CN108096086A - 一种利用冰叶日中花冻干粉制备不含防腐剂的冰叶日中花提取物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种利用冰叶日中花冻干粉制备不含防腐剂的冰叶日中花提取物的方法，包括以下步骤：H1、原料选取；H2、设备清洗；H3、冷冻干燥；H4、超微粉碎；H5、辐照灭菌；H6、超声波提取；H7、离心除杂；H8、微孔过滤除菌。本发明的创新点在于：工艺简单，选用“植物工厂”内种植的水耕冰花作为原料，保证提取液的高品质，并采用低温冷冻干燥制粉技术、超声波强化提取技术，完整保留冰花的有效活性成分，制备的冰花提取液不添加任何防腐剂，而且冰花提取液富含大量矿物质、氨基酸、肌醇、β‑胡萝卜素、维生素等营养成分，具有美白祛斑、补水保湿、抗敏修复、抗衰老等功效，可用于制造高端的补水保湿、镇静舒缓、美白祛斑、抗敏修复、紧致抗衰等化妆品，创造可观经济效益。

Description

一种利用冰叶日中花冻干粉制备不含防腐剂的冰叶日中花提 取物的方法

技术领域

本发明涉及化妆品生产技术领域，具体为一种利用冰叶日中花冻干粉制备不含防腐剂的冰叶日中花提取物的方法。

背景技术

冰菜又名冰叶日中花，是番杏科，日中花属的一年生草本植物，原产于南非纳米比沙漠等干旱地区。其特点是在叶面和茎上着生有大量的大型泡状细胞，里面填充有液体，在太阳照射下反射光线，就像冰晶一样，因此而得名。冰叶日中花是一种高营养价值的盐生植物，常被人们直接用来生食或利用提取物来制作化妆品。

目前，公开报道的冰叶日中花提取物存在以下几个问题：(1)有公开报道的冰叶日中花提取物所使用的原料，均来自土壤栽培的冰花。由于土壤栽培存在的一些固有缺陷，列如：需要使用农药来预防、杀灭病虫害，因而存在农药残留风险；栽培的环境，栽培使用的土壤、水源、肥料等存在被重金属污染的风险和被有害微生物污染的风险；栽培过程中必须向土壤中灌溉高浓度矿物盐，最终导致土壤的盐碱化，破坏生态平衡等；(2)由于冰花提取液含有大量的水分和丰富的营养物质，存储过程中必须添加剂大量防腐剂用量用于防止其变质，因而很大程度上限制了其在高端化妆品中的添加应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用冰叶日中花冻干粉制备不含防腐剂的冰叶日中花提取物的方法，以解决上述背景技术中所提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种利用冰叶日中花冻干粉制备不含防腐剂的冰叶日中花提取物的方法，包括以下步骤：

H1、原料选取：挑选“植物工厂”内种植的水耕冰叶日中花，去掉根部和破损的叶片，置于聚乙烯塑料盒内，低温3-8℃(优选4℃)密封保存，并在12小时内进行冷冻干燥处理；

H2、设备清洗：对所有设备清洗，自来水冲洗干净后再用无菌去离子水冲洗一遍；晾干后用臭氧消毒30分钟，待用；

H3、冷冻干燥：将冰叶日中花称重后进行冷冻干燥处理工艺条件为：-20℃至-50℃(优选-26℃)预冻3-24小时(优选5小时)，干燥室工作压力30-80Pa(优选45Pa)，升华温度10-30℃(优选20℃)，保持10-30小时(优选20小时)，解析温度30-50℃(优选35℃)，保持3-8小时(优选5小时)，冰花冻干物含水量≤6％(优选≤3％)；

H4、超微粉碎：将冷冻干燥好的冰花粗品置于清洁、温度低于25℃、湿度小于30％的环境中进行超微粉碎，过100-500目筛(优选200目筛)后按照100g/袋的包装规格，装入消毒好的复合铝箔袋中，密封保存；

