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CN107412845B - 大鲵分泌物生物膜及其制备方法和应用 - Google Patents

大鲵分泌物生物膜及其制备方法和应用 Download PDF

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CN107412845B CN201710681321.6A CN201710681321A CN107412845B CN 107412845 B CN107412845 B CN 107412845B CN 201710681321 A CN201710681321 A CN 201710681321A CN 107412845 B CN107412845 B CN 107412845B
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Abstract

本发明公开了一种大鲵分泌物生物膜及其制备方法和应用，先将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中，得到大鲵分泌物溶液，然后将大鲵分泌物溶液冻干成膜或真空干燥成膜，得到大鲵分泌物生物膜。发明人经过大量的探索研究，预料不到地发现，大鲵分泌物在含氟极性溶剂中具有较高的溶解度。这种制备方法不破坏大鲵分泌物的原有结构，形成的大鲵分泌物生物膜保留了大鲵分泌物较好的粘合性、生物相容性等优点，且该大鲵分泌物生物膜质地均匀、韧性和强度较好，能够作为止血膜、组织粘合膜或绷带等对创面进行覆盖或包裹，具有广阔的应用前景。

Description

大鲵分泌物生物膜及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物材料领域，特别是涉及一种大鲵分泌物生物膜及其制备方法和应用。
背景技术
大鲵，也被称为“中国大蝾螈”，属于大鲵科，是最大的现存两栖动物物种之一。它在生物多样性，遗传进化和生物化学领域显示了巨大的研究进展和宝贵的潜力。大鲵粘液是大鲵体表受刺激后的一种大鲵分泌物，前期的研究发现大鲵分泌物具有粘合性能好、生物相容性好且可降解等优点，可开发成为止血材料、粘合剂及软组织填充材料等。
然而，传统的大鲵分泌物应用形式大多为粉末状或凝胶状。在临床上，需要使用膜状材料对创面覆盖或包裹，粉末和凝胶均无法满足上述临床需求。因此急需开发大鲵分泌物生物膜。但是由于大鲵分泌物的难溶性，研究人员不断尝试将大鲵分泌物制备成膜，但都难以在不破坏大鲵分泌物本身粘合性、生物相容性等原有性能的前提下形成大鲵分泌物生物膜。
发明内容
基于此，有必要提供一种能够在不破坏大鲵分泌物原有性能的基础上形成大鲵分泌物生物膜的制备方法。
此外，还提供一种大鲵分泌物生物膜及其应用。
一种大鲵分泌物生物膜的制备方法，包括如下步骤：
将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中，得到大鲵分泌物溶液；及
将所述大鲵分泌物溶液冻干成膜或真空干燥成膜，得到所述大鲵分泌物生物膜。
在一个实施方式中，将所述大鲵分泌物溶液冻干成膜，所述冻干成膜的步骤具体包括：
将所述大鲵分泌物溶液置于温度为-50℃～-30℃条件下冷冻0.5h～2h；及
将冷冻后的所述大鲵分泌物溶液置于绝对压强为1Pa～10Pa的条件下放置12h～24h。
在一个实施方式中，将所述大鲵分泌物溶液置于温度为-50℃～-30℃条件下冷冻0.5h～2h的步骤之前，还包括：
将所述大鲵分泌物溶液以恒定的速率降温至-50℃～-30℃。
在一个实施方式中，所述大鲵分泌物为大鲵粘液的干燥粉。
在一个实施方式中，所述大鲵分泌物溶液中所述大鲵分泌物的浓度为0.001g/mL～2g/mL。
在一个实施方式中，其特征在于，所述大鲵分泌物通过如下方法制备：
从大鲵的外表面刮取大鲵粘液；
将所述大鲵粘液置于温度为-30℃～-10℃的条件下冷冻0.5h～2h；及
将冷冻后的所述大鲵粘液置于温度为-50℃～-30℃、绝对压强为5Pa～20Pa的条件下真空冷冻干燥，得到所述大鲵分泌物。
在一个实施方式中，所述大鲵分泌物的粒径为1μm～100μm。
在一个实施方式中，所述将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中的步骤中，所述溶解的操作为在温度为10℃～35℃条件下搅拌处理4h～8h。
