CN108272683A - 一种用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液及其制备方法与应用。所述方法如下：将原料积雪草、洋甘菊和甘草预处理得到混合植物片；将制得的混合植物片置于20～45℃的浸泡液中浸泡15～30分钟，浸泡液包括5～10份的第一酶制剂、1～5份醇类物质、1～5份盐类物质及40～100份水；将浸泡液和浸泡后的植物片在预设温度下超声处理1～2小时，静止分层后分离得到上清液；将上清液加热再冷却至室温后并利用超声波将其与第二酶制剂复配得到混合液；混合液采用装填有树脂填料的色谱层析柱纯水洗脱，去除杂质，获得的洗脱液即保湿植物提取液。本发明提供的保湿植物提取液温和无刺激，保湿效果好，具天然防腐性能。

Description

一种用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液及其制备方法与 应用

【技术领域】

本发明涉及酶法提取活性物质技术领域，尤其涉及一种用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液及其制备方法与应用。

【背景技术】

积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)为伞形科积雪草植物，因其叶子酷似马蹄状或半个铜钱，所以又名马蹄草、连钱草等，民间也有地方称其为胡薄荷、地钱草等。积雪草在许多国家和地区的传统医药领域中的应用历史悠久，我国中医中药对积雪草的内服和外用已有两千年历史，最早被《神农本草经》一书所载。据《本草纲目》记载，积雪草味苦、辛、性寒，无毒，归肝、脾、肾、胃经，其功效为活血、消肿止痛，并有清热解毒、利尿等。积雪草的化学成分主有三萜类、黄酮类、多炔烯类和挥发油类等。

洋甘菊(Matricaria chamomillaL.)又称母菊，为菊科母菊属(Matricaria)的一年生或多年生草本，全草香气，含有挥发性芳香油，具有保湿、杀菌、保湿美白等功能，是一种极具开发价值的香料植物。

甘草(Glycyrrhiza)，又名乌拉尔甘昌，多年生草本植物，属豆科。甘草中的生理活性成分主要有三萜类化合物(甘草甜素亦甘草酸盐，甘草次酸等)、黄酮类化合物(甘草黄碱酮、异甘草黄酮、甘草素等)及甘草多糖类化合物三大类成分。

目前单一的植物提取液功效不能完全满足市场需求，如何将植物功效性发挥到最大，多种植物复配提取物的研发应用而生。

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液的方法，以克服现有技术有机溶剂提取法导致的提取物保湿性不强、安全性和功效性不高的技术缺陷。

为达到上述目的，本发明提供一种保湿植物提取液的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将原料10～80份积雪草、10～80份洋甘菊和10～80份甘草预处理得到长度小于预设值的混合植物片；

(2)将步骤(1)制得的混合植物片置于20～45℃的浸泡液中浸泡15～30分钟，所述浸泡液包括5～10份的第一酶制剂、1～5份醇类物质、1～5份盐类物质及40～100份水，其中，所述第一酶制剂为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物，所述醇类物质为1,2-己二醇、丁二醇、丙二醇、辛甘醇中的一种或两种以上的混合物，所述盐类物质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、碳酸钠中的一种或两种以上的混合物；

(3)将浸泡液和浸泡后的混合植物片转移至超声波处理器中，在20～45℃下超声处理1～2小时，静止分层后分离得到上清液；

(4)将所述上清液在85～100℃下加热5～15分钟，待冷却至室温后，再加入5～10份的第二酶制剂，并在20～45℃下超声处理1～2小时得到混合液，其中，所述第二酶制剂包括葡糖氧化酶和/或溶菌酶；

(5)所述混合液采用装填有树脂填料的色谱层析柱纯水洗脱，去除杂质，获得的洗脱液即保湿植物提取液。

在本发明提供的所述的无防腐剂的保湿植物提取液的制备方法一较佳实施例中，所述积雪草、所述洋甘菊和所述甘草的重量之比为(0.25～2)：(0.5～8)：1。

在本发明提供的所述的保湿植物提取液的制备方法一较佳实施例中，所述积雪草、所述洋甘菊和所述甘草的重量之比为1：1：1。

在本发明提供的所述的保湿植物提取液的制备方法一较佳实施例中，所述第二酶制剂还包括辅酶Q10或蛋白酶。

本发明同时提供一种用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液，所述保湿植物提取液采用上文所述的的保湿植物提取液的制备方法制备得到。

