CN107929728A - 一种肺炎球菌蛋白疫苗及其制备方法 - Google Patents
一种肺炎球菌蛋白疫苗及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107929728A CN107929728A CN201710258675.XA CN201710258675A CN107929728A CN 107929728 A CN107929728 A CN 107929728A CN 201710258675 A CN201710258675 A CN 201710258675A CN 107929728 A CN107929728 A CN 107929728A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protein
- vaccine
- protein vaccine
- pneumococcal
- capsular
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 14
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title abstract description 48
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 claims abstract description 33
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 32
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 18
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 8
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000001719 carbohydrate derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003726 plant lectin Substances 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 4
- 108010089814 Plant Lectins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 abstract description 14
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 abstract description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 abstract description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 24
- 201000005010 Streptococcus pneumonia Diseases 0.000 description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 23
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 23
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 23
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 20
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 20
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 20
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 20
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 20
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 20
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 19
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 208000024875 Infantile dystonia-parkinsonism Diseases 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 208000001543 infantile parkinsonism-dystonia Diseases 0.000 description 10
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 6
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 6
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 6
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 229940031937 polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 4
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 229940031831 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 3
- 241001478240 Coccus Species 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241001522129 Pinellia Species 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 3
- 229940031960 pneumococcal polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 3
- 229940031767 13-valent pneumococcal conjugate vaccine Drugs 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000202726 Bupleurum Species 0.000 description 2
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 2
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 2
- 108010000437 Deamino Arginine Vasopressin Proteins 0.000 description 2
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 229940124858 Streptococcus pneumoniae vaccine Drugs 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 2
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940031999 pneumococcal conjugate vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229960005404 sulfamethoxazole Drugs 0.000 description 2
- JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N sulphamethoxazole Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 108010037003 Buserelin Proteins 0.000 description 1
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229940124895 FluMist Drugs 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000025309 Hair disease Diseases 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010071699 Infectious pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000158526 Nasalis Species 0.000 description 1
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000337007 Oceania Species 0.000 description 1
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108010046516 Wheat Germ Agglutinins Proteins 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940001007 aluminium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 amino, carboxyl Chemical group 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 229960004099 azithromycin Drugs 0.000 description 1
- MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N azithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)N(C)C[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N 0.000 description 1
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 description 1
- 208000025255 bacterial arthritis Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- CUWODFFVMXJOKD-UVLQAERKSA-N buserelin Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](COC(C)(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 CUWODFFVMXJOKD-UVLQAERKSA-N 0.000 description 1
- 229960002719 buserelin Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 1
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004281 desmopressin Drugs 0.000 description 1
- NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N desmopressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSCCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(N)=O)=O)CCC(=O)N)C1=CC=CC=C1 NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N 0.000 description 1
