CN107410213A - 一种人工养殖松墨天牛的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种人工养殖松墨天牛的方法，用于实验室条件下饲养繁殖松墨天牛。所述方法包括：（1）松墨天牛亚成熟个体的人工饲养；（2）松墨天牛人工产房的配备；（3）松墨天牛性成熟个体的人工配对饲养及诱导繁殖；（4）松墨天牛各龄期幼虫人工饲料的制备；（5）松墨天牛初生幼虫的分离获取；（6）松墨天牛幼虫转入人工饲料的后续培养；（7）松墨天牛蛹期及羽化管理。本发明采用的人工养殖松墨天牛的方法，在实验室条件下构建出一套适用于人工培养各生长阶段的松墨天牛的体系，在减少松材消耗的同时，显著提高松墨天牛各生长阶段的成活率，排除季节对松墨天牛生长繁殖的影响，缩短松墨天牛的生长周期，形成稳定的实验虫源。
Description
技术领域
本发明属于实验动物养殖领域，具体涉及一种人工养殖松墨天牛的方法。
背景技术
松墨天牛是松树的一种主要害虫，在我国乃至世界范围内广泛分布。幼虫蛀食树干，成虫啃食树皮，导致树势衰弱，严重者可致整株松树枯死折断。同时松墨天牛还是导致松树枯死病的直接元凶松材线虫的有效传播媒介，松材线虫通过寄生在松墨天牛的气管内随松墨天牛在松林间迁移，受到严重感染的松树整株呈火烧状枯死。每年松墨天牛及松材线虫病均给林产业造成巨大的直接经济损失，因此更加有效的防治松墨天牛及松材线虫病迫在眉睫。
目前采用的防治松墨天牛的方法主要有诱捕法、疫木销毁、农药喷施和生物防治等，其中生物防治又包括天敌动物防治和菌物防治，白僵菌、苏云金芽孢杆菌等对松墨天牛都有一定的毒杀作用，对松墨天牛的成虫和幼虫都有效，且对环境的不良影响较其他防治手段更低。在寻找高效防治手段的过程中，无疑需要用到大量的各虫态的松墨天牛用于实验，传统野外采集松墨天牛成虫，从疫木中分离松墨天牛幼虫的方法费时费力，且因季节因素较难在全年任一时间获得各个虫态的松墨天牛。若能实现在实验室条件下人工养殖松墨天牛，将给松墨天牛防治的研究工作带来巨大帮助。
针对松墨天牛的生物学特性，采用一种人工养殖松墨天牛的方法，在实验室条件下进行松墨天牛各虫态的饲养和繁殖传代，缩小各方面消耗，解决季节因素影响实验的问题，建立稳定的实验室松墨天牛种群，为松墨天牛及松材线虫病的防治研究工作提供有力保障。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人工养殖松墨天牛的方法，排除季节因素对松墨天牛相关实验的影响，减少野外采集松墨天牛的各方面消耗，构建稳定的松墨天牛人工种群。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种人工养殖松墨天牛的方法, 所述方法包括如下：
（1）松墨天牛亚成熟个体的人工饲养；
（2）松墨天牛人工产房的配备；
（3）松墨天牛性成熟个体的人工配对饲养及诱导繁殖；
（4）松墨天牛各龄期幼虫人工饲料的制备；
（5）松墨天牛初生幼虫的分离获取；
（6）松墨天牛幼虫转入人工饲料的后续培养；
（7）松墨天牛蛹期及羽化管理。
具体步骤如下：
1、在松墨天牛发生区域松林悬挂松墨天牛诱捕器诱捕野生松墨天牛活体；或是从疫木中分离老熟的松墨天牛幼虫，取12毫升EP试管，填入天然木浆纸巾，加水润湿，将老熟的松墨天牛幼虫至于此管内，并将装有松墨天牛老熟幼虫的试管放置于温度为25~28℃，湿度65~80%的恒温箱中黑暗培养，促使老熟幼虫化蛹并最终羽化。