本发明还提供一种上文所述的用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液在制备化妆品和个人洗护用品中的应用。

本发明还提供一种保湿洗面奶，以其总重量为100％计，其包括0.5～15％的上文所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

本发明还提供一种保湿润肤乳，以其总重量为100％计，其包括0.5～15％的上文所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

本发明还提供一种保湿沐浴露，以其总重量为100％计，其包括1～15％的上文所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

本发明还提供一种保湿化妆水，以其总重量为100％计，其包括3～18％的上文所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

与相关技术相比，本发明提供的用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液及其制备方法与应用具有以下有益效果：

一、本发明提供的保湿植物提取液以积雪草、洋甘菊和甘草为原料，利用复合生物酶特有技术提取活性物质，在第一酶制剂、醇类物质和盐类物质的共同作用下，全面破解植物细胞壁及细胞间质的密闭结构，高效提取原料中的活性物质，并避免了使用有毒性的有机溶剂，提高了保湿植物提取液的安全性。

二、利用超声波有效复配第二酶制剂和从原料中提取的活性物质，使制备的保湿植物提取液自身具防腐性能，无需再添加防腐剂，一方面在化妆品和个人洗护用品中应用时可以避免添加防腐剂带来的刺激等负面作用，另一方面还能延长产品自身的使用寿命。

三、本发明提供的保湿植物提取液为可溶性液体，克服了粉末状保湿提取物在各类产品体系中的兼容应用的局限性，且本发明提供的保湿植物提取液温和无刺激，能够长效保湿。

【具体实施方式】

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种用生物加工和防腐的保湿植物提取液的制备方法，所述方法包括如下步骤：

步骤一、将原料10～80份积雪草、10～80份洋甘菊和10～80份甘草预处理得到长度小于预设值的混合植物片；

具体地，所述积雪草选自广东区域积雪草、湖北区域积雪草、海南区域积雪草、江苏区域积雪草中的一种或两种以上。优选地，所述积雪草为为广东区域积雪草。所述洋甘菊选自罗马洋甘菊(CHAMAEMELUM NOBILE)、德国洋甘菊(MATRICARIA RECUTICA)、摩洛哥洋甘菊(ORMENIS MULTICAULIS)的一种或两种混合物。优选地，所述洋甘菊为罗马洋甘菊。所述甘草选自广东区域甘草、湖北区域甘草、湖南区域、河北区域甘草中的一种或两种以上。优选地，所述甘草为广东区域甘草。

将积雪草、洋甘菊和甘草清洗干净，剪成小片块，然后再使用榨汁机破碎，破碎后的各原料的长度小于8mm，即通过榨汁机破碎后的混合植物片的长度小于8mm。需要说明的是，积雪草、洋甘菊和甘草可以分别用榨汁机破碎再混合，或者在破碎前将积雪草、洋甘菊和甘草混合，然后再一起破碎。使用不同型号的榨汁机对原料的破碎程度也不一样，8mm为优选值。

优选地，所述积雪草、所述洋甘菊和所述甘草的重量之比为(0.25～2)：(0.5～8)：1。

优选地，所述积雪草、所述洋甘菊和所述甘草的重量之比为1:1:1、1:2:1、1:4:1、1:6:1、1:8:1、2:1:1、4:1:2、6:1:2和8:1:2。

更为优选地，所述洋甘菊、所述忍冬花和所述草木犀的重量之比为1：1：1。

步骤二、将步骤一制得的混合植物片置于20～45℃的浸泡液中浸泡15～30分钟，所述浸泡液包括5～10份的第一酶制剂、1～5份醇类物质、1～5份盐类物质及40～100份水，其中，所述第一酶制剂为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物，所述醇类物质为1,2-己二醇、丁二醇、丙二醇、辛甘醇中的一种或两种以上的混合物，所述盐类物质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、碳酸钠中的一种或两种以上的混合物。

本发明利用复合生物酶特有技术提取活性物质，在第一酶制剂、醇类物质和盐类物质的共同作用下，全面破解植物细胞壁及细胞间质的密闭结构，高效提取积雪草、洋甘菊和甘草的活性物质，并避免了使用有毒性的有机溶剂，提高了保湿植物提取液的安全性。

