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CN107922884A - 含游离多元不饱和脂肪酸组合物及其制造方法 - Google Patents

含游离多元不饱和脂肪酸组合物及其制造方法 Download PDF

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CN107922884A
CN107922884A CN201680049980.1A CN201680049980A CN107922884A CN 107922884 A CN107922884 A CN 107922884A CN 201680049980 A CN201680049980 A CN 201680049980A CN 107922884 A CN107922884 A CN 107922884A
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小菅雄平
山口秀明
土居崎信滋
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Nippon Suisan Kaisha Ltd
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Abstract

一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其包含含量为组合物中的脂肪酸的80.0％以上的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸，且满足选自由以下的条件(1)及(2)组成的组中的至少一个：(1)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下、及(2)加德纳色相低于3+；一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物的制造方法，其包括：准备包含至少一种碳原子数为20以上的多元不饱和脂肪酸的原料组合物；对于包含所准备的原料组合物、低级醇、水及碱催化剂的反应液，在10℃以下的温度条件下进行水解处理。

Description

含游离多元不饱和脂肪酸组合物及其制造方法
技术领域
本发明涉及含游离多元不饱和脂肪酸组合物及其制造方法。
背景技术
已知二十碳二烯酸、二高-γ-亚麻酸(DGLA)、二十碳四烯酸、花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸及二十二碳六烯酸(DHA)等碳原子数为20以上的长链的多元不饱和脂肪酸在生物体中发挥各种功能性。因此，对于多元不饱和脂肪酸，研究了作为医药品、健康食品、化妆品等制品中的功能性成分的利用。伴随于此，要求以高浓度且大量地生产多元不饱和脂肪酸。
多元不饱和脂肪酸由于在天然中大多情况下，作为三酰基甘油(甘油酯)的构成脂肪酸存在于油中，所以为了得到游离型的多元不饱和脂肪酸，通常进行将三酰基甘油中的构成脂肪酸或其脂肪酸烷基酯水解。
例如，在国际公开第2013/172346号小册子中，公开了通过对将精馏、柱色谱法组合而得到的高度不饱和脂肪酸的酯进行水解，得到(游离)高度不饱和脂肪酸。
在国际公开第2015/083843号小册子中，公开了关于DGLA的游离脂肪酸，通过制造微生物油的低级烷基酯后，将进行精制而提高了纯度的DGLA低级烷基酯用碱催化剂进行水解，得到DGLA的游离脂肪酸。
发明内容
发明所要解决的课题
在用于得到游离脂肪酸的水解处理中，有时不仅作为目标的游离多元不饱和脂肪酸，在处理前的原料中不存在或仅以少量存在的物质也产生或增加。这样的物质由于为目的之外的杂质，大多结构或功能不清楚，所以在含游离多元不饱和脂肪酸组合物中，优选尽可能减少含量。
此外，为了充分地发挥游离多元不饱和脂肪酸的功能，要求以高浓度包含游离多元不饱和脂肪酸的组合物，通过浓缩处理等来提高游离多元不饱和脂肪酸的浓度。在上述的杂质中，由于与作为目标的游离多元不饱和脂肪酸结构类似等理由，也可存在通过后续的处理难以除去的杂质。该情况下，担心伴随着作为目标的游离多元不饱和脂肪酸的浓缩，杂质的浓度也变高。为了除去杂质还考虑了使精制的精度提高，但精度的提高有限，此外，在处理效率、处理时间等方面，工业上不利。
因此，有对于杂质少的游离多元不饱和脂肪酸组合物、及杂质少的游离多元不饱和脂肪酸组合物的制造方法的要求。
用于解决课题的方案
本发明包含以下的方式。
[1]一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其包含含量为组合物中的脂肪酸的80.0％以上的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸，
所述含游离多元不饱和脂肪酸组合物满足选自由以下的条件(1)及(2)组成的组中的至少一个：
(1)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下；及
(2)加德纳色相低于3+。
[2]根据[1]所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，茴香胺值为5.0以下。
[3]根据[1]或[2]所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，脂肪酸烷基酯的含量为组合物中的脂肪酸的0.2％以下。
[4]根据[1]～[3]中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的0.001％～1.0％。
[5]根据[1]～[4]中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，多元不饱和脂肪酸为选自由二十碳二烯酸、二高-γ-亚麻酸、米德酸、二十碳四烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸及二十二碳六烯酸组成的组中的至少一个。
[6]根据[1]～[5]中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，组合物中的残留有机溶剂的总含量为5000ppm以下。
[7]根据[1]～[6]中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，组合物中的碳原子数为18的二元以上的多元不饱和脂肪酸的含量为组合物的脂肪酸的2.0％以下。
[8]一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物的制造方法，其包括：准备包含至少一种碳原子数为20以上的多元不饱和脂肪酸的原料组合物的步骤；以及
对于包含所准备的原料组合物、低级醇、水及碱催化剂的反应液，在10℃以下的温度条件下进行水解处理的步骤。
[9]根据[8]所述的制造方法，其中，原料组合物中的多元不饱和脂肪酸为多元不饱和脂肪酸烷基酯。
[10]根据[8]或[9]所述的制造方法，其还包括在水解处理后的反应液中添加用于停止水解反应的酸，添加酸后的反应液的pH为pH1.0～6.0。
[11]根据[8]～[10]中任一项所述的制造方法，其中，反应液中的低级醇的量相对于原料组合物中的脂肪酸为0.9当量～32.0当量。
[12]根据[8]～[11]中任一项所述的制造方法，其中，反应液中的低级醇的量相对于水以重量比计为0.20～8.20。
[13]根据[8]～[12]中任一项所述的制造方法，其中，反应液中的水的量相对于原料组合物中的脂肪酸为6.0当量～13.0当量。
[14]根据[8]～[13]中任一项所述的制造方法，其中，反应液中的碱催化剂的量相对于原料组合物中的脂肪酸为1.0当量～2.3当量。
[15]根据[8]～[14]中任一项所述的制造方法，其中，碱催化剂为选自由氢氧化钠及氢氧化钾组成的组中的至少一个。
[16]根据[8]～[15]中任一项所述的制造方法，其中，水解处理的温度条件为-20℃～10℃。
[17]根据[8]～[16]中任一项所述的制造方法，其中，原料组合物来源于微生物原料。
[18]一种食品、增补剂、医药品、化妆品、或饲料，其含有[1]～[7]中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物。
[19][1]～[7]中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物在食品、增补剂、医药品、化妆品、或饲料的制造方法中的用途。
发明效果
根据本发明的一方式，能够提供杂质少的游离多元不饱和脂肪酸组合物、及杂质少的游离多元不饱和脂肪酸组合物的制造方法。
具体实施方式
