CN108008135B - 一种载脂蛋白b测定试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种载脂蛋白B测定试剂盒，其包含有所述的复合稳定剂。这种复合稳定剂含有牛血清白蛋白、丙三醇、Triton X‑100、海藻糖、液体生物防腐剂Proclin300。本发明涉及到的载脂蛋白B测定试剂盒，其保存时间比较长，提高测试稳定性、准确性、精密度较常规的产品效果好。该试剂盒成本低廉，配制简单，适合大规模应用。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断领域，特别是涉及一种用于载脂蛋白B测定试剂盒。
背景技术
载脂蛋白(英语：Apolipoproteins)指那些结合到脂类上的蛋白质(脂溶性物质，如脂肪与胆固醇)，他们结合在一起就形成了脂蛋白，后者载着脂类穿梭于淋巴系统与循环系统。载脂蛋白B存在于低密度脂蛋白的表面，细胞识别和摄取LDL主要通过识别载脂蛋白B实现。所以，载脂蛋白B增多时，即使LDL水平正常，也可使冠心病发病率增高。人血清中载脂蛋白B与其相应抗体反应，形成抗原-抗体复合物，该复合物的浊度与样本中载脂蛋白B的含量成正比，从而测定载脂蛋白B的含量。与载脂蛋白B结合的抗体作为一种蛋白质容易失活、降解，直接影响载脂蛋白B测定的结果致使载脂蛋白B测定试剂盒缺乏稳定性，保存时间短，直接影响临床使用。
目前关于载脂蛋白B测定试剂稳定性的报道非常有限。专利CN 203178297U提供了一种血清载脂蛋白B测定试剂盒；包括盒体、盒盖和试剂瓶，但未涉及试剂成分和配比，未对试剂盒的稳定性进行说明；CN 1957255A提供一种检测apo B－48的方法，但主要应用范围为平板酶联乳胶聚集法，未加入任何稳定剂，未对试剂盒的稳定性进行说明。因此，研究一种配制简单、成本低廉、针对载脂蛋白B测定试剂盒有稳定效果的复合稳定剂，具有相当的市场价值。
发明内容
本发明的目的在于公开一种用于载脂蛋白B测定试剂盒。
本发明所采取的技术方案是：
一种复合稳定剂，稳定剂含有牛血清白蛋白、丙三醇、Triton X-100、海藻糖、液体生物防腐剂Proclin300。
优选的，稳定剂中含有：1～5％牛血清白蛋白、1～2％丙三醇、1～1.5％Triton X-100、1～2.5％海藻糖、0.1～0.2％液体生物防腐剂Proclin300。
优选的，稳定剂中牛血清白蛋白含量为10g/L、丙三醇含量为10g/L、Triton X-100含量为10g/L、海藻糖含量为15g/L、液体生物防腐剂Proclin300含量为2g/L。
复合稳定剂在载脂蛋白B测定试剂盒中的应用。
一种载脂蛋白B测定试剂盒，试剂盒中含有上述复合稳定剂。
优选的，试剂盒中还含有试剂1和试剂2，其中试剂1中的成分是Trisbase 2.0g/L、盐酸0.6g/L、氯化钠7.20g/L、PEG-4000 1g/L、山梨酸钾1g/L；试剂2的成分是Trisbase2.0g/L、盐酸0.6g/L、APOB抗体5.0g/L、山梨酸钾1g/L。
本发明的有益效果是：本发明涉及到的载脂蛋白B测定试剂盒，其保存时间比较长，提高测试稳定性、准确性、精密度较常规的产品效果好。该试剂盒成本低廉，配制简单，适合大规模应用。
具体实施方式
实施例1
按照下述配方配制用于载脂蛋白B试剂盒的复合稳定剂：10g/L牛血清白蛋白、10g/L丙三醇、10g/L Triton X-100、15g/L海藻糖、2g/L液体生物防腐剂Proclin300。
试验用载脂蛋白B测定试剂盒，由试剂1和试剂2组成：
试剂1:Trisbase 2.0g/L、盐酸0.6g/L、氯化钠7.20g/L、PEG-4000 1g/L、山梨酸钾1g/L；
试剂2:Trisbase 2.0g/L、盐酸0.6g/L、APOB抗体5.0g/L、山梨酸钾1g/L。
试验方法及结果：
1)稳定性、准确性、精密度
将复合稳定剂，按2％(v/v)的量加入载脂蛋白B测定试剂盒中(试剂1和试剂2均按此量添加)，与不添加复合稳定剂的载脂蛋白B测定试剂盒分别测定样本中载脂蛋白B含量。本试验以英国朗道脂类质控水平1(质控1)和脂类质控水平3(质控3)为样本，标准品为英国朗道载脂蛋白A1&B校准品，采用日立7020型全自动生化分析仪进行检测，设一个空白测试、两个样本测试(空白测试以生理盐水代替样本)。样本与试剂1和试剂2的比例为2μL：250μL：50μL，设定的主波长为340nm、副波长为700nm，样本与试剂1混匀后，37℃孵育5min，读取各管吸光度A1，加入试剂2混匀后反应5min，读取吸光度A2,每管的吸光度变化Λ，A＝A2-A1，扣除试剂空白后计算出样本、标准品的吸光度变化值Λ，然后根自动计算出样本中载脂蛋白B含量。质控1中载脂蛋白B靶值为88.8mg/dL，质控3中载脂蛋白B的靶值为160mg/dL，允许偏差范围在±18％。
根据以上测定方法，以同批次同瓶装的质控1、质控3作为检测样本，分别用添加2％(V/V)复合稳定剂的载脂蛋白B测定试剂盒和不添加复合稳定剂的载脂蛋白B测定试剂盒进行检测，每7天检测一次，检测周期57天，计算得到测定质控结果的相对偏差(CV)、标准偏差(SD)、相对标准偏差(CV)和有效期天数，相对偏差、相对标准偏差这两项可反映测定结果的稳定性。
