[go: up one dir, main page]

CN107669637B - 一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用 - Google Patents

一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107669637B
CN107669637B CN201710945585.8A CN201710945585A CN107669637B CN 107669637 B CN107669637 B CN 107669637B CN 201710945585 A CN201710945585 A CN 201710945585A CN 107669637 B CN107669637 B CN 107669637B
Authority
CN
China
Prior art keywords
artemether
liposome
injection
group
prepared
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201710945585.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107669637A (zh
Inventor
黄桂华
田柳
郝燕云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong University
Original Assignee
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong University filed Critical Shandong University
Priority to CN201710945585.8A priority Critical patent/CN107669637B/zh
Publication of CN107669637A publication Critical patent/CN107669637A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107669637B publication Critical patent/CN107669637B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明提供一种注射用蒿甲醚脂质体，采用乙醇注入法制备得到蒿甲醚脂质体，该方法制备工艺简单，可应用于产业化生产，本发明通过选择适当的材料成分，采用合适的制备工艺，所制备得到的蒿甲醚脂质体粒径小(150～200nm)，粒径大小分布均匀，包封率大于90％。蒿甲醚脂质体在体内缓慢释放，避免药物在注射初期浓度过高而引起的不良反应。同时，发明人发现，采用此法制备得到的蒿甲醚脂质体稳定性高，生物利用度高，复溶性好，贮藏时间长，满足其用药需求。

Description

一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及药物制剂技术领域，特别涉及一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用。
背景技术
青蒿素及其衍生物是从黄花蒿的叶子中提取出的倍半萜脂类的化合物，该类药物为高效、速效的疟原虫红细胞内期杀灭剂，目前主要用于间日疟、恶性疟的症状控制以及耐氯喹虫株的治疗；近期研究发现蒿甲醚具有较强的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞均具有抑制杀伤作用，因此，蒿甲醚的抗肿瘤活性是其新发现的药理作用中的研究热点。蒿甲醚是青蒿素的10-β-甲基二氢衍生物，分子式为C16H26O5。其形状为白色结晶或结晶性粉末。蒿甲醚的抗疟活性比青蒿素强10～20倍，近期复发率比青蒿素低。目前蒿甲醚的上市剂型主要包括胶囊剂、片剂、油溶注射剂。由于蒿甲醚的水溶性差，导致其消化道吸收慢，生物利用度低，生物半衰期较短，有效血药浓度难以维持。而油溶性注射液容易引起过敏等不良反应，注射疼痛，对注射部位有刺激。因此，研究开发安全、高效的新型蒿甲醚给药系统，提高生物利用度，对蒿甲醚在临床中的应用具有积极的意义。
脂质体是指将药物包封于由磷脂和胆固醇组成的脂质双分子层中构成的封闭囊泡，具有淋巴系统趋向性，属于靶向给药系统的一种新剂型。由于构成脂质体的材料与生物体的细胞膜成分相似，所以脂质体的生物相容性良好，很容易被融合进入细胞而进一步释放药物，使其可在特定的组织中保持较高血药浓度，还可改变药物的在体内的组织分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中聚集，可进一步提高药物的疗效、降低药物的毒副作用。将药物制成脂质体后，可保护药物的活性基团不被体内的酶所降解，因此可延长药物在血液中的循环时间。
然而，尽管脂质体存在上述优点，在长期实践研究中发现，脂质体稳定性较差，一般方法制备的脂质体容易聚集融合，有效期较短；而由于脂质体性质不够稳定，其内容物容易泄露，为提高脂质体贮藏稳定性，目前常进行冷冻干燥，临用前加水复溶以形成脂质体混悬液，但是脂质体经冷冻干燥制成冻干粉后易出现脂质体囊泡遭到破坏，药物渗漏现象，冻干后难以恢复至冻干前的状态，内容物或多或少都会发生泄露，因此需要添加冻干保护剂，但是添加此类物质，可能对脂质体的使用安全性产生影响，同时不同药物，不同制备方法制备得到的脂质体其生物利用度也不同，针对不同的药物，脂质体的包封率和载药量差别极大，致使某些药物制备的脂质体载药量极低，从而难以发挥药物的作用。
