CN107828886A

CN107828886A - Gbp2基因和/或gbp2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用

Info

Publication number: CN107828886A
Application number: CN201710961897.8A
Authority: CN
Inventors: 张瑜; 谭诗生; 聂春来
Original assignee: Guizhou Provincial Peoples Hospital
Current assignee: Guizhou Provincial Peoples Hospital
Priority date: 2017-10-16
Filing date: 2017-10-16
Publication date: 2018-03-23

Abstract

本发明公开的是GBP2基因和/或GBP2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用。还提供了检测GBP2基因和/或GBP2蛋白的产品在制备诊断乳腺癌的工具中的应用、一种诊断以GBP2蛋白过低表达和/或降低为特征的乳腺癌的方法。还提供了一种乳腺癌药物的筛选方法，可以通过在对乳腺癌细胞添加测试药物后或在对乳腺癌肿瘤模型动物施用测试药物后的某个时期测量GBP2基因或者GBP2蛋白的表达水平来测定乳腺癌药物抑制乳腺癌细胞转移的效果。本发明通过检测受试者组织中GBP2的表达水平，可以判断受试者是否患有乳腺癌、或者判断受试者乳腺癌细胞转移情况，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案，能够实现乳腺癌的早期诊断，降低乳腺癌的死亡率。

Description

GBP2基因和/或GBP2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用

技术领域

本发明涉及乳腺癌相关基因研究技术领域，具体是涉及GBP2基因和/或GBP2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。据国家癌症中心公布的最新统计数字显示，我国乳腺癌发病和死亡率高居女性癌症前列，近年来乳腺癌发病率正以每年3％的速度递增，是城市中死亡率增长最快的癌症，发病年龄也呈逐渐年轻化的趋势。因此，对乳腺癌的防治是我们面临的十分严峻的任务。目前，对乳腺癌的治疗主要以手术治疗为主，术后辅以局部或全身的放疗、化疗、内分泌治疗以及生物治疗等综合措施以提高生存率和延长生存时间，但仍有相当一部分患者因为乳腺癌细胞转移到其它重要器官如肺、骨和脑组织等而使治疗失败导致死亡，这也是乳腺癌死亡率居高不下的重要原因之一。既往研究显示上皮间充质转化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)是肿瘤转移的必需过程。但是最新的研究结果表明EMT并非乳腺癌细胞转移的关键因素。因此，深入了解和揭示乳腺癌转移的生物学机制，对乳腺癌进行针对性更强、达到更有效的治疗是降低乳腺癌死亡率的关键。

近年来，GBP家族因发现其在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭中起着重要作用而受到研究者的重视，但具体机制尚不十分清楚。GBP蛋白分子量为65-71kd，它们都属于大GTPase中的dynamin超家族，目前分别在人和小鼠中发现7和11个亚型。其中，GBP1和GBP2是两个重要的GBP蛋白。GBP1蛋白拥有GTPase，middle和GTPase effector活性区，其它GBP家族蛋白也拥有同样的活性区。GBP1被发现定位于胞浆，而GBP2在胞浆和某种囊泡膜成分上均有定位，但是这个膜成分不是线粒体，溶酶体等的细胞内成分。也有研究显示GBP2能定位在高尔基体上。GBP1的结构和生理特性研究得比较多，而GBP2的结构研究还在进行中。但是GBP2和GBP1的序列有75％的同源性，而且GBP2的活性功能域也显示和GBP1一致。这样，可以借鉴GBP1的结构来研究GBP2的生化特性。GBP家族蛋白最初作为干扰素诱导蛋白，被发现在自身免疫性疾病中起着重要作用。但是，GBP1蛋白被发现能抑制肿瘤细胞转移的作用。研究表明，它在上皮肿瘤细胞中通过抑制MMP-1的表达而抑制上皮肿瘤细胞转移，在内皮细胞中通过诱导integrin alpha 4的表达而抑制内皮细胞的转移，还有报道显示GBP1可抑制结肠癌细胞的转移等。近期，有研究表明GBP1和头颈部癌，卵巢癌差的预后相关，和乳腺癌的预后有部分关系，而且GBP1能促进食管癌细胞的迁移。然而，有关GBP1蛋白的异构体GBP2蛋白与肿瘤细胞转移关系却研究较少。虽然有研究表明GBP2能够介导非肿瘤和肿瘤细胞的延展和的生长。同时，也有研究表明GBP2在食道上皮鳞状细胞癌中表达量高，可能是一种食道上皮鳞状细胞癌的肿瘤标志物，而且其表达量与乳腺癌患者的预后有直接关系，但GBP2是否与抑制肿瘤细胞转移相关至今未见相关报道。在我们深入探索乳腺癌细胞转移调控机制的研究中，首次发现在转移性高的乳腺癌细胞中上调GBP2的表达能显著降低细胞的迁移和侵袭能力。因此，有必要探索GBP2在抑制乳腺癌转移中的作用机理，并且将其用于研究作为乳腺癌新的诊治靶点的应用。