本发明的一方式所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物为一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其包含含量为组合物中的脂肪酸的80.0％以上的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸，且满足选自由以下的条件(1)及(2)组成的组中的至少一个：
(1)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下；及
(2)加德纳色相低于3+。
本发明的一方式所述的游离多元不饱和脂肪酸的制造方法为一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物的制造方法，其包括：准备包含至少一种碳原子数为20以上的多元不饱和脂肪酸的原料组合物的步骤；以及，对于包含所准备的原料组合物、低级醇、水及碱催化剂的反应液，在10℃以下的温度条件下进行水解处理的步骤。
在含有碳原子数为20以上的游离长链多元不饱和脂肪酸的组合物中，与烷基酯形态或甘油酯形态的长链多元不饱和脂肪酸相比极性高，有时显示出与烷基酯形态或甘油酯形态的长链多元不饱和脂肪酸不同的行为。发现特别是在用于得到高浓度的游离多元不饱和脂肪酸的利用碱催化剂的水解工序中，有时共轭不饱和脂肪酸或着色物质作为杂质增加，这些杂质与包含烷基酯形态或甘油酯形态的长链多元不饱和脂肪酸的组合物的情况不同，在以高浓度含有游离长链多元不饱和脂肪酸的组合物中，分离或除去变得困难。另一方面，发现这些杂质是起因于水解工序的加热而产生或增加的物质；及通过将水解工序的温度条件设定为特定范围，能够抑制这些物质的产生或增加。
即，在本含游离多元不饱和脂肪酸组合物中，共轭不饱和脂肪酸的含量及着色物质的含量中的至少一者与在以往的温度条件下进行用于得到游离脂肪酸的利用碱催化剂的水解处理的情况相比较低。通过将用于得到游离形态的脂肪酸的水解处理中的温度条件设定为规定范围，能够分别调整共轭不饱和脂肪酸的含量及着色物质的含量，且与水解处理之前相比能够降低是预料之外的。例如，在适用70℃那样的一般的利用碱催化剂的水解处理的温度条件的情况下增加的选自由共轭不饱和脂肪酸及着色物质组成的组中的至少一者的含量可以通过将水解处理的温度条件降低至规定的范围而减少。
因此，在本含游离多元不饱和脂肪酸组合物中，由于不仅作为目标的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸的含量高，而且水解工序中产生或增加的共轭不饱和脂肪酸和/或着色物质的含量少，所以本组合物中这些特定的杂质的含量少，且能够更高且良好地发挥作为目标的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸的功能。
在本含游离多元不饱和脂肪酸组合物的制造方法中，由于包括在10℃以下的温度条件下进行对于原料组合物的水解处理，所以能够高效地得到上述的特定的杂质的含量少、且包含作为目标的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸的组合物。
所谓“油”或“油脂”，在本说明书中，也包含仅含有三甘油酯的油、和以三甘油酯作为主要成分且包含二甘油酯、单甘油酯、磷脂质、胆甾醇、游离脂肪酸等其他脂质的粗油。“油”或“油脂”是指包含这些脂质的组合物。
对于用语“脂肪酸”，不仅包含游离的饱和或者不饱和脂肪酸它们自身，而且还包含游离的饱和或者不饱和脂肪酸、饱和或者不饱和脂肪酸烷基酯、三甘油酯、二甘油酯、单甘油酯、磷脂质、甾醇酯等中包含的作为构成单元的脂肪酸，也可换言之为构成脂肪酸。在本说明书中，只要没有特别说明，或只要没有特别表示，在言及关于存在或者使用的脂肪酸时，也包含任何形态的含脂肪酸化合物的存在或使用。作为包含脂肪酸的化合物的形态，可列举出游离脂肪酸形态、脂肪酸烷基酯形态、甘油酯形态、磷脂质的形态、甾醇酯形态等。某脂肪酸被特定的情况下，可以以一种形态存在，也可以作为2种以上的形态的混合物存在。
经验上判明脂肪酸的水解的反应效率高，在水解后，得到主要包含游离脂肪酸形态的脂肪酸的组合物。因此，对于加工工序后的脂肪酸，只要没有特别说明，有时将为组合物、及脂肪酸为游离脂肪酸形态的脂肪酸省略而记载。但是，没有将包含除游离脂肪酸形态以外的形态的脂肪酸完全排除。
经验上判明油脂或脂肪酸酯的醇分解的反应效率高，在醇分解后，得到主要包含脂肪酸烷基酯形态的脂肪酸的组合物。因此，对于加工工序后的脂肪酸，只要没有特别说明，则有时将为组合物、及脂肪酸为烷基酯形态的脂肪酸省略而记载。但是，没有将包含除烷基酯形态以外的形态的脂肪酸完全排除。
在记载脂肪酸时，有时使用将碳原子数、双键的数目及双键的部位分别使用数字和字母简略地表示的数值表达。例如碳原子数为20的饱和脂肪酸被记载为“C20：0”，碳原子数为18的一元不饱和脂肪酸被记载为“C18：1”等，二高-γ-亚麻酸被记载为“C20：3，n-6”等。其中，“n-6”也作为ω-6被记载，但其表示从最后的碳(ω)向着羧基计数时的最初的双键的键合位置为第6个。该方法对于本领域技术人员是众所周知的，对于按照该方法记载的脂肪酸，只要是本领域技术人员则能够容易地特定。
在本说明书中“粗油”是指上述的脂质的混合物、且由生物提取的状态的油。在本说明书中“精制油”是指对于粗油进行选自由脱胶工序、脱酸工序、脱色工序、及脱臭工序组成的组中的至少一个油脂的精制工序，进行了将除磷脂质及甾醇等目标物以外的物质除去的精制处理而得到的油。
在本说明书中“工序”的用语不仅包含独立的工序，在无法与其他工序明确区别的情况下也只要可达成该工序的所期望的目的，则也包含于本用语中。
本说明书中使用“～”所表示的数值范围表示包含其前后记载的数值分别作为最小值及最大值的范围。在本说明书中，关于百分率的“以下”或“低于”的用语只要没有特别记载下限值，则意味着包含0％、即“不含有”的情况、或包含通过现状的手段无法检测的值的范围。
在本说明书中，组合物中的各成分的量在组合物中存在多个符合各成分的物质的情况下，只要没有特别说明，则是指组合物中存在的该多个物质的总量。在本说明书中，组合物中的各成分的含量(％)在组合物中存在多个符合各成分的物质的情况下，只要没有特别说明，则是指组合物中存在的该多个物质的总含量。
在本说明书中，在记载了仅规定对于同一对象言及的1个或者多个上限值的数值范围和仅规定1个或者多个下限值的数值范围的情况下，只要没有特别说明，则将从1个或多个上限值任意选择的上限值与从1个或多个下限值任意选择的下限值组合而成立的数值范围也包含于本发明的一实施方式中。
本说明书中的组合物中的脂肪酸的含量只要没有特别说明，则基于脂肪酸组成而决定。脂肪酸组成可以按照常规方法而求出。具体而言，在成为测定对象的组合物中的脂肪酸为脂肪酸低级烷基酯以外的情况下，使用将成为测定对象的脂肪酸使用低级醇和催化剂进行酯化而得到的脂肪酸低级烷基酯。在成为测定对象的组合物中的脂肪酸为脂肪酸低级烷基酯的情况下，直接使用测定对象的脂肪酸。接着，以所得到的脂肪酸低级烷基酯作为试样，使用气相色谱法进行分析。在所得到的气相色谱法的图表中鉴定与各脂肪酸相当的峰，使用Agilent ChemStation积分算法(修订版C.01.03[37]、Agilent Technologies)，求出各脂肪酸的峰面积。所谓峰面积是将以各种脂肪酸作为构成成分的油脂使用气相色谱法、薄层色谱法/氢焰离子化检测器(TLC/FID)等进行分析而得到的图表的各个成分的峰面积相对于总峰面积的比例(面积％)，表示该峰的成分的含有比率。基于通过上述的测定方法得到的面积％的值与基于各脂肪酸相对于试样中的脂肪酸的总重量的重量％的值设定为相同而可以互换使用。参照日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版2.4.2.1-2013脂肪酸组成(FID恒温气相色谱法)及该2.4.2.2-2013脂肪酸组成(FID升温气相色谱法)。
对于脂肪酸组成，通过利用实施例中示出的方法的气相色谱法来确认。详细的条件示于实施例中。
<含游离多元不饱和脂肪酸组合物>
本发明的一实施方式中的含游离多元不饱和脂肪酸组合物为一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其包含含量为组合物中的脂肪酸的80.0％以上的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸，且满足选自由以下的条件(1)及(2)组成的组中的至少一个：
(1)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下、及(2)加德纳色相低于3+。
本含游离多元不饱和脂肪酸组合物由于满足选自由条件(1)及(2)组成的组中的至少一个，且含有80.0％以上的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸，所以特定的杂质少，能够更高且良好地发挥至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸的功能。