发明内容
针对上述现有技术的不足，发明人提供一种注射用蒿甲醚脂质体，其不仅能够有效提高蒿甲醚脂质体的生物利用度，而且能够增强蒿甲醚的热稳定性，延长蒿甲醚的有效期。
具体的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的第一个方面，公开了一种注射用蒿甲醚脂质体，通过选用特定重量配比的：蒿甲醚、大豆磷脂和胆固醇，可以形成品质优异的注射用蒿甲醚脂质体。
具体的，本发明提供一种注射用蒿甲醚脂质体，其由以下重量份数比的成分制成：
蒿甲醚1份，大豆磷脂6-8份，胆固醇1-2份；
进一步优选的，所述注射用蒿甲醚脂质体，其由以下重量份数比的成分制成：
蒿甲醚1份，大豆磷脂6份，胆固醇1.5份；
作为用于形成脂质体的磷脂，可以选用天然磷脂和人工合成磷脂，在本发明中，作为药物活性成分的作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。在本发明中，作为药物活性成分的蒿甲醚，其脂溶性较好，而水溶性差。针对蒿甲醚的特点，本发明人通过研究发现大豆磷脂特别适于作为基础磷脂成膜材料。
大豆磷脂作为一种天然磷脂，其含量非常高，容易获得，价格低廉。大豆磷脂的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。而当使用其他磷脂类成分如蛋黄卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇等时，则难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性和渗漏率等性质差。
特别的，在本发明的注射用蒿甲醚脂质体中，相对于1重量份的蒿甲醚而言，大豆磷脂的用量为6-8重量份。如果大豆磷脂的用量低于6重量份，则无法形成稳定的脂质体；而如果大豆磷脂的用量高于8重量份，则作为药物活性成分的蒿甲醚的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。
在本发明中，胆固醇用于调节脂质体的膜稳定性。胆固醇是一种双亲性分子，与大豆磷脂相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入大豆磷脂双层，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。
另一方面，本发明人研究发现，在本发明的注射用蒿甲醚脂质体中，相对于1重量份蒿甲醚而言，大豆磷脂的用量为6-8重量份，胆固醇为1-2重量份时，所形成的蒿甲醚脂质体的包封率更高。特别的，当蒿甲醚、大豆磷脂与胆固醇质量比为1:6:1.5时，此时得到的脂质体稳定性最好，包封率最高。
研究发现，当使用上述特定量的蒿甲醚、大豆磷脂和胆固醇时，可以得到品质优良的蒿甲醚脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。
本发明的又一个方面，公开了蒿甲醚脂质体的制备方法，具体包括步骤如下：
将蒿甲醚、大豆磷脂和胆固醇按比例溶于无水乙醇中进行超声溶解，制成脂质溶液，然后将脂质溶液注入40～45℃的磷酸盐缓冲液(PBS)中，注入完毕后搅拌去除乙醇，然后进行超声处理过滤膜即得蒿甲醚脂质体液体制剂。
其中，所述将蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇、无水乙醇和磷酸盐缓冲液的质量体积比为1:6-8:1-2:0.3-0.4:0.8-1.2(g：g：g：L：L)；
进一步优选的，所述蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇、无水乙醇和磷酸盐缓冲液的质量体积比为1:6:1.5:0.3:1.2(g：g：g：L：L)；
进行超声溶解时超声频率为30-50KHz(优选为40KHz)，进行搅拌去除乙醇时所述搅拌转速为700-800rpm(优选为800rpm)；进行超声处理时超声频率为30-50KHz(优选为40KHz)；
优选的，所述滤膜孔径为0.22μm；
优选的，所述磷酸盐缓冲液pH为6.5；
本发明的又一个方面，公开了上述制备方法制备得到的注射用蒿甲醚脂质体在制备靶向治疗肝癌肿瘤细胞药物中的应用。
如前所述，蒿甲醚传统上用于间日疟、恶性疟的症状控制以及耐氯喹虫株的治疗，然而近期研究表明蒿甲醚具有较强的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞均具有抑制杀伤作用，因此，蒿甲醚的抗肿瘤活性是其新发现的药理作用中的研究热点。而由于脂质体具有缓释效应和靶向效应，因此采用脂质体制备得到蒿甲醚脂质体能够有效提高对肿瘤治疗效果，发明人在动物实验中意外发现，本申请制备得到的蒿甲醚脂质体对肝癌肿瘤细胞具有明显的靶向效应，同时能够蓄积在肝癌肿瘤组织中，表现出良好的抗肝癌肿瘤效果。但是需要说明的，本发明制备得到的蒿甲醚脂质体对脑癌肿瘤、肺癌肿瘤的靶向效应和蓄积效应较差，这亦表明药物制剂在治疗肿瘤癌症过程中的极端复杂性。
