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CN107787226A - 药物组合 - Google Patents

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CN107787226A
CN107787226A CN201680030674.3A CN201680030674A CN107787226A CN 107787226 A CN107787226 A CN 107787226A CN 201680030674 A CN201680030674 A CN 201680030674A CN 107787226 A CN107787226 A CN 107787226A
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pyridine
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Abstract

一种药物组合，包括N‑(5‑氰基‑4‑((2‑甲氧基乙基)氨基)吡啶‑2‑基)‑7‑甲酰基‑6‑((4‑甲基‑2‑氧代哌嗪‑1‑基)甲基)‑3,4‑二氢‑1,8‑萘啶‑1(2H)‑甲酰胺或其药学上可接受盐，至少一种如本文所定义的活性成分或其药学上可接受盐，以及可任选的药学上可接受载体，用于同时或依序施用；该组合在治疗增殖性疾病中的应用；治疗患有增殖性疾病的对象的方法，包括施用治疗有效量的该组合。

Description

药物组合
技术领域
本发明涉及药物组合，包括(i)游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和
(ii)至少一种本文所定义的游离形式或药学上可接受盐形式的其它活性成分，以及可任选的至少一种药学上可接受载体；该组合在治疗或预防增殖性疾病中的应用，如癌症尤其是肝癌；治疗患有增殖性疾病如癌症、尤其是肝癌的对象的方法，包括施用治疗有效量的该组合。
发明背景
尽管有多种治疗选择用于癌症患者，仍需要有效且安全的治疗剂以及能施用于有效长期癌症治疗的新联合疗法。
肝癌或肝脏肿瘤被分类为原发性肝癌(即在肝组织中形成的癌)和继发性肝癌(即从身体另一部分扩散到肝的癌)。根据美国国立卫生研究院国家癌症研究所的数据，2014年美国肝癌和肝内胆管癌的估计新病例数目和死亡数目分别为33,190和23,000例。重要的是，诊断出肝癌和肝内胆管癌后存活5年或更长的百分比仅约16％。
目前发现游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和至少一种本文所定义其它活性成分的组合在体外细胞增殖试验中显示出协同组合活性，如实验部分所示，并可能因此有效用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
基于实验部分所示的协同组合活性，预期组合
(i)游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式，
会在增殖性疾病，尤其是癌症，更特定是肝癌的治疗中引起出乎意料的改进。这一出乎意料的改进将使得(例如)各化合物所需剂量减少、引起例如化合物在治疗中的副作用减少或长期临床有效性提高。
当同时或依序施用游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和至少一种本文所定义的其它活性成分时，其以协同方式相互作用从而强力抑制细胞增殖，并因此在肝癌中具有意想不到的有效性。这一出乎意料的协同反应将使得(例如)各化合物所需剂量减少、引起例如化合物在治疗中的副作用减少或长期临床有效性提高。
发明内容
本发明提供药物组合和治疗方法，其可用于抑制肿瘤细胞生长和治疗增殖性疾病，尤其是癌症，更特定是肝癌。
本发明提供包括以下的药物组合：
(i)游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺，和
(ii)游离形式或药学上可接受盐形式的至少一种本文所定义的其它活性成分，以及可任选的至少一种药学上可接受载体。
在本发明组合中，(ii)中的活性成分选自下组：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
本发明进一步涉及组合制剂或药物组合物，包括：
(i)游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)游离形式或药学上可接受盐形式7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式，
以及可任选的至少一种药学上可接受载体。在一个实施方式中，本发明涉及组合制剂，包括：(1)一个或多个单位剂型的本文所定义的组合伴侣(i)，和(2)一个或多个单位剂型的本文所定义的组合伴侣(ii)。
本发明特定涉及药物组合，包括：
(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式，
以及可任选的至少一种药学上可接受载体，用于在需要的对象中治疗或预防增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
本发明还涉及药物组合，包括：
(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式，
以及可任选的至少一种药学上可接受载体，用于制造在需要的对象中治疗或预防增殖性疾病如癌症尤其是肝癌的药物组合物或药剂。
本发明进一步涉及以下应用：
(i)游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式，
在制造用于治疗或预防增殖性疾病如癌症尤其是肝癌的药物组合物或药剂中的应用。
本发明涉及在需要的对象中治疗增殖性疾病如癌症尤其是肝癌的方法，包括向所述对象同时或依序施用治疗有效量的
(i)游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺，
联合
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式，
以及可任选的至少一种药学上可接受载体。
在一个实施方式中，本发明涉及在需要的对象中治疗增殖性疾病如癌症尤其是肝癌的方法，包括同时或依序施用治疗有效量的
(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐或游离形式，
联合
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的单磷酸盐；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的琥珀酸盐；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的盐酸盐。
本发明进一步提供商业包装，包括含以下的药物组合：
(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式，
以及其同时或依序施用的说明书，用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
以上组合还被提供用作药剂，具体用于治疗或预防增殖性疾病如癌症尤其是肝癌。
附图简要说明
图1.用一定浓度范围的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(缩写为CPi)和3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲单磷酸盐(缩写为CPii-a)处理7天后，HUH7细胞的生长抑制。
图2.用一定浓度范围的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(缩写为CPi)和(R)-8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺(缩写为CPii-b)处理7天后，HUH7细胞的生长抑制。
图3.用一定浓度范围的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(缩写为CPi)和7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺琥珀酸盐(缩写为CPii-d)处理7天后，HUH7细胞的生长抑制。
图4.用一定浓度范围的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(缩写为CPi)和(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺(缩写为CPii-e)处理7天后，HUH7细胞的生长抑制。
图5.用一定浓度范围的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(缩写为CPi)和4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺盐酸盐(缩写为CPii-f)处理3天后，HUH7细胞的生长抑制。
发明详述
本发明提供药物组合，包括：
(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和
(ii)至少一种本文所定义的其它活性成分的游离形式或药学上可接受盐形式，以及可任选的至少一种药学上可接受载体。
因此，包括(i)游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和(ii)至少一种本文所定义的其它活性成分或其药学上可接受盐以及可任选地至少一种药学上可接受载体的药物组合在本文称为“本发明组合”。该术语也用于指包括以下作为唯一活性成分的药物组合：(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(ii)一种本文所定义的其它活性成分。
本发明提供药物组合，包括：
(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式，
以及可任选的至少一种药学上可接受载体。
本发明涉及用作药剂的这类组合，具体用于治疗或预防增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
如本文所定义的本发明组合能有效延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。具体地，如本文所定义的组合能例如在增殖性疾病治疗中引起相较单一疗法出乎意料的改善，尤其是癌症，更特定是肝癌。与仅应用本发明组合所用活性成分之一的单一疗法相比，这一出乎意料的改善使得例如：活性成分(i)[即N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式]的所需剂量或给药频率减少；如本文所定义的活性成分(ii)所需剂量或给药频率减少；如本文所定义的活性成分(i)和(ii)所需剂量或给药频率减少；如本文所定义的活性成分(i)、(ii)或两者的副作用减少；生活质量提高或发病率降低；或如本文所定义的活性成分(i)、(ii)或两者的长期临床有效性提高。优选地，本发明组合提供协同治疗效果，如涉及缓解、延迟增殖性疾病的发展或抑制增殖性疾病的症状，如癌症尤其是肝癌。
除非另有明确说明，本文所用一般术语用以下含义定义：
术语“包含”和“包括”在本文中以其开放、非限制性含义使用，除非另有说明。
在描述本发明的上下文(尤其是下列权利要求的上下文)中，术语“一个”、“一种”、“所述”及类似提及被解释为涵盖单数和复数，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。当复数形式被用于化合物、盐等时，也用于指单个化合物、盐等。
本文所用的术语“组合”或“药物组合”指采用一个单位剂型(如胶囊、片剂或小袋)的固定组合、非固定组合或用于联合施用的成套药盒，其中游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺[即活性成分(i)]和至少一种本文所定义的其它活性成分[即活性成分(ii)]或其药学上可接受盐可同时施用、在同一时间独立施用或一定时间间隔内分开施用，使得组合伴侣显示协作如协同效应。术语“固定组合”指活性成分即本文所定义的活性成分(i)和一种或多种组合伴侣[即本文所定义的活性成分(ii)]可以单一实体或单位剂型同时施用于患者。术语“非固定组合”指活性成分即本文所定义的活性成分(i)和一种或多种组合伴侣[即本文所定义的活性成分(ii)]作为分开的实体同时或依序施用于患者，而没有特定时间限制，其中该施用在患者体内提供治疗有效水平的两种化合物。这应用于两种活性成分的组合，也用于鸡尾酒疗法，如施用三种或更多活性成分。
术语“组合制剂”在本文中定义为尤其指“成套药盒”，在此意义上，本文所定义的组合伴侣[即活性成分(i)和活性成分(ii)]同时或在不同时间点能独立给药或采用组合伴侣[如活性成分(i)和活性成分(ii)]量相异的不同组合给药。例如，成套药盒部分能随后同时施用或按时间顺序交叉施用，后者即在不同时间点且就成套药盒任何部分而言时间间隔相同或不同。在组合制剂中施用的一种组合伴侣与另一种组合伴侣的总量之比可变，如为了适应待治疗患者亚群需求或单个患者需求。
术语“至少一种”涉及活性成分(ii)或“其它活性成分”时，指1、2、3或4种。优选一种。
根据本发明，合适的组合伴侣(ii)[即本文也称为活性成分(ii)]包括：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲，具有式
(描述于WO2006/000420的实施例145)的游离形式或药学上可接受盐形式，特别是单磷酸盐形式(描述于WO2011/071821的实施例3)；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺，具有式
(描述于PCT/IB2015/050345的实施例1)的游离形式或药学上可接受盐形式，特别是游离形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺，具有式
(描述于WO2010/020675的实施例74)，也具有以下化学名：7-环戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺；游离形式或药学上可接受盐形式，特别是琥珀酸盐形式(描述于WO2012/064805)；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺，具有式
(描述于WO2010/029082的实施例15)的游离形式或药学上可接受盐形式，特别是游离形式；
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺，具有式
(描述于WO2007/084786的实施例10)，也具有以下化学名：
5-(2,6-二吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺，或
5-(2,6-二-4-吗啉-4-嘧啶)-4-三氟甲基吡啶-2-胺，或
5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺，或
5-(2,6-二-4-吗啉-4-嘧啶)–4-(三氟甲基)-2-吡啶胺；
的游离形式或药学上可接受盐形式，特别是其盐酸盐(描述于WO2012/044727)。
上述化合物8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺可为外消旋物形式、(R)型或(S)型。在一个实施方式中，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是外消旋物。在一个实施方式中，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是如下所示的(R)型：
在一个实施方式中，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是如下所示的(S)型：