发明内容

本发明解决的技术问题是，现有技术针对乳腺癌转移研究针对性不够强，不能达到有效的治疗乳腺癌和降低乳腺癌死亡率，进而提供了一种GBP2基因和/或GBP2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用。

本发明的技术方案是：

GBP2基因和/或GBP2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用。

进一步地，所述GBP2基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

进一步地，所述GBP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：

MAPEINLPGPMSLIDNTKGQLVVNPEALKILSAITQPVVVVAIVGLYRTGKSYLMNKLAGKKNGFSLGSTVKSHTKGIWMWCVPHPKKPEHTLVLLDTEGLGDIEKGDNENDSWIFALAILLSSTFVYNSMGTINQQAMDQLHYVTELTDRIKANSSPGNNSVDDSADFVSFFPAFVWTLRDFTLELEVDGEPITADDYLELSLKLRKGTDKKSKSFNDPRLCIRKFFPKRKCFVFDWPAPKKYLAHLEQLKEEELNPDFIEQVAEFCSYILSHSNVKTLSGGIPVNGPRLESLVLTYVNAISSGDLPCMENAVLALAQIENSAAVEKAIAHYEQQMGQKVQLPTETLQELLDLHRDSEREAIEVFMKNSFKDVDQMFQRKLGAQLEARRDDFCKQNSKASSDCCMALLQDIFGPLEEDVKQGTFSKPGGYRLFTQKLQELKNKYYQVPRKGIQAKEVLKKYLESKEDVADALLQTDQSLSEKEKAIEVERIKAESAEAAKKMLEEIQKKNEEMMEQKEKSYQEHVKQLTEKMERDRAQLMAEQEKTLALKLQEQERLLKEGFENESKRLQKDIWDIQMRSKSLEPICNIL

本发明还提供了检测GBP2基因和/或GBP2蛋白的产品在制备诊断乳腺癌的工具中的应用。

进一步地，所述产品包括：通过RT-PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品和通过实时定量PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品，或者用免疫方法检测GBP2蛋白的表达的产品；所述用RT-PCR诊断乳腺癌的产品至少包括一对特异扩增GBP2基因的引物；所述用实时定量PCR诊断乳腺癌的产品至少包括一对特异扩增GBP2基因的引物。

进一步地，所述检测GBP2基因或GBP2蛋白的产品可以是检测GBP2基因或GBP2蛋白的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。

更进一步地，所述用实时定量PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品至少包括的一对特异扩增GBP2基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

SEQ ID NO.3：Forward:5'-aaagatctgatggctccagagatcaacttgc-3'带BglII

SEQ ID NO.4：Reverse:5'-aaggtaccttagagtatgttacatattggctccaat-3'带KpnI

所述用RT-PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品至少包括的一对特异扩增GBP2基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

SEQ ID NO.3：Forward:5'-aaagatctgatggctccagagatcaacttgc-3'带BglII

SEQ ID NO.4：Reverse:5'-aaggtaccttagagtatgttacatattggctccaat-3'带KpnI

上面所述的特异扩增GBP2基因的引物，可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。

所述用免疫方法检测GBP2蛋白的表达进一步为检测全长GBP2和/或GBP2^K51A和/或GBP2^D103L/D108L的表达。

本发明的检测GBP2蛋白的产品包括特异性结合GBP2蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本发明的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。本发明的检测GBP2蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。