本说明书中，只要没有特别说明，则有时将碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸称为“游离LC-PUFA”。本说明书中，有时将本发明的实施方式所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物简称为“含游离LC-PUFA组合物”。
在含游离LC-PUFA组合物中的碳原子数为20以上的多元不饱和脂肪酸中，包含二元以上、优选三元以上的不饱和脂肪酸。多元不饱和脂肪酸的碳原子数是指构成脂肪酸的碳原子数。作为碳原子数为20以上的多元不饱和脂肪酸，可列举出例如碳原子数为20以上且22以下的多元不饱和脂肪酸，具体而言，可列举出二十碳二烯酸(C20：2，n-9、EDA)、二高-γ-亚麻酸(C20：3，n-6、DGLA)、米德酸(C20：3，n-9、MA)、二十碳四烯酸(C20：4，n-3、ETA)、花生四烯酸(C20：4，n-6、ARA)、二十碳五烯酸(C20：5，n-3、EPA)、二十二碳四烯酸(C22：4，n-6、ETA)、二十二碳五烯酸(C22：5，n-3、n-3DPA)、二十二碳五烯酸(C22：5，n-6、n-6DPA)及二十二碳六烯酸(C22：6，n-3、DHA)等。含游离LC-PUFA组合物只要包含至少一个这些多元不饱和脂肪酸即可，可以将2个以上组合包含。作为2个以上的组合的LC-PUFA，可列举出例如DGLA与EPA的组合、DGLA与n-3DPA的组合、DGLA与DHA的组合、ARA与EPA的组合、ARA与n-3DPA的组合、ARA与DHA的组合、EPA与n-3DPA的组合、DHA与n-3DPA的组合、DHA与EPA的组合、EPA与DHA与n- 3DPA的组合等。
在含游离LC-PUFA组合物中，可以包含选自上述的多元不饱和脂肪酸中的一个、且不包含其他多元不饱和脂肪酸；或者，只要作为LC-PUFA含有上述的碳原子数为20以上且22以下的多元不饱和脂肪酸中的至少一个，则也可以不包含其他特定的一个或2个以上。例如，含游离LC-PUFA组合物可以不包含选自由二十碳二烯酸(C20：2，n-9)、二高-γ-亚麻酸(C20：3，n-6)、米德酸(C20：3，n-9)、二十碳四烯酸(C20：4，n-3)、花生四烯酸(C20：4，n-6)、二十碳五烯酸(C20：5，n-3)、二十二碳四烯酸(C22：4，n-6)、二十二碳五烯酸(C22：5，n-3)、二十二碳五烯酸(C22：5，n-6)及二十二碳六烯酸(C22：6，n-3)组成的组中的至少一个。另外，这里不包含多元不饱和脂肪酸是指成为对象的多元不饱和脂肪酸的含量为低于组合物中的脂肪酸的5％、或为0％。
含游离LC-PUFA组合物中的LC-PUFA的含量为组合物中的脂肪酸的80.0％以上。含游离LC-PUFA组合物由于包含80.0％以上的LC-PUFA，所以能够更高地发挥LC-PUFA的功能。含游离LC-PUFA组合物中的靶LC-PUFA的含量的下限值可以设定为组合物中的脂肪酸的85.0％、90.0％、95.0％、97.0％、98.0％、99.0％、或99.5％。在LC-PUFA的含量更高的情况下，能够更高地发挥LC-PUFA的功能。LC-PUFA的含量的上限值没有特别限制，例如可以设定为99.9％、或98.0％。在本组合物中，LC-PUFA的含量可以设定为将上述的上限值的任意的值与下限值的任意的值组合的范围，例如也可以为组合物中的脂肪酸的80.0％～99.9％、90.0％～99.9％、90.0％～98％、95.0％～99.9％、97.0％～99.9％、或97.0％～98.0％。
含游离LC-PUFA组合物满足选自由条件(1)及(2)组成的组中的至少一个。
含游离LC-PUFA组合物可满足的条件(1)与共轭不饱和脂肪酸的含量有关，共轭不饱和脂肪酸的含量设定为组合物中的脂肪酸的1.0％以下。作为共轭不饱和脂肪酸，根据水解处理中适用的原料组合物中的脂肪酸的种类及LC-PUFA的种类而不同，但可列举出共轭二烯酸、共轭三烯酸、共轭四烯酸等。共轭不饱和脂肪酸可以基于成为对象的共轭不饱和脂肪酸的吸光度进行定量。含游离LC-PUFA组合物中的共轭不饱和脂肪酸的含量设定为测定试样的紫外光谱，并由规定的计算式算出的共轭不饱和脂肪酸的含量，设定为按照日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版参1.14中规定的共轭不饱和脂肪酸(光谱法)测定的值。在试样中的组合物包含除脂肪酸以外的成分的情况下，基于组合物中的脂肪酸的量，可以求出共轭不饱和脂肪酸的量。
含游离LC-PUFA组合物的共轭不饱和脂肪酸的含量可以设定为组合物中的脂肪酸的0.8％以下、0.7％以下、0.6％以下、0.5％以下、0.4％以下、或0.3％以下。存在共轭不饱和脂肪酸的含量越少，则组合物的氧化稳定性越优异的倾向。共轭不饱和脂肪酸的含量的下限值也可以为0.1％、0.2％、0.01％、或0.001％。例如，含游离LC-PUFA组合物的共轭不饱和脂肪酸的含量可以设定为组合物中的脂肪酸的0.001％～1.0％、0.01％～0.8％、0.1％～0.7％、或0.2％～0.7％。
含游离LC-PUFA组合物可满足的条件(2)与加德纳色相有关，加德纳色相设定为低于3+。加德纳色相是基于含游离LC-PUFA组合物中存在的着色物质的含量而变动的指标，像1-、1、1+、2-、2、2+、3-、3、3+、4-、4、4+、5-、5、5+那样，表示组合物的着色程度依次变强。满足条件(2)是指含游离LC-PUFA组合物的色为低于3+的加德纳色相、即相当于1-、1、1+、2-、2、2+、3-或3中的任一者。加德纳色相按照日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版3.2.1.1来决定。
含游离LC-PUFA组合物的加德纳色相可以设定为3-以下、2+以下、2以下、1+以下、或1-。显示更低的值的加德纳色相的含游离LC-PUFA组合物为通过利用碱催化剂的水解可产生的着色物质更少的组合物，存在品质管理容易、商品化的选择的幅度扩大的倾向。
含游离LC-PUFA组合物只要满足条件(1)及(2)中的任一个即可。即，在含游离LC-PUFA组合物中，满足条件(1)的情况下，加德纳色相也可以为3+以上，该情况下，例如可以设定为4以下、或4-以下。在含游离LC-PUFA组合物中，满足条件(2)的情况下，共轭不饱和脂肪酸的含量也可以为超过1.0％，该情况下，例如可以设定为3.0％以下、2.5％以下、2.0％以下、1.5％以下。
在含游离LC-PUFA组合物中，作为条件(3)，茴香胺值(AnV)可以设定为5.0以下、4.5以下、4.0以下、3.5以下、3.0以下、或2.5以下。茴香胺值是基于含游离LC-PUFA组合物中存在的氧化物质的含量而变动的指标。显示更低的茴香胺值的含游离LC-PUFA组合物中氧化物质的含量更少。茴香胺值按照日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版2.5.3来决定。
含游离LC-PUFA组合物可以有仅满足条件(1)的情况、仅满足条件(2)的情况、满足条件(1)及(2)的情况。此外，除了它们以外，还可以满足条件(3)。含游离LC-PUFA组合物例如包含以下的组合物：
(a)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下、且加德纳色相为3+以上的含游离LC-PUFA组合物。
(b)共轭不饱和脂肪酸的含量为超过组合物中的脂肪酸的1.0％、且加德纳色相为3以下的含游离LC-PUFA组合物；
(c)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下、且加德纳色相为3以下的含游离LC-PUFA组合物；
(d)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下、且加德纳色相为3+以上、茴香胺值为5.0以下的含游离LC-PUFA组合物；
(e)共轭不饱和脂肪酸的含量为超过组合物中的脂肪酸的1.0％、且加德纳色相为3以下、茴香胺值为5.0以下的含游离LC-PUFA组合物；
(f)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下、加德纳色相为低于3+、且茴香胺值为5.0以下的含游离LC-PUFA组合物。
在上述(a)～(c)的含游离LC-PUFA组合物中，茴香胺值为超过5.0，也可以为6.0以下、或5.5以下。在上述(a)及(d)的含游离LC-PUFA组合物中，加德纳色相为3+以上，也可以为6以下、5+以下、5以下、5-以下、4+以下、4以下、或4-以下。在上述(b)及(e)的含游离LC-PUFA组合物中，共轭不饱和脂肪酸的含量也可以为2.5％以下、2.0％以下、或1.5％以下。
在上述(f)的含游离LC-PUFA组合物中，例如包含以下的组合物：
(f1)共轭不饱和脂肪酸的含量为0.7％以下、且加德纳色相为2+以下及茴香胺值为5.0以下的含游离LC-PUFA组合物。
(f2)共轭不饱和脂肪酸的含量为0.7％以下、且加德纳色相为低于3+及茴香胺值为4.0以下的含游离LC-PUFA组合物。
