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CN107522784B - 抗il-23抗体 - Google Patents

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CN107522784B CN201710917166.3A CN201710917166A CN107522784B CN 107522784 B CN107522784 B CN 107522784B CN 201710917166 A CN201710917166 A CN 201710917166A CN 107522784 B CN107522784 B CN 107522784B
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L.E.弗里戈
E.L.雷蒙德
S.辛格
X.朱
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Abstract

本发明涉及抗IL‑23p19的结合化合物，特别是人源化抗IL‑23p19抗体；及使用其的治疗及诊断方法以及组合物。

Description

抗IL-23抗体
本申请是申请日为2011年11月2日、中国申请号为201180064083.5、发明名称为“抗IL-23抗体”的发明申请的分案申请。
技术领域
本发明总体上涉及用于诊断性及治疗性用途的抗IL-23p19抗体。更特别是，公开了用于治疗各种疾病或病症的人源化抗IL-23p19抗体及使用方法。亦公开了包含这些化合物的药物组合物及试剂盒。
发明背景
高等真核生物经进化会对病原体起复杂的应答，该应答由先天性免疫应答起始且随后为适应性免疫应答。此两种机制一起不仅根除感染生物体的病原体而且亦产生针对未来暴露的长期免疫应答。缺乏这些反应会使适应性免疫应答对感染及/或变化的敏感性增加，导致慢性炎症及自身免疫性。IL-12为一种由p40及p35蛋白亚单元组成的杂二聚细胞因子，其长时间以来被视为先天性免疫应答的标志性细胞因子，对应变性免疫性具有较大影响。然而，关于此细胞因子的生物学作用的研究的数据产生令人费解的结果。例如，尽管缺乏p40的小鼠对胶原蛋白诱发的关节炎(CIA)及实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)具有抗性，但缺乏p35的小鼠易感患以上两种疾病且甚至显示恶化的疾病。这些难题随着在1990年代后期发现在免疫应答中具有不同作用的IL-12细胞因子家族新成员IL-23而开始得以解决。
IL-23由与IL-12共有的亚单元(p40)及独特p19亚单元构成。尽管共有此p40亚单元，但IL-23及IL-12的作用极不相同。IL-12经由促进Th1细胞分化、增殖及活化而对Th1反应极为重要。相比之下，IL-23支持新近确定的一组CD4+T辅助细胞的发育及维持，所述CD4+T辅助细胞由于能够产生IL-17及相关细胞因子而称为Th17细胞。日益增多的证据表明IL-23参与慢性自身免疫炎症，且IL-23活性的调节可提供针对自身免疫疾病的有前途的疗法。
因此，需要具有有益药理学性质的针对IL-23的拮抗剂分子，其可用作治疗人类疾病，特别是免疫及自身免疫疾病的治疗剂。
因此，本发明的一个目标在于提供抗IL-23拮抗剂分子，特别是对IL-23具有高结合亲和力的抗IL-23拮抗剂分子。
本发明的另一目标在于提供对IL-23具有高特异性的抗IL-23拮抗剂分子。
本发明的另一目标在于提供对IL-23与其受体的缔合具有高阻断活性的抗IL-23拮抗剂。
本发明的另一目标在于提供具有强力细胞活性的抗IL-23拮抗剂。
本发明的另一目标在于提供具有有利生物利用度的抗IL-23拮抗剂。
本发明的另一目标在于提供具有有利生物物理学性质的抗IL-23拮抗剂。
本发明的其它目标包括上述任何目标的组合。
发明概述
本发明解决以上需要且提供与IL-23蛋白的p19亚单元结合的抗体。在一个方面中，本发明的抗体以高亲和力与人类IL-23结合。在另一方面中，本发明的抗体抑制小鼠脾细胞经IL-23刺激产生IL-17。在另一方面中，本发明的抗体不与作为IL-23的密切相关家族成员的IL-12结合亦不拮抗IL-12。
在一个实施方案中，本发明提供由小鼠融合瘤产生的抗IL-23p19抗体，例如单克隆抗体。在一个实施方案中，本发明提供全长抗IL-23p19抗体。在另一个实施方案中，本发明提供抗IL-23p19人源化抗体，例如人源化单克隆抗IL-23p19抗体，例如全长人源化单克隆抗IL-23p19抗体。在一个方面中，本发明的人源化抗体以高亲和力与人类IL-23结合。在另一方面中，本发明的人源化抗体亦以高亲和力与短尾猴(cynomolgus)IL-23结合。在另一方面中，本发明的人源化抗体抑制DB细胞中由IL-23诱导的STAT3磷酸化。在另一方面中，本发明的人源化抗体通过与IL-23的p19亚单元结合来拮抗IL-23的作用，例如通过对IL-17及IL-22的细胞因子的抑制所测量，所述细胞因子系由IL-23刺激产生。在另一方面中，本发明的人源化抗体具有有利的药物动力学(PK)概况。在另一方面中，本发明的人源化抗体具有有利生物物理学性质，例如质量、稳定性或溶解性，例如由呈单体形式抗体的百分比所确定。
其它实施方案涵盖编码本发明的抗体的DNA分子、包含这些DNA分子的表达载体及宿主细胞、及制备本发明的抗体的方法。本发明另外提供本发明的抗体特别是针对免疫及自身免疫疾病的治疗性用途。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含轻链CDR1(L-CDR1)序列SEQ ID NO:1、4、6、7、8、11、15、18、19、22、27或30；轻链CDR2(L-CDR2)序列SEQ ID NO:2、5、9、12、16、20、23、25、28或31；轻链CDR3(L-CDR3)序列SEQ ID NO:3、10、13、14、17、21、24、26、29或32；重链CDR1(H-CDR1)序列SEQ ID NO:33、36、38、40、43、45、48、51、54、57、60、63、66、67、68、69、77或80；重链CDR2(H-CDR2)序列SEQ ID NO:34、39、41、46、49、52、55、58、61、64、70、72、73、75、78或81；及重链CDR3(H-CDR3)序列SEQ ID NO:35、37、42、44、47、50、53、56、59、62、65、71、74、76、79或82。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，该轻链可变区包含以上所列L-CDR1、以上所列L-CDR2及以上所列L-CDR3；及重链可变区，该重链可变区包含以上所列H-CDR1、以上所列H-CDR2及以上所列H-CDR3。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含分别为SEQ ID NO:1、2、3、33、34及35的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:4、5、3、36、34及37的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:1、2、3、38、39及35的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:6、2、3、40、41及42的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:7、2、3、43、41及44的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:8、9、10、45、46及47的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；分别为SEQ IDNO:8、9、10、48、49及50的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:11、12、13、51、52及53的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:7、2、14、54、55及56的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:15、16、17、57、58及59的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:18、16、17、60、61及62的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:19；20；21；63、66、67或68；64；及65的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:22、23、24、69、70及71的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:22、25、26、55、72及71的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ IDNO:8、9、10、45、73及74的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:27、28、29、45、75及76的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:8、9、10、77、78及79的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或分别为SEQ ID NO:30、31、32、80、81及82的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，该轻链可变区包含以上所列L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3组合；及重链可变区，该重链可变区包含以上所列H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3组合。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:84的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:121的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:86的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:123的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:88的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:125的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:90的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:127的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:91的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:128的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQID NO:93的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:130的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:95的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:132的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:97的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:134的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:99的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:136的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:101的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:138的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:103的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:140的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:105的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQID NO:142的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:107的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:144的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:109的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:146的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:111的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:148的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:113的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:150的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:115的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:152的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ IDNO:117的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:154的重链可变区；或含有氨基酸序列SEQ ID NO:119的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:156的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有选自SEQ ID NO:158、160、162及164的氨基酸序列的轻链可变区及含有选自SEQ ID NO:166、168、170及172的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段对IL-23的KD小于40pM或小于20pM或小于10pM或小于1pM。
在另一个实施方案中，本发明提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其在由SEQ ID NO:181的氨基酸残基108至126及氨基酸残基137至151组成的表位处与人类IL-23p19结合。
在另一个实施方案中，本发明提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其与本发明的抗体竞争性结合人类IL-23p19。在一个实施方案中，本发明提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其与包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:174的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176的重链的人源化单克隆抗IL-23p19抗体竞争性结合人类IL-23p19。在一个实施方案中，本发明提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其与包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:174的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:178的重链的人源化单克隆抗IL-23p19抗体竞争性结合人类IL-23p19。在一个实施方案中，本发明提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其与包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:180的轻链及含有氨基酸序列SEQID NO:176的重链的人源化单克隆抗IL-23p19抗体竞争性结合人类IL-23p19。在一个实施方案中，本发明提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其与包含含有氨基酸序列SEQID NO:180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:178的重链的人源化单克隆抗IL-23p19抗体竞争性结合人类IL-23p19。
在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化抗体。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为单克隆抗体。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为全长抗体。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。在一个实施方案中，抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链Fv片段。在一个实施方案中，抗原结合片段包含轻链可变区及重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQ IDNO:20(CDR2-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:63、66、67或68(CDR1-H)；氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQ IDNO:20(CDR2-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:66(CDR1-H)；氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)、氨基酸序列SEQ ID NO:20(CDR2-L)及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:63、66、67或68(CDR1-H)、氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)、氨基酸序列SEQ ID NO:20(CDR2-L)及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:66(CDR1-H)、氨基酸序列SEQ IDNO:64(CDR2-H)及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:158、160、162或164的任一者；及重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:166、168、170或172的任一者。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:160的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:166的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:160的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:168的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:158的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:166的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:158的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:168的重链可变区。
在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化抗体。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为单克隆抗体。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为全长抗体。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗IL-23p19抗体，例如全长人源化单克隆抗体。在一个实施方案中，抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链Fv片段。在一个实施方案中，抗原结合片段包含轻链可变区及重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种包含与人类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA或IgE重链恒定区连接的氨基酸序列SEQ ID NO:166或168的抗体。一种包含与人类IgG1重链恒定区连接的氨基酸序列SEQ ID NO:166或168的抗体。一种包含与人类κ或λ轻链恒定区连接的氨基酸序列SEQ ID NO:158或160的抗体。一种包含与人类κ轻链恒定区连接的氨基酸序列SEQ ID NO:158或160的抗体。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抗体，其包含与人类IgG1重链恒定区连接的氨基酸序列SEQ ID NO:166或168、及与人类κ轻链恒定区连接的氨基酸序列SEQ IDNO:158或160。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有选自SEQ ID NO:158、160、162及164的任一者的氨基酸序列的轻链可变区及含有选自SEQ ID NO:166、168、170及172的任一者的氨基酸序列的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:160的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:166的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:160的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:168的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:158的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:166的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:158的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:168的重链可变区。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:174或180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176或178的重链。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:174的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176的重链。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:174的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:178的重链。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176的重链。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:178的重链。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:160的CDR，以及氨基酸序列与SEQ IDNO:160的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区；及人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:166的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:166的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:160的CDR，以及氨基酸序列与SEQ IDNO:160的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区；及人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:168的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:168的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:158的CDR，以及氨基酸序列与SEQ IDNO:158的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区；及人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:166的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:166的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:158的CDR，以及氨基酸序列与SEQ IDNO:158的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区；及人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:168的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:168的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于对人类IL-23的KD小于或等于1pM。在一个方面中，在50％人类血清中结合速率无变化。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其活体外阻断IL-23与人类IL-23R/Fc结合。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其不与人类IL-12结合。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其抑制小鼠脾细胞中由人类IL-23诱导的IL-17产生，IC50小于或等于20pM。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其抑制人类DB细胞中由人类IL-23诱导的STAT3磷酸化，IC50小于或等于40pM。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其不具有预测的ADCC/CDC活性。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其对短尾猴IL-23的KD小于或等于1pM。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其不具有与小鼠或大鼠IL-23的交叉反应性。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其抑制小鼠耳中由人类IL-23诱导的IL-17及IL-22的产生，在1mg/kg下对两种细胞因子的抑制均为80％或80％以上。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于如通过差示扫描热量测定法所测定的熔融温度为83℃。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于如通过紫外光谱法测量且通过混浊度监测的溶解度大于或等于100mg/ml。
在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其以至少90％单体形式或至少92％单体形式或至少95％单体形式存在于缓冲液中。
在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体的特征可进一步在于其以至少90％单体形式或至少92％单体形式或至少95％单体形式保持在缓冲液中持续一个月或四个月。
在一个方面中，人源化抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。
其它实施方案涵盖编码以上轻链可变区的DNA分子、编码以上重链可变区的DNA分子、编码以上轻链区的DNA分子、或编码以上重链区的DNA分子。
其它实施方案涵盖含有以上DNA分子的表达载体。在一个实施方案中，表达载体包含分别编码恒定重链及/或恒定轻链的DNA分子，其分别与编码可变重链及/或可变轻链的DNA分子连接。其它实施方案涵盖携带上述一或多种表达载体的宿主细胞。在一个实施方案中，宿主为哺乳动物细胞。
其它实施方案涵盖一种产生上述抗体或其抗原结合片段的方法，其包括用上述一或多种载体转染哺乳动物宿主细胞，培养该宿主细胞，及回收并纯化该抗体或其抗原结合片段。
其它实施方案涵盖一种产生上述抗体或其抗原结合片段的方法，其包括获得包含上述一或多种载体的哺乳动物宿主细胞，及培养该宿主细胞。在一个实施方案中，该方法另外包含回收并纯化该抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种用于医药中的上述抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，用途为治疗炎性疾病、自身免疫疾病、呼吸系统疾病、代谢障碍或癌症。在一个实施方案中，用途为治疗牛皮癣、炎性肠病(克罗恩氏病(Crohn's disease)、溃疡性结肠炎)、牛皮癣关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎或强直性脊椎炎。在一个实施方案中，用途为治疗牛皮癣。在一个实施方案中，用途为治疗炎性肠病。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种包含上述抗体分子或抗原结合片段及药学上可接受的载剂的药物组合物。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种治疗炎性疾病、自身免疫疾病、呼吸系统疾病、代谢障碍或癌症的方法，其包括向有需要的个体，例如患者给予有效量的上述抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段、或包含该抗体或其抗原结合片段的药物组合物。在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段通过非经肠给药途径给予或经静脉内或皮下给予。在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段经皮下给予。在一个实施方案中，所述疾病为牛皮癣、炎性肠病(克罗恩氏病、溃疡性结肠炎)、牛皮癣关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎或强直性脊椎炎。在一个实施方案中，所述疾病为牛皮癣。在一个实施方案中，所述疾病为炎性肠病。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抑制IL-23与哺乳动物细胞上的IL-23受体结合的方法，其包括向该细胞给予上述抗体分子或抗原结合片段，由此抑制由IL-23受体介导的信号传导。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种治疗患有IL-23相关病症的个体的方法，其包括向该个体给予上述抗体或抗原结合片段，该抗体或抗原结合片段与人类IL-23结合。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种检测及/或定量测定生物样品中的IL-23含量的方法，其通过使该样品与上述抗体或抗原结合片段接触并检测该抗体或其片段与IL-23p19的结合而达成。此信息可用于诊断IL-23相关病症。因此，提供了用于诊断IL-23相关病症或确定个体出现IL-23相关病症的风险是否增加的方法，其中该方法包括使来自个体的生物样品与上述抗体或抗原结合片段接触，并检测该抗体或抗原结合片段与IL-23p19的结合以测定IL-23的表达或浓度。
在一个实施方案中，本发明另外提供一种抑制IL-23与细胞上的IL-23受体结合的方法，其包括向该细胞或细胞环境给予上述抗体或抗原结合片段，由此抑制由IL-23受体介导的信号传导。
附图简述
图1：小鼠可变区与人源化可变区的比对。图1a：抗IL-23p19 6B8工程改造的Vk区。图1b：抗IL-23p19 6B8工程改造的VH区。
氨基酸根据标准Kabat编号流程来编号。普通字体＝人类；斜体/加下划线字体＝鼠类；阴影字体＝合成；粗体/斜体/加下划线＝CDR。
图2：人类IL-23与IL-23R/Fc结合的竞争结合分析。
发明详述
IL-23的p19亚单元(在本文中亦称为“IL-23p19”及“p19亚单元”)为一种具有189个氨基酸的多肽，其含有具有21个氨基酸的前导序列(Oppmann等人,Immunity 13:715(2000)，SEQ ID NO:181)。该分子的生物活性仅在其与IL-12p40亚单元搭配以形成IL-23时才被检测到。IL-23主要由活化树突状细胞(DC)及吞噬细胞表达。发现IL-23的受体由IL-12受体的IL-12Rβ1亚单元与称为IL-23R的独特亚单元搭配构成(Parham等人,J.Immunol.168:5699(2002))。检测到该受体主要在记忆T细胞及NK细胞上表达。因此，此细胞因子:受体对的表达似乎局限于特定免疫细胞群体。尽管最初认为IL-12与IL-23将共有许多功能，但数据显示并非如此。尽管IL-12在Th1细胞的产生中具有主要作用，但发现IL-23关键性地涉及于新近认定的称为Th17的Th细胞亚群的产生及维持中(Kikly等人,Curr.Opin.Immunol.18:670(2006)；Kastelein等人,Ann.Rev.Immunol.25:221(2007))。这些细胞产生IL-17A、IL-17F、IL-22及其它促炎性细胞因子，例如IL-6及TNF-α。如下所述，关于这些Th17细胞的作用的动物模型研究显示其作为慢性炎症及自身免疫性中的驱动力的重要性。
本发明提供与IL-23的p19亚单元，特别是人类IL-23p19结合的抗体。本发明亦涉及识别IL-23的p19亚单元的人源化抗体。在具体实施方案中，这些人源化抗体的序列已基于某些前导小鼠抗体的序列得以鉴定。
本发明的前导小鼠抗体由小鼠融合瘤产生。使用不同技术对小鼠进行免疫接种。例如，对人类IL-23p19蛋白或其片段具有特异性的抗体可针对例如分离的IL-23p19蛋白、分离的IL-23蛋白、分离的杂交IL-23蛋白及/或任何以上蛋白质的一部分(包括合成肽)的免疫原性抗原而产生。例如，使用包含小鼠IL-23p40亚单元及人类IL-23p19亚单元的杂交IL-23蛋白质对小鼠进行免疫接种。可使用本领域中已知的任何适合技术制备免疫原性抗原及产生单克隆抗体。
基于前导小鼠抗体对人类IL-23的高亲和力对其进行选择。因此，在一个方面中，本发明提供一种以高亲和力与人类IL-23结合的抗体。所选小鼠抗体经人源化以产生人源化抗体。本发明的人源化抗体以高亲和力与人类IL-23结合。因此，在另一方面中，本发明提供一种以高亲和力与人类IL-23结合的人源化抗体。
因此，在一个实施方案中，本发明提供一种KD小于40pM的抗IL-23p19抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种KD小于20pM的抗IL-23p19抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种KD小于10pM的抗IL-23p19抗体。在另一个实施方案中，本发明提供一种KD小于1pM的抗IL-23p19抗体。
在另一方面中，在人类血清不存在或在50％人类血清存在下，本发明的抗体以高亲和力与IL-23p19结合。
在另一方面中，本发明的人源化抗体亦以高亲和力与短尾猴IL-23结合。
在另一方面中，本发明的抗体与IL-23结合，但不与IL-12结合。在另一方面中，本发明的抗体不干扰作为IL-23的密切相关家族成员的IL-12的生物活性。
在另一方面中，本发明的抗体抑制小鼠脾细胞经IL-23刺激产生IL-17。
在另一方面中，本发明的人源化抗体抑制DB细胞中由IL-23诱导的STAT3磷酸化。