本发明还提供了一种诊断以GBP2蛋白过低表达和/或降低为特征的乳腺癌的方法，所述方法包括以下步骤：(i)测定患者样品中GBP2蛋白的表达水平；(ii)将GBP2蛋白表达水平与正常样品进行比较；(iii)将患者样品相对于正常样品的GBP2蛋白表达水平与乳腺癌的阳性或阴性诊断相关联，所述乳腺癌与GBP2蛋白过低表达和/或降低相关。

本发明的样品，可以使用例如来自活检受试者获得的组织样品或流体。例如组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液、或其级分或经过处理的材料。

在本发明的具体实施方案中，所述样品来自受试者的组织。

本发明还提供了一种乳腺癌药物的筛选方法，可以通过在对乳腺癌细胞添加测试药物后或在对乳腺癌肿瘤模型动物施用测试药物后的某个时期测量GBP2基因或者GBP2蛋白的表达水平来测定乳腺癌药物抑制乳腺癌细胞转移的效果。更具体地说，当GBP2基因或者GBP2蛋白的表达水平在添加或施用测试药物后升高或者恢复正常水平时，可选择该药物作为抑制乳腺癌细胞转移的治疗药物。

本发明的有益效果：

本发明首次发现了GBP2基因表达与乳腺癌细胞转移相关，GBP2蛋白在正常的乳腺组织中表达量高，而且GBP2在转移性强的乳腺癌细胞中表达量低，GBP2蛋白的过表达抑制乳腺癌细胞转移能力，通过检测受试者组织中GBP2的表达水平，可以判断受试者是否患有乳腺癌、或者判断受试者乳腺癌细胞转移情况，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案，能够实现乳腺癌的早期诊断，降低乳腺癌的死亡率。

附图说明

图1是乳腺癌组织中GBP2表达量与正常乳腺组织中GBP2表达量比较图。

其中，A.免疫组化检测GBP2在人正常乳腺和肿瘤组织中的表达；B.免疫组化检测Ki-67在正常乳腺和肿瘤组织中的表达；C,D.统计结果的显示。(n＝3,mean±S.D.**,P<0.01)。

图2是GBP2和GBP1在迁移性强的乳腺癌细胞中表达结果对比图。

图3是GBP2表达抑制乳腺癌细胞的迁移结果图。

其中，A.Flag-GBP2表达抑制MDA-MB-231和MDA-MB-436的转移和侵袭能力。(n＝3,mean±S.D.*,P<0.05)；B.Flag-GBP2表达没有诱导细胞的死亡；C.Flag-GBP1表达对MDA-MB-231和MDA-MB-436的转移和侵袭能力没有明显影响；D.Flag-GBP1表达没有诱导细胞的死亡；E.Flag-GBP2或者Flag-GBP1以及Drp1在细胞中的表达；F.Flag-GBP2没有诱导caspase-3在MDA-MB-231中的激活。

具体实施方式

下面结合具体实施例来对本发明进行更进一步详细的说明：

GBP2基因和/或GBP2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用。

GBP2基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

GBP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：

检测GBP2基因和/或GBP2蛋白的产品在制备诊断乳腺癌的工具中的应用。

所述产品包括：通过RT-PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品和通过实时定量PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品，以及用免疫方法检测GBP2蛋白的表达的产品；所述用RT-PCR诊断乳腺癌的产品至少包括一对特异扩增GBP2基因的引物；所述用实时定量PCR诊断乳腺癌的产品至少包括一对特异扩增GBP2基因的引物。

所述检测GBP2基因或GBP2蛋白的产品可以是检测GBP2基因或GBP2蛋白的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。

所述用实时定量PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品至少包括的一对特异扩增GBP2基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

