸杞粉末与水的料液比按质量体积比为1：50g/ml，提取温度为60℃，提取时间为50min，提取功率为250W；

3)将收集的残渣，置入超声波提取器中进行提取，浓缩、分离纯化，既得黄酮；超声波提取时，残渣与乙醇的料液比按质量体积比为1：40g/ml，乙醇体积分数为85％，提取时间为110min，提取功率为200W，提取次数为5次；分离纯化时，大孔树脂选择LS-303；

4)将收集的上清液，通过723型强酸性阳离子交换树脂分离，用2mol/LHCl洗脱，洗脱液经浓缩、结晶既得甜菜碱，流出液经95％乙醇醇沉后，浓缩干燥，既得枸杞多糖；

实施例1-3和对比例1-3提取出的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的得率以及纯度如表1。

黄酮含量的检测方法为以芦丁为标准品，亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠比色法；多糖含量的检测方法为以葡萄糖标准品，蒽酮-硫酸法；色素含量的检测方法为以β胡萝卜素标准品，比色法；三种测定方法都为现有技术。

得率＝(枸杞活性成分的质量/枸杞原料的质量)×100％

表1枸杞活性成分的得率和纯度

从表1中的数据可知，采用本申请的方法同步提取分离出枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素，极大地提高了枸杞利用率；与对比例1相比可知，本申请将超声波水提后的浓缩滤液和滤渣分别进行超声波和微波醇提，然后分别混合两种过滤后得到的乙醇滤液和滤渣，进行后续的分离提纯得到枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素，最终的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的提取率较高；与对比例2相比可知，本发明以冷冻干燥后的枸杞为原料，通过在-10～-20℃下冷冻干燥，将各种营养物质和活性成分的损失降低到最低限度，比普通高温干燥保存的好，提高了枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的提取率；与对比例3相比可知，本发明将超声波水提、微波醇提、DEAE-纤维素柱层析、硅胶柱层析和大孔树脂柱层析的现代生产工艺结合，同步提取分离出枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素，极大地提高了枸杞利用率。

动物实验：

为了验证本发明从黑果枸杞中提取的活性成分具有防治非酒精性脂肪肝的用途，本发明样品选择实施例1得到的三种枸杞活性成分：枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素，进行动物测定，测试过程如下。

取SPF级KM种小鼠40只，进行高糖高脂饮食喂养16周后，建立高糖高脂膳食诱导非酒精性脂肪肝模型，随机分成4组，每组10只，分别为高糖高脂模型组、枸杞多糖组、枸杞黄酮组和枸杞色素组。各组小鼠正常进食普通小鼠饲料及饮水，枸杞多糖组、枸杞黄酮组和枸杞色素组灌服同等剂量相对应的枸杞活性成分(200mg/kg)，高糖高脂模型组灌服同等剂量生理盐水，直至第7周末实验结束。第7周末，各组小鼠均禁食过夜，于次日，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，眼球取血于抗凝管中，提取血清保存待测。采血后，小鼠放置于冰盘上，剪开腹腔，取全部肝脏并称量记录肝脏湿重，结果见表2，取肝脏右叶中部约1cm×1cm大小，置于4％多聚甲醛磷酸缓冲液中固定，用于HE染色及免疫组织化学染色。取肝脏右叶正向中内侧少量用于制备肝脏匀浆及线粒体提取。检测非酒精性脂肪肝小鼠肝脏病理形态改变，血液中ALT、AST、TG、TC含量，TBARS、GSH含量，SOD活性，线粒体β氧化速率，结果见表3和表4。

表2枸杞活性成分干预后NAFLD小鼠体重与肝指数变化

注：*表示与MX组相比，P<0.05，**表示与MX组相比，P<0.01

表2结果显示，通过7周有氧运动及枸杞活性成分的干预，与模型组相比枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素组体重没有改变，肝湿重下降(P<0.01)。黑果枸杞活性物干预对于NAFLD 小鼠减重效果不显著，通过降低肝脏湿重，降低肝指数。

运动与枸杞活性成分对高糖高脂膳食诱导NAFLD小鼠肝脏组织形态学改变的影响

HE染色，光镜下观察脂肪变性程度。肝细胞脂肪变性程度标准判断如下：肝脏的脂肪变性程度根据肝小叶内含脂滴细胞数与总细胞之比值(％)分为四级：1级，0-25％；26-50％，二级；51-75％，三级；76-100％，四级。经过7周的正常饲养，模型组小鼠肝脏形态结构出现好转，汇管区炎性浸润减少，脂质空泡数量减少。经过7周有氧运动及黑果枸杞主要活性成分的干预，与模型组相比，各组小鼠肝细胞排列情况有明显好转，肝索排列较完整，仅少数肝细胞存有小泡样脂滴，肝细胞浊肿减少，脂肪变性程度减轻(图1，表3)。

表3有氧运动及枸杞活性成分干预后各组小鼠肝细胞脂肪变性改变(n＝8)

注：与模型组相比，*P<0.01。

枸杞活成分对NAFLD小鼠血清转氨酶的影响

血清中转氨酶的含量是反映肝细胞损伤的重要指标(表4)。转氨酶ALT、AST，常用于检测肝脏受损伤的程度。转氨酶主要位于肝细胞内，是人体代谢过程中不可或缺的“催化剂”，当肝脏发生炎症、坏死等损伤等异常状况时，转氨酶从肝细胞释放入外周血中，引起血清转氨酶升高。实验结果表明：黑果枸杞活性成分干预后，与MX组相比，各干预组小鼠血清中 ALT、AST含量显著下降(P<0.01)，肝损伤程度降低。