在另一方面中，本发明的人源化抗体通过与IL-23的p19亚单元结合来拮抗IL-23的作用，该作用通过对例如IL-17及IL-22的细胞因子的抑制所测量(所述细胞因子由IL-23刺激产生)，且通过这些细胞因子的含量降低所检测，。
在另一方面中，本发明的人源化抗体具有有利的药物动力学(PK)概况，如由在短尾猴中的活体内半衰期所例示。
在另一方面中，本发明的人源化单克隆抗IL-23p19抗体具有有利的生物物理学性质，例如质量、稳定性或溶解性。
在一个方面中，抗IL-23p19抗体为人源化抗体。在一个方面中，抗IL-23p19抗体为单克隆抗体。在一个方面中，抗IL-23p19抗体为全长抗体。在一个方面中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。
本发明的抗体或其抗原结合片段识别特定“IL-23p19抗原表位”或“IL-23p19表位”。如本文所用，这些术语是指能够与抗IL-23p19抗体免疫应答的分子(例如肽)或分子片段且例如包括由具有以下轻链/重链序列组合的任何抗体识别的IL-23p19抗原决定簇：SEQID NO:84/121、86/123、88/125、90/127、91/128、93/130、95/132、97/134、99/136、101/138、103/140、105/142、107/144、109/146、111/148、113/150、115/152、117/154、119/156、160/166、160/168、158/166或158/168。IL-23p19抗原表位可包括在蛋白质、蛋白质片段、肽或其类似物中。表位最常见为蛋白质、短寡肽、寡肽模拟物(亦即模拟IL-23p19抗原的抗体结合性质的有机化合物)或其组合。认为抗体的肽或多肽表位的最小尺寸为约四至五个氨基酸。肽或多肽表位含有例如至少七个氨基酸或例如至少九个氨基酸或例如约15至约20个氨基酸。因为抗体可识别呈三级形式的抗原肽或多肽，所以构成表位的氨基酸不需要是连续的，且在一些情况下可能甚至不在同一肽链上。表位可通过本领域中已知的各种技术确定，例如X射线结晶学、氢/氘交换质谱(HXMS)、定点诱变、丙氨酸扫描诱变及肽筛选方法。
抗体或免疫球蛋白的一般化结构为本领域技术人员所熟知。这些分子为通常约150,000道尔顿(dalton)的杂四聚糖蛋白，由两条相同轻(L)链及两条相同重(H)链构成且通常称为全长抗体。各轻链由一个二硫键与重链共价连接以形成杂二聚体，且杂四聚分子经由杂二聚体的两条相同重链之间的共价二硫键形成。尽管轻链与重链由一个二硫键连接在一起，但两条重链之间的二硫键数目随免疫球蛋白同种型而变化。各重链及轻链亦具有规则间隔的链内二硫桥。各重链在氨基端具有可变域(VH)，随后为三个或四个恒定域(CH1、CH2、CH3及CH4)以及介于CH1与CH2之间的铰链区。各轻链具有两个域，即氨基端可变域(VL)及羧基端恒定域(CL)。VL域与VH域非共价缔合，而CL域通常经由二硫键与CH1域共价连接。据信特定氨基酸残基在轻链与重链可变域之间形成界面(Chothia等人,1985,J.Mol.Biol.186:651-663)。可变域在本文中亦称为可变区。
可变域内的某些域在不同抗体之间颇为不同，亦即为“高变的”。这些高变域含有直接参与各特定抗体对其特定抗原决定簇的结合及特异性中的残基。轻链与重链可变域两者的高变性集中在称为互补决定区(CDR)或高变环(HVL)的三个区段中。CDR通过Kabat等人,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,Md.中的序列比较确定，而HVL(在本文中亦称为CDR)根据可变域的三维结构确定结构，如由Chothia及Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-917所述。此两种方法会导致对CDR的鉴定略有不同。如由Kabat所确定，CDR-L1位于轻链可变域中的约残基24-34处，CDR-L2位于约残基50-56处，且CDR-L3位于约残基89-97处；CDR-H1位于重链可变域中的约残基31-35处，CDR-H2位于约残基50-65处，且CDR-H3位于约残基95-102处。涵盖特定CDR的精确残基数目将视CDR的序列及尺寸而变化。本领域技术人员可鉴于抗体的可变区氨基酸序列按常规确定哪些残基构成特定CDR。因此，重链及轻链的CDR1、CDR2、CDR3限定了给定抗体所特有的独特功能性质。
每一重链及轻链内的三个CDR为由骨架区(FR)来间隔，骨架区含有可变性通常较低的序列。自重链及轻链可变域的氨基末端至羧基末端，FR及CDR以以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。FR的较大β-折叠构型使每一链内的CDR彼此紧邻且与另一链中的CDR紧邻。所得构象有助于抗原结合位点(参见Kabat等人，1991，NIH Publ.第91-3242号，第I卷，第647-669页)，但并非所有CDR残基皆必须直接参与抗原结合。
FR残基及Ig恒定域并不直接参与抗原结合，但有助于抗原结合和/或介导抗体效应子功能。人们认为，一些FR残基以至少三种方式对抗原结合产生显著效应：直接与表位非共价结合，与一或多个CDR残基相互作用，及影响重链及轻链之间的接口。恒定域并不直接参与抗原结合，但介导各种Ig效应子功能，例如介导抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)及抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。
可基于恒定域的氨基酸序列将脊椎动物免疫球蛋白的轻链分配至两个显著不同的种类(κ及λ)中的一类。通过比较，根据恒定域的序列将哺乳动物免疫球蛋白的重链分为以下五个主要类别：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。将IgG及IgA进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。对应于不同免疫球蛋白种类的重链恒定域分别称作α、δ、ε、γ及μ。各天然免疫球蛋白种类的亚单元结构及三维构型为人所熟知。
术语“抗体”、“抗IL-23p19抗体”、“人源化抗IL-23p19抗体”、“人源化抗IL-23p19表位抗体”及“变体人源化抗IL-23p19表位抗体”具体涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)及表达期望生物学活性(例如IL-23P19结合)的抗体片段(例如可变域及抗体的其他部分)。
术语“单克隆抗体”(mAb)是指具有高度特异性，即针对单一抗原决定簇(即“表位”)具有高度特异性。因此，修饰词“单克隆”指示针对相同表位的抗体，且不应理解为需要通过任何特定方法来产生该抗体。应理解，单克隆抗体可通过本领域已知的任何技术或方法来制备；包括(例如)杂交瘤方法(Kohler等人，1975，Nature 256:495)，或本领域已知的重组DNA方法(例如，参见美国专利第4,816,567号)，或使用噬菌体抗体文库通过以下文献中所述技术分离以重组方式产生的单克隆抗体的方法：Clackson等人，1991，Nature352：624-628；及Marks等人，1991，J.Mol.Biol.222：581-597。
术语“单体”是指抗体的均质形式。例如，对于全长抗体，单体是指具有两条相同重链及两条相同轻链的单体抗体。
嵌合抗体为由来自一个物种(例如，非人哺乳动物，例如小鼠)的抗体重链及轻链可变区及另一物种(例如，人)抗体的重链及轻链恒定区组成，且可通过以下方式来获得：连接来自第一物种(例如，小鼠)的编码抗体可变区的DNA序列与来自第二物种(例如人)的编码抗体恒定区的DNA序列，并用含有所述经连接序列的表达载体转化宿主，从而使其可产生嵌合抗体。或者，嵌合抗体中，重链和/或轻链中的一或多个区域或域亦可与来自另一免疫球蛋白种类或同种型的单克隆抗体中的对应序列相同、同源或为其变体、或来自共有序列或种系序列。嵌合抗体可包括所述抗体的片段，条件是抗体片段表达出其亲代抗体的期望生物学活性，例如与相同表位结合(例如，参见美国专利第4,816,567号；及Morrison等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855)。
术语“抗体片段”、“抗IL-23p19抗体片段”、“抗IL-23p19表位抗体片段”、“人源化抗IL-23p19抗体片段”、“人源化抗IL-23p19表位抗体片段”、“变体人源化抗IL-23p19表位抗体片段”是指全长抗IL-23P19抗体的一部分，其中保留可变区或功能能力，例如特异性IL-23P19表位结合。抗体片段的实例包括(但不限于)Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、scFv及scFv-Fc片段、二价抗体(diabody)、线性抗体、单链抗体、微抗体(minibody)、自抗体片段形成的二价抗体及自抗体片段形成的多特异性抗体。
可用例如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶等酶处理全长抗体以生成可用抗体片段。使用木瓜蛋白酶消化来产生两个相同的称作“Fab”片段的抗原结合抗体片段(各自具有单一抗原结合位点)及残留的“Fc”片段。Fab片段亦含有轻链恒定域及重链CH1域。胃蛋白酶处理产生F(ab')2片段，其具有两个抗原结合位点且仍能交联抗原。
Fab'片段与Fab片段的不同之处在于在CH1域的C末端存在额外残基，包括一或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。F(ab')2抗体片段为通过铰链区中的半胱氨酸残基连接的Fab'片段对。亦已知抗体片段的其他化学偶联。
“Fv”片段含有完整抗原识别及结合位点，该位点为由一个重链可变域与一个轻链可变域呈紧密非共价连接的二聚体组成。在此构型中，每一可变域的三个CDR相互作用，从而在该VH-VL二聚体的表面上界定抗原结合位点。该六个CDR共同赋予该抗体抗原结合特异性。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段为包含抗体VH及VL域的单链Fv变体，其中所述域存在于单一多肽链中。单链Fv能识别并结合抗原。scFv多肽亦可任选含有位于VH域与VL域之间的多肽接头，以促进scFv形成用于抗原结合的期望三维结构(例如，参见Pluckthun，1994，InThe Pharmacology of monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore编辑，Springer-Verlag，New York，第269-315页)。
“二价抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含在同一多肽链中连接的重链可变域(VH)与轻链可变域(VL)(VH-VL或VL-VH)。二价抗体更充分描述于例如Holliger等人,(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448中。
其他已知的抗体片段包括那些包含一对串联的Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)以形成一对抗原结合区的抗体片段。所述“线性抗体”可为双特异性或单特异性，如(例如)Zapata等人，1995，Protein Eng.8(10):1057-1062中所述。
“人源化抗体”或“人源化抗体片段”为特定类型的嵌合抗体，其包括免疫球蛋白氨基酸序列变体或其片段，其能结合预定抗原，且其包含一或多个基本上具有人免疫球蛋白氨基酸序列的FR及一或多个基本上具有非人免疫球蛋白氨基酸序列的CDR。此非人氨基酸序列通常称作“输入”序列，通常取自“输入”抗体域，尤其是可变域。通常，人源化抗体至少包括非人抗体的CDR或HVL，插入人重链或轻链可变域的FR之间。本发明阐述特定人源化抗IL-23P19抗体，其含有插入人种系序列重链及轻链可变域的FR之间的表3及4所示源自鼠类单克隆抗体的CDR或人源化CDR。应理解，某些鼠类FR残基可能对人源化抗体的功能重要，且因此将修饰某些人种系序列重链及轻链可变域残基，以与对应鼠类序列中的那些相同。
在另一方面中，人源化抗IL-23P19抗体基本上包含所有至少一个(通常两个)可变域(例如含于例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc及Fv片段中者)，其中所有或基本上所有CDR对应于非人免疫球蛋白的CDR，且在本文中特别是所有CDR为本文下表1至4中所详述的鼠类序列或人源化序列，且所有或基本上所有FR为人免疫球蛋白共有序列或种系序列的FR。在另一方面中，人源化抗IL-23P19抗体亦包括免疫球蛋白(通常为人免疫球蛋白)Fc区的至少一部分。通常，抗体含有轻链以及至少重链可变域二者。若适宜，抗体亦可包括重链CH1、铰链、CH2、CH3和/或CH4区中的一或多者。
人源化抗IL-23P19抗体可选自任一种类免疫球蛋白(包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE)及任一同种型(包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。例如，恒定域可为补体固定的恒定域，其中期望人源化抗体表达细胞毒性活性，且同种型通常为IgG1。倘若不期望该细胞毒性活性，则恒定域可为另一同种型，例如IgG2。替代性人源化抗IL-23P19抗体可包含来自不止一种免疫球蛋白种类或同种型的序列，且本领域技术人员可熟练选择特定恒定域来优化所期望的效应子功能。在具体实施方案中，本发明所提供抗体为IgG1抗体，且更具体而言为剔除效应子功能的IgG1抗体。
人源化抗IL-23P19抗体的FR及CDR或HVL不需要与亲代序列精确对应。例如，可通过取代、插入或缺失来改变(例如，诱变处理)输入CDR或HVL或共有FR或种系FR序列中的一或多个残基，从而使得所得氨基酸残基与任一亲代序列中对应位置的原始残基不再相同，但抗体仍保留与IL-23P19结合的功能。该改变通常可并非广泛改变且可为保守改变。通常，至少75％人源化抗体残基可与亲代共有FR或种系FR及输入CDR序列中的那些残基对应，更通常有至少90％、且最通常有超过95％或超过98％或超过99％的残基对应。
影响重链与轻链可变区之间的接口(“VL-VH接口”)的免疫球蛋白残基为那些影响两条链相对于彼此接近或定向的残基。某些可能参与链间相互作用的残基包括VL残基34、36、38、44、46、87、89、91、96及98以及VH残基35、37、39、45、47、91、93、95、100及103(采用Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutesof Health，Bethesda，Md.，1987)中所述的编号系统)。美国专利第6,407,213号亦论述，例如VL残基43及85以及VH残基43及60等残基亦可能参与此相互作用。尽管仅针对人IgG阐述所述残基，但其亦适用于其他物种。选择合理地预期参与链间相互作用的重要抗体残基用于共有序列中的取代。
术语“共有序列”及“共有抗体”是指在任一特定种类、同种型或亚单元结构的所有免疫球蛋白(例如人免疫球蛋白可变域)中的每一位置包含最常出现的氨基酸残基的氨基酸序列。共有序列可基于特定物种或多个物种的免疫球蛋白。“共有”序列、结构或抗体可理解为涵盖某些实施方案中所述的共有人序列，且是指在任一特定种类、同种型或亚单元结构的所有人免疫球蛋白中的每一位置包含最常出现的氨基酸残基的氨基酸序列。因此，共有序列所含有的氨基酸序列在每一位置具有存在于一或多种已知免疫球蛋白中的氨基酸，但其可能并不精确复制任一单一免疫球蛋白的整个氨基酸序列。可变区共有序列并非自任何天然产生的抗体或免疫球蛋白及其变体均可获得(Kabat等人，1991，Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md.)。重链及轻链共有序列及其变体的FR为人源化抗IL-23P19抗体的制备提供可用序列。例如，参见美国专利第6,037,454号及第6,054,297号。
人种系序列天然存在于人种群中。所述种系基因的组合产生抗体多样性。抗体轻链的种系抗体序列来自保守人种系κ或λv-基因及j-基因。类似地，重链序列来自种系v-、d-及j-基因(LeFranc，M-P及LeFranc，G，“The Immunoglobulin Facts Book”AcademicPress，2001)。
如本文所用，“变体”、“抗IL-23p19变体”、“人源化抗IL-23p19变体”或“变体人源化抗IL-23p19”各自是指至少具有来自如表1中所示的任何序列的轻链可变鼠类CDR序列、或至少具有如表2中所示的源于鼠类单克隆抗体的重链鼠类CDR序列的人源化抗IL-23p19抗体。变体包括在一或两个轻链或重链可变域中具有一或多个氨基酸变化的变体，其限制条件为氨基酸变化不会实质上损害抗体与IL-23p19的结合。本文中产生的例示性人源化抗体包括称为抗体A、抗体B、抗体C及抗体D的抗体，且所述抗体的各种轻链及重链分别展示于SEQ ID No:174及180、以及SEQ ID No:176及178中。
“分离的”抗体为已经鉴定且已自其天然环境组分中分离和/或回收的抗体。抗体天然环境中的污染物组分为那些可干扰抗体的诊断性或治疗性应用的物质，且可为酶、激素或其他蛋白性或非蛋白性溶质。在一个方面中，可将抗体纯化至以抗体重量计分离度至少大于95％。
由于抗体天然环境中的至少一种组分不会存在，故分离的抗体包括产生其的重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常可通过至少一个纯化步骤来制备，其中移除了重组细胞物质。
术语“抗体性能”是指有助于抗体识别抗原或者抗体活体内效力的因素。抗体氨基酸序列的变化可影响例如折叠等抗体特性，且可影响例如以下的物理因素：抗体与抗原结合的初始速率(ka)、抗体与抗原的解离常数(kd)、抗体对抗原的亲和常数(Kd)、抗体构象、蛋白稳定性及抗体半衰期。
本文所用术语“表位标记的”是指抗IL-23P19抗体与“表位标签”融合。“表位标签”为具有足量氨基酸以为抗体产生提供表位的多肽，且其经设计以使得其不干扰人源化抗IL-23P19抗体的期望活性。表位标签通常具有充分独特性以使得针对该表位标签产生的抗体基本上不会与其他表位交叉反应。适宜的标签多肽一般含有至少6个氨基酸残基且通常含有约8至50个氨基酸残基或约9至30个残基。表位标签及结合表位的抗体的实例包括流感HA标签多肽及其抗体12CA5(Field等人，1988Mol.Cell.Biol.8：2159-2165)；c-myc标签及其8F9、3C7、6E10、G4、B7及9E10抗体(Evan等人，1985，Mol.Cell.Biol.5(12):3610-3616)；及单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体(Paborsky等人，1990，Protein Engineering 3(6)：547-553)。在某些实施方案中，表位标签为“补救受体结合表位”。本文所用术语“补救受体结合表位(salvage receptor binding epitope)”是指IgG分子(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)Fc区中的表位，其负责延长IgG分子的活体内血清半衰期。
在一些实施方案中，本发明的抗体可与细胞毒性剂缀合。细胞毒性剂为抑制或阻止细胞机能和/或引起细胞破坏的任何物质。该术语意欲包括放射性同位素(例如I131、I125、Y90及Re186)、化学治疗药物及毒素(例如细菌、真菌、植物或动物源酶活性毒素)及其片段。所述细胞毒性剂可通过标准操作与本发明的人源化抗体偶联，且其可用于(例如)治疗适用抗体疗法的患者。
“化学治疗药物”为可用于治疗癌症的化学化合物。化学治疗药物有多种实例可与本发明治疗性抗体缀合。所述化学治疗药物的实例包括烷化剂，例如噻替哌(thiotepa)及环磷酰胺；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，例如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、meturedopa及uredopa；亚乙基亚胺及甲基密胺，包括六甲密胺(altretamine)、三亚乙基密胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫化磷酰胺及三羟甲基密胺；番荔枝内酯(acetogenin)(尤其为布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan))；苔藓抑制素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其合成类似物阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)及比折来新(bizelesin))；cryptophycin(尤其为cryptophycin 1及cryptophycin 8)；多拉司他汀(dolastatin)；auristatin(包括类似物单甲基-auristatin E及单甲基-auristatin F)；多卡米星(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189及CBI-TMI)；艾榴素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥类，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)和乌拉莫司汀(uracil mustard)；硝基脲类，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫斯汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，例如烯二炔(enediyne)抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)，尤其是刺孢霉素γ1I和刺孢霉素
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参见例如Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；dynemicin，包括dynemicin A；二膦酸盐，例如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；新抑癌蛋白生色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团(related chromoprotein enediyne antibiotic chromophore)、aclacinomysin类、放线菌素(actinomycin)、authramycin、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、多柔比星(AdriamycinTM)(包括吗啉代-多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基吗啉代-多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉子基-多柔比星(2-pyrrolino-doxorubicin)、去氧多柔比星(deoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycin)类例如丝裂霉素C(mitomycin C)、麦考酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌罗霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、新制癌菌素(zinostatin)和佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，例如甲氨喋呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸(denopterin)、甲氨喋呤、喋罗呤(pteropterin)和三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)和硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，例如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮杂尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、伊诺他滨(enocitabine)和氟尿苷(floxuridine)；雄激素，例如卡普睾酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)和睾内酯(testolactone)；抗肾上腺素药(anti-adrenal)，例如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)和曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，例如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；伊达曲杀(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登醇(maytansinoid)类，例如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；mopidanmol；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；
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雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺(2,2’,2”-trichlorotriethylamine)；单端孢霉烯(trichothecene)(尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A(roridin A)和anguidine)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；溴丙哌嗪(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派；紫杉烷(taxoid)，例如紫杉醇(paclitaxel)
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Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)及多西紫杉醇(doxetaxel)
Figure BDA0001426027050000232
Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨(gemcitabine)(GemzarTM)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物，例如顺铂(cisplatin)及卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)(NavelbineTM)；诺安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；柔红霉素(daunomycin)；氨蝶呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素，例如视黄酸；卡培他滨(capecitabine)；及上述药物中任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。此定义中亦包括用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，例如抗雌激素及选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括(例如)他莫昔芬(tamoxifen)(包括NolvadexTM)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、keoxifene、LY117018、奥那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene)(FarestonTM)；抑制芳香酶的芳香酶抑制剂，其调节肾上腺中雌激素的产生，例如4(5)-咪唑、胺鲁米特、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)(MegaceTM)、依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozole)、伏氯唑(vorozole)(RivisorTM)、来曲唑(letrozole)(FemaraTM)及阿那曲唑(anastrozole)(ArimidexTM)；及抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；及上述药物中任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。所述药物中的任何一或多者可与本发明的人源化抗体缀合以提供可用于治疗各种病症的治疗药物。
亦可使抗体与前药缀合。“前药”为药物活性物质的前体或衍生物形式，其与母体药物相比对肿瘤细胞的细胞毒性较小，且能酶促活化或转化为活性更强的形式。例如，参见Wilman，1986,“Prodrugs in Cancer Chemotherapy”，Biochemical SocietyTransactions，14，第375-382页，615th Meeting Belfast；及Stella等人，1985，“Prodrugs：A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery”，Directed DrugDelivery，Borchardt等人(编辑)，第247-267页，Humana Press。可用的前药包括(但不限于)含有磷酸根的前药、含有硫代磷酸根的前药、含有硫酸根的前药、含有肽的前药、经D-氨基酸修饰的前药、糖基化前药、含有β-内酰胺的前药、含有任选经取代的苯氧基乙酰胺的前药及含有任选经取代的苯基乙酰胺的前药、5-氟胞嘧啶前药及其他5-氟尿苷前药，其可转化成具有更高活性的无细胞毒性药物。可衍生为前药形式的细胞毒性药物的实例包括(但不限于)那些上文所述的化学治疗药物。
出于诊断性以及治疗性监测目的，亦可使本发明的抗体与标记(单独的标记或者标记与另外的第二药物(前药、化学治疗药物等))缀合。标记与其他第二药物不同，其是指可检测的化合物或组合物药物，且其可与本发明的人源化抗体直接或间接缀合。标记本身可被可检测(例如，放射性同位素标记或荧光标记)，或在酶标记情况下，标记可催化底物化合物或组合物发生可检测的化学变化。可制备经标记人源化抗IL-23P19抗体并用于各种应用中，包括活体外及活体内诊断学。
可将本发明的抗体调配为脂质体制剂的一部分以实现其活体内递送。“脂质体”为由各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂组成的小囊泡。脂质体可用于向哺乳动物递送化合物或调配物，例如本文所公开的人源化抗IL-23P19抗体，该抗体任选与一或多种药物活性药物和/或标记偶联或组合。脂质体的组分通常以双层结构排列，此与生物膜的脂质排列类似。
本发明某些方面涉及分离的核酸，其编码本发明的人源化抗体的一或多个域。“分离的”核酸分子为自至少一种污染物核酸分子鉴定并分离的核酸分子，其在抗体核酸的天然来源中通常与该污染物核酸分子相结合。分离的核酸分子与存在于天然细胞中的核酸分子不同。
在本发明各方面中，重组表达人源化抗体的一或多个域。该重组表达可采用一或多种控制序列，即在特定宿主有机体中表达可操作连接的编码序列所需的聚核苷酸序列。适用于原核细胞中的控制序列包括(例如)启动子、操纵子及核糖体结合位点序列。真核控制序列包括(但不限于)启动子、聚腺苷酸化信号及增强子。所述控制序列可用于在原核及真核宿主细胞中表达及产生人源化抗IL-23P19抗体。
在使核酸序列与另一核酸序列具有功能性联系时，该核酸序列经“可操作连接”。例如，若前序列或分泌前导序列表达为参与多肽分泌的前蛋白，则该前序列或分泌前导序列与编码该多肽的核酸可操作连接；若启动子或增强子影响该序列的转录，则该启动子或增强子与该序列可操作连接；或若核糖体结合位点的定位可促进翻译，则该核糖体结合位点与该编码序列可操作连接。通常，“可操作连接”意指所连接DNA序列为连续序列，且在分泌前导序列情形下为连续序列且位于阅读框内。然而，增强子任选是连续的。可通过在便捷的限制位点处接合来完成连接。若不存在所述位点，则可使用合成寡核苷酸衔接子或接头。
本文所用术语“细胞”、“细胞系”及“细胞培养物”可互换使用，且所有所述名称皆包括其子代。因此，“转化体”及“转化细胞”包括原代个体细胞及其衍生的培养物而不考虑转移次数。
用于治疗目的的术语“哺乳动物”是指任何归类为哺乳动物的动物，包括人、家畜及农场动物，以及动物园动物、运动用动物或宠物，例如狗、马、猫、牛等。优选地，哺乳动物为人。
本文所用“病症”为可受益于使用本文所述人源化抗IL-23P19抗体治疗的任何病况。该术语包括慢性及急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所述病症的病理学病况。本文欲治疗的非限制性实例或病症包括炎性、血管生成性、自身免疫性及免疫性病症、呼吸系统病症、癌症、血液恶性肿瘤、良性及恶性肿瘤、白血病及淋巴恶性肿瘤。
术语“癌症”及“癌性”是指或描述哺乳动物中特征通常在于细胞生长失调的生理学病况。癌症的实例包括(但不限于)癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤及白血病。
如本文所用，术语“IL-23相关病症”或“IL-23相关疾病”是指由IL-23活性促成、且IL-23通常异常表达的病状。IL-23相关病症包括免疫系统疾病及病症，例如自身免疫病症及炎症病症。所述病况包括(但不限于)类风湿性关节炎(RA)、全身性红斑狼疮(SLE)、硬皮症、Sjogren氏综合征、多发性硬化、牛皮癣、牛皮癣关节炎、炎性肠病(例如，溃疡性结肠炎及克罗恩氏病)、肺炎症、哮喘、特发性血小板减少性紫癜(ITP)及强直性脊椎炎。
术语“静脉内输注”是指在动物或人患者静脉中经大于约15分钟、一般介于约30至90分钟之间的一段时间引入药物。
术语“静脉内推注”或“静脉内推射”是指将药物给予至动物或人的静脉中，从而使机体在约15分钟或更短、一般5分钟或更短时间内接受药物。
术语“皮下给予”是指在动物或人患者的皮肤下、优选在皮肤与基底组织之间的囊内通过自药物贮器相对缓慢的持续递送来引入药物。将皮肤向上捏离或拉离基底组织可产生囊。
术语“皮下输注”是指在动物或人患者的皮肤下、优选在皮肤与基底组织之间的囊内经一段时间(包括(但不限于)30分钟或更短、或90分钟或更短)通过自药物贮器相对缓慢的持续递送来引入药物。任选地，输注可通过皮下植入药物递送泵(植入动物或人患者的皮肤下)来实施，其中该泵经预定时间段(例如30分钟、90分钟或跨越整个治疗方案的时间段)递送预定量的药物。
术语“皮下推注”是指在动物或人患者的皮肤下给予药物，其中推注药物递送短于约15分钟；在另一方面中，短于5分钟；且在另一方面中，短于60秒。在另一方面中，在皮肤与基底组织之间的囊内给予，其中该囊可通过将皮肤向上捏离或拉离基底组织来产生。
所用术语“治疗有效量”是指活性药物可缓解或改善所治疗病症的一或多种症状的量。在另一方面中，治疗有效量是指已显示可有效(例如)减慢疾病进展的目标血清浓度。可取决于欲治疗病况以常用方式来测量功效。
本文所用“治疗”及“疗法”及类似术语意欲包括针对疾病或病症的治疗性以及预防性或抑制性措施，其产生任何临床上期望或有益的效应，包括(但不限于)减轻或缓解疾病或病症的一或多个症状、使疾病或病症消退、减慢或停止疾病或病症的进展。因此，例如，术语治疗包括在疾病或病症的症状发作之前或之后给予药物，由此预防或消除疾病或病症的一或多个体征。作为另一实例，该术语包括在疾病的临床表达后给予药物，从而抵抗该疾病的症状。此外，在发作后及在已出现临床症状后给予药物包含本文所用“治疗”或“疗法”，其中不论该治疗是否引起疾病改善，给予皆影响疾病或病症的临床参数，例如组织损伤度或转移的量或程度。另外，只要单独或与另一治疗药物组合的本发明组合物与未使用人源化IL-23P19抗体组合物时相比减轻或改善所治疗病症的至少一个症状，不论是否减轻该病症的所有症状，该结果即应视为可有效治疗潜在病症。
所用术语“包装说明书”是指通常包括于治疗产品商业包装内的说明书，其含有关于使用所述治疗产品的适应症、用法、给予、禁忌症和/或警告的信息。
抗体
在一个方面中，本文描述且公开抗IL-23抗体，特别是人源化抗IL-23p19抗体；及包含一或多种抗IL-23抗体，特别是一或多种本发明的人源化抗IL-23p19抗体的组合物及制品。亦描述包括抗IL-23抗体，特别是人源化抗IL-23p19抗体的抗原结合片段的结合剂。人源化抗IL-23p19抗体及结合剂可抑制Th17相关细胞因子的产生，Th17相关细胞因子会促成慢性自身免疫及炎性疾病。因此，人源化抗IL-23p19抗体及结合剂可用于治疗多种疾病或病症。人源化抗IL-23p19抗体及IL-23p19结合剂各自包括特异性识别IL-23p19表位的至少一部分(亦即抗原结合片段)。
在初始表征时，基于IL-23p19结合特征选择小鼠抗体。
因此，在一个方面中，本发明的抗体对IL-23，特别是对人类IL-23的KD小于100pM。在另一方面中，本发明的抗体的KD小于40pM。在另一方面中，本发明的抗体的KD小于20pM。在另一方面中，本发明的抗体的KD小于10pM。在另一方面中，本发明的单克隆抗体的KD小于1pM。
所选小鼠抗体具有下列如表1及表2中所示的轻链可变区及重链可变区。
表1：抗IL-23p19小鼠前导物-VK序列
Figure BDA0001426027050000291
Figure BDA0001426027050000301
Figure BDA0001426027050000311
Figure BDA0001426027050000321
Figure BDA0001426027050000331
Figure BDA0001426027050000341
表2：抗IL-23p29小鼠前导物-VH序列
Figure BDA0001426027050000351
Figure BDA0001426027050000361