SEQ ID NO.3：Forward:5'-aaagatctgatggctccagagatcaacttgc-3'带BglII

SEQ ID NO.4：Reverse:5'-aaggtaccttagagtatgttacatattggctccaat-3'带KpnI

SEQ ID NO.3：Forward:5'-aaagatctgatggctccagagatcaacttgc-3'带BglII

SEQ ID NO.4：Reverse:5'-aaggtaccttagagtatgttacatattggctccaat-3'带KpnI

上面所述的特异扩增GBP2基因的引物，可以通过通过化学合成来制备。

所述用免疫方法检测GBP2蛋白的表达是检测全长GBP2和/或GBP2^K51A和/或GBP2^D103L/D108L的表达。

本发明的检测GBP2蛋白的产品包括特异性结合GBP2蛋白的抗体，抗体通过本领域技术人员公知的方法来获得。

诊断以GBP2蛋白过低表达和/或降低为特征的乳腺癌的方法，包括以下步骤：(i)测定患者样品中GBP2蛋白的表达水平；(ii)将GBP2蛋白表达水平与正常样品进行比较；(iii)将患者样品相对于正常样品的GBP2蛋白表达水平与乳腺癌的阳性或阴性诊断相关联，所述乳腺癌与GBP2蛋白过低表达和/或降低相关。

本发明的样品来自受试者的组织。

相关实验及数据：

实验模型：乳腺癌细胞系(高迁移性乳腺癌细胞、低迁移性乳腺癌细胞、正常乳腺细胞)、实验动物小鼠和临床样本。

实验方法：细胞生物学、分子生物学以及生物物理等研究方法(如免疫荧光、RNAi技术、激光共聚焦技术)。

1.分析GBP2蛋白表达下的低转移性乳腺癌细胞(如MCF-7)、转移性乳腺癌细胞(如MDA-MB-231和MDAMB-436)的亚细胞(如线粒体、溶酶体或胞质等)水平的分布与定位；上调或者RNAi GBP2的表达，比较研究和分析细胞中线粒体的融合-分裂动态变化特征和差异，如线粒体的数量、长度、粗细、离细胞核的距离和融合速率等。

乳腺癌样本的收集和原代肿瘤细胞的培养

(1)临床标本收集，病理分析，标本的修剪，保存，固定，包埋，免疫组织化学染色，相关性/显著性统计分析：所有临床肿瘤标本的收集，及病理分析均在医院进行，所有标本均经过严格的分类，原则上标本一分为二，一份迅速冻存与液氮，另一半进行固定，包埋和免疫组织化学分析。免疫组化染色结果[按照9分制：染色强度(分为0–3级:阴性＝0,弱＝1,中＝2,强＝3)×细胞染色百分百(同样分为0-3级：0,1＝1–25％,2＝26–50％,3＝51–100％)]由两位经验丰富的实验技师来判定，并进行最终的相关性和显著性等统计分析。

(2)原代乳腺癌肿瘤细胞的培养：

原代肿瘤细胞按文献报道的方法(Breast Cancer Res,16(2014))，利用肿瘤细胞分离试剂盒进行。得到的原代乳腺癌细胞可使用免疫组化，实时定量PCR等方法检测ER，PR等相关乳腺癌标志物和Ki-67等肿瘤标志物的表达。

2.动物实验

通过表达或者干扰GBP2在乳腺癌细胞中的表达，利用这些处理过的肿瘤细胞株接种小鼠，在小鼠模型中研究是否GBP2表达变化会影响肿瘤的生长和转移。比较表达外源GBP2蛋白的与表达空载体的乳腺癌细胞(如MDA-MB-231)在小鼠体内形成的肿瘤肺转移结节数，为GBP2蛋白在动物整体水平调控乳腺癌细胞的转移提供实验证据。

(1)乳腺癌原位移植动物模型

接种到SCID小鼠乳腺脂肪垫形成原位瘤，观察其成瘤能力，并在30天左右，解剖小鼠，分析原位肿瘤生长曲线、组织病理分析、GBP2、Drp1、ER、PR、Her2等蛋白染色(表达量)、肺中的转移结节的数量和大小的差别等。

(2)乳腺癌细胞株动物模型

表达或者干扰GBP2在乳腺癌细胞中的表达，利用这些处理过的肿瘤细胞株接种小鼠，比较表达外源GBP2蛋白的与表达空载体的乳腺癌细胞(如MDA-MB-231)在小鼠体内形成的肿瘤肺转移结节数，同时比较RNAi Drp1表达的乳腺癌细胞在小鼠体内形成的肿瘤肺转移结节数，肿瘤生长曲线、组织病理分析、微血管密度分析、凋亡(cleaved caspase-3染色等)，GBP2、Drp1等蛋白染色(表达量)等。