- YNKFCNRZZPFMEX-XHPDKPNGSA-N desmopressin acetate trihydrate Chemical compound O.O.O.CC(O)=O.C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSCCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(N)=O)=O)CCC(=O)N)C1=CC=CC=C1 YNKFCNRZZPFMEX-XHPDKPNGSA-N 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 208000034653 disorder of pilosebaceous unit Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000000959 ear middle Anatomy 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000010579 first pass effect Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000001279 glycosylating effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 229940028441 minirin Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000003695 paranasal sinus Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000008494 pericarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 229940124733 pneumococcal vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940049548 pneumovax Drugs 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000003257 protein preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 101150063569 slgA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000025301 tympanitis Diseases 0.000 description 1
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了一种肺炎球菌蛋白疫苗，是包括一种或多种肺炎链球菌荚膜糖与载体蛋白共价连接而得的肺炎链球菌荚膜糖‑蛋白结合物，载体蛋白为凝集素。与现有技术相比，本发明的优势是：提供的蛋白疫苗给药方式为经鼻给药，相对于肌肉注射，鼻腔给药方式更方便快捷；本发明提供的蛋白疫苗可作为市售肺炎球菌补充免疫疫苗使用；在大规模疫情发生时，可作为应急性疫苗暂时使用，为后续进行市售肺炎球菌疫苗接种提供免疫基础。
Description
技术领域
本发明涉及一种肺炎球菌蛋白疫苗，具体说，是涉及一种可用于鼻腔给药的肺炎球菌蛋白疫苗。
背景技术
一、肺炎球菌性疾病流行病学
肺炎链球菌性疾病(pneumococcal disease，PDs)的高发病率、高病死率、抗生素耐药性以及严重的后遗症，尤其是疾病对婴幼儿以及老年人产生的严重影响，使该疾病成为全球重要的公共卫生问题之一，我国也是肺炎链球菌性疾病的高发国家。肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae，SP，也称肺炎双球菌，Pneumococcus)为链球菌属，是一种过氧化氢酶阴性的革兰阳性双球菌，其细胞外壁的荚膜是细菌的特殊结构，存在于一些细菌细胞壁外的一层黏液性物质，可保护细菌免受抑菌或杀菌物质的侵害以及宿主吞噬细胞的吞噬，同时还有助于细菌黏附于宿主细胞表面以诱发感染，是细菌得以生存的重要表面结构。肺炎链球菌是导致婴幼儿肺炎、菌血症、脑膜炎等严重疾病的主要因素，也是引起窦炎和急性中耳炎最常见的病因。根据其荚膜多糖抗原性差异，目前已发现90多种血清型。感染或接种多糖抗原后刺激机体产生的保护性抗体具有型特异性，也有些抗体对相关血清型有一定程度的交叉保护。
肺炎链球菌广泛分布于然界，人类是重要自然宿主。肺炎链球菌在人的鼻咽、喉喉和口腔均可正常存在。儿童的鼻咽部携带率高于成年人。婴幼儿被认为是该菌的主要储存宿主。横断面调查显示，婴幼儿鼻咽携带率在发达国家可低至27％，在发展中国家可达85％。相较普通人群，肺炎链球菌性疾病更易发于5岁以下儿童和65岁以上老人人群。
肺炎链球菌主要通过呼吸道飞沫直接传播或由定植菌导致自体感染。肺炎链球菌可局部播散到鼻窦或中耳导致感染，吸入下呼吸道导致肺炎。当细菌侵入血液循环，伴或不伴其他部位播散繁殖，则可引起侵袭性感染，导致侵袭性肺炎链球菌性疾病(invasivepneumococcal diseases，IPD)。
肺炎链球菌性疾病分侵袭性和非侵袭性两类。IPD是指肺炎链球菌侵入与外环境无直接相通、原本无菌的部位和组织所致感染，主要包括脑膜炎、菌血症性肺炎，以及脓毒症、脓胸、骨髓炎、心包炎、心内膜炎、腹膜炎和化脓性关节炎等少见感染。IPD中80％～90％为菌血症性肺炎，5％～10％是脑膜炎，胸膜炎和关节炎等不足5％。非侵袭性肺炎链球菌性疾病主要包括急性中耳炎、鼻窦炎和非菌血症性肺炎。临床诊断的肺炎链球菌性肺炎80％为非菌血症性肺炎，20％为菌血症性肺炎。IPD不如非侵袭性肺炎链球菌性疾病常见，但是病原学诊断较易明确，因此IPD发病率经常作为反映肺炎链球菌性疾病负担和血清型分布的重要指标之一。