一种大鲵分泌物生物膜，通过上述任一项所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法制备得到。
上述大鲵分泌物生物膜作为止血膜、组织粘合膜或绷带的应用。
上述大鲵分泌物生物膜的制备方法，先将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中，得到大鲵分泌物溶液，然后将大鲵分泌物溶液冻干成膜或真空干燥成膜，得到大鲵分泌物生物膜。发明人经过大量的探索研究，预料不到地发现，大鲵分泌物在六氟异丙醇等含氟极性溶剂中具有较高的溶解度，因此能够将大鲵分泌物溶解在六氟异丙醇等含氟极性溶剂中形成大鲵分泌物溶液，然后将大鲵分泌物溶液冻干成膜获得大鲵分泌物生物膜。这种制备方法不破坏大鲵分泌物的原有结构，形成的大鲵分泌物生物膜保留了大鲵分泌物较好的粘合性、生物相容性等优点，且该大鲵分泌物生物膜质地均匀、韧性和强度较好，能够作为止血膜、组织粘合膜或绷带等对创面进行覆盖或包裹，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为一实施方式的大鲵分泌物生物膜的制备方法的流程图；
图2为实施例1中制备的大鲵分泌物生物膜的示意图；
图3为测试四中对照组和用实施例1制备的大鲵分泌物粘性生物膜处理伤口的结果比对图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例及附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
请参阅图1，一实施方式的大鲵分泌物生物膜的制备方法包括如下步骤S110～S150。
S110、从大鲵的外表面刮取大鲵粘液。
具体地，将鲜活大鲵用清水清洗体表并去除蜕皮等杂质，然后用扁平物如勺子来回刮擦大鲵体表，待大鲵体表分泌大量乳白色粘液时，刮取收集大鲵粘液。一般每次可从5kg左右的成年大鲵上收集约5g大鲵粘液。
本实施方式中，总共刮取获得50g大鲵粘液。
S120、将S110中收集的大鲵粘液置于温度为-30℃～-10℃的条件下冷冻0.5h～2h。
具体地，将收集的大鲵粘液置于-20℃冰箱中冷冻1h。
S130、将S120中冷冻后的大鲵粘液置于温度为-50℃～-30℃、绝对压强为5Pa～20Pa的条件下真空冷冻干燥，得到大鲵分泌物。
具体地，将冷冻后的大鲵粘液置于温度为-50℃～-30℃、绝对压强为5Pa～20Pa的条件下真空冷冻干燥的操作中，真空冷冻干燥的时间为12h～48h。
具体地，绝对压强为5Pa～20Pa表示实际压强低于大气压的真空条件下去除大鲵粘液内部的水分，获得大鲵粘液的干燥粉。
本实施方式中，将冷冻后的大鲵粘液置于冻干机中，在温度为-40℃、绝对压强为10Pa的条件下，干燥24h，使得大鲵粘液干燥形成粉末状。
具体地，S120中的冷冻温度高于S130中真空冷冻干燥的温度，使得大鲵粘液逐步冷却，避免骤冷破坏大鲵粘液内部结构。
在一个实施方式中，真空冷冻干燥得到大鲵粘液的干燥粉后，还包括将大鲵粘液的干燥粉粉碎形成微小颗粒。
具体地，用低温超微粉碎机粉碎大鲵粘液的干燥粉，边粉碎边加液氮，使温度保持低温，粉碎后得到微小颗粒状的大鲵分泌物，促进大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中，从而制备大鲵分泌物生物膜。
在一个实施方式中，大鲵分泌物的粒径为1μm～100μm。
在一个实施方式中，大鲵分泌物的粒径为20μm～60μm。
本实施方式中，大鲵分泌物的粒径为50μm。
S140、将S130中得到的大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中，得到大鲵分泌物溶液。
具体地，大鲵分泌物为大鲵粘液的干燥粉。
发明人经过大量的探索研究，预料不到地发现，大鲵分泌物在含氟极性溶剂中具有较高的溶解度，因此能够将大鲵分泌物溶解在六氟异丙醇等含氟极性溶剂中形成大鲵分泌物溶液，然后将大鲵分泌物溶液冻干成膜获得大鲵分泌物生物膜。虽然含氟极性溶剂溶解大鲵分泌物的机制尚不明确，但是经过实验研究证实，大鲵分泌物在含氟极性溶剂中具有较高的溶解度，在常温下能够达到20g/mL，因而能够在含氟极性溶剂中溶解较高剂量的大鲵分泌物，进而冷冻干燥成膜，制备大鲵分泌物生物膜。
在一个实施方式中，大鲵分泌物溶液中大鲵分泌物的浓度为0.001g/mL～2g/mL。
