CN108355171A - 脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用 - Google Patents
脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108355171A CN108355171A CN201810313026.XA CN201810313026A CN108355171A CN 108355171 A CN108355171 A CN 108355171A CN 201810313026 A CN201810313026 A CN 201810313026A CN 108355171 A CN108355171 A CN 108355171A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tissue regeneration
- film material
- dermal matrix
- acellular dermal
- regeneration film
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 100
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 title claims abstract description 75
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 title claims abstract description 61
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 title claims description 33
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 70
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 62
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 43
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims abstract description 32
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 53
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 claims description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 11
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 claims description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 5
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 claims 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 claims 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 abstract description 68
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 abstract description 46
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 20
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 abstract description 19
- 239000000835 fiber Substances 0.000 abstract description 14
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 9
- 230000008439 repair process Effects 0.000 abstract description 9
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 abstract description 9
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 abstract description 8
- 239000007943 implant Substances 0.000 abstract description 8
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 abstract description 7
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 6
- 244000059546 zoonotic virus Species 0.000 abstract description 6
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 11
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 8
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 6
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 6
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 6
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 6
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 6
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 5
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 description 3
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000010478 bone regeneration Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 2
- 238000007696 Kjeldahl method Methods 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 208000008312 Tooth Loss Diseases 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001909 alveolar process Anatomy 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004053 dental implant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 description 1
- 238000010883 osseointegration Methods 0.000 description 1
- 210000005009 osteogenic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
- A61L27/3633—Extracellular matrix [ECM]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3641—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the site of application in the body
- A61L27/3645—Connective tissue
- A61L27/365—Bones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
- A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
- A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/58—Materials at least partially resorbable by the body
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/02—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of bones; weight-bearing implants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明提出了一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用，涉及医用生物材料的技术领域。本发明的制备方法包括以下步骤：前处理，脱表皮层、制备疏松面，稳定化，脱细胞处理，洗涤和灭菌；由本发明的方法制备的膜材料以鱼皮为原料，具有三维空间框架结构，包括由生物基底膜构成的致密面和由真皮支架构成的胶原蛋白疏松面。本发明的膜材料避免了现有组织修复材料存在人畜共患病毒的携带和传播的风险，对细胞成分去除干净，免疫原性低，增加了胶原纤维的间隙，保留了真皮层结构，组织相容性良好，既具有良好的机械屏障作用又有利于新骨的生成；用于口腔种植手术的骨缺损修复治疗时，材料可吸收，有效避免了二次手术及其对患者的损伤。
Description
技术领域
本发明涉及医用生物材料的技术领域，特别是指一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用。
背景技术
近几年来，随着科学技术水平的不断发展和进步，一种新型修复技术——膜引导组织再生术(membrane guided bone/tissue regeneration，MGBR/MGTR)的出现极大地提高了口腔修复学的水平。引导组织再生术(guided bone/tissue regeneration，GBR/GTR)具有引导成骨和促进种植体周围骨性结合形成的作用，其原理是根据各类不同组织细胞迁移速度不同，即上皮细胞、成纤维细胞比形成牙槽骨的细胞快，采用生物材料制成一种具备致密面和疏松面的生物膜，致密面起屏障作用，以阻止软组织中成纤维细胞及上皮细胞长入骨缺损区，避免这些细胞与有骨生成能力的细胞产生竞争抑制，疏松面则保护血块的稳定，维持血块充填的间隙，使有骨生成能力的细胞缓慢进入骨缺损区，修复骨缺损。
临床中因各种原因导致的牙周组织缺损、拔牙后牙槽嵴吸收、牙缺失等，经常伴有牙周组织和牙槽骨的缺损。口腔种植术成为常规修复的方法，该手术成功的关键是有足够的骨量，除了为种植体提供了初期的机械力学以及长期的生物力学稳定，也满足了人们在视觉上的要求。在骨缺损修复过程中，不同组织细胞向骨缺损区迁移速度是不同的，而其中成纤维细胞和上皮细胞较快，导致非成骨细胞大量占据骨缺损区，影响骨生成量；因此，需要在口腔软组织与骨缺损区之间放置引导组织再生膜材料，起机械屏障作用，从而选择性地将非成骨细胞阻挡于骨缺损区以外，使成骨细胞顺利地进入骨缺损区，以提高新骨的生成量。
根据临床需要，有效引导组织再生膜应该具有适当的机械强度，以阻挡生长快速的软组织远离牙根表面，在牙根面上维持一个的空间。另外，引导组织再生膜需要具备良好生物相容性、无抗原活性和一定的手术可操作性，并且，能够保持一段足够引导组织再生的时间。根据在体内是否容易降解，临床应用的引导组织再生膜可分为生物降解和不可降解两大类。
目前，现有的引导组织再生膜材料产品在临床中应用时，仍存在抗原性高、力学强度不够、膜塌陷、移位、不可吸收膜需要二次手术取出、可吸收膜的体内维持时间不够长等问题。脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix，ADM)是利用物理和化学方法将动物皮肤中的表皮层和细胞等抗原成分去除，只保留了基底膜和真皮中的细胞外基质纤维支架而得到的。脱细胞真皮基质具有良好的降解性能、力学性能和生物学性能，在口腔医用材料领域具有巨大的应用前景。然而，目前的脱细胞真皮基质主要来源于脱细胞猪/牛/异体人皮等，异体组织的获取日益困难，而猪、牛等陆地哺乳动物源性材料存在人畜共患病毒的携带和传播的风险；因此，急需寻找安全性更高的脱细胞基质材料以满足临床应用的需求。
发明内容
本发明提出一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用，解决了现有技术中的引导组织再生膜存在人畜共患病毒的携带和传播的风险的问题。