3.利用医院的样本库，收集病人不同时期乳腺癌和正常乳腺的临床样本，通过免疫组化等方法分析原位肿瘤、癌周组织、正常乳腺组织以及转移肿瘤中的GBP2的表达，以及相应的乳腺癌标志物(如ER，PR，Her2等)和随访临床预后的关系。所有样本得到和处理均符合伦理委员会要求。同时也利用公司的组织芯片来进行验证。

结果：

①GBP2在乳腺癌组织和转移性强的肿瘤细胞中低表达

通过收集一些病人的乳腺癌和正常组织样本，发现GBP2在人正常乳腺组织中高表达，而在乳腺癌组织中低表达(图1)。

我们在细胞上检测GBP2的表达。选用的MCF-7、T47D、ZR-75-1是ER+/PR+的低迁移性乳腺癌细胞(Biochem Bioph Res Co,(2016)478:1617-1623),而MDA-MB-231、MDA-MB-436、SUM149是ER-/PR-/Her2-的迁移性强的三阴乳腺癌细胞(J Natl Cancer Inst,(2010)102:1496-1512；Oncogene(2011)30:770–780)。同时MCF10A也是ER-/PR-/Her2-的正常乳腺细胞(Biochem Bioph Res Co,(2016)478:1617-1623)。

我们在细胞水平上检测发现，GBP2在转移性强的乳腺癌细胞中低表达，转移性弱的乳腺癌细胞中高表达。GBP1作为对照(图2)。最近研究显示GBP1在转移性强的乳腺癌细胞中表达量高(Biochem Bioph Res Co,(2016)478:1617-1623)。这些结果显示GBP2和GBP1可能在乳腺癌中起着不一样的作用。

②GBP2表达抑制了乳腺癌细胞的转移

因为转移性强的乳腺癌细胞中GBP2表达量低。因此，我们高表达GBP2进而观察其对乳腺癌转移的影响。我们以MDA-MB-231和MDA-MB-436为模型。我们发现GBP2的表达明显抑制了乳腺癌细胞的转移。同样的情况下，GBP1的表达对细胞的转移没有明显作用(图3)。

SEQ ID NO.1：

SEQ ID NO.2：

SEQ ID NO.3：

Forward:5'-aaagatctgatggctccagagatcaacttgc-3'带BglII

SEQ ID NO.4：

Reverse:5'-aaggtaccttagagtatgttacatattggctccaat-3'带KpnI

序列表

<110> 贵州省人民医院

<120> GBP2基因和或GBP2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用

<130> 无

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 4148

<212> DNA

<213> A

<220>

<221> mRNA

<222> (1)..(4148)