具体地，大鲵分泌物溶液中大鲵分泌物的浓度为0.1g/mL～1g/mL。
优选地，大鲵分泌物溶液中大鲵分泌物的浓度为0.05g/mL～0.5g/mL。
如大鲵分泌物的浓度过高，不易溶解，较难形成混合均匀的大鲵分泌物溶液。如大鲵分泌物的浓度过低，难以冻干形成膜状生物材料。本实施方式的大鲵分泌物的浓度为0.001g/mL～2g/mL，浓度适宜，能够制备形成韧性和强度较好大鲵分泌物生物膜。
在一个实施方式中，将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中的步骤中，溶解的操作为在温度为10℃～35℃条件下搅拌处理4h～8h。
具体地，将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中的步骤中，溶解的操作为在温度为15℃～25℃条件下搅拌处理5h～7h。
溶解大鲵分泌物时的温度条件适宜，使得大鲵分泌物能够在含氟极性溶剂中溶解，且同时避免温度过高破坏大鲵粘液的内部结构。通过搅拌处理，加速大鲵分泌物的溶解，从而形成混合均匀的溶液。
具体地，含氟极性溶剂为含羧基或羟基的含氟有机溶剂，例如六氟异丙醇、三氟乙醇或三氟乙酸等。
优选地，含氟极性溶剂为六氟异丙醇，六氟异丙醇的纯度为99％以上。大鲵分泌物在六氟异丙醇中溶解度高且形成的大鲵分泌物生物膜粘性好。
S150、将S140中得到的大鲵分泌物溶液冻干成膜或真空干燥成膜，得到大鲵分泌物生物膜。
大鲵分泌物溶液中溶解了大鲵分泌物，冻干时，溶剂被挥发，形成膜状的大鲵分泌物生物膜。
在一个实施方式中，将大鲵分泌物溶液冻干成膜的步骤具体包括以下步骤S151～S153。
S151、将大鲵分泌物溶液以恒定的速率降温至-50℃～-30℃。
一般在室温下例如10℃～35℃条件下溶解大鲵分泌物，大鲵分泌物溶液以恒定的速率降温至-50℃～-30℃，逐步冷却，避免骤冷破坏大鲵分泌物内部结构。
在一个实施方式中，将大鲵分泌物溶液加入成型模具中，其中大鲵分泌物溶液在成型模具中的液体厚度为0.5cm～10cm。然后将装载有大鲵分泌物溶液的成型模具放入冻干机中，以0.5℃/min～2℃/min的速率降温至-50℃～-30℃。
具体地，成型模具的大小以及形状可以根据实际需要调整。
S152、将S151中冷却的大鲵分泌物溶液置于温度为-50℃～-30℃条件下冷冻0.5h～2h。
冷却后的大鲵分泌物溶液冷冻0.5h～2h，在低温条件下保持一段时间以提高大鲵分泌物的韧性以及强度。
S153、将S152中冷冻后的大鲵分泌物溶液置于绝对压强为1Pa～10Pa的条件下放置12h～24h。
在绝对压强为1Pa～10Pa的条件下，大鲵分泌物溶液中的溶剂含氟极性溶剂被挥发，得到膜状的大鲵分泌物生物膜。
具体地，绝对压强为1Pa～10Pa的条件下放置12h～24h后，得到膜状的大鲵分泌物生物膜具有微小的空隙，从而能够为营养物质运输提供通道，提高膜的生物相容性。
在另一个实施方式中，也可以将大鲵分泌物溶液真空干燥成膜。即将大鲵分泌物溶液置于真空条件(低于大气压即可)的条件下，大鲵分泌物溶液中的溶剂挥发，形成大鲵分泌物粘性生物膜。具体地，真空干燥成膜的温度一般不超过37℃。
上述大鲵分泌物生物膜的制备方法，先将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中，得到大鲵分泌物溶液，然后将大鲵分泌物溶液冻干成膜或真空干燥成膜，得到大鲵分泌物生物膜。发明人经过大量的探索研究，预料不到地发现，大鲵分泌物在含氟极性溶剂中具有较高的溶解度，因此能够将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中形成大鲵分泌物溶液，然后将大鲵分泌物溶液冻干成膜获得大鲵分泌物生物膜。这种制备方法不破坏大鲵分泌物的原有结构，形成的大鲵分泌物生物膜保留了大鲵分泌物较好的粘合性、生物相容性等优点，且该大鲵分泌物生物膜质地均匀、韧性和强度较好，能够作为止血膜、组织粘合膜或绷带等对创面进行覆盖或包裹，具有广阔的应用前景。
需要说明的是，实际应用中，大鲵分泌物生物膜的制备方法不局限于上述步骤S110～S150的顺序。本领域技术人员可以根据需要进行调整。如当预先已经提取大鲵粘液干燥形成大鲵分泌物或者直接从市场购买获得大鲵分泌物时，步骤S110～S130可以省略。
一实施方式的大鲵分泌物生物膜，通过上述的大鲵分泌物生物膜的制备方法制备得到。
上述大鲵分泌物生物膜作为止血膜或绷带的应用。