Figure BDA0001426027050000371
Figure BDA0001426027050000381
Figure BDA0001426027050000391
Figure BDA0001426027050000401
基于骨架同源性、CDR结构、保守典型残基、保守界面填充残基及其它参数选择各小鼠前导物的人类骨架序列。
各种小鼠抗体的小鼠轻链及重链CDR分别展示于表3及表4中。表4亦展示经由人源化方法源于小鼠抗体6B8的三个重链CDR。
表3：轻链CDR序列
Figure BDA0001426027050000411
Figure BDA0001426027050000421
表4：重链CDR序列
Figure BDA0001426027050000431
Figure BDA0001426027050000441
以上在表3及表4中所列的CDR是使用Chothia编号系统确定的(Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948)。
相比于嵌合亲本Fab显示较佳或同等结合的Fab，经选择用于转化成IgG。将6B8转化成IgG1KO形式。IgG1KO(剔除效应功能)在Fc区中具有两个突变Leu234Ala及Leu235Ala，其降低效应功能，例如FcγR及补体结合。IgG形式描述在文献中(参见例如Hezareh等人,(2001)Journal of Virology 75:12161-12168)。实施例1更详细描述人源化方法。此人源化的结果是产生人源化抗体序列。源于小鼠抗体6B8的人源化轻链可变区及重链可变区的代表性编号提供且展示于表5及表6中。源于小鼠抗体6B8的人源化轻链可变区及重链可变区与小鼠抗体6B8的轻链可变区及重链可变区之间的比对展示于图1中。
源于小鼠抗体6B8的人源化轻链可变区及重链可变区的所选组合产生抗体A、B、C及D：
抗体A：具有IgK-66的6B8-IgG1KO-2(重链可变区6B8CVH-02及轻链可变区6B8CVK-66)；
抗体B：具有IgK-66的6B8-IgG1KO-5(重链可变区6B8CVH-05及轻链可变区6B8CVK-66)；
抗体C：具有IgK-65的6B8-IgG1KO-2(重链可变区6B8CVH-02及轻链可变区6B8CVK-65)；
抗体D：具有IgK-65的6B8-IgG1KO-5(重链可变区6B8CVH-05及轻链可变区6B8CVK-65)。
抗体A、B、C及D具有展示于表7中的重链及轻链序列。
表5：人源化6B8-VK序列
Figure BDA0001426027050000451
Figure BDA0001426027050000461
表6：人源化6B8-VH序列
Figure BDA0001426027050000471
Figure BDA0001426027050000481
表7：抗体A、B、C及D的重链及轻链DNA及氨基酸序列
Figure BDA0001426027050000491
Figure BDA0001426027050000501
Figure BDA0001426027050000511
Figure BDA0001426027050000521
Figure BDA0001426027050000531
Figure BDA0001426027050000541
上表7中，抗体A、B、C及D的轻链可变区及重链可变区加下划线。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下至少一种性质。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下至少两种或至少3、4、5、6、7、8、9、10或11种性质的任何组合。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下所有性质。
·对人类IL-23的KD≤1pM(在50％人类血清中结合速率无变化)
·活体外阻断IL-23与人类IL-23R/Fc结合
·不与人类IL-12结合
·抑制小鼠脾细胞中由人类IL-23诱导的IL-17产生，IC50≤20pM
·抑制人类DB细胞中由人类IL-23诱导的STAT3磷酸化，IC50≤40pM
·无预测的ADCC/CDC活性
·对短尾猴IL-23的KD≤1pM
·与小鼠或大鼠IL-23无交叉反应性
·抑制小鼠耳中由人类IL-23诱导的IL-17及IL-22产生(在1mg/kg下对两种细胞因子的抑制均≥80％)
·稳定性83℃(熔融温度83℃，如通过差示扫描热量测定法所测定)
·溶解度≥100mg/ml(如通过紫外光谱法测量且通过混浊度监测)
·在三只短尾猴中皮下给予1.0mg/kg显示，≥10nM的暴露持续约28天，生物利用度为约70％。
在本文中，无预测的ADCC/DC活性是指本发明的人源化抗IL-23p19抗体对Fc受体的亲和力降低且因此预测不具有ADCC/CDC活性。
在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下至少一种性质。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下至少两种或至少3、4、5、6、7、8、9或10种性质的任何组合。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下所有性质。
·对人类IL-23的KD≤1pM(在50％人类血清中结合速率无变化)
·活体外阻断IL-23与人类IL-23R/Fc结合
·不与人类IL-12结合
·抑制小鼠脾细胞中由人类IL-23诱导的IL-17产生，IC50≤20pM
·抑制人类DB细胞中由人类IL-23诱导的STAT3磷酸化，IC50≤40pM
·无预测的ADCC/CDC活性
·对短尾猴IL-23的KD≤1pM
·与小鼠或大鼠IL-23无交叉反应性
·抑制小鼠耳中由人类IL-23诱导的IL-17及IL-22产生(在1mg/kg下对两种细胞因子的抑制均≥80％)
·稳定性83℃(熔融温度83℃，如通过差示扫描热量测定法所测定)
·溶解度≥100mg/ml(如通过紫外光谱法测量且通过混浊度监测)。
在另一方面中，本发明的人源化抗体具有至少一种以下结合性质(性质A)。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下至少两种或至少三种性质的任何组合。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下所有性质。
·对人类IL-23的KD≤1pM(在50％人类血清中结合速率无变化)
·不与人类IL-12结合
·对短尾猴IL-23的KD≤1pM
·与小鼠或大鼠IL-23无交叉反应性。
特别是，本发明的人源化抗体对人类IL-23的KD≤1pM(在50％人类血清中结合速率无变化)且不与人类IL-12结合。
在另一方面中，本发明的人源化抗体具有至少一种以下功能性质(性质B)。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下至少两种或至少三种性质的任何组合。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下所有性质。
·活体外阻断IL-23与人类IL-23R/Fc结合
·抑制小鼠脾细胞中由人类IL-23诱导的IL-17产生，IC50≤20pM
·抑制人类DB细胞中由人类IL-23诱导的STAT3磷酸化，IC50≤40pM
·抑制小鼠耳中由人类IL-23诱导的IL-17及IL-22产生(在1mg/kg下对两种细胞因子的抑制均≥80％)。
在另一方面中，本发明的人源化抗体具有至少一种以下性质(性质C)。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下至少两种或至少三种性质的任何组合。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下所有性质。
·无预测的ADCC/CDC活性
·稳定性83℃(熔融温度83℃，如通过差示扫描热量测定法所测定)
·溶解度≥100mg/ml(如通过紫外光谱法测量且通过混浊度监测)
·在三只短尾猴中皮下给予1.0mg/kg显示，≥10nM的暴露持续约28天，生物利用度为约70％。
在另一方面中，本发明的人源化抗体具有至少一种以下性质(性质C)。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下至少两种性质的任何组合。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有以下所有性质。
·无预测的ADCC/CDC活性
·稳定性83℃(熔融温度83℃，如通过差示扫描热量测定法所测定)
·溶解度≥100mg/ml(如通过紫外光谱法测量且通过混浊度监测)。
在另一方面中，本发明的人源化抗体具有至少一种性质A、至少一种性质B及至少一种性质C。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体具有至少两种或至少三种性质A、B及C的任何组合。
在一些方面中，人源化抗体显示阻断活性，由此其使IL-23与IL-23受体的结合减小至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。可使用本领域中已知的竞争性结合分析来测量抗体阻断IL-23与IL-23受体结合的能力。或者，可通过评估IL-23的生物效应(例如IL-17及IL-22的产生)以确定由IL-23受体介导的信号传导是否受抑制，以此测量抗体的阻断活性。
在另一方面中，本发明提供一种具有有利生物物理学性质的人源化抗IL-23p19抗体。在一个方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体以至少90％单体形式或至少92％单体形式或至少95％单体形式存在于缓冲液中。在另一方面中，本发明的人源化抗IL-23p19抗体在缓冲液中保持至少90％单体形式或至少92％单体形式或至少95％单体形式持续一个月或四个月。
在一个方面中，本发明的人源化抗体为抗体A、抗体B、抗体C或抗体D。因此，在一个实施方案中，本发明的人源化抗体包含轻链序列SEQ ID NO:174及重链序列SEQ ID NO:176(抗体A)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体包含轻链序列SEQ ID NO:174及重链序列SEQ ID NO:178(抗体B)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体包含轻链序列SEQID NO:180及重链序列SEQ ID NO:176(抗体C)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体包含轻链序列SEQ ID NO:180及重链序列SEQ ID NO:178(抗体D)。
在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由轻链序列SEQ ID NO:174及重链序列SEQ ID NO:176组成(抗体A)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由轻链序列SEQID NO:174及重链序列SEQ ID NO:178组成(抗体B)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由轻链序列SEQ ID NO:180及重链序列SEQ ID NO:176组成(抗体C)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由轻链序列SEQ ID NO:180及重链序列SEQ ID NO:178组成(抗体D)。
在一些实施方案中，人源化抗IL-23p19抗体(包括其抗原结合片段，例如重链及轻链可变区)包含具有源于抗体A(轻链序列＝SEQ ID NO:174；重链序列＝SEQ ID NO:176)、抗体B(轻链序列＝SEQ ID NO:174；重链序列＝SEQ ID NO:178)、抗体C(轻链序列＝SEQ IDNO:180；重链序列＝SEQ ID NO:176)或抗体D(轻链序列＝SEQ ID NO:180；重链序列＝SEQID NO:178)的残基的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，本发明提供一种在由SEQ ID NO:181的氨基酸残基108至126及氨基酸残基137至151组成的表位处与人类IL-23p19结合的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段。
在另一个实施方案中，本发明提供一种与本发明的抗体(例如本文所述的抗体A、抗体B、抗体C或抗体D)竞争性结合人类IL-23p19的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段。可使用本领域中已知的竞争性结合分析来测量抗体或抗原结合片段竞争性结合IL-23p19的能力。
人源化抗IL-23p19抗体任选在共有或种系骨架区中包括特定氨基酸取代。相比于通过将CDR或HVL“直接交换(direct swap)”至人类种系骨架区中所形成的人源化抗体所显示的抗体效能，前述骨架位置中氨基酸残基的特定取代可改良抗体效能的多个方面(包括结合亲和力及/或稳定性)。
在一些实施方案中，本发明阐述轻链可变区具有SEQ ID NO:84、86、88、90、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117或119所示氨基酸序列的其它单克隆抗体。在一些实施方案中，本发明阐述重链可变区具有SEQ ID NO:121、123、125、127、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154或156所示氨基酸序列的其它单克隆抗体(参见以上表1及表2)。这些小鼠抗体的CDR序列展示于表3及表4中。将这些CDR置于人类共有重链及轻链可变域的FR中将产生适用的本发明的人源化抗体。
特别是，本发明提供轻链可变区与重链可变区的组合为SEQ ID NO:84/121、86/123、88/125、90/127、91/128、93/130、95/132、97/134、99/136、101/138、103/140、105/142、107/144、109/146、111/148、113/150、115/152、117/154或119/156的单克隆抗体。这些可变区可与人类恒定区组合。
在一些实施方案中，本发明阐述轻链可变区序列具有SEQ ID NO:158、160、162或164所示氨基酸序列的其它人源化抗体。在一些实施方案中，本发明阐述重链可变区序列具有SEQ ID NO:166、168、170或172所示氨基酸序列的其它人源化抗体(参见以上表5及表6)。这些抗体的CDR序列展示于表3及表4中。特别是，本发明提供轻链可变区与重链可变区的组合为SEQ ID NO:160/166、160/168、158/166或158/168的单克隆抗体。这些可变区可与人类恒定区组合。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:160的CDR，以及氨基酸序列与SEQ IDNO:160的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致、至少93％一致或至少95％一致的骨架区；及人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:166的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:166的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致、至少93％一致或至少95％一致的骨架区。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:160的CDR，以及氨基酸序列与SEQ IDNO:160的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致、至少93％一致或至少95％一致的骨架区；及人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:168的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:168的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致、至少93％一致或至少95％一致的骨架区。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:158的CDR，以及氨基酸序列与SEQ IDNO:158的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致、至少93％一致或至少95％一致的骨架区；及人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:166的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:166的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致、至少93％一致或至少95％一致的骨架区。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:158的CDR，以及氨基酸序列与SEQ IDNO:158的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致、至少93％一致或至少95％一致的骨架区；及人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:168的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:168的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致、至少93％一致或至少95％一致的骨架区。在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体为人源化单克隆抗体。
在一些具体实施方案中，本文公开的人源化抗IL-23p19抗体包含至少重链或轻链可变域，该轻链可变域包含如以上表1至表6中所示的鼠类单克隆抗体或人源化抗体的CDR或HVL及人类种系重链及轻链可变域的FR。
这些序列的CDR展示于表3及表4中。因此，在一个方面中，本发明提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含轻链CDR1(L-CDR1)序列SEQ ID NO:1、4、6、7、8、11、15、18、19、22、27或30；轻链CDR2(L-CDR2)序列SEQ ID NO:2、5、9、12、16、20、23、25、28或31；轻链CDR3(L-CDR3)序列SEQ ID NO:3、10、13、14、17、21、24、26、29或32；重链CDR1(H-CDR1)序列SEQ ID NO:33、36、38、40、43、45、48、51、54、57、60、63、66、67、68、69、77或80；重链CDR2(H-CDR2)序列SEQ ID NO:34、39、41、46、49、52、55、58、61、64、70、72、73、75、78或81；及重链CDR3(H-CDR3)序列SEQ ID NO:35、37、42、44、47、50、53、56、59、62、65、71、74、76、79或82。在一个方面中，抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，该轻链可变区包含以上所列L-CDR1、以上所列L-CDR2及以上所列L-CDR3；及重链可变区，该重链可变区包含以上所列H-CDR1、以上所列H-CDR2及以上所列H-CDR3。
在另一方面中，本发明提供一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含：
a)分别为SEQ ID NO:1、2、3、33、34及35的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
b)分别为SEQ ID NO:4、5、3、36、34及37的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
c)分别为SEQ ID NO:1、2、3、38、39及35的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
d)分别为SEQ ID NO:6、2、3、40、41及42的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
e)分别为SEQ ID NO:7、2、3、43、41及44的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
f)分别为SEQ ID NO:8、9、10、45、46及47的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
g)分别为SEQ ID NO:8、9、10、48、49及50的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
h)分别为SEQ ID NO:11、12、13、51、52及53的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
i)分别为SEQ ID NO:7、2、14、54、55及56的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
j)分别为SEQ ID NO:15、16、17、57、58及59的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
k)分别为SEQ ID NO:18、16、17、60、61及62的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
l)分别为SEQ ID NO:19；20；21；63、66、67或68；64；及65的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
m)分别为SEQ ID NO:22、23、24、69、70及71的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
n)分别为SEQ ID NO:22、25、26、55、72及71的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
o)分别为SEQ ID NO:8、9、10、45、73及74的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
p)分别为SEQ ID NO:27、28、29、45、75及76的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
q)分别为SEQ ID NO:8、9、10、77、78及79的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
r)分别为SEQ ID NO:30、31、32、80、81及82的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列。
在一个方面中，抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，该轻链可变区包含以上所列L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3组合；及重链可变区，该重链可变区包含以上所列H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3组合。
在具体实施方案中，CDR区在这些例示性免疫球蛋白之间交换(即，例如一种小鼠抗体或源于其的人源化抗体的一或两个CDR与来自另一小鼠抗体或源于其的人源化抗体的类似CDR交换)的嵌合抗体预期可产生适用抗体。
在某些实施方案中，人源化抗IL-23P19抗体为抗体片段。上文已概述各种抗体片段且已研发出多种技术来产生所述抗体片段。可经由蛋白水解消化完整抗体来获得片段(例如，参见Morimoto等人，1992，Journal of Biochemical and Biophysical Methods24:107-117；及Brennan等人，1985，Science 229:81)。或者，可在重组宿主细胞中直接产生片段。例如，可直接自大肠杆菌(E.coli)回收Fab'-SH片段，并实施化学偶联以形成F(ab')2片段(例如，参见Carter等人，1992，Bio/Technology 10:163-167)。通过另一方法，可直接自重组宿主细胞培养物中分离F(ab')2片段。本领域技术人员可了解产生抗体片段的其他技术。因此，在一个方面中，本发明提供抗体片段，其包含本文所述的CDR，特别是本文所述的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3的一种组合。在另一方面中，本发明提供抗体片段，其包含本文所述的可变区，例如本文所述的轻链可变区与重链可变区的一种组合。
某些实施方案包括包含轻链序列SEQ ID NO:174或180的任一者与重链序列SEQID NO:176或178组合的人源化抗IL-23p19抗体的F(ab')2片段。这些实施方案可包括包含该F(ab')2的完整抗体。
在一些实施方案中，该抗体或抗体片段包括介导效应子功能的恒定区。恒定区可提供针对表达IL-23的靶细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)反应。效应域可为(例如)Ig分子的Fc区。
抗体的效应域可来自任何适宜的脊椎动物物种及同种型。来自不同动物物种的同种型介导效应子功能的能力不同。例如，人免疫球蛋白介导CDC及ADCC/ADCP的能力一般分别具有以下次序：IgM≈IgG1≈IgG3>IgG2>IgG4及IgG1≈IgG3>IgG2/IgM/IgG4。鼠类免疫球蛋白一般介导CDC及ADCC/ADCP一般分别具有以下次序：鼠类IgM≈IgG3>>IgG2b>IgG2a>>IgG1及IgG2b>IgG2a>IgG1>>IgG3。在另一实施例中，鼠类IgG2a介导ADCC，而鼠类IgG2a及IgM二者介导CDC。
抗体修饰
人源化抗IL-23P19抗体及药物可包括对人源化抗IL-23P19抗体或其抗原结合片段的修饰。例如，可期望在效应子功能方面修饰抗体，以增强抗体在治疗癌症中的效力。一种所述修饰为将半胱氨酸残基引入Fc区中，由此使得在此区域中可形成链间二硫键。由此生成的同二聚抗体可具有经改良的内在化能力和/或增强的补体介导细胞杀伤和/或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。例如，参见Caron等人，1992，J.Exp Med.176:1191-1195；及Shopes，1992，J.Immunol.148：2918-2922。亦可使用异双功能性交联剂来制备具有增强的抗肿瘤活性的同二聚抗体，如Wolff等人，1993，Cancer Research 53：2560-2565中所述。或者，抗体可经改造以含有双重Fc区，从而增强抗体的补体溶胞及ADCC能力。参见Stevenson等人，1989，Anti-Cancer Drug Design 3：219-230。
已通过修改抗体Fc区的糖基化模式来生成支持ADCC的能力经改良的抗体。这是可能的，因为抗体在CH2域中天冬酰胺残基N297处的糖基化参与ADCC必需的IgG与Fcγ受体之间的相互作用。已经改造宿主细胞系以表达糖基化改变(例如增加平分型(bisecting)N-乙酰葡萄糖胺或减少岩藻糖)的抗体。减少岩藻糖比增加平分型N-乙酰葡萄糖胺的存在更大程度地增强ADCC活性。另外，低岩藻糖抗体的ADCC增强与FcγRIIIa V/F多态性无关。
修饰抗体Fc区中的氨基酸序列为增强ADCC的糖基化改造的备选方案。已通过广泛的突变分析来确定Fcγ受体在人IgG1上的结合位点。此导致生成具有Fc突变的人源化IgG1抗体，所述突变提高对FcγRIIIa的结合亲和性并增强活体外ADCC。另外，已获得结合特性具有多种不同变更的Fc变体，所述特性例如与特异性FcγR受体的结合增强且与其他FcγR受体的结合不变或减小。
另一方面包括免疫缀合物，其包含与细胞毒性剂缀合的人源化抗体或其片段，该细胞毒性剂为例如化学治疗药物、毒素(例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即，放射性缀合物)。
上文已阐述可用于产生所述免疫缀合物的化学治疗药物。可用于形成可用免疫缀合物的酶促活性毒素及其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolacaamericana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制剂、泻果素(curcin)、巴豆毒蛋白、肥皂草(Sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、mitogellin、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素(enomycin)、单端孢霉烯等。多种放射性核素可用于产生放射性缀合物的人源化抗IL-23P19抗体。实例包括212Bi、131I、131In、90Y及186Re。
人源化抗IL-23P19抗体与细胞毒性剂或化学治疗剂的缀合物可通过已知方法使用多种双功能蛋白偶联剂制得，所述偶联剂例如3-(2-吡啶基二巯基)丙酸N-琥珀酰亚胺酯(SPDP)、亚胺基硫杂环戊烷(IT)、亚胺酸酯的双功能衍生物(例如己二酸二甲酯HCL)、活性酯(例如辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(例如戊二醛)、双叠氮基化合物(例如双(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(例如双(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(例如甲苯2,6-二异氰酸酯)及双活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人，1987，Science 238:1098中所述来制备。经碳-14标记的1-异硫氰酰苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)为放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。缀合物亦可使用可裂解接头来形成。
亦可将本文所公开人源化抗IL-23P19抗体调配为免疫脂质体。含有抗体的脂质体通过本领域已知的方法来制备，例如以下文献中所阐述：Epstein等人，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:3688；Hwang等人，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4030；及美国专利第4,485,045号及第4,544,545号。循环时间延长的脂质体公开于(例如)美国专利第5,013,556号中。
尤其有用的脂质体可使用包含磷脂酰胆碱、胆固醇及PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物通过反相蒸发法来生成。经由具有指定孔径的滤膜挤出脂质体以获得具有期望直径的脂质体。可经由二硫化物互换反应使本文所公开抗体的Fab'片段与脂质体组合，如Martin等人，1982，J.Biol.Chem.257:286-288中所述。化学治疗药物(例如多柔比星)任选含于脂质体内。例如，参见Gabizon等人，1989，J.National Cancer Inst.81(19):1484。
本文阐述并公开的抗体亦可通过使抗体与活化前药的酶缀合来用于ADEPT(抗体导向的酶前药疗法)操作，该酶将前药(例如，肽基化学治疗药物)转化为活性抗癌药物。例如，参见WO 81/01145、WO 88/07378及美国专利第4,975,278号。可用于ADEPT的免疫缀合物中的酶组分为能作用于前药而将其转化为活性更强的细胞毒性形式的酶。可用于ADEPT的具体酶包括(但不限于)：碱性磷酸酶，其用于将含磷酸酯前药转化为游离药物；芳基硫酸酯酶，其用于将含硫酸酯前药转化为游离药物；胞嘧啶脱胺酶，其用于将非毒性5-氟胞嘧啶转化为抗癌药物5-氟尿嘧啶；蛋白酶，例如沙雷菌(Serratia)蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶及组织蛋白酶(例如组织蛋白酶B及L)，其用于将含肽前药转化为游离药物；D-丙氨酰羧肽酶，其用于转化含有D-氨基酸取代基的前药；碳水化合物裂解酶，例如β-半乳糖苷酶及神经氨酸酶，其用于将糖基化前药转化为游离药物；β-内酰胺酶，其用于将经β-内酰胺衍生的药物转化为游离药物；及青霉素酰胺酶，例如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶，其用于分别将胺氮上经苯氧基乙酰基或苯基乙酰基衍生的药物转化为游离药物。或者，可使用具有酶活性的抗体(“抗体酶”)来将前药转化为游离活性药物(例如，参见Massey，1987，Nature 328：457-458)。可通过已知方法来制备抗体-抗体酶缀合物以供将抗体酶递送至肿瘤细胞群，例如，通过使酶与上述人源化抗IL-23P19抗体/异双功能性交联试剂共价结合来制备。或者，可使用重组DNA技术构造融合蛋白，其包含本文所公开抗体的至少抗原结合区及与之相连的上述酶的至少功能活性部分(例如，参见Neuberger等人，1984，Nature 312:604-608)。
在某些实施方案中，可期望使用人源化抗IL-23P19抗体片段而非完整抗体以(例如)促进组织渗透。可期望修饰抗体片段以延长其血清半衰期。此可通过(例如)将补救受体结合表位纳入抗体片段中来达成。在一种方法中，可改变(例如使之突变)抗体片段中的适宜区域，或可通过(例如)DNA或肽合成将表位纳入肽标签中，随后使该标签在末端或在中部与抗体片段融合。例如，参见WO 96/32478。
在其他实施方案中，亦包括人源化抗IL-23P19抗体的共价修饰。共价修饰包括对以下基团的修饰：半胱氨酰基残基、组氨酰基残基、赖氨酰基及氨基末端残基、精氨酰基残基、酪氨酰基残基、羧基侧基团(天冬氨酰基或谷氨酰基)、谷氨酰氨酰基及天冬酰氨酰基残基或丝氨酰基或苏氨酰基残基。另一共价修饰类型涉及使糖苷与抗体化学或酶促偶联。若适用，所述修饰可通过化学合成或通过抗体的酶促或化学裂解来制备。可通过使抗体的靶向氨基酸残基与能与所选侧链或氨基-或羧基-末端残基反应的有机衍生剂反应来将抗体的其他共价修饰类型引入分子中。
抗体上存在的任何碳水化合物部分的移除可以以化学或酶促方式来完成。化学去糖基化阐述于以下文献中：Hakimuddin等人，1987，Arch.Biochem.Biophys.259:52及Edge等人，1981，Anal.Biochem.，118:131。抗体上碳水化合物部分的酶促裂解可通过使用多种内切糖苷酶及外切糖苷酶来达成，如Thotakura等人，1987，Meth.Enzymol 138:350中所述。
可用的共价修饰的另一类型包含使抗体与多种非蛋白性聚合物(例如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯)中的一者以以下文献中的一或多者所述的方式连接：美国专利第4,640,835号、美国专利第4,496,689号、美国专利第4,301,144号、美国专利第4,670,417号、美国专利第4,791,192号及美国专利第4,179,337号。
人源化及氨基酸序列变体
抗IL-23P19抗体的氨基酸序列变体可通过将适宜核苷酸变化引入抗IL-23P19抗体DNA中或通过肽合成来制备。所述变体包括(例如)本文实施例中抗IL-23P19抗体氨基酸序列内残基的缺失和/或插入和/或取代。实施缺失、插入及取代的任一组合以获得最终构建体，条件是最终构建体具有期望特征。氨基酸变化亦可改变人源化或变体抗IL-23P19抗体的翻译后过程，例如改变糖基化位点的数目或位置。
可用于鉴定抗IL-23P19抗体中优选诱变位置的某些残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham及Wells(Science，244:1081-1085(1989))中所述。此处，鉴定了残基或目标残基群(例如带电荷残基，例如arg、asp、his、lys及glu)且其经中性或带负电荷氨基酸(通常为丙氨酸)取代以影响氨基酸与IL-23P19抗原的相互作用。然后通过在取代位点或针对取代位点引入另外或其他变体来改良那些显示对取代具有功能敏感性的氨基酸位置。因此，在预先确定引入氨基酸序列变异的位点时，突变本身的性质无需预先确定。例如，为分析给定位点处突变的性能，在目标密码子或区域处实施丙氨酸扫描诱变或随机诱变并针对期望活性筛选所表达的抗IL-23P19抗体变体。
氨基酸序列插入包括氨基-和/或羧基末端融合(长度介于一个残基至含有上百或更多残基的多肽的范围内)以及单一或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括与表位标签融合的抗IL-23P19抗体。抗IL-23P19抗体分子的其他插入性变体包括酶或可提高抗体血清半衰期的多肽与抗IL-23P19抗体N-或C-末端的融合。
另一类型的变体系氨基酸取代变体。所述变体在抗IL-23P19抗体分子中移除至少一个氨基酸残基并在该位置处插入不同残基。用于取代诱变的最受关注的位点包括超变区，但亦涵盖FR改变。保守取代展示于表5的“优选取代”标题下。若所述取代引起生物活性改变，则可引入更重要的改变(命名为“示例性取代”，或如下文参照氨基酸种类所进一步阐述)，并筛选产物。
表8：
Figure BDA0001426027050000671
在蛋白化学中，一般公认抗体的生物学特性可通过选择维持以下特性的效应显著不同的取代来达成：(a)取代区域中多肽骨架的结构，例如呈折叠或螺旋构象，(b)分子在靶位点处的电荷或疏水性，或(c)侧链体积。根据常见侧链特性将天然残基分为以下各类：
(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水性：cys、ser、thr；
(3)酸性：asp、glu；
(4)碱性：asn、gin、his、lys、arg；