本发明采用乙醇注入法制备得到蒿甲醚脂质体，该方法制备工艺简单，可应用于产业化生产，本发明选择安全无毒的无水乙醇作为溶媒溶解脂质材料，意外发现其用量对冷冻干燥后的稳定性影响甚大，发明人发现，在适宜用量范围内，无水乙醇能诱导流动磷脂的酰基链无序化形成一个交错凝胶相，当冷冻干燥过程中，脂质双分子层中大量水分子升华，从而破坏凝胶相结构，导致脂质双分子层融合以及药物的渗漏，而通过控制无水乙醇含量，使得脂质体囊泡内部部分水分子就被乙醇分子取代，而由于蒿甲醚较易溶于乙醇，使得蒿甲醚颗粒包裹于乙醇中，在冷冻干燥过程中在脂质体内部析出形成一种网络样骨架结构，减少药物渗漏，同时减少了水分子对凝胶相结构的破坏，从而维持蒿甲醚脂质体稳定性，显著提高了蒿甲醚脂质体的复溶性，从而有利于减少冻干保护剂的使用，进而降低冻干保护剂对蒿甲醚脂质体的负面影响；同时发明人在研究中发现，超声处理对本申请制备得到的脂质体粒径控制和包封率影响甚大，而采用磷酸盐缓冲液同时控制缓冲液pH，一方面起到对脂质体溶液稀释作用，另一方面使得最终产品处于一个更加稳定的环境中，起到缓冲作用；同时发明人意外发现，蒿甲醚脂质体经pH6.5的磷酸盐缓冲液浸液处理后，其对肝癌肿瘤的靶向效应和蓄积效应得到明显提高；
本发明通过选择适当的材料成分，采用合适的制备工艺，所制备得到的蒿甲醚脂质体粒径小(150～200nm)，粒径大小分布均匀，包封率大于90％；由于蒿甲醚包裹于脂质体磷脂膜上，这种“包封”起到了增强稳定性的作用，避免了药物和血管壁的直接接触，降低了药物的血管刺激性。另外，蒿甲醚脂质体在体内缓慢释放，避免药物在注射初期浓度过高而引起的不良反应。同时，发明人发现，采用此法制备得到的蒿甲醚脂质体稳定性高，生物利用度高，复溶性好，贮藏时间长，满足其用药需求。
附图说明
图1是本发明实施例1制备的得到的新鲜蒿甲醚脂质体图片。
图2是本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体的粒径及粒度分布图。
图3是本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体的电位分布图。
图4是本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体的透射电镜照片。
图5是本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体在不同介质中的粒径变化图。
图6是蒿甲醚增溶溶液和本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体体外释放曲线的比较。
图7是本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体的溶血试验结果(1号为阴性对照，2～6号为不同浓度的蒿甲醚脂质体，7号为阳性对照)；
图8是本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体的溶血率结果；
图9是生理盐水、空白脂质体组、蒿甲醚增溶溶液和本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体给药后，各组小鼠主要器官的病理切片照片。
图10是蒿甲醚增溶溶液和本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体给药后，各组小鼠血浆中药物浓度随时间变化关系图。
图11是生理盐水、空白脂质体组、蒿甲醚增溶溶液和本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体给药后，各组小鼠肿瘤体积随时间变化关系图。
图12是生理盐水、空白脂质体组、蒿甲醚增溶溶液和本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体给药后，各组小鼠肿瘤的外观照片。
图13是生理盐水、空白脂质体组、蒿甲醚增溶溶液和本发明实施例1制备的蒿甲醚脂质体给药后，各组小鼠肿瘤的病理切片照片。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
正如背景技术中所介绍的，蒿甲醚的水溶性差，导致其消化道吸收慢，生物利用度低，生物半衰期较短，有效血药浓度难以维持。而油溶性注射液容易引起过敏等不良反应，注射疼痛，对注射部位有刺激，患者的顺应性较差。因此，研究开发安全、高效的新型蒿甲醚给药系统，提高生物利用度，对蒿甲醚在临床中的应用具有积极的意义。
有鉴于此，本发明的一种具体实施方式中，提供一种注射用蒿甲醚脂质体，其由以下重量份数比的成分制成：
蒿甲醚1份，大豆磷脂6-8份，胆固醇1-2份；
进一步优选的，所述注射用蒿甲醚脂质体，其由以下重量份数比的成分制成：
蒿甲醚1份，大豆磷脂6份，胆固醇1.5份；
本发明的又一具体实施方式中，公开了蒿甲醚脂质体的制备方法，具体包括步骤如下：
将蒿甲醚、大豆磷脂和胆固醇按比例溶于无水乙醇中进行超声溶解，制成脂质溶液，然后将脂质溶液注入40～45℃的磷酸盐缓冲液(PBS)中，注入完毕后搅拌去除乙醇，然后进行超声处理过滤膜即得蒿甲醚脂质体液体制剂。
本发明的又一具体实施方式中，所述将蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇、无水乙醇和磷酸盐缓冲液的质量体积比为1:6-8:1-2：0.3-0.4：0.8-1.2(g：g：g：L：L)；
本发明的又一具体实施方式中，所述蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇、无水乙醇和磷酸盐缓冲液的质量体积比为1:6:1.5:0.3:1.2(g：g：g：L：L)；
本发明的又一具体实施方式中，进行超声溶解时超声频率为30-50KHz(优选为40KHz)，进行搅拌去除乙醇时所述搅拌转速为700-800rpm(优选为800rpm)；进行超声处理时超声频率为30-50KHz(优选为40KHz)；
优选的，所述滤膜孔径为0.22μm；
优选的，所述磷酸盐缓冲液pH为6.5；
本发明的又一具体实施方式中，公开了上述制备方法制备得到的注射用蒿甲醚脂质体在制备靶向治疗肝癌肿瘤细胞药物中的应用，所述靶向治疗肝癌肿瘤细胞药物为注射剂。
