CN107782820A

CN107782820A - 一种布洛芬中遗传毒性杂质对甲苯磺酸乙酯的测定方法

Info

Publication number: CN107782820A
Application number: CN201610798559.2A
Authority: CN
Inventors: 朱琳; 包月红; 赵悦; 叶海英
Original assignee: Jiangsu Chia Tai Fenghai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Chia Tai Fenghai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2016-08-31
Filing date: 2016-08-31
Publication date: 2018-03-09

Abstract

本发明提供了一种气相色谱质谱联用法检测布洛芬中遗传毒性杂质对甲苯磺酸乙酯的方法，主要步骤为：采用5％苯基‑亚芳基和95％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱，配制对照品线性溶液及样品溶液，采用程序升温，样品经气相色谱仪分离后，进入质谱检测器检测，质谱为EI源，选择离子扫描模式定量，选择离子为m/z：91、92、155，以对照品浓度与相应的峰面积计算线性回归方程，并以线性回归方程计算布洛芬中对甲苯磺酸乙酯的含量。本方法简单、快捷、准确、灵敏度高，检测方法科学、客观，可用于布洛芬样品的质量控制，具有实用价值。

Description

一种布洛芬中遗传毒性杂质对甲苯磺酸乙酯的测定方法

技术领域

本发明涉及一种通过气相色谱质谱联用仪测定布洛芬中遗传毒性杂质对甲苯磺酸乙酯的方法。

背景技术

布洛芬是一种非甾体类抗炎药，其化学名称：2-甲基-4-(2-甲基丙基)苯乙酸，分子式为：C₁₃H₁₈O₂，分子量为：206.28，结构式为：

非甾体抗炎药(Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs，NSAIDs)是一类不含有甾体结构的抗炎药，通过抑制前列腺素的合成，发挥其解热、镇痛、消炎作用，在临床上广泛用于骨关节炎、类风湿性关节炎、多种发热和各种疼痛症状的缓解。目前NSAIDs是全球使用最多的药物种类之一，世界大约每天有3000万人在使用。布洛芬作为非甾体抗炎药能刺激人体和实验动物的细胞免疫功能，增加自然杀伤细胞的活力，加速病原微生物的清除，可明显改善免疫功能，提高抗感染能力，因而具有抗炎解热功能。布洛芬1966年首次在英国批准上市，1974年在美国上市。1983年，作为第一个非甾体抗炎药在英国被批准为非处方药，次年被美国批准为非处方药。1985年，全球布洛芬的使用者超过了一亿，具有良好的疗效和安全性记录。

2009年美国FDA上市布洛芬注射液Caldolor，用于经静脉内输注给药缓解轻至中度疼痛和作为阿片类止痛药物的附加用药缓解中至重度疼痛以及治疗发热，该剂型可为不能、不适或不便使用口服药物患者提供一种新的疼痛缓解或发热治疗的选择。因当前市场上无注射级布洛芬原料，用于布洛芬注射液的原料需进行精制，使其可以满足注射剂生产的要求。根据布洛芬的合成工艺可知，布洛芬合成过程中使用了对甲苯磺酸，其残留可能与精制过程中使用的乙醇反应生成对甲苯磺酸乙酯。欧洲药品审评委员会(EMEA)相关技术文件显示，甲磺酸烷基酯杂质可能具有潜在的遗传毒性，毒理学担忧阈值(TTC)估计值是1.5μg/人/日。因此，需建立高灵敏度分析方法严格控制该类杂质。但现有技术中少有关于布洛芬中对甲苯磺酸乙酯的测定方法的相关研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种气相色谱质谱联用的方法，检测布洛芬中遗传毒性杂质对甲苯磺酸乙酯，以控制布洛芬原料质量。