上面引用的各参考文献通过引用纳入本文。
术语“药物组合物”在本文中定义为指混合物或溶液，包含至少一种待施用于对象如哺乳动物或人的活性成分或治疗剂，用于预防或治疗影响哺乳动物或人的特定疾病或病症，特别是增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
术语“药学上可接受”在本文中定义为指在合理医学判断范围内适于接触对象如哺乳动物或人体组织的那些化合物、材料、组合物和/或剂型，而没有过度毒性、刺激、过敏反应和其它问题并发症，并具有合理的效益/风险比。
术语“药物”、“活性物质”、“活性成分”、“活性剂”、“药剂”应理解为指游离形式或药学上可接受盐形式的化合物，特别是本文给出的化合物。本文的术语“活性成分(i)”也称为“组合伴侣(i)”，涉及游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺。类似地，术语“活性成分(ii)”也称为“组合伴侣(ii)”，并指以下任意一种：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
本文所用的术语“共施用”或“联合施用”定义成涵盖将选定活性成分施用于需要的单一对象(如患者)，且意在包括其中药剂不必定通过同一施用途径或同时施用的治疗方案。
本文所用的术语“治疗”、“处理”、“对待”或“疗法”包括缓解、减少或改善对象中至少一种症状或实现疾病进展延迟的治疗。例如，治疗可以是减少一种或数种疾病症状或完全消除疾病，如癌症。在本发明含义范围内，术语“治疗”也指阻滞、延迟发生(即疾病临床表现前的阶段)和/或降低疾病发展或恶化的风险。本文所用的术语“保护”指在对象如哺乳动物或人中预防、延迟疾病的发展或继续或恶化或者治疗疾病，或在适当时指全部。
本文所用的术语“预防”、“防止”或“阻止”包括预防与所防止状态、疾病或紊乱相关或者由其导致的至少一种症状。
本文所用的术语“联合治疗有效量”指当(采用按时间顺序交叉方式，尤其是顺序特异方式)分开给予温血动物特别是待治疗的人时，治疗剂显示出(优选协同)相互作用(联合治疗效果)的量。可通过跟踪血液水平显示2种化合物在至少某些时间间隔内存在于待治疗人的血液中来确定情况是否如此。
术语治疗剂组合的“药学上有效量”是相较用组合治疗的基线可观察征兆和症状，足以提供可观察改善的量。
本文所用的术语“协同效应”指至少2种治疗剂即本文所定义活性成分(i)和至少一种本文所定义活性成分(ii)的效果，高于各药物自身施用效果的简单叠加。例如，所述效果能显示增殖性疾病如癌症尤其是肝癌或其症状的症状进展。可如实施例所示计算协同效应。类似地，“协同有效量”指获得协同效应所需的量。
本文所用的术语“对象”或“患者”包括动物，其能患有或受增殖性疾病折磨，如癌症或任何直接或间接涉及癌症的紊乱，尤其是肝癌。对象示例包括哺乳动物，如人、狗、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人动物。在优选的实施方式中，所述对象是人，例如患有、有风险患有或潜在能患有增殖性疾病如癌症尤其是肝癌的人。
术语“约”或“大致”应具有给定值或范围10％以内的含义，更优选5％以内。
当指活性成分(i)时，术语“盐”应理解为活性成分(i)的盐，并优选药学上可接受盐。药学上可接受酸加成盐能用无机酸和有机酸形成。能获得盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。能获得盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。活性成分(i)的最优选盐是柠檬酸盐。活性成分(i)柠檬酸盐的化学计量比优选是1:1(柠檬酸：N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺)。
除非另有说明，本说明书和权利要求中关于具体化合物的描述或命名意在包括其两种单独对映体、非对映混合物、外消旋物或其它。因此，本发明还包括所有这类异构体，包含本发明化合物的非对映混合物和拆分对映体。通过本领域技术人员已知的方法例如色谱或分步结晶，非对映混合物能基于物理化学差异分成单独的非对映体。对映体能如下分离：通过与适当的光学活性化合物(如醇)反应将对映体混合物转变成非对映混合物，分离非对映体并将单独非对映体转化(如水解)成相应的纯对映体。确定立体化学和分离立体异构体的方法为本领域所熟知(参见“高等有机化学(Advanced organic Chemistry)”,第4版,J.March.纽约的约翰·威利父子出版公司(John Wiley and Sons),1992中第4章的讨论)。
涉及活性成分(ii)时，除非另有说明，术语“盐”包括可存在于活性成分(ii)中的酸性和碱性基团的盐。实际上为碱性的活性成分(ii)能与不同无机和有机酸形成广泛多样的盐。药学上可接受酸加成盐能用无机酸和有机酸形成。能获得盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。能获得盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。由于活性成分(ii)可包括一种以上酸性和碱性部分，活性成分(ii)可在单一活性成分中包括单盐、二盐或三盐。在活性成分(ii)的酸性部分中，盐可通过用碱性化合物处理活性成分(ii)来形成，尤其是无机碱。例如，无机盐用碱和碱土金属形成，如锂、钠、钾、钡和钙。有机碱盐包括例如铵、二苄基铵、苄基铵、2-羟乙基铵、双(2-羟乙基)铵、苯乙基苄胺、二苄基-乙二胺等盐。酸性部分的其它盐可包括例如用普鲁卡因、奎宁和N-甲基葡萄糖胺形成的那些盐，以及用碱性氨基酸如甘氨酸、鸟氨酸、组氨酸、苯基甘氨酸、赖氨酸和精氨酸形成的盐。本发明活性成分(ii)的优选盐如本文所定义。
除非另有规定或由文中明确说明，提及用于本发明药物组合的治疗剂则包括活性成分(i)和活性成分(ii)的游离形式以及所有药学上可接受盐。
在上面给出专利申请引用的各情况中，涉及化合物的主题在此通过引用纳入本申请。用作本发明药物组合中治疗剂的化合物能分别如引用文献所述进行制备和施用。本发明范围还包括如上所示的两种单独治疗剂的组合，即本发明范围内的药物组合能包括三种或更多治疗剂。
在一个实施方式中，本发明组合用于治疗增殖性疾病。在一个实施方式中，所述增殖性疾病是癌症。具体地，所述癌选自肝癌、乳腺癌、成胶质细胞瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、胃癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌。更特定地，所述癌是肝癌。
在一个实施方式中，本发明组合也可用于治疗表征为阳性FGFR4表达的实体恶性肿瘤。
在一个实施方式中，本发明组合也可用于治疗表征为阳性KLB(β-klotho)表达的实体恶性肿瘤。
在一个实施方式中，本发明组合也可用于治疗表征为阳性FGF19表达的实体恶性肿瘤。
在一个实施方式中，本发明组合也可用于治疗表征为阳性FGFR4和阳性KLB表达的实体恶性肿瘤。
在一个实施方式中，本发明组合也可用于治疗表征为阳性FGFR4和阳性FGF19表达的实体恶性肿瘤。
在一个实施方式中，本发明组合也可用于治疗表征为阳性FGFR4、阳性KLB和阳性FGF19表达的实体恶性肿瘤。
上述FGFR4、KLB和/或FGF19的任何阳性表达都能通过技术人员已知的方法评估，如RT-qPCR、蛋白质印迹、ELISA、免疫组织化学。
用于分开施用两种组合伴侣或以固定组合施用的药物组合物，即含本发明组合的单一盖仑组合物，可以本身已知的方式制备且适合经肠(如口服或直肠)和胃肠外施用于包括人在内的哺乳动物(温血动物)，所述组合物包括例如如上所述的治疗有效量的至少一种单独药理学活性组合伴侣，或联合一种或多种药学上可接受载体，特别适合经肠或胃肠外应用。药物组合物可包含约0.1％-约99.9％、优选约1％-约60％的治疗剂。
用于经肠或胃肠外施用的联合疗法的合适药物组合物是例如采用单位剂型的那些，如糖衣片剂、片剂、胶囊或栓剂或安瓿。如果没有另外说明，这些以本身已知的方式制备，例如通过多种常规混合、粉碎、直接压片、造粒、包糖衣、溶解、冻干工艺或对本领域技术人员显而易见的制造技术制备。应理解各剂型的个体剂量所含组合伴侣单位含量本身不需构成有效量，因为必要的有效量可通过施用多个剂量单位来实现。
含有药剂组合或该药剂组合单独药剂的单位剂型可采用包封于胶囊如明胶胶囊的微片剂形式。为此，能使用药物制剂所用的明胶胶囊，如获自辉瑞(Pfizer)的称为CAPSUGEL的硬明胶胶囊。
本发明的单位剂型可任选进一步包括用于药物的其他常规载体或赋形剂。这类载体的示例包括但不限于崩解剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂、稀释剂、着色剂、调味剂和防腐剂。本领域普通技术人员可通过常规实验根据特定的所需剂型性质而选择一种或多种上述载体，而无过度负担。所用各载体的量可在本领域常规范围内变化。在此通过引用纳入的以下参考文献公开了用于配制口服剂型的技术和赋形剂。参见《药物赋形剂手册》(The Handbook of Pharmaceutical Excipients),第4版,Rowe等编.,美国医药协会(American Pharmaceuticals Association)(2003)；和《雷明顿：药物科学与实践》(Remington:the Science and Practice of Pharmacy),第20版,Gennaro编,利平科特威廉姆斯.威尔金斯公司(Lippincott Williams & Wilkins)(2003)。
通过在造粒之前或造粒期间将一个或多个常规载体纳入到初始混合物内，或将一个或多个常规载体与口服剂型中含药剂组合或该药剂组合单独药剂的颗粒组合，这些可任选的额外常规载体可被纳入口服剂型。在后面的实施方式中，所述组合的混合物可例如通过V形混合器进一步混合，随后压片或模制成片剂，例如由胶囊包封或填入小袋的单层片剂(monolithic tablet)。
药学上可接受崩解剂的示例包括但不限于淀粉；粘土；纤维素；藻酸盐；树胶；交联聚合物，例如交联聚乙烯吡咯烷酮或交联聚维酮，如来自国际特种产品公司(International Specialty Products，纽约州韦恩)的POLYPLASDONE XL；交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲纤维素钠，如来自FMC的AC-DI-SOL；和交联羧甲基纤维素钙；大豆多糖；和瓜尔胶。崩解剂可存在的量是组合物重量的约0％-约10％。在一个实施方式中，所述崩解剂可存在的量是组合物重量的约0.1％-约5％。
药学上可接受的粘合剂的示例包括但不限于淀粉；纤维素和其衍生物，例如微晶纤维素，如来自FMC(宾夕法尼亚州费城)的AVICEL PH，羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和来自陶氏化学公司(Dow Chemical Corp.，密歇根州米德兰)的羟丙甲基纤维素METHOCEL；蔗糖；右旋糖；玉米糖浆；多糖；和明胶。粘合剂可存在的量是组合物重量的约0％-约50％，如约2-20％。
药学上可接受润滑剂和药学上可接受助流剂的示例包括但不限于胶态二氧化硅、三硅酸镁、淀粉、滑石、磷酸三钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙、碳酸镁、氧化镁、聚乙二醇、粉末状纤维素和微晶纤维素。润滑剂可存在的量是组合物重量的约0％-约10％。在一个实施方式中，所述润滑剂可存在的量是组合物重量的约0.1％-约1.5％。助流剂可存在的量是重量的约0.1％-约10％。
药学上可接受填充剂和药学上可接受稀释剂的示例包括但不限于糖粉、可压缩糖、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、粉末状纤维素、山梨糖醇、蔗糖和滑石。例如，填充剂/稀释剂可存在的量是组合物重量的约0％-约80％。
根据本发明，治疗有效量的本发明组合各组合伴侣即本文所定义的活性成分(i)和活性成分(ii)，可同时或依序且以任何顺序施用，组合伴侣可分开或作为固定组合施用。例如，本发明所述治疗增殖性疾病的方法可包括同时或以任何顺序依序(1)施用游离形式或药学上可接受盐形式的活性成分(i)和(2)施用游离形式或药学上可接受盐形式的活性成分(ii)，采用联合治疗有效量，优选协同有效量，如每日或间歇性剂量。本发明组合个体组合伴侣即本文所定义活性成分(i)和活性成分(ii)，可在治疗进程中于不同时间分开施用或以分开或单一组合形式同时施用。此外，术语“施用”也涵盖使用组合伴侣的前药，其在体内转化成组合伴侣本身。因此，本发明应理解为包括所有这类同时或交替治疗的方案且术语“施用”也相应解释。
用于本发明组合各组合伴侣的有效剂量可根据所用特定化合物或药物组合物、施用模式、所治疗病症和所治疗病症严重度而变化。因此，本发明组合的剂量方案根据多种因素选择，包括施用途径和患者的肾脏和肝脏功能。掌握普通技术的临床医生或医师能容易确定并处方出缓解、抵消或阻滞病症进展所需单一治疗剂的有效量。
本发明组合的组合伴侣即本文所定义的活性成分(i)和活性成分(ii)能产生功效而无毒性的最优比例、单独和联合剂量、以及浓度基于靶位点对治疗剂的可及性的动力学，且可用本领域技术人员已知的方法确定。
有效剂量的各组合伴侣可能需要相较组合中的一种化合物而更频繁施用另一种化合物。因此，为允许适当给药，包装的药物产品可包括含有化合物组合的一个或多个剂型，以及含有化合物组合之一但没有该组合另一化合物的一个或多个剂型。
用于本发明组合的组合伴侣作为单一药物销售时，如果本文它处未有提及，其剂量和施用模式与各市售药物的包装说明书所提供的信息一致。
用于治疗增殖性疾病的各组合伴侣最优剂量能就各个体用已知方法凭经验确定，并根据多种因素变化，包括但不限于疾病进展程度；个体的年龄、体重、总体健康、性别和饮食；施用时间和途径；以及个体正服用的其它药物。
可联合载体材料以生成单位剂型的各组合伴侣的含量根据所治疗个体和特定施用模式而变化。在一些实施方式中，含本文所述药剂组合的单位剂型包括药剂单独施用时通常施用的组合中的各药剂量。
剂量频率可根据所用化合物和待治疗或预防的特定病症而变化。通常优选使用足以提供有效疗法的最小剂量。通常使用本领域技术人员熟悉的适合所治疗或预防病症的试验可监测患者的疗效。
优选实施方式
本文描述了本发明的多个列举的实施方式。应认识到各实施方式中给定的特征可联合其它给定特征以进一步提供本发明实施方式。
实施方式1.一种药物组合，包括：(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式2.如实施方式1所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式3.如实施方式1所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式4.如实施方式1-3中任一项所述的药物组合，其特征在于，(ii)中的活性成分选自下组：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的单磷酸盐；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的琥珀酸盐；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的盐酸盐。
实施方式5.如实施方式1-4中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述活性成分8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是外消旋物形式。
实施方式6.如实施方式1-4中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述活性成分8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是(R)型。