优选地，所述第一酶制剂为所述纤维素酶、所述果胶酶和所述木聚糖酶的混合物，且所述木聚糖酶、所述纤维素酶和所述果胶酶和的重量比组成为1：(2～8)：(1～6)。

其中，纤维素酶与果胶酶能够使细胞壁或细胞间质中的纤维素、果胶等物质降解，破坏细胞壁的致密结构，引起细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁、细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，从传质角度促使有效成分提取率提高。

木聚糖是植物半纤维素的重要组分，木聚糖结构复杂，完全降解需要多种酶的参与，而木聚糖酶是参与降解酶系中最重要的一种。木聚糖是指可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称，木聚糖酶可以破碎植物细胞壁，提高养分的木聚糖降解为聚合度较低的小分子片段，破坏细胞壁的结构，将细胞壁束缚的营养物质释放出来。

半纤维素酶是一种能使构成植物细胞膜的多糖类(纤维素和果胶物质除外)水解的酶类。

其中，1,2-己二醇、丁二醇、丙二醇和辛甘醇均能够溶解一定的植物体成分，同时安全性好，具有各自的优良特性。如1,2-己二醇，能够高效长久保湿，还有着防腐杀菌的功效；丁二醇触感滑爽，性质稳定，可以获得更柔软的肤感；丙二醇的粘性和吸湿性好，无毒；辛甘醇具有一定的保湿与抗菌活性。

优选地，所述醇类物质为1,2-己二醇。

其中，氯化钠能增大体系的粘度；可做渗透调节剂、盐析剂，对酶的活性具有一定的影响，影响酶破解细胞壁的速度及植物细胞内物质的溶出。氯化钠还具有杀菌消炎的作用。

氯化钾是盐酸盐的一种，白色结晶或结晶性粉末，易溶于水和甘油，难溶于醇，不溶于醚和丙酮。在食品行业中，可用作食盐代用品应用于农产、水产、畜产、发酵、调味、罐头、方便食品等，制作低钠产品，以降低钠含量过高对机体的不良影响；也用于强化钾(供人体电解质用)，配制运动员饮料等。

氯化镁在化学工业中是重要的无机原料，用于生产碳酸镁、氢氧化镁、氧化镁等镁产品，也用作防冻剂的原料等。在其它领域内可做食品添加剂、蛋白凝固剂、融雪剂、冷冻剂、防尘剂、耐火材料等。

碳酸钠是一种易溶于水的白色粉末，溶液呈碱性。广泛用于医药、造纸、冶金、玻璃、纺织、染料等工业，用作食品工业发酵剂。

优选地，所述盐类物质为氯化钠。

步骤三、将浸泡液和浸泡后的混合植物片转移至超声波处理器中，在20～45℃下超声处理1～2小时，静止分层后分离得到上清液；其中，分离方法可以为离心或过滤。

一般情况下，为了减少制备工艺时间，超声处理的温度和浸泡的温度相同。

步骤四、将所述上清液在85～100℃下加热5～15分钟，待冷却至室温后，再加入5～10份的第二酶制剂，并在20～45℃下超声处理1～2小时得到混合液，其中，所述第二酶制剂包括葡糖氧化酶和/或溶菌酶；

优选地，所述第二酶制剂还包括辅酶Q10或蛋白酶。

第二酶制剂为功效性酶制剂，葡糖氧化酶和溶菌酶能抑制菌斑形成，能够有效去除菌落种群，使提取的保湿植物提取液自身具防腐性能，延长了产品的使用寿命，且避免加入其他防腐剂使产生过敏现象。辅酶Q10和蛋白酶可提高其在应用时的功效。

具体地：

葡糖氧化酶能有效快速分解葡聚糖，溶解菌斑，抑制菌斑形成，能够有效去除菌落种群。

溶菌酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶作为防腐剂安全性高。溶菌酶是一种天然蛋白质，性质很稳定。

辅酶Q10是一种脂溶性抗氧化剂，能激活人体细胞和细胞能量的营养，具有提高人体免疫力、增强抗氧化、延缓衰老和增强人体活力等功能。同时能深入细胞，强化细胞新成代谢功能，活络细胞间紧实结合能力，另一方面在表皮层形成弹性的网状结构，确实修补因失水性造成的皱纹，并进而达到真正的保湿功效。

步骤五、所述混合液采用装填有树脂填料的色谱层析柱纯水洗脱，去除杂质，获得的洗脱液即保湿植物提取液。

本发明还提供采用上文所述的用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液的制备方法制备得到的用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液，该保湿植物提取液可以在制备化妆品和个人洗护用品中应用。