我国流行病学研究表明，儿科呼吸道感染常用抗生素越来越多地出现耐药现象。在8个城市进行的一项为期2年(2005、2006)5岁以下住院患儿的前瞻性研究发现，侵袭性菌株中，分别有55％和17％对青霉素高度和中度耐药；451株侵袭性和非侵袭性菌株，分别有64％和18％的菌株对青霉素高度和中度耐药。同样，在成人中，青霉素不敏感也是一个重要问题。2010中国细菌耐药监测协作网监测显示，按美国临床和实验室标准化委员会2008年修改后的标准，儿童临床分离株中青霉素敏感株、中介株和耐药株分别为70.3％、15.9％和13.8％；成年人中分别为92.2％、3.3％和4.4％。2008年对肺炎链球菌青霉素最低抑菌浓度折点调整后，青霉素敏感率大幅提高。另外，我国青霉素不敏感株的交叉耐药和多重耐药现象明显，对头孢菌素耐药性也在升高，对非β内酰胺类抗生素尤其是红霉素等大环内酯类抗生素的耐药率尤其高，远远超过西方国家。2006～2008年在11个城市11家医院分离到的171株IPD株中，分别有96％和75％的菌株对红霉素和磺胺甲基异噁唑耐药，77％的脑膜炎分离株是青霉素耐药株，30％的脑膜炎分离株对第三代头孢菌素(头孢曲松)耐药。北京1～60月龄儿童中，有87％～94％的分离菌株对红霉素耐药，80％对四环素和磺胺甲基异噁唑耐药。Zhou等从北京上呼吸道感染患儿中分离到140株肺炎链球菌，对红霉素和阿奇霉素的耐药率分别达到96.4％和97.1％，其中64.3％(90/140)的菌株为多重耐药株。在工业化国家中，虽然具备适宜的抗生素治疗和重症监护，成人肺炎球菌菌血症的病死率达到15％～20％，老年人群高达30％～40％。肺炎球菌感染导致的中耳炎和鼻窦炎虽然严重程度相对较轻，但在全球范围内仍属于较常见的卫生问题。综上，肺炎链球菌是导致我国儿童和老年人发病、死亡的重要病原体，因此通过接种肺炎链球菌疫苗是预防肺炎链球菌性疾病的重要措施，对预防肺炎链球菌感染具有重大现实意义。
二、肺炎球菌性疾病的预防
疫苗是将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用转基因等方法制成的用于预防或治疗传染病的自动免疫制剂，是生物制剂中的最为常见的一类。肺炎链球菌荚膜含多糖抗原，是其必要的保护性因子和毒力因子，也是分型的基础。荚膜多糖(capsular polysaccharide，CP)具有良好的免疫原性，被广泛应用于多糖疫苗的研制。Johnson等对1980～2007文献的系统回顾表明，全球5岁以下儿童约70％的IPD是由6～11种血清型所致。导致非侵袭性疾病的血清型较多，而5岁以下儿童的IPD最常见血清型是l、5、6A、6B、14、19F和23F。其中1、5和14型导致的IPD在全球占28％～43％，在20个最贫困国家中约占30％；23F和19F导致的IPD在全球占9％～18％。在欧洲、美洲和大洋洲，18C型也很常见。
目前我国市售肺炎链球菌疫苗有两种，即PCV(pneumococcal conjugatevaccine)和PPV(pneumococcal polysaccharide vaccine)。PPV是将肺炎链球菌荚膜多糖作为抗原，诱导血清型特异性IgG(以IgG2亚型为主)、IgM和IgA抗体，增强调理吞噬，促使白细胞和吞噬细胞杀灭肺炎链球菌，对肺炎链球菌感染具有特异性保护作用。PCV是将肺炎链球菌多糖通过化学法结合于具有免疫原性的蛋白载体，能更好地增强抗体反应并诱导免疫记忆。
由于多糖疫苗只含多糖抗原(一种非T细胞依赖性抗原)，可以刺激成熟的B淋巴细胞，但不会刺激T淋巴细胞，不能产生免疫记忆。2岁以下婴幼儿免疫功能发育尚不完善，对多糖的免疫反应很差，所以多糖疫苗不能有效诱导2岁以下的婴幼儿产生保护性免疫应答。结合疫苗由常见致病血清型的多糖抗原与载体蛋白结合后吸附于佐剂，多糖抗原与载体蛋白的结合改变了抗原性质，从非T细胞依赖性抗原(多糖)转换为T细胞依赖性抗原(多糖蛋白结合物)，从而刺激T辅助细胞，诱导产生免疫记忆，当与疫苗组分相同的多糖抗原再次刺激时可产生增强的免疫应答。婴儿出生后不久就可对T细胞依赖性抗原产生有效的免疫应答，结合疫苗能有效刺激婴幼儿免疫系统，产生足够的保护性抗体，并诱导免疫记忆。WHO推荐将PCV纳入免疫规划，尤其是那些5岁以下儿童死亡率超过50/1000活产婴儿的国家。
国际上已上市的PCV有PCV7、PCV10和PCV13，PCV7含7种(4、6B、9V、14、18C、19F和23F)，PCV13含13种(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F)，PCV10含10种(1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F)肺炎链球菌多糖抗原。
我国目前上市的是PCV7(国家食品药品监督管理局批准的通用名是“7价肺炎球菌结合疫苗”)和PPV23(国家食品药品监督管理局批准的通用名为“23价肺炎球菌多糖疫苗”)。PCV7每0.5mL剂含2μg血清型4、9V、14、19F和23F的单糖，2μg血清型18C的寡糖，4μg血清型6B的多糖；CRM197载体蛋白20μg，磷酸铝佐剂0.125mg，不含防腐剂。但疫苗接种人群中有对白喉类毒素过敏者禁用PCV7，这无疑对2岁以下高危人群白喉类毒素过敏患者有局限作用。由于多糖疫苗的局限性，PPV23主要用于成人和2岁以上高危人群的肺炎链球菌性疾病。PPV23包含23种纯化的肺炎链球菌多糖抗原，即血清型l、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、l0A、11A、12F、14、15B、l7F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F。每剂(0.5mL)含上述各型荚膜糖25μg，无佐剂。荚膜多糖疫苗由于其成分单一，不存在易引起免疫副反应的物质，使该类疫苗更安全、有效，已成为应用最多的疫苗之一。
WHO建议，在婴儿接种肺炎球菌结合疫苗时，采用3剂基础免疫方案(即3p+0方案)；或者，也可采用替代性的2剂基础免疫加1剂加强免疫方案(2p+1方案)。在选择3p+0方案和2p+1时，均可参考肺炎球菌病的流行病学、可能的接种率和疫苗各剂次接种的时间安排。