实施方式7.如实施方式1-4中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述活性成分8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是(S)型。
实施方式8.如实施方式1-7中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述组合还包括至少一种药学上可接受载体。
实施方式9.如前述实施方式中任一项所述的药物组合，其特征在于，游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和游离形式或药学上可接受盐形式的(ii)中活性成分是唯一的活性成分。
实施方式10.如前述实施方式中任一项所述的药物组合用作药物。
实施方式11.如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式12.如实施方式1-9中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式13.如实施方式1-9中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物组合物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式14.如实施方式1-9中任一项所述的药物组合，其特征在于，游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和游离形式或药学上可接受盐形式的(ii)中活性成分以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式15.一种组合制剂，包括：(1)一个或多个单位剂型的(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(2)至少一种选自下组的其它活性成分的一个或多个单位剂型的(ii)：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式16.如实施方式15所述的组合制剂，其特征在于，游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和游离形式或药学上可接受盐形式的(ii)中活性成分是唯一的活性成分。
实施方式17.如实施方式15所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式18.如实施方式17所述的组合制剂，其特征在于，所述游离形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和游离形式或药学上可接受盐形式的(ii)中活性成分是唯一的活性成分。
实施方式19.如实施方式15所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式20.如实施方式19所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐和游离形式或药学上可接受盐形式的(ii)中活性成分是唯一的活性成分。
实施方式21.如实施方式15-20中任一项所述的组合制剂，其特征在于，(ii)中的活性成分选自下组：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的单磷酸盐；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的琥珀酸盐；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的盐酸盐。
实施方式22.如实施方式21所述的组合制剂，其特征在于，游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和(ii)中活性成分是唯一的活性成分。
实施方式23.如实施方式15-22中任一项所述的组合制剂，其特征在于，所述活性成分8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是外消旋物形式。
实施方式24.如实施方式15-22中任一项所述的组合制剂，其特征在于，所述活性成分8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是(R)型。
实施方式25.如实施方式15-22中任一项所述的组合制剂，其特征在于，所述活性成分8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是(S)型。
实施方式26.一种药物组合物，包括如实施方式1-9中任一项所定义的组合和至少一种药学上可接受载体。
实施方式27.如实施方式26所述的药物组合物，其特征在于，游离形式或药学上可接受盐形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和游离形式或药学上可接受盐形式的(ii)中活性成分以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式28.一种商业包装，包括如实施方式1-9中任一项所定义的药物组合以及其同时或依序施用的说明书，用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式A：
实施方式1a：一种药物组合，包括：(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(ii)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式2a：如实施方式1a所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式3a：如实施方式1a所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺和(ii)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲是柠檬酸盐形式。
实施方式4a：如实施方式1a-3a中任一项所述的药物组合，其特征在于，3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲是单磷酸盐形式。
实施方式5a：如实施方式1a-4a中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述组合还包括至少一种药学上可接受载体。
实施方式6a：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式7a：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用作药物。
实施方式8a：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式9a：如实施方式1a-6a中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式10a：如实施方式1a-6a中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物组合物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式11a：如实施方式1a-6a中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式12a：一种组合制剂，包括：(1)一个或多个单位剂型的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(2)一个或多个单位剂型的3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式13a：如实施方式12a所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式14a：如实施方式12a所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式15a：如实施方式14a所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式和3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式16a：如实施方式12a所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式17a：如实施方式16a所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐和3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式18a：如实施方式12a-17a中任一项所述的组合制剂，其特征在于，3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲是单磷酸盐形式。
实施方式19a：如实施方式18a所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的单磷酸盐是唯一的活性成分。
实施方式20a：一种药物组合物，包括如实施方式1a-6a中任一项所定义的组合和至少一种药学上可接受载体。
实施方式21a：如实施方式20a所述的药物组合物，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式22a：一种商业包装，包括如实施方式1a-6a中任一项所定义的药物组合以及其同时或依序施用的说明书，用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式B：
实施方式1b：一种药物组合，包括：(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(ii)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式2b：如实施方式1a所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式3b：如实施方式1a所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式4b：如实施方式1b-3b中任一项所述的药物组合，其特征在于，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是游离形式。
实施方式5b：如实施方式1b-4b中任一项所述的药物组合，其特征在于，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是外消旋物形式。
实施方式6b：如实施方式1b-4b中任一项所述的药物组合，其特征在于，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是(R)型。
实施方式7b：如实施方式1b-4b中任一项所述的药物组合，其特征在于，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是(S)型。
实施方式8b：如实施方式1b-7b中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述组合还包括至少一种药学上可接受盐载体。
实施方式9b：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式10b：如前述实施方式中任一项所述的药物组合用作药物。
实施方式11b：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式12b：如实施方式1b-9b中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式13b：如实施方式1b-9b中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物组合物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式14b：如实施方式1b-9b中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式15b：一种组合制剂，包括：(1)一个或多个单位剂型的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(2)一个或多个单位剂型的8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式16b：如实施方式15b所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式17b：如实施方式15b所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式18b：如实施方式17b所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式和8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式19b：如实施方式15b所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式20b：如实施方式19b所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐和8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式21b：如实施方式15b-20b中任一项所述的组合制剂，其特征在于，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是游离形式。
实施方式22b：如实施方式15b-21b中任一项所述的组合制剂，其特征在于，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是外消旋物形式。
实施方式23b：如实施方式15b-21b中任一项所述的组合制剂，其特征在于，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是(R)型。
实施方式24b：如实施方式15b-21b中任一项所述的组合制剂，其特征在于，8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺是(S)型。
实施方式25b：如实施方式21b-24b中任一项所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式的8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式是唯一的活性成分。
实施方式26b：一种药物组合物，包括如实施方式1b-9b中任一项所定义的组合和至少一种药学上可接受载体。
实施方式27b：如实施方式26b所述的药物组合物，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式28b：一种商业包装，包括如实施方式1b-9b中任一项所定义的药物组合以及其同时或依序施用的说明书，用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式D：
实施方式1d：一种药物组合，包括：(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(ii)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式2d：如实施方式1d所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式3d：如实施方式1d所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式4d：如实施方式1d-3d中任一项所述的药物组合，其特征在于，7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺是琥珀酸盐形式。