(5)影响链取向的残基：gly、pro；及
(6)芳香族：trp、tyr、phe。
非保守性取代使得需要将所述种类之一的成员交换为另一种类。
亦可取代(一般用丝氨酸取代)维持人源化或变体抗IL-23P19抗体的适当构象时未涉及的任何半胱氨酸残基，从而提高分子的氧化稳定性，预防异常交联，或提供与细胞毒性或细胞抑制化合物的已确认的经合点。相反，可将半胱氨酸键添加至抗体以提高其稳定性(尤其在抗体为例如Fv片段等抗体片段时)。
一类取代型变体涉及取代亲代抗体(例如人源化或人抗体)中的一或多个超变区残基。通常，所选用于进一步研发的所得变体可相对于产生所述变体的亲代抗体具有改良的生物特性。产生所述取代型变体的便捷方法为使用噬菌体展示实施的亲和性成熟。简言之，使若干超变区位点(例如6至7个位点)突变以在每一位点产生所有可能的氨基酸取代。由此产生的抗体变体以单价方式以与每一颗粒内所封装的M13基因III产物的融合形式自丝状噬菌体颗粒展示出来。然后针对生物学活性(例如结合亲和性)来筛选噬菌体展示的变体。为确定修饰的候选超变区位点，可实施丙氨酸扫描诱变以确定显著促进抗原结合的超变区残基。或者或另外，有利的是分析抗原-抗体复合物的晶体结构以确定抗体与人IL-23P19之间的接触点。所述接触残基及附近残基为本文所述技术的候选取代残基。产生所述变体后，立即如本文所述对变体组进行筛选，且可选择在一或多个相关分析中具有优良特性的抗体以供进一步研发。
抗体的另一类氨基酸变体改变抗体的原始糖基化模式。“改变”意指缺失一或多个存在于抗体中的碳水化合物部分和/或添加一或多个抗体中不存在的糖基化位点。
在一些实施方案中，可期望修饰本发明的抗体以添加糖基化位点。抗体的糖基化通常为N-连接或O-连接。N-连接是指碳水化合物部分连接至天冬酰氨酸残基侧链。三肽序列天冬酰氨酸-X-丝氨酸及天冬酰氨酸-X-苏氨酸(其中X为除脯氨酸外的任何氨基酸)为碳水化合物部分经酶连接至天冬酰氨酸侧链的识别序列。因此，多肽中存在所述三肽序列中的任一者均可产生潜在糖基化位点。O-连接糖基化是指糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一连接至羟基氨基酸，最常见为丝氨酸或苏氨酸，但亦可使用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。因此，为糖基化特定蛋白(例如抗体)，改造该蛋白的氨基酸序列以含有上述三肽序列中的一或多者(对于N-连接糖基化位点)。亦可通过一或多个丝氨酸或苏氨酸残基添加或取代于原始抗体序列中来改变(对于O-连接糖基化位点)。
编码抗IL-23P19抗体氨基酸序列变体的核酸分子为由本领域已知的多种方法制备。所述方法包括(但不限于)自天然来源分离(在天然氨基酸序列变体情况下)或通过抗IL-23P19抗体的预先制备的变体或非变体形式实施寡核苷酸介导(或定点)诱变、PCR诱变及盒式诱变制备。
聚核苷酸、载体、宿主细胞及重组方法
其他实施方案涵盖包含编码人源化抗IL-23P19抗体的序列的分离的聚核苷酸、包含该聚核苷酸的载体及宿主细胞，以及产生人源化抗体的重组技术。分离的聚核苷酸可编码抗IL-23P19抗体的任何期望形式，包括例如全长单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段、二价抗体(diabodies)、线性抗体、单链抗体分子及自抗体片段形成的多特异性抗体。
一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码抗体或抗体片段的轻链可变区的序列，该轻链可变区具有以下任何氨基酸序列：SEQ ID NO:84、86、88、90、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117或119。编码这些氨基酸序列的例示性聚核苷酸序列为SEQ ID NO:83、85、87、89、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116及118。一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码抗体或抗体片段的重链可变区的序列，该重链可变区具有氨基酸序列SEQ ID NO:121、123、125、127、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154或156。编码这些氨基酸序列的例示性聚核苷酸序列为SEQ ID NO:120、122、124、126、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153或155。
一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码抗体或抗体片段的轻链可变区的序列，该轻链可变区具有以下任何氨基酸序列：SEQ ID NO:158、160、162或164。编码这些氨基酸序列的例示性聚核苷酸序列为SEQ ID NO:157、159、161或163。一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码抗体或抗体片段的重链可变区的序列，该重链可变区具有氨基酸序列SEQ ID NO:166、168、170或172。编码这些氨基酸序列的例示性聚核苷酸序列为SEQ IDNO:165、167、169或171。
一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码抗体轻链的序列，该轻链具有以下任何氨基酸序列：SEQ ID NO:174或180。编码这些氨基酸序列的例示性聚核苷酸序列为SEQ ID NO:173或179。一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码抗体重链的序列，该重链具有氨基酸序列SEQ ID NO:176或178。编码这些氨基酸序列的例示性聚核苷酸序列为SEQ ID NO:175或177。
在一个方面中，分离的聚核苷酸序列编码抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段分别包含以下氨基酸序列的轻链可变区及重链可变区：SEQ ID NO:174及SEQ ID NO:176；SEQ ID NO:174及SEQ ID NO:178；SEQ ID NO:180及SEQ ID NO:176；SEQ ID NO:180及SEQID NO:178。编码这些氨基酸序列的例示性聚核苷酸序列分别为SEQ ID NO:173及175；SEQID NO:173及177；SEQ ID NO:179及175；SEQ ID NO:179及177。
包含编码人源化抗IL-23P19抗体或其片段或链的序列的聚核苷酸可与一或多种本领域已知的调节或控制序列融合，且可含于本领域已知的适宜的表达载体或宿主细胞中。编码重链或轻链可变域的每一聚核苷酸分子皆可独立地与编码恒定域(例如人恒定域)的聚核苷酸序列融合，从而使得能产生完整抗体。或者，可使聚核苷酸或其部分融合在一起，从而提供产生单链抗体的模板。
对于重组产生，将编码抗体的聚核苷酸插入可复制载体中以供克隆(扩增DNA)或表达。可使用多种适合表达重组抗体的载体。载体组分一般包括(但不限于)以下中的一或多者：信号序列、复制起点、一或多个标记基因、增强子组件、启动子及转录终止序列。
人源化抗IL-23P19抗体亦可以融合多肽形式产生，其中抗体与异源多肽融合，例如信号序列或在成熟蛋白或多肽的氨基末端具有特异性裂解位点的其他多肽。所选异源性信号序列通常为宿主细胞可识别及加工(即，通过信号肽酶裂解)的序列。对于不能识别并加工人源化抗IL-23P19抗体信号序列的原核宿主细胞而言，信号序列可由原核信号序列取代。信号序列可为(例如)碱性磷酸酶、青霉素酶、脂蛋白、耐热肠毒素II前导序列等。对于酵母分泌，可用(例如)以下信号来取代天然信号序列：得自酵母转化酶α-因子的前导序列(包括酵母菌属(Saccharomyces)及克鲁维酵母属(Kluyveromyces)α-因子前导序列)、酸性磷酸酶、白色念珠菌(C.albicans)葡糖淀粉酶或WO90/13646中所述的信号。在哺乳动物细胞中，可使用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导序列(例如单纯疱疹病毒gD信号)。该前体区的DNA在阅读框中与编码人源化抗IL-23P19抗体的DNA接合。
表达及克隆载体含有使载体能在一或多个所选宿主细胞中复制的核酸序列。通常，在克隆载体中，此序列为使载体能独立于宿主染色体DNA而复制者，且其包括复制起点或自主复制序列。用于多种细菌、酵母及病毒的所述序列为本领域所熟知。来自质粒pBR322的复制起点适用于大多数革兰氏(Gram)阴性细菌，2-υ质粒起点适用于酵母，且多种病毒起点(SV40、多瘤、腺病毒、VSV及BPV)可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点组分(通常可仅使用SV40起点，这是因为其含有早期启动子)。
表达及克隆载体可含有编码可选择标记物的基因以有助于对表达的鉴定。典型可选择标记基因编码如下蛋白：赋予对抗生素或其他毒素(例如，氨苄西林(ampicillin)、新霉素、甲氨蝶呤或四环素)的抗性；或者，为营养缺陷的补体；或在其他备选方案中供应复合培养基中不存在的特定营养素，例如编码杆菌(Bacilli)的D-丙氨酸消旋酶的基因。
选择方案的一个实施例利用药物来阻止宿主细胞的生长。那些经异源基因成功转化的细胞产生赋予抗药性的蛋白，且因此可在该选择方案中存活。该显性选择的实施例使用药物新霉素、霉酚酸及潮霉素。哺乳动物细胞的常用可选择标记物为那些使得能鉴定可吸收编码人源化抗IL-23P19抗体的核酸的细胞的标记物，例如DHFR(二氢叶酸还原酶)、胸苷激酶、金属硫蛋白-I及-II(例如灵长类动物金属硫蛋白基因)、腺苷脱胺酶、鸟氨酸脱羧酶等。首先通过在含有甲氨蝶呤(Mtx)(DHFR的竞争性拮抗剂)的培养基中培养所有转化体来鉴定经DHFR选择基因转化的细胞。在采用野生型DHFR时，适宜的宿主细胞为DHFR活性缺陷的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系(例如DG44)。
或者，经编码抗IL-23P19抗体、野生型DHFR蛋白及另一可选择标记物(例如氨基葡萄糖苷3'-磷酸转移酶(APH))的DNA序列转化或共转化的宿主细胞(尤其是含有内源性DHFR的野生型宿主)可通过在含有针对所述可选择标记物的选择剂(例如氨基糖苷抗生素，例如卡那霉素(kanamycin)、新霉素或G418)的培养基中使细胞生长来进行选择。例如，参见美国专利第4,965,199号。
倘若使用酵母细胞作为宿主细胞来实施重组产生，则可使用存在于酵母质粒YRp7中的TRP1基因(Stinchcomb等人，1979，Nature 282：39)作为可选择标记物。TRP1基因为缺少在色氨酸中生长的能力的酵母突变体菌株(例如，ATCC第44076号或PEP4-1)提供选择标记物(Jones，1977，Genetics 85:12)。则酵母宿主细胞基因组中trp1损伤的存在可提供有效环境以通过在不存在色氨酸时生长来检测转化。类似地，Leu2p缺陷型酵母菌株(例如ATCC 20,622或38,626)通过具有LEU2基因的已知质粒来补足。
另外，可使用得自1.6μm环形质粒pKD1的载体来转化克鲁维酵母。或者，已报导用于大规模产生重组牛凝乳酶的表达系统可用于乳酸克鲁维酵母(K.lactis.)(Van denBerg，1990，Bio/Technology 8:135)。亦已公开通过克鲁维酵母属的工业菌株分泌成熟重组人血清白蛋白的稳定多拷贝表达载体(Fleer等人，1991，Bio/Technology 9:968-975)。
表达及克隆载体通常含有宿主有机体可识别且与编码抗IL-23P19抗体或其多肽链的核酸分子可操作连接的启动子。适用于原核宿主的启动子包括phoA启动子、β-内酰胺酶及乳糖启动子系统、碱性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统及杂合启动子(例如tac启动子)。其他已知的细菌启动子亦适宜。用于细菌系统的启动子亦可含有与编码人源化抗IL-23P19抗体的DNA可操作连接的Shine-Dalgamo(S.D.)序列。
已知多种真核启动子序列。事实上，所有真核基因皆具有富AT区，其位于转录起始位点上游约25至30个碱基处。在许多基因的转录起始点上游70至80个碱基处发现的另一序列为CNCAAT区，其中N可为任一核苷酸。在大多数真核基因的3'端处为AATAAA序列，其可能向编码序列的3'端添加聚A尾的信号。所有所述序列皆以适宜方式插入真核表达载体中。
适用于酵母宿主的启动序列的实例包括以下酶的启动子：3-磷酸甘油酸酯激酶或其他糖酵解酶，例如烯醇化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶及葡糖激酶。
诱导型启动子的另一优点为通过生长条件来控制转录。所述启动子包括以下酶的酵母启动子区：醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酶、与氮代谢相关的衍生物酶、金属硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶及负责麦芽糖及半乳糖利用的酶。用于酵母表达的适宜载体及启动子进一步阐述于EP 73,657中。酵母增强子亦可有利地与酵母启动子一起使用。
在哺乳动物宿主细胞中自载体转录人源化抗IL-23P19抗体受(例如)自以下获得的启动子控制：病毒基因组，例如多瘤、鸡痘病毒、腺病毒(例如腺病毒2)、牛乳头瘤病毒、禽肉瘤病毒、细胞巨化病毒、逆转录病毒、肝炎B病毒及猿猴病毒40(SV40)；异源性哺乳动物启动子，例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子；热休克启动子，条件是所述启动子与宿主细胞系统兼容。
SV40病毒的早期及晚期启动子为便捷地以SV40限制性片段形式获得，其亦含有SV40病毒复制起点。人细胞巨化病毒的立即早期启动子为便捷地以HindIII E限制性片段形式获得。使用牛乳头瘤病毒作为载体在哺乳动物宿主中表达DNA的系统公开于美国专利第4,419,446号中。此系统的修改形式阐述于美国专利第4,601,978号中。亦可参见Reyes等人，1982，Nature297:598-601，其公开在来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子控制下在小鼠细胞中表达人p-干扰素cDNA。或者，可使用劳斯肉瘤病毒(rous sarcoma virus)长末端重复序列作为启动子。
可用于重组表达载体的另一可用组件为增强子序列，其用于提高高等真核生物中编码人源化抗IL-23P19抗体的DNA的转录。现已知多种增强子序列来自哺乳动物基因(例如珠蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白及胰岛素)。然而，通常使用来自真核细胞病毒的增强子。实例包括位于复制起点迟侧(late side)上的SV40增强子(bp 100-270)、细胞巨化病毒早期启动子增强子、位于复制起点迟侧上的多瘤增强子及腺病毒增强子。关于活化真核启动子的增强组件的描述亦可参见Yaniv，1982，Nature 297:17-18。可将增强子剪接至载体中人源化抗IL-23P19抗体编码序列的5'或3'位置处，但优选位于启动子的5'位点。
用于真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人细胞或来自其他多细胞有机体的有核细胞)中的表达载体亦可含有终止转录及稳定mRNA所需的序列。所述序列一般可自真核生物或病毒DNA或cDNA的5'及偶而其3'非翻译区获得。所述区域含有在编码抗IL-23P19抗体的mRNA的非翻译部分中转录为聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一种可用的转录终止组分为牛生长激素聚腺苷酸化区。参见WO94/11026及其中所公开的表达载体。在一些实施方案中，人源化抗IL-23P19抗体可使用CHEF系统来表达。(例如，参见美国专利第5,888,809号，其公开内容为以引用方式并入本文中。)
在本文载体中克隆或表达DNA的适宜的宿主细胞为上述原核细胞、酵母细胞或高等真核细胞。适用于此目的的原核生物包括真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性有机体，例如：肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，例如埃希氏菌属(Escherichia)(例如大肠杆菌)、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、沙门氏菌属(Salmonella)(例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium))、沙雷菌属(例如黏质沙雷氏菌(Serratia marcescans))及志贺氏菌属(Shigella)，以及杆菌属(例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)及地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)(例如于1989年4月12日出版的DD 266,710中所公开的地衣芽孢杆菌41P))、假单胞菌属(Pseudomonas)(例如铜绿假单胞菌)及链霉菌属(Streptomyces)。优选的大肠杆菌克隆宿主为大肠杆菌294(ATCC 31,446)，但其他菌株(例如大肠杆菌B、大肠杆菌X1776(ATCC 31,537)及大肠杆菌W3110(ATCC 27,325))亦适合。所述实施例为例示性而非限制性。
除原核生物外，例如丝状真菌或酵母等真核微生物亦为人源化抗IL-23P19抗体编码载体的适宜的克隆或表达宿主。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或常见的面包酵母(baker's yeast)为最常用的低等真核宿主微生物。然而，一般可使用多种其他属、种及菌株且可用于本文中，例如裂殖酵母菌(Schizosaccharomyces pombe)；克鲁维酵母属宿主，例如乳酸克鲁维酵母、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)(ATCC 12,424)、保加利亚克鲁维酵母(K.bulgaricus)(ATCC 16,045)、威克克鲁维酵母(K.wickeramii)(ATCC 24,178)、瓦尔特克鲁维酵母(K.waltii)(ATCC 56,500)、果蝇克鲁维酵母(K.drosophilarum)(ATCC36,906)、耐热克鲁维酵母(K.thermotolerans)及马科斯克鲁维酵母(K.marxianus)；耶氏酵母属(yarrowia)(EP 402,226)；巴斯德毕赤酵母菌(Pichia pastoris)(EP 183,070)；念珠菌属(Candida)；里氏木霉菌(Trichoderma reesia)(EP244,234)；粗糙链孢霉菌(Neurospora crassa)；许旺酵母属(Schwanniomyces)，例如西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)；及丝状真菌，例如链孢霉属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、弯颈霉属(Tolypocladium)及曲霉菌属(Aspergillus)宿主(例如构巢曲霉(A.nidulans)及黑曲霉(A.niger))。
表达糖基化人源化抗IL-23P19抗体的适宜宿主细胞得自多细胞有机体。无脊椎动物细胞的实例包括植物及昆虫细胞，包括(例如)多种杆状病毒株及变体及来自例如以下宿主的相应许可的昆虫宿主细胞：草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(Aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)(果蝇)及家蚕(Bombyx mori)(蚕)。多种转染用病毒株可自公开途径获得，例如苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)NPV的L-1变体及家蚕NPV的Bm-5株，且所述病毒尤其可用于转染草地贪夜蛾细胞。
亦可采用棉花、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛花、西红柿及烟草的植物细胞培养物作为宿主。
在另一方面中，人源化抗IL-23P19的表达为在脊椎动物细胞中实施。脊椎动物细胞在培养(组织培养)中的繁殖已成为常规操作且技术随处可得。可用哺乳动物宿主细胞系的实例为经SV40转化的猴肾CV1为(COS-7，ATCC CRL 1651)、人胚肾系(293系或经亚克隆以供在悬浮培养中生长的293细胞，Graham等人，1977，J.Gen Virol.36：59)、幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)、中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR1(CHO，Urlaub等人，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216；例如DG44)、小鼠睾丸支持细胞(TM4，Mather，1980，Biol.Reprod.23:243-251)、猴肾细胞(CV1ATCC CCL 70)、非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCCCRL-1587)、人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)、犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)、水牛鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)、人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)、人肝细胞(Hep G2，HB 8065)、小鼠乳房肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)、TR1细胞(Mather等人，1982，AnnalsN.Y.Acad.Sci.383：44-68)、MRC 5细胞、FS4细胞及人肝细胞瘤系(Hep G2)。
用上述用于产生人源化抗IL-23P19抗体的表达或克隆载体来转化宿主细胞，并在常用营养培养基中培养，所述营养培养基经修改以适于诱导启动子、选择转化体或扩增编码期望序列的基因。
可在多种培养基中培养用于产生本文所述人源化抗IL-23P19抗体的宿主细胞。市售培养基适用于培养宿主细胞，例如Ham's F10(Sigma-Aldrich公司，St.Louis，Mo.)、最小必需培养基((MEM)，Sigma-Aldrich公司)、RPMI-1640(Sigma-Aldrich公司)及达尔伯克氏改良的伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)((DMEM)，Sigma-Aldrich公司)。另外，可使用以下文献中的一或多者阐述的任一培养基来作为宿主细胞的培养基：Ham等人，1979，Meth.Enz.58：44；Barnes等人，1980，Anal.Biochem.102：255；美国专利第4,767,704号、美国专利第4,657,866号、美国专利第4,927,762号、美国专利第4,560,655号、美国专利第5,122,469号、WO 90/103430及WO 87/00195。所述培养基中的任一者可根据需要补加有激素和/或其他生长因子(例如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐(例如氯化钠、钙盐、镁盐及磷酸盐)、缓冲液(例如HEPES)、核苷酸(例如腺苷及胸苷)、抗生素(例如庆大霉素)、痕量元素(定义为通常以微摩尔范围的最终浓度存在的无机化合物)及葡萄糖或等效能源。亦可以包括本领域技术人员已知的适当浓度的其他补加物。例如温度、pH等培养条件为那些先前用于所选表达用宿主细胞的条件，且对本领域技术人员而言是显而易见的。
在使用重组技术时，抗体可在细胞内、在壁膜间隙中产生，或直接分泌至培养基中。若在细胞内产生抗体，则作为第一步骤可使细胞破裂以释放蛋白。可通过离心或超滤移除微粒碎片，即宿主细胞或溶解片段。Carter等人，1992，Bio/Technology 10:163-167阐述分离分泌至大肠杆菌壁膜间隙中的抗体的操作。简言之，在乙酸钠(pH 3.5)、EDTA及苯甲磺酰氟(PMSF)存在下经约30分钟使细胞糊剂解冻。可通过离心移除细胞碎片。倘若抗体分泌至培养基中，则通常首先使用市售蛋白浓缩滤器(例如Amicon或Millipore Pellicon超滤单元)浓缩来自所述表达系统的上清液。在任一前述步骤中可包括例如PMSF等蛋白酶抑制剂以抑制蛋白水解，且可包括抗生素以防止外来污染物生长。可使用多种方法自宿主细胞分离抗体。
可使用(例如)羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析及亲和色谱来纯化自细胞制备的抗体组合物，其中亲和色谱为常用纯化技术。蛋白A作为亲和配体的适合性取决于存在于抗体中的任一免疫球蛋白Fc域的物种及同种型。蛋白A可用于纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(例如，参见Lindmark等人，1983J.Immunol.Meth.62:1-13)。推荐蛋白G用于所有小鼠同种型及人γ3(例如，参见Guss等人，1986EMBO J.5:1567-1575)。亲和配体所附接的基质最经常为琼脂糖，但亦可使用其他基质。机械上稳定的基质(例如可控多孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯)使得可达成较使用琼脂糖更快的流速及更短的处理时间。倘若抗体包含CH3域，则Bakerbond ABXTM树脂(J.T.Baker，Phillipsburg，N.J.)可用于纯化。取决于欲回收的抗体，亦可使用其他蛋白纯化技术，例如离子交换柱分级分离、乙醇沉淀、反相HPLC、硅胶色谱、肝素SEPHAROSETM色谱、阴离子或阳离子交换树脂(例如聚天冬氨酸柱)色谱、色谱聚焦、SDS-PAGE及硫酸铵沉淀。
在任何初步纯化步骤后，可使用pH介于约2.5至4.5之间的洗脱缓冲液对包含目标抗体及污染物的混合物实施低pH疏水相互作用色谱，其通常在低盐浓度(例如，约0-0.25M盐)下实施。
亦包括在如本文定义的低、中及高严格度条件下与由编码本发明的抗体或抗体片段的分离的聚核苷酸序列表示的核苷酸序列的全部或一部分(例如编码可变区的部分)发生杂交的核酸。杂交核酸的杂交部分通常长至少15个(例如，20个、25个、30个或50个)核苷酸。杂交核酸的杂交部分与编码抗IL-23P19多肽(例如，重链或轻链可变区)或其补体的核酸的一部分或全部的序列至少80％(例如至少90％、至少95％或至少98％)一致。本文所述类型的杂交核酸可用作(例如)克隆探针、引物(例如PCR引物)或诊断探针。
一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码氨基酸序列为SEQ ID NO:84、86、88、90、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117或119的任一者的抗体或抗体片段的序列；及与聚核苷酸序列SEQ ID NO:83、85、87、89、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116或118至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％一致的序列。
一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码氨基酸序列为SEQ ID NO:158、160、162或164的任一者的抗体或抗体片段的序列；及与聚核苷酸序列SEQ ID NO:157、159、161或163至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％一致的序列。
一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码氨基酸序列为SEQ ID NO:121、123、125、127、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154或156的任一者的抗体或抗体片段的序列；及与聚核苷酸序列SEQ ID NO:120、122、124、126、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153或155至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％一致的序列。
一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码氨基酸序列为SEQ ID NO:166、168、170或172的任一者的抗体或抗体片段的序列；及与聚核苷酸序列SEQ ID NO:165、167、169或171至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％一致的序列。
一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码轻链可变区氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO:84、86、88、90、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117或119的任一者至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％一致的抗体或抗体片段的序列。一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码轻链可变区氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO:158、160、162或164的任一者至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％一致的抗体或抗体片段的序列。一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码重链可变区氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO:121、123、125、127、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154或156的任一者至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％一致的抗体或抗体片段的序列。一些实施方案包括分离的聚核苷酸，其包含编码重链可变区氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO:166、168、170或172的任一者至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％一致的抗体或抗体片段的序列。
本文所用术语“一致”或“一致性百分比”在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中是指两个或更多个序列或子序列在进行对比及对齐(以获得最大对应性)时相同或有指定百分比的核苷酸或氨基酸残基相同。为测定一致性百分比，将序列对齐以达成最佳对比目的(例如，可在第一氨基酸或核酸序列中引入空位以与第二氨基酸或核酸序列达成最佳对齐)。然后对比对应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。若第一序列中的位置与第二序列中的对应位置由相同氨基酸残基或核苷酸占据，则所述分子在该位置处一致。两个序列之间的一致性百分比为所述序列所共有的一致性位置数目的函数(即，一致性％＝一致性位置数/总位置数(例如，重叠位置数)x100)。在一些实施方案中，所对比两个序列在合适时(例如，不包括延伸出所对比序列外的额外序列)于序列内引入空位后长度相同。例如，在对比可变区序列时，不考虑前导序列和/或恒定域序列。在两个序列之间的序列对比中，“对应”CDR是指两个序列中相同位置处的CDR(例如，每一序列的CDR-H1)。
两个序列之间一致性百分比或相似性百分比的测定可使用数学算法来完成。用于对比两个序列的数学算法的优选非限制性实例为Karlin及Altschul的算法(1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268)，其根据Karlin及Altschul，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877加以修改。此一算法已纳入Altschul等人的NBLAST及XBLAST程序中(1990，J.Mol.Biol.215:403-410)。BLAST核苷酸搜索可用NBLAST程序(分数＝100，字长＝12)来实施，从而获得与编码目标蛋白的核酸同源的核苷酸序列。BLAST蛋白搜索可用XBLAST程序(分数＝50，字长＝3)来实施，从而获得与目标蛋白同源的氨基酸序列。出于对比目的，为获得加空位对齐，可如Altschul等人，1997，Nucleic AcidsRes.25:3389-3402中所述来利用Gapped BLAST。或者，可使用PSI-Blast来实施迭代搜索，其检测分子之间的远距离联系(同一文献)。在利用BLAST、Gapped BLAST及PSI-Blast程序时，可使用各程序(例如，XBLAST及NBLAST)的预设参数。用于对比序列的另一优选非限制性实例为Myers及Miller的算法(CABIOS(1989))。此一算法已纳入ALIGN程序(2.0版)中，其为GCG序列对齐软件包的一部分。在利用对齐程序来对比氨基酸序列时，可使用PAM120加权残差表、等于12的空位长度罚分及等于4的空位罚分。用于序列分析的其他算法为本领域已知且包括ADVANCE及ADAM，如Torellis及Robotti，1994，Comput.Appl.Biosci.10:3-5中所述；及FASTA，如Pearson及Lipman，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444-8中所述。在FASTA内，ktup为设定灵敏度及搜索速度的控制选项。若ktup＝2，则通过检查对齐残基对来发现所对比两个序列中的相似区域；若ktup＝1，则检查单一对齐氨基酸。对于蛋白序列，可将ktup设定为2或1，或对于DNA序列设定为1至6。若未指定ktup，则对于蛋白默认值为2且对于DNA默认值为6。或者，蛋白序列对齐可使用CLUSTAL W算法来实施，如Higgins等人，1996，Methods Enzymol.266:383-402所述。
非治疗性用途
本文所述抗体可用作亲和纯化剂。在此方法中，使用本领域熟知方法将抗体固定在例如蛋白A树脂等固相上。使固定抗体与含有欲纯化IL-23P19蛋白(或其片段)的样品接触，且随后用适宜溶剂洗涤载体，从而可移除样品中除与固定抗体结合的IL-23P19蛋白以外的基本上所有物质。最后，用另一适宜溶剂洗涤载体，从而可自抗体释放IL-23P19蛋白。
抗IL-23p19抗体，例如人源化抗IL-23p19抗体亦适用于诊断分析中以检测及/或定量测定IL-23蛋白，例如检测特定细胞、组织或血清中的IL-23表达。抗IL-23p19抗体可诊断性用于例如监测疾病的显现或进展作为临床测试程序的一部分以例如确定给定治疗及/或预防方案的功效。检测可通过偶合抗IL-23p19抗体加以促进。可检测物质的实例包括各种酶、辅基、荧光物质、发光物质、生物发光物质、放射性物质、使用各种正电子发射断层摄影术的正电子发射金属、及非放射性顺磁性金属离子。关于可与本发明的适用作诊断剂的抗体结合的金属离子，参见例如美国专利第4,741,900号。
抗IL-23p19抗体可用于诊断IL-23相关病症(例如特征在于IL-23的表达异常的病症)或确定个体出现IL-23相关病症的风险是否增加的方法中。这些方法包括使来自个体的生物样品与IL-23p19抗体接触并检测抗体与IL-23p19的结合。“生物样品”是指自个体、细胞系、组织培养物或潜在表达IL-23的其它细胞来源获得的任何生物样品。用于自哺乳动物获得组织活检及体液的方法在本领域中为熟知的。
在一些实施方案中，该方法可另外包括比较患者样品中的IL-23含量与对照样品(例如不患有IL-23相关病症的个体)中的IL-23含量，以确定患者是否患有IL-23相关病症或处于显现IL-23相关病症的风险中。
在一些实施方案中，例如出于诊断性目的，可有利地用可检测部分标记抗体。可使用多种可检测标记，包括放射性同位素、荧光标记、酶底物标记等。可使用多种已知技术使标记与抗体间接缀合。例如，可使抗体与生物素缀合，且可使上文所述三大类标记中的任一种与抗生物素蛋白缀合，或反之亦然。生物素选择性地与抗生物素蛋白结合，且该标记由此可以以该间接方式与抗体缀合。或者，为达成标记与抗体之间接缀合，可使抗体与较小半抗原(例如地高辛(digoxin))缀合且使一种不同类型的上述标记与抗半抗原抗体(例如，抗地高辛抗体)缀合。由此，可达成标记与抗体之间接缀合。
示例性放射性同位素标记包括35S、14C、125I、3H及131I。使用(例如)以下文献中所述的技术可用放射性同位素标记抗体：Current Protocols in Immunology，第1及2卷，1991，Coligen等人编辑，Wiley-Interscience，New York，N.Y.，Pubs。可通过(例如)闪烁计数来测量放射性。
示例性荧光标记包括得自以下的标记：稀土螯合物(铕螯合物)或荧光素及其衍生物、罗丹明(rhodamine)及其衍生物、丹磺酰(dansyl)、丽丝胺(Lissamine)、藻红蛋白及得克萨斯红(Texas Red)。可经由已知技术使荧光标记与抗体缀合，例如Current Protocolsin Immunology(上述文献)中所公开的那些。可使用荧光计来定量测量荧光。
本领域已知多种经充分表征的酶-底物标记(例如，综述参见美国专利第4,275,149号)。酶一般催化发色底物发生可使用各种技术测量的化学改变。例如，改变可为可以以分光光度计法测量的底物颜色变化。或者，酶可改变底物的荧光或化学发光。量化荧光变化的技术如上文所述。化学发光底物可通过化学反应经电子激发，随后可发射可使用(例如)化学发光计测量的光线或向荧光受体提供能量。