以下通过实施例的方式对本发明做进一步阐述。
实施例1
Figure BDA0001426998900000061
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的12ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以800rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(40KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实施例2
Figure BDA0001426998900000071
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用4ml的无水乙醇30KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的10ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以700rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(40KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实施例3
Figure BDA0001426998900000072
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用4ml的无水乙醇50KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的10ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以700rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(30KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实施例4
Figure BDA0001426998900000081
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的10ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以700rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(40KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实施例5
Figure BDA0001426998900000082
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至40℃的12ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以700rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(30KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实施例6
Figure BDA0001426998900000083
Figure BDA0001426998900000091
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的8ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以700rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(40KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实施例7
Figure BDA0001426998900000092
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的12ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以800rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(30KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实验例8
Figure BDA0001426998900000093
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的12ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以800rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(40KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实验例9
Figure BDA0001426998900000101
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用7ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的12ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以800rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(40KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实验例10
Figure BDA0001426998900000102
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的12ml的柠檬酸盐缓冲溶液中，用电子恒速搅拌器以800rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(40KHz)
后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
实验例11
Figure BDA0001426998900000111
制备工艺：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的12ml的磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液中，用电子恒速搅拌器以800rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经超声(40KHz)后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体。
对实施例1～7和实验例8～11的脂质体测定其脂质体悬混液中蒿甲醚脂质体包封率(包封率I)、载药量和粒径大小及经冷冻干燥后采用注射水水化重组后的脂质体(包封率II)如下表所示。
Figure BDA0001426998900000112
Figure BDA0001426998900000121
稳定性质量考察
参照中国药典附录对上述实施例1-7和实施例8-11所制备的脂质体经长期稳定性考察，对性状、澄明度、有关物质和含量进行检验并统计，结果见下表：
Figure BDA0001426998900000122
Figure BDA0001426998900000131
Figure BDA0001426998900000141
由上表可知，脱离本发明各原料最适配比或更换本发明原料(实施例8、9)，则包封率和载药量明显降低，同时稳定性实验亦不理想，特别是实施例9，仅仅增加了无水乙醇用量，脂质体悬混液中蒿甲醚脂质体包封率降低作用并不明显，但是经冷冻干燥后复溶后的蒿甲醚脂质体包封率却显著降低；同时需要说明的是，发明人在缓冲液的选择上，除使用PBS缓冲液外，还选择使用柠檬酸盐缓冲溶液和磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液，二者在包封率、载药量及稳定性实验方面与采用PBS缓冲液的本发明技术方案相当甚至部分指标优于本发明，但是发明人采用实验例10和实验例11制备得到的蒿甲醚脂质体在对小鼠肝癌肿瘤治疗试验中，发现二者对肝癌肿瘤的靶向效应和蓄积效应均显著低于实施例1蒿甲醚脂质体(p<0.05)，这表明pH6.5的磷酸盐缓冲液对制备得到的蒿甲醚脂质体对肝癌肿瘤细胞的靶向及蓄积效应影响甚大，由于本发明脂质体为被动靶向，实现靶向效果受众多因素影响，包括EPR效应、肿瘤区域微环境、肿瘤细胞内的还原环境等，而这些因素又和脂质体的粒径、电荷分布、脂质体组成、pH等紧密相关，发明人认为通过pH6.5的磷酸盐缓冲液处理后的本发明蒿甲醚脂质体上述条件更好满足对肝癌肿瘤的靶向定位，同时使得脂质体更有利于在肝癌肿瘤细胞内蓄积，从而实现蒿甲醚对肝癌肿瘤细胞的高效治疗。
实验部分
1.蒿甲醚脂质体在不同介质中稳定性的考察
以蒿甲醚脂质体的粒径变化为评价指标，分别考察其在10％血浆-生理盐水溶液和pH7.4PBS溶液中的稳定性，试验结果如图5所示，蒿甲醚脂质体混悬剂与10％血浆孵育后，前24h时，其粒径未发生明显变化。说明蒿甲醚脂质体在上述两种介质中具有一定的稳定性，可在体内维持较完整的结构。在24h后，蒿甲醚脂质体在PBS粒径无明显变化，具有良好的稳定性。而在10％的血浆中，其粒径明显增大，最大的粒径接近于1100nm，肉眼可见絮状物。说明在此条件下，蒿甲醚脂质体的脂质双分子层结构遭到了破坏，药物可释放较为充分。
2.体外释放试验
参考动态膜透析法对本发明的脂质体的体外释放进行研究。取蒿甲醚增溶溶液和本发明实施例1脂质体各3份，每份含蒿甲醚约2mg，置于已经进行了预处理的透析袋中，扎紧袋口，放入含有25mL释放介质的透析管中，将试样置恒温振荡器中，控制温度在(37±1)℃，转速为100rpm，按照设定的时间点，定时吸取透析液1.0mL并及时补充等量的释放介质，测定药物浓度，计算累积释放率Q(％)。以Q平均值为纵坐标，以释放时间(t)为横坐标，绘制体外释放曲线见图6。
由图6可知，蒿甲醚增溶溶液组在pH7.4的PBS中，前8h的累积释放百分率达到80％以上，而蒿甲醚脂质体组的释放无明显突释，在8h时，蒿甲醚脂质体组释放了(50.46±2.03)％，在48h时，其累积释放百分率达到(79.35±2.10)％，释放速度明显慢于蒿甲醚增溶溶液组。
3.安全性试验
3.1.溶血试验
取7只试管分别编号1-7，其中1号管为阴性对照管，无溶血现象；7号为阳性对照管，即有溶血现象；2-6号管为样品管。按表1所示依次加入2％红细胞混悬液、脂质体混悬液、生理盐水、蒸馏水，将其混匀后，于37℃下恒温孵育3h。孵育完成后，将样品溶液置于离心机中，3000rpm离心10min。观察上清液，判断是否发生溶血。于紫外下检测其溶血率，判断其溶血程度。观察7只试管的溶血情况，结果见图7。
表1溶血试验设计
Figure BDA0001426998900000161