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，其技术方案是这样实现的：包括以下步骤：1)前处理：取鱼皮，去除鱼鳞、内侧脂肪和多余鱼肉；2)洗涤：将步骤1)所得的鱼皮采用生理盐水反复冲洗数次，接着，采用超纯水反复冲洗数次；3)脱表皮层、制备疏松面：将步骤1)所得的组织置于0.01～1.0mol/L的酸溶液中，在20～37℃下，振荡5～30min，以去除表皮层并得到疏松面；4)稳定化：将步骤3)所得的组织置于0.5～2.5mol/L的氯化钠溶液中，在20～37℃下，振荡30～120min，以稳定结构；5)脱细胞：将步骤4)所得的组织置于-80～-70℃下冻融，反复冻融数次，然后，依次采用0.5～4.0wt％的脱氧胆酸钠溶液、3.5～6.5g/L的十二烷基磺酸钠溶液和0.1～1.0g/L的胰蛋白酶溶液进行脱细胞处理；6)洗涤：采用生理盐水进行洗涤；7)灭菌：冻干，定型，经Co-60γ射线辐照灭菌，得引导组织再生膜材料。
本发明的引导组织再生膜材料的制备方法中以鱼皮为原料，避免了使用猪或牛等陆地哺乳动物源性材料存在人畜共患病毒的携带和传播的风险；保留了真皮层结构，对细胞成分去除干净，免疫原性低；通过酸处理法得到了一面致密一面疏松的脱细胞基质，组织相容性良好，可以与组织有机缝合，用于口腔种植手术的骨缺损修复治疗时，放置于口腔软组织与骨缺损区之间，致密面起到了良好的机械屏障作用，同时疏松面有利于成骨细胞进入形成新骨；脱细胞的过程中增加了冻融的处理方法，增加了膜材料中胶原纤维的间隙，为细胞提供了通道，增大了细胞的迁移速度，同时提供了细胞生长空间。该制备方法简单，操作方便，对设备无特殊要求，易于实现产业化。
作为一种优选的实施方案，所述步骤3)中酸溶液是盐酸溶液、硫酸溶液、甲酸溶液、乙酸溶液中的任意一种或几种。本发明通过酸溶液对洗涤后的鱼皮组织进行处理，在鱼皮组织的一侧形成疏松面，改变了现有鱼皮组织仅具有致密面而没有疏松面的特点；这些酸来源容易，酸性温和，能起到除去组织中的蛋白聚糖，分离胶原纤维的作用，适于制备疏松面。
作为一种优选的实施方案，所述步骤7)中灭菌的剂量为15～20kGy。本发明采用Co-60γ射线辐照灭菌，与其它病毒灭活方法相比，该法灭活病毒彻底，对有包膜和无包膜病毒均有杀灭作用，并且能对密封后的产品进行灭活，辐照后不会污染环境或产生有毒副作用的物质。
作为一种优选的实施方案，所述步骤5)中冻融的次数为3～5次。本发明在脱细胞的过程中增加了冻融处理过程，通过这种低温反复冻融，使鱼皮组织中胶原纤维的间隙逐渐扩大，间隙结构稳定，成型性好。
作为一种优选的实施方案，所述步骤2)中生理盐水冲洗和超纯水冲洗的次数均为3～5次，每次冲洗的时间均为10～15min。本发明首先采用刀子或镊子将鱼皮上的鱼鳞以及内侧脂肪和多余鱼肉去除，由于鱼皮中的脂质层得到了去除，降低了膜材料的免疫原性；前处理后的鱼皮经过生理盐水和超纯水反复冲洗，通过控制冲洗次数和冲洗时间，确保洗涤干净，达到卫生要求。
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料，其技术方案是这样实现的：由上述任意一项所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法制备而成；所述引导组织再生膜材料是具有三维空间框架结构的脱细胞细胞外基质，所述引导组织再生膜材料包括由生物基底膜构成的致密面和由真皮支架构成的胶原蛋白疏松面。
本发明的膜材料以鱼皮为原料，是一面为致密面另一面为疏松面的脱细胞细胞外基质，保留了真皮层结构，主要成分是胶原蛋白，组织相容性良好，免疫原性低；该膜材料用于口腔种植手术的骨缺损修复治疗时，放置于口腔软组织与骨缺损区之间，致密面起机械屏障作用，能够选择性地将非成骨细胞阻挡于骨缺损区以外，使成骨细胞顺利地从疏松面进入骨缺损区，因此，能够提高新骨的生成量；该引导组织再生膜材料可吸收，有效避免了二次手术及其对患者的损伤，在口腔医学领域具有良好的应用前景，具有较高的医学领域实际应用价值。
作为一种优选的实施方案，所述引导组织再生膜材料为柔软的片状。该引导组织再生膜材料放置在口腔软组织与骨缺损区之间，其致密面朝向口腔软组织的方向，疏松面朝向骨缺损区的方向，这种柔软的片状膜材料在口腔软组织与骨缺损区之间起到了很好的屏蔽膜的作用，能够选择性地将非成骨细胞阻挡于骨缺损区以外，使成骨细胞顺利地进入骨缺损区，因此，能够提高新骨的生成量。
作为一种优选的实施方案，所述引导组织再生膜材料的规格为15～25mm×15～25mm×0.5～1.0mm。材料的尺寸和形状可根据实际情况进行调整，这个尺寸是根据临床上常用的规格裁剪的，临床使用方便。
作为一种优选的实施方案，所述引导组织再生膜材料的外观为白色。该膜材料为白色，与皮肤的颜色接近，使用后不影响口腔的美观，适配效果好。
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的应用，其技术方案是这样实现的：所述引导组织再生膜材料用于口腔种植手术的骨缺损修复中，置于口腔软组织与骨缺损区之间。本发明的这种膜材料作为骨组织和牙周组织再生的屏障膜，既具有良好的机械屏障作用又有利于新骨的生成，可吸收，有效避免了二次手术及二次手术对患者的损伤。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用了物理和化学的方法对鱼皮组织进行脱细胞，所制备的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料中细胞成分去除彻底，细胞等抗原物质处理干净，降低了免疫原性，并具备了疏松面；在脱细胞的过程中采用冻融以及胰蛋白酶处理的方法，增加了脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料中胶原纤维的间隙，为细胞提供了通道，增大了细胞的迁移速度，同时提供了细胞生长空间。本发明的膜材料以鱼皮为原料，来源丰富，避免了使用猪或牛等陆地哺乳动物源性材料存在人畜共患病毒的携带和传播的风险；其是一面为致密面另一面为疏松面的脱细胞细胞外基质，保留了真皮层结构，主要成分是胶原蛋白，组织相容性良好。本发明制备的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料可用于口腔种植手术的骨缺损修复，放置于口腔软组织与骨缺损区之间，具有可以与口腔软组织紧密贴附，组织相容性好，术后可被降解吸收，不产生有毒产物和厚度适宜等优点，在口腔医学领域具有良好的应用前景，具有较高的医学领域实际应用价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例一所得的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的立体结构示意图；
图2为实施例一中未处理鱼皮即鱼皮原料一个面的扫描电镜观察图；
图3为实施例一中未处理鱼皮即鱼皮原料另一个面的扫描电镜观察图；
图4为实施例一中冻融处理前鱼皮截面的扫描电镜观察图；
图5为图1中的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的致密面的扫描电镜观察图；
图6为图1中的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的疏松面的扫描电镜观察图；