本发明还具体公开了保湿植物提取液在洗面奶、润肤乳、沐浴露和化妆水中的具体应用。具体实现的技术方案如下：

应用1、一种保湿洗面奶，以其总重量为100％计，其包括0.5～15％的上文所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

优选地，所述保湿洗面奶包括以重量百分比计的如下组份：椰油醇硫酸酯钠盐2.5％～3.5％、椰油酰胺2.0％～3.5％、保湿植物提取液0.5％～15％、柠檬酸0.01％～0.05％、余量为去离子水。

更优选地，所述保湿洗面奶包括以重量百分比计的如下组份：椰油醇硫酸酯钠盐2.5％、椰油酰胺3.5％、保湿植物提取液8.0％、柠檬酸0.03％、去离子水85.97％。

应用2、一种保湿润肤乳，以其总重量为100％计，其包括0.5～15％的上文所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

优选地，所述保湿润肤乳包括以重量百分比计的如下组份：丁二醇2.5％～3.5％、葡糖酸钠0.005％～0.01％、辛酸/癸酸甘油三酯2.0％～3.5％、氢化聚异丁烯2.0％～3.0％、异壬酸异壬酯0.5％～1.5％、鲸蜡硬脂醇0.1％～0.8％、聚丙烯酸酯交联聚合物-60.2％～0.8％、聚山梨醇酯-60 0.015％～0.07％、叔丁醇0.0025％～0.01％、保湿植物提取液0.5％～15％、柠檬酸0.01％～0.05％、余量为去离子水。

更优选地，所述保湿润肤乳包括以重量百分比计的如下组份：丁二醇3.0％、葡糖酸钠0.008％、辛酸/癸酸甘油三酯3.5％、氢化聚异丁烯2.0％、异壬酸异壬酯0.5％、鲸蜡硬脂醇0.8％、聚丙烯酸酯交联聚合物-6 0.4％、聚山梨醇酯-60 0.05％、叔丁醇0.01％、保湿植物提取液8％、柠檬酸0.03％、去离子水81.702％。

应用3、一种保湿沐浴露，以其总重量为100％计，其包括1～15％的上文所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

优选地，所述保湿沐浴露包括以重量百分比计的如下组份：椰油酰胺丙基甜菜碱4.5％～6.5％、月桂基葡糖苷2.0％～3.0％、癸基葡糖苷0.15％～0.2％、椰油酰两性基二乙酸二钠0.005％～0.01％、PEG-150二硬脂酸酯2.0％～3.5％、PEG-7甘油椰油酸酯2.0％～3.0％、保湿植物提取液1.0％～15.0％、柠檬酸0.01％～0.05％、余量为去离子水。

更优选地，所述保湿沐浴露包括以重量百分比计的如下组份：椰油酰胺丙基甜菜碱5.0％、月桂基葡糖苷2.0％、癸基葡糖苷0.15％、椰油酰两性基二乙酸二钠0.01％、PEG-150二硬脂酸酯2.0％、PEG-7甘油椰油酸酯2.0％、保湿植物提取液5.0％、柠檬酸0.01％、去离子水83.83％。

应用4、一种保湿化妆水，以其总重量为100％计，其包括3～18％的上文所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

优选地，所述保湿化妆水包括以重量百分比计的如下组份：甘油1.0％～2.5％、保湿植物提取液3.0％～18％、丁二醇0.8％～2％、PEG-60氢化蓖麻油0.2％～1.0％、香精0.05％～0.2％、柠檬酸0.01％～0.05％、余量为去离子水。

更优选地，所述保湿化妆水包括以重量百分比计的如下组份：甘油1.0％、保湿植物提取液16％、丁二醇2％、PEG-60氢化蓖麻油0.2％、香精0.1％、柠檬酸0.05％、去离子水80.65％。

一、制备保湿植物提取液(实施例1-9)

