CN107648311A - 具有抗病毒和抗炎作用的组合物及药物 - Google Patents

Abstract

具有抗病毒和抗炎作用的组合物及药物。所述的组合物由黄芩黄酮总苷元提取物和穿心莲总内酯提取物组成，其中以黄芩素计的黄芩黄酮总苷元提取物与以穿心莲内酯计的穿心莲总内酯提取物的重量比为1:(0.05‑0.5)。以该组合物为有效成分，与药物中可以接受的辅助和/或添加成分即可共同组成相应具有抗病毒和抗炎作用的药物，优选为口服型药物制剂。该组合物和相应的药物相较于现有报道的同类药物，在药物经济学和药效作用方面可具有更优越的效果和应用价值。

Description

具有抗病毒和抗炎作用的组合物及药物

技术领域

本发明涉及一种改进的具有抗病毒和抗炎作用的组合物及相应的药物。

背景技术

黄芩和穿心莲为清热解毒的常用中药，黄芩主要有效成分为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素（即黄芩苷元）、汉黄芩素等黄酮类化合物，一般认为其中黄芩苷元的作用要强于黄芩苷。穿心莲的主要有效成分为穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯等内酯类化合物。CN1234355B的中国专利中公开了一种由黄芩素/穿心莲内酯以重量比10/2~10/20组成的具有抗感染和抗炎作用的药物组合物。深入的研究发现，该药物组合物还有可以进一步优化、完善和提高的改进之处。

发明内容

在上述文献内容的基础上，本发明进一步提供了一种更为优化和改进的具有抗病毒和抗炎作用的组合物，以及以该组合物为有效成分的具有抗病毒和抗炎作用的相应药物。

本发明具有抗病毒和抗炎作用的组合物，是由黄芩黄酮总苷元提取物和穿心莲总内酯提取物组成，其中，以黄芩素计的黄芩黄酮总苷元提取物与以穿心莲内酯计的穿心莲总内酯提取物的重量比为1:(0.05-0.5)。在此基础上，所述的以黄芩素计的黄芩黄酮总苷元提取物与以穿心莲内酯计的穿心莲总内酯提取物进一步优选的重量比为≥1:0.1并且＜1:0.2。

为尽量减少和避免在所述黄芩黄酮总苷元提取物和/或穿心莲总内酯提取物中存在多种类和/或比例量的其它成分可能产生或带来的不利影响，上述组合物的更好方式是，所述的黄芩黄酮总苷元提取物中的黄芩素和汉黄芩素的总重量≥60%，和/或所述的穿心莲总内酯提取物中的穿心莲内酯和新穿心莲内酯的总重量≥20%，以使上述组合物的质量及其效果能有更可靠的保证和提高。

在上述形式的组合物中，所述的黄芩黄酮总苷元提取物除可以采用目前已有报道和/或使用的各种方法得到外，优选的是采用本申请人在中国专利CN104606288A中所报道的方法制备得到的黄芩黄酮总苷元提取物。即，在0~30℃和pH 值2~7的条件下，对黄芩药材原料用水浸提，收集浸提液后的剩余药渣再于pH 值5~7的条件下置沸水中继续煎煮提取，收集煎煮提取液后，将浸提液与煎煮提取液合并，于室温至＜70℃条件下维持3~20小时，收集沉淀物或可进一步干燥后，即得所述的黄芩黄酮总苷元提取物。该方法不仅操作简便和成本低，而且所得提取物的收率高。

对于上述形式的组合物中所述的穿心莲总内酯提取物，由于难溶于水而易溶于乙醇，因此除可以采用目前已有报道和/或使用的各种方法，如大孔树脂色谱法、溶剂萃取法或柱层析分离法等方式得到外，可优选参照张玲等“穿心莲的提取工艺研究”（时珍国医国药，2003,14(8):458），和/或李志享等“穿心莲总内酯的研究进展”（时珍国医国药，2012,23(11):2854）等文献报道的方法，即下述方式醇提水沉方法：

方法1，将穿心莲粉碎后，用体积含量为40~90%的乙醇-水溶液提取，提取液除去乙醇后用水稀释进行固液分离，得到沉淀物形式的穿心莲总内酯提取物；或者

方法2，将穿心莲粉碎后，用体积含量为40~90%的乙醇-水溶液提取，提取液经活性炭和/或膜分离脱色除杂后，除去乙醇，用水稀释进行固液分离，得到沉淀物形式的穿心莲总内酯提取物；