图7为图1中的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料截面的扫描电镜观察图；
图8为未处理鱼皮组织的组织学结构光学显微镜观察图；
图9为图1中的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的组织学结构光学显微镜观察图；
1-致密面；2-疏松面。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，包括以下步骤：
1)前处理：取鱼皮，去除鱼鳞、内侧脂肪和多余鱼肉；
2)洗涤：将步骤1)所得的鱼皮采用生理盐水反复冲洗数次，接着，采用超纯水反复冲洗数次；
3)脱表皮层、制备疏松面：将步骤1)所得的组织置于0.01～1.0mol/L的酸溶液中，在20～37℃下，振荡5～30min，以去除表皮层并得到疏松面；
4)稳定化：将步骤3)所得的组织置于0.5～2.5mol/L的氯化钠溶液中，在20～37℃下，振荡30～120min，以稳定结构；
5)脱细胞：将步骤4)所得的组织置于-80～-70℃下冻融，反复冻融数次，然后，依次采用0.5～4.0％的脱氧胆酸钠溶液、3.5～6.5g/L的十二烷基磺酸钠溶液和0.1～1.0g/L的胰蛋白酶溶液进行脱细胞处理；
6)洗涤：采用生理盐水进行洗涤；
7)灭菌：冻干，定型，经Co-60γ射线辐照灭菌，得引导组织再生膜材料。
优选地，所述步骤3)中酸溶液是盐酸溶液、硫酸溶液、甲酸溶液、乙酸溶液中的任意一种或几种。
具体地，所述步骤7)中灭菌的剂量为15～20kGy。
进一步地，所述步骤5)中冻融的次数为3～5次。
更优选地，所述步骤2)中生理盐水冲洗和超纯水冲洗的次数均为3～5次，每次冲洗的时间均为10～15min。
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料，由上述任意一项所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法制备而成；所述引导组织再生膜材料是具有三维空间框架结构的脱细胞细胞外基质，所述引导组织再生膜材料包括由生物基底膜构成的致密面和由真皮支架构成的胶原蛋白疏松面。
优选地，所述引导组织再生膜材料为柔软的片状。
具体地，所述引导组织再生膜材料的规格为15～25mm×15～25mm×0.5～1.0mm。
进一步地，所述引导组织再生膜材料的外观为白色。
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的应用，所述引导组织再生膜材料用于口腔种植手术的骨缺损修复中，置于口腔软组织与骨缺损区之间。
实施例一
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，包括以下步骤：
1)前处理：从鱼身上取下鱼皮，采用刀将鱼鳞、内侧脂肪和多余鱼肉去除；
2)洗涤：将步骤1)获得的鱼皮采用生理盐水反复冲洗3次，每次持续10min，并再以超纯水反复冲洗3次，每次持续10min；
3)脱表皮层、制备疏松面：将步骤2)获得的材料放入0.01mol/L的甲酸溶液中，在20℃恒温摇床中，振荡30min，以去除表皮层并制备疏松面；
4)稳定化：将步骤3)获得的材料放入0.5mol/L的氯化钠溶液中，在20℃恒温摇床中，振荡120min，以稳定结构；
5)脱细胞：将步骤4)获得的材料在-80℃下冻融，反复冻融3次，再分别采用0.5％的脱氧胆酸钠溶液、3.5g/L的十二烷基磺酸钠溶液和0.1g/L的胰蛋白酶溶液对该鱼皮组织进行脱细胞处理；
6)洗涤：采用生理盐水对步骤5)获得的脱细胞真皮基质进行洗涤；
7)灭菌：对步骤6)获得的脱细胞真皮基质依次进行冻干、定型和Co-60γ射线辐照灭菌，灭菌剂量为15kGy，得到成品。
参阅附图1，本发明所得的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料具有三维空间框架结构，包括由生物基底膜构成的致密面1和由真皮支架构成的胶原蛋白疏松面2，为柔软白色片状，规格为15mm×15mm×0.5mm；参阅附图2和附图3，本发明所采用的原料鱼皮，正反两面均为致密面，内侧还带有一些皮下组织，鱼皮纤维较细，表现为各个网状单元层平面二维致密编织，各个网状单元相互叠加且它们之间主要靠一些细小的胶原纤维束来联系；经过前处理之后，该鱼皮原料的脂肪含量很低，其DNA含量不到50ng/mg，几乎可以忽略不计；本发明的鱼皮经过洗涤、脱表皮层以制备疏松面、稳定化和冻融处理之后，参阅附图4、附图6和附图7，原本排列致密的胶原纤维层被打断，出现孔隙，鱼皮组织中的胶原纤维间隙增加。
将本实施例最终所得的成品于日本JEOL公司生产的JSM-7500型号的扫描电子显微镜上进行观察，由附图5、附图6和附图7可以看出，其致密面表面光滑，非常密实，其疏松面呈疏松多孔状，具有很多明显的孔道；致密面和疏松面分层明显，结构完全不同，致密面有效地将成纤维细胞和上皮细胞等非成骨细胞阻挡于骨缺损区以外，成骨细胞顺利地通过致密面并从疏松面进入骨缺损区，从而提高了新骨的生成量；由附图8可以看出，原料鱼皮的黑色素细胞分布在皮层表层部分，鱼皮的主要成分是胶原纤维，结构上由平面二维编织的网状单元相互叠加，排列致密，各个网状单元主要靠一些纵向细小的胶原纤维束来联系，切片还能看到皮下脂肪组织；由附图9可以看出，处理后细胞得到了很好的脱除，基本无细胞核残留，并且原本层状排列的胶原纤维被打断，创造出纵向的细胞生长通道；另外，处理过程处理掉了表皮层和皮下组织层，减少了抗原性物质的存在。
实施例二
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，包括以下步骤：
1)前处理：从鱼身上取下鱼皮，采用镊子将鱼鳞以及内侧脂肪和多余鱼肉去除；
2)洗涤：将步骤1)获得的鱼皮采用生理盐水反复冲洗5次，每次持续15min，并再以超纯水反复冲洗5次，每次持续15min；
3)脱表皮层、制备疏松面：将步骤2)获得的材料放入0.1mol/L的盐酸溶液中，在25℃恒温摇床中，振荡10min，去除表皮层并制备疏松面；
4)稳定化：将步骤3)获得的材料放入1.0mol/L的氯化钠溶液中，在37℃的恒温摇床中，振荡90min，以稳定结构；
5)脱细胞：将步骤4)获得的材料在-70℃下冻融，反复冻融5次，再分别采用1.0％的脱氧胆酸钠溶液、5.0g/L的十二烷基磺酸钠溶液和0.5g/L的胰蛋白酶溶液对该鱼皮组织进行脱细胞处理；
6)洗涤：采用生理盐水对步骤5)获得的脱细胞真皮基质进行洗涤；
7)灭菌：对步骤6)获得的脱细胞真皮基质依次进行冻干、定型和Co-60γ射线辐照灭菌，灭菌剂量为17kGy，得到成品。
该成品即脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料具有三维空间框架结构，为柔软白色片状，规格为25mm×25mm×1.0mm，包括由生物基底膜构成的致密面和由真皮支架构成的胶原蛋白疏松面，致密面表面光滑，非常密实，疏松面呈疏松多孔状，具有很多明显的孔道；致密面和疏松面分层明显，结构完全不同。