实施方式5d：如实施方式1d-4d中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述组合还包括至少一种药学上可接受盐载体。
实施方式6d：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式7d：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用作药物。
实施方式8d：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式9d：如实施方式1d-6d中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式10d：如实施方式1d-6d中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物组合物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式11d：如实施方式1d-6d中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式12d：一种组合制剂，包括：(1)一个或多个单位剂型的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(2)一个或多个单位剂型的7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式13d：如实施方式12d所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式14d：如实施方式12d所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式15d：如实施方式14d所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式和7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式16d：如实施方式12d所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式17d：如实施方式16d所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐和7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式18d：如实施方式12d-17d中任一项所述的组合制剂，其特征在于，7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺是琥珀酸盐形式。
实施方式19d：如实施方式18d所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的琥珀酸盐是唯一的活性成分。
实施方式20d：一种药物组合物，包括如实施方式1d-6d中任一项所定义的组合和至少一种药学上可接受载体。
实施方式21d：如实施方式20d所述的药物组合物，其特征在于N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式22d：一种商业包装，包括如实施方式1d-6d中任一项所定义的药物组合以及其同时或依序施用的说明书，用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式E：
实施方式1e：一种药物组合，包括：(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(ii)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式2e：如实施方式1e所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式3e：如实施方式1e所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式4e：如实施方式1e-3e中任一项所述的药物组合，其特征在于，(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺是游离形式。
实施方式5e：如实施方式1e-4e中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述组合还包括至少一种药学上可接受盐载体。
实施方式6e：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式7e：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用作药物。
实施方式8e：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式9e：如实施方式1e-6e中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式10e：如实施方式1e-6e中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物组合物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式11e：如实施方式1e-6e中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式12e：一种组合制剂，包括：(1)一个或多个单位剂型的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(2)一个或多个单位剂型的(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式13e：如实施方式12e所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式14e：如实施方式12e所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式15e：如实施方式14e所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式和(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式16e：如实施方式12e所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式17e：如实施方式16e所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐和(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式18e：如实施方式12e-17e中任一项所述的组合制剂，其特征在于，(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺是游离形式。
实施方式19e：如实施方式18e所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式是唯一的活性成分。
实施方式20e：一种药物组合物，包括如实施方式1e-6e中任一项所定义的组合和至少一种药学上可接受载体。
实施方式21e：如实施方式20e所述的药物组合物，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式22e：一种商业包装，包括如实施方式1e-6e中任一项所定义的药物组合以及其同时或依序施用的说明书，用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式F：
实施方式1f：一种药物组合，包括：(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(ii)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式2f：如实施方式1f所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式3f：如实施方式1f所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式4f：如实施方式1f-3f中任一项所述的药物组合，其特征在于，4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺是盐酸盐形式。
实施方式5f：如实施方式1f-4f中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述组合还包括至少一种药学上可接受盐载体。
实施方式6f：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式7f：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用作药物。
实施方式8f：如前述实施方式中任一项所述的药物组合，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式9f：如实施方式1f-6f中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式10f：如实施方式1f-6f中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病药物组合物中的应用，如癌症尤其是肝癌。
实施方式11f：如实施方式1f-6f中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式12f：一种组合制剂，包括：(1)一个或多个单位剂型的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和(2)一个或多个单位剂型的4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
实施方式13f：如实施方式12f所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式14f：如实施方式12f所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是游离形式。
实施方式15f：如实施方式14f所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式和4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式16f：如实施方式12f所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺是柠檬酸盐形式。
实施方式17f：如实施方式16f所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐和4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式是唯一的活性成分。
实施方式18f：如实施方式12f-17f中任一项所述的组合制剂，其特征在于，4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺是盐酸盐形式。
实施方式19f：如实施方式18f所述的组合制剂，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的盐酸盐是唯一的活性成分。
实施方式20f：一种药物组合物，包括如实施方式1f-6f中任一项所定义的组合和至少一种药学上可接受载体。
实施方式21f：如实施方式20f所述的药物组合物，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
实施方式22f：一种商业包装，包括如实施方式1f-6f中任一项所定义的药物组合以及其同时或依序施用的说明书，用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
以下实施例阐明上述发明；然而，其不意在以任何方式限制发明范围。本发明药物组合的有益效果也能通过相关领域技术人员已知的其它试验模型确定。
其它缩写：
HUH7＝人肝细胞瘤细胞系7
HCC＝肝细胞癌
ATCC＝美国模式培养物保藏所
CTG＝CellTiter Glo
CI＝联合指数
ATP＝三磷酸腺苷
PBS＝磷酸盐缓冲盐水
Et2O＝乙醚
EtOAc＝乙酸乙酯
DIEA或DIPEA＝N,N-二异丙基-乙胺
HPLC＝高效液相色谱
mL＝毫升
Pd2(dba)3＝三(二亚苄基丙酮)二钯
Xantophos＝4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantophos)以下缩写用于实验部分，指代化合物：
CPi＝N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺,
CPii-a＝3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲单磷酸盐；
CPii-b＝(R)-8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺
CPii-d＝7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺琥珀酸盐
CPii-e＝(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺
CPii-f＝4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺盐酸盐
实施例
N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(本文缩写为CPi，并也命名为实施例83)和其盐的合成公开于PCT/IB2014/065585，其内容通过引用纳入，如下文所述：
实施例83：N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺。
室温下将浓盐酸(0.40ml)加入溶于THF(3ml)和水(1ml)的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-(二甲氧基甲基)-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(中间体80,470mg,0.808mmol)溶液。室温搅拌3小时后，加入饱和NaHCO3水溶液，混合物用DCM(3次)提取，有机层用Na2SO4干燥并蒸发。残留物用EtOAc(6ml)超声波处理，加入庚烷(6ml)，然后过滤。所得白色固体随后溶于DCM(6ml)，加入EtOAc(3ml)，溶液进行加温、密封并置于室温2小时。过滤、干燥产生为白色固体的目标化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.43(s,1H),10.06(s,1H),8.24(s,1H),7.49(s,1H),7.47(s,1H),6.96(t,br,1H),4.86(s,2H),3.96-3.90(m,2H),3.52-3.46(m,2H),3.39-3.33(m,2H),3.30-3.21(m,2H),3.37(s,3H),3.02(s,2H),2.93-2.86(m,2H),2.61-2.56(m,2H),2.21(s,3H),1.95-1.85(m,2H).
(UPLC-MS 6)tR 0.70,ESI-MS 507.2,[M+H]+.