该大鲵分泌物生物膜保留了大鲵分泌物较好的粘合性、生物相容性等优点，且生物膜的质地均匀、韧性和强度较好，能够作为止血膜、组织粘合膜或绷带等对创面进行覆盖或包裹，具有广阔的应用前景。
下面为具体实施例(以下实施例如无特殊说明，则不含有除不可避免的杂质以外的其他未明确指出的组分)
实施例中采用试剂和仪器如非特别说明，均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者试剂盒生产厂家推荐的方法实现。
实施例1
将鲜活大鲵用清水清洗体表并去除蜕皮等杂质，然后用勺子来回刮擦大鲵体表，待大鲵体表分泌大量乳白色粘液时，刮取收集大鲵粘液。一般每次可从5kg左右的成年大鲵上收集约5g大鲵粘液，总共刮取获得50g大鲵粘液。将收集的大鲵粘液置于-20℃冰箱中冷冻1h。将冷冻后的大鲵粘液置于冻干机中，在温度为-40℃、绝对压强为10Pa的条件下真空冷冻干燥24h，大鲵粘液的干燥粉。用低温超微粉碎机粉碎大鲵粘液的干燥粉，边粉碎边加液氮，使温度保持低温，粉碎后得到平均粒径为50μm的大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的六氟异丙醇中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，形成均一的大鲵分泌物溶液。
取5mL大鲵分泌物溶液注入长×宽为4cm×1cm的成型模具中，然后将成型模具放入冻干机中，以1℃/min的速率降温至-40℃，并在-40℃温度条件下冷冻放置1h。随后将成型模具置于绝对压强为5Pa的条件下放置16h，得到质地均一、具有微孔状的膜状的大鲵分泌物生物膜。大鲵分泌物生物膜的如图2所示。
实施例2
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取5g大鲵分泌物加入到10mL的六氟异丙醇中，在25℃下搅拌处理4h，形成均一的大鲵分泌物溶液。
取5mL大鲵分泌物溶液注入长×宽为10cm×1cm的成型模具中，然后将成型模具放入冻干机中，以1℃/min的速率降温至-40℃，并在-40℃温度条件下冷冻放置0.5h。随后将成型模具置于绝对压强为8Pa的条件下放置12h，得到质地均一、具有微孔状的膜状的大鲵分泌物生物膜。
实施例3
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取0.5g大鲵分泌物加入到10mL的六氟异丙醇中，在常温下(20℃)搅拌处理4h，形成均一的大鲵分泌物溶液。
取5mL大鲵分泌物溶液注入长×宽为1cm×1cm的成型模具中，然后将成型模具放入冻干机中，以0.5℃/min的速率降温至-30℃，并在-30℃温度条件下冷冻放置0.5h。随后将成型模具置于绝对压强为10Pa的条件下放置12h，得到质地均一、具有微孔状的膜状的大鲵分泌物生物膜。
实施例4
取1g按实施例1的方法制备保存的大鲵分泌物加入到10mL的六氟异丙醇中，在常温下(20℃)搅拌处理8h，形成均一的大鲵分泌物溶液。
取5mL大鲵分泌物溶液注入长×宽为10cm×2cm的成型模具中，然后将成型模具放入冻干机中，以2℃/min的速率降温至-40℃，并在-40℃温度条件下冷冻放置2h。随后将成型模具置于绝对压强为10Pa的条件下放置15h，得到质地均一、具有微孔状的膜状的大鲵分泌物生物膜。
实施例5
取20g按实施例1的方法制备保存的大鲵分泌物加入到10mL的六氟异丙醇中，在常温下(20℃)搅拌处理8h，形成均一的大鲵分泌物溶液。
取5mL大鲵分泌物溶液注入长×宽为1cm×1cm的成型模具中，然后将成型模具放入冻干机中，以2℃/min的速率降温至-50℃，并在-50℃温度条件下冷冻放置2h。随后将成型模具置于绝对压强为5Pa的条件下放置24h，得到质地均一、具有微孔状的膜状的大鲵分泌物生物膜。
实施例6
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的三氟乙酸中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，大鲵分泌物在三氟乙酸中部分溶解。
取5mL大鲵分泌物-三氟乙酸溶液，按实施例1的方法注入长×宽为4cm×1cm的成型模具中，然后将成型模具放入冻干机中，以1℃/min的速率降温至-40℃，并在-40℃温度条件下冷冻放置1h。随后将成型模具置于绝对压强为5Pa的条件下放置16h。结果发现大鲵分泌物-三氟乙酸溶液也能形成膜状材料，膜状材料均一性和粘性均比实施例1制备的生物膜稍差。