实施例三
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，包括以下步骤：
1)前处理：从鱼身上取下鱼皮，采用刀或镊子将鱼鳞以及内侧脂肪和多余鱼肉去除；
2)洗涤：将步骤1)获得的鱼皮采用生理盐水反复冲洗4次，每次持续12min，并再以超纯水反复冲洗4次，每次持续12min；
3)脱表皮层、制备疏松面：将步骤2)获得的材料放入0.5mol/L的乙酸溶液中，在25℃恒温摇床中，振荡5min去除表皮层并制备疏松面；
4)稳定化：将步骤3)获得的材料放入2.0mol/L氯化钠溶液中，在25℃恒温摇床中，振荡60min以稳定结构；
5)脱细胞：将步骤4)获得的材料在-75℃下冻融，反复冻融4次，再分别采用2.0％的脱氧胆酸钠溶液、5.0g/L的十二烷基磺酸钠溶液和0.5g/L的胰蛋白酶溶液对该鱼皮组织进行脱细胞处理；
6)洗涤：用生理盐水对步骤5)获得的脱细胞真皮基质进行洗涤；
7)灭菌：对步骤6)获得的脱细胞真皮基质依次进行冻干、定型和Co-60γ射线辐照灭菌，灭菌剂量为18kGy，得到成品。
该成品即脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料具有三维空间框架结构，为柔软白色片状，规格为20mm×20mm×0.8mm，包括由生物基底膜构成的致密面和由真皮支架构成的胶原蛋白疏松面，致密面表面光滑，非常密实，疏松面呈疏松多孔状，具有很多明显的孔道；致密面和疏松面分层明显，结构完全不同。
实施例四
本发明的一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，包括以下步骤：
1)前处理：从鱼身上取下鱼皮，采用刀将鱼鳞以及内侧脂肪和多余鱼肉去除；
2)洗涤：将步骤1)获得的鱼皮采用生理盐水反复冲洗3次，每次持续15min，并再以超纯水反复冲洗3次，每次持续15min；
3)脱表皮层、制备疏松面：将步骤2)获得的材料放入1.0mol/L的硫酸溶液中，在37℃恒温摇床中，振荡5min，以去除表皮层并制备疏松面；
4)稳定化：将步骤3)获得的材料放入2.5mol/L的氯化钠溶液中，在37℃恒温摇床中，振荡30min，以稳定结构；
5)脱细胞：将步骤4)获得的材料在-80℃下冻融，反复冻融4次，再分别采用4.0％的脱氧胆酸钠溶液、6.5g/L十二烷基磺酸钠溶液和1.0g/L胰蛋白酶溶液对该鱼皮组织进行脱细胞处理；
6)洗涤：采用生理盐水对步骤5)获得的脱细胞真皮基质进行洗涤；
7)灭菌：对步骤6)获得的脱细胞真皮基质依次进行冻干、定型和Co-60γ射线辐照灭菌，灭菌剂量为20kGy，得到成品。
该成品即脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料具有三维空间框架结构，为柔软白色片状，规格为20mm×15mm×0.5mm，包括由生物基底膜构成的致密面和由真皮支架构成的胶原蛋白疏松面，致密面表面光滑，非常密实，疏松面呈疏松多孔状，具有很多明显的孔道；致密面和疏松面分层明显，结构完全不同。
表1不同组织修复材料的性能测试结果
将实施例一至实施例四所得的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料分别进行性能测试实验，包括外观、抗张强度、羟脯氨酸含量、总蛋白含量、体外模拟降解时间、细胞毒性和致敏试验，其中，外观通过技术专家从外部感官质量上进行评价，抗张强度采用济南友创试验机有限公司生产的WDW-1型号的电子万能试验机测定的应力应变关系而测定，羟脯氨酸含量采用日立L-8900型号的氨基酸分析仪通过氨基酸分析方法测定，并以总蛋白含量为基数进行计量，总蛋白含量采用凯氏定氮方法测定，体外模拟降解时间采用体外模拟降解方法测定，细胞毒性采用MTT比色方法测定，致敏试验采用GBT16886.10-2005第10部分：刺激与迟发型超敏反应试验规定的方法测定，测试结果如表1所示。
由表1可以看出，本发明制备的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的外观均为白色，具有致密面和疏松面两个面，无肉眼可见杂质；其厚度在0.5～1mm之间；抗张强度均不低于4MPa；羟脯氨酸含量不小于总蛋白含量的7％(m/m)；总蛋白含量不低于95％；体外模拟降解时间不少于48h；细胞毒性反应均不大于1级，均无迟发型的超敏反应。因此，其具有很好的与口腔适配效果，厚度适中，抗张强度大，无细胞毒性和致敏反应，放置于口腔软组织与骨缺损区之间，可以与口腔软组织紧密贴附，组织相容性好，术后可被降解吸收，不产生有毒产物，在口腔医学领域具有良好的应用前景，具有较高的医学领域实际应用价值。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用了物理和化学的方法对鱼皮组织进行脱细胞，使制备的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料中细胞成分去除彻底，细胞等抗原物质处理干净，降低了免疫原性，并具备了疏松面；在脱细胞的过程中采用冻融以及胰蛋白酶处理的方法，增加了脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料中胶原纤维的间隙，为细胞提供了通道，增大了细胞的迁移速度，同时提供了细胞生长空间。本发明的膜材料以鱼皮为原料，来源丰富，避免了使用猪或牛等陆地哺乳动物源性材料存在人畜共患病毒的携带和传播的风险；其是一面为致密面另一面为疏松面的脱细胞细胞外基质，保留了真皮层结构，主要成分是胶原蛋白，组织相容性良好。本发明制备的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料可用于口腔种植手术的骨缺损修复，放置于口腔软组织与骨缺损区之间，具有可以与口腔软组织紧密贴附，组织相容性好，术后可被降解吸收，不产生有毒产物和厚度适宜等优点，在口腔医学领域具有良好的应用前景，具有较高的医学领域实际应用价值。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)前处理：取鱼皮，去除鱼鳞、内侧脂肪和多余鱼肉；
2)洗涤：将步骤1)所得的鱼皮采用生理盐水反复冲洗数次，接着，采用超纯水反复冲洗数次；
3)脱表皮层、制备疏松面：将步骤1)所得的组织置于0.01～1.0mol/L的酸溶液中，在20～37℃下，振荡5～30min，以去除表皮层并得到疏松面；
4)稳定化：将步骤3)所得的组织置于0.5～2.5mol/L的氯化钠溶液中，在20～37℃下，振荡30～120min，以稳定结构；
5)脱细胞：将步骤4)所得的组织置于-80～-70℃下冻融，反复冻融数次，然后，依次采用0.5～4.0wt％的脱氧胆酸钠溶液、3.5～6.5g/L的十二烷基磺酸钠溶液和0.1～1.0g/L的胰蛋白酶溶液进行脱细胞处理；