通过肉眼观察和紫外分光光度法对各组溶血情况进行判断。
用肉眼观察7支试管的溶血情况，结果如图7；由图7结果可知，蒿甲醚脂质体混悬液在肉眼观察下无明显的溶血情况。
采用紫外分光光度法测得蒿甲醚脂质体(ARM-Lips)的溶血率见图8；由上结果可知，蒿甲醚脂质体在各浓度下的溶血百分率均小5％，表明其可安全应用于静脉注射。
3.2.病理切片
观察病理学变化的小鼠中，共分为四组，每组3只，分别为NS组、blank-Lips组、蒿甲醚增溶溶液(ARM-Sol)组、ARM-Lips)组。给药剂量为20mg/kg，每2天给药一次，连续给药10天。10天后，处死小鼠后，将其正常器官组织进行HE染色，以观察各组制剂对正常器官组织的毒副作用；由图9可知，在结束给药后，蒿甲醚脂质体组小鼠各主要器官形态与生理盐水组相比，无明显病理变化。因此，脂质体作为蒿甲醚的载体，毒性较低，具有良好的生物相容性。
4.药动学试验
取66只昆明小鼠，随机分为2组，分别为蒿甲醚溶液组和蒿甲醚脂质体组。给药剂量为20mg/kg，给药方式为尾静脉推注。分别于给药后0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、10h时，摘小鼠眼球取血500μL，取血后，将小鼠脱颈处死。将血浆置于用肝素润洗的EP管中，离心(12 000rpm)15min，取出上清液，于-20℃冰箱内保存，待测；DAS2.0(Drug And Statisticsfor Windows)药代动力学程序对小鼠血浆中的药物浓度测定结果进行处理，计算药物动力学参数，其中，平均血药浓度与时间变化曲线如图10所示。
将血药浓度的测定结果用DAS 2.0(Drug And Statistics for Windows)药代动力学软件进行处理，求算药物动力学参数，结果如表2所示。
表2蒿甲醚的两种制剂在小鼠血浆内的动力学参数
Figure BDA0001426998900000171
由上表和图10可知，与ARM-Sol相比，ARM-Lips在体内的循环时间显著延长，t1/2β延长了8.375倍，MRT分别增加了3.38倍，AUC分别增加了3.11倍。
5.药效学试验
在小鼠左侧腋下接种H22肝癌肿瘤细胞。选择对数生长期的H22细胞，确定细胞活性＞95％，用PBS清洗、混悬、计数。固定小鼠，用酒精消毒其左腋下，接种0.1mL的H22细胞悬液(2×107/mL)。用游标卡尺测量肿瘤的长、短径，应用公式瘤体积＝(L×W2)/2计算肿瘤的体积。
当肿瘤体积＞100mm3时，从60只的肿瘤模型小鼠中优选出41只肿瘤体积相近，体重差异小于1g的小鼠。
在观察体积变化的小鼠中，共分为4组，每组8只，分别为生理盐水组(NS)、空白脂质体组(blank-Lips)、蒿甲醚增溶溶液组(ARM-Sol)、蒿甲醚脂质体组(ARM-Lips)。给药剂量为20mg/kg，每2天给药一次，连续给药10天，在给药后一天测量小鼠的体重以及肿瘤的长径和短径，计算小鼠的肿瘤体积。分别绘制其肿瘤体积和小鼠体重的变化曲线。10天后，处死小鼠，剥离瘤体，并称量其重量。
在观察病理学变化的小鼠中，共分为四组，每组3只，分别为NS组、blank-Lips组、ARM-Sol组、ARM-Lips组。给药方式、剂量和时间与上述相同。10天后，处死小鼠后，将其肿瘤和正常器官组织进行HE染色，以观察各组制剂中，肿瘤的结构差异以及对正常器官组织的毒副作用。
在给药后第11天处死小鼠，剥离瘤体称重并拍照，结果见图12。
在给药后第11天剥取各组瘤体肉眼观察，可见空白脂质体组和生理盐水组的肿瘤体积较大，蒿甲醚溶液组次之，而蒿甲醚脂质体组最小，瘤重由大到小排序依次是：空白脂质体组〉生理盐水组〉蒿甲醚溶液组〉蒿甲醚脂质体组。结果表明，脂质体组和溶液组均能不同程度的抑制肿瘤的生长，而脂质体组的瘤重又小于溶液组，说明蒿甲醚脂质体的抗肿瘤效果要比蒿甲醚溶液组好。
通过病理切片考察蒿甲醚脂质体给药后肿瘤结构的差异，结果分别如图13。由图13可知，结束给药后，生理盐水组组与空白脂质体组的肿瘤细胞结构完整，核分裂像明显，大部分肿瘤细胞呈增殖分裂旺盛的状态；蒿甲醚溶液组中，可见小部分肿瘤细胞结构被破坏，而大部分肿瘤细胞仍呈现出活跃增殖的状态；蒿甲醚脂质体组中，肿瘤细胞结构破坏严重，呈现大片坏死的状态，炎细胞浸润，核分裂数减少。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种注射用蒿甲醚脂质体在制备靶向治疗肝癌肿瘤细胞药物中的应用；
所述注射用蒿甲醚脂质体的制备方法包括步骤如下：
将处方量的蒿甲醚、大豆磷脂、胆固醇用3ml的无水乙醇40KHz超声溶解，混匀，将混合液用微量加样器缓慢注入到加热至45℃的12ml的PBS中，用电子恒速搅拌器以800rpm的速度搅拌至无水乙醇除尽为止，所得混悬液经40KHz超声后，通过0.22μm的微孔滤膜，即得蒿甲醚脂质体；
Figure FDF0000012774590000011
CN201710945585.8A 2017-09-30 2017-09-30 一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用 Expired - Fee Related CN107669637B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710945585.8A CN107669637B (zh) 2017-09-30 2017-09-30 一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710945585.8A CN107669637B (zh) 2017-09-30 2017-09-30 一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107669637A CN107669637A (zh) 2018-02-09