酶标记的实例包括萤光素酶(例如萤火虫萤光素酶及细菌萤光素酶，美国专利第4,737,456号)、萤光素、2,3-二氢酞嗪二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶(例如辣根过氧化物酶(HRPO))、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(例如尿酸酶及黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等。缀合酶与抗体的技术阐述于(例如)以下文献中：O'Sullivan等人，1981，Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugatesfor use in Enzyme Immunoassay，Methods in Enzym.(J.Langone及H.Van Vunakis编辑)，Academic press，N.Y.，73：147-166。
酶-底物组合的实例包括(例如)：辣根过氧化物酶(HRPO)与作为底物的过氧化氢酶，其中过氧化氢酶氧化染料前体(例如邻苯二胺(OPD)或3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐(TMB))；碱性磷酸酶(AP)与作为发色底物的磷酸对硝基苯酯；及β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)与发色底物(例如对硝基苯基-β-D-半乳糖苷酶或荧光底物4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷酶)。
本领域技术人员可了解多种其他酶-底物组合。所述组合的一般综述参见美国专利第4,275,149号及美国专利第4,318,980号。
在另一实施方案中，使用未标记人源化抗IL-23P19抗体且用结合该人源化抗IL-23P19抗体的经标记抗体来检测。
本文所述抗体可用于任一已知分析方法中，例如竞争性结合分析、直接及间接夹心(sandwich)分析及免疫沉淀分析。例如，参见Zola，Monoclonal Antibodies：A Manualof Techniques，第147-158页(CRC Press公司，1987)。
抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段可用于抑制IL-23与IL-23受体的结合。这些方法包括向细胞(例如哺乳动物细胞)或细胞环境给予抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，由此抑制由IL-23受体介导的信号传导。这些方法可在活体外或在活体内进行。“细胞环境”是指组织、培养基或包围细胞的细胞外基质。向细胞的细胞环境给予抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，以使得该抗体或片段能够与在细胞外部及环绕细胞的IL-23分子结合，从而阻止IL-23与其受体结合。
诊断试剂盒
抗IL-23P19抗体可用于诊断试剂盒中，即预定量试剂与实施诊断分析的说明书的经包装组合。倘若用酶标记抗体，则试剂盒可包括酶所需底物及辅因子(例如提供可检测发色团或荧光团的底物前体)。另外，可包括其他添加剂，例如稳定剂、缓冲剂(例如封阻缓冲剂或溶胞缓冲剂)等。各种试剂的相对量可大幅变化以使所述试剂在溶液中的浓度可显著优化分析的灵敏度。试剂可以干粉形式(通常经冻干)提供，其包括在溶解后可使试剂溶液具有适宜浓度的赋形剂。
治疗性用途
在另一实施方案中，本文所公开人源化抗IL-23P19抗体可用于治疗如本文所述各种与IL-23P19的表达有关的病症。用于治疗IL-23相关病症的方法包括向有需要的个体给予治疗有效量的人源化抗IL-23p19抗体。
人源化抗IL-23P19抗体或药物通过任何适宜方式来给予，包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内及鼻内，且若需要局部免疫抑制治疗，则实施病灶内给予(包括灌注或以其他方式使移植物在移植前与抗体接触)。人源化抗IL-23P19抗体或药物可以(例如)输注或推注形式来给予。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。另外，人源化抗IL-23P19抗体通过脉冲输注适当给予，尤其是以抗体的递减剂量来给予。在一方面中，通过注射来实施给药，最优选通过静脉内或皮下注射来给药，这部分地取决于给予是短期给予还是长期给予。
在预防或治疗疾病时，抗体的适宜剂量可取决于多种因素，例如如上文所定义欲治疗疾病的类型、疾病的严重程度及病程、给予抗体的目的是预防性还是治疗性、先前治疗、患者临床史及对抗体的反应，以及主治医师的决定。抗体一次性给予或经一系列治疗以适当方式给予患者。
取决于疾病类型及严重程度，不论(例如)通过一或多次分开给予还是通过连续输注来给予，向患者给予的抗体初始候选剂量为约1μg/kg至20mg/kg(例如0.1-15mg/kg)。取决于上文所提及的因素，典型日剂量可介于约1μg/kg至100mg/kg或更高范围内。对于经数天或更长时间重复给予，取决于病况，持续治疗直至疾病症状出现所期望的抑制。然而，可使用其他剂量方案。此疗法的进展可通过常用技术及分析容易地监测。示例性剂量方案公开于WO 94/04188中。
本文所用术语“抑制”在与“改善”及“减轻”相同的背景中意指减少疾病的一或多个特征。
可以与良好医疗实践一致的方式对抗体组合物进行调配、配量及给予。在此上下文中需考虑的因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病况、病因、药物的递送位点、给予方法、给予时间安排及从业医师所知的其他因素。欲给予抗体的“治疗有效量”可取决于所述因素，且为预防、改善或治疗与IL-23表达有关的病症所需的最小量。
抗体不必(但任选)与一或多种当前用于预防或治疗所述病症的药物一起调配。所述其他药物的有效量取决于人源化抗IL-23P19抗体存在于调配物中的量、病症或治疗的类型及上述其他因素。所述其他药物通常以与上文所用相同的剂量及给予途径来使用或为上文所用剂量的约1％至99％。
IL-23相关病症
抗IL-23p19抗体或药剂适用于治疗或预防特征在于例如因免疫细胞(例如淋巴细胞或树突状细胞)活化不当所致的IL-23表达异常的免疫病症。此IL-23异常表达可归因于例如IL-23蛋白含量增加。抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段亦可用于治疗或预防呼吸系统病症、代谢障碍(例如糖尿病)及某些癌症。根据本文所述的方法治疗或预防免疫病症、呼吸系统病症、代谢障碍或癌症，是通过向需要此治疗或预防的个体给予有效量的抗IL-23p19抗体或药剂，由此抗体使与疾病状态相关的IL-23的活性降低来达成的。
特征为免疫细胞的不当活化且可通过本文所述方法来治疗或预防的免疫疾病可根据(例如)该病症的基础超敏反应的类型来分类。所述反应通常可分为四类：过敏性反应、细胞毒性(细胞溶解性)反应、免疫复合物反应或细胞介导的免疫(CMI)反应(亦称作迟发型超敏(DTH)反应)。(例如，参见Fundamental Immunology(William E.Paul编辑，RavenPress，N.Y.，第3版，1993))。免疫疾病包括炎性疾病及自身免疫疾病。
所述免疫疾病的具体实例包括以下疾病：类风湿性关节炎、自身免疫性脱髓鞘疾病(例如，多发性硬化、过敏性脑脊髓炎)、内分泌性眼病、葡萄膜视网膜炎、全身性红斑狼疮、重症肌无力、格雷夫斯氏病(Grave's disease)、肾小球肾炎、自身免疫性血液病、炎性肠病(例如，克罗恩氏病或溃疡性结肠炎)、过敏反应、过敏性反应、Sjogren氏综合征、I型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、纤维肌痛、多发性肌炎、皮肌炎、炎症肌炎、多发性内分泌不足、施密特氏综合征(Schmidt'ssyndrome)、自身免疫性葡萄膜炎、艾迪生氏病、肾上腺炎、甲状腺炎、桥本氏甲状腺炎、自身免疫性甲状腺病、恶性贫血、胃萎缩、慢性肝炎、类狼疮性肝炎、动脉粥样硬化、亚急性皮肤红斑狼疮、甲状旁腺功能减退、德雷斯勒氏综合征(Dressler's syndrome)、自身免疫性血小板减少症、特发性血小板减少性紫癜、溶血性贫血、寻常天疱疮、天疱疮、疱疹样皮炎、斑秃、类天疱疮、硬皮症、进行性全身性硬化症、CREST综合征(钙质沉着症、雷诺现象(Raynaud's phenomenon)、食管活动不良、指端硬化及毛细管扩张)、雄性及雌性自身免疫性不育、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎、混合性结缔组织病、结节性多动脉炎、全身性坏死性血管炎、特应性皮炎、特应性鼻炎、古德帕斯丘氏综合征(Goodpasture's syndrome)、恰加斯氏病(Chagas'disease)、肉样瘤病、风湿热、哮喘、复发性流产、抗磷脂综合征、农民肺(farmer's lung)、多形红斑、心脏切开术后综合征、柯兴综合征(Cushing's syndrome)、自身免疫性慢性活动性肝炎、养鸟人肺、中毒性表皮坏死溶解症、阿尔波特氏综合征(Alport's syndrome)、肺泡炎、过敏性肺泡炎、纤维化肺泡炎、间质性肺病、结节性红斑、坏疽性脓皮病、输血反应、高安动脉炎(Takayasu's arteritis)、风湿性多肌痛、颞动脉炎、血吸虫病、巨细胞动脉炎、蛔虫病、曲霉菌病、阿司匹林三联症(Sampter's syndrome)、湿疹、淋巴瘤样肉芽肿病、贝切特氏病(Behcet's disease)、卡普兰综合征(Caplan's syndrome)、川崎病(Kawasaki's disease)、登革热(dengue)、脑脊髓炎、心内膜炎、心内膜心肌纤维化症、眼内炎、持久性隆起性红斑、牛皮癣、牛皮癣关节炎、胎儿成红细胞增多症、嗜酸细胞性筋膜炎、输血后紫癜综合征(Shulman's syndrome)、费尔蒂综合征(Felty's syndrome)、丝虫病、睫状体炎、慢性睫状体炎、异色睫状体炎、福克斯睫状体炎(Fuch's cyclitis)、IgA肾病、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、移植物抗宿主病、移植排斥、心肌病、肌无力综合征(Eaton-Lambert syndrome)、复发性多软骨炎、冷球蛋白血症、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulemia)、埃文斯综合征(Evan's syndrome)、急性呼吸窘迫综合征、肺炎症、骨质疏松、迟发型超敏反应及自身免疫性性腺衰竭。
在一些实施方案中，免疫病症为T细胞介导的免疫病症，且因此如本文所述的抗IL-23p19抗体及药剂亦适用于治疗或预防T细胞介导的免疫病症。
在一个方面中，抗IL-23p19抗体或药剂适用于治疗或预防IL-23异常表达的呼吸系统病症。根据本文所述的方法治疗或预防呼吸系统病症，是通过向需要此治疗或预防的个体给予有效量的抗IL-23p19抗体或药剂，由此抗体使与疾病状态相关的IL-23活性降低来达成的。这些病症包括(但不限于)：呼吸系统病、各种起因的阻塞性肺病、各种起因的肺气肿、限制性肺病、间质性肺病(interstitial pulmonary disease/interstitial lungdisease)、囊肿性纤维化、各种起因的支气管炎、支气管扩张症、ARDS(成人呼吸窘迫综合征)及所有形式的肺水肿；选自COPD(慢性阻塞性肺病)的阻塞性肺病、哮喘、支气管哮喘、儿科哮喘、重度哮喘、急性哮喘发作及慢性支气管炎；起源于COPD(慢性阻塞性肺病)或α1-蛋白酶抑制剂缺乏的肺气肿；选自过敏性肺泡炎的限制性肺病、由工作相关的有害物质引发的限制性肺病(例如石棉肺(asbestosis)或矽肺病(silicosis))、及由肺肿瘤(例如癌性淋巴管症(lymphangiosis carcinomatosa)、支气管肺泡癌及淋巴瘤)引起的限制；由感染，例如病毒、细菌、真菌、原生动物、蠕虫或其它病原体感染引起的肺炎；由各种因素，例如吸气及左心功能不全引起的肺炎；辐射诱发的肺炎或纤维化、胶原症(例如红斑狼疮、全身性硬皮病或类肉瘤病)、肉芽肿(例如伯克氏病(Boeck's disease)、特发性间质性肺炎或特发性肺纤维化(IPF))；黏液阻塞症(mucoviscidosis)、由细菌或病毒感染引起的支气管炎、过敏性支气管炎及中毒性支气管炎；支气管扩张症；肺水肿，例如在吸入有毒物质及外来物质之后的中毒性肺水肿；鼻炎、关节炎及相关关节病、牛皮癣、骨髓性白血病、多发性硬化、阿兹海默氏病(Alzheimer's disease)、肾小球肾炎及慢性异位性皮肤炎。
在另一方面中，如本文所述的抗IL-23p19抗体及药剂亦适用于治疗IL-23异常表达的癌症。
可通过本文所述的方法治疗的IL-23表达性癌症包括(例如)白血病，例如急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(例如，成髓细胞性白血病、前髓细胞性白血病、骨髓单核细胞性白血病、单核细胞性白血病或红白血病)、慢性白血病、慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病或慢性淋巴细胞性白血病；真性红细胞增多症；淋巴瘤(例如，霍奇金氏病或非霍奇金氏病)；多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；重链病；实体肿瘤，例如肉瘤及癌瘤(例如，纤维肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨性肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏肿瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯氏肿瘤(Wilms'tumor)、宫颈癌、子宫癌、睾丸瘤、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤(menangioma)、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、鼻咽癌或食管癌)。
药物组合物及其给药
可将包含IL-23p19结合剂(例如抗IL-23p19抗体)的组合物给予患有免疫病症、呼吸系统病症或癌症或处于患有免疫病症、呼吸系统病症或癌症的风险中的个体。本发明另外提供IL-23P19结合剂(例如，抗IL-23P19抗体)在制备用于预防或治疗表达IL-23P19的癌症或免疫病症的药物中的用途。本文所用术语“个体”意指可给予IL-23P19结合剂的任何哺乳动物患者，包括(例如)人及非人哺乳动物，例如灵长类动物、啮齿类动物及狗。明确意欲使用本文所述方法治疗的个体包括人。在免疫病症或表达IL-23P19的癌症的预防或治疗中，抗体或药物可单独或与其他组份组合给予。可与抗体或药剂组合给予的这些组份包括甲胺喋呤(MTX)及免疫调节剂，例如抗体或小分子。
用于这些药物组合物中的抗体的实例为包含轻链可变区氨基酸序列为SEQ IDNO:84、86、88、90、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117或119的任一者的人源化抗体或抗体片段的抗体。用于这些药物组合物中的抗体的实例亦为包含重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:121、123、125、127、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154或156的任一者的人源化抗体或抗体片段的抗体。
用于这些药物组合物中的抗体的其它实例亦为包含轻链可变区氨基酸序列为SEQID NO:158、160、162或164的任一者的人源化抗体或抗体片段的抗体。用于这些药物组合物中的优选抗体亦为包含重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:166、168、170或172的任一者的人源化抗体或抗体片段的抗体。
用于这些药物组合物中的抗体的其它实例亦为包含轻链可变区及重链可变区为SEQ ID NO:160及166、SEQ ID NO:160及168、SEQ ID NO:158及166或SEQ ID NO:158及168的任一者的人源化抗体或抗体片段的抗体。
用于这些药物组合物中的抗体的其它实例亦为包含轻链区氨基酸序列为SEQ IDNO:174或180的任一者的人源化抗体的抗体。用于这些药物组合物中的优选抗体亦为包含重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:176或178的任一者的人源化抗体的抗体。
用于这些药物组合物中的抗体的其它实例亦为包含抗体A、抗体B、抗体C或抗体D的抗体。
已知且可使用多种递送系统来给予IL-23P19结合剂。引入方法包括(但不限于)真皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外及经口途径。IL-23P19结合剂可通过(例如)输注、推注或注射来给予，且可与例如化学治疗药物等其他生物活性剂一起给予。给予可为全身性或局部给予。在优选实施方案中，通过皮下注射来给予。可在(例如)预填充注射器中制备用于所述注射的调配物，其可每隔一周给予一次。
在具体实施方案中，IL-23P19结合剂组合物为通过注射、借助导管、借助栓剂或借助植入体来给予，该植入体为有孔、无孔或凝胶状材料，其包括例如硅橡胶膜等膜或纤维。通常，在给予组合物时，使用抗IL-23P19抗体或药物不能吸附的材料。
在其他实施方案中，抗IL-23P19抗体或药物以控释系统来递送。在一实施方案中，可使用泵(例如，参见Langer，1990，Science 249:1527-1533；Sefton，1989，CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:201；Buchwald等人，1980，Surgery88:507；Saudek等人，1989，N.Engl.J.Med.321:574)。在另一实施方案中，可使用聚合材料。(例如，参见MedicalApplications of Controlled Release(Langer及Wise编辑，CRC Press，Boca Raton，Fla.，1974)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design andPerformance(Smolen及Ball编辑，Wiley，New York，1984)；Ranger及Peppas，1983，Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61。亦参见Levy等人，1985，Science 228:190；During等人，1989，Ann.Neurol.25:351；Howard等人，1989，J.Neurosurg.71:105。)其他控释系统论述于(例如)Langer(上述文献)中。
IL-23P19结合剂(例如，抗IL-23P19抗体)可以包含治疗有效量的结合剂及一或多种药学上相容的成分的药物组合物形式来给予。
在典型实施方案中，根据常规操作将药物组合物调配为适用于静脉内或皮下给予人的药物组合物。通常，注射给予用组合物为存在于无菌等渗水性缓冲液中的溶液。若需要，药物亦可包括增溶剂及局部麻醉剂(例如利诺卡因(lignocaine))以减轻注射位点的疼痛。通常，各成分单独或混合在一起以单位剂型来供应，例如，作为冻干干粉或无水浓缩物存在于例如安瓿或药囊等标明活性剂的量的密封容器中。倘若药物为通过输注来给予，则可将其分配至含有无菌药物级水或盐水的输注瓶中。倘若药物通过注射来给予，则可提供含有注射用无菌水或盐水的安瓿以使得可在给予之前混合各成分。
此外，可以以药物试剂盒形式来提供药物组合物，所述试剂盒包含(a)含有呈冻干形式的IL-23P19结合剂(例如，抗IL-23P19抗体)的容器及(b)含有药学上可接受的注射用稀释剂(例如，无菌水)的第二容器。药学上可接受的稀释剂可用于重组或稀释冻干抗IL-23P19抗体或药物。任选地，该容器可附带有监管药物或生物产品的制备、使用或销售的政府机构所规定形式的公告，该公告显示政府机构已批准用于人给予的制备、使用或销售。
IL-23P19结合剂(例如，抗IL-23P19抗体)在治疗或预防免疫病症或表达IL-23P19的癌症中的有效量可通过标准临床技术来确定。另外，可任选采用活体外分析来帮助确定最佳剂量范围。调配中所用确切剂量亦可取决于给予途径及免疫病症或癌症的阶段，且应根据从业医师的判断及各患者的情况来决定。可根据得自活体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线来推断有效剂量。
通常，抗IL-23P19抗体或IL-23P19结合剂给予患有免疫病症或表达IL-23P19的癌症的患者的剂量通常为约0.1mg/kg至约100mg/kg个体体重。给予个体的剂量为约0.1mg/kg至约50mg/kg个体体重、约1mg/kg至约30mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约15mg/kg、或约1mg/kg至约10mg/kg。
示例性剂量包括(但不限于)1ng/kg至100mg/kg。在一些实施方案中，剂量为约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg或约16mg/kg。该剂量可以例如以下的频率来给予：每日、每周一次(一周一次)、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每两周一次或每月一次、每两个月一次或每三个月一次。在具体实施方案中，剂量为约0.5mg/kg/周、约1mg/kg/周、约2mg/kg/周、约3mg/kg/周、约4mg/kg/周、约5mg/kg/周、约6mg/kg/周、约7mg/kg/周、约8mg/kg/周、约9mg/kg/周、约10mg/kg/周、约11mg/kg/周、约12mg/kg/周、约13mg/kg/周、约14mg/kg/周、约15mg/kg/周或约16mg/kg/周。在一些实施方案中，剂量介于约1mg/kg/周至约15mg/kg/周的范围内。
在一些实施方案中，包含IL-23P19结合剂的药物组合物还可包含与该结合剂缀合或未缀合的治疗药物。抗IL-23P19抗体或IL-23P19结合剂可与一或多种用于治疗或预防免疫病症或癌症的治疗药物组合共同给予。
该组合疗法给予可对疾病参数(例如，症状严重度、症状数或复发频率)产生累加或协同效应。
对于组合给予的治疗方案，在一具体实施方案中，将抗IL-23P19抗体或IL-23P19结合剂与治疗药物同时给予。在另一具体实施方案中，在给予抗IL-23P19抗体或IL-23P19结合剂之前或之后给予治疗药物，即在给予抗IL-23P19抗体或IL-23P19结合剂之前或之后至少一小时且最长数月、例如至少一小时、5小时、12小时、1天、1周、1个月或3个月给予治疗药物。
制品
在另一方面中，包括含有可用于治疗上述病症的材料的制品。该制品包含容器及标记。适宜容器包括(例如)瓶子、小瓶、注射器及试管。容器可自例如玻璃或塑料等多种材料形成。容器容纳可有效治疗病况的组合物且可具有无菌出入口。例如，容器可为静脉内溶液袋或具有皮下注射针可刺入塞子的小瓶。组合物中的活性药物为人源化抗IL-23P19抗体。容器上或与容器相连的标记指示，该组合物为用于治疗所选病况。制品还可包含第二容器，该第二容器包含药学上可接受的缓冲液，例如磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液(Ringer'ssolution)及右旋糖溶液。其还可包括根据商业及用户角度考虑所期望的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、滤器、针、注射器及写有使用说明的包装说明书。
本发明进一步在下列实施例中加以描述，所述实施例不意欲限制本发明范畴。
实施例
实施例1：产生人源化抗IL-23p19抗体
将小鼠前导抗体6B8转化成由6B8的小鼠可变域及人类恒定IgG1KO域组成的嵌合抗体。小鼠抗体6B8展示于上文表1及表2中。IgG1KO(KO即knock out，剔除)具有两个置换突变(Leu234Ala及Leu235Ala)，所述突变通过降低效应功能，例如FcγR及补体结合而消除ADCC及CDC活性。小鼠抗体的可变域与嵌合抗体的可变域相同。产生嵌合抗体以确认抗体的功能且确保获得正确序列。接着经由设计及筛选方法使抗体的可变区人源化。以任何给定位置中可为人类或小鼠残基的方式制备人类及小鼠残基变化的文库。对于在人类种系与小鼠抗体之间不同的那些氨基酸，制备此类文库。仅选择保留亲本小鼠抗体的功能的纯系。抗体6B8的代表性人源化可变区展示于表5及表6中。
以此方式，抗体A、抗体B、抗体C及抗体D为由小鼠抗体6B8选殖至人类IgG1-KO(KO＝剔除)/κ骨架中所获得的人源化抗体。抗体A、B、C及D展示于表7中。
实施例2：抗体与重组IL-23蛋白的结合
A)下文展示小鼠抗IL-23p19抗体与重组人类IL-23结合的动力学及亲和力(表9)。在单柱纯化之后，使用自融合瘤产生的物质，利用Fortebio Octet(Fortebio,Menlo Park,CA)来测量动力学及结合亲和力。因为Octet不为基于流体学的技术，所以此方法不提供对解离速率的精确测定。在一些情况下，仅可获得亲和力的估计值。
表9
抗体 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(pM)
18C4 3.84E+05 2.14E-06 5.57
18E 5 3.29E+05 2.61E-06 7.93
18D3 3.19E+05 2.16E-06 6.78
20E8 4.21E+05 2.69E-04 638
22E2 3.46E+05 3.53E-04 1024
24A5 2.02E+05 4.57E-06 22.6
15C11 4.11E+05 1.07E-05 26
43F5 1.72E+05 5.96E-06 34.6
27G8 1.57E+05 4.26E-06 27.2
31H9 2.99E+05 3.45E-06 11.5
2D1 <1e-6 <1
9D12 <1e-6 <1
6B8 <1e-6 <1
73H10 5.29E+04 5.24E-06 99.2
74H3 3.06E+04 2.09E-06 68.3
35H8
26F7 4.76E+05 1.34E-05 28.1
34G3 9.18E+05 3.10E-05 32.8
34D9 3.44E+03 1.87E-06 544
B)测量源于小鼠抗体6B8的人源化抗体的亲和力。使用ProteON XPR36(Biorad,Hercules,CA)测量、且整体拟合成1:1结合模型的动力学结合数据显示，与共价联接p19与p40亚单元的重组IL-23(其含有21个氨基酸的接头或不含有该接头)的相互作用具有高亲和力，亲和力的范围为1pM-100pM之间(表10)。亦测试抗体6H12(公开于WO 2007/027714中)、抗体QF20(公开于WO 2007/024846中)及抗体C1273(公开于WO 2007/005955中)。
表10
Figure BDA0001426027050000921
C)用ProteON XPR36测量抗IL-23p19抗体与短尾猴IL-23结合的亲和力及动力学数据，且整体拟合成1:1结合模型(表11)。亦测试抗体6H12(公开于WO 2007/027714中)、抗体QF20(公开于WO 2007/024846中)及抗体C1273(公开于WO 2007/005955中)。
表11
抗体 K<sub>D</sub>(pM) k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s)
抗体A <1 2.95E+06 <1e-6
抗体B <1 2.99E+06 <1e-6
抗体C 2.9 3.23E+06 9.36E-06
抗体D 15.9 2.07E+06 3.29E-05
C-1273 >5,000 n/a n/a
6H12 157 9.91E+05 1.56E-04
QF20 1.2 3.90E+06 4.78E-06
D)相对于人类IL-12的分子选择性
抗IL-23p19抗体亦在100nM的浓度下注射于人类IL-12表面。使用Fortebio Octet测得的这些抗体的结合信号为零，这表明这些抗体选择性结合人类IL-23。亦在50％人类血清存在下分析抗IL-23p19抗体与IL-23的结合且观测到血清对结合速率无显著影响，从而证明结合具有高特异性。
实施例3：人类IL-23与人类IL-23R/Fc结合的竞争结合分析
在生物传感器表面上捕捉人类IL-23R-Fc，并注射10nM人类IL-23。传感器图谱指示IL-23与IL-23受体之间的特异性结合(图2，上部)。抗体接着与10nM人类IL-23共同注射以评估抗体与IL-23结合是否可抑制IL-23与IL-23受体之间的相互作用。在此实施例中，若抗体与人类IL-23结合且能够抑制相互作用，则将观测到结合降低或无结合(图2，下部)。在所示实施例中，等摩尔浓度的抗体A与10nM重组人类IL-23共同注射。
实施例4：功能性细胞分析，抑制小鼠脾细胞经IL-23刺激产生IL-17
一种针对抗IL-23p19抗体的功能性细胞分析，测量其抑制自小鼠脾分离的单核细胞经IL-23刺激的产生IL-17的能力。人类重组IL-23蛋白能够刺激IL-17自小鼠脾细胞释放。此外，活化人类单核细胞性THP-1细胞的上清液中发现的天然来源的人类IL-23可用于刺激小鼠单核细胞产生IL-17。
人类重组IL-23或来自活化THP-1细胞的天然人类IL-23与经滴定的抗IL-23p19抗体一起预培育。接着将IL-23/抗体组合加入至新鲜分离的鼠类脾细胞中。仅将重组IL-23用作阳性对照。在培养两天之后，收集细胞上清液且通过ELISA(R&D Systems,Minneapolis,MN)分析IL-17。下文展示抗IL-23p19抗体的代表性IC50值。所测试抗体为由融合瘤产生的小鼠抗体(第1-19列，参见表1及表2)、嵌合抗体(第20-23列)、及抗体A至D。亦测试抗体6H12(公开于WO 2007/027714中)、抗体QF20(公开于WO 2007/024846中)及抗体C1273(公开于WO2007/005955中)。
表12
Figure BDA0001426027050000931
Figure BDA0001426027050000941
实施例5：在人类活化T细胞分析中针对IL-12的功能特异性测试
在人类活化T细胞分析中测试抗IL-23p19抗体对IL-12的功能性抑制。人类重组IL-12(1ng/ml)与5μg/ml抗IL-23p19抗体一起预培育。接着将所述IL-12/抗体组合添加至来自PHA的人类T细胞母细胞中。仅将重组IL-12用作阳性对照。抗IL-12p70抗体(BenderMedSystems,Vienna,Austria)用作对照的抑制性抗体。在培养两天之后，收集细胞上清液且通过ELISA(R&D Systems)分析IFN-γ。一式三份测试样品且测定IFN-γ的平均值(pg/ml)。结果(连同标准偏差)展示于下表中。
表13
抗体 细胞因子刺激 平均pg/ml IFN-γ+/-标准偏差
无抗体 无 87+/-7
无抗体 1ng/ml IL-12 532+/-51
嵌合18E5 1ng/ml IL-12 511+/-3
嵌合6B8 1ng/ml IL-12 523+/-60
抗体A 1ng/ml IL-12 497+/-30
抗体B 1ng/ml IL-12 537+/-2
抗体C 1ng/ml IL-12 495+/-25
抗体D 1ng/ml IL-12 539+/-38
抗IL-12p70抗体 1ng/ml IL-12 119+/-12
实施例6：抑制人类细胞系DB中由IL-23诱导的STAT3磷酸化
人类细胞系DB(ATCC,Manassas,VA)通过内源性IL-23R复合物(IL-23R及IL-12Rβ1)对IL-23刺激产生应答，且以IL-23剂量依赖性方式使STAT3磷酸化。开发出一种用于测试抗IL-23p19抗体抑制IL-23诱导的STAT3磷酸化的分析。DB细胞以1×10e6个细胞/孔接种于96孔板中。欲测试的抗体经连续稀释且在室温与重组人类IL-23(10ng/ml)一起预培育1小时。接着在37℃下，将抗体/IL-23混合物添加至细胞中，持续30分钟。通过在4℃下离心10分钟收集细胞且接着于冰冷缓冲液(Cell Signaling Technology,Beverly,MA)中将细胞溶解。对一部分溶解产物进行磷酸STAT3ELISA(Invitrogen)。根据相比于无抗体对照孔的STAT3磷酸化抑制百分比计算抗体IC50值。代表性IC50值展示于下表中。
表14
抗体 IC<sub>50</sub>(pM)
抗体A 25，15，38，23，13，18
抗体B 73，84
抗体C 132，80
抗体D 158
QF20 26，26，27
C-1273 163，438
实施例7：小鼠耳中由IL-23诱导产生细胞因子的活体内模型
使用小鼠中的活体内模型。连续4天将重组人类IL-23注射至小鼠耳的皮肤中，从而导致表皮变厚且IL-17及IL-22蛋白上调。在此模型中评估抗IL-23p19抗体。在初次将IL-23注射至皮肤中之前1小时，经单次腹膜内注射给予1mg/kg或5mg/kg的抗体。再持续3天每日一次注射重组人类IL-23(其含有接头)且收集组织进行细胞因子评估。显示抗体对细胞因子产生的抑制作用。三个实验的结果展示于下表中(实验1：第1-7行，实验2：第8-10行，实验3：第1-14行)。
表15
Figure BDA0001426027050000961
实施例8：短尾猴中的药物动力学研究
通过静脉内输注十分钟来向三只短尾猴给予人源化抗IL-23p19抗体，剂量为1.0mg/kg。历经6周时程收集血清样品，且使用特定ELISA测量游离抗体浓度。抗体的血清浓度-时间曲线及相应药物动力学参数概述于下表16中。
表16
抗体 CL(ml/d/kg) Vol(ml/kg) AUC(nM·h/ml) T<sub>1/2</sub>(天) MRT(天)
抗体A 5.2 88 32262 12.1 17.2
抗体B 6.0 87 27030 10.1 14.8
抗体C 4.7 91 34642 14.1 19.6
抗体D 3.4 67 47633 12.6 19.8
实施例9：NSO细胞中的表达及生物物理学数据
转染NS0细胞及产生稳定细胞池(pool)：
使NS0细胞在1％FBS存在下生长，随后进行转染。收集40×10e6个细胞，且与20μg线性化DNA(重链及轻链表达载体)一起再悬浮于含有2％FBS的0.8ml培养基中，接着在冰上培育细胞约15分钟，随后在750V/25μF(Bio-Rad Gene Pulser Xcell)下对细胞电穿孔。在37℃及5％CO2下用2％FBS回收细胞约48小时，接着以2×10e5个细胞/ml接种于含有G418及霉酚酸的96孔板中，持续14-21天直至形成群落。
通过ELISA自96孔板筛选带有群落的上清液。ELISA板用含1μg/ml山羊抗-κ(Southern Biotech,Birmingham,AL)的PBS涂布，且培育经稀释的上清液，接着用山羊抗-人类IgG Fc-HRP(来自Jackson ImmunoResearch Laboratories,West Grove,PA)检测。汇合阳性群落以扩大规模。根据制造商方案使用蛋白A尖头(protein A tips)，通过ForteBio测定抗体产生的效价。抗体A及抗体D的效价介于250-350mg/L之间，自蛋白质纯化的回收率超过80％，且在IEX纯化之后含超过94％的单体。将蛋白质再悬浮于含有20mM柠檬酸钠及115mM NaCl的最终缓冲液(pH 6.0)中且在4℃下保持稳定至少4个月，且在该缓冲液中的溶解度高达100mg/ml。
表17
Figure BDA0001426027050000981
表18
Figure BDA0001426027050000982
AUC：在0.5-1mg/ml的浓度下，根据沉降速度法的测量进行分析超速离心；SEC：尺寸排阻色谱；％M：单体百分比。
实施例10：表位定位(mapping)
使用氢/氘交换质谱(HXMS)来定位抗体A与人类IL-23p19结合的表位。此方法测定IL-23p19的酰胺骨架氢与D2O交换的易发性。实验用单独的IL-23以及添加有抗体A的IL-23进行。由此鉴定IL-23p19序列中显示因抗体A的结合而显著地免于交换的区域。方法的分辨率取决于用胃蛋白酶或蛋白酶XVIII消化所产生的肽。通过采用标准准确质量及HPLC MS/MS技术用未交换样品进行其它对照实验来鉴定这些源于IL-23p19的肽。
使用重组人类IL-23。对于蛋白质+抗体样品，50μl IL-23(0.8mg/ml)与10μl抗体A(12.7mg/ml)一起在室温培育15分钟。抗体A/IL-23的最终摩尔比为1.2:1。
为进行交换，将5μl IL-23蛋白加入50μl氘化缓冲液(含50mM PBS的D2O)中且在室温培育100秒。添加50μl 2M脲/0.5M TCEP且在室温培育60秒。添加5μl胃蛋白酶或蛋白酶XVIII(4mg/ml，溶于0.1％甲酸中)，并将样品即刻冷却至4℃。
在5分钟之后，在下列条件下将50μl样品注射于Shimadzu HPLC系统(SCL10A控制器及两个LC10AD泵)上：
流动相A＝99/1/0.1(水/乙腈/甲酸)。
流动相B＝95/5/0.1(乙腈/水/甲酸)。
流速＝100μl/min。
柱＝Phenomenex Jupiter C5，5μ，50×1.0mm。
流动相管线、柱、注射器环处于冰浴中。
梯度＝时间0(3％B)，时间2.2(3％B)，时间10.1(90％B)，时间12.0(90％B)，时间12.1(3％B)。
如下进行质谱分析：
质谱仪＝Thermo Orbitrap Velos(0900865)。
方法：
A.断裂化(以鉴定肽)：12分钟采集时间(3分钟起动延迟)，在30,000分辨率下全扫描FTMS，七次离子阱数据依赖性扫描(CID)。
B.MS操作：12分钟采集时间(3分钟起动延迟)，在60,000分辨率下全扫描FTMS。
使用断裂化数据及程序Proteome Discoverer(Thermoscientific,Waltham,MA)鉴定胃蛋白酶及蛋白酶XVIII肽。所鉴定的肽使用Xcalibur软件(Thermoscientific)进行目视比较(单独的蛋白质与存在抗体的蛋白质)。对于单独的IL-23与有抗体A的IL-23而言，在IL-23p19区的外部无显著交换变化。对于蛋白质的p19部分，使用程序PepMap(Thermoscientific)分析数据。此程序计算所交换肽的平均质量。检查PepMap结果且藉助于Microsoft Excel计算不产生所验证结果的那些肽。