本发明的技术方案如下：

1)色谱条件：

气相色谱条件：

色谱柱：5％苯基-亚芳基和95％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；

柱箱温度：50℃～300℃；

流速：0.5～1.5mL/min；

进样口：200～300℃；

进样量：0.1～2μl；

质谱条件：

检测器：质谱检测器：

离子源：EI源，选择离子扫描模式；

离子源温度：250～300℃；

传输线温度：250～300℃。

2)供试品溶液的配制取布洛芬样品适量，置量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3)对照品线性溶液的配制取对甲苯磺酸乙酯对照品适量，置量瓶中，加溶剂溶解并稀释制成对照品储备液；分别精密量取适量，加溶剂定量稀释制成一系列不同浓度的溶液，作为对照品线性溶液。

4)测定精密量取对照品线性溶液，分别注入气质色谱仪，记录色谱图，以对照品线性溶液浓度与相应的峰面积计算线性回归方程。精密量取供试品溶液，注入气质色谱仪，记录色谱图，按线性回归方程计算对苯甲磺酸乙酯含量。

步骤1)气相色谱条件中所述色谱柱为TG-5MS，长度为30m，口径为0.32mm，膜厚为0.25μm；所述柱箱温度采用程序升温，初始温度50℃，保持2min，以10℃/min速率升温到200℃，再以30℃/min速率升温到300℃，保持10min；所述进样口温度优选为280℃，进样方式为不分流进样，不分流时间1min；柱流速优选为1.0ml/min；所述检测方法色谱条件中进样量为1μl。

步骤1)质谱条件中所述选择离子为m/z：91、92、155；离子源温度优选为280℃，传输线温度优选为280℃。

进一步地，步骤2)和3)所述溶剂选自丙酮、正己烷或其混合。

进一步地，步骤3)所述对照品线性溶液浓度为20～400ng/ml。

进一步地，步骤3)所述对照品线性溶液浓度选自20、40、50、80、100、160、200、300、400ng/ml。

进一步地，步骤3)所述对照品线性溶液浓度为20、40、80、160、300ng/ml。

进一步地，步骤3)所述对照品线性溶液浓度为40、50、100、200、400ng/ml。

本发明提供的技术方案，在发明研究过程中，显示出了布洛芬中对甲苯磺酸乙酯检测的方法学方面的明显优势。

另外，发明人将上述检测方法进行了方法学验证。

1)专属性

取对甲苯磺酸乙酯对照品适量，精密称定，用丙酮溶解并稀释制成每1ml约含200ng的溶液，作为对照品溶液；称取布洛芬样品适量，精密称定，加丙酮溶解并稀释制成每1ml中约含0.5g的溶液，作为供试品溶液；分别进样空白溶剂丙酮、对照品溶液和供试品溶液，考察对甲苯磺酸乙酯与布洛芬的分离情况。结果显示，对甲苯磺酸乙酯的保留时间为15.13min，布洛芬的保留时间为16.22min，空白溶剂、布洛芬均对对甲苯磺酸乙酯的测定无干扰。

2)线性与范围

取对甲苯磺酸乙酯对照品适量，精密称定，用丙酮溶解并稀释制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品储备液；精密量取适量，加丙酮稀释制成每1ml中分别约含8、20、40、80、200、400ng的溶液，作为线性溶液。依法测定，以峰面积为y，浓度(ng/ml)为x，进行线性回归。在20.02～400.36ng/ml浓度范围内，对甲苯磺酸乙酯峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性方程y＝7490.7x–134488，相关系数为0.9995，线性关系良好。

3)检测限与定量限

逐级稀释对照品溶液，至信噪比(S/N)为10:1，为定量限；至信噪比(S/N)为3:1时，为检测限。定量限为20.5ng/ml(相当于供试浓度的0.000004％)，检测限为10.3ng/ml(相当于供试浓度的0.000002％)，远小于限度，满足检测要求。