实施例7
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的三氟乙醇中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，大鲵分泌物在三氟乙醇中部分溶解。
取5mL大鲵分泌物-三氟乙醇溶液，按实施例1的方法注入长×宽为4cm×1cm的成型模具中，然后将成型模具放入冻干机中，以1℃/min的速率降温至-40℃，并在-40℃温度条件下冷冻放置1h。随后将成型模具置于绝对压强为5Pa的条件下放置16h。结果发现大鲵分泌物-三氟乙醇溶液也能形成膜状材料，膜状材料均一性和粘性均比实施例1制备的生物膜稍差。
对比例1
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的水中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，大鲵分泌物在水中基本不溶解，因而无法制备大鲵分泌物生物膜。
对比例2
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的丙酮中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，大鲵分泌物在丙酮中基本不溶解，因而无法制备大鲵分泌物生物膜。
对比例3
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的乙醇中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，大鲵分泌物在乙醇中基本不溶解，因而无法制备大鲵分泌物生物膜。
对比例4
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的乙腈中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，大鲵分泌物在乙腈中基本不溶解，因而无法制备大鲵分泌物生物膜。
对比例5
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的二氯甲烷中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，大鲵分泌物在二氯甲烷中基本不溶解，因而无法制备大鲵分泌物生物膜。
对比例6
按实施例1的方法制备大鲵分泌物。
取10g上述方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的二甲亚砜中，在常温下(20℃)搅拌处理6h，大鲵分泌物在二甲亚砜中基本不溶解，因而无法制备大鲵分泌物生物膜。
测试一
在20℃条件下，取实施例1的方法制备的大鲵分泌物加入到10mL的六氟异丙醇中，加入过程中不断搅拌。当加入0.5g大鲵分泌物时，大鲵分泌物迅速溶解在六氟异丙醇中，继续向六氟异丙醇中加入大鲵分泌物，当大鲵分泌物的加入量达到10g时，大鲵分泌物依然能够迅速溶解在六氟异丙醇中。直至大鲵分泌物的加入量达到25g时，才出现沉降的现象。说明大鲵分泌物在六氟异丙醇中具有非常好的溶解性，六氟异丙醇能够大剂量的溶解大鲵分泌物，在20℃时，溶解度可达2.5g/mL。因此，将大鲵分泌物溶解在六氟异丙醇中能够形成均一的大鲵分泌物溶液用于制备大鲵分泌物生物膜。另外，实施例6和实施例7在三氟乙酸和三氟乙醇中，大鲵分泌物也能够部分溶解。
而采用其它溶剂时，如对比例1～6中的水、丙酮、乙醇、乙腈、二氯甲烷、二甲亚砜等，相同的方法测试大鲵分泌物基本不溶解。
测试二
将一块实施例1制备的大鲵分泌物粘性生物膜正反两面分别粘合在两块PDMS膜上，然后用万能拉力机上下夹头分别夹住两块PDMS膜，用万能拉力机拉伸测试大鲵分泌物粘性生物膜剪切粘附应力。采用相同的方法测试实施例2～实施例5制备的大鲵分泌物生物膜的剪切粘附应力，结果如下表1所示。
表1：大鲵分泌物生物膜的剪切粘附应力
Figure BDA0001375604490000111
Figure BDA0001375604490000121
从表1中的数据可以看出实施例1～实施例5制备的大鲵分泌物生物膜粘合力较好，且膜状材料本身具有韧性和强度较好，能够作为止血膜或绷带等对创面进行覆盖或包裹，具有广阔的应用前景。
测试三