所述用体积含量为40~90%的乙醇-水溶液的提取，包括以所述溶液的渗漉、回流、超声方式提取。

上述穿心莲总内酯提取物的制备方法简便可行，生产成本低廉。

在上述组合物的基础上，以所述组合物为有效成分，与药物中可以接受的辅助和/或添加成分，按照目前常规的工艺和方法，可以制备成具有相应抗病毒和抗炎作用的药物。例如，作为一种优选的形式，是可与在口服制剂中可以被接受的崩解剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、填充剂等常用的辅助/添加成份混合后，按相应的现有常规工艺和方法处理，即可制成为相应的片剂、丸剂、胶囊剂，或适当形式的缓释剂、控释剂等口服型制剂的药物。

本领域熟知，中药药效作用的发挥，具有多成分、多靶点、多途径的协同整合作用。现有研究表明，黄芩黄酮总苷元提取物中除黄芩素外，还含有汉黄芩素、千层纸素A等苷元类成分，虽也能具有黄芩素相似的功效，但也还具有其各自的特点；穿心莲总内酯提取物中除穿心莲内酯外，还含有新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯等，除具有与穿心莲内酯相似的作用外，也还具有其各自的特点。深入研究表明，这些成分的组合，除可分别对黄芩素和穿心莲内酯的作用有所加强外，不仅在其各自的抗病毒和抗炎的综合作用上，而且在所述两种提取物组合后的抗病毒和抗炎综合作用方面，还可以起到显著的协同增效作用及互补作用，药效作用能明显优于相应比例量单纯由黄芩素/穿心莲内酯组成的药物组合物。同时，还能避免为单纯获得黄芩素和穿心莲内酯成分，而使包括汉黄芩素、千层纸素A、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯等其它更多有益成分中药物有效成分的丢失和浪费，使中药材资源得到更充分和更好的利用，也显著降低成本和价格，惠及民生。因此在药物经济学和药效作用方面都更具有显著的优越性。

以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。

具体实施方式

实施例1

取黄芩药材20公斤粉碎过10目筛，加水250升，于约15-25℃和pH值~3的条件下搅拌浸提0.5-1小时，滤过，滤液高速离心至澄清，收集浸提液，备用。药渣加入8-10倍量的沸水中调pH值~6，煎煮0.5小时，滤过，滤液备用；药渣再加8-10倍量水煎煮1-2次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，高速离心至澄清，收集提取液，与上述浸提液合并，调pH值~5，加热至50℃左右并保温8-10小时，析出沉淀；过滤，水洗，干燥，即得黄芩黄酮总苷元提取物，收率为10.2%，黄芩素和汉黄芩素含量为67.2%，其中，黄芩素含量为55.3%。

穿心莲粉碎，按渗漉法常规操作，先用适量50%乙醇浸润，密闭放置3-6 h，使药粉均匀润湿和膨胀，装入渗漉筒，加50%乙醇浸渍3-5 h后，以2-4 mL/min×kg的速度渗漉，收集6-8倍量的渗漉液，减压回收除尽乙醇，加水稀释至约1 g/mL（以生药计），离心，固液分离，沉淀干燥，即得穿心莲总内酯提取物，收率为4.0%，穿心莲内酯和新穿心莲内酯的重量含量为23.4%，其中，穿心莲内酯含量为18.5%。

分别取上述黄芩黄酮总苷元提取物1000g（以黄芩素计）、穿心莲总内酯提取物100g（以穿心莲内酯计），加辅料淀粉1000g，混合均匀，制粒，压制10000片，即得本发明所述的片剂。

实施例2

取黄芩药材20公斤粉碎过20目筛，加水200升，于约0-10℃和pH值5~6的条件下搅拌浸提0.5-1小时，滤过，滤液高速离心至澄清，收集浸提液，备用。药渣加入10-12倍量的沸水中调pH值~6，煎煮0.5小时，滤过，滤液备用；药渣再加6-10倍量水煎煮1-2次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，高速离心至澄清，收集提取液，与上述浸提液合并，调pH值~6，加热至40℃左右并保温10-15小时，析出沉淀；过滤，水洗，干燥，即得黄芩黄酮总苷元提取物，收率为9.5%，黄芩素和汉黄芩素含量为75.3%，其中，黄芩素含量为61.6%。