通过用合适反离子沉淀，自上述游离形式的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺制备以下盐。
具有1:1化学计量比的苹果酸盐(mw 640.66),mp(DSC)181.1℃(开始)：将丙酮(2ml)加入苹果酸(26.4mg,0.197mmol)和N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(100mg,0.197mmol)的混合物，混合物在迷你金属浴(mini-block)上加热，加热-冷却循环从55-5℃持续7个重复循环(加热速度:1.5℃/min,冷却速度:0.25℃/min)。白色固体通过离心收集并在40℃干燥18小时以获得目标盐。
具有1:0.5化学计量比的酒石酸盐(mw 581.72),mp(DSC)176.7℃(开始)。室温制备溶于甲醇(5ml)的酒石酸(75.7mg)溶液(0.1M)。一部分含0.1M酒石酸的丙酮溶液(2ml)随后加入溶于甲醇(4ml)的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(100mg)悬液，混合物超声波处理1分钟，随后于55℃加热并搅拌2小时。白色固体经过滤收集，甲醇(2ml)洗2次，在40℃真空干燥18小时以获得目标盐。
具有1:1化学计量比的酒石酸盐(mw 656.66),mp(DSC)169.9℃(开始)：室温制备溶于丙酮(5ml)的酒石酸(75.7mg)溶液(0.1M)。一部分含0.1M酒石酸的丙酮溶液(2ml)随后加入溶于甲醇(4ml)的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(100mg)悬液，混合物超声波处理1分钟，随后55℃加热并搅拌2小时。白色固体经过滤收集，丙酮(2ml)洗2次，在40℃真空干燥18小时以获得目标盐。
具有1:0.5化学计量比的柠檬酸盐(mw 602.73),mp(DSC)168.4℃(开始)：室温制备溶于甲醇(5ml)的柠檬酸(96.9mg)溶液(0.1M)。一部分含0.1M柠檬酸的甲醇溶液(2ml)随后加入溶于甲醇(4ml)的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(100mg)悬液，混合物超声波处理1分钟，随后55℃加热并搅拌2小时。白色固体经过滤收集，丙酮(2ml)洗2次，在40℃真空干燥18小时以获得目标盐。
具有1:1化学计量比的柠檬酸盐(mw 698.70),mp(DSC)168.8℃(开始)：室温制备溶于丙酮(5ml)的柠檬酸(96.9mg)溶液(0.1M)。一部分含0.1M柠檬酸的丙酮溶液(2ml)随后加入溶于丙酮(4ml)的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(100mg)悬液，混合物超声波处理1分钟，随后55℃加热并搅拌2小时，然后缓慢冷却至室温。白色固体随后经过滤收集，丙酮(2ml)洗2次，在40℃真空干燥18小时以获得目标盐。
或者，将N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(6.5g,12.83mmol)置于500ml四口烧瓶反应器。加入49ml冰醋酸，所得悬液在23℃搅拌，直至获得澄清混合物。在一个单独的烧瓶中，无水2-羟基丙烷-1,2,3-三羧酸(2.59g,13.47mmol,1.05当量)在50℃溶于49ml冰醋酸，直至获得澄清溶液。随后在23℃将该溶液加入先前制备的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺溶液。该混合物在23℃搅拌30分钟，然后在1小时中逐滴加入升温至75℃的192ml乙酸乙酯中。温度在添加中保持恒定。添加结束时，混合物温度缓慢冷却至23℃并在温和搅拌下于此温度保持16小时。悬液冷却至5-10℃并过滤。滤饼用15ml乙酸乙酯和15ml丙酮洗涤。湿饼(ca 8.5g)转至含192ml干燥丙酮的500ml烧瓶。所得悬液回流24小时。过滤悬液，滤饼用15ml干燥丙酮洗2次，随后在50℃真空干燥数小时以获得目标盐。
中间体80：N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-(二甲氧基甲基)-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺。
溶于无水DMF(1.5ml)的6-氨基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)烟腈(中间体75,481mg,2.50mmol)溶液在10分钟内逐滴加到二(1H-1,2,4-三唑-1-基)甲酮(410mg,2.50mmol)和DMF(1.5ml)的混合物，冷却至0℃。0℃搅拌45分钟后，反应混合物能加温至室温，室温下再90分钟后，加入溶于DMF(2ml)的1-((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪-2-酮(中间体81,418mg,1.00mmol)溶液。反应混合物在室温搅拌17.5小时，通过加入MeOH淬灭并蒸发。残留物以DCM溶液加至80g 硅胶柱，通过正相色谱纯化，用从DCM到DCM中2％MeOH的梯度洗脱。合并含各部分的产品并蒸发产生为橙色泡沫的目标化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.50(s,1H),8.27(s,1H),7.52(s,1H),7.39(s,1H),6.93(t,1H),5.45(s,1H),4.65(s,2H),3.94-3.89(m,2H),3.54-3.50(m,2H),3.40-3.35(m,2H),3.38(s,6H),3.29(s,3H),3.20-3.16(m,2H),3.05(s,2H),2.86-2.80(m,2H),2.61-2.55(m,2H),2.22(s,3H),1.94-1.88(m,2H).(UPLC-MS 6)tR 0.72；ESI-MS 553.3[M+H]+.
中间体81：1-((2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪-2-酮。
室温下将三乙酰氧基硼氢化钠(3.10g,14.61mmol)加入溶于1,2-二氯乙烷(20ml)的2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-3-甲醛(中间体41,2.30g,9.74mmol)、乙基2-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)乙酸酯二盐酸盐(中间体82,2.6g,14.61mmol)和三乙胺(6.75ml,48.7mmol)的混合物。反应混合物室温搅拌21小时，加入额外的三乙酰氧基硼氢化钠(2.6g,9.74mmol)。室温下再搅拌4小时后，再次加入额外的三乙酰氧基硼氢化钠(1.3g,4.87mmol)，且反应在4℃维持2.5天。反应混合物随后加温至室温，加入饱和NaHCO3水溶液，混合物用DCM(3次)提取，合并的有机层用Na2SO4干燥并蒸发。残留物以DCM溶液加至120g硅胶柱，通过正相色谱纯化，用从DCM到DCM中10％MeOH的梯度洗脱。合并含各部分的产品并蒸发产生为橙色泡沫的目标化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.08(s,1H),5.30(s,br,1H),5.20(s,1H),4.69(s,2H),3.44-3.34(m,2H),3.40(s,6H),3.22-3.15(m,2H),3.24(s,2H),2.71-2.64(m,2H),2.58-2.50(m,2H),2.31(s,3H),1.98-1.82(m,2H).(UPLC-MS6)tR 0.33；ESI-MS 335.3[M+H]+.
中间体82：乙基2-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)乙酸酯二盐酸盐。
室温下将浓盐酸(10ml)加入溶于THF(20ml)和EtOH(100ml)的乙基2-((2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)(甲基)氨基)乙酸酯(中间体83,3.05g,11.13mmol)。室温搅拌1小时后，蒸发反应混合物，加入乙醇(20ml)，蒸发，再加入乙醇(50ml)，然后在60℃搅拌70分钟。冷却的反应混合物随后蒸发产生为浅黄色玻璃状目标化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.58(s,br,3H),4.19(q,2H),4.26-4.15(m,2H),3.44(s,br,2H),3.21(s,br,2H),2.88(s,3H),1.21(t,3H).
中间体83：乙基2-((2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)(甲基)氨基)乙酸酯。
在0℃将溴乙酸乙酯(1.27ml,11.48mmol)加入叔丁基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸酯(2.0g,11.48mmol)、三乙胺(4.81ml)和THF(24ml)的混合物。室温搅拌24小时后，反应混合物在饱和NaHCO3水溶液与DCM之间分开，DCM提取2次，有机层用Na2SO4干燥，蒸发产生为澄清浅黄色油状的目标化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 5.20(s,br,1H),4.18(q,2H),3.24(s,2H),3.22-3.16(m,2H),2.65-2.61(m,2H),2.38(s,3H),1.42(s,9H),1.24(t,3H).
中间体41：2-(二甲氧基甲基)-5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-3-甲醛。
在氩气下于-78℃向溶于THF(400ml)的6-溴-7-(二甲氧基甲基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶(中间体12,15.0g,52.2mmol)溶液加入MeLi(Et2O中1.6M,32.6ml,52.2mmol)，溶液搅拌5分钟，然后缓慢加入n-BuLi(己烷中1.6M,35.9ml,57.5mmol)，溶液搅拌20分钟。在-78℃将THF(100ml)加入反应。随后，加入n-BuLi(己烷中1.6M,49.0ml,78mmol)，反应混合物搅拌20分钟，接着再加入n-BuLi(己烷中1.6M,6.53ml,10.45mmol)，混合物在-78℃搅拌10分钟。加入DMF(2.10ml,27.2mmol)且反应混合物在-78℃搅拌45分钟，然后加温至室温，倒入饱和NH4Cl水溶液并用DCM提取2次。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并蒸发以产生为橙色油状的目标化合物。(UPLC-MS 3)tR 0.63min；ESI-MS 237.2[M+H]+.
中间体12：6-溴-7-(二甲氧基甲基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶。
将溶于乙腈(2l)的7-(二甲氧基甲基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶(中间体4,114.6g,550.3mmol)置于3l四颈圆底烧瓶中。然后分批加入NBS(103g,578mol)，在25℃搅拌。所得溶液在25℃搅拌30分钟。所得混合物真空浓缩且残留物用1000ml乙醚稀释。混合物用3次100ml冰/水洗涤。水相用2次100ml乙醚提取，合并有机层。所得混合物用1x100ml盐水洗，硫酸钠干燥并真空浓缩以产生为淡黄色固体的目标化合物。LC-MS:(ES,m/z):286.03[M+H]+.1H-NMR:(300MHz,CDCl3)δ 1.86-1.94(2H,m),2.70-2.74(2H,m),3.9-3.43(2H,m),3.47(6H,s),5.23(1H,s),5.58(1H,s),7.29(1H,s).
中间体4：7-(二甲氧基甲基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶。
使用J.Org.Chem.,2004,69(6),第1959–1966页所述过程。5-l压力反应釜(5atm)中放置2-(二甲氧基甲基)-1,8-萘啶(中间体5,200g,979mmol)、乙醇(3l)、PtO2(12g)。反应釜排空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在氢气氛下于23℃搅拌过夜。该反应重复4次。滤出固体，所得混合物真空浓缩产生为黄色固体的目标化合物。
中间体5：2-(二甲氧基甲基)-1,8-萘啶。
使用J.Org.Chem.,2004,69(6),第1959–1966页所述过程。20l四颈圆底烧瓶中放置2-氨基吡啶-3-甲醛(1000g,8.19mol)、1,1-二甲氧基丙-2-酮(1257g,10.64mol)、乙醇(10l)和水(2l)。然后在0-15℃逐滴加入溶于水(1000ml)的氢氧化钠(409.8g,10.24mol)溶液并搅拌。溶液在0-20℃搅拌3小时，随后真空浓缩。所得溶液用3次1200ml乙酸乙酯提取且合并有机层。混合物用硫酸钠干燥并真空浓缩。残留物用3次300ml己烷洗涤且固体经过滤收集。产生为黄色固体的目标化合物。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.11(dd,1H),8.53(d,1H),8.50(dd,1H),7.73(d,1H),7.67(dd,1H),5.44(s,1H),3.41(s,6H).
中间体75：6-氨基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)烟腈。
溶于DMA(20ml)的6-氨基-4-氟烟腈(中间体21,1.10g,8.02mmol)溶液与2-甲氧基乙胺(2.07ml,24.1mmol)和DIPEA(4.20mL,24.1mmol)反应，加热至50℃并搅拌15小时。反应混合物冷却至室温并浓缩。粗产物用正相色谱(24g硅胶柱,庚烷/EtOAc 100:0-0:100)纯化。浓缩含各部分的产品并真空干燥，产生为米黄色固体的目标化合物。
6-氨基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)烟腈的替代合成如下概括：
向叔丁基N-{5-氰基-4-[(2-甲氧基乙基)氨基]吡啶-2-基}氨基甲酸酯(中间体287,7g)加入30-36％HCl水溶液(40ml)，混合物室温搅拌30分钟并通过色谱监测，直至完全转化。溶液随后用20-30％NaOH溶液碱化至pH＝9-10，过滤产生白色固体。将固体加入乙酸乙酯(15ml)并加热至50-55℃以形成澄清溶液。溶液接着冷却至3-6℃，搅拌2-3小时并过滤。湿饼随后干燥产生为白色固体的目标化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.92(s,1H),6.39(s,2H),6.15(t,1H),5.61(s,1H),3.46(t,2H),3.27(s,3H),3.24(q,2H).(UPLC-MS 3)tR 0.62；ESI-MS 193.1[M+H]+.