IL-23序列中显示因抗体A的结合而显著地免于交换的区域，鉴定为SEQID NO:181的氨基酸残基108至126及SEQ ID NO:181的氨基酸残基137至151。
本发明涉及下述各项：
1.抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:20(CDR2-L)；及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及
b)重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:63、66、67或68(CDR1-H)；氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
2.如项1的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:20(CDR2-L)；及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及
b)重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:63(CDR1-H)；氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
3.如项1的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:20(CDR2-L)；及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及
b)重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:66(CDR1-H)；氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
4.如项1的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:20(CDR2-L)；及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及
b)重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:67(CDR1-H)；氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
5.如项1的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQ ID NO:20(CDR2-L)；及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及
b)重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:68(CDR1-H)；氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
6.如项1的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:158、160、162或164的任一者；及重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:166、168、170或172的任一者。
7.如项6的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:160的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:166的重链可变区。
8.如项6的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:160的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:168的重链可变区。
9.如项6的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:158的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:166的重链可变区。
10.如项6的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:158的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:168的重链可变区。
11.如项6的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含与人类IgG1重链恒定区连接的氨基酸序列SEQ ID NO:166或168，以及与人类κ轻链恒定区连接的氨基酸序列SEQ ID NO:158或160。
12.如项1的抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)人源化轻链可变域，该轻链可变域包含SEQ ID NO:158或160的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:158或160的可变域轻链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区；及
b)人源化重链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO:166或168的CDR，以及氨基酸序列与SEQ ID NO:166或168的可变域重链氨基酸序列的骨架区氨基酸序列至少90％一致的骨架区。
13.如项1-12中任一项的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
14.如项1的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是人源化单克隆抗IL-23p19抗体，且包含：含有选自SEQ ID NO:158、160、162及164的任一者的氨基酸序列的轻链可变区，以及含有选自SEQ ID NO:166、168、170及172的任一者的氨基酸序列的重链可变区。
15.如项14的人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含含有氨基酸序列SEQID NO:160的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:166的重链可变区。
16.如项14的人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含含有氨基酸序列SEQID NO:160的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:168的重链可变区。
17.如项14的人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含含有氨基酸序列SEQID NO:158的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:166的重链可变区。
18.如项14的人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含含有氨基酸序列SEQID NO:158的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:168的重链可变区。
19.如项1的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO:174或180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176或178的重链。
20.如项19的人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含含有氨基酸序列SEQID NO:174的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176的重链。
21.如项19的人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含含有氨基酸序列SEQID NO:174的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:178的重链。
22.如项19的人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含含有氨基酸序列SEQID NO:180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176的重链。
23.如项19的人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含含有氨基酸序列SEQID NO:180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:178的重链。
24.抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其在由SEQ ID NO:181的氨基酸残基108至126及氨基酸残基137至151组成的表位处与人类IL-23p19结合。
25.抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其与以下抗体竞争性结合人类IL-23p19：
a)人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:174的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176的重链；或
b)人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:174的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:178的重链；或
c)人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:176的重链；或
d)人源化单克隆抗IL-23p19抗体，其包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:180的轻链及含有氨基酸序列SEQ ID NO:178的重链。
26.如项24或25中任一项的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
27.如项1-26中任一项的抗体或抗原结合片段，其用于医药中。
28.如项27的抗体或抗原结合片段，其中该用途为治疗炎性疾病、自身免疫疾病、呼吸系统疾病、代谢障碍或癌症。
29.如项27的抗体或抗原结合片段，其中该用途为治疗牛皮癣、炎性肠病、牛皮癣关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎或强直性脊椎炎。
30.药物组合物，其包含如项1-26中任一项的抗体或抗原结合片段以及药学上可接受的载剂。
31.治疗患有IL-23相关病症的个体的方法，其包括：向所述个体给予如项1-26中任一项的抗体或抗原结合片段或如项30的药物组合物，所述抗体或抗原结合片段与人类IL-23结合。
32.治疗炎性疾病、自身免疫疾病、呼吸系统疾病、代谢障碍或癌症的方法，其包括向有此需要的个体给予有效量的如项1-26中任一项的抗体或抗原结合片段或如项30的药物组合物。
33.如项32的方法，其中该疾病为牛皮癣、炎性肠病、牛皮癣关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎或强直性脊椎炎。
34.抑制IL-23与哺乳动物细胞上的IL-23受体结合的方法，其包括向所述细胞给予如项1-26中任一项的抗体或抗原结合片段，由此抑制由该IL-23受体介导的信号传导。
35.一种抗IL-23p19抗体或其抗原结合片段，其包含含有以下的轻链可变区：
a)轻链CDR1(L-CDR1)序列SEQ ID NO:1、4、6、7、8、11、15、18、19、22、27或30；
b)轻链CDR2(L-CDR2)序列SEQ ID NO:2、5、9、12、16、20、23、25、28或31；及
c)轻链CDR3(L-CDR3)序列SEQ ID NO:3、10、13、14、17、21、24、26、29或32；
及含有以下的重链可变区：
d)重链CDR1(H-CDR1)序列SEQ ID NO:33、36、38、40、43、45、48、51、54、57、60、63、66、67、68、69、77或80；
e)重链CDR2(H-CDR2)序列SEQ ID NO:34、39、41、46、49、52、55、58、61、64、70、72、73、75、78或81；及
f)重链CDR3(H-CDR3)序列SEQ ID NO:35、37、42、44、47、50、53、56、59、62、65、71、74、76、79或82。
36.如项35的抗IL-23p379抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)分别为SEQ ID NO:1、2、3、33、34及35的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
b)分别为SEQ ID NO:4、5、3、36、34及37的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
c)分别为SEQ ID NO:1、2、3、38、39及35的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
d)分别为SEQ ID NO:6、2、3、40、41及42的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
e)分别为SEQ ID NO:7、2、3、43、41及44的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
f)分别为SEQ ID NO:8、9、10、45、46及47的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
g)分别为SEQ ID NO:8、9、10、48、49及50的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
h)分别为SEQ ID NO:11、12、13、51、52及53的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
i)分别为SEQ ID NO:7、2、14、54、55及56的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
j)分别为SEQ ID NO:15、16、17、57、58及59的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
k)分别为SEQ ID NO:18、16、17、60、61及62的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
l)分别为SEQ ID NO:19；20；21；63、66、67或68；64；及65的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
m)分别为SEQ ID NO:22、23、24、69、70及71的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
n)分别为SEQ ID NO:22、25、26、55、72及71的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
o)分别为SEQ ID NO:8、9、10、45、73及74的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
p)分别为SEQ ID NO:27、28、29、45、75及76的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
q)分别为SEQ ID NO:8、9、10、77、78及79的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列；或
r)分别为SEQ ID NO:30、31、32、80、81及82的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3序列。
37.如项36的抗IL-23p389抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:84的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:121的重链可变区；或
b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:86的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:123的重链可变区；或
c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:88的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:125的重链可变区；或
d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:90的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:127的重链可变区；或
e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:91的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:128的重链可变区；或
f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:93的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:130的重链可变区；或
g)含有氨基酸序列SEQ ID NO:95的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:132的重链可变区；或
h)含有氨基酸序列SEQ ID NO:97的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:134的重链可变区；或
i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:99的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:136的重链可变区；或
j)含有氨基酸序列SEQ ID NO:101的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:138的重链可变区；或
k)含有氨基酸序列SEQ ID NO:103的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:140的重链可变区；或
l)含有氨基酸序列SEQ ID NO:105的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:142的重链可变区；或
m)含有氨基酸序列SEQ ID NO:107的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:144的重链可变区；或
n)含有氨基酸序列SEQ ID NO:109的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:146的重链可变区；或
o)含有氨基酸序列SEQ ID NO:111的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:148的重链可变区；或
p)含有氨基酸序列SEQ ID NO:113的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:150的重链可变区；或
q)含有氨基酸序列SEQ ID NO:115的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:152的重链可变区；或
r)含有氨基酸序列SEQ ID NO:117的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:154的重链可变区；或
s)含有氨基酸序列SEQ ID NO:119的轻链可变区及含有氨基酸序列SEQ ID NO:156的重链可变区。
38.分离的聚核苷酸，其包含：
编码抗体或抗体片段的轻链可变区的序列，该轻链可变区具有以下氨基酸序列：SEQ ID NO:84、86、88、90、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117或119；或
编码抗体或抗体片段的重链可变区的序列，该重链可变区具有以下氨基酸序列：SEQ ID NO:121、123、125、127、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154或156。
39.分离的聚核苷酸，其包含：
编码抗体或抗体片段的轻链可变区的序列，该轻链可变区具有以下氨基酸序列：SEQ ID NO:158、160、162或164；或
编码抗体或抗体片段的重链可变区的序列，该重链可变区具有以下氨基酸序列：SEQ ID NO:166、168、170或172。
40.如项39的分离的聚核苷酸，其中所述聚核苷酸包含：编码抗体轻链的序列，所述轻链具有氨基酸序列SEQ ID NO:174或180；或编码抗体重链的序列，所述重链具有氨基酸序列SEQ ID NO:176或178。
序列表
<110> Barrett, Rachel Rebecca
Canada, Keith
Catron, Katrina Mary
Copenhaver, Robert
Frego, Lee Edward
Raymond, Ernest Lee
Singh, Sanjaya
Zhu, Xiangyang
<120> 抗IL-23抗体
<130> 09-0561
<150> 61/410,158
<151> 2010-11-04
<150> 61/411,953
<151> 2010-11-10
<150> 61/412,594
<151> 2010-11-11
<150> 61/448,785
<151> 2011-03-03
<160> 181
<170> FastSEQ，用于Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 1
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Glu Tyr Leu His
1 5 10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 2
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 3
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 4
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 5
Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 6
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Val Tyr Leu His
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 7
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His
1 5 10
<210> 8
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 8
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 9
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 10
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 11
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Ile His
1 5 10 15
<210> 12
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 12
Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 13
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 14
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 15
Arg Thr Ser Glu Ser Val Tyr Ser Tyr Gly Gln Asn Phe Ile His
1 5 10 15
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 16
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 17
Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 18
<211> 15
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 18
Arg Ala Ser Glu Thr Ile Asn Phe Tyr Gly Thr Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 19
Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala Val Ala
1 5 10
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 20
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 21
His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 22
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 23
Ala Ala Arg Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 24
Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 25
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 26
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 26
Leu His Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 27
Arg Ala Ser Lys Ser Val Arg Phe Ser Asp Tyr Phe Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 28
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 28
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 29
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 29
Gln Asn Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 30
Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Asn Ala Val Val
1 5 10
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 31
Trp Ala Ser Thr Arg His Ile
1 5
<210> 32
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 32
Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Leu Thr
1 5
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 33
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Val Ile His
1 5 10
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 34
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 35
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 35
Arg Leu Asp Glu Ala Tyr
1 5
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 36
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Leu Ile His
1 5 10
<210> 37
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 37
Asn Trp Asp Leu Asp Tyr
1 5
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 38
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Val Met His
1 5 10
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 39
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 40
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Ile Ile His
1 5 10
<210> 41
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 41
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asp Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 42
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 42
Arg Trp Asp Glu Ser Tyr
1 5
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 43
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ser Ile Met His
1 5 10
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 44
Arg Trp Asp Glu Ala Tyr
1 5
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 45
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 46
Val Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 47
Asp Gly His Arg Trp Tyr Phe Asp Val
1 5
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 48
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 49
Glu Ile Ile Pro Thr Thr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ala
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 50
Glu Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 51
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 51
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Thr Ile His
1 5 10
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 52
Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Tyr Pro Lys Phe Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 53
Arg Pro Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 54
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Leu Met His
1 5 10
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 55
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 56
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 56
Asn Trp Asp Tyr Ala Tyr
1 5
<210> 57
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 57
Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 58
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 58
Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 59
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 59
Lys Asp Tyr Asn Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 60
Gly Phe Ser Leu Asn Asn Phe Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 61
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 61
Ala Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 62
Lys Asp Tyr Ser Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 63
Gly Asn Thr Phe Thr Asp Gln Thr Ile His
1 5 10
<210> 64
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 64
Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 65
Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr
1 5 10
<210> 66
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 66
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln Thr Ile His
1 5 10
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 67
Gly Phe Thr Phe Thr Asp Gln Thr Ile His
1 5 10
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 68
Gly Gly Thr Phe Thr Asp Gln Thr Ile His
1 5 10
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 69
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Val Met His
1 5 10
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 70
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 71
<211> 6
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 71
Asn Trp Asp Val Pro Tyr
1 5