(f3)共轭不饱和脂肪酸的含量为0.7％以下、且加德纳色相为2+以下及茴香胺值为4.0以下的含游离LC-PUFA组合物。
(f4)共轭不饱和脂肪酸的含量为0.4％以下、且加德纳色相为1+以下及茴香胺值为3.5以下的含游离LC-PUFA组合物。
(f5)共轭不饱和脂肪酸的含量为0.4％以下、且加德纳色相为1以下及茴香胺值为2.5以下的含游离LC-PUFA组合物。
(f6)共轭不饱和脂肪酸的含量为0.3％以下、且加德纳色相为1-及茴香胺值为3.5以下的含游离LC-PUFA组合物。
在上述(a)～(f)的含游离LC-PUFA组合物中，共轭不饱和脂肪酸的含量也可以为0.001％以上、0.01％以上、或0.1％以上。
在含游离LC-PUFA组合物中，脂肪酸烷基酯的含量可以设定为低。脂肪酸烷基酯在制造游离脂肪酸的工序中，可以为碱水解的原料物质、或可通过逆反应而由游离脂肪酸生成的产物。脂肪酸烷基酯的含量更少的含游离LC-PUFA组合物可以使游离LC-PUFA的含量更高，此外，存在组合物的生物体吸收性、特别是肠道吸收性更高的倾向。含游离LC-PUFA组合物的脂肪酸烷基酯含量可以设定为组合物中的脂肪酸的0.2％以下、0.1％以下、0.05％以下、0.04％以下、0.03％以下、0.02％以下、或0.01％以下。作为脂肪酸烷基酯的含量的下限值，没有特别限制，例如可以设定为0.0005％。脂肪酸烷基酯的含量为0.0005％以上的情况下，存在组合物难以结晶化、流动性提高的倾向。
含游离LC-PUFA组合物可以制成除LC-PUFA以外的脂肪酸的含量少的组合物。在组合物中的LC-PUFA以外的脂肪酸的含量低的情况下，能够以与LC-PUFA的含量相应的程度期待功能的发挥，此外，能够抑制由除LC-PUFA以外的其他脂肪酸带来的影响。作为在含游离LC-PUFA组合物中含量能够降低的其他脂肪酸，可列举出碳原子数低于20的饱和或者不饱和脂肪酸、碳原子数为22以上的饱和脂肪酸等。具体而言，作为碳原子数低于20的饱和或不饱和脂肪酸，可列举出碳原子数为18的饱和脂肪酸、碳原子数为18的一元不饱和脂肪酸、碳原子数为18的二元不饱和脂肪酸、碳原子数为18的三元不饱和脂肪酸及碳原子数为18的四元不饱和脂肪酸，作为碳原子数为22以上的饱和脂肪酸，可列举出碳原子数为22的饱和脂肪酸及碳原子数为24的饱和脂肪酸。
在含游离LC-PUFA组合物中，这些除LC-PUFA以外的脂肪酸中的碳原子数为18的二元以上的多元不饱和脂肪酸的含量可以设定为低。例如，碳原子数为18的二元以上的多元不饱和脂肪酸的含量可以设定为组合物的脂肪酸的2.0％以下、1.5％以下、1.0％以下、或0.8％以下。作为除LC-PUFA以外的脂肪酸的含量的下限值，例如也可以为0.001％以上、0.005％以上、或0.01％。碳原子数为18的二元以上的多元不饱和脂肪酸的含量例如可以设定为0.001％～2.0％、0.005％～1.5％、0.01％～1.5％、或0.01％～1.0％。
含游离LC-PUFA组合物也可以含有除上述的脂肪酸以外的形态的脂肪酸。作为其他形态的脂肪酸，可列举出三甘油酯、二甘油酯、单甘油酯、磷脂质、甾醇酯等。这些其他形态的脂肪酸的含量只要是相当于含游离LC-PUFA组合物的除LC-PUFA以外的剩余部分的量即可，可以设定为低于组合物中的脂肪酸的20.0％、低于10.0％、低于5.0％、低于2.0％、低于1.0％、或低于0.5％。
含游离LC-PUFA组合物中的脂肪酸的含量可以设定为组合物的总重量的97.0重量％以上、98.0重量％以上、99.0重量％以上、99.5重量％以上、或100重量％。含游离LC-PUFA组合物中的脂肪酸的含量可以通过TLC/FID等公知的方法来确认。在含游离LC-PUFA组合物中，可以包含除脂肪酸以外的成分。作为可包含于含游离LC-PUFA组合物中的其他成分，可列举出生育酚、维生素C、维生素C衍生物等抗氧化剂、乙醇等溶剂等。
含游离LC-PUFA组合物只要可以具有本说明书中记载的特征，则可以是以任何制造方法制造的组合物，可以优选为通过后述的制造方法制造的组合物。
<制造方法>
本发明的一方式中的含游离LC-PUFA组合物的制造方法包括准备包含至少一种碳原子数为20以上的多元不饱和脂肪酸的原料组合物；对于包含所准备的原料组合物、低级醇、水及碱催化剂的反应液，在10℃以下的温度条件下进行水解处理，根据需要也包括其他工序。根据本制造方法，能够更高效地得到共轭不饱和脂肪酸和/或着色物质的含量低于在超过10℃的温度下进行水解处理而得到的组合物的含游离LC-PUFA组合物。
在准备原料组合物的工序中，只要是包含至少一个LC-PUFA的原料组合物，则可以准备已获得的原料组合物，也可以准备另外制造的原料组合物。原料组合物可以是来源于水产物原料的组合物、来源于微生物原料的组合物、来源于植物原料的组合物、来源于动物原料的组合物等来源于生物的组合物。原料组合物可以是包含三甘油酯形态的LC-PUFA的组合物，也可以是含有LC-PUFA烷基酯的组合物。含LC-PUFA烷基酯组合物优选为将含有三甘油酯形态的LC-PUFA的生物油进行烷基酯化而得到的组合物。
作为含有LC-PUFA的生物油，可以是鱼类等水产物原料油、来源于微生物的微生物油、来源于植物的植物油等生物油，例如，可以是微生物油。生物油是指以生物量作为起源而得到的油，微生物油是指以微生物生物量作为起源而得到的油。生物油也可以是来源于基因重组体的生物油。所谓“生物量”的用语是指在规定的区域或生态系统中生长的规定的时刻的细胞的集合物或块。
作为水产物原料油，可例示出包含鱼类、甲壳类、或海产动物中包含的油脂、磷脂质、蜡酯等的脂质。作为水产原料油，为鲱鱼(herring)、沙丁鱼(sardine)、凤尾鱼(anchovy)、步鱼(menhaden)、皮尔彻德鱼(pilchard)、秋刀鱼(saury)、金枪鱼(tuna)、鲣鱼(bonito)、无须鳕(hake)、鲶鱼(catfish)、毛鳞鱼(capelin)、红鱼(red fish)、白鱼(whitefish)、鲭鱼(mackerel)、竹荚鱼(jack mackerel)、黄尾鱼(yellowtail)、玉筋鱼(sandeel)、大头鱼(pout)、鲑鱼(salmon)、狭鳕(pollock)、鳕鱼(cod)、大比目鱼(halibut)、鳟鱼(trout)、blue whitening、西鲱(sprat)、鲨鱼(shark)、狗鲨(dogfish)等鱼类来源的油、乌贼(squid)、双壳贝(clam)、鲍鱼(abalone)等软体动物来源的油、磷虾(krill)等甲壳类来源的油、及海豹(seal)、海狮(sea lion)、海狗(sea bear)、海象(warlus)等动物来源的油、以及这些油的混合物。
作为微生物，只要是脂质生产微生物或可脂质生产微生物即可，可列举出藻类(algae)、真菌、细菌类(bacteria)、菌类(fungi)及原生藻菌(stramenopile)类。
作为藻类，可列举出粘菌门(Labyrinthulamycota)属等。
作为真菌，可列举出亚罗酵母属、假丝酵母属、酵母属、裂殖酵母属、毕赤酵母属等。
作为细菌类，可列举出农杆菌(Agrobacterium)、芽孢杆菌(Bacillus)、大肠杆菌(Escherichia)、假单胞菌(Pseudomonas)、放线菌(Actinomyces)等。
作为菌类，可列举出选自由被孢霉(Mortierella)属、耳霉(Conidiobolus)属、腐霉(Pythium)属、疫霉(Phytophthora)属、青霉(Penicillium)属、枝孢菌(Cladosporium)属、毛霉(Mucor)属、镰刀菌(Fusarium)属、曲霉(Aspergillus)属、红酵母(Rhodotorula)属、虫霉(Entomophthora)属、刺孢囊霉(Echinosporangium)属、及水霉(Saprolegnia)属组成的组中的至少1种。其中，进一步优选属于被孢霉(Mortierella)属的微生物。作为属于被孢霉属的微生物，可列举出例如长孢被孢霉(Mortierella elongata)、微小被孢霉(Mortierella exigua)、喜湿被孢霉(Mortierella hygrophila)、高山被孢霉(Mortierella alpina)等属于被孢霉亚属的微生物。
作为植物，除了芸薹属(Brassica)、向日葵属(Helianthus)、棉花属(Gossypium)、亚麻属(Linum)、烟草属(Nicotiana)、柑橘属(Citrus)、葱属(Allium)、小麦属(Triticum)、大麦属(Hordeum)、燕麦属(Avena)、黑麦属(Secale)、稻属(Oryza)、甘蔗属(Saccharum)、玉蜀黍属(Zea)、高粱属(Sorghum)的植物以外，还可列举出大豆(soybean)、番茄(tomato)、马铃薯(potato)、豌豆(pea)、豇豆(frijol)、花生(peanut)、苜蓿(Medicago)、芹菜(celery)、荷兰芹(pase1ey)、紫苜蓿(clover)、胡萝卜(carrot)、萝卜(radish)、甜菜(sugar beet)、黄瓜(cucumber)、菠菜(spinach)、木薯(cassava)、橄榄(olive)、苹果(apple)、香蕉(banana)、甜瓜(melon)、葡萄(grape)、草莓(strawberry)、椰子(coconut plant)、咖啡树(coffee plant)、胡椒(pepper)等。