实施例1

将10份积雪草、10份洋甘菊和10份甘草清洗干净，剪成小片块后，混匀，使用榨汁机破碎；然后加入100份水、7份第一酶制剂(纤维素酶2.5份、果胶酶2份、木聚糖酶2.5份)、5份醇类物质(1,2-己二醇5份)、5份盐类物质(氯化钠5份)，置于25℃温度恒温水浴锅内浸泡30min；浸泡后转移至超声波处理器中，在25℃温度下以继续超声1h；然后静置分层，离心或过滤得到上清液；再将上清液于90℃下加热10min，待上清液冷却至室温后，加入5.5份第二酶制剂(葡糖氧化酶2份、溶菌酶3.5份)，在25℃下继续超声1h得到混合液；最后将所述混合液通过装填有树脂填料的色谱层析柱，用水洗涤，以除去杂质，收集洗脱液，即得到保湿植物提取液。

实施例1中，积雪草、洋甘菊和甘草的重量之比为1：1：1，实施例2～9除将积雪草、洋甘菊和甘草的重量之比如表1所示那样进行变更以外，其他都和实施例1同样的条件下进行制备得到保湿植物提取液，实施例2～9中各原料的重量比如下：

表1

二、为了进一步说明本发明实施例提供的保湿植物提取液的安全性及功效性，以下通过试验例进一步说明本发明实施例提供的保湿植物提取液的有益效果：

试验一：保湿效果测试

实验样品：本发明实施例1～9提供的保湿植物提取液

实验方法：用皮肤测试仪测量固定手臂的初始参数指标初始值(水份、油份、弹性、胶原纤维等)，涂抹等量的保湿植物提取液，涂抹均匀，等待1分钟至皮肤完全吸收，测试涂抹后固定手臂处的各参数指标值。

表2

试验样品	水份初始值	涂抹1min后	涂抹30min后	涂抹1h后
					实施例1	40％	66％	66％	65％
实施例2	41％	63％	63％	64％
					实施例3	42％	62％	62％	60％
实施例4	39％	63％	63％	62％
					实施例5	41％	60％	59％	59％
实施例6	45％	66％	65％	66％
					实施例7	42％	67％	55％	56％
实施例8	40％	59％	58％	57％
					实施例9	41％	60％	60％	59％

本实验利用皮肤测试仪对本发明中的保湿植物提取液进行过保湿功效测试，本发明的保湿植物提取液以积雪草、洋甘菊、甘草为原料，在多种酶的作用下复配而成，能够有效且长效保湿。通过实验发现本发明的保湿植物提取液能够明显增加皮肤的水分，增加肌肤的水润度，保持肌肤的柔滑水嫩，水分增加值均在20％以上；吸收1h后，肌肤的水分增加值基本上保持不变，能够长效保湿。本发明的实施例1提供的保湿植物提取液的保湿功效性最好，积雪草、洋甘菊和甘草的份数之比为1:1:1，结果见表2。

试验二：防腐效果测试

1、试验样品：本发明实施例1提供的保湿植物提取液样品；实验菌为大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC 6538、铜绿假单胞菌ATCC 9027、白色念珠菌ATCC 10231。

2、试验方法：微生物挑战性实验方法。

3、试验结果评定：采用《欧洲药典》的结果评定标准对本次试验结果进行评定，具体详见下表3。

表3

从上表3的测试结果可知，4种实验菌于第7天时(1周)菌落总数均下降100％，至第28天时无增长，判定通过挑战性实验，防腐效能良好，即本发明实施例1提供的抗敏性复合提取液采用溶菌酶、葡糖氧化酶及多元醇复配构建的防腐体系的防腐效果良好。

试验三：眼部刺激性/腐蚀性测试

1、试验样品：本发明实施例1～9提供的保湿植物提取液。

2、试验方法：SN/T 2329-2009化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验。

3、试验结果评价标准：刺激评分标准分为以下等级：IS＜1为无刺激性；1≤IS＜5为轻刺激性；5≤IS＜9为中度刺激性；IS≥10为强刺激性/腐蚀性。

4、试验结果：经过试验，本发明的保湿植物提取液的刺激评分均为IS＜1，即本发明实施例提供的保湿植物提取液对眼部温和无刺激性。

试验四：皮肤刺激性试验

(一)皮肤封闭型斑贴试验

1、试验样品：本发明实施例1～9提供的保湿植物提取液。

2、试验方法：从某一区域选择20名志愿者，志愿者的年龄在20～45岁之间，身体健康，近期未服用药物，非哺乳妇女或妊娠妇女，非体质敏感者。随机将志愿者平均分成10组，每组两个人。其中，组1为空白对照组，斑试器小室内不放置任何物质，将斑试器用低致敏胶带贴敷于志愿者的背部或者前臂屈侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷在皮肤上；组2～组10与组1的处理方法相同，不同的是：分别将加有0.025mL本发明提供的保湿植物提取液放入斑试器小室内；即组2对应的是实施例1提供的保湿植物提取液，组3对应的是本发明实施例2提供的保湿植物提取液，组4对应的是本发明实施例3提供的保湿植物提取液……以此类推，组10对应的是本发明实施例9提供的保湿植物提取液。各组试验持续24小时、48小时后，去除斑试器后30min，待压痕消失后，观察贴敷处皮肤的反应情况并记录。