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.14(d,1H),6.51(d,1H),6.47-6.41(m,1H),4.98(s,1H),3.28-3.19(m,2H),3.23(s,6H),2.64(t,2H),1.73-1.79(m,2H).
中间体21：6-氨基-4-氟烟腈。
溶于DMA(800ml)的4-氟-5-碘吡啶-2-胺(中间体22,240g,1mol)、氰化锌(125g,1.05mol)、锌(13g,0.2mol)、Pd2(dba)3(25g,25mmol)和dppf(55g,0.1mol)除气并在氮气下装入圆底烧瓶。混合物在100℃搅拌3小时。反应混合物用5％NaHCO3(2l)稀释，EtOAc(4x600ml)提取。合并的有机层用5％NaOH(1l)洗涤，Na2SO4干燥，浓缩到700ml。所得有机相用EtOAc(1.7l)通过硅胶柱洗脱。合并的有机滤液用2M HCl(3x 800ml)洗涤。水相的pH用饱和NaHCO3调至10。水相用DCM(3x 500ml)提取。合并的DCM用Na2SO4干燥并浓缩。残留物通过柱色谱(戊烷:EtOAc 10:1-3:2洗脱)然后从戊烷:EtOAc 3/1中重结晶来进一步纯化，以产生为白色固体的目标化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.40(d,1H),7.40(s,2H),6.34(d,1H).
中间体22：4-氟-5-碘吡啶-2-胺。
4-氟吡啶-2-胺(336g,2.5mol)和NIS(745g,2.75mol)的MeCN(9l)悬液用TFA(114g,1mol)处理。然后，反应混合物室温搅拌8小时。反应混合物用EtOAc(10l)稀释，饱和Na2S2O3水溶液(2x 5l)、卤水(4x 5l)洗涤。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩产生粗产品。粗产品通过从EtOAc/戊烷(1/10)再结晶来纯化，以产生为白色固体的目标化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.14(d,1H),6.45(s,2H),6.33(d,1H).
中间体287：叔丁基(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)氨基甲酸酯。
溶于DMSO(80ml)的叔丁基(4-氯-5-氰基吡啶-2-基)氨基甲酸酯(中间体288,9.8g,38.6mmol)、2-甲氧基乙胺(5.8g,77.3mmol)和DIPEA(6g,46.4mmol)混合物在65-70℃加热24小时并通过色谱监测，直至完全转化。溶液随后冷却至室温，白色固体逐步沉淀。接着在1小时内缓慢加入水((20ml)。悬液再搅拌1小时，过滤并干燥产生为白色固体的目标化合物。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ 9.87(s,1H),8.18(s,1H),7.20(s,1H),6.86(s,9H),3.51(t,2H),3.36(t,2H),3.28(s,3H),1.47(s,9H).
中间体288：叔丁基(4-氯-5-氰基吡啶-2-基)氨基甲酸酯。
溶于THF(150ml)的2,4-二氯-5-氰基吡啶(10g,57.8mmol)、叔丁基氨基甲酸酯(8.2g,70.5mmol)、Pd(OAc)2(0.26g,1.1mmol)、Xantphos(1.34g,2.3mmol)和K2CO3(12g,87mmol)混合物用氮气脱气3次。然后，混合物在70℃加热4-5小时并通过色谱监测，直至完全转化。反应完成后，加入额外的THF(100ml)且混合物在70℃再加热1小时，接着冷却至室温。悬液随后经硅藻土垫过滤以移除固体。滤液随后浓缩并与乙酸乙酯共沸蒸馏，然后过滤产生目标化合物。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ 10.82(s,1H),8.79(s,1H),8.09(s,1H),1.49(s,9H).
用于实施例83的体外生化激酶测定
所有试验在384孔微量滴定板中进行。各试验板包含测试化合物的8点连续稀释液以及作为参照化合物的星孢菌素的4组8点连续稀释液，加上16个高对照和16个低对照。
液体处理和孵育步骤在装有机械臂(Thermo CatX,Caliper Twister II)和孵育器(Liconic STX40,Thermo Cytomat 2C450)的Innovadyne Nanodrop Express上完成。通过加入50nl/孔溶于90％DMSO的化合物溶液，来制备试验板。激酶反应如下起始：逐步加入4.5μl/孔的肽/ATP-溶液(50mM HEPES,pH 7.5,1mM DTT,0.02％吐温(Tween)20,0.02％BSA,0.6％DMSO,10mMβ-甘油磷酸盐和10μM原钒酸钠,16mM MgCl2,1122μM ATP,4μM肽(5-Fluo-Ahx-KKKKEEIYFFFG-NH2,Biosyntan公司(Biosyntan GmbH))，和4.5μl/孔的酶溶液(50mM HEPES,pH 7.5,1mM DTT,0.02％吐温20,0.02％BSA,0.6％DMSO,10mMβ-甘油磷酸盐和10μM原钒酸钠,16mM MgCl2,6nM FGFR4(GST-FGFR4(388-802),通过在昆虫细胞中表达以及亲和色谱而由机构内部制备)。激酶反应在30℃孵育60分钟，随后通过加入16μl/孔的停止液(100mM HEPES pH 7.5,5％DMSO,0.1％Caliper包衣试剂,10mM EDTA和0.015％Brij35)来终止。将有终止激酶反应的板转至Caliper LC3000工作台以读取。用Caliper微流体迁移技术分离磷酸化和未磷酸化的肽。简言之，将来自终止激酶反应的样品加载于芯片。通过恒定缓冲液流动将分析物运送通过芯片，底物肽的迁移通过其标记的荧光信号来监测。磷酸化肽(产物)和未磷酸化肽(底物)通过其电荷/质量比在电场中分开。由所形成磷酸肽的量计算激酶活性。通过非线性回归分析从不同化合物浓度下的百分比抑制值来确定IC50值。
制备化合物稀释液
将测试化合物溶于DMSO(10mM)并转入携带独特2D矩阵的1.4mL平底或V型矩阵管。如果不立即使用，储液在+2℃保存。对于试验程序，解冻小瓶并通过扫描仪鉴定，由此产生指导后续工作步骤的工作单。
化合物稀释在96孔板中完成。稀释操作包括生成“预稀释板”、“母板”和“试验板”。
预稀释板：聚丙烯96孔板用作预稀释板。总共制备4个预稀释板，包括各自在板位置A1-A10的测试化合物，A11处的1种标准化合物和A12处的1种DMSO对照。所有稀释步骤在HamiltonSTAR机器人上完成。
母板：将30μL的个体化合物稀释液(包括4个“预稀释板”的标准化合物和对照)转至384“主板”，包括以下浓度：1’810、362、72.5、54.6、14.5、2.9、0.58和0.12μM，分别在90％DMSO中。
试验板：随后如下制备相同“试验板”：通过HummingBird 384通道分液器抽吸50nL的“母板”各化合物稀释液到384孔“试验板”内。这些板直接用于以9.05μL总体积进行的试验。这在试验中产生10、2.0、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064和0.000128μM的化合物终浓度以及0.5％的DMSO终浓度。
FGFR4的体外细胞激酶测定
作为细胞FGFR4激酶活性的读取，开发了测量FGFR4上酪氨酸磷酸化含量的试验。为此，生成BaF3-Tel-FGFR4细胞系：用编码融合蛋白的逆转录病毒稳定转导BaF3细胞，所述融合蛋白由融合至FGFR4胞质域(包括近膜区结构域)的TEL氨基末端部分(aa1-337)组成。TEL结构域的存在通过寡聚化和由此酪氨酸位点的自身磷酸化介导融合FGFR4激酶的组成型激活。
开发基于MSD(Meso Scale Discovery)的捕获ELISA并如下使用：
-细胞处理：每孔250000个BaF3-Tel-FGFR4细胞接种于96孔组织培养板(CorningCat#3359)的40uL生长培养基(RPMI-1640(Amimed Cat#1-41F01-I)，补充有10％胎牛血清,10mM HEPES,1mM丙酮酸钠,2mM稳定谷氨酰胺和1x青霉素-链霉素)。使用液体处理装置(Velocity 11Bravo,安捷伦(Agilent))，在DMSO中制备连续3倍稀释的化合物，预稀释于生长培养基中，然后转移10uL/孔到细胞板。在37℃/5％CO2孵育1小时后，加入50uL裂解缓冲液(150mM NaCl,20mM Tris(pH 7.5),1mM EDTA,1mM EGTA,1％曲通(Triton)X-100,10mMNaF，补充蛋白酶抑制剂(Complete Mini,Roche Cat#11836153001)和磷酸酶)抑制剂(磷酸酶Inhib I,西格玛(SIGMA)Cat#P2850；磷酸酶Inhib II,西格玛Cat#P5726，根据供应商说明)并在冰上孵育30分钟，以300rpm振荡。样品板随后在-70℃冷冻和保存。冰上解冻后，样品板在6℃以1200rpm离心15分钟。
-ELISA试验：多阵列96孔板(MSD,Cat#L15XB-3)用25uL/孔的小鼠抗H-TEL抗体(圣克鲁斯公司(Santa Cruz),Cat#sc-166835)室温包被1小时，抗体在PBS/O中1:400稀释。加入溶于TBS-T(50mM Tris,150mM NaCl,0.02％吐温-20)的150uL 3％MSD-阻断剂A(Cat#R93BA-1)后，板在室温振荡孵育1小时。然后，板用200uL/孔的TBS-T洗涤3次。50uL细胞裂解物随后转移到包被板并在4℃孵育15小时，然后用200μl TBS-T/孔洗3次并加入25μl/孔的MSD SULFOTAGGED PY20抗体(MSD Cat#R32AP-5)，抗体在TBS-T+1％MSD阻断剂A中1:250稀释。室温振荡孵育1小时后，孔用200μl TBS-T/孔洗3次。加入150μl用纳米水1:4稀释的MSD读取缓冲液(MSD,Cat#R92TC-2)储液后，立即通过SectorImager 6000(MSD)来定量电化学发光信号产生。IC50计算：对于数据分析，试验背景在含培养基和裂解缓冲液但没有细胞的孔中测定，从所有数据点中减去相应值。特定测试化合物浓度对FGFR4磷酸化的影响表示为仅用载剂处理的细胞(DMSO,0.2％f.c.)所得的背景-校正电化学发光读数(该读数设为100)的百分比。引起半数最大信号抑制(IC50)的化合物浓度通过标准四参数曲线拟合(XLfit 5.4,IDBS)确定。
细胞增殖试验