测定结果有效期天数试验结果数据详见下表。
由上表数据可知，未加入复合稳定剂的载脂蛋白B测定试剂盒与加入2％复合稳定剂的试剂盒相比，其检测结果相对偏差、相对标准偏差分别明显偏高。说明没有加入复合稳定剂的载脂蛋白B测定试剂盒很不稳定，有效期天数只能维持8-15天左右。加入2％复合稳定剂的载脂蛋白B测定试剂盒在整个测试周期中，准确度均在允许偏差范围内，精密度CV小于4％，说明该测定试剂盒在57天内能保持良好的稳定性、准确性、精密度。由此可见，添加了2％复合稳定剂的载脂蛋白B测定试剂盒在测试稳定性、准确度、精密度方面表现更为优异，复合稳定剂对其有明显的稳定效果，可有效延长载脂蛋白B测定试剂盒的保存期限。
2)使用量比对试验
将复合稳定剂按照1％(v/v)、2％(v/v)、3％(v/v)的比例分别加入载脂蛋白B测定试剂盒中(试剂1和试剂2均按同样量添加)，进行样本中载脂蛋白B含量的测定。按本发明稳定性试验的测定方法测定，计算得到测定质控结果的相对偏差(CV)、标准偏差(SD)、相对标准偏差(CV)和有效期天数，相对偏差、相对标准偏差这两项可反映测定结果的稳定性。结果见下表。
由上表数据可知，复合稳定剂的三种不同加入量对载脂蛋白B测定试剂盒的稳定作用均有所增强，从不同程度地延长试剂盒的保存期限和提高试剂盒的测试稳定性、准确度、精密度。加入1％复合稳定剂的试剂盒作用最弱，有效期天数约29天；加入3％复合稳定剂的试剂盒相对偏差、相对标准偏差较加入2％复合稳定剂的试剂盒低，说明3％复合稳定剂的加入量不是最优选；2％复合稳定剂添加量的试剂盒的相对偏差、相对标准偏差最小，说明加入2％复合稳定剂的载脂蛋白B测定试剂盒测试稳定性、准确性、精密度最好，在试剂盒开瓶后57天左右还能保持良好的测试性能。因此，2％可定为复合稳定剂在载脂蛋白B测定试剂盒中的最佳使用量。
实施例2
按照下述配方配制用于载脂蛋白B试剂盒的复合稳定剂：50g/L牛血清白蛋白、20g/L丙三醇、15g/L Triton X-100、25g/L海藻糖、2g/L液体生物防腐剂Proclin300。
按照实施例1的方法进行稳定性、准确性、精密度试验，结果如下：
实施例3
按照下述配方配制用于载脂蛋白B试剂盒的复合稳定剂：10g/L牛血清白蛋白、10g/L丙三醇、10g/L Triton X-100、10g/L海藻糖、1g/L液体生物防腐剂Proclin300。
按照实施例1的方法进行稳定性、准确性、精密度试验，结果如下：
从以上数据和分析结果可以得到，载脂蛋白B测定试剂盒加入本发明所述复合稳定剂后，能延长试剂盒的保存时间，有效提高测试稳定性、准确性、精密度，且最适加入体积比大约为2％。该复合稳定剂成本低廉，配制简单，值得进一步推广使用。
Claims (3)
1.一种复合稳定剂在制备载脂蛋白B测定试剂盒中的应用，其特征在于：所述稳定剂由1～5％牛血清白蛋白、1～2％丙三醇、1～1.5％Triton X-100、1～2.5％海藻糖和0.1～0.2％液体生物防腐剂Proclin300组成，所述稳定剂在载脂蛋白B测定试剂盒中的添加量(v/v)为2％或3％；所述试剂盒中还含有试剂1和试剂2，其中试剂1中的成分是Trisbase2.0g/L、盐酸0.6g/L、氯化钠7.20g/L、PEG-4000 1g/L、山梨酸钾1g/L；试剂2的成分是Trisbase 2.0g/L、盐酸0.6g/L、APOB抗体5.0g/L、山梨酸钾1g/L。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，稳定剂中牛血清白蛋白含量为10g/L、丙三醇含量为10g/L、Triton X-100含量为10g/L、海藻糖含量为15g/L、液体生物防腐剂Proclin300含量为2g/L。
3.一种载脂蛋白B测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中添加有2％或3％(v/v)的复合稳定剂，所述复合稳定剂由以下组分组成：1～5％牛血清白蛋白、1～2％丙三醇、1～1.5％Triton X-100、1～2.5％海藻糖、0.1～0.2％液体生物防腐剂Proclin300；所述试剂盒中还含有试剂1和试剂2，其中试剂1中的成分是Trisbase 2.0g/L、盐酸0.6g/L、氯化钠7.20g/L、PEG-4000 1g/L、山梨酸钾1g/L；试剂2的成分是Trisbase 2.0g/L、盐酸0.6g/L、APOB抗体5.0g/L、山梨酸钾1g/L。
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- 2017-11-23 CN CN201711182760.9A patent/CN108008135B/zh active Active
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