其中，皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准见下表4。

表4

在整个试验过程中，组1～组10的受试者的受势部位皮肤反应均呈阴性反应。由此可以看出，本发明实施例提供的保湿植物提取液不会引起皮肤的过敏和刺激反应，安全性好。

(二)重复性开放型涂抹试验

1、试验样品：本发明实施例1～9提供的保湿植物提取液。

2、从某一区域中选择20名志愿者，志愿者的年龄在20-45岁之间，身体健康，近期未服用药物，非哺乳妇女或妊娠妇女，非体质敏感者。随机将志愿者平均分成10组，每组两个人。其中，组1为空白对照组，以前臂屈作为受试部位，面积3×3cm2，受试部位保持干燥，受试前和受势期间避免接触其他外用制剂，用超纯水0.05±0.005g/次，均匀地涂抹受试部位；组2～组10分别为试验组，与组1不同的是：采用本发明实施例1～9提供的保湿植物提取液0.05±0.005g/次均匀地涂抹受试部位；其中，即组2对应的是实施例1提供的保湿植物提取液，组3对应的是本发明实施例2提供的保湿植物提取液，组4对应的是本发明实施例3提供的保湿植物提取液……以此类推，组10对应的是本发明实施例9提供的保湿植物提取液。各组每天进行2次均匀地涂抹受试部位，连续试验7天后完成试验，每天观察受试者的受试部位的皮肤反应情况并记录。在试验的过程中，如果出现如下表5中的3分以上的皮肤反应情况时，可停止继续试验并记录结果。

其中，表5为皮肤重复性开放型涂抹试验皮肤反应评判标准表。

表5

在整个试验过程中，组1～组10的受试者的受势部位的皮肤反应均呈阴性反应。由此可以看出，本发明实施例提供的保湿植物提取液不会引起皮肤的过敏和刺激反应，安全性好。

三、应用实施例10

实施例1制备的保湿植物提取液在保湿洗面奶中的应用

表6

表7

表8

表6为本发明的保湿植物提取液在洗面奶中的应用。保湿植物提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，配方体系中无需添加防腐剂。通过表7的结果可知，洗面奶配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，洗面奶配方1～5对能够明显增加皮肤的水分，增加肌肤的水润度，保持肌肤的柔滑水嫩，水分增加最高值达15％；吸收1h后，肌肤的水分增加值基本上保持不变，能够长效保湿，结果见表8。

四、应用实施例11

实施例1制备的保湿植物提取液在保湿润肤乳中的应用

表9

表10

	配方1	配方2	配方3	配方4	配方5
						是否通过防腐挑战性实验	通过	通过	通过	通过	通过

表11

试验样品	水份初始值	涂抹1min后	涂抹30min后	涂抹1h后
					配方1	40％	58％	58％	58％
配方2	41％	52％	52％	52％
					配方3	42％	52％	52％	52％
配方4	39％	55％	55％	55％
					配方5	41％	49％	49％	49％

表9为本发明的保湿植物提取液在润肤乳中的应用。保湿植物提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，配方体系中无需添加防腐剂。通过表10的结果可知，润肤乳配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，润肤乳配方1～5对能够明显增加皮肤的水分，增加肌肤的水润度，保持肌肤的柔滑水嫩，水分增加最高值达18％；吸收1h后，肌肤的水分增加值基本上保持不变，能够长效保湿，结果见表11。

五、应用实施例12

实施例1制备的保湿植物提取液在保湿沐浴露中的应用

表12

表13

	配方1	配方2	配方3	配方4	配方5
						是否通过防腐挑战性实验	通过	通过	通过	通过	通过

表14

表12为本发明的保湿植物提取液在沐浴露中的应用。保湿植物提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，通过表13的结果可知，沐浴露配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，沐浴露配方1～5的保湿效果好，能明显提高肌肤水分含量，高达10％以上，并且能够长效保湿，滋养肌肤，结果见表14。