亚甲基蓝染色增殖试验(MBS)：化合物对细胞增殖的影响用HuH-7肝细胞癌细胞评价，所述细胞获自日本研究生物资源细胞库(Japanese Collection of ResearchBioresources Cell Bank)(Cat#JCRB0403)并在37℃,5％CO2加湿培养箱中培养于供应商推荐的培养基(DMEM高葡萄糖(Amimed Cat#1-26F01-I),10％胎牛血清(英杰(Invitrogen)Cat#16140-071),1mM丙酮酸钠(Amimed Cat#5-60F00-H),1x青霉素/链霉素(Amimed Cat#4-01F00-H))。特别地，5000细胞/孔接种于96孔组织培养板(TPP Cat#92696)，总培养基体积为100μl/孔，24小时后一式三份加入递增的化合物稀释液或DMSO。化合物加入后72小时，通过加入25μL/孔的20％戊二醛(西格玛奥德里奇(Sigma Aldrich Ca)t#G400-4)来固定细胞并室温孵育10分钟。细胞用H2O,200μL/孔洗3次，用100μL/孔的0.05％亚甲基蓝(ABCRGmbH Cat#AB117904)室温染色10分钟。细胞用H2O,200μL/孔洗3次，然后通过加入200μL/孔的3％HCl(Fluka Cat#84422)室温振荡裂解30分钟。在A650nm测量光密度。相对DMSO处理细胞提供50％增殖抑制的化合物浓度(IC50)用XLFit软件测定。
CellTiter Glo(CTG)试验：化合物对细胞增殖的功能效果用HuH-7肝细胞癌细胞评价，所述细胞获自日本研究生物资源细胞库(Cat#JCRB0403)并在37℃,5％CO2加湿培养箱中培养于供应商推荐的培养基(DMEM高葡萄糖(Amimed Cat#1-26F01-I),10％胎牛血清(英杰Cat#16140-071),1mM丙酮酸钠(Amimed Cat#5-60F00-H),1x青霉素/链霉素(AmimedCat#4-01F00-H))。化合物介导的细胞增殖/活力抑制通过定量细胞ATP水平来评估，使用CellTiter-Glo(CTG)试剂(普洛麦格(Promega),Cat#G7573)。简言之，细胞以3’000细胞/孔/80μl新鲜培养基接种于经组织培养处理的96孔板(Costar Cat#3904)，接着加入含有5倍于其预期终浓度的化合物稀释液的20μl培养基。剂量反应效果通过3倍连续稀释的测试化合物评价，从10μM开始。细胞在37℃和5％CO2下孵育3天后，在加入50μl CTG后根据供应商手册使用相应装备的多模式读板仪(M200Pro，瑞士帝肯(TECAN))进行发光检测(积分时间：500ms)以定量抑制剂对细胞活力的影响。对于数据分析，从所有数据点中减去试验背景值，该值在含培养基但没有细胞的孔中测定。为区分细胞毒性和细胞抑制化合物，使用分开的细胞板(第0天)评估相对于化合物添加时所观察到的数目的活细胞数目。特定测试化合物浓度对细胞增殖/活力的影响表示为仅用载剂处理的细胞(DMSO,0.1％f.c.)所得的背景-和第0天-校正发光读数(该读数设为100％)的百分比，而仅含培养基但没有细胞的孔的发光读数设为-100％。引起半数最大生长抑制(GI50)的化合物浓度用标准四参数曲线拟合(XLfit 5.2.,英国的IDBS)确定。
实施例1
(S)和(R)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的合成公开于PCT/IB2015/050345，如下所述：
步骤a：溶于DIPEA(3mL)的6-氯-3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-胺(200mg,0.652mmol)和N-(4-甲氧苄基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺(358mg,1.304mmol)溶液在130℃搅拌60小时。冷却至室温后，减压移除挥发物。所得残留物溶于TFA(3mL)，溶液在微波反应器中于160℃搅拌1小时并在180℃搅拌15分钟。减压移除挥发物且所得残留物通过HPLC纯化(用含25-50％乙腈的水、5mM NH4OH修饰剂梯度洗脱)产生8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺(73mg,0.482mmol；基于HRMS的83％纯)。19mg的此化合物通过HPLC进一步纯化(用含25-50％乙腈的水、0.1％TFA修饰剂梯度洗脱)产生纯的目标化合物(9.5mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ ppm 8.29(dd,J＝4.42,1.39Hz,1H),7.48(s,1H),7.19-7.41(m,2H),4.06-4.26(m,2H),2.89-3.14(m,2H),2.71(t,J＝7.33Hz,1H),1.86-2.00(m,1H),1.73-1.84(m,1H),1.43-1.72(m,5H),1.27-1.42(m,2H),1.17-1.27(m,1H).19F NMR(376MHz,甲醇-d4)δ ppm-66.45(s).HRMS计算出C19H24N6F3S(M+H)+425.1735,发现为425.1753.IC50为0.023uM.
步骤b：如下手性SFC纯化上述目标化合物；柱:ID 21x250mm,流速:每分钟75g,流动相:35％MeOH和10mM NH4OH，溶于CO2,检测:270nm UV，以获得单一对映体Rt(P1)＝4.9min；IC50是0.011uM且Rt(P2)＝6.4min；IC50是0.167uM，其中IC50指选择性抑制SHP2活性的能力。通过任何一种以下实验测试来证明抑制性质：
SHP2变构抑制试验
SHP2通过二酪氨酰磷酸化肽结合其Src同源2(SH2)结构域而变构激活。后一激活步骤引起释放SHP2自抑制界面，进而提供就底物识别和反应催化而言有活性且可用的SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)。用替代底物DiFMUP通过即时荧光分析模式监测SHP2的催化活性。
更特别地，磷酸酶反应在平底、低边、非结合表面的384孔黑色聚苯乙烯板(康宁(Corning),Cat#3575))中在室温下进行，使用25uL终反应体积和以下试验缓冲液条件：60mM HEPES,pH 7.2,75mM NaCl,75mM KCl,1mM EDTA,0.05％P-20,5mM DTT。
SHP2的抑制(浓度范围为0.003-100μM)用以下试验监测，其中0.5nM SHP2用0.5uM的肽IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222(序列:H2N-LN(pY)IDLDLV(dPEG8)LST(pY)ASINFQK-酰胺)孵育。在25℃孵育30-60分钟后，向反应加入替代底物DiFMUP(英杰(Invitrogen),cat#D6567)并在25℃孵育30分钟。随后通过加入5ul 160uM bpV(Phen)溶液(Enzo生命科学公司(Enzo Life Sciences))来淬灭反应。荧光信号用酶标仪(Envision,珀金埃尔默(Perki-Elmer))分别使用340nm和450nm的激发及发射波长来监测。抑制剂剂量反应曲线用标准化IC50回归曲线分析，该曲线用基于对照的标准化进行拟合。
p-ERK细胞试验
p-ERK细胞试验使用 SureFireTM磷酸化ERK 1/2试剂盒(珀金埃尔默):KYSE-520细胞(30,000细胞/孔)过夜生长于96孔板培养物并用浓度为20、6.6、2.2、0.74、0.24、0.08、0.027uM的Shp2抑制剂在37℃处理2小时。通过加入30μL裂解缓冲液(珀金埃尔默)来终止孵育，所述缓冲液由SureFire磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)检测试剂盒(珀金埃尔默)提供。样品根据厂商指南进行处理。来自pERK的荧光信号用2101多标记读数仪(珀金埃尔默Envision)测量两次。抑制百分比通过总ERK信号标准化并与DMSO载剂对照比较。
集落形成实验和细胞增殖试验
KYSE-520细胞(1500细胞/孔)接种于24孔板的300uL培养基(含10％FBS的RPMI-1640，龙沙(Lonza))。对于药物处理，在细胞平板接种24小时后和5天后加入不同浓度(20、10、5、2.5、1.25uM)的本发明化合物。第11天，集落用0.2％结晶紫(安倍医疗(MPBiomedicals))染色，随后溶于20％乙酸以用Spectramax读数仪(赛默科技(ThermoScientific))定量。在细胞增殖试验中，细胞(1500-细胞/孔)接种于96孔板的100uL培养基(含10％FBS的RPMI-1640，龙沙)。第6天，加入50μL Celltiter-Glo试剂(普洛麦格)，并根据供应商说明(普洛麦格)测定发光信号。
中间体1
6-氯-3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-胺
步骤a：(在室温和N2下)向溶于二氧六环(12mL)的3-溴-2-(三氟甲基)吡啶(1.0g,4.42mmol)、XantPhos(256mg,0.442mmol)、Pd2(dba)3(203mg,0.221mmol)溶液加入2-乙基己基-3-巯基丙酸酯(1.1mL,4.87mmol)，然后加入DIPEA(1.55mL,8.85mmol)。所得溶液在微波反应器中于110℃搅拌1小时。冷却至室温后，反应经硅藻土垫过滤，然后EtOAc(25mL)洗涤。浓缩合并的滤液，所得残留物通过硅胶色谱(0-30％梯度的EtOAc/庚烷)纯化以产生2-乙基己基3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)丙酸酯(1.41g,3.88mmol)。MS m/z 364.0(M+H)+.
步骤b：在-78℃和N2下向溶于THF(8mL)的2-乙基己基3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)丙酸酯(1.0g,2.75mmol)溶液加入叔丁醇钾(THF中1M,8.25mL,8.25mmol)。在-78℃剧烈搅拌20分钟后，反应用K2CO3水溶液(2M,500uL)淬灭，减压移除挥发物。所得残留物倒入含K2CO3水溶液(2M,30mL)的分液漏斗，用Et2O(2x 20mL)提取。水相用6M HCl酸化直至pH4，所得混浊悬液用CHCl3:IPA(9:1；3x 20mL)提取，产生2-(三氟甲基)吡啶-3-硫醇(380mg,2.12mmol)。MS m/z 180.0(M+H)+.