4)准确度

分别精密称取10份布洛芬(注射级)样品约5g，其中1份加丙酮溶解并稀释制成每1ml中约含0.5g的溶液，作为空白溶液。另9份分成3组，每组分别加入高、中、低三个浓度的对照品溶液，再加丙酮溶解并稀释至刻度，作为回收率供试品溶液，加标浓度分别为100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml。分别依法测定，以标准曲线代入计算对苯甲磺酸乙酯的含量，并计算其回收率。结果显示，各浓度平均回收率均在95％～118％间，回收率RSD(n＝9)为8.3％(＜10％)，满足试验要求，本法准确性良好(表1)。

表1回收率试验结果

5)溶液稳定性

配制对甲苯磺酸乙酯对照品溶液，分别在0、2、4、6、8、10小时测定，考察对甲苯磺酸乙酯峰面积的变化情况并计算RSD。结果表明，对照品溶液在10小时内对甲苯磺酸乙酯的峰面积无明显变化(RSD＝3.1％)，表明在10小时内溶液稳定(表2)。

表2溶液稳定性试验结果

时间(hr)	0	2	4	6	8	10	RSD(％)
								峰面积	1245620	1166839	1156253	1157697	1141305	1172739	3.1

6)进样精密度

配制对甲苯磺酸乙酯对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积及RSD值。结果表明，对照品溶液中对甲苯磺酸乙酯峰面积无明显变化(RSD＝2.2％)，进样精密度良好(表3)。

表3进样精密度试验结果

进样次数	1	2	3	4	5	6	RSD(％)
								峰面积	1390596	1397154	1380680	1424561	1454987	1450133	2.2

7)耐用性

适当改变色谱条件，初温±2℃、流速±0.1ml/min、升温速率±1℃、初温保持±1min，测定布洛芬加标溶液，考察对甲苯磺酸乙酯与布洛芬峰的分离情况以及峰面积的变化。结果表明适当改变色谱条件，对甲苯磺酸乙酯与布洛芬峰均能有效分离(分离度＞1.5)，对甲苯磺酸乙酯峰面积无明显变化(RSD＜10％)，本方法耐用性较好。

综上所述，该方法具有良好的专属性、线性、准确度、稳定性、精密度及耐用性。

本发明采用气相色谱分离，质谱选择离子扫描方式定量，通过标准曲线计算布洛芬中对甲苯磺酸乙酯的含量，方法耗时短，灵敏度高，能够实现快速、准确、批量检测。同时该方法具有方法学意义，使用的仪器及设备均为实验室常规分析设备，发明方法检测成本较低，易于推广。

附图说明

图1为实施例1中对甲苯磺酸乙酯对照品的选择离子流图。

图2为实施例1中对甲苯磺酸乙酯对照品的质谱图。

图3为实施例1中空白溶剂的选择离子流图。

图4为实施例1中线性试验的标准曲线图。

图5为实施例1中布洛芬样品的选择离子流图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细描述。这些实施例仅用于阐明本发明，而不用于限制本发明范围。

实施例1布洛芬中遗传毒性杂质对甲苯磺酸乙酯的检测

1)气相色谱及质谱条件：

色谱柱：TG-5MS(30m×0.32mm，0.25μm)；

升温程序：50℃保持2min，以10℃/min上升到200℃，再以30℃/min上升到300℃保持10分钟；

载气：氦气，恒流模式；

流速：1.0mL/min；

进样口：280℃，不分流进样，不分流时间1min；

进样量：1μl；

MS：EI源，选择离子扫描模式，选择离子为m/z：91、92、155；

离子源温度：280℃；

传输线温度：280℃；

溶剂延迟时间：5min；

2)溶液配制

取布洛芬5g，精密称定，置10ml量瓶中，加丙酮溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取对甲苯磺酸乙酯对照品适量，精密称定，加丙酮溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品储备液；精密量取适量，加丙酮定量稀释制成每1ml中分别约含对甲苯磺酸乙酯40ng、50ng、100ng、200ng、400ng的溶液，作为对照品线性溶液。

3)检测方法及结果

精密量取对照品线性溶液各1μl，分别注入气质色谱仪，记录色谱图(图1～4)，以对照品线性溶液浓度与相应的峰面积计算线性回归方程为y＝9002.6x-14981，R²＝0.9989。精密量取供试品溶液1μl，注入气质色谱仪，记录色谱图(图5)，按线性回归方程计算，所测样品中未检出对苯甲磺酸乙酯。