穿心莲粉碎，按回流法常规操作，用6-10倍量的70%乙醇回流提取2-3次，每次1-2小时，滤过，滤液经活性炭脱色和/或膜分离脱色除杂后，除尽乙醇，加水稀释至约2 g/mL（以生药计），离心，固液分离，沉淀干燥，即得穿心莲总内酯提取物，收率为2.9%，穿心莲内酯和新穿心莲内酯的重量含量为31.8%，其中，穿心莲内酯含量为25.1%。

分别取上述黄芩黄酮总苷元提取物1000g（以黄芩素计）、穿心莲总内酯提取物200g（以穿心莲内酯计），加入到PEG-6000熔融液中，充分搅拌均匀，在滴丸机中制成10000粒滴丸，即得本发明所述的丸剂型药物。

实施例3

分别取实施例1的黄芩黄酮总苷元提取物1000g（以黄芩素计）、穿心莲总内酯提取物500g（以穿心莲内酯计），干压制粒，装制胶囊10000粒，即得本发明所述的胶囊剂。

实施例4

分别取实施例2的黄芩黄酮总苷元提取物1000g（以黄芩素计）、穿心莲总内酯提取物50g（以穿心莲内酯计），加辅料淀粉适量，混合均匀，制粒，压制10000片，即得本发明所述的片剂。

以本发明实施例1所述的黄芩黄酮总苷元提取物、穿心莲总内酯提取物按不同比例组成的组合物作为试验药物，进行了抗病毒、抗炎作用的药效学试验。同时，按常规方法采用柱层析分离，从黄芩黄酮总苷元提取物中分离得到黄芩素单一成分（含量≥98.0%），从穿心莲总内酯提取物中分离得到穿心莲内酯单一成分（含量≥98.0%），以此为有效成分，与前述CN1234355B的以单一的黄芩素/穿心莲内酯形式的组合物进行对比试验。

一、抗病毒作用

采用组织细胞半数感染量（TCID₅₀）的方法，根据药物对细胞病变的抑制效果，以确定试验药物对Adv3和RSV的抗病毒效果。

1. 药液配制：用RPMI-1640对上述各试验药物进行对倍稀释，其药液浓度分别为1.0mg/ml，0.5mg/ml，0.25mg/ml，0.125mg/ml（均以黄芩素和穿心莲内酯计）。病毒唑的浓度分别为0.062，0.031，0.015和0.008 mg/ml。

2. 对Vero细胞和Hep-2细胞的最大无毒浓度测定：在96孔细胞培养板的Vero单层细胞和Hep-2单层细胞中分别加入不同浓度的试验药物，置37℃和5% CO₂培养箱中96小时，观察细胞病变，测定其对Vero细胞和Hep-2单层细胞的最大无毒浓度。

3. 对Adv3病毒致Vero细胞病变的抑制试验：在96孔细胞培养板的Vero单层细胞内，每孔感染Adv3 10TCID₅₀(7LgTCID₅₀)病毒液，2小时后倾去病毒液，每孔内再加入不同浓度的试验药物或病毒唑，培养96小时后观察细胞病变。

4. 对RSV病毒致Hep-2细胞病变的抑制试验：在96孔细胞培养板的Hep-2单层细胞内，每孔感染RSV 10TCID₅₀(6LgTCID₅₀)病毒液，2小时后倾去病毒液，每孔内再加入不同浓度的试验药物或病毒唑，培养96小时后观察细胞病变。

5. 实验结果

（1）各试验药物对Vero细胞的最大无毒浓度，经CPE法测定均小于2.0mg/ml 。正式药物试验中则采用小于2.0mg/ml 的药物进行体外抗病毒试验。

（2）各试验药物对Adv3病毒致Vero细胞病变的抑制作用，对RSV病毒致Hep-2细胞病变的抑制作用。试验结果如表1所示。其中，试验药物Ⅰ～Ⅳ组为不同比例的本发明药物组合物（10:0.5，10:1，10:2，10:5），Ⅴ和Ⅵ两组分别为CN1234355B的药物组合物（10:1和10:2）。

表1结果表明，本发明组合物的各种组成比例的黄芩黄酮总苷元提取物/穿心莲总内酯提取物组合物（Ⅰ～Ⅳ）对Adv3和RSV均具有显著的抑制作用，且强于相应比例量的CN1234355B药物组合物（Ⅴ和 Ⅵ），其中本发明组合物中的优选比例为10:1（Ⅱ）和10:2（Ⅲ）。