<400> 1

ccttttatgg tgaatgagtc actgctttag ttgatacttt gtttcatatt agtgcatttc 60

tttgcagagg ttacctcttt ttcttgtctc tcgtcaggtc tctgacattg acagagcctg 120

gacgttggag gaagccccag gacgttggag gggtaaagta aaagtccaca gttaccgtga 180

gagaaaaaag agggagaaag cagtgcagcc aaactcggaa gaaaagagag gaggaaaagg 240

actcgacttt cacattggaa caaccttctt tccagtgcta aaggatctct gatctgggga 300

acaacaccct ggacatggct ccagagatca acttgccggg cccaatgagc ctcattgata 360

acactaaagg gcagctggtg gtgaatccag aagctctgaa gatcctatct gcaattacgc 420

agcctgtggt ggtggtggcg attgtgggcc tctatcgcac aggcaaatcc tacctgatga 480

acaagctggc tgggaagaaa aacggcttct ctctaggctc cacagtgaag tctcacacca 540

agggaatctg gatgtggtgt gtgcctcatc ccaagaagcc agaacacacc ctagttctgc 600

tcgacactga gggcctggga gatatagaga agggtgacaa tgagaatgac tcctggatct 660

ttgccttggc catcctcctg agcagcacct tcgtgtacaa tagcatggga accatcaacc 720

agcaggccat ggaccaactt cactatgtga cagagctgac agatcgaatc aaggcaaact 780

cctcacctgg taacaattct gtagacgact cagctgactt tgtgagcttt tttccagcat 840

ttgtgtggac tctcagagat ttcaccctgg aactggaagt agatggagaa cccatcactg 900

ctgatgacta cttggagctt tcgctaaagc taagaaaagg tactgataag aaaagtaaaa 960

gctttaatga tcctcggttg tgcatccgaa agttcttccc caagaggaag tgcttcgtct 1020

tcgattggcc cgctcctaag aagtaccttg ctcacctaga gcagctaaag gaggaagagc 1080

tgaaccctga tttcatagaa caagttgcag aattttgttc ctacatcctc agccattcca 1140

atgtcaagac tctttcaggt ggcattccag tcaatgggcc tcgtctagag agcctggtgc 1200

tgacctacgt caatgccatc agcagtgggg atctaccctg catggagaac gcagtcctgg 1260

ccttggccca gatagagaac tcagccgcag tggaaaaggc tattgcccac tatgaacagc 1320

agatgggcca gaaggtgcag ctgcccacgg aaaccctcca ggagctgctg gacctgcaca 1380

gggacagtga gagagaggcc attgaagtct tcatgaagaa ctctttcaag gatgtggacc 1440

aaatgttcca gaggaaatta ggggcccagt tggaagcaag gcgagatgac ttttgtaagc 1500

agaattccaa agcatcatca gattgttgca tggctttact tcaggatata tttggccctt 1560

tagaagaaga tgtcaagcag ggaacatttt ctaaaccagg aggttaccgt ctctttactc 1620

agaagctgca ggagctgaag aataagtact accaggtgcc aaggaagggg atacaggcca 1680

aagaggtgct gaaaaaatat ttggagtcca aggaggatgt ggctgatgca cttctacaga 1740

ctgatcagtc actctcagaa aaggaaaaag cgattgaagt ggaacgtata aaggctgaat 1800

ctgcagaagc tgcaaagaaa atgttggagg aaatacaaaa gaagaatgag gagatgatgg 1860

aacagaaaga gaagagttat caggaacatg tgaaacaatt gactgagaag atggagaggg 1920

acagggccca gttaatggca gagcaagaga agaccctcgc tcttaaactt caggaacagg 1980

aacgccttct caaggaggga ttcgagaatg agagcaagag acttcaaaaa gacatatggg 2040

atatccagat gagaagcaaa tcattggagc caatatgtaa catactctaa aagtccaagg 2100

agcaaaattt gcctgtccag ctccctctcc ccaagaaaca acatgaatga gcaacttcag 2160

agtgtcaaac aactgccatt aaacttaact caaaatcatg atgcatgcat ttttgttgaa 2220

ccataaagtt tgcaaagtaa aggttaagta tgaggtcaat gttttaccta cagagcaatt 2280