6)洗涤：采用生理盐水进行洗涤；
7)灭菌：冻干，定型，经Co-60γ射线辐照灭菌，得引导组织再生膜材料。
2.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，其特征在于：
所述步骤3)中酸溶液是盐酸溶液、硫酸溶液、甲酸溶液、乙酸溶液中的任意一种或几种。
3.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，其特征在于：
所述步骤7)中灭菌的剂量为15～20kGy。
4.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，其特征在于：
所述步骤5)中冻融的次数为3～5次。
5.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法，其特征在于：
所述步骤2)中生理盐水冲洗和超纯水冲洗的次数均为3～5次，每次冲洗的时间均为10～15min。
6.一种脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料，其特征在于：
由根据权利要求1～5中任意一项所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的制备方法制备而成；
所述引导组织再生膜材料是具有三维空间框架结构的脱细胞细胞外基质，所述引导组织再生膜材料包括由生物基底膜构成的致密面和由真皮支架构成的胶原蛋白疏松面。
7.根据权利要求6所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料，其特征在于：
所述引导组织再生膜材料为柔软的片状。
8.根据权利要求7所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料，其特征在于：
所述引导组织再生膜材料的规格为15～25mm×15～25mm×0.5～1.0mm。
9.根据权利要求6所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料，其特征在于：
所述引导组织再生膜材料的外观为白色。
10.一种根据权利要求6所述的脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料的应用，其特征在于：
所述引导组织再生膜材料用于口腔种植手术的骨缺损修复中，置于口腔软组织与骨缺损区之间。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810313026.XA CN108355171B (zh) | 2018-04-09 | 2018-04-09 | 脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810313026.XA CN108355171B (zh) | 2018-04-09 | 2018-04-09 | 脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108355171A true CN108355171A (zh) | 2018-08-03 |
| CN108355171B CN108355171B (zh) | 2021-05-14 |
Family
ID=63008044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810313026.XA Active CN108355171B (zh) | 2018-04-09 | 2018-04-09 | 脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108355171B (zh) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110193096A (zh) * | 2019-05-29 | 2019-09-03 | 上海市第六人民医院 | 一种海洋源性仿生型软骨材料及其制备方法 |
| WO2020097711A1 (pt) * | 2018-11-14 | 2020-05-22 | JÚNIOR, Edmar Maciel Lima | Processo de obtenção de matriz extracelular descelularizada, matriz extracelular descelularizada, uso da mesma e kit |
| CN112618799A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-09 | 上海理工大学 | 鱼皮脱细胞真皮基质及其制备方法和应用 |
| CN112755247A (zh) * | 2019-10-21 | 2021-05-07 | 烟台蓝创生物技术有限公司 | 一种脱细胞真皮基质及其制备方法 |
| CN113476667A (zh) * | 2021-07-26 | 2021-10-08 | 青岛蓝远生物工程有限公司 | 一种鱼皮脱细胞真皮基质支架及其制备方法和应用 |
| US20210322229A1 (en) * | 2018-10-24 | 2021-10-21 | Somnio Global Holdings, Llc | Functional wound healing dressings |
| CN113616854A (zh) * | 2021-08-18 | 2021-11-09 | 江苏优创生物医学科技有限公司 | 一种人工软组织及其制备方法 |
| CN113694256A (zh) * | 2021-08-16 | 2021-11-26 | 江苏优创生物医学科技有限公司 | 一种脱细胞基质纤维及其制备方法 |
| CN113846045A (zh) * | 2020-06-28 | 2021-12-28 | 中国海洋大学 | 一种可用于细胞培养的鱼鳞组织支架的制备方法 |
| CN114618026A (zh) * | 2022-03-17 | 2022-06-14 | 西岭(镇江)医疗科技有限公司 | 一种可促进骨再生的屏障膜及其制备方法 |
| CN115814161A (zh) * | 2022-11-25 | 2023-03-21 | 深圳兰度生物材料有限公司 | 软组织修复材料及其制备方法 |
Citations (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1522766A (zh) * | 2003-09-05 | 2004-08-25 | 东南大学 | 脱细胞真皮基质的制备方法 |