2、准备长宽分别为50~60CM、高为80~120CM的网纱笼作为天牛的产房，在笼内中央置一500ML三角瓶，注入清水，将新鲜的松树枝条插入三角瓶中水培作为营养枝条；在笼内四角各放置一根直径为5~10CM、长度为15~20CM且两端封口的新鲜的健康马尾松带皮木段作为产卵木。将上述松墨天牛产房置于温度为25~28℃、湿度为65~80%、光周期为光照：黑暗=12:12h的温室内。
3、将松墨天牛成虫按照两雌一雄为一组，放入准备好的产房，让其随机交配、产卵。每个产房放入五到六组松墨天牛成虫。每隔两天更换一次营养枝条和产卵木，并在产卵木上做好时间标记。
4、疫木中分离出的松墨天牛老熟幼虫羽化后，取一个小号塑料金鱼缸作为饲养盒，在底部垫上纸巾作为保湿材料，加水润湿；截取一段10CM左右的营养树枝放入盒中作为新羽化亚成体成虫的饲料。将羽化的亚成体成虫放入上述饲养盒，每盒一只，置于与产房相同的环境下饲养七到十天至性成熟后转入产房与直接诱捕到的松墨天牛成虫做相同条件合笼饲养、繁殖。
5、将产房中更换下来的产卵木置于相同条件的温室中继续培养12~15天后，用木刻刀小心地将树皮与木质部剥离，取出驻生于韧皮部的初生松墨天牛幼虫。
6、将分离出松墨天牛幼虫的产卵木的树皮和木质部分别粉碎至四十目以下，制备成木质部粉末、树皮粉末，备用；分配配置成1~2龄的松墨天牛低龄幼虫饲料和3龄以后的松墨天牛高龄幼虫饲料；
所述的1~2龄的松墨天牛低龄幼虫饲料包括以下重量份原料：木质部粉末45~55份，树皮粉末90~110份，玉米粉、大豆粉、麦麸、食用菌菌糠中的一种或几种60~70份，苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾中的一种或几种2~3份，干酵母、酵母粉、酵母提取物种的一种或几种20~30份，琼脂条25~35份，虾壳粉8~15份，蔗糖35~45份，単蒸水280~320份；所述的3龄以后的松墨天牛高龄幼虫饲料包括以下重量份原料：木质部粉末140~160份，玉米粉、大豆粉、麦麸、食用菌菌糠中的一种或几种60~70份，苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾中的一种或几种2~3份，干酵母、酵母粉、酵母提取物种的一种或几种20~30份，琼脂条25~35份，虾壳粉8~15份，蔗糖35~45份，単蒸水280~320份。
7、将上述除木质部粉末和韧皮部粉末外的成分置于铝锅中加热至琼脂条溶解，各成分混为均匀的糊浆，；取木质部粉末45~55份、树皮粉末90~110份与上述成分糊浆混合，冷却后填入12MLEP试管中填至距管口三分之一容量处，封盖，制成松墨天牛低龄幼虫人工饲料。取木质部粉末140~160份与上述的成分糊浆混合，冷却后填入50ML离心管中填至距管口三分之一容量处，封盖，制成松墨天牛转入3龄后的中高龄幼虫人工饲料。将上述两种人工饲料放入灭菌锅中，121摄氏度灭菌30分钟后取出冷却备用。
8、在分装好的低龄幼虫人工饲料的中央用消毒的镊子扎一个小孔，将分离得到的初生松墨天牛幼虫头向下放入小孔中，盖上离心管盖，置于与产房环境条件相同的人工气候箱中培养。定期观察松墨天牛幼虫的取食情况，两周后小心地将生长至3龄初期左右的松墨天牛幼虫取出，完成低龄阶段的饲养，后用于上述同样的方法将取出的松墨天牛幼虫转入中高龄幼虫人工饲料中进行后续培养，定期观察松墨天牛的取食情况和生长情况，直至松墨天牛的人工饲料中平整出蛹室化蛹，最后羽化出新一代的成虫，