实施例2布洛芬中遗传毒性杂质对甲苯磺酸乙酯的检测

1)气相色谱及质谱条件：

色谱柱：TG-5MS(30m×0.32mm，0.25μm)；

载气：氦气，恒流模式；

流速：1.0mL/min；

进样口：280℃，不分流进样，不分流时间1min；

进样量：1.0μl

MS：EI源，选择离子扫描模式，选择离子为m/z：91、92、155；

离子源温度：280℃；

传输线温度：280℃；

溶剂延迟时间：5min；

2)溶液配制

取布洛芬2g，精密称定，置10ml量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取对甲苯磺酸乙酯对照品适量，精密称定，加正己烷溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品储备液；精密量取适量，加正己烷定量稀释制成每1ml中分别约含对甲苯磺酸乙酯20ng、40ng、80ng、160ng、300ng的溶液，作为对照品线性溶液。

3)检测方法及结果

精密量取对照品线性溶液各1μl，分别注入气质色谱仪，记录色谱图，以对照品线性溶液浓度与相应的峰面积计算线性回归方程为y＝6052.5x–97379，R²＝0.9998，线性关系良好。精密量取供试品溶液1μl，注入气质色谱仪，记录色谱图，按线性回归方程计算，所测样品未检出对苯甲磺酸乙酯。逐级稀释对照品溶液，至信噪比(S/N)为10:1，为定量限；至信噪比(S/N)为3:1时，为检测限。定量限为20.0ng/ml(相当于供试浓度的0.00001％)，检测限为10.0ng/ml(相当于供试浓度的0.000005％)，检测限与定量限小于限度，满足检测要求。

Claims

1.一种布洛芬中遗传毒性杂质对甲苯磺酸乙酯的检测方法，其特征在于所述方法为气相色谱质谱联用法：

1)色谱条件：

气相色谱条件：

柱箱温度：50℃～300℃；

载气：氦气；

载气流速：0.5～1.5mL/min；

进样方式：不分流进样，不分流时间1min；

进样口温度：200～300℃；

进样量：0.1～2μl

质谱条件：

检测器：质谱检测器：

离子源：EI源，选择离子扫描模式；

离子源温度：250～300℃；

传输线温度：250～300℃；

2)供试品溶液的配制：取布洛芬适量，加溶剂溶解，作为供试品溶液；

3)对照品线性溶液的配制：取对甲苯磺酸乙酯对照品适量，加溶剂溶解成对照品储备液；之后加溶剂定量稀释制成不同浓度的溶液，作为对照品线性溶液；

4)测定方法：精密量取对照品线性溶液，分别注入气相色谱-质谱联用仪，以对照品线性溶液浓度与相应的峰面积计算线性回归方程；精密量取供试品溶液，注入气相色谱-质谱联用仪，记录色谱图，按线性回归方程计算对苯甲磺酸乙酯含量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤1)所述色谱柱为TG-5MS，长度为30m，口径为0.32mm，膜厚为0.25μm。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤1)所述柱箱温度采用程序升温，初始温度50℃，保持2min，以10℃/min速率升温到200℃，再以30℃/min速率升温到300℃，保持10min。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤1)所述进样口温度为280℃，柱流速为1.0ml/min，进样量为1μl。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤1)中选择离子为m/z：91、92、155；离子源温度为280℃，传输线温度为280℃。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤2)和3)所述溶剂选自丙酮、正己烷或其混合。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤3)所述对照品线性溶液浓度范围为20～400ng/ml。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于步骤3)所述对照品线性溶液浓度选自20、40、50、80、100、160、200、300、400ng/ml。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于步骤3)所述对照品线性溶液浓度为20、40、80、160、300ng/ml。

10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于步骤3)所述对照品线性溶液浓度为40、50、100、200、400ng/ml。