六、应用实施例13

实施例1制备的保湿植物提取液在保湿化妆水中的应用

表15

表16

	配方1	配方2	配方3	配方4	配方5
						是否通过防腐挑战性实验	通过	通过	通过	通过	通过

表17

试验样品	水份初始值	涂抹1min后	涂抹30min后	涂抹1h后
					配方1	40％	58％	58％	58％
配方2	41％	56％	56％	56％
					配方3	42％	58％	58％	58％
配方4	39％	61％	61％	61％
					配方5	41％	55％	55％	55％

表15为本发明的保湿植物提取液在化妆水中的应用。保湿植物提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，通过表16的结果可知，化妆水配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，化妆水配方1～5的保湿效果好，能明显提高肌肤水分含量，最高达21％，并且能够长效保湿，滋养肌肤，结果见表17。

本发明提供的用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液及其制备方法与应用具有以下有益效果：

一、本发明提供的保湿植物提取液以积雪草、洋甘菊和甘草为原料，利用复合生物酶特有技术提取活性物质，在第一酶制剂、醇类物质和盐类物质的共同作用下，全面破解植物细胞壁及细胞间质的密闭结构，高效提取原料中的活性物质，并避免了使用有毒性的有机溶剂，提高了保湿植物提取液的安全性。

二、利用超声波有效复配第二酶制剂和从原料中提取的活性物质，使制备的保湿植物提取液自身具防腐性能，无需再添加防腐剂，一方面在化妆品和个人洗护用品中应用时可以避免添加防腐剂带来的刺激等负面作用，另一方面还能延长产品自身的使用寿命。

三、本发明提供的保湿植物提取液为可溶性液体，克服了粉末状保湿提取物在各类产品体系中的兼容应用的局限性，且本发明提供的保湿植物提取液温和无刺激，能够长效保湿。

以上所述的仅是本发明的实施方式，在此应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出改进，但这些均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将原料10～80份积雪草、10～80份洋甘菊和10～80份甘草预处理得到长度小于预设值的混合植物片；

(2)将步骤(1)制得的混合植物片置于20～45℃的浸泡液中浸泡15～30分钟，所述浸泡液包括5～10份的第一酶制剂、1～5份醇类物质、1～5份盐类物质及40～100份水，其中，所述第一酶制剂为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物，所述醇类物质为1,2-己二醇、丁二醇、丙二醇、辛甘醇中的一种或两种以上的混合物，所述盐类物质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、碳酸钠中的一种或两种以上的混合物；

(3)将浸泡液和浸泡后的混合植物片转移至超声波处理器中，在20～45℃下超声处理1～2小时，静止分层后分离得到上清液；

(4)将所述上清液在85～100℃下加热5～15分钟，待冷却至室温后，再加入5～10份的第二酶制剂，并在20～45℃下超声处理1～2小时得到混合液，其中，所述第二酶制剂包括葡糖氧化酶和/或溶菌酶；

(5)所述混合液采用装填有树脂填料的色谱层析柱纯水洗脱，去除杂质，获得的洗脱液即保湿植物提取液。

2.根据权利要求1所述的用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液的制备方法，其特征在于，所述积雪草、所述洋甘菊和所述甘草的重量之比为(0.25～2)：(0.5～8)：1。

3.根据权利要求2所述的用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液的制备方法，其特征在于，所述积雪草、所述洋甘菊和所述甘草的重量之比为1：1：1。

4.根据权利要求1所述的用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液的制备方法，其特征在于，所述第二酶制剂还包括辅酶Q10或蛋白酶。

5.一种用生物酶加工和防腐的保湿植物提取液，其特征在于，所述保湿植物提取液采用权利要求1至4中任一项所述的保湿植物提取液的制备方法制备得到。

6.权利要求5所述的保湿植物提取液在制备化妆品和个人洗护用品中的应用。

7.一种保湿洗面奶，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括0.5～15％的权利要求1至4中任一项所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

8.一种保湿润肤乳，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括0.5～15％的权利要求1至4中任一项所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

9.一种保湿沐浴露，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括1～15％的权利要求1至4中任一项所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。

10.一种保湿化妆水，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括3～18％的权利要求1至4中任一项所述的制备方法制备得到的保湿植物提取液。