成为烷基酯化处理的对象的原料油可以是粗油，也可以是精制油。粗油可以是由水产物原料得到的油，也可以是由微生物原料得到的油。精制油可以是对粗油进行脱胶工序、脱酸工序、使用了活性白土或活性炭的脱色工序、水洗工序、利用水蒸气蒸馏等的脱臭工序等，经由将除磷脂质及甾醇等目标物以外的物质除去的粗油精制工序而得到。
在进行烷基酯化的工序中，将原料油通过使用了低级醇的醇分解，分解成低级烷基酯。作为低级醇，可列举出脂肪酸的烷基酯化中一般使用的醇、例如碳原子数为1～3的低级醇。醇分解是在原料油中添加低级醇例如乙醇和催化剂或酶并使其反应，由键合于甘油上的脂肪酸生成乙酯的反应。作为催化剂，使用碱催化剂、酸催化剂等。作为酶，使用脂酶。
在粗油或者精制油、或通过烷基酯化处理得到的含脂肪酸烷基酯组合物中，有时除了作为目标的LC-PUFA以外，还包含1个或2个以上的其他脂肪酸。为了由粗油或者精制油或含脂肪酸烷基酯组合物将特定的LC-PUFA浓缩或离析，可以将蒸馏、精馏、柱色谱法、低温结晶化法、尿素包合法、液-液逆流分配色谱法等单独使用1种、或将2种以上组合使用。优选蒸馏或精馏与柱色谱法或液-液逆流分配色谱法的组合。在经由将特定的LC-PUFA浓缩或离析的工序的情况下，能够提高本含LC-PUFA组合物中最终可包含的作为目标的LC-PUFA的脂肪酸中的含量，并且降低除作为目标的LC-PUFA以外的其他脂肪酸的脂肪酸中的含量。
例如，使用精馏的情况下，作为精馏工序，在将蒸馏塔的塔顶部的压力设定为10mmHg(1333Pa)以下的减压、将塔底温度设定为165℃～210℃、优选170℃～195℃的条件下进行蒸馏在抑制由热引起的脂肪酸的改性、提高精馏效率的方面优选。蒸馏塔的塔顶部的压力越低越好，更优选为0.1mmHg(13.33Pa)以下。对于塔顶部的温度没有特别限制，例如可以设定为160℃以下。通过精馏工序，可以得到包含更高的含量的LC-PUFA、例如LC-PUFA烷基酯的原料组合物。
作为柱色谱法，优选反相分配系的柱色谱法。作为反相柱色谱法，可列举出本技术领域中公知的反相柱色谱法，特别是优选可列举出以被十八烷基甲硅烷基(ODS)修饰过的基材作为固定相的高效液相色谱法(HPLC)。
通过浓缩或离析工序得到的组合物为作为目标的LC-PUFA的含量高的组合物，例如，作为目标的LC-PUFA的含量也可以为脂肪酸的80.0％以上、85.0％以上、90.0％以上、95.0％以上、97.0％以上、98.0％以上、99.0％以上、或99.5％以上。可以使用该含有高浓度的LC-PUFA的组合物作为原料组合物。
在进行水解处理的工序中，对于包含所准备的原料组合物、低级醇、水及碱催化剂的反应液，在10℃以下的温度条件下进行水解处理。在本说明书中，有时将使用了碱催化剂的本水解处理称为碱水解处理。
在碱水解处理中使用的反应液中，包含原料组合物、低级醇、水及碱催化剂。作为原料组合物，可以为生物油，也可以为含LC-PUFA烷基酯组合物。反应液中的原料组合物的浓度(w/w)从反应效率的观点出发，可以设定为10.0重量％～70.0重量％、20.0重量％～60.0重量％、或40重量％～50重量％。
作为低级醇，可列举出为了将生物油或脂肪酸烷基酯分解而得到游离脂肪酸而一般使用的低级醇、例如碳原子数为1～3的低级醇。反应液中的低级醇的量只要是为了将原料组合物中的脂肪酸分解成游离型而有效的量即可，例如，相对于原料组合物中的脂肪酸，可以设定为0.9当量～32.0当量、0.92当量～20.0当量、0.95当量～14当量、2.0当量～10.0当量、3.0当量～7.0当量、或4.5当量～5.5当量。原料组合物中的低级醇相对于脂肪酸的比为0.9当量或大于其的情况下，存在反应以更良好的速度进行的倾向，此外，存在更容易抑制着色物质的产生的倾向。另一方面，为32.0当量或小于其的情况下，存在能够使反应停止后的状态稳定化、且有效地抑制可生成脂肪酸烷基酯的逆反应的进行的倾向。对于反应液中的低级醇的量，包含在反应液的制备时添加的低级醇的量和在反应中反应液中副产的低级醇的量这两者。本说明书中的“当量”是指“摩尔当量”。以下相同。
反应液中的低级醇的量相对于水以重量比计可以设定为0.20～8.20、0.23～4.50、0.25～3.50、0.60～2.50、或1.20～1.50。若水与低级醇的重量比为该范围，则碱水解更良好地进行，此外，存在能够使反应停止后的状态稳定化、且有效地抑制可生成脂肪酸烷基酯的逆反应的进行的倾向。对于反应液中的低级醇的量，包含在反应液的制备时添加的低级醇的量和在反应中反应液中副产的低级醇的量这两者。
水在反应液中的量相对于原料组合物中的脂肪酸，可以设定为6.0当量～13.0当量、7.0当量～12.0当量、8.0当量～11.0当量、或9.0当量～10.0当量。若水相对于原料组合物的重量比为该范围时，则能够使碱水解更良好地进行。
作为碱水解处理中使用的碱催化剂，可以设定为碱金属氢氧化物，为氢氧化钠、氢氧化钾等，可以为选自由氢氧化钠及氢氧化钾组成的组中的至少一个，更优选为氢氧化钠。碱水解处理中使用的碱催化剂的量只要为可由原料组合物生成游离脂肪酸的范围即可，例如，相对于原料组合物中的脂肪酸可以设定为1.0当量～2.3当量、1.0当量～2.0当量、或1.0当量～1.5当量，碱催化剂相对于原料组合物的比为该范围内时，能够高效地使反应进行而得到游离LC-PUFA。
在反应液中，在不妨碍碱水解反应的进行的范围内，可以包含除上述的物质以外的成分。作为这样的成分，可列举出生育酚、维生素C、维生素C衍生物等抗氧化剂、丙酮等非醇溶剂等。
本制造方法中的水解处理在10℃以下的温度条件下进行。通过设定为10℃以下的水解处理，能够抑制选自由共轭不饱和脂肪酸及着色物质组成的组中的至少一种杂质在水解工序中的产生或增加。水解处理的温度条件只要是在10℃以下的温度条件下水解处理能够进行的温度范围即可，例如可以设定为-20℃以上、-10℃以上、-5℃以上、-4℃以上、-2℃以上、0℃以上、或2℃以上，另一方面，可以设定为8℃以下、或7℃以下。作为水解处理的温度范围，可以设定为基于上述的上限值中的任一者和下限值中的任一者的数值范围，例如可以设定为-20℃～10℃、-10℃～10℃、-5℃～10℃、-4℃～10℃、0℃～10℃、0℃～8℃、或2℃～7℃。在10℃以下那样的温度条件下进行水解处理的情况下，能够更加抑制上述的杂质的产生或增加。
作为碱水解处理的反应时间，根据所设定的温度范围而不同，但例如可以设定为30分钟～600小时、1小时～100小时、8小时～80小时、或19小时～25小时。随着碱水解处理进行而反应液中的脂肪酸烷基酯的量减少。因此，可以根据反应液中的脂肪酸烷基酯的残存量而使碱水解处理停止。反应液中的脂肪酸烷基酯的量可以通过薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)等进行确认。
碱水解处理可以通过向反应液中添加酸而停止。通过添加酸，反应液的pH成为酸性侧，水解反应的进行停止，通过碱催化剂的添加而生成的皂化物分解，得到游离脂肪酸。此时，通过使反应液中存在己烷等有机溶剂，可以将通过反应停止处理而得到的游离脂肪酸萃取。对于反应停止及萃取处理的温度条件没有特别限制，例如可以设定为0℃～40℃、5℃～35℃、或15℃～30℃的范围内。对于反应停止及萃取处理的时间，没有特别限制，可以进行至通过搅拌等而混合的反应液发生层分离、且稳定。
为了将碱水解反应停止而使用的酸在本技术领域中众所周知，可列举出例如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸等无机酸、或醋酸、柠檬酸、草酸等有机酸。作为酸，从水中的溶解度高且通过水洗容易除去的方面出发优选无机酸，其中从添加量为少量即可、所生成的盐及残存的酸的除去的方面出发，更优选盐酸等。酸的添加量只要是为了将碱水解处理停止而有效的量即可，相对于添加的碱催化剂可以设定为1.1当量左右。
添加酸后的反应液的pH只要是能够将碱水解停止的pH即可，可以以pH1.0、pH1.5、或pH2.0作为下限值，另一方面，可以以pH6.0、pH5.0、pH4.5、或pH4.0作为上限值。酸化添加后的反应液的pH例如可以设定为pH1.0～pH6.0、pH1.5～pH4.5、pH2.0～pH5.0、pH2.0～4.0。将添加酸后的反应液的pH设定为超过pH1的范围、例如pH1.5～pH4.5、或pH2.0～pH4.0的情况下，能够在水解反应停止后抑制可生成脂肪酸烷基酯的逆反应的进行，能够抑制脂肪酸烷基酯的增加。这里的反应液的pH是指包含有机层及水层的反应液的水层的pH。