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 72
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 73
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 73
Val Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 74
Asn Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5
<210> 75
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 75
Asp Phe Asn His Asn Asn Asp Val Ile Thr Tyr Asn Pro Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 76
Gly Leu Arg Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 77
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asn
1 5 10
<210> 78
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 78
Val Ile Ile Pro Asn Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 79
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 79
Asp Gly Gly Ile Leu Leu Trp Tyr Leu Asp Val
1 5 10
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 80
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asp
1 5 10
<210> 81
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 81
Asp Ile Asn Pro His Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 82
<211> 13
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 82
Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 83
<211> 333
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 83
gacattgtgc tgacccaatc tccaggttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atatcctgca gaaccagtga aagtgtttat agttatggcc aaaattttat acactggtac 120
cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctggaatct 180
gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccatgaat 240
cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaactaatga ggatccgtac 300
acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aga 333
<210> 84
<211> 111
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 84
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Val Tyr Ser Tyr
20 25 30
Gly Gln Asn Phe Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Met Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg
100 105 110
<210> 85
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 85
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc ttgtccacat cagtgggaga cagggtcacc 60
atcacttgca aggccagtcg ggatgtggct attgctgtag cctggtatca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaactact tcttttctgg gcatccaccc gacacactgg ggtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tcggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagattattt ctgtcaccaa tatagcagct atccattcac gttcggctcg 300
gggacaaagt tggaaataaa g 321
<210> 86
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 86
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Leu Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 87
<211> 333
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 87
gacattgcgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctggggca gagggccacc 60
atatcctgca gagccagtga aactattaat ttttatggca ctagttttat gcactggtac 120
cagcagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180
gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240
cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaactaatga ggatccgtac 300
acgttcggag gggggactaa gttggaaata aaa 333
<210> 88
<211> 111
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 88
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Thr Ile Asn Phe Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 89
<211> 336
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 89
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
aacagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac ccagctggaa ataaaa 336
<210> 90
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 90
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Asn Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 91
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 91
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 92
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 92
gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60
ctttcctgca gggccagtca gagtattagc gactacttat actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaaattt gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcactg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcgacag tgtggaacct 240
gatgatgttg gagtcttttt ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgttcac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 93
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 93
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asp Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Asp Asp Val Gly Val Phe Phe Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 94
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 94
gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60
ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gagtacttac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240
gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300
gggacaaagt tggaaataaa a 321
<210> 95
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 95
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Glu Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 96
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 96
gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60
ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gactacttat actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaaattt gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcactg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcgacag tgtggaacct 240
gatgatgttg gagtcttttt ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgttcac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 97
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 97
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asp Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Asp Asp Val Gly Val Phe Phe Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 98
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 98
gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60
ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gagtatttac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240
gaagatgttg gagtttatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300
gggacaaagt tggaaataaa a 321
<210> 99
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 99
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Glu Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 100
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 100
gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60
ctctcctgca gggccagcca gagtattagc gtctacttac actggtatca acaaaaatca 120
cctgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240
gaagatgttg gagtttatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300
gggacaaagt tggaaataaa a 321
<210> 101
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 101
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Val Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 102
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 102
gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaaa tagagtctct 60
ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gactacttac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggtcaaat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240
gaagatgttg gagtgtatta ttgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300
gggacaaagt tggaaataaa a 321
<210> 103
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 103
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asn Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asn Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 333
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 104
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgttt ctctggggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcaga ttctctgact atttttatat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctacc ttgcatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcaga acagtaggga gcttccgtac 300
acgttcggag gggggaccaa gctggagata aaa 333
<210> 105
<211> 111
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 105
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Arg Phe Ser
20 25 30
Asp Tyr Phe Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 106
<211> 333
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 106
gacattgtgt tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat acactggtac 120
caacagaaac cgggacagcc acccaaattc ctcatctatc ttgcatccaa cctagattct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga gcttccgtac 300
acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 333
<210> 107
<211> 111
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 107
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 108
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 108
gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60
ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gactacttac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240
gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 109
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 109
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 110
<211> 336
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 110
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc ccgacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaat 336
<210> 111
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 111
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn
100 105 110
<210> 112
<211> 318
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 112
gacattatga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
atcacctgca aggccagtca ggatgtgggt aatgctgtgg tctggtatca acaaaaacca 120
gggcaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc ggcacattgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattaccaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagattattt ctgtcagcaa tatagcagct atctcacgtt cggtgctggg 300
accaagctgg agctgaaa 318
<210> 113
<211> 106
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 113
Asp Ile Met Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Asn Ala
20 25 30
Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 114
<211> 336
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 114
gatgttgtga tgacccaatc tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tctacattgg 120
tacctgctga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336
<210> 115
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 115
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Leu Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 116
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 116
gacatccaga tgactcagtc tccagttttc ctgtctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atcacatgtc gagcaagtga gaatattgac agttatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctttgct gcacgaaact tagcagatgg tgtgccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattctctca agatcaacag aatgcagtct 240
gaagatgttg cgagatacta ctgtcaacat tattatagta ctccattcac gttcggctcg 300
gggacaaagt tggaaataga a 321
<210> 117
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 117
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Val Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Phe Ala Ala Arg Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Arg Met Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Arg Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu
100 105
<210> 118
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 118
gacatccaga tgactcagtc gccagcttcc ctgtctgcat ctgtgggaga aactgtcatc 60
ttcacatgtc gagcaagtga gaatattgac agttatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattctctca agatcaacag cctgcagtct 240
gaagatgttg cgagatatta ctgtctacat tattatagta ctccattcac gttcggctcg 300
gggacagagt tggaaataaa a 321
<210> 119
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 119
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Ile Phe Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Arg Tyr Tyr Cys Leu His Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Glu Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 120
<211> 357
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 120
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60
acatgcactg tctctgggtt ctcattaacc acctatgcta taagctgggt tcgccagtca 120
ccaggaaagg gtctggagtg gcttggagtc atatggactg gtggaggcac aaaatataat 180
tcagctctca aatccagact gagcatcagc aaagacaact ccaagagtca agttttctta 240
aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccaggtact actgtgccag aaaggactat 300
aattacgggg gtgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357
<210> 121
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 121
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Lys Asp Tyr Asn Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 122
<211> 360
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 122
caggttcagc tgcaacagtc tgacgctgag ttggtgaaac ctggcacttc agtgaagaca 60
tcctgcaaaa tttctggcaa caccttcact gaccaaacta ttcactggat gaagcagagg 120
cctgaacagg gcctggaatg gattggatat atttatccta gagatgatag tcctaagtac 180
aatgagaact tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca acagtctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aatcccagac 300
aggtcaggct acgcctggtt tatttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctcttca 360
<210> 123
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 123
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Thr Ser Cys Lys Ile Ser Gly Asn Thr Phe Thr Asp Gln
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 124
<211> 357
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 124
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctgtc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60
acatgcactg tctctgggtt ctcattaaac aactttgcta taagttgggt tcgtcagcca 120
ccaggaaagg gtctggagtg gcttggagca atatggactg gtggaggcac aaattataat 180
tcagctctca aatccagact gagcatcagc aaagacaact ccaagagtca agttttctta 240
aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccaggtatt attgtgtcag aaaggactat 300
agttacgggg gtgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357
<210> 125
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 125
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ala Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Arg Lys Asp Tyr Ser Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 126
<211> 354
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 126
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgtg ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactata tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggagtt attattcctt acaacggtgg tactagctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgttgaca agtcctccag cacagcctac 240
atggagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc acgagatggt 300
caccgctggt acttcgatgt ctggggcaca gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 127
<211> 118
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 127
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly His Arg Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 128
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 128
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Cys Cys
20 25 30
Ile Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Trp Asp Glu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 129
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 129
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtcaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact cgctatctta ttcactgggt gaaacagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaaatac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac ctctaactgg 300
gacctcgact actggggcca aggcaccact ctcacagtct cctca 345
<210> 130
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 130
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Leu Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ser Asn Trp Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 131
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 131
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgaa gtggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cctctggata cacattcact agttctgtta tacactgggt gaagcagaag 120
gctgggcagg gccttgagtg gattggatat atcaatccct ataatgatgg tactaagtac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca gatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aagacggttg 300
gacgaggctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345
<210> 132
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 132
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Val Ile His Trp Val Lys Gln Lys Ala Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Leu Asp Glu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 133
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 133
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggctgc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact cgctatctta ttcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaaatat 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac ctctaattgg 300
gacctcgact actggggcca aggcaccact ctcacagtct cctca 345
<210> 134
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 134