在美国的一项大规模现场研究中，由疫苗血清型诱导的针对侵袭性肺炎球菌疾病的保护性免疫力在接种了至少3针次的儿童中可达97.4％(95％可信区间：82.7％～99.9％)[采用“符合方案分析”(有效病例分析，per-protocol analysis)]，在至少接种1针次的儿童中可达93.9％(95％可信区间：79.6％～98.5％)[采用“意向性治疗分析”(intention-to-treat analysis)]。此外，在接种至少1针次该疫苗后，报告的侵袭性肺炎球菌疾病总体减少了89.1％(95％可信区间：73.7％～95.8％)。在将PCV7引进国家免疫接种规划1年后，由该疫苗中含有的肺炎球菌血清型所致的侵袭性肺炎球菌疾病在所有1岁以下接种者中的发病率降低了100％(95％可信区间：87.3％～100％)。在引进该疫苗3年后，1岁以下儿童中所有侵袭性肺炎球菌疾病的发病率降低了84.1％；在20～39岁成人中降低了52％，在60岁以上个体中降低了27％。后续监测表明，在引进该疫苗2年后，侵袭性肺炎球菌疾病在5岁以下儿童中的发病率降低了75％。在5岁以上、未接种疫苗的人群中侵袭性肺炎球菌疾病发病率的下降可能是因为来自5岁以下、已接种疫苗的婴幼儿的细菌传播减少了，即所谓“间接免疫”或“群体免疫”现象，在所有被防止的侵袭性肺炎球菌疾病中约有68％可归功于这种间接效应[1,2,3]。而我国关于PCV7免疫接种转归的信息相对较少。
我国上市的惠氏公司研制的沛儿TM(七价肺炎球菌结合疫苗)推荐的常规免疫接种程序为：3、4、5月龄进行基础免疫、12～15月龄加强免疫，具体根据儿童首次接种月龄接种，如3～6月龄婴儿：基础免疫接种3剂，每剂0.5mL，首次接种在3月龄，免疫程序为3、4、5月龄各一剂，每次接种至少间隔1个月，建议在12～15月龄接种第4剂；7～11月龄婴儿：基础免疫接种2剂、每剂0.5mL，每次接种至少间隔1个月，建议在12月龄以后接种第3剂，与第2次接种至少间隔2个月；12～23月龄幼儿：接种2剂、每剂0.5mL，每次接种至少间隔2个月；24月龄～5岁儿童：接种1剂。但由于可能存在的肌注反应，接种人群接种意愿不高，常常导致免疫方案无法按计划执行，致使疫苗保护力度减弱。
三、疫苗鼻腔给药系统研究进展
疫苗的常见剂型主要为口服和注射剂，由于疫苗的分子活性要求，目前的疫苗剂型研究主要集中在注射剂中。目前疫苗大多采用皮下或肌内注射的方式接种，注射接种通常可有效地诱导系统免疫，但无法诱导黏膜免疫，被接种者体内不能产生黏膜分泌性免疫球蛋白(slgA)抗体。同时，注射接种方式存在着接种周期长、次数多、辍种率高以及易发生交叉感染等问题，尤其幼儿病人的依从性差极大限制疫苗接种。近年来，鼻腔给药作为一种非侵入性疫苗接种途径逐渐成为研究的热点，鼻腔给药系统是指在鼻腔给药后，经鼻黏膜吸收从而发挥局部或全身治疗或预防作用的一类制剂。随着新辅料和新技术的逐渐应用，鼻腔以其可避免胃肠道酶的破坏作用和肝脏的首过效应，药物吸收迅速、起效快，易于被患者接受和顺应性好等特点，已被看作是疫苗、激素、多肽等许多药物的最佳给药途径。目前，已经有一些蛋白质、多肽类药物的鼻腔给药产品上市，如瑞士Novartis公司的降钙素(Calcitonin)、德国Ferring公司的去氨加压素(Desmopressin)以及法国Aventis公司的布舍瑞(Buserelin)等，已有少数鼻腔给药的疫苗制剂上市，如美国FDA已经批准的Medlm-mune公司的鼻腔喷雾给药流感病毒活疫苗(influenza virus vaccine live，商品名：FluMist)等。但是疫苗鼻腔给药具有吸收易受阻、黏膜刺激性强、易受酶降解、无法保持缓释长效作用等问题[4,5]。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种肺炎球菌蛋白疫苗，以鼻腔给药的形式进行接种，该疫苗不含有动物源性、食源性等高分子组分，且易于吸收，从而具备极佳的经济效益和环境效益。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种肺炎球菌蛋白疫苗，是包括一种或多种肺炎链球菌荚膜糖与载体蛋白共价连接而得的肺炎链球菌荚膜糖-蛋白结合物，载体蛋白为凝集素。
凝集素(lectin)是非免疫原性的糖蛋白或糖特异体(sugar-specifity)，19世纪由Stillmark发现，可选择性识别细胞膜表面糖分子或受体样结构，从而与糖基化生物膜结合(溶酶体传递方式的内化过程)，充当给药系统的溶酶体样“佐剂”(drug deliveryadjuvant)。凝集素对微粒给药系统的修饰除了经微粒上空隙的吸附作用(adsorptionprocess)，还可通过载体材料上所负载氨基、羧基或羧基的共价键合(covalent linkage)。
优选地，肺炎链球菌荚膜糖-蛋白结合物分子量为30～1000kDa。
优选地，凝集素选自植物凝集素，如半夏凝集素、荆豆凝集素、麦胚凝集素、蓖麻凝集素或马蹄蟹凝集素。
优选地，肺炎链球菌荚膜糖，优选为分离提纯血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜多糖，所述肺炎球菌的血清型包括1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和/或23F。
优选地，肺炎球菌荚膜糖与载体蛋白的质量比为(0.5～2)：1，优选为(0.5～1.5)：1。
优选地，上述肺炎球菌蛋白疫苗的制备方法包括如下步骤：
步骤a)制备并分离提纯载体蛋白；
步骤b)分别分离提纯多种血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜糖；
步骤c)活化步骤b所得荚膜糖，与步骤a所得凝集素共价偶联；
步骤d)分离提纯步骤c所得偶连体，得蛋白疫苗原液。
更优选地，上述肺炎球菌蛋白疫苗的制备方法包括如下步骤：
步骤a)制备并分离提纯凝集素；
步骤b)分别分离提纯多种血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜糖；
步骤c)活化步骤b所得荚膜糖，超声条件下与步骤a所得凝集素共价偶联；
步骤d)分离提纯步骤c所得偶连体，得蛋白疫苗原液。
更优选地，上述载体蛋白制备方法可参照现有技术中植物凝集素分离提纯的方法制备，具体可参见下述具体实施方式，并不作为本发明是否可实现的关键因素。
更优选地，步骤b中荚膜糖的分离纯化工艺可根据现有技术进行操作。
更优选地，步骤c制备活化的肺炎球菌荚膜糖的具体操作为：步骤b所得荚膜糖中加入生理盐水，加入CDAP活化3min，再加入等体积ADH溶液反应30min，所得溶液经超滤浓缩后备用；较佳地，本操作中pH为7.5～9.5。