止血实验：取Wistar大鼠10只，雌雄各半，体重250g±20g，分别将每只大鼠的2条后腿分为实验组和对照组。实验前，将大鼠按30mg/kg腹腔注射2％戊巴比妥钠水溶液麻醉，大鼠仰卧位固定，用电推理发器将大鼠后腿内侧剃毛，8％硫化钠脱毛，碘伏、体积分数为75％的乙醇消毒。然后用手术刀在大鼠的两后腿内侧部位切口，长30mm，深3mm，有血液流出。切开后在实验组切口部位分别用实施例1～实施例7制备的大鲵分泌物生物膜包扎，粘合牢固，对照组在切口部位用纱布包扎，并按压止血。用实施例1～实施例7制备的大鲵分泌物生物膜包扎实验组的大鼠后腿在1min内停止出血，大鲵分泌物生物膜的表面无血液渗出。而对照组按压3min后才停止出血，纱布表面有明显的血液渗出。说明大鲵分泌物生物膜止血效果明显。
测试四
伤口愈合试验：取BALB/c小鼠10只，雌雄各半，八个月大。在小鼠背部，划出两条平行整齐全层的皮肤切口。实验组：分别用实施例1～实施例7制备的大鲵分泌物粘性生物膜粘合在伤口处；对照组：用手术缝合线间断缝合处理。3天后，撕开实验组的粘性生物膜以及拆除对照组的缝线。实验组和对照组的切口都愈合，但对照组有更明显皮肤发红和切口边缘浮肿，而实验组的伤口愈合的更好。其中一个实施例的结果如图3所示(图3中用的粘性生物膜具体为实施例1制备的大鲵分泌物粘性生物膜)。
以上实验结果表明实施例1～实施例7制备的大鲵分泌物生物膜，具有膜状材料的韧性和强度，且粘合性较好，制备成膜后大鲵分泌物原有性能没有被破坏，保留了大鲵分泌物较好的粘合性、生物相容性等优点。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种大鲵分泌物生物膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中，得到大鲵分泌物溶液；及
将所述大鲵分泌物溶液冻干成膜或真空干燥成膜，得到所述大鲵分泌物生物膜；
所述含氟极性溶剂选自六氟异丙醇、三氟乙醇和三氟乙酸中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法，其特征在于，将所述大鲵分泌物溶液冻干成膜，所述冻干成膜的步骤具体包括：
将所述大鲵分泌物溶液置于温度为-50℃～-30℃条件下冷冻0.5h～2h；及
将冷冻后的所述大鲵分泌物溶液置于绝对压强为1Pa～10Pa的条件下放置12h～24h。
3.根据权利要求2所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法，其特征在于，将所述大鲵分泌物溶液置于温度为-50℃～-30℃条件下冷冻0.5h～2h的步骤之前，还包括：
将所述大鲵分泌物溶液以恒定的速率降温至-50℃～-30℃。
4.根据权利要求1所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法，其特征在于，所述大鲵分泌物为大鲵粘液的干燥粉。
5.根据权利要求1所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法，其特征在于，所述大鲵分泌物溶液中所述大鲵分泌物的浓度为0.001g/mL～2g/mL。
6.根据权利要求1所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法，其特征在于，所述大鲵分泌物通过如下方法制备：
从大鲵的外表面刮取大鲵粘液；
将所述大鲵粘液置于温度为-30℃～-10℃的条件下冷冻0.5h～2h；及
将冷冻后的所述大鲵粘液置于温度为-50℃～-30℃、绝对压强为5Pa～20Pa的条件下真空冷冻干燥，得到所述大鲵分泌物。
7.根据权利要求1所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法，其特征在于，所述大鲵分泌物的粒径为1μm～100μm。
8.根据权利要求1所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法，其特征在于，所述将大鲵分泌物溶解在含氟极性溶剂中的步骤中，所述溶解的操作为在温度为10℃～35℃条件下搅拌处理4h～8h。
9.一种大鲵分泌物生物膜，其特征在于，通过权利要求1～8任一项所述的大鲵分泌物生物膜的制备方法制备得到。
10.如权利要求9所述的大鲵分泌物生物膜在制备止血膜、组织粘合膜或绷带中的应用。
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