枸杞活性成分对NAFLD小鼠血脂的影响

TC是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和，血液中TC、TG含量可以反映脂代谢情况。实验结果显示，施加干预后，与模型组相比，各干预组小鼠血清中TG、TC含量显著下降(P<0.01)(表4)

枸杞活性成分对NAFLD小鼠肝脏GSH含量的影响

机体内广泛存在的一种过氧化物分解的酶：谷胱甘肽过氧化物酶，可特异性催化还原性谷胱甘肽对氢过氧化物的还原反应。谷胱甘肽过氧化物酶通过清除细胞内的过氧化物代谢产物并阻断脂质过氧化链锁反应，对细胞膜的结构完整、功能正常起到保护作用。通常情况下， GSH水平是反映细胞功能和适应性的敏感指标(表4)。

枸杞活性成分对NAFLD小鼠肝脏抗氧化酶活性的影响

SOD常作为催化剂催化不同的氧化还原反应，使机体氧化还原状态保持在相对稳定的水平(表4)。

枸杞活性成分对NAFLD小鼠肝脏脂质过氧化物的作用

检测肝脏TBARS可以评价肝脏脂质过氧化的程度。TBARS是脂类物质氧化降解后的产物，涵盖了大部分氧化伤害产生的醛酮类物质，与MDA相比，更能够衡量机体脂质氧化水平(表4)。

枸杞活性成分对NAFLD小鼠肝脏线粒体β氧化速率的影响

通过7周枸杞活性成分的干预，各干预组线粒体β氧化速率上升，促进脂质的β氧化，降低肝脏脂质堆积(表4)。

表4枸杞活性成分干预后各组小鼠生化指标检测结果

注：*表示与MX组相比，P<0.05，**表示与MX组相比，P<0.01

合成甘油三酯、胆固醇的主要场所有脂肪组织、小肠、肝脏，其中，肝脏的合成能力是最强的，通常，肝脏合成的不储存在肝脏中，合成的甘油三酯与磷脂、胆固醇、载脂蛋白B100、 C等结合生成极低密度脂蛋白，通过血液运输到肝外各组织器官利用。当NAFLD小鼠肝脏合成甘油三酯的量超过其通过极低密度脂蛋白输出的能力，多余的甘油三酯在肝脏内存积。我们的实验结果发现，通过7周枸杞活性成分的干预，与模型组相比，各干预组线粒体β氧化速率上升，血清TG、TC含量显著降低(P<0.01)，AST、ALT浓度降低，肝脏损伤程度降低。同时，HE染色结果也表明，与模型组相比，各组小鼠肝细胞排列情况有明显好转，肝索排列较完整，肝损伤程度下降，仅少数肝细胞存有小泡样脂滴，肝细胞浊肿减少，脂肪变性程度减轻，肝细胞中脂质堆积减少(图1、表3)。7周枸杞活性成分干预通过修复线粒体功能，提高线粒体β氧化速率，降低肝细胞中脂质沉积，降低肝脏损伤，进而促进NAFLD良性转归。

在“二次打击”学说中，“第一击”是脂质的堆积，“第二击”则是氧化应激介导的炎症、星状细胞活化以及肝纤维化，氧化应激水平增高是NAFLD发展到NASH的关键因素，我们的实验结果发现，7周枸杞活性成分干预后，与模型组相比，各组GSH含量、SOD活性均显著升高，而反应组织MDA水平的TBARS含量则显著降低(P<0.01或P<0.05)。7周枸杞活性成分的干预可以提高机体抗氧化酶的含量及活性，促进过氧化物的清除速率，能够有效的降低NAFLD小鼠肝脏中氧化应激水平，对于NAFLD的转归起到有利的作用。

Claims (10)

1.一种枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将在-10～-20℃下冷冻干燥后的枸杞粉碎成粉末，枸杞粉末加入蒸馏水进行超声波提取，提取温度为70-80℃，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；

2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10-15g/ml混合后在室温下微波提取，得到乙醇提取混合物Ⅰ；

3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:5-10g/ml混合，在70-80℃下超声波提取，得到乙醇提取混合物Ⅱ；

4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；

5)浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；

6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在70-80℃下回流，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。

2.如权利要求1所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤1)中所述枸杞为黑果枸杞。

3.如权利要求1或2所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤1)中所述枸杞粉末的粒径为30-50目。

4.如权利要求1或2所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤1)中所述枸杞粉末与蒸馏水的质量体积比为1:10-20g/ml。

5.如权利要求1或2所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤1)中所述超声波提取时间为1.5-3h。

6.如权利要求1或2所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤2)中所述微波超声提取时间为1.5-2.5h。

7.如权利要求1或2所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤3)中所述超声波提取时间为0.5-1.2h。

8.如权利要求1或2所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤5)中所述浓缩液用乙酸乙酯萃取3次。

9.如权利要求1或2所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤6)中所述回流时间为2-4h。

10.一种如权利要求1-9任一项所述的提取方法得到的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素在非酒精性脂肪肝防治方面的用途。