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ala Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Leu Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
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85 90 95
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100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 135
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 135
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgaa ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cctctggata cacattcact agttctgtta tgcactgggt gaagcagaag 120
gctgggcagg gccttgagtg gattggatat atcaatccct ataatgatgg tactcagtac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aattttccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aagacggttg 300
gacgaggctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345
<210> 136
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 136
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Ala Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Phe Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Leu Asp Glu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 137
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 137
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact agctctatta ttcactgggt gaagcagagg 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acgatgatgt tactaagtac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagacggtgg 300
gacgagtctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345
<210> 138
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 138
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Ile Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asp Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Trp Asp Glu Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 139
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 139
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cactttcact acctctatta tgcactgggt gaaacagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acgatgatgt tactaagtac 180
aatgaaaagt tcaaaggcaa ggccacattg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcagtct attactgtgt aagacggtgg 300
gacgaggctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345
<210> 140
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 140
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ser
20 25 30
Ile Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asp Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Arg Trp Asp Glu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 141
<211> 357
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 141
gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgtaagg cttctggata cacgtttact gactactaca tgaactgggt gaggcagagc 120
catggagaga gccttgagtg gattggagat tttaatcata acaatgatgt tattacttac 180
aacccgaagt tcaagggcaa ggtcacattg actgtagaga agtcttccac cacagcctac 240
atggagctcc gcagcctgtc atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagggggcta 300
cgaggctact atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357
<210> 142
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 142
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ser His Gly Glu Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Phe Asn His Asn Asn Asp Val Ile Thr Tyr Asn Pro Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Val Glu Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Ser Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Arg Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 143
<211> 354
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 143
caggttcagc tgcaacagtc tgacgctgag ttggtgaaac ctggagcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg tttctggcta caccttcact gaccatacta ttcactggat gaagcagagg 120
cctgaacagg gcctggaatg gattggatat atttatccta gagatggtta tcctaagttc 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagacggccc 300
ccttactatg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcgccgtctc ctca 354
<210> 144
<211> 118
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 144
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Tyr Pro Lys Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Pro Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Ala Val Ser Ser
115
<210> 145
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 145
gaggtccaac tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact aggtatctta tgcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggttat attaatcctt acaatgatgg tactaattac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgttc ccttaactgg 300
gactatgctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345
<210> 146
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 146
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Leu Asn Trp Asp Tyr Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 147
<211> 360
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 147
gagttccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact gactacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120
aaaggaaaga gccttgagtg gattggagta attattccta actatggttt tactagctac 180
aatcagaact tcaagggcaa ggccactttg actgtagacc agtcttccag cacagcccac 240
atgcagctca acagtgtgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgt aagagatggg 300
ggaatactcc tctggtatct cgatgtctgg ggcacaggga ccacggtcac cgtctcctca 360
<210> 148
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 148
Glu Phe Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Lys Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Ile Pro Asn Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala His
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Gly Gly Ile Leu Leu Trp Tyr Leu Asp Val Trp Gly Thr
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 149
<211> 366
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 149
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagaagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggagat atcaatcctc acaatggtgg tactatctac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcccac 240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagaaattac 300
tacggtagta gttacggctg gtacttcgat gtctggggca cagggaccac ggtcaccgtc 360
tcgtca 366
<210> 150
<211> 122
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 150
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Lys Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro His Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 151
<211> 360
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 151
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatt 60
tcctgcaggg cttctggtta ctcattcact ggctactaca tgaactgggt gaagcaaagt 120
cctgaaaaga gccttgagtg gattggagag attattccta ccactggtgg tacttcctac 180
aaccagaagt tcaaggccaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca agagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagagagc 300
ggtgggttct actggtactt cgatgtctgg ggcacaggga ccacggtcac cgtctcctca 360
<210> 152
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 152
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ile Pro Thr Thr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 153
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 153
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact aggtatgtta tgcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgt tactaagtac 180
aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca gatcctccag cacagcctac 240
atgaaactca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attattgtgc aagaaactgg 300
gacgttcctt actggggcca agggactctg atcactgtct ctgca 345
<210> 154
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 154
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Lys Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ile Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 155
<211> 345
<212> DNA
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 155
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact aggtatctta tgcactgggt gaagcagaag 120
cctggacagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaagtac 180
aatgagaggt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaaactgg 300
gacgtacctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345
<210> 156
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(Mouse)
<400> 156
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Trp Asp Val Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 157
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 157
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggtgc caaagctgct gctgttctgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccagac 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240
gaggacctgg ccgactacta ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa g 321
<210> 158
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 158
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 159
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 159
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggtgc caaagctgct gatctactgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccaagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240
gaggacgtgg ccgactactt ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300
ggcaccaagc tggagatcaa g 321
<210> 160
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 161
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 161
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggtgc caaagctgct gatctactgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccaagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240
gaggacgtgg ccgactactt ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300
ggcaccaagc tggagatcaa g 321
<210> 162
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 162
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 163
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 163
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggtgc caaagctgct gctgttctgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccagac 180
cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240
gaggacctgg ccgactacta ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300
ggcaccaagc tggagatcaa g 321
<210> 164
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 164
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 165
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 165
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gaccagacca tccactggat gcgccaggcc 120
ccaggccagg gcctggagtg gatcggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180
aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccatc accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300
cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
<210> 166
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 166
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 167
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 167
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggctt caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccaggcc 120
ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180
aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccctg accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300
cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
<210> 168
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 168
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Gln
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 169
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 169
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaagacc 60
agctgcaagg ccagcggcgg caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccagcgc 120
ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180
aacgagaact tcaagggccg cgtcaccatc accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300
cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
<210> 170
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 170
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Thr Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Thr Asp Gln
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 171
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 171
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcgg caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccaggcc 120
ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180
aacgagaatt tcaagggccg cgtcaccctg accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt acttctgcgc ccgcccagac 300
cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
<210> 172
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 172
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Thr Asp Gln
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 173
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 173
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggtgc caaagctgct gatctactgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccaagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240
gaggacgtgg ccgactactt ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 174
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 174
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 175
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 175
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gaccagacca tccactggat gcgccaggcc 120
ccaggccagg gcctggagtg gatcggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180
aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccatc accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300
cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tcgacaagag agttgagccc 660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag caccagaagc tgctggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtcgtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggt 1347
<210> 176
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 176
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 177
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 177
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggctt caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccaggcc 120
ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180
aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccctg accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300
cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tcgacaagag agttgagccc 660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag caccagaagc tgctggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtcgtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggt 1347
<210> 178
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 178
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Gln
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 179
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 179
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggtgc caaagctgct gctgttctgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccagac 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240
gaggacctgg ccgactacta ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 180
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化序列.
<400> 180
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 181
<211> 189
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 181
Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr
1 5 10 15
Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln
20 25 30
Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His
35 40 45
Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr
50 55 60
Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln
65 70 75 80
Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly
85 90 95
Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu
100 105 110
Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu
115 120 125
Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr
130 135 140
Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu
145 150 155 160
Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala
165 170 175
Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro
180 185

Claims (8)

1.人源化抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含：
a)轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQID NO:20(CDR2-L)；及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及
b)重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:66或67(CDR1-H)；氨基酸序列SEQ ID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)，
其中该抗体具有对IL-23小于40pM的KD。
2.权利要求1的人源化抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含：
a)轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQID NO:20(CDR2-L)；及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及
b)重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:66(CDR1-H)；氨基酸序列SEQID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
3.权利要求1的人源化抗IL-23p19抗体，其中该抗体包含：
a)轻链可变区，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:19(CDR1-L)；氨基酸序列SEQID NO:20(CDR2-L)；及氨基酸序列SEQ ID NO:21(CDR3-L)；及
b)重链可变区，该重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:67(CDR1-H)；氨基酸序列SEQID NO:64(CDR2-H)；及氨基酸序列SEQ ID NO:65(CDR3-H)。
4.权利要求1-3任一项的人源化抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
5.权利要求1-3任一项的抗体，其用于在药物中使用。
6.权利要求5的抗体，其中该使用为治疗牛皮癣、炎性肠病、牛皮癣关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎、克罗恩氏病或强直性脊椎炎。
7.权利要求5的抗体，其中该使用为治疗溃疡性结肠炎。
8.药物组合物，其包含权利要求1-3任一项的抗体以及药学上可接受的载剂。
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