| CN1800372A (zh) * | 2005-12-02 | 2006-07-12 | 王平安 | 组织工程化细胞外基质的制备方法 |
| CN100999615A (zh) * | 2006-12-22 | 2007-07-18 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种由鱼皮提取的色素及其制备方法 |
| CN102018991A (zh) * | 2010-12-02 | 2011-04-20 | 南通大学 | 纳米银-猪脱细胞真皮基质生物敷料及其制备方法 |
| CN102247589A (zh) * | 2010-05-19 | 2011-11-23 | 李勇 | 海洋胶原肽在制备延缓皮肤衰老的药物、食品中的用途 |
| EP2485779A2 (en) * | 2009-10-07 | 2012-08-15 | Kerecis EHF | A scaffold material for wound care and/or other tissue healing applications |
| US20120221118A1 (en) * | 2011-02-25 | 2012-08-30 | Obi Biologics, Inc. | Materials for soft and hard tissue repair |
| CN103785060A (zh) * | 2014-03-06 | 2014-05-14 | 福州大学 | 一种负载表皮生长因子的鱼皮胶原支架及其制备方法 |
| CN104436318A (zh) * | 2014-11-21 | 2015-03-25 | 李柏霖 | 一种可吸收抗菌类骨结构的引导组织再生膜的制作方法 |
| CN105331662A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-02-17 | 四川大学 | 一种动物软骨源的未变性ii型胶原及其制备方法 |
| CN205073351U (zh) * | 2015-09-18 | 2016-03-09 | 广州市美昊生物科技有限公司 | 一种脱细胞基质源的口腔补片 |
| CN105982337A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-10-05 | 浙江省海洋开发研究院 | 一种用于骨质疏松和关节炎辅助治疗的水产胶原蛋白肽食品 |
| CN106075579A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-11-09 | 柏登生医股份有限公司 | 鱼皮衍生组织修复材料及其制造方法 |
| CN106421903A (zh) * | 2016-08-17 | 2017-02-22 | 东华大学 | 蓝鲨鱼皮胶原牙周组织引导再生纳米纤维膜及其制备方法 |
-
2018
- 2018-04-09 CN CN201810313026.XA patent/CN108355171B/zh active Active
Patent Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1522766A (zh) * | 2003-09-05 | 2004-08-25 | 东南大学 | 脱细胞真皮基质的制备方法 |
| CN1800372A (zh) * | 2005-12-02 | 2006-07-12 | 王平安 | 组织工程化细胞外基质的制备方法 |
| CN100999615A (zh) * | 2006-12-22 | 2007-07-18 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种由鱼皮提取的色素及其制备方法 |
| CN102781485A (zh) * | 2009-10-07 | 2012-11-14 | 克雷西斯公司 | 用于创伤护理和/或其它组织愈合应用的支架材料 |
| EP2485779A2 (en) * | 2009-10-07 | 2012-08-15 | Kerecis EHF | A scaffold material for wound care and/or other tissue healing applications |
| CN102247589A (zh) * | 2010-05-19 | 2011-11-23 | 李勇 | 海洋胶原肽在制备延缓皮肤衰老的药物、食品中的用途 |
| CN102018991A (zh) * | 2010-12-02 | 2011-04-20 | 南通大学 | 纳米银-猪脱细胞真皮基质生物敷料及其制备方法 |
| US20120221118A1 (en) * | 2011-02-25 | 2012-08-30 | Obi Biologics, Inc. | Materials for soft and hard tissue repair |
| CN103785060A (zh) * | 2014-03-06 | 2014-05-14 | 福州大学 | 一种负载表皮生长因子的鱼皮胶原支架及其制备方法 |
| CN104436318A (zh) * | 2014-11-21 | 2015-03-25 | 李柏霖 | 一种可吸收抗菌类骨结构的引导组织再生膜的制作方法 |
| CN106075579A (zh) * | 2015-03-31 | 2016-11-09 | 柏登生医股份有限公司 | 鱼皮衍生组织修复材料及其制造方法 |
| CN205073351U (zh) * | 2015-09-18 | 2016-03-09 | 广州市美昊生物科技有限公司 | 一种脱细胞基质源的口腔补片 |
| CN105331662A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-02-17 | 四川大学 | 一种动物软骨源的未变性ii型胶原及其制备方法 |
| CN105982337A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-10-05 | 浙江省海洋开发研究院 | 一种用于骨质疏松和关节炎辅助治疗的水产胶原蛋白肽食品 |
| CN106421903A (zh) * | 2016-08-17 | 2017-02-22 | 东华大学 | 蓝鲨鱼皮胶原牙周组织引导再生纳米纤维膜及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王园园等: "脱细胞鱼皮口腔引导组织修复膜的制备和评价", 《中国组织工程研究》 * |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20210322229A1 (en) * | 2018-10-24 | 2021-10-21 | Somnio Global Holdings, Llc | Functional wound healing dressings |