H5、辐照灭菌：将分装好的冰花冻干粉进行辐照灭菌处理，辐照工艺为：60Coγ射线辐照，辐照剂量为2-10kGy(优选4.5kGy)。辐照灭菌后取样检测细菌、霉菌和酵母菌、金黄色葡萄球菌、粪大肠菌群、铜绿假单胞杆菌，检测合格后即可入库待用；

H6、超声波提取：将辐照灭菌后并且检测合格的冰花冻干粉用无菌去离子水配制成0.5-10％(优选5％)的冰花粉溶液，转入消毒好的超声提取设备中，使用20-50kHZ(优选40kHZ)超声波频率，功率为0.3-0.8w/cm2(优选0.5w/cm2)，提取温度为20-50℃(优选30℃)，提取时间为20-60分钟(优选45分钟)，加速有效成分的溶出；

H7、离心除杂：将得到的超声波提取液用离心机50xg-5000xg(优选600xg)，离心10-60分钟(优选30分钟)，收集上清液转移至干净无菌的聚乙烯塑料桶内，弃去残渣；

H8、微孔过滤除菌：将离心液过0.10-0.45μm(优选0.22μm)非对称聚醚砜滤膜，压力泵加压至2-8个(优选4个)标准大气压，去除细微杂质和有害微生物，收集滤液至干净无菌的聚乙烯塑料桶内，并立即使用。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

1、本发明所选的原料为在完全受控、不使用农药、不接触土壤、无尘、无菌、封闭的“植物工厂”内种植出来的水耕冰花，充分保证了冰花提取液的高品质；采用低温冷冻干燥制粉技术、超声波强化提取技术，完整保留了冰花的有效活性成分。

2、本发明的冰花提取工艺、原材料存储方式是：使用常温存储辐照灭菌后的冰花冻干粉用来代替长期存储冰花提取液成品，解决了冰花提取液成品在存储过程中必须添加大量防腐剂的弊端。

3、本发明的冰花提取液富含大量矿物质(植物盐)、氨基酸、肌醇(松醇)、β-胡萝卜素、维生素等营养成分，具有美白祛斑、补水保湿、抗敏修复、抗自由基、抗衰老等功效，可用于制造高端的补水保湿、镇静舒缓、美白祛斑、抗敏修复、紧致抗衰等化妆品，从而创造可观经济效益。

附图说明

图1为本发明的工艺流程图；

图2为本发明的带工艺说明的工艺流程图。

具体实施方式

下面将结合实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1、图2，一种利用冰叶日中花冻干粉制备不含防腐剂的冰叶日中花提取物的方法，包括以下步骤：

H1、原料选取：挑选“植物工厂”内种植的水耕冰叶日中花，去掉根部和破损的叶片，置于聚乙烯塑料盒内，低温(4℃左右)密封保存，并在12小时内送至工厂处理；

H2、设备清洗：对所有设备清洗，自来水冲洗干净后再用无菌去离子水冲洗一遍；晾干后用臭氧消毒30分钟，待用；

H3、冷冻干燥：将冰叶日中花称重后进行冷冻干燥处理，工艺条件为：-26℃预冻5小时，干燥室工作压力45Pa，升华温度20℃，保持20小时，解析温度35℃，保持5小时。冷冻干燥结束后，取样检测冰花冻干物水分含量为2.13％；

H4、超微粉碎：将冷冻干燥好的冰花粗品置于清洁、温度低于25℃、湿度小于30％的环境中进行超微粉碎，过200目筛后按照100g/袋的包装规格，装入消毒好的复合铝箔袋中，密封保存；

H5、辐照灭菌：将分装好的冰花冻干粉进行辐照灭菌处理，辐照工艺为：60Coγ射线辐照，辐照剂量为4.5kGy。辐照灭菌后取样检测细菌、霉菌和酵母菌、金黄色葡萄球菌、粪大肠菌群、铜绿假单胞杆菌、水分含量，检测方法和限值参照《化妆品卫生规范》2007版。检测结果为细菌总数、霉菌和酵母菌总数＜10；金黄色葡萄球菌、粪大肠菌群、铜绿假单胞杆菌均未检出，水分含量为2.21％；