caactcatgc ttatttatag tactaacttt taatatgatc tttaactaaa tcctatattt 2340

gaaatcatac acaaggactc aagagagata ttgtgtaact aggatgcatt ttccaatgag 2400

atatcttgca gtttctgttc tgggtagatt tttttctctc atatgcacca cccttactgt 2460

atattcagtc ctatactctt attcagggat ttaactatgg tcgtagcata gggctgaagt 2520

gttgtgaata tgatgaaaat gtgatgagac caaacaaacc atggggcaca gtagagcatc 2580

actcctgcca agtggtcttt gtatggcatg ctggctgcaa ataaaggaga tctgggacac 2640

ttaactaggc ttttaaagta cagacagtgc acagttctca tttgggtgga ggctgcatga 2700

tctgtgggca ctagcagaga aagtggttgc ctctgtgcag aatgcattta tgagtagagg 2760

ctccaccttc tctgtccatg taaaccctct aggtaattac tgccccattc ccaggccacc 2820

tagatctctc ttctctagtc tcccttagtc ttttctcttt cctgaagttt agaaaataac 2880

ttctacaatc acagaaagga aagctttaac tcaaactcaa attactttcc attcttctga 2940

ggaccaggac tataatccta taaagcctaa aacttgactg catttttctc tctgctcctc 3000

tgctatgaca ttatatcctc aaagctactc agggtaaatg acttactaaa aaaaaaaaaa 3060

tgacagattg aaaaatcaag aataattcat taatacaaaa cattatccta ctacaattgt 3120

ttcaggatgt gtattattca gagttcttca tggcaaataa caatctgctc agcaatttaa 3180

gtaaaaagta atttactttt taataccatt aggttgcaca ccgatgctcc agaattgtga 3240

gggagccata ctctacagct attccaccga ggataatact accattgtaa aggcatctca 3300

cgggaaaaca acacagctac catgaaccag caccatgatc tctggatgaa atgctggaag 3360

cttctgcagt gtcagctatg agtaaatgga tgccaccacc ttcacatttt cagtaaacaa 3420

atactcccct accccatgaa aagttgcatc tttgagctgc tcacatctcc agctaagcct 3480

cacaaaagtc aatctgcagg gaagaatcta aatcatatgc ctacccatgg gaaagtctga 3540

gaattagagt atttttgtct tctacttttg gaggaagaaa ctaataacgt gggaaatttt 3600

cctgtatgtt tagtcaacca gtttttccat gcagatgtat ggagataaat cttatagtag 3660

gaataaccta agacttgagt tagtattttt gtgtacatca gatacaacac tcttctcatc 3720

ttttttgtca ttatttttca atgttgtttt aatctttcca ctgttgtttc atgtcatgca 3780

ctttgttaat attctttaag ttattcttag tttttaacaa tgatacttaa gaaagactta 3840

ataggactat agaataggta ctccctattc cccaaccctg ggaacacaat ttaacatatt 3900

agttcatttg tatttaagat ctatcttgtt tatgcctcag tttagttatt gctcttacct 3960

ttcaaacagt tagtattttg tatctagttc tgtgaaagca aaaagcaact ttattctttc 4020

ttacaattcc ccttttactt aatcggaaca tttctttcct gtttgttcat tagtcactct 4080

cagataaatg aatagtctct ttttctaaaa aaaaaaataa catttgacct aaaaaaaaaa 4140

aaaaaaaa 4148

<210> 2

<211> 591

<212> PRT

<213> A

<220>

<221> UNSURE

<222> (1)..(591)

<400> 2

Met Ala Pro Glu Ile Asn Leu Pro Gly Pro Met Ser Leu Ile Asp Asn

1 5 10 15

Thr Lys Gly Gln Leu Val Val Asn Pro Glu Ala Leu Lys Ile Leu Ser

20 25 30

Ala Ile Thr Gln Pro Val Val Val Val Ala Ile Val Gly Leu Tyr Arg

35 40 45

Thr Gly Lys Ser Tyr Leu Met Asn Lys Leu Ala Gly Lys Lys Asn Gly

50 55 60

Phe Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Ser His Thr Lys Gly Ile Trp Met