| CN113164645A (zh) * | 2018-11-14 | 2021-07-23 | 埃德马尔·马西埃尔·利马·朱尼尔 | 获得脱细胞的细胞外基质的方法，脱细胞的细胞外基质，其用途和试剂盒 |
| WO2020097711A1 (pt) * | 2018-11-14 | 2020-05-22 | JÚNIOR, Edmar Maciel Lima | Processo de obtenção de matriz extracelular descelularizada, matriz extracelular descelularizada, uso da mesma e kit |
| CN110193096A (zh) * | 2019-05-29 | 2019-09-03 | 上海市第六人民医院 | 一种海洋源性仿生型软骨材料及其制备方法 |
| CN112755247A (zh) * | 2019-10-21 | 2021-05-07 | 烟台蓝创生物技术有限公司 | 一种脱细胞真皮基质及其制备方法 |
| CN113846045A (zh) * | 2020-06-28 | 2021-12-28 | 中国海洋大学 | 一种可用于细胞培养的鱼鳞组织支架的制备方法 |
| CN113846045B (zh) * | 2020-06-28 | 2023-09-22 | 中国海洋大学 | 一种可用于细胞培养的鱼鳞组织支架的制备方法 |
| CN112618799A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-09 | 上海理工大学 | 鱼皮脱细胞真皮基质及其制备方法和应用 |
| CN112618799B (zh) * | 2020-12-28 | 2022-05-27 | 上海理工大学 | 鱼皮脱细胞真皮基质及其制备方法和应用 |
| CN113476667A (zh) * | 2021-07-26 | 2021-10-08 | 青岛蓝远生物工程有限公司 | 一种鱼皮脱细胞真皮基质支架及其制备方法和应用 |
| CN113694256A (zh) * | 2021-08-16 | 2021-11-26 | 江苏优创生物医学科技有限公司 | 一种脱细胞基质纤维及其制备方法 |
| CN113616854A (zh) * | 2021-08-18 | 2021-11-09 | 江苏优创生物医学科技有限公司 | 一种人工软组织及其制备方法 |
| CN114618026A (zh) * | 2022-03-17 | 2022-06-14 | 西岭(镇江)医疗科技有限公司 | 一种可促进骨再生的屏障膜及其制备方法 |
| CN114618026B (zh) * | 2022-03-17 | 2023-09-12 | 西岭(镇江)医疗科技有限公司 | 一种可促进骨再生的屏障膜及其制备方法 |
| CN115814161A (zh) * | 2022-11-25 | 2023-03-21 | 深圳兰度生物材料有限公司 | 软组织修复材料及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108355171B (zh) | 2021-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108355171A (zh) | 脱细胞真皮基质引导组织再生膜材料及其制备方法和应用 | |
| CN108478868B (zh) | 可注射型同种异体脂肪脱细胞基质微粒的制备方法及应用 | |
| CN104055795B (zh) | 一种可注射植入剂及其制备方法 | |
| CN106492285A (zh) | 可注射的脱细胞软骨基质微粒及其在植入剂中的应用 | |
| KR20100040427A (ko) | 자기 치아를 이용한 치료방법 및 치아 처리방법 | |
| US20130220365A1 (en) | Method for Producing a Bone Transplant Material, and Bone Transplant Material Produced by Same | |
| CN107929809A (zh) | 一种可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒及其制备方法与应用 | |
| RU2721604C1 (ru) | Способ получения остеопластических биоматериалов из костной ткани | |
| CN105935317A (zh) | 一种表面载药缓释颌面种植经皮基台及其制备方法 | |
| CN108144124A (zh) | 一种脱细胞异体真皮基质及在口腔疾病中的应用 | |
| CN108404212A (zh) | 一种脱细胞真皮基质材料的制备方法 | |
| Liu et al. | Manufacture and preliminary evaluation of acellular tooth roots as allografts for alveolar ridge augmentation | |
| CN115245597A (zh) | 交联透明质酸凝胶与脱细胞基质微粒组合物 | |
| CN101637623A (zh) | 一种牙科止血栓及其制备方法 | |
| CN112957532A (zh) | 一种用于牙种植的生物膜制备方法 | |
| EP3941542B1 (en) | Injectable aqueous implant formulation containing ascorbic acid | |
| CN107412867B (zh) | 一种异种脱细胞真皮基质的制备方法 | |
| KR101455837B1 (ko) | 조직 재생 유도용 흡수성 차폐막의 제조방법 | |
| CN105266916B (zh) | 一种以再利用为目的离体牙处理及储存的方法 | |
| KR20190093188A (ko) | 분쇄된 탈 세포화한 세포외 기질의 현탁 형태의 제조 방법 | |
| CN109701077B (zh) | 一种微孔再生组织基质及其制备和应用 | |
| CN113101416B (zh) | 一种方格星虫脱细胞生物材料、制备方法及其应用 | |
| CN112717205B (zh) | 一种利用动物源生物膜制备的口腔修复膜及其制备方法 | |
| KR20110092477A (ko) | 치아 골 이식재 및 이의 제조방법 | |
| CN116019982A (zh) | 一种脱细胞真皮基质及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |