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CN107446842A - 一株枯草芽孢杆菌及其在净化水质中的应用 - Google Patents

一株枯草芽孢杆菌及其在净化水质中的应用 Download PDF

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CN107446842A
CN107446842A CN201710606187.3A CN201710606187A CN107446842A CN 107446842 A CN107446842 A CN 107446842A CN 201710606187 A CN201710606187 A CN 201710606187A CN 107446842 A CN107446842 A CN 107446842A
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Changzhou Yinghuochong Biotechnology Co ltd
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Abstract

本发明公开了一株枯草芽孢杆菌及其在净化水质中的应用,所述菌株分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）YHC‑024，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO：M 2017404。所述菌株通过低能氮离子注入诱变后，通过平板筛选出长势良好的菌株，再通过平板透明圈复筛获得。筛选得到的枯草芽孢杆菌，可以起到代替硝化反硝化细菌的作用，能够大幅度降低水体中氨氮含量，氨氮去除率可达90%。可以减少水质净化中其他种类微生物的使用，简化生产工艺，降低治理成本。

Description

一株枯草芽孢杆菌及其在净化水质中的应用
技术领域
本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其在净化水质中的应用，属于微生物选育及发酵技术领域。
背景技术
城市污水中的氨氮主要来自城市生活污水，来自农业施肥及工业废水等。氨氮的主要危害:氨氮能够使湖泊等缓流封闭或半封闭的水体产生富营养化，而水体富营养化已成为全球的重大环境问题。生物脱氨氮作为解决水体富营养化的主要手段，已成为污水处理领域的重中之重。
现在我国对污水处理研究主要采用复合微生物菌剂，其中氨氮的处理主要集中于硝化及反硝化细菌的筛选，而枯草芽孢杆菌则主要用于复池塘水质底质，抑止有害菌生长。开发一种高效去除氨氮的枯草芽孢杆菌，可以减少其他种类微生物的使用，简化生产工艺，降低治理成本。
发明内容
本发明的目的是提供一株枯草芽孢杆菌及其在中净化水质中的应用，诱变方法简单、高效、安全，相较于出发混合菌种，得到的枯草芽孢杆菌能在中净化水质，且发酵周期短，发酵产量高，减少生产成本，简化生产工艺。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一株枯草芽孢杆菌，分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）YHC-024，已于2017年6月30日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，地址：中国 武汉 武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2017404。
本发明所述的枯草芽孢杆菌的筛选方法是：将实验室保存的枯草芽孢杆菌YHCB-003细胞悬浮液经低能氮离子注入诱变后，通过平板筛选出长势良好的菌株，再通过平板透明圈复筛获取作为下一轮诱变的出发菌株，重复上述诱变过程，最后筛选出符合工业应用的目标菌株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）YHC-024。
本发明菌株的形态学及生理化学特征如下：
菌落颜色：白色；
需氧方式：好氧；
菌落大小：3~8μm；
适宜生长温度：30~35℃；
适宜生长pH：6.0~7.0；
菌落形态：圆形；
革兰氏染色：阳性。
本发明所提供的枯草芽孢杆菌筛选诱变方法，具体步骤如下
（a)、细胞悬浮液制备：将平板上培养的枯草芽孢杆菌制成细胞悬液，调整浓度为106/毫升，并添加5%~10%的甘油。
（b)、低能氮离子注入诱变：取0.1 mL的步骤(a)中细胞悬浮液均匀涂布于无菌平皿上，以无菌风吹干，在20~30 KeV，注入剂量为3.6×1014~26.6×1014 ions/cm3下对其进行氮离子注入。
(c)、初筛：将步骤（b）诱变得到的菌种在无菌条件下用1 mL无菌水洗脱，涂布到平板培养基上，在30~35 ℃下倒置培养,培养时间为2~3d，筛选长势良好的单菌落。
（d）、单细胞悬浮液的制备：将筛选出的枯草芽孢杆菌涂布到平板培养基上，并在30~35 ℃下倒置培养2~3d后，制备成细胞悬液，调整浓度为106/毫升，并加入5%~10%甘油。
（e）、低能氮离子注入诱变：取0.1 mL的步骤(d)中细胞悬液均匀涂布于无菌平皿上，以无菌风吹干，在20~30 KeV，注入剂量为3.6×1014~26.6×1014ions/cm3下对其进行氮离子注入。离子注入完毕后，取出平皿，在无菌条件下用1 mL无菌水洗脱，涂布到平板培养基上，在30~35 ℃下倒置培养，培养时间为2~3d。
（f）、复筛：将步骤（e）诱变得到的菌种接种至斜面培养基上培养后，在30~35℃下倒置培养培养时间为2~3 d；再接种至种子培养基培养，培养温度为30~35℃，摇瓶装液量10%~30%（v/v），培养时间16~24h.，将种子培养基中的种液接种至发酵培养基培养，接种量5%~15%（V/V)，250 mL摇瓶装液量30~50 mL，发酵温度30~35 ℃，发酵时间16~24h。
将0.1~0.5ml发酵菌悬液滴加到有机氮固体平板培养基中央，以同样无菌水为对照，28 ℃条件下培养5d，用直尺测量溶氮圈直径(D)和菌落直径(d)，并根据是否产生溶氮圈以及D/d值的大小来确定菌株的降解氨氮能力。
筛选出降解效率高菌株做下一次诱变的出发菌株，重复d~f，直到筛选出目标菌株。
步骤（b）中低能氮离子注入，优选诱变能量为20KeV。
在上述筛选方法中：步骤（b)、（c）、（d）和（e）中所采用的平板培养基包含如下质量百分数成分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，琼脂1%~3%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的一种或多种混合物；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的一种或多种混合；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的一种或几种混合。
步骤（f）所采用的斜面培养基包含如下质量分数成分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，琼脂1%~3%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的一种或几种混合物；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的一种或多种混合；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的一种或几种混合。
步骤（f)所采用的种子培养基包含如下质量分数成分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，其余为水，pH调至6~7，所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的一种或几种混合物；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的一种或多种混合；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的一种或几种混合。
步骤（f）所采用的发酵培养基包含如下质量分数成分：氮源5%~10%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的一种或几种混合物；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的一种或多种混合；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的一种或几种混合。
本发明菌株采用的离子束诱变育种是一种交叉物理学和生物学的新型诱变方式，和经典诱变方法相比，在遗传稳定性，诱变频率性上有巨大优势。同时采用糖蜜、玉米浆等工业废弃原材料进行发酵，发酵时间缩短到24h以内，最终获得的枯草芽孢杆菌氨氮去除率可达90%。
所述的枯草芽孢杆菌YHC-024在净化水质中的应用。
将枯草芽孢杆菌YHC-024发酵培养后，离心得菌体，将菌体直接加入到待净化的水体中，或者与其他微生物复合制成复合菌剂加入到待净化的水体中，降解水体中的氨氮。
一种含有所述枯草芽孢杆菌YHC-024的菌剂，所述菌剂的制备方法如下：
（1）平板培养：将枯草芽孢杆菌接种到平板培养基，培养温度为30~35℃,培养时间2~3d。
（2）斜面培养：将步骤(1)平板培养的枯草芽孢杆菌接种到斜面培养基上，培养温度为30~35℃，培养时间为2~3d。
（3）种子培养：将步骤（2）斜面培养的枯草芽孢杆菌菌悬液接种到种子培养基中，培养温度为30~35℃，摇瓶装液量10%~30%（v/v），培养时间为16~24h。
（4）发酵培养：将步骤（3）中的种子培养液接种至发酵培养基，以5%~15%（V/V）接种量接种于发酵培养基中，培养温度为30~35℃，培养时间为16~24h。
其中，所述平板培养基包含如下质量百分数的组分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，琼脂1%~3%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的至少一种；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的至少一种；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的至少一种。
所述斜面培养基包含如下质量分数的组分：所述步骤2）中的斜面培养基包含如下质量百分数的组分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，琼脂1%~3%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的至少一种；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的至少一种；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的至少一种。
所述种子液培养基包含如下质量分数组分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的一种或几种混合物；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的一种或多种混合；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的一种或几种混合。
所述发酵培养基包含如下质量分数组分：氮源5%~10%，碳源5%~15%，无机盐0.1%~0.5%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的一种或几种混合物；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的一种或多种混合；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的一种或几种混合。
净水实验：将发酵液上清离心后，以质量百分比为0.1%~1%的比例加入高氮磷含量的污水中，每隔24h后检测氨氮去除率，水质达标排放。
所述高氨氮污水中氨氮含量为8~10mg/L，可以为城市河道、农业污水中的一种或多种混合。
有益效果：
本发明筛选得到的枯草芽孢杆菌，可以起到代替硝化反硝化细菌的作用，能够大幅度降低水体中氨氮含量，氨氮去除率可达90%。可以减少水质净化中其他种类微生物的使用，简化生产工艺，降低治理成本。且本发明菌株在500L发酵罐中，发酵时间下降到24h，极大的减少了菌剂的生产成本。本发明菌株完全符合工业化生产的技术指标，可用于工业化发酵生产，有重大的社会科研意义和经济价值。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然后，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体物料比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应该也不会限制本发明。
以下实施例中污水来源于城市河道或者农业污水，主要污染物来源于生活污水及农业施肥等，本发明菌株具备复合菌株的效果，具备抑菌及降解氨氮的双重功能。
实施例1
本实施例说明将枯草芽孢杆菌原始菌株进行低能氮离子注入诱变筛选的方法。
进行第一步低能氮离子注入诱变筛选的具体步骤如下：
（a）、单细胞悬浮液制备：取30~35℃恒温培养2~3d的枯草芽孢杆菌YHCB-003新鲜斜面加混有5%~10%甘油的无菌水10mL，制成菌悬液，用血球计数板计数，调整细胞浓度106个/毫升。
(b)、低能氮离子注入诱变：取0.1mL步骤（a）中的菌悬液均匀涂布于无菌平皿上，镜检无细胞重叠者进行低能氮离子注入。本实验低能氮离子注入机为离子束生物工程装置。在20KeV,注入剂量为5.5×1014ions/cm3下对其进行氮离子注入，靶室真空度为10-3Pa，以15S脉冲式注入，间隔10S。离子注入完毕后，取出平皿，在无菌条件下用1mL无菌水洗脱，涂布到平板上，在30~35℃下倒置培养2~3d。
(c)、诱变菌株的筛选：
初筛：取步骤（b）中诱变得到的菌种在无菌条件下用1 mL无菌水洗脱，涂布到平板培养基上，在30~35 ℃下倒置培养培养时间为2~3d，筛选长势较好的单菌落。
复筛：将筛选出的菌种接种至斜面培养基上培养后，在30~35℃下倒置培养，培养时间为2~3 d；再接种至种子培养基培养，培养温度为30~35℃，摇瓶装液量10%~30%（v/v），培养时间24~36 h.，将种子培养基中的种液接种至发酵培养基培养，接种量5%~15%（V/V)，250 mL摇瓶装液量30~50 mL，发酵温度30~35 ℃，发酵时间36~48h。将0.1~0.5ml发酵菌悬液滴加到有机氮固体平板培养基中央，以同样无菌水为对照，28 ℃条件下培养5d，用直尺测量溶氮圈直径(D)和菌落直径(d)，并根据是否产生溶氮圈以及D/d值的大小来确定菌株的降解氨氮能力。
其中步骤（b）中的平板培养基为：玉米浆3%，尿素1%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，琼脂1.5%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃； 所述百分数为质量百分数。
所述斜面培养基包含如下质量分数的组分：玉米浆3%，尿素1%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，琼脂1.5%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
所述种子液培养基包含如下质量分数组分：玉米浆1%，尿素2%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
所述发酵培养基包含如下质量分数组分：玉米浆3%，尿素2%，糖蜜13%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃。
实施例2
本实施例说明枯草芽孢杆菌在净化水质中的应用
本实施例营养基配方（%为质量百分比）
平板培养基为：玉米浆3%，尿素1%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，琼脂1.5%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
斜面培养基：玉米浆3%，尿素1%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，琼脂1.5%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
种子培养基：玉米浆1%，尿素2%，糖蜜5%，硫酸镁0. 1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
发酵培养基：玉米浆3%，尿素2%，糖蜜13%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
污水来源于常州五星河，污水中氨氮含量为9.56mg/L。
将筛选得到的枯草芽孢杆菌接种至平板培养基上于30℃条件下倒置培养48h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度30℃，培养时间48h。在超净工作台内，用5ml移液管吸取无菌水于斜面中，再用大口5ml移液管吸取斜面上均匀涂抹的菌悬液接种到种子培养基，培养温度30℃，100mL摇瓶装液量45mL，在180rpm摇床转速下培养24h；将摇床上种子液合并后接种到50L种子罐中进行培养，种子罐中种子培养基的装液量为35L，接种量10%（v/v），培养温度30℃，在180rpm转速下培养24h。再将种子罐压入到500 L发酵罐中进行发酵，发酵罐中发酵培养基的装液量为350 L，接种量10%（v/v），培养温度30℃，在180rpm转速下培养24h。将发酵液上清离心后，9000转离心30分钟后，以0.1%（wt）的比例加入50L高氨氮含量的污水中，每隔24h后检测氨氮去除率，以出发菌株为对照，水质净化结果如表1所示。
表1：
实施例3
本实施例说明枯草芽孢杆菌在净化水质中的应用
本实施例营养基配方（%为质量百分比）
平板培养基为：玉米浆3%，尿素1%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，琼脂1.5%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
斜面培养基：玉米浆3%，尿素1%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，琼脂1.5%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
种子培养基：玉米浆1%，尿素2%，糖蜜5%，硫酸镁0. 1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
发酵培养基：玉米浆3%，尿素2%，糖蜜13%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
污水来源于常州五星河，污水中氨氮含量为10.02mg/L。
将筛选得到的枯草芽孢杆菌接种至平板培养基上于30℃条件下倒置培养48h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度30℃，培养时间48h。在超净工作台内，用5ml移液管吸取无菌水于斜面中，再用大口5ml移液管吸取斜面上均匀涂抹的菌悬液接种到种子培养基，培养温度30℃，100mL摇瓶瓶装液量45mL，在180rpm摇床转速下培养24h；将摇床上种子液合并后接种到50L种子罐中进行培养，种子罐中种子培养基的装液量为35L，接种量10%（v/v），培养温度30℃，在180rpm转速下培养24h。再将种子罐压入到500 L发酵罐中进行发酵，发酵罐中发酵培养基的装液量为350 L，接种量10%（v/v），培养温度30℃，在180rpm转速下培养20h。将发酵液上清离心后，9000转离心30分钟后，以0.1%的比例加入50L高氨氮含量的污水中，每隔24h后检测氨氮去除率，以出发菌株为对照，水质净化结果如表2所示。
表2：
实施例4
本实施例说明枯草芽孢杆菌在净化水质中的应用
本实施例营养基配方（%为质量百分比）
平板培养基为：玉米浆3%，尿素1%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，琼脂1.5%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
斜面培养基：玉米浆3%，尿素1%，糖蜜5%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，琼脂1.5%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
种子培养基：玉米浆1%，尿素2%，糖蜜5%，硫酸镁0. 1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
发酵培养基：玉米浆3%，尿素2%，糖蜜13%，硫酸镁0.1%，氯化钙0.1%，氯化铁0.1%，其余为水，pH调至6.8，培养温度为30℃；
污水来源于常州五星河，污水中氨氮含量为9.03mg/L。
将筛选得到的枯草芽孢杆菌接种至平板培养基上于30℃条件下倒置培养48h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度30℃，培养时间48h。在超净工作台内，用5ml移液管吸取无菌水于斜面中，再用大口5ml移液管吸取斜面上均匀涂抹的菌悬液接种到种子培养基，培养温度30℃，100mL摇瓶瓶装液量45mL，在180rpm摇床转速下培养24h；将摇床上种子液合并后接种到50L种子罐中进行培养，种子罐中种子培养基的装液量为35L，接种量10%（v/v），培养温度30℃，在180rpm转速下培养24h。再将种子罐压入到500 L发酵罐中进行发酵，发酵罐中发酵培养基的装液量为350 L，接种量10%（v/v），培养温度30℃，在180rpm转速下培养22h。将发酵液上清离心后，9000转离心30分钟后，以0.2%的比例加入50L高氨氮含量的污水中，每隔24h后检测氨氮去除率，以出发菌株为对照,水质净化结果如表3所示。
表3
实施例5
本实施例说明枯草芽孢杆菌YHC-024的抑菌效果检测
指示大肠杆菌菌液10 mL均匀涂布于 LB固体培养基上，用牛津杯打孔（孔径6 mm），加稀释菌样量50 mL/孔，静置30 min，放入37 ℃培养箱过夜培养后，测定抑菌圈大小。
用游标卡尺测定抑菌圈直径为12mm，根据抑菌圈大小判断抑菌效果，枯草芽孢杆菌YHC-024存在抑菌效果。
实施例6 本实施例说明水中氨氮检测方式
仪器和设备：
可见分光光度计：具 20 mm 比色皿。
氨氮蒸馏装置：由 500 ml 凯式烧瓶、氮球、直形冷凝管和导管组成，冷凝管末端可连接一段适当长度的滴管，使出口尖端浸入吸收液液面下。亦可使用 500 ml 蒸馏烧瓶。
样品采集与保存：水样采集在聚乙烯瓶或玻璃瓶内，要尽快分析，如需保存，应加硫酸使水样酸化至 pH＜2，2～5 ℃下可保存 7 d。
样品的预处理：
去除余氯
若样品中存在余氯，可加入适量的硫代硫酸钠溶液去除。每加 0.5 ml 可去除 0.25mg 余氯。用淀粉-碘化钾试纸检验余氯是否除尽。
絮凝沉淀
100 ml 样品中加入 1 ml 硫酸锌溶液和 0.1～0.2 ml 氢氧化钠溶液，调节 pH 约为10.5，混匀，放置使之沉淀，倾取上清液分析。必要时，用经水冲洗过的中速滤纸过滤，弃去初滤液 20 ml。也可对絮凝后样品离心处理。
预蒸馏
50 ml 硼酸溶液移入接收瓶内，确保冷凝管出口在硼酸溶液液面之下。分取 250 ml样品，移入烧瓶中，加几滴溴百里酚蓝指示剂，必要时，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调整 pH至 6.0（指示剂呈黄色）～7.4（指示剂呈蓝色），加入 0.25 g 轻质氧化镁及数粒玻璃珠，立即连接氮球和冷凝管。加热蒸馏，使馏出液速率约为 10 ml/min，待馏出液达 200 ml 时，停止蒸馏，加水定容至 250 ml。
分析步骤
8 个 50 ml 比色管中，分别加入 0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 和 10.00ml 氨氮标准工作溶液，其所对应的氨氮含量分别为 0.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0和 100 µg，加水至标线。加入 1.0 ml 酒石酸钾钠溶液，摇匀，再加入纳氏试剂 1.5 ml或1.0 ml，摇匀。放置 10 min 后，在波长 420 nm 下，用 20 mm 比色皿，以水作参比，测量吸光度。
以空白校正后的吸光度为纵坐标，以其对应的氨氮含量（µg）为横坐标，绘制校准曲线。
样品测定
清洁水样：直接取 50 ml，按与校准曲线相同的步骤测量吸光度。
有悬浮物或色度干扰的水样：取经预处理的水样 50 ml（若水样中氨氮质量浓度超过 2 mg/L，可适当少取水样体积），按与校准曲线相同的步骤测量吸光度。
结果计算
水中氨氮的质量浓度按式（1）计算：
ρN=As − Ab − a/b ×V，
式中：
ρN——水样中氨氮的质量浓度（mg/L)，
As——水样的吸光度。

Claims (10)

1.一株枯草芽孢杆菌，分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）YHC-024，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO：M 2017404。
2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在净化水质中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，将枯草芽孢杆菌YHC-024发酵培养后，离心得菌体，将菌体加入到待净化的水体中，降解水体中的氨氮。
4.一种含有权利要求1所述枯草芽孢杆菌YHC-024的菌剂。
5.权利要求4所述菌剂在净化水质中的应用。
6.权利要求4所述的菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）、平板培养：将枯草芽孢杆菌接种至平板培养基上培养，培养温度为30~35℃，培养时间为2~3d；
2）、斜面培养：将步骤1）平板培养基培养的枯草芽孢杆菌接种至斜面培养基培养，培养温度为30~35℃，培养时间为2~3d；
3）、种子培养：将步骤2）中枯草芽孢杆菌的斜面培养物接种至种子培养基培养，培养温度为30~35℃，培养时间24~36h；
4）、发酵培养：将步骤3)中种子培养的枯草芽孢杆菌接种至发酵培养基培养，接种量5%~15%（V/V)，发酵温度30~35℃，发酵时间36~48h，将发酵液离心后得菌体。
7.根据权利要求6所述的菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1）中平板培养基包含如下质量百分数的组分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，琼脂1%~3%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的至少一种；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的至少一种；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的至少一种。
8.根据权利要求6所述的菌剂的制备方法，其特征在于所述步骤2）中的斜面培养基包含如下质量百分数的组分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，琼脂1%~3%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的至少一种；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的至少一种；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的至少一种。
9.根据权利要求6所述的菌剂的制备方法，其特征在于所述步骤3）中的种子培养基包含如下质量百分数的组分：氮源1%~3%，碳源5%~10%，无机盐0.1%~0.5%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的至少一种；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的至少一种；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的至少一种。
10.根据权利要求6所述的菌剂的制备方法，其特征在于所述步骤4）中的发酵培养基中包含如下质量分数的组分：氮源5%~10%，碳源5%~15%，无机盐0.1%~0.5%，其余为水，pH调至6~7，其中所述氮源为尿素、玉米浆或者酵母膏中的至少一种；碳源为葡萄糖、蔗糖或者糖蜜中的至少一种；所述无机盐为铁盐、钠盐、钙盐或者镁盐中的至少一种。
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