H6、超声波提取：将辐照灭菌后并且检测合格的冰花冻干粉用无菌去离子水配制成5％的冰花粉溶液，转入消毒好的超声提取设备中，使用40kHZ超声波频率，功率为0.5w/cm2，提取温度为30℃，提取时间为45分钟，加速有效成分的溶出；

H7、离心除杂：将得到的超声波提取液用离心机600xg，离心30分钟，收集上清液转移至干净无菌的聚乙烯塑料桶内，弃去残渣；

H8、微孔过滤除菌：将离心液过0.22μm非对称聚醚砜滤膜，压力泵加压至4个标准大气压，去除细微杂质和有害微生物，收集滤液至干净无菌的聚乙烯塑料桶内，并立即使用。

冰花提取液无菌验证：对通过0.22μm非对称聚醚砜滤膜的冰花提取液进行取样检测，测试细菌、霉菌和酵母菌、金黄色葡萄球菌、粪大肠菌群、铜绿假单胞杆菌的含量，检测方法和限值参照《化妆品卫生规范》2007版。检测结果为细菌总数、霉菌和酵母菌总数＜10；金黄色葡萄球菌、粪大肠菌群、铜绿假单胞杆菌均未检出。

将按照本实列方法进行制备的冰花提取液进行成分检测，各成分为：植物盐：589.4mg/100g(其中含钠：72.4mg/100g，钾：436mg/100g，铁：0.316mg/100g，钙：34.12mg/100g，锌：0.186mg/100g，铜：0.0436mg/100g，磷：32.68mg/100g，镁：13.28mg/100g，锰：0.378mg/100g)，维生素：4.48mg/100g(其中VC：2.84mg/100g，VE：1.5mg/100g，VB1：0.0256mg/100g，VB2：0.06mg/100g，VB6：0.0504mg/100g)，总氨基酸：53mg/100g，蛋白质：1212mg/100g，肌醇(松醇)：153mg/100g，β-胡萝卜素：1.9mg/100g，果酸：242.4196mg/100g(其中草酸：196mg/100g，柠檬酸：46.4mg/100g)。

对冰花提取液进行安全性验证：

1多次皮肤刺激性试验

1.1检测依据：中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范》2007年版皮肤刺激性/腐蚀性试验方法

1.2检测步骤：试验前约24h，将新西兰兔背部脊柱两侧毛剪掉，左、右各约3cm×3cm。取受试物约0.5mL(g)直接涂在皮肤上，然后用二层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封闭试验，敷用时间为4h。试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。于清除受试物后的1、24、48和72h观察涂抹部位皮肤反应。在观察期内受试新西兰兔皮肤均未出现红斑和水肿的皮肤刺激反应。

1.3检测结果：依据中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范》2007年版皮肤刺激性/腐蚀性试验判断标准，被检的冰花提取物多次皮肤刺激强度为无刺激性。

2冰叶日中花提取物眼刺激替代实验

2.1检测步骤：鸡胚尿囊绒毛膜实验。取孵化至第7天的受精蛋，打开气室，剥去内壳膜，暴露出尿囊绒毛膜，可看到新生血管。用无菌透明胶纸封闭窗口，继续孵化一天。第二天将孵化正常的将鸡蛋分为3组，实验组3枚(灭菌冰花提取液)，阴性(灭菌生理盐水)和阳性(1％SDS(过滤除菌))对照组各一枚，揭去透明胶纸，分别将测试物滴入尿囊绒毛膜，观察是否有出血、凝血、血管溶解及出现的时间，按公式进行打分评价。

IS＝{(301-secH)X5+(301-secL)X7+(301-secC)X9}/300

注：secH表出血初始时间(秒)；secL表血管溶解初始时间(秒)；secC表凝血初始时间(秒)

表1时间评估法结果评价

评分	分类
		IS＜5	无/轻刺激性
5≤IS≤9	中等刺激性
		IS＞9	强刺激性/腐蚀性

2.2检测结果：冰叶日中花提取液涂抹鸡胚尿囊绒毛膜后，无出血、凝血和血管溶解现象，刺激积分为0分，因此冰叶日中花提取物对鸡胚尿囊绒毛膜刺激强度为无刺激性。

3人体斑贴试验

3.1检测依据：中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范》2007年版人体皮肤封闭型斑贴试验方法