65 70 75 80

Trp Cys Val Pro His Pro Lys Lys Pro Glu His Thr Leu Val Leu Leu

85 90 95

Asp Thr Glu Gly Leu Gly Asp Ile Glu Lys Gly Asp Asn Glu Asn Asp

100 105 110

Ser Trp Ile Phe Ala Leu Ala Ile Leu Leu Ser Ser Thr Phe Val Tyr

115 120 125

Asn Ser Met Gly Thr Ile Asn Gln Gln Ala Met Asp Gln Leu His Tyr

130 135 140

Val Thr Glu Leu Thr Asp Arg Ile Lys Ala Asn Ser Ser Pro Gly Asn

145 150 155 160

Asn Ser Val Asp Asp Ser Ala Asp Phe Val Ser Phe Phe Pro Ala Phe

165 170 175

Val Trp Thr Leu Arg Asp Phe Thr Leu Glu Leu Glu Val Asp Gly Glu

180 185 190

Pro Ile Thr Ala Asp Asp Tyr Leu Glu Leu Ser Leu Lys Leu Arg Lys

195 200 205

Gly Thr Asp Lys Lys Ser Lys Ser Phe Asn Asp Pro Arg Leu Cys Ile

210 215 220

Arg Lys Phe Phe Pro Lys Arg Lys Cys Phe Val Phe Asp Trp Pro Ala

225 230 235 240

Pro Lys Lys Tyr Leu Ala His Leu Glu Gln Leu Lys Glu Glu Glu Leu

245 250 255

Asn Pro Asp Phe Ile Glu Gln Val Ala Glu Phe Cys Ser Tyr Ile Leu

260 265 270

Ser His Ser Asn Val Lys Thr Leu Ser Gly Gly Ile Pro Val Asn Gly

275 280 285

Pro Arg Leu Glu Ser Leu Val Leu Thr Tyr Val Asn Ala Ile Ser Ser

290 295 300

Gly Asp Leu Pro Cys Met Glu Asn Ala Val Leu Ala Leu Ala Gln Ile

305 310 315 320

Glu Asn Ser Ala Ala Val Glu Lys Ala Ile Ala His Tyr Glu Gln Gln

325 330 335

Met Gly Gln Lys Val Gln Leu Pro Thr Glu Thr Leu Gln Glu Leu Leu

340 345 350

Asp Leu His Arg Asp Ser Glu Arg Glu Ala Ile Glu Val Phe Met Lys

355 360 365

Asn Ser Phe Lys Asp Val Asp Gln Met Phe Gln Arg Lys Leu Gly Ala

370 375 380

Gln Leu Glu Ala Arg Arg Asp Asp Phe Cys Lys Gln Asn Ser Lys Ala

385 390 395 400

Ser Ser Asp Cys Cys Met Ala Leu Leu Gln Asp Ile Phe Gly Pro Leu

405 410 415

Glu Glu Asp Val Lys Gln Gly Thr Phe Ser Lys Pro Gly Gly Tyr Arg

420 425 430

Leu Phe Thr Gln Lys Leu Gln Glu Leu Lys Asn Lys Tyr Tyr Gln Val

435 440 445

Pro Arg Lys Gly Ile Gln Ala Lys Glu Val Leu Lys Lys Tyr Leu Glu

450 455 460

Ser Lys Glu Asp Val Ala Asp Ala Leu Leu Gln Thr Asp Gln Ser Leu

465 470 475 480

Ser Glu Lys Glu Lys Ala Ile Glu Val Glu Arg Ile Lys Ala Glu Ser

485 490 495

Ala Glu Ala Ala Lys Lys Met Leu Glu Glu Ile Gln Lys Lys Asn Glu

500 505 510

Glu Met Met Glu Gln Lys Glu Lys Ser Tyr Gln Glu His Val Lys Gln

515 520 525

Leu Thr Glu Lys Met Glu Arg Asp Arg Ala Gln Leu Met Ala Glu Gln

530 535 540

Glu Lys Thr Leu Ala Leu Lys Leu Gln Glu Gln Glu Arg Leu Leu Lys

545 550 555 560

Glu Gly Phe Glu Asn Glu Ser Lys Arg Leu Gln Lys Asp Ile Trp Asp

565 570 575

Ile Gln Met Arg Ser Lys Ser Leu Glu Pro Ile Cys Asn Ile Leu

580 585 590

<210> 3

<211> 31

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Claims

1.GBP2基因和/或GBP2蛋白作为乳腺癌新的诊治靶点的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述GBP2基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述GBP2蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

4.检测GBP2基因和/或GBP2蛋白的产品在制备诊断乳腺癌的工具中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品和通过实时定量PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品，或者用免疫方法检测GBP2蛋白的表达的产品；所述用RT-PCR诊断乳腺癌的产品至少包括一对特异扩增GBP2基因的引物；所述用实时定量PCR诊断乳腺癌的产品至少包括一对特异扩增GBP2基因的引物。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品至少包括的一对特异扩增GBP2基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述用RT-PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品至少包括的一对特异扩增GBP2基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述用RT-PCR检测GBP2基因表达以诊断乳腺癌的产品为一对特异扩增GBP2基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述用免疫方法检测GBP2蛋白的表达进一步为检测全长GBP2和/或GBP2^K51A和/或GBP2^D103L/D108L的表达。

10.一种诊断以GBP2蛋白过低表达和/或降低为特征的乳腺癌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(i)测定患者样品中GBP2蛋白的表达水平；(ii)将GBP2蛋白表达水平与正常样品进行比较；(iii)将患者样品相对于正常样品的GBP2蛋白表达水平与乳腺癌的阳性或阴性诊断相关联，所述乳腺癌与GBP2蛋白过低表达和/或降低相关。