二、抗炎作用

在上述试验结果的基础上，以黄芩黄酮总苷元提取物/穿心莲总内酯提取物(以黄芩素和穿心莲内酯计，10:1（Ⅰ）、10:2（Ⅱ）)的本发明药物组合物，以及黄芩素/穿心莲内酯﹝10:1（Ⅲ）、10:2（Ⅳ）﹞对比药物组合物为试验药物进一步进行了下述抗炎作用的实验研究。

1. 对小鼠棉球肉芽肿的影响 雄性小鼠60只随机分为6组，在戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉下，于各鼠右侧腋窝下消毒，切口0.3cm，皮下植入10mg灭菌棉球，缝合消毒。此后每日各组ig给药，每天一次，连续14d。未次给药后24h摘取带肉芽组织的棉球在60℃ 18h干燥后称重，用带肉芽的棉球重量减去棉球重量（10mg），即为肉芽组织重量，结果如表2所示。由表2可见本发明药物试验样品黄芩黄酮总苷元提取物/穿心莲总内酯提取物组合物(（10:1、10:2，0.4g/kg（以黄芩素和穿心莲内酯计）），对棉球肉芽组织重量均有明显的抑制作用，且强于黄芩素/穿心莲内酯组合物（10:1、10:2）的相应剂量组。

2. 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 小鼠60只随机分为10组，ig给药1h后，尾静脉注射1%伊文思蓝0.1ml/只，并同时腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/只，20min后，拉颈椎处死动物，剪开腹腔，用5ml蒸馏水冲洗腹腔数次，吸取腹腔洗出液离心5min，590nm测定吸收值（OD），结果如表2所示。

表2结果表明，本发明药物试验样品黄芩黄酮总苷元提取物/穿心莲总内酯提取物组合物（10:1、10:2），均能明显抑制小鼠腹腔毛细血管通透性，且强于黄芩素/穿心莲内酯组合物（10:1、10:2）的相应剂量组。

上述的试验结果清楚表明，采用本发明提出的黄芩黄酮总苷元提取物和穿心莲总内酯提取物组成形式的组合物，以及以该组合物作为有效药用成分的药物，其抗病毒和抗炎作用的效果明显强于包括CN1234355B在内的单一采用由黄芩素和穿心莲内酯为有效药用成分的药物组合物，是在其基础上的一种具有更加显著优越性的进一步优化的组合物和药物，具有令人满意的开发前景和价值。

Claims (7)

1.具有抗病毒和抗炎作用的组合物，其特征是由黄芩黄酮总苷元提取物和穿心莲总内酯提取物组成，其中以黄芩素计的黄芩黄酮总苷元提取物与以穿心莲内酯计的穿心莲总内酯提取物的重量比为1:(0.05-0.5)。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征是所述的以黄芩素计的黄芩黄酮总苷元提取物与以穿心莲内酯计的穿心莲总内酯提取物的重量比为≥1:0.1并且＜1:0.2。

3.如权利要求1或2所述的组合物，其特征是所述的黄芩黄酮总苷元提取物中的黄芩素和汉黄芩素的总重量≥60%，所述的穿心莲总内酯提取物中的穿心莲内酯和新穿心莲内酯的总重量≥20%。

4.如权利要求1或2所述的组合物，其特征是所述的黄芩黄酮总苷元提取物为采用中国专利CN104606288A的方法制备得到的黄芩黄酮总苷元提取物。

5.如权利要求1或2所述的组合物，其特征是所述的穿心莲总内酯提取物为采用下述方法制备得到的产物：

方法1，将穿心莲粉碎后，用体积含量为40~90%的乙醇-水溶液提取，提取液除去乙醇后用水稀释进行固液分离，得到沉淀物形式的穿心莲总内酯提取物；或者

方法2，将穿心莲粉碎后，用体积含量为40~90%的乙醇-水溶液提取，提取液经活性炭和/或膜分离脱色除杂后，除去乙醇，用水稀释进行固液分离，得到沉淀物形式的穿心莲总内酯提取物；

所述用体积含量为40~90%的乙醇-水溶液的提取，包括以所述溶液的渗漉、回流、超声方式提取。

6.具有抗病毒和抗炎作用的药物，其特征是以权利要求1至5之一的组合物为有效成分，与药物中可以接受的辅助和/或添加成分共同组成。

7.如权利要求6所述的药物，其特征是所述的药物为口服型制剂。