本制造方法可以包括从反应停止及萃取处理后得到的反应液除去水溶性成分的洗涤工序。在洗涤工序中，只要使用水等作为洗液添加到反应液中即可。可以进行至洗涤处理中使用的洗液的pH为中性附近、例如超过6。对于洗涤工序的温度没有特别限制，可以在25℃以下进行。本制造方法可以包括在洗涤工序后，用于由洗涤处理后的反应液的有机层回收作为目标的含游离LC-PUFA组合物的回收工序。回收处理只要应用为了该目的而通常使用的手段即可，例如可以使用蒸发器等。
通过本制造方法得到的含游离LC-PUFA组合物的共轭不饱和脂肪酸和/或着色物质的含量低于在超过10℃的温度下进行水解处理而得到的组合物。在通过本制造方法得到的含游离LC-PUFA组合物中，LC-PUFA的含量例如可以设定为组合物中的脂肪酸的80.0％以上、85.0％以上、90.0％以上、95％以上、97.0％以上、98.0％以上、99.0％以上、或99.5％以上。在通过本制造方法得到的含游离LC-PUFA组合物中，共轭不饱和脂肪酸的含量可以设定为低于在超过10℃的温度下进行水解处理而得到的组合物的量、例如组合物中的脂肪酸的1.0％以下、0.8％以下、0.7％以下、0.6％以下、0.5％以下、0.4％以下、或0.3％以下。在通过本制造方法得到的含游离LC-PUFA组合物中，作为着色物质的指标的加德纳色相可以设定为低于在超过10℃的温度下进行水解处理而得到的组合物的值、例如低于3+、3-以下、2+以下、2以下、1+以下、或1-。作为这样的含游离LC-PUFA组合物，可列举出上述的本发明的其他实施方式中的含游离LC-PUFA组合物。
在含游离LC-PUFA组合物中，与通过水解酶得到的含游离LC-PUFA组合物相比，热失活处理后的酶的残留量少。在热失活处理后的酶的残留量少的组合物中，能够降低残留酶的影响。
含游离LC-PUFA组合物设定为来源于生物油的组合物，由于可以不经由化学合成的工序而得到，所以能够制成残留有机溶剂量低的组合物。本说明书中的有机溶剂是指为除脂肪酸以外的溶剂、且具有至少一个碳原子的疏水性或亲水性的溶剂，可列举出极性溶剂、非极性溶剂、水混合性溶剂、水不混合性溶剂、及它们2个以上的组合。作为有机溶剂，可列举出取代或未取代的、饱和或者不饱和脂肪族烃、芳香族烃、醇、醚、酮、醛、羧酸、酯、腈、酰胺等，它们可以是单独或也可以是2种以上的组合。
含游离LC-PUFA组合物中的残留有机溶剂的总含量可以设定为5000ppm以下、3000ppm以下、2000ppm以下、或1000ppm以下。
含游离LC-PUFA组合物也可以是残留有机溶剂中的选自由甲醇、乙醇、丙酮及己烷组成的组中的至少一个的含量低的组合物。这些有机溶剂可以分别独立地设定为500ppm以下、300ppm以下、或200ppm以下。例如，含游离LC-PUFA组合物中的甲醇、乙醇、丙酮及己烷的含量均可以设定为500ppm以下、300ppm以下、或200ppm以下。
在含游离LC-PUFA组合物中，由于上述那样的杂质少、且以高浓度包含至少一个游离LC-PUFA，所以能够以高的水平良好地发挥与所含有的LC-PUFA的种类相应的功能，可以在各种用途中优选使用。
作为含游离LC-PUFA组合物的优选的用途，可列举出例如在食品、增补剂、医药品、化妆品、饲料等中的使用、在它们的制造方法中的使用，特别是可列举出包含含有LC-PUFA的组合物作为有效成分的医药品。例如，在本含游离LC-PUFA组合物为含有游离ARA、游离DGLA、游离EPA、游离DHA等的组合物的情况下，对于将这些功能性LC-PUFA以高的含有率且生产率好地应用于所要求的用途中极其有用。作为这样的用途，可列举出可期待动脉硬化、脑梗塞、心筋梗塞、血栓症、高脂血症等生活习惯病预防、代谢综合症改善、抗过敏、抗炎症、抗癌、脑功能改善等作用的食品、增补剂、医药品、化妆品、饲料等。作为医药品，可列举出皮肤外用剂、经口剂等。
使用含游离LC-PUFA组合物作为医药品时，医药品包含含游离LC-PUFA组合物及医药上能够允许的载体和根据需要的其他成分。投与形态只要基于组合物中的LC-PUFA的种类，正确进行经口投与或非经口投与，则可以是任何形态。作为投与形态，可列举出例如注射液、输液、散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、肠溶剂、糖锭、内用液剂、悬浮剂、乳剂、糖浆剂、外用液剂、湿布剂、滴鼻剂、滴耳剂、滴眼剂、吸入剂、软膏剂、洗涤剂、栓剂等，可以将它们根据症状而分别单独使用、或组合使用。
这些各种制剂可以按照常规方法根据目的而在主药中使用赋型剂、结合剂、防腐剂、稳定剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂等在医药的制剂技术领域中通常可使用的已知的辅助剂进行制剂化。此外其投与量根据投与的目的、组合物中的LC-PUFA的种类、投与对象者的状况(性别、年龄、体重等)而不同，但通常对于成人经口投与的情况下，以作为结构脂质的LC-PUFA的总量计，可以在每1天0.01mg～10g、优选0.1mg～2g、进一步优选1mg～200mg的范围内，此外非经口投与的情况下，以作为结构脂质的LC-PUFA的总量计，可以在每1天0.001mg～1g、优选0.01mg～200mg、进一步优选0.1mg～100mg的范围内适当调节而投与。
实施例
以下，通过实施例对本发明进行详细说明。然而，本发明并不受它们的任何限定。
在以下的项中的实施例及比较例中，将LC-PUFA仅设定为特定种类，但对于LC-PUFA的种类没有特别限定。
以下的实施例的项中使用的“精制水”是指被精制的水，“水”是指自来水。
推测作为本实施例中使用的原料组合物的含脂肪酸烷基酯组合物中包含的脂肪酸的大部分为脂肪酸烷基酯形态。因此，以下，试样中包含的脂肪酸全部作为烷基酯形态的脂肪酸记载。但是，没有将包含除烷基酯形态以外的形态的脂肪酸完全排除。
[比较例1]
<制备方法>
将含有96.7％的EPA的鱼油来源的原料EPA乙酯1通过常规方法进行碱水解。
即，相对于2.50g的原料EPA乙酯1，添加乙醇6.25mL(4.92g、相对于脂肪酸为14.11当量)、水1.00mL、48重量％氢氧化钠水溶液0.76g(相对于脂肪酸为1.20当量的碱)而制备了试样液1。试样液1中，水分为1.40g，即相对于脂肪酸为10.27当量。对于试样液1，在70℃、油浴中加热24小时，进行水解处理。表1中示出试样液1的制备时的组成。表1中，原料组合物表示试样液中的重量(g)，碱、乙醇、及水的量表示相对于原料组合物中的脂肪酸的量(摩尔当量)。另外，在水解反应后的试样液中，乙醇的相对于脂肪酸的量理论上最大可增加1当量。在水解反应后的试样液中，水的相对于脂肪酸的量理论上最大可减少1当量。以下相同。
水解处理的反应的结束如以下那样操作来判断。即，将试样液1的一部分取出，以试样液：1N盐酸水溶液：己烷＝1：2：5(v/v/v)组合而混合。以分离后的己烷层作为确认用试样。
使用微量注射器将确认用试样0.5μL负载于TLC板上，在展开槽中立刻展开。展开后，将薄层板从展开槽取出，在通风机内使溶剂蒸发，通过浸渍方式涂布对茴香醛显色试剂。涂布后，在110℃～120℃左右，加热至呈色，得到斑点。通过目视确认原料乙酯的斑点的消失，作为反应终点。以下相同。
作为展开溶剂，使用己烷：二乙基醚：醋酸＝80：20：1(v/v/v)。作为TLC板，使用Silicagel 60G F254(Merck Millipore)。作为显色试剂，使用对茴香醛显色试剂。
对茴香醛显色试剂如以下那样操作而制备。即，将对茴香醛9.3mL、醋酸3.8mL、乙醇340mL一边冰冷一边混合后，混合浓硫酸12.5mL而制备。
在将处理后的试样液1风冷，转移至分液漏斗中后，在该试样液1中，添加己烷3.13mL、精制水2.50mL。若进一步添加2.25g的盐酸，则试样液1分离成己烷层和水层这两层。水层的pH为1.0。表1中，将此时的水层的pH称为“酸性化时pH”。以下相同。
在将试样液1搅拌，接着静置后，在从试样液1除去水层后的试样液1中进一步添加精制水3.75mL并搅拌。添加微量盐酸而将水层的pH调整为1.0。之后，使用等量的精制水作为水洗用液进行水洗。将水洗重复至水洗后回收的水洗用液成为中性pH6.0～7.0。在水洗后由试样液1回收己烷层，由已回收的己烷层，将己烷通过蒸发器及抽真空而除去，得到2.12g含有游离EPA的组合物即EPA1。
<评价方法>
对于原料EPA乙酯1及上述中得到的EPA1，进行下述的评价。对于评价结果中的EPA1的特性，示于表1中，对于脂肪酸组成，示于表4中。
回收率为96.8％。所得到的EPA1的加德纳色相为6-，AnV为1.9，乙酯(EE)含量为2820ppm，共轭二烯酸含量为2.45％。没有检测到除共轭二烯酸以外的共轭不饱和脂肪酸。另外，对于共轭不饱和脂肪酸，仅共轭二烯酸示于表1中。
(1)回收率
EPA1中的EPA的回收率按照下述式求出。将作为原料组合物的EPA乙酯的分子量设定为330.5028，将作为水解物的游离EPA的分子量设定为302.4498。
[数学式1]
(2)共轭不饱和脂肪酸
按照日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版参1.14测定。
(3)色相
加德纳色相按照日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版3.2.1.1来决定。