更优选地，步骤c将活化肺炎球菌荚膜糖偶联凝集素的具体操作为：超声条件下，将ADH-荚膜糖衍生物加入生理盐水，加入EDAC至终浓度为0.1mol/L，室温下反应3小时，反应物用4℃生理盐水透析膜透析，加入凝集素(凝集素与荚膜糖质量比为1.5：1)；较佳地，本操作中pH为4.5～6.5。
进一步，超声波频率范围为15～30kHz。
更优选地，步骤d具体操作为：步骤c所得反应物经5000rpm/min离心2min，取上清液层析，除菌过滤，得蛋白疫苗溶液；较佳地，上清液层经甘露糖-Sepharose凝胶层析。
与现有技术相比，本发明具有以下优势：
1、凝集素是给药系统常用的佐剂，但本发明提供的蛋白疫苗首次提出以植物凝集素为蛋白载体制备肺炎球菌疫苗，为肺炎疫苗的可行方向打下基础；
2、本发明提供的蛋白疫苗给药方式为经鼻给药，相对于肌肉注射，鼻腔给药方式更方便快捷；
3、本发明提供的蛋白疫苗可作为市售肺炎球菌补充免疫疫苗使用；
4、本发明提供的蛋白疫苗可提高市售肺炎球菌疫苗抗体浓度和阳转率，减少疫苗接种失败的几率；
5、在大规模疫情发生时，可作为应急性疫苗暂时使用，为后续进行市售肺炎球菌疫苗接种提供免疫基础。
具体实施方式
下面结合实施例和对比例对本发明作进一步详细、完整地说明。实施例中出现的试剂或仪器在具体实施方式中无如特殊说明，均为市售，且按照其说明书进行操作，在此不作赘述。
本发明中涉及到的百分号“％”，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分比，除另有规定外，是指100mL溶液中含有溶质的克数。
实施例1
一、凝集素制备
取来自于上海中医药大学的500克新鲜半夏块茎洗净磨碎后6000rpm/min离心10min，上清液经饱和度20％～95％硫酸铵分级纯化后，收集60％～95％饱和硫酸铵沉淀PTA，活性组分分次经甘露糖-Sepharose凝胶层析，得半夏凝集素蛋白液，备用。亦或将凝集素克隆至大肠杆菌进行表达并分离纯化，备用。
二、制备肺炎球菌荚膜糖
1.选取7种血清型(4、6B、9V、14、18C、19F和23F)的肺炎球菌培养；
2.分别提纯以上各种血清型肺炎球菌中抗原性强的荚膜糖：肺炎球菌灭活后离心收集上清液，经超滤浓缩，根据各肺炎球菌血清型特性分别加入体积分数为70％的预冷乙醇，离心收集，得粗制多糖；将粗制多糖溶于乙酸钠溶液中，然后按1：2比例以冷酚混匀，离心去除蛋白，反复酚提5-6次，收集上清，用蒸馏水透析，透析后液体加2mol/L氯化钙溶液，加入乙醇搅拌，离心去除核酸，收集上清，补加乙醇(终浓度80％搅拌)，离心收集沉淀，用乙醇、丙酮洗涤沉淀，脱水干燥后即为精制荚膜糖，置-20℃保存备用。
三、蛋白疫苗的制备
1.肺炎球菌荚膜糖活化：将上述步骤制备的肺炎球菌荚膜糖(血清型4、9V、14、19F和23F的单糖4g，血清型18C的寡糖4g，血清型6B的多糖8g)加入5mg/mL的(生理盐水)溶液500mL中，加入CDAP活化，控制pH至8.5±0.5，反应3min，加入等体积ADH溶液，控制pH至8.5±0.5，反应30min后经超滤浓缩得ADH-荚膜糖衍生物；
2.活化肺炎球菌荚膜糖偶联凝集素：超声条件下，将ADH-荚膜糖衍生物配成5mg/mL的(生理盐水)溶液500m L，加入EDAC至终浓度为0.1mol/L，混匀控制pH至5.5±0.5，室温下反应3小时，反应物用透析膜进行透析(4℃生理盐水透析)，加入凝集素(凝集素与荚膜糖质量比为1.5：1)；
3.蛋白疫苗分离纯化：反应物经5000rpm/min离心2min，取上清液经甘露糖-Sepharose凝胶层析，除菌过滤得蛋白疫苗溶液，取0.5mL备用，编号为样品1；
4.冻干：具体步骤可参考中国发明专利申请CN 106063933A，在此不做赘述。
上述蛋白疫苗溶液给药方式为鼻粘膜给药，具体可参考现有技术制备，如冻干粉和生理盐水经膜隔离装入喷瓶，临用前破膜混匀，一次性喷入鼻腔。
实施例2
本实施例与实施例1的差别仅在于凝集素为由琼脂糖珠去毒后的荆豆凝集素，所得蛋白疫苗溶液编号为样品2。
实施例3
本实施例与实施例1的差别仅在于疫苗荚膜糖血清型及用量为1、4、5、7F、9V、14、18C、19F和23F各4g，6B为8g。
实施例4
本实施例与实施例1的差别仅在于疫苗荚膜糖血清型及用量为1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F各4g，6B为8g。
疫苗评价
下面对实施例提供的蛋白疫苗进行加强免疫效果评估实验：
选取8周龄、体重15～20g雌性小鼠100只，随机分为5组，每个相同免疫组使用20只小鼠，参考WHO免疫计划和剂量分别小鼠腹腔注射Prevnar7或样品1、2喷鼻，阴性对照组为生理盐水喷鼻，具体见表1。
表1
分别在小鼠11月龄和13月龄采血，采用ELISA法检测抗体平均滴度并计算阳转率，结果见表2～表5。
表2 11月龄小鼠抗体平均滴度
表3 11月龄抗体阳转率(％)
表4 13月龄小鼠抗体平均滴度
表5 13月龄抗体阳转率(％)
分别用4、6B、9V、14、18C、19F和23F型肺炎球菌攻击14月龄小鼠，持续攻击7天，采血检测血液中菌群数量，检测结果见表6。
表6
下面对实施例提供的蛋白疫苗进行游离糖含量检测，结果见表7：
表7溶液中游离荚膜糖含量测定结果(mg/mL)
由表1～表5可知，B组小鼠由于在免疫计划的基础上多加一针疫苗，小鼠易发生不良反应，个别死亡，故不宜进行过量注射；C组小鼠体内抗体浓度低于B组，但高于其他组别，小鼠抗体阳转率高，且小鼠未见死亡；D组小鼠体内抗体浓度最弱，阳转率达70％以上，小鼠未见死亡；E组小鼠抗体浓度高于D组低于B组，阳转率高，小鼠未见死亡。此外，由表6～7可知，本发明提供的蛋白疫苗单独使用对细菌免疫效果较联用时差，且糖-蛋白复合物不稳定，这是由于凝集素-糖的复合物没有固定的单一结构，一旦复合物形成，所参与的分子位置及构象仍在变化(糖与蛋白的结合可逆)，故需要临用临配，3日内必须使用完毕，7日后游离糖含量已接近荚膜糖总含量的二分之一，较难激起受体免疫反应。由上述数据可知，本发明提供的蛋白疫苗可作为补充方案，作为完成免疫计划但未达到免疫效果的加强针，可极大提高免疫效果。此外，在出现大规模疫情时，本发明提供的蛋白疫苗可作为应急方案进行基础免疫。
参考文献
[1]QIN Ying,et al.,Technical guideline on application of pneumococcalvaccine in China(2012),Chin J Epidemiol，November 2012，Vo1.33，No.11：1101-1110.