3.2检测步骤：将冰叶日中花提取物放入斑试器小室内，用量约为0.020mL-0.025mL。对照孔为空白对照。将加有冰叶日中花提取物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的背部，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。分别于去除受试物斑试器后30min(待压痕消失后)、24h和48h按标准观察皮肤反应。在观察期内实验组皮肤均未出现红斑、水肿等阳性反应。

3.3检测结果：依据中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范》2007年版人体皮肤封闭型斑贴试验判断标准，送检的冰花提取物对人体皮肤不良反应的潜在可能性为阴性。

另外，本方法所得冰花提取液还进行功效性验证：

1美白祛斑功效验证

1.1验证原理：酪氨酸酶活性抑制实验。人类皮肤的颜色与皮肤中存在的色素的种类和数量有关，黑素对皮肤颜色影响最大。酪氨酸酶是黑素生成的关键酶，它控制着黑素的形成过程，其活性程度对色素的沉积起主要作用。美白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶达到美白作用，故对酪氨酸酶抑制作用的强弱是评价增白化妆品的主要指标。酪氨酸酶既能催化L-酪氨酸生成L-多巴，又能催化L-多巴氧化为多巴醌，多巴醌为红色，在475nm可以测定其吸光度值，从而评价酶活性抑制效果。

1.2验证步骤：按下表顺序和剂量准确移取试剂，置于37℃水浴中恒温10min后，各加入0.40mL酪氨酸酶溶液，混匀，37℃温育反应10min，迅速移入比色皿中，测得在475nm处的吸光度Aa、Ab、Ac、Ad，然后按下面的公式计算提取液对酪氨酸酶的抑制率：

抑制率＝[1-(Ad-Ac)/(Ab-Aa)]×100％

1.3验证结果：

冰花提取液添加百分比	5％	10％	15％	20％
					酶活性抑制率	38.56％	50.73％	61.02％	65.47％

不同浓度的冰叶日中花提取液对酪氨酸酶活性均有抑制作用，添加量达到20％时抑制率能达到65.47％，验证结果说明冰叶日中花提取液有良好的美白祛斑功效。

2抗自由基、抗衰老功效验证

2.1验证原理：

自由基清除实验：自由基对细胞的损伤是皮肤衰老的重要原因之一，在机体代谢过程中产生的具有高度化学活性的自由基，极易对组织细胞的生物大分子，如核酸、蛋白质、多糖和脂类等造成损伤。自由基是衰老的重要启动因素，对组织细胞的损伤反应是缓慢、反复、渐进地进行，并具有累积效应。对自由基的清除效果是评价产品抗衰老性质的主要指标。

DPPH又称1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果，来计算抗氧化能力。

利用Fenton反应产生羟自由基：H2O2+Fe2+＝·OH+H2O+Fe3+，在反应体系中加入水杨酸，Fenton反应生成的羟自由基与水杨酸反应，生成于510nm处有特殊吸收的2，3-二羟基苯甲酸，如果向反应体系中加入具有清除羟自由基功能的被测物，就会减少生成的羟自由基，从而使有色化合物的生成量相应减少。采用固定反应时间法，在510nm处测量含被测物反应液的吸光度，并与空白液比较，以测定被测物对羟自由基的清除作用。

在光照条件下，甲硫氨酸和核黄素反应产生O-2·，可以将氯化硝基氮蓝四唑(NBT)氧化为蓝紫色物质formazane，在560nm下有明显的吸收。清除O-2·物质的加入，可降低NBT的氧化程度。用分光光度法测定其吸光度，以吸光度的变化来间接判断受试物对O-2·的清除作用。

2.2验证步骤：

2.2.1DPPH自由基清除活性验证：在10mL比色管中依次按下表剂量准确移取试剂，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。按下式计算自由基清除率(K)。试验重复三次，取其平均值作为最后结果。