(4)茴香胺值
按照日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版2.5.3来决定。
(5)脂肪酸组成
原料EPA乙酯1及EPA1的脂肪酸组成通过利用基于以下的条件的气相色谱法得到的各脂肪酸峰求出。另外，对于EPA1，在气相色谱法测定前进行甲基酯化。甲基酯化依据American Oil Chemists’Society(AOCS)Official Method Ce1b-89进行。
-气相色谱法分析条件-
机种Agilent7890GC system(Agilent社)
柱DB-WAX(Agilent Technologies、30m×0.25mm ID、0.25μm film thickness)J&W122-7032
柱烘箱180℃-3℃/min-230℃(25min)
注入温度250℃
注入方法分流
分流比30：1
检测器温度270℃
检测器FID
载气氦气(1.0mL/min、恒定流量)
(6)脂肪酸乙酯含量
通过基于以下的条件的高效液相色谱法(HPLC)来测定。试样溶液按照EPA1成为10mg/mL的方式以5v/v％醋酸/丙酮溶液稀释而制备。定量使用EPA乙酯99％含量品适当制作标准曲线而测定。
-HPLC测定条件-
柱YMC_ODS-A柱(4.6mm×150mm)
洗脱液MeOH：水＝9：1
流速1mL/min
柱温度40℃
注入量5μl注入
检测器UV205nm
[比较例2]
除了将含有96.7％的EPA的比较例1的原料EPA乙酯1的量、及试样液中的乙醇的量分别如以下那样变更以外，与比较例1同样地操作，进行碱水解。
即，相对于5.00g的原料EPA乙酯1，添加乙醇3.50mL(2.75g、相对于脂肪酸为3.95当量)、水2.01mL、48重量％氢氧化钠水溶液1.51g(相对于脂肪酸为1.20当量的碱)而制备试样液2。试样液2中，水分为2.80g，即相对于脂肪酸为10.27当量。对于试样液2，在70℃、油浴中加热24小时，进行水解处理。确认水解处理的反应的结束，将处理后的试样液2风冷，转移至分液漏斗中后，在该试样液2中，添加己烷6.25mL、精制水5.00mL。若进一步添加2.02g的盐酸，则试样液2分离成己烷层和水层这两层。水层的pH为3.0。
将试样液2搅拌，接着静置后，由试样液2除去水层后，在除去后的试样液2中进一步添加精制水7.50mL并搅拌。添加微量盐酸而将水层的pH调整为1.0。之后，使用等量的精制水作为水洗用液进行水洗。将水洗重复至水洗后回收的水洗用液成为中性pH6.0～7.0。由水洗后的试样液2回收己烷层，由已回收的己烷层，将己烷通过蒸发器及抽真空而除去，得到4.17g含有游离EPA的组合物即EPA2。
对于原料EPA乙酯1及上述中得到的EPA2，与EPA1同样地进行评价。将结果示于表1及表4中。
回收率为91.0％。所得到的EPA2的加德纳色相为12，AnV为5.3，乙酯(EE)含量为191ppm，共轭二烯酸量为1.12％。没有检测到除共轭二烯酸以外的共轭不饱和脂肪酸。另外，对于共轭不饱和脂肪酸，仅共轭二烯酸示于表1中。
[实施例1]
除了将含有96.7％的EPA的比较例1的原料EPA乙酯1变更、将碱水解时的温度条件变更为6℃以外，与比较例1同样地操作，进行碱水解。
即，相对于2.50g的原料EPA乙酯1，添加乙醇6.25mL(4.92g、相对于脂肪酸为14.11当量)、水1.00mL、48重量％氢氧化钠水溶液0.76g(相对于脂肪酸为1.20当量的碱)而制备试样液3。试样液3中，水分为1.40g，即相对于脂肪酸为10.27当量。对于试样液3，在6℃下搅拌24小时，进行水解处理。确认水解处理的反应的结束，将处理后的试样液3恢复至常温，转移至分液漏斗中后，在该试样液3中添加己烷3.13mL、精制水2.50mL。若进一步添加2.25g的盐酸，则试样液3分离成己烷层和水层这两层。水层的pH为1.0。
将试样液3搅拌，接着静置后，由试样液3除去水层后，在除去后的试样液3中进一步添加精制水3.75mL并搅拌。添加微量盐酸而将水层的pH调整为1.0。之后，使用等量的精制水作为水洗用液进行水洗。将水洗重复至水洗后回收的水洗用液成为中性pH6.0～7.0。由水洗后的试样液3回收己烷层，由回收的己烷层将己烷通过蒸发器及抽真空而除去，得到2.14g含有游离EPA的组合物即EPA3。
对于EPA3，与EPA1同样地进行评价。将结果示于表1及表4中。
回收率为93.8％。所得到的EPA3的加德纳色相为2-，AnV为1.3，乙酯(EE)含量为2790ppm，共轭二烯酸含量为0.47％。没有检测到除共轭二烯酸以外的共轭不饱和脂肪酸。这些物性值示于表1中。另外，对于共轭不饱和脂肪酸，仅共轭二烯酸示于表1中。
[实施例2]
除了将含有96.7％的EPA的比较例1的原料EPA乙酯1变更、将碱水解时的温度条件变更为6℃以外，与比较例2同样地操作，进行碱水解。
即，相对于5.00g的原料EPA乙酯1，添加乙醇3.50mL(2.75g、相对于脂肪酸为3.95当量)、水2.01mL、48重量％氢氧化钠水溶液1.51g(相对于脂肪酸为1.20当量的碱)而制备试样液4。试样液4中，水分为2.80g，即相对于脂肪酸为10.27当量。对于试样液4，在6℃下搅拌24小时，进行水解处理。
将处理后的试样液4恢复至常温，转移至分液漏斗中后，在该试样液4中添加己烷6.25mL、精制水5.00mL。若进一步添加2.09g的盐酸，则试样液4分离成己烷层和水层这两层。水层的pH为3.0。
将试样液4搅拌，接着静置后，由试样液4除去水层后，在除去后的试样液4中进一步添加精制水7.50mL并搅拌。添加微量盐酸而将水层的pH调整为1.0。之后，使用等量的精制水作为水洗用液进行水洗。将水洗重复至水洗后回收的水洗用液成为中性pH6.0～7.0。由水洗后的试样液4回收己烷层，由回收的己烷层将己烷通过蒸发器及抽真空而除去，得到4.37g含有游离EPA的组合物即EPA4。
对于EPA4，与EPA1同样地进行评价。将结果示于表1及表4中。
回收率为95.4％。所得到的EPA4的加德纳色相为1，AnV为2.1，乙酯(EE)含量为240ppm，共轭二烯酸含量为0.39％。没有检测到除共轭二烯酸以外的共轭不饱和脂肪酸。另外，对于共轭不饱和脂肪酸，仅共轭二烯酸示于表1中。
[比较例3]
除了使用了含有96.1％的DGLA的微生物来源的原料DGLA乙酯1以外，与比较例2同样地操作，进行碱水解。
即，相对于1.50g的原料DGLA乙酯1，添加乙醇1.05mL(0.83g、相对于脂肪酸为4.00当量)、水0.61mL、48重量％氢氧化钠水溶液0.45g(相对于脂肪酸为1.20当量的碱)而制备试样液5。试样液5中，水分为0.84g，即相对于脂肪酸为10.40当量。对于试样液5，在70℃、油浴中加热24小时，进行水解处理。
确认水解处理的反应的结束，将处理后的试样液5风冷，转移至分液漏斗中后，在该试样液5中，添加己烷1.88mL、精制水1.50mL。若进一步添加0.60g的盐酸，则试样液5分离成己烷层和水层这两层。水层的pH为3.0。
将试样液5搅拌，接着静置后，由试样液5除去水层后，在除去后的试样液5中进一步添加精制水2.25mL并搅拌。添加微量盐酸而将水层的pH调整为1.0。之后，使用等量的精制水作为水洗溶液进行水洗。将水洗重复至水洗后回收的水洗用液成为中性pH6.0～7.0。由水洗后的试样液5回收己烷层，由回收的己烷层将己烷通过蒸发器及抽真空而除去，得到1.19g含有游离DGLA的组合物即DGLA1。
对于原料DGLA乙酯1及上述中得到的DGLA1，与比较例2同样地进行评价。将结果示于表2及表4中。回收率为86.4％。所得到的DGLA1的加德纳色相为6-，AnV为13.7，乙酯(EE)含量为21ppm，共轭二烯酸含量为1.03％。没有检测到除共轭二烯酸以外的共轭不饱和脂肪酸。另外，对于共轭不饱和脂肪酸，仅共轭二烯酸示于表2中。
另外，在测定脂肪酸乙酯含量时，按照DGLA1成为10mg/mL的方式以5v/v％醋酸/丙酮溶液稀释而制备试样溶液，使用DGLA乙酯99％含量品制作标准曲线。在计算回收率时，将作为水解物的游离DGLA的分子量设定为306.48，将作为原料组合物的DGLA乙酯的分子量设定为334.53。
[实施例3]
除了使用含有96.1％的DGLA的微生物来源的原料DGLA乙酯2，将水解时的温度条件变更为6℃以外，与比较例3同样地操作，进行碱水解。其结果是，得到1.31g含有游离DGLA的组合物即DGLA2。
对于原料DGLA乙酯2及上述中得到的DGLA2，与比较例3同样地进行评价。将结果示于表2及表4中。回收率为95.2％。所得到的DGLA2的加德纳色相为1-，AnV为3.2，乙酯(EE)含量为151ppm，共轭二烯酸含量为0.24％。没有检测到除共轭二烯酸以外的共轭不饱和脂肪酸。另外，对于共轭不饱和脂肪酸，仅共轭二烯酸示于表2中。
[比较例4]
除了使用含有39.0％的DHA及47.8％的EPA的鱼油来源的原料PUFA乙酯1以外，与比较例1同样地操作，进行碱水解。