秦颖等，肺炎链球菌性疾病相关疫苗应用技术指南(2012版)，中华流行病学杂志，2012年11月第33卷第11期：1101-1110.
[2]张哲等，荚膜多糖及其疫苗研究进展[J].动物医学进展，2015，36(11)：83-87.
[3]世界卫生组织关于肺炎球菌疫苗的立场文件(2012年)，WeeklyEpidemiological Record.No.12,2007,pp.93-104.
[4]CAI Xin-jun,et al.,Development of Research on VaccineMicroparticle Nasal Drug Delivery System,Progress in Pharmaceutical Sciences，2007，Vo1.31，No.9：391-397.
蔡鑫君等，疫苗微粒鼻腔给药系统的研究进展，药学进展，2007年第31卷第9期：391-397.
[5]胡音等，鼻腔给药系统的研究进展[J].中国医药生物技术，2008.10，3(5)：381-384.
Claims (10)
1.一种肺炎球菌蛋白疫苗，其特征是：包括一种或多种肺炎链球菌荚膜糖与载体蛋白共价连接而得的肺炎链球菌荚膜糖-蛋白结合物，载体蛋白为凝集素。
2.权利要求1所述的蛋白疫苗，其特征是：凝集素选自植物凝集素。
3.权利要求1所述的蛋白疫苗，其特征是：肺炎球菌的血清型包括1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和/或23F。
4.权利要求1所述的蛋白疫苗，其特征是：肺炎球菌荚膜糖与载体蛋白的质量比为(0.5～2)：1。
5.一种肺炎球菌蛋白疫苗的制备方法，其特征是，包括如下步骤：
步骤a)制备并分离提纯载体蛋白；
步骤b)分别分离提纯多种血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜糖；
步骤c)活化步骤b所得荚膜糖，与步骤a所得凝集素共价偶联；
步骤d)分离提纯步骤c所得偶连体，得蛋白疫苗原液。
6.权利要求5所述的蛋白疫苗的制备方法，其特征是，包括如下步骤：
步骤a)制备并分离提纯凝集素；
步骤b)分别分离提纯多种血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜糖；
步骤c)活化步骤b所得荚膜糖，超声条件下与步骤a所得凝集素共价偶联；
步骤d)分离提纯步骤c所得偶连体，得蛋白疫苗原液。
7.权利要求6所述的蛋白疫苗的制备方法，其特征是，步骤c制备活化的肺炎球菌荚膜糖的具体操作为：步骤b所得荚膜糖中加入生理盐水，加入CDAP活化3min，再加入等体积ADH溶液反应30min，所得溶液经超滤浓缩后备用。
8.权利要求7所述的蛋白疫苗的制备方法，其特征是，步骤c将活化肺炎球菌荚膜糖偶联凝集素的具体操作为：超声条件下，将ADH-荚膜糖衍生物加入生理盐水，加入EDAC至终浓度为0.1mol/L，室温下反应3小时，反应物用4℃生理盐水透析膜透析，加入凝集素。
9.权利要求6所述的蛋白疫苗的制备方法，其特征是：超声波频率范围为15～30kHz。
10.权利要求6所述的蛋白疫苗的制备方法，步骤d具体操作为：步骤c所得反应物经5000rpm/min离心2min，取上清液层析，除菌过滤，得蛋白疫苗溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710258675.XA CN107929728A (zh) | 2017-04-19 | 2017-04-19 | 一种肺炎球菌蛋白疫苗及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710258675.XA CN107929728A (zh) | 2017-04-19 | 2017-04-19 | 一种肺炎球菌蛋白疫苗及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107929728A true CN107929728A (zh) | 2018-04-20 |
Family
ID=61929073
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710258675.XA Pending CN107929728A (zh) | 2017-04-19 | 2017-04-19 | 一种肺炎球菌蛋白疫苗及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107929728A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11116828B2 (en) | 2017-12-06 | 2021-09-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof |
| US11642406B2 (en) | 2018-12-19 | 2023-05-09 | Merck Sharp & Dohme Llc | Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1487839A (zh) * | 2000-11-27 | 2004-04-07 | ղ˹��C��ղ˹���˹ | 用作佐剂的集合素 |
| US20050260228A1 (en) * | 2001-03-19 | 2005-11-24 | Rolando Wyss | Vaccines absorbable by the transmucosal way |
| CN101378778A (zh) * | 2005-12-22 | 2009-03-04 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 肺炎球菌多糖缀合物疫苗 |
| CN101785857A (zh) * | 2010-03-05 | 2010-07-28 | 郑玉清 | 一种新的肺炎球菌结合疫苗及其制备方法 |
| CN102869375A (zh) * | 2010-03-09 | 2013-01-09 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 包含与载体蛋白缀合的肺炎链球菌多糖的免疫原性组合物 |
| CN103893751A (zh) * | 2014-03-26 | 2014-07-02 | 天津康希诺生物技术有限公司 | 一种肺炎球菌多糖蛋白缀合疫苗及其制备方法 |
-
2017
- 2017-04-19 CN CN201710258675.XA patent/CN107929728A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1487839A (zh) * | 2000-11-27 | 2004-04-07 | ղ˹��C��ղ˹���˹ | 用作佐剂的集合素 |