9、将新羽化的成虫放入金鱼缸饲养盒内单笼饲养7~10天，转入产房交配、产卵，完成一轮饲养。通过松墨天牛成虫的分批投产，将松墨天牛的生长阶段交错开，达到同时保有各虫态和生长阶段的松墨天牛。不断循环以上过程，实现松墨天牛的实验室人工养殖。
本发明的优点在于：
1、通过采用本发明所述的一种人工饲养松墨天牛的方法，与现有的专利（CN 10228853B；CN 101983580 A; CN 102715377 A)及已报道的文章《松墨天牛室内人工饲养及其生物学特性观察》中所述的人工饲养松墨天牛的方法相比，提高了松材的利用率，使用菌糠、麦麸等价格低廉的原料，节约了饲养成本和人力物力，在松墨天牛幼虫饲料中添加了适量的补充几丁质的虾壳成分，其他组成成分也更加科学，成虫的饲料也更符合松墨天牛的取食习性，更有助于松墨天牛的生长。在实验室条件下实现松墨天牛的传代养殖，建立起稳定的实验天牛种群，缩短了松墨天牛的生长周期，不受季节因素的影响，做到随时能够提供各虫态、各龄期的松墨天牛用于实验研究。大大减少了使用传统野外采集和分离松墨天牛而产生的人力、物力及财力的消耗，加速了松墨天牛及松材线虫病防治研究共组的进程，为林产业做出巨大贡献。
2、通过采用本发明方法，可进行松墨天牛品系的纯化。与野外采集的松墨天牛相比，本方法饲养的松墨天牛可以尽可能的减少天牛自身携带的病原微生物对实验的影响，是一种较好的实验材料。
附图说明
图1单笼饲养（左图）及产房（右图）示意图。
图2幼虫人工饲料（左图）及在饲料中生长的中高龄幼虫（右图）示意图。
图3交配中的松墨天牛（左图）及正在产卵的雌性松墨天牛（右图）。
具体实施方式
实施例1
在9到10月份期间到松墨天牛发生区采集被松墨天牛蛀食的树枝、树干，将松墨天牛从中分离，置于装有湿润纸巾的EP试管内，设置环境温度为27℃，湿度为70%，暗箱培养直至羽化为成虫。将初羽化的成虫置于垫有湿润纸巾的饲养盒内，饲以新鲜树枝段，饲养至十天后按照两雌一雄为一组放入准备好的产房中，每个产房放入五组松墨天牛成虫。每隔两天更换一次产房中的营养树枝和产卵木，将产卵木做好时间标记，置于与产房相同的条件下继续培养15天，用刻刀将产卵木的树皮剥去，取出蛀生在韧皮部的松墨天牛低龄幼虫，转接入准备好的松墨天牛低龄幼虫饲料中培养两周，再转入准备好的松墨天牛中高龄幼虫饲料中培养至羽化，进入下一个饲养循环。将松墨天牛成虫的繁殖时间错开，使得后代松墨天牛的生长阶段随之错开，实现同时保有各虫态、各生长阶段的松墨天牛。本实施例培养的松墨天牛羽化率达83.5%。
1~2龄的松墨天牛低龄幼虫饲料包括以下重量份原料：木质部粉末50份，树皮粉末100份，玉米粉65份，苯甲酸2份，干酵母25份，琼脂条30份，虾壳粉10份，蔗糖40份，単蒸水300份；
3龄以后的松墨天牛高龄幼虫饲料包括以下重量份原料：木质部粉末150份，大豆粉65份，苯甲酸钠3份，酵母粉25份，琼脂条30份，虾壳粉10份，蔗糖40份，単蒸水300份。
实施例2
1、在松墨天牛发生区域松林悬挂松墨天牛诱捕器诱捕野生松墨天牛活体。
2、准备长宽分别为60CM、高为120CM的网纱笼作为天牛的产房，在笼内中央置一500ML三角瓶，注入清水，将新鲜的松树枝条插入三角瓶中水培作为营养枝条；在笼内四角各放置一根直径为10CM、长度为20CM且两端封口的新鲜的健康马尾松带皮木段作为产卵木。将上述松墨天牛产房置于温度为25℃、湿度为65%、光周期为光照：黑暗=12:12h的温室内。