即，相对于2.50g的原料PUFA乙酯1，添加乙醇6.25mL(4.92g、相对于脂肪酸为14.53当量)、水1.02mL、48重量％氢氧化钠水溶液0.73g(相对于脂肪酸为1.20当量的碱)而制备试样液7。试样液7中，水分为1.40g，即相对于脂肪酸为10.57当量。相对于试样液7，在70℃、油浴中加热24小时，进行水解处理。
将处理后的试样液7风冷，转移至分液漏斗中后，在该试样液7中，添加己烷3.13mL、精制水2.50mL，进一步添加盐酸。试样液7在添加盐酸后分离成己烷层和水层这两层。水层的pH为1.0。
将试样液7搅拌，接着静置后，由试样液7除去水层后，在除去后的试样液7中进一步添加精制水3.75mL并搅拌。添加微量盐酸而将水层的pH调整为1.0。之后，使用等量的精制水作为水洗用液进行水洗。将水洗重复至水洗后回收的水洗尿液成为中性pH6.0～7.0。由水洗后的试样液7回收己烷层，由回收的己烷层将己烷通过蒸发器及抽真空而除去，得到2.25g含有游离DHA和游离的EPA的组合物即PUFA1。
对于原料PUFA乙酯1及上述中得到的PUFA1，与比较例1同样地进行评价。将结果示于表3及表4中。回收率为98.4％。所得到的DGLA1的加德纳色相为7-，AnV为2.1，共轭二烯酸含量为3.29％。没有检测到除共轭二烯酸以外的共轭不饱和脂肪酸。另外，对于共轭不饱和脂肪酸，仅共轭二烯酸示于表3中。
另外，在计算回收率时，将原料PUFA乙酯1中的脂肪酸的平均分子量设定为340.167，将所得到的PUFA1中的脂肪酸的平均分子量设定为312.167。
[实施例4]
除了使用含有39.0％的DHA及47.8％的EPA的鱼油来源的原料PUFA乙酯2、将碱水解时的温度条件变更为6℃以外，与比较例4同样地操作，进行碱水解。其结果是，得到4.58g含有游离PUFA的组合物、PUFA2。
即，相对于5.00g的原料PUFA乙酯2，添加乙醇3.50mL(2.75g、相对于脂肪酸为4.07当量)、水2.04mL、48重量％氢氧化钠水溶液1.47g(相对于脂肪酸为1.20当量的碱)而制备试样液8。试样液8中，水分为2.80g，即相对于脂肪酸为10.57当量。对于试样液8，在6℃下搅拌24小时，进行水解处理。
确认水解处理的反应的结束，将处理后的试样液8风冷，转移至分液漏斗中后，在该试样液8中，添加己烷6.25mL、精制水5.00mL，进一步添加盐酸。试样液8分离成己烷层和水层这两层。水层的pH为3.0。
将试样液8搅拌，接着静置后，由试样液8除去水层后，在除去后的试样液8中进一步添加精制水7.50mL并搅拌。添加微量盐酸而将水层的pH调整为1.0。之后，使用等量的精制水作为水洗用液进行水洗。将水洗重复至水洗后回收的水洗用液成为中性pH6.0～7.0。由水洗后的试样液8回收己烷层，由回收的己烷层将己烷通过蒸发器及抽真空而除去，得到4.58g含有游离PUFA的组合物即PUFA2。
对于原料PUFA乙酯2及上述中得到的PUFA2，与比较例4同样地进行评价。将结果示于表3及表4中。回收率为99.7％。所得到的PUFA2的加德纳色相为2+，AnV为3.9，共轭二烯酸含量为0.65％。没有检测到除共轭二烯酸以外的共轭不饱和脂肪酸。另外，对于共轭不饱和脂肪酸，仅共轭二烯酸示于表3中。
以下，示出与比较例1～比较例4及实施例1～4有关的表1～表4。表1～表3中，“条件”是指水解处理的条件，“特性”是指通过水解处理得到的组合物的特性及物性。表1～表3中，在比较例及实施例的栏中，左侧记载与原料组合物有关的事项，右栏记载与通过水解处理得到的组合物有关的事项。表1～表3中，“EE”为乙酯的简记，“G色相”表示加德纳色相。表4中，“C18PUFA”是指碳原子数为18的二元以上的多元不饱和脂肪酸的总计。“others”是指为除LC-PUFA及C18PUFA以外的脂肪酸、且没有记载的物质，是由100％的数值减去LC-PUFA的含量及C18PUFA的含量而得到的计算值。“n.d.”是指低于0.01％。
[表1]
[表2]
[表3]
[表4]
如表1～表3中所示的那样，在6℃下进行碱水解处理的实施例1～4的组合物、即包含游离EPA的EPA3及EPA4、包含游离DGLA的DGLA2、以及包含游离DHA和游离EPA的PUFA2的共轭二烯酸含量均为1.0％以下，且加德纳色相低于3+。特别是确认到共轭二烯酸即使进行硅胶处理也几乎没有变化。与此相对，在实施例1～4中，均可以将共轭二烯酸的含量降低至在70℃下进行处理的比较例1～4的一半以下。
此外，实施例1～3的组合物的茴香胺值均为5.0以下，乙酯含量也为500ppm(0.05重量％)以下。实施例1～实施例4的组合物中的任一者，甲醇、乙醇、丙酮、及己烷全部为200ppm以下。
在实施例1和实施例2中，试样液的乙醇相对于原料组合物的量和酸性化时pH不同。实施例2中得到的包含游离EPA的EPA4与实施例1中得到的包含游离EPA的EPA3比较，加德纳色相更良好，脂肪酸乙酯量及共轭二烯酸的含量更降低。
像这样在含游离LC-PUFA组合物中，共轭二烯酸和/或着色物质之类的杂质少，且作为目标的LC-PUFA的含量高。这样的含游离LC-PUFA组合物优选能够适应于医药等用途中。
2015年8月31日申请的日本专利申请第2015-170856号的公开其整体通过参照纳入本说明书中。
本说明书中记载的全部文献、专利申请、及技术标准与具体且分别记载各个文献、专利申请、及技术标准通过参照纳入的情况相同程度地援引而纳入本说明书中。

Claims (17)

1.一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其包含含量为组合物中的脂肪酸的80.0％以上的至少一种碳原子数为20以上的游离多元不饱和脂肪酸，
所述含游离多元不饱和脂肪酸组合物满足选自由以下的条件(1)及(2)组成的组中的至少一个：
(1)共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的1.0％以下；及
(2)加德纳色相低于3+。
2.根据权利要求1所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，
茴香胺值为5.0以下。
3.根据权利要求1或2所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，
脂肪酸烷基酯的含量为组合物中的脂肪酸的0.2％以下。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，
共轭不饱和脂肪酸的含量为组合物中的脂肪酸的0.001％～1.0％。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，
多元不饱和脂肪酸为选自由二十碳二烯酸、二高-γ-亚麻酸、米德酸、二十碳四烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸及二十二碳六烯酸组成的组中的至少一个。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，
组合物中的残留有机溶剂的总含量为5000ppm以下。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的含游离多元不饱和脂肪酸组合物，其中，
组合物中的碳原子数为18的二元以上的多元不饱和脂肪酸的含量为组合物的脂肪酸的2.0％以下。
8.一种含游离多元不饱和脂肪酸组合物的制造方法，其包括以下步骤：
准备包含至少一种碳原子数为20以上的多元不饱和脂肪酸的原料组合物的步骤；以及
对于包含所准备的原料组合物、低级醇、水及碱催化剂的反应液，在10℃以下的温度条件下进行水解处理。
9.根据权利要求8所述的制造方法，其中，
原料组合物中的多元不饱和脂肪酸为多元不饱和脂肪酸烷基酯。
10.根据权利要求8或9所述的制造方法，其中，所述制造方法还包括在水解处理后的反应液中添加用于停止水解反应的酸的步骤，添加酸后的反应液的pH为pH1.0～6.0。
11.根据权利要求8～10中任一项所述的制造方法，其中，
反应液中的低级醇的量相对于原料组合物中的脂肪酸为0.9当量～32.0当量。
12.根据权利要求8～11中任一项所述的制造方法，其中，
反应液中的低级醇的量相对于水以重量比计为0.20～8.20。
13.根据权利要求8～12中任一项所述的制造方法，其中，
反应液中的水的量相对于原料组合物中的脂肪酸为6.0当量～13.0当量。
14.根据权利要求8～13中任一项所述的制造方法，其中，
反应液中的碱催化剂的量相对于原料组合物中的脂肪酸为1.0当量～2.3当量。
15.根据权利要求8～14中任一项所述的制造方法，其中，
碱催化剂为选自由氢氧化钠及氢氧化钾组成的组中的至少一个。
16.根据权利要求8～15中任一项所述的制造方法，其中，
水解处理的温度条件为-20℃～10℃。
17.根据权利要求8～16中任一项所述的制造方法，其中，
原料组合物为来源于微生物原料的组合物。
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