CN107669637B true CN107669637B (zh) 2021-11-02

Family

ID=61141170

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710945585.8A Expired - Fee Related CN107669637B (zh) 2017-09-30 2017-09-30 一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107669637B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11246836B2 (en) * 2018-05-17 2022-02-15 Bluelight Pharmatech Co., Ltd. Intramuscular depot of decoquinate compositions and method of prophylaxis and treatment thereof
CN113521006B (zh) * 2021-07-14 2023-04-28 广州中医药大学(广州中医药研究院) 蒿甲醚脂质体、红细胞膜包脂质体、靶向肽修饰仿生脂质体及其制备方法和治疗疟疾的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103417530A (zh) * 2013-09-03 2013-12-04 福州大学 一种青蒿素衍生物及其脂质体在制备声敏剂中的应用
CN106474064A (zh) * 2015-08-27 2017-03-08 昆药集团股份有限公司 一种蒿甲醚纳米脂质体及其制备方法与应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103417530A (zh) * 2013-09-03 2013-12-04 福州大学 一种青蒿素衍生物及其脂质体在制备声敏剂中的应用
CN106474064A (zh) * 2015-08-27 2017-03-08 昆药集团股份有限公司 一种蒿甲醚纳米脂质体及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN107669637A (zh) 2018-02-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103083239B (zh) 一种蟾毒灵脂质体及其制备方法和应用
CN105853403B (zh) 一种紫杉醇棕榈酸酯脂质体及其制备方法
WO2022088708A1 (zh) 血筒素靶向载药体系、制备方法及其应用
CN105456194A (zh) 厚朴酚脂质体及其衍生制剂和制备方法
Xin et al. PLGA nanoparticles introduction into mitoxantrone-loaded ultrasound-responsive liposomes: In vitro and in vivo investigations
WO2008080369A1 (fr) Composition liposomale stable
CN105708847A (zh) 人参皂苷多组分共载靶向纳米体系的制备方法及其应用
CN113304119A (zh) 一种外泌体联合索拉非尼脂质体的构建方法
CN102579337B (zh) 含有多西他赛的长循环脂质纳米混悬剂及其制备方法
TW202312985A (zh) 靶向動脈粥樣硬化脂質體奈米載體遞送系統及其製備方法
CN102379850B (zh) 一种穿越人体粘液屏障的靶向给药脂质体
CN113679670A (zh) 一种载氯喹化合物的囊泡纳米药物及其制备方法与应用
CN107669637B (zh) 一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用
CN103989624A (zh) 一种盐酸伊立替康组合物及其制备方法
CN105919935B (zh) 索拉非尼药物脂质纳米混悬剂及其制备方法
CN104045823B (zh) 一种甘草次酸衍生物及其制备方法和应用
CN109381429A (zh) 一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体及其制备方法
CN102366408A (zh) 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂
CN112891339A (zh) 包封青蒿素的血红素纳米囊泡、制备方法和用途
CN112370529A (zh) 一种治疗肺动脉高压的复方制剂与制备方法
CN115463110B (zh) 一种胆酸修饰的口服紫杉醇纳米粒、其制备方法及应用
CN104771361B (zh) 一种盐酸拓扑替康脂质体纳米制剂及其制备方法
CN109172520A (zh) 一种紫杉烷类衍生物tm-2胶束注射液及其制备方法与应用
CN114788811A (zh) 一种盐酸吉西他滨壳聚糖胶束及其制备方法
CN113840624B (zh) 单醣标记的纳米脂质体药物递送系统，其制法及其作为药物靶定递送载体的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20211102