步骤c：(在室温和N2下)向溶于二氧六环(2mL)的2-(三氟甲基)吡啶-3-硫醇(285mg,1.591mmol)、3-溴-6-氯吡嗪-2-胺(414mg,1.988mmol)、XantPhos(101mg,0.175mmol)和Pd2(dba)3(72.8mg,0.08mmol)溶液加入DIPEA(556uL,3.18mmol)。所得溶液在微波反应器中于130℃搅拌1.5小时。冷却至室温后，反应用EtOAc稀释，并经硅藻土垫过滤，然后EtOAc(25mL)洗涤。浓缩合并的滤液，所得残留物通过硅胶色谱(0-30％梯度的EtOAc/庚烷)纯化以产生6-氯-3-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-胺(1.41g,3.88mmol)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ ppm 8.64(dd,J＝4.55,1.26Hz,1H),7.90(s,1H),7.82(dd,J＝8.08,0.76Hz,1H),7.46(dd,J＝8.08,4.80Hz,1H)；19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ ppm-64.34(s,1F).MS m/z 307.1(M+H)+.
中间体7
N-(4-甲氧苄基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-b
步骤a：向溶于DCE(7mL)的叔丁基1-氧代-8-氮杂螺[4.5]癸-8-羧酸酯(1.8g,7.11mmol)和(4-甲氧基苯基)甲胺(1.07g,7.82mmol)溶液分批加入氰基硼氢化钠(2.23g,35.5mmol)并在室温搅拌65小时。混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)稀释并用EtOAc(3x20mL)提取。合并的有机相用盐水洗涤并浓缩。所得残留物通过硅胶色谱(0-2％梯度的MeOH/DCM，0.25％Et3N修饰，然后是0-50％梯度的EtOAc/庚烷)纯化，产生为无色蜡状的叔丁基1-((4-甲氧苄基)氨基)-8-氮杂螺[4.5]癸-8-羧酸酯(1.1g,2.94mmol)。MS m/z375.3(M+H)+.
步骤b：溶于DCM(2mL)的叔丁基1-((4-甲氧苄基)氨基)-8-氮杂螺[4.5]癸-8-羧酸酯(1.1g,2.94mmol)(1.1g,2.94mmol)和TFA(2mL)溶液在0℃搅拌15分钟。减压移除挥发物。所得残留物用NaHCO3水溶液(10mL)稀释并用EtOAc(4x 10mL)提取，产生为无色油状的N-(4-甲氧苄基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺(0.8g,2.92mmol)。MS m/z 275.2(M+H)+.
实施例2
本发明组合处理后肝细胞癌细胞系HUH7的细胞生长抑制和协同评价
细胞增殖试验：人肝细胞癌细胞系HUH7购自美国模式培养物保藏所(ATCC)。细胞在37℃、5％CO2加湿培养箱中培养于RPMI-1640生长培养基(ATCC，目录号20-2001)，该培养基补充有10％胎牛血清(GIBCO，目录号F4135)。对于7天细胞增殖试验，HUH7细胞以每孔1500个细胞的密度接种于经组织培养处理的96孔板(康宁，目录号3904)，并能在37℃、5％CO2加湿培养箱中过夜贴壁。对于7日剂量矩阵组合研究，细胞暴露于采用棋盘(checkerboard)形式的连续稀释的单一药剂或组合的以下药剂对：CPi+CPii-a、CPi+CPii-b、CPi+CPiid或CPi+CPii-e。处理7天后，如厂商说明所推荐，通过用CellTiter Glo(CTG试验)(普洛麦格，目录号G7572)测量ATP水平来分析细胞生长。
对于3日剂量矩阵组合研究，HUH7细胞以每孔500个细胞的密度接种于经组织培养处理的384孔板(Costar目录号3707)，并能在37℃、5％CO2加湿培养箱中过夜贴壁。细胞随后暴露于采用棋盘形式的连续稀释的单一药剂或组合的CPi和CPii-f。处理3天后，如上所述通过测量ATP水平来分析细胞生长，除了CTG在加入孔之前以1:1预稀释于水。根据Loewe相加模型，使用定制软件(组合分析模块)来测定组合活性。简言之，对于浓度矩阵中两种化合物的各组合，组合效应计算为所测抑制与根据Loewe相加模型的抑制之间的差异。组合指数(CI)由以下方程式导出：
其中：
-C(A)和C(B)是组合时引起50％抑制的药物A和B的浓度；和
-EC50(A)和EC50(B)是单独引起50％抑制的药物A和B的浓度。
CI值定量地定义协同作用(CI<1)、累加效应(CI＝1)和拮抗作用(CI>1)。
流式细胞术用于评价CPi与CPii-e之间的组合活性。HUH7细胞以每孔1500个细胞的密度接种于经组织培养处理的96孔板(康宁，目录号3904)的重复孔，并能在37℃、5％CO2加湿培养箱中过夜贴壁。细胞随后暴露于以下药物处理：一定浓度范围的CPi、一定浓度范围的CPii-e和全浓度范围矩阵的两种药剂组合。处理7天后，细胞用PBS洗2次，然后将胰蛋白酶化的细胞以200ul的终体积转移入低贴壁圆底96孔板。根据厂商说明，细胞用10uM终浓度的Sytox溶液(生命技术公司(LifeTechnologies)目录号S7020)标记。分析用FloJo软件完成。组合活性如上所述计算。
结果：
图1阐述当用一定浓度范围的3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲单磷酸盐(本文缩写为CPii-a)和N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(本文缩写为CPi)处理7天后，HUH7细胞的生长抑制。显示两种药剂的棋盘组合在广泛浓度矩阵中的生长抑制百分比(组合数据热图)和协同作用评价(Loewe过量热图)，或50％生长抑制水平(Loewe等效应图)。处理7天后，观察CPi和CPii-a全浓度矩阵的协同组合活性，组合指数为0.327。
图2阐述用一定浓度范围的(R)-8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺(本文缩写为CPii-b)和N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(本文缩写为CPi)处理7天后，HUH7细胞的生长抑制。显示两种药剂的棋盘组合在广泛浓度矩阵中的生长抑制百分比(组合数据热图)和协同作用评价(Loewe过量热图)，或50％生长抑制水平(Loewe等效应图)。处理7天后，观察CPi和CPii-b全浓度矩阵的协同组合活性，组合指数为0.363。
图3阐述用一定浓度范围的7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺琥珀酸盐(本文缩写为CPii-d)和N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(本文缩写为CPi)处理7天后，HUH7细胞的生长抑制。显示两种药剂的棋盘组合在广泛浓度矩阵中的生长抑制百分比(组合数据热图)和协同作用评价(Loewe过量热图)，或50％生长抑制水平(Loewe等效应图)。处理7天后，观察CPii-d和CPi全浓度矩阵的协同组合活性，组合指数为0.729。
图4阐述用一定浓度范围的(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺(本文缩写为CPii-e)和N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(本文缩写为CPi)处理7天后，HUH7细胞的生长抑制。显示两种药剂的棋盘组合在广泛浓度矩阵中的生长抑制百分比(组合数据热图)和协同作用评价(Loewe过量热图)，或50％生长抑制水平(Loewe等效应图)。处理7天后，观察CPi和CPii-e全浓度矩阵的协同组合活性，组合指数为0.385。
图5阐述用一定浓度范围的4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺盐酸盐(本文缩写为CPii-f)和N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺(本文缩写为CPi)处理3天后，HUH7细胞的生长抑制。显示两种药剂的棋盘组合在广泛浓度矩阵中的生长抑制百分比(组合数据热图)和协同作用评价(Loewe过量热图)，或50％生长抑制水平(Loewe等效应图)。处理3天后，观察CPii-f和CPi全浓度矩阵的协同组合活性，组合指数为0.524。
结论：总之，当CPi联合CPii-a,CPii-b,CPii-d,CPii-e或CPii-f时，在体外细胞增殖试验中观察到协同组合活性。

Claims (13)

1.一种药物组合，包括：
(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
2.如权利要求1所述的药物组合，其特征在于，所述组合包括：
(i)N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐或游离形式，和
(ii)至少一种选自下组的其它活性成分：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的单磷酸盐；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的琥珀酸盐；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的盐酸盐。
3.如权利要求1或2所述的药物组合，其特征在于，所述组合还包括至少一种药学上可接受载体。
4.如前述权利要求中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述组合用作药物。
5.如前述权利要求中任一项所述的药物组合，其特征在于，所述组合用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
6.如权利要求1-3中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病如癌症尤其是肝癌的药物中的应用。
7.如权利要求1-3中任一项所述的药物组合在制造治疗增殖性疾病如癌症尤其是肝癌的药物组合物中的应用。
8.如权利要求1-3中任一项所述的药物组合，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和(ii)中活性成分的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
9.一种组合制剂，包括：
(1)一个或多个单位剂型的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式，和
(2)一个或多个单位剂型的其它活性成分，选自下组：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的游离形式或药学上可接受盐形式；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的游离形式或药学上可接受盐形式。
10.如权利要求9所述的组合制剂，其特征在于，所述制剂包括：
(1)一个或多个单位剂型的N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的柠檬酸盐或游离形式，和(2)一个或多个单位剂型的其它活性成分，选自下组：
a)3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲的单磷酸盐；
b)8-(6-氨基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫代)吡嗪-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺的游离形式；
c)7-环戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸二甲基酰胺的琥珀酸盐；
d)(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺的游离形式；和
e)4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺的盐酸盐。
11.一种药物组合物，所述组合物包括如权利要求1-3中任一项所述的组合和至少一种药学上可接受载体。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，N-(5-氰基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)吡啶-2-基)-7-甲酰基-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)-3,4-二氢-1,8-萘啶-1(2H)-甲酰胺的游离形式或药学上可接受盐形式和(ii)中活性成分的游离形式或药学上可接受盐形式以协同有效量提供，用于治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
13.一种商业包装，所述包装包括如权利要求1-3中任一项所述的组合以及其同时或依序施用的说明书，用于延迟增殖性疾病发展或治疗增殖性疾病，如癌症尤其是肝癌。
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