K(％)＝[1-(Ai-Aj)/Ac]*100％

2.2.2羟自由基清除能力验证：在比色管中按下表依次先加入试剂后摇匀，37℃水浴加热15min后取出，测其510nm处吸光度；羟自由基清除率计算公式为：

羟自由基清除率(％)＝A0-(Ax-Ax0)/A0·100％

2.2.3超氧阴离子清除功效验证：按下表依次加入试剂，将各管在4 000lx下反应25min。560nm下测定吸光值，重复3次。结果以清除百分率(％)表示。

清除率＝{A(空白样)-A(样品)}/A(空白样)*100％

2.3验证结果：

冰花提取液添加百分比	5％	10％	15％	20％
					对DPPH抑制率	40.37％	57.56％	68.42％	73.08％
对羟自由基抑制率	42.88％	56.31％	67.74％	71.29％
					对超氧阴离子抑制率	39.62％	53.73％	62.81％	68.24％

不同浓度的冰叶日中花提取液对DPPH、羟自由基和超氧阴离子自由基均具有清除作用，验证结果说明冰叶日中花提取液具有良好的清除自由基、抗衰老功效。

3补水保湿功效验证：

3.1验证原理：采用电容法测量人体皮肤角质层的水分含量，其原理是基于水和其他物质的介电常数差异显著，按照皮肤含水量的不同，测得的皮肤的电容值不同，其观测参数可代表皮肤水分值。通过2组温度、湿度传感器测定近表皮(约1cm以内)，由角质层水分散失在不同两点形成的水蒸气气压梯度，直接测出经表皮散发的水分量。经皮水分散失值是皮肤屏障好坏的一个重要标志，越低说明皮肤的屏障功能就越好，反之，则越差。

3.2验证步骤：测试环境温度为22℃±1℃，湿度为50％±5％，有效志愿者30名；年龄在16-65岁之间。实验中，左右手臂内侧标记3cm×3cm试验区域，冰叶日中花组和空白对照组均随机分布在左右手臂上。使用电容法皮肤测定仪进行受试区域和对照区域的测量，每个区域依照平行测定5次。先测量各测试区域的空白值，然后按2ml±0.1ml/cm2样品用量，使用乳胶指套将试验产品均匀涂布于试验区内.涂抹后，分别测量1h、2h和4h，受试区域和空白对照区域的皮肤含水量合水分散失率。

3.3验证结果：

不同浓度的冰叶日中花提取液均具有提高皮肤的含水量和减少经皮水分散失均效果。验证结果说明冰叶日中花提取液具有良好的的补水保湿功效。

4抗敏修复功效性验证

4.1验证原理：RBC溶血刺激模型检测对SDS致细胞膜刺激损伤的抑制实验。当血液中红细胞发生破裂，红细胞内血红蛋白逸出，测定逸出的血红蛋白反应的吸光度值，根据吸光度值的高低，可以判定红细胞受到损伤的程度。血红蛋白漏出量越多，表明损伤越大，也说明了待测物的致敏性和安全性。SDS能导致红细胞膜破裂，原料与SDS共同作用于红细胞后，检测红细胞破裂减少程度，可判定原料的抗敏、抗刺激功效。

4.2验证方法：取新鲜牛血，加入抗凝剂，室温下1500×g离心15min后吸去上清液，用PBS缓冲液混洗离心管中的RBC 4次，去除大量的白细胞、血浆和黄色的碎片，将离心管中的RBC添加适量葡萄糖，使葡萄糖终浓度为10mmol/L，密封保存。4℃冰箱保存备用。实验前，以PBS调RBC终浓度为8×109个/mL待用。实验分为3组：①阳性对照组：向1.5mL EP管中加入25μL RBC悬液，935μL PBS和40μL质量浓度为1.0mg/mL的SDS溶液，37℃下150r/min振荡孵育10min；②测试样品自溶对照：分别向1.5mL EP管加入不同浓度的冰叶日中花提取液(5％、10％、15％、20％)，加入PBS至975μL混匀。快速加入25μL RBC轻缓混匀，37℃下150r/min振荡孵育30min；③样品+SDS组：分别向1.5mL EP管加入不同浓度的冰叶日中花提取液(5％、10％、15％、20％)，再加入PBS至935μL，混匀后加入25μL RBC，振荡孵育30min后取出，加入40μL质量浓度为1.0mg/mL SDS液，振荡孵育10min。11180×g离心1min终止3组反应，取上清液于1cm比色皿中于530nm波长处测吸光度，计算溶血率。其中阳性对照组和测试样品自溶组的比较可表征该样品的刺激性，阳性对照组和样品+SDS组的比较可表征该样品的抗刺激性。