| US20050260228A1 (en) * | 2001-03-19 | 2005-11-24 | Rolando Wyss | Vaccines absorbable by the transmucosal way |
| CN101378778A (zh) * | 2005-12-22 | 2009-03-04 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 肺炎球菌多糖缀合物疫苗 |
| CN101785857A (zh) * | 2010-03-05 | 2010-07-28 | 郑玉清 | 一种新的肺炎球菌结合疫苗及其制备方法 |
| CN102869375A (zh) * | 2010-03-09 | 2013-01-09 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 包含与载体蛋白缀合的肺炎链球菌多糖的免疫原性组合物 |
| CN103893751A (zh) * | 2014-03-26 | 2014-07-02 | 天津康希诺生物技术有限公司 | 一种肺炎球菌多糖蛋白缀合疫苗及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| E. C. LAVELLE等: "Mucosal immunogenicity of plant lectins in mice", 《IMMUNOLOGY》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11116828B2 (en) | 2017-12-06 | 2021-09-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof |
| US11850278B2 (en) | 2017-12-06 | 2023-12-26 | Merck Sharp & Dohme Llc | Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof |
| US12097250B2 (en) | 2017-12-06 | 2024-09-24 | Merck Sharp & Dohme Llc | Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof |
| US11642406B2 (en) | 2018-12-19 | 2023-05-09 | Merck Sharp & Dohme Llc | Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof |
| US12016914B2 (en) | 2018-12-19 | 2024-06-25 | Merck Sharp & Dohme Llc | Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI235064B (en) | Lyophilized antigenic composition comprising conjugated streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides | |
| RU2484846C2 (ru) | Мультивалентная композиция на основе конъюгата пневмокковый полисахарид-белок | |
| Austrian | Pneumococcal polysaccharide vaccines | |
| KR101730749B1 (ko) | 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물 | |
| CN103656632B (zh) | 多价肺炎球菌荚膜多糖组合物、其制备方法及应用 | |
| CN104225587B (zh) | 多价脑膜炎球菌衍生的多糖‑蛋白质缀合物及疫苗 | |
| WO2015144031A1 (zh) | 一种肺炎球菌多糖蛋白缀合疫苗及其制备方法 | |
| CN102068690A (zh) | 多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗及其制备方法 | |
| CN102977208B (zh) | 鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白的制备方法、应用及药物组合物、制剂和试剂盒 | |
| JP7441301B2 (ja) | 球菌多糖類－タンパク質接合体を含む免疫原性組成物 | |
| JP2005504718A (ja) | 多価髄膜炎菌多糖−タンパク質複合ワクチン | |
| JP2005515237A (ja) | 免疫無防備状態の個体群に用いる糖コンジュゲートワクチン | |
| CN103656631A (zh) | 多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白缀合物组合物及其制备方法 | |
| Robbins et al. | Cross-reactive antigens and immunity to diseases caused by encapsulated bacteria | |
| CN101785857A (zh) | 一种新的肺炎球菌结合疫苗及其制备方法 | |
| CN107929728A (zh) | 一种肺炎球菌蛋白疫苗及其制备方法 | |
| US20220267419A1 (en) | Human Immunoglobulin Against Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus, Preparation Method Therefor, And Use Thereof | |
| CN1709505B (zh) | 多价细菌荚膜多糖-蛋白质结合物联合疫苗 | |
| CN110251667A (zh) | 一种免疫组合制剂及其制备方法和应用 | |
| CN101934077A (zh) | 多价的脑膜炎球菌产生的多糖-蛋白质偶联物和疫苗 | |
| CN116688109A (zh) | 多糖蛋白缀合物 | |
| CN106075420A (zh) | 多价肺炎球菌‑b型流感嗜血杆菌联合疫苗 | |
| CN106075430A (zh) | 多价肺炎球菌‑acyw135脑膜炎球菌联合疫苗 | |
| CN101443454A (zh) | 多价脑膜炎球菌衍生化的多糖-蛋白质缀合物和疫苗 | |
| WO2020139308A1 (ru) | Инактивированная стафилококковая жидкая вакцина |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180420 |