4.3验证结果：

不同浓度冰叶日中花提取液自溶组没有发生明显的血红细胞溶血现象，溶血率低于2.5％，没有使血红细胞发生明显的受损和刺激，即均没有明显的刺激性。实验组(冰叶日中花提取液+SDS组)与阳性组(SDS组)对比，不同浓度冰花提取液对SDS致损血红细胞均有很强抑制作用，验证结果说明冰叶日中花提取液具有良好的抗敏、抗刺激效果。

经过多种检测可知，通过本发明的方法所制备的冰花提取物不需要添加任何防腐剂，因而对人体无刺激；经过多种检测可知，通过本发明的方法所制备的冰花提取物中富含的大量矿物质(植物盐)、氨基酸、肌醇(松醇)、β-胡萝卜素、维生素等营养成分，因而具有美白祛斑、补水保湿、抗敏修复、抗自由基、抗衰老等功效。通过本发明的方法所制备的冰花提取物可用于制造高端的补水保湿、镇静舒缓、美白祛斑、抗敏修复、紧致抗衰等化妆品，从而创造可观经济效益。

尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种利用冰叶日中花冻干粉制备不含防腐剂的冰叶日中花提取物的方法，其特征在于：包括以下步骤：

H1、原料选取：挑选“植物工厂”内种植的水耕冰叶日中花，去掉根部和破损的叶片，置于聚乙烯塑料盒内，低温3-8℃(优选4℃)密封保存，并在12小时内进行冷冻干燥处理；

H2、设备清洗：对所有设备清洗，自来水冲洗干净后再用无菌去离子水冲洗一遍；晾干后用臭氧消毒30分钟，待用；

H3、冷冻干燥：将冰叶日中花称重后进行冷冻干燥处理工艺条件为：-20℃至-50℃(优选-26℃)预冻3-24小时(优选5小时)，干燥室工作压力30-80Pa(优选45Pa)，升华温度10-30℃(优选20℃)，保持10-30小时(优选20小时)，解析温度30-50℃(优选35℃)，保持3-8小时(优选5小时)，冰花冻干物含水量≤6％(优选≤3％)；

H4、超微粉碎：将冷冻干燥好的冰花粗品置于清洁、温度低于25℃、湿度小于30％的环境中进行超微粉碎，过100-500目筛(优选200目筛)后按照100g/袋的包装规格，装入消毒好的复合铝箔袋中，密封保存；

H5、辐照灭菌：将分装好的冰花冻干粉进行辐照灭菌处理，辐照工艺为：60Coγ射线辐照，辐照剂量为2-10kGy(优选4.5kGy)。辐照灭菌后取样检测细菌、霉菌和酵母菌、金黄色葡萄球菌、粪大肠菌群、铜绿假单胞杆菌，检测合格后即可入库待用；

H6、超声波提取：将辐照灭菌后并且检测合格的冰花冻干粉用无菌去离子水配制成0.5-10％(优选5％)的冰花粉溶液，转入消毒好的超声提取设备中，使用20-50kHZ(优选40kHZ)超声波频率，功率为0.3-0.8w/cm2(优选0.5w/cm2)，提取温度为20-50℃(优选30℃)，提取时间为20-60分钟(优选45分钟)，加速有效成分的溶出；

H7、离心除杂：将得到的超声波提取液用离心机50xg-5000xg(优选600xg)，离心10-60分钟(优选30分钟)，收集上清液转移至干净无菌的聚乙烯塑料桶内，弃去残渣；

H8、微孔过滤除菌：将离心液过0.10-0.45μm(优选0.22μm)非对称聚醚砜滤膜，压力泵加压至2-8个(优选4个)标准大气压，去除细微杂质和有害微生物，收集滤液至干净无菌的聚乙烯塑料桶内，并立即使用。