3、将松墨天牛成虫按照两雌一雄为一组，放入准备好的产房，让其随机交配、产卵。每个产房放入六组松墨天牛成虫。每隔两天更换一次营养枝条和产卵木，并在产卵木上做好时间标记。
4、疫木中分离出的松墨天牛老熟幼虫羽化后，取一个小号塑料金鱼缸作为饲养盒，在底部垫上纸巾作为保湿材料，加水润湿；截取一段10CM的营养树枝放入盒中作为新羽化亚成体成虫的饲料。将羽化的亚成体成虫放入上述饲养盒，每盒一只，置于与产房相同的环境下饲养七到十天至性成熟后转入产房与直接诱捕到的松墨天牛成虫做相同条件合笼饲养、繁殖。
5、将产房中更换下来的产卵木置于相同条件的温室中继续培养15天后，用木刻刀小心地将树皮与木质部剥离，取出驻生于韧皮部的初生松墨天牛幼虫。
6、将分离出松墨天牛幼虫的产卵木的树皮和木质部分别粉碎至四十目以下，制备成木质部粉末、树皮粉末，备用；分配配置成1~2龄的松墨天牛低龄幼虫饲料和3龄以后的松墨天牛高龄幼虫饲料；
所述的1~2龄的松墨天牛低龄幼虫饲料包括以下重量份原料：木质部粉末45份，树皮粉末90份，大豆粉60份，山梨酸2份，酵母粉20份，琼脂条25份，虾壳粉8份，蔗糖35份，単蒸水280份；所述的3龄以后的松墨天牛高龄幼虫饲料包括以下重量份原料：木质部粉末140份，麦麸60份，山梨酸钾3份，酵母粉20份，琼脂条25份，虾壳粉8份，蔗糖35份，単蒸水280份。
7、将木质部粉末和韧皮部粉末外的成分置于铝锅中加热至琼脂条溶解，各成分混为均匀的糊浆，加入适量一当量硫酸调节至pH=5；取木质部粉末、树皮粉末与上述成分糊浆混合，冷却后填入12MLEP试管中填至距管口三分之一容量处，封盖，制成松墨天牛低龄幼虫人工饲料。取木质部粉末份与上述的成分糊浆混合，冷却后填入50ML离心管中填至距管口三分之一容量处，封盖，制成松墨天牛转入3龄后的中高龄幼虫人工饲料。将上述两种人工饲料放入灭菌锅中，121摄氏度灭菌30分钟后取出冷却备用。
8、在分装好的低龄幼虫人工饲料的中央用消毒的镊子扎一个小孔，将分离得到的初生松墨天牛幼虫头向下放入小孔中，盖上离心管盖，置于与产房环境条件相同的人工气候箱中培养。定期观察松墨天牛幼虫的取食情况，两周后小心地将生长至3龄初期左右的松墨天牛幼虫取出，完成低龄阶段的饲养，后用于上述同样的方法将取出的松墨天牛幼虫转入中高龄幼虫人工饲料中进行后续培养，定期观察松墨天牛的取食情况和生长情况，直至松墨天牛的人工饲料中平整出蛹室化蛹，最后羽化出新一代的成虫，
9、将新羽化的成虫放入金鱼缸饲养盒内单笼饲养10天，转入产房交配、产卵，完成一轮饲养。通过松墨天牛成虫的分批投产，将松墨天牛的生长阶段交错开，达到同时保有各虫态和生长阶段的松墨天牛。不断循环以上过程，实现松墨天牛的实验室人工养殖。使用本实施例培养的松墨天牛羽化率达86.0%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (8)
1.一种人工养殖松墨天牛的方法，其特征在于，所述方法包括如下：
（1）松墨天牛亚成熟个体的人工饲养；
（2）松墨天牛人工产房的配备；
（3）松墨天牛性成熟个体的人工配对饲养及诱导繁殖；
（4）松墨天牛各龄期幼虫人工饲料的制备；
（5）松墨天牛初生幼虫的分离获取；
（6）松墨天牛幼虫转入人工饲料的后续培养；
（7）松墨天牛蛹期及羽化管理。
2.根据权利要求1所述的一种人工养殖松墨天牛的方法，其特征在于：步骤（1）为：在松墨天牛发生区域松林悬挂松墨天牛诱捕器诱捕野生松墨天牛活体；或是从疫木中分离老熟的松墨天牛幼虫，取12毫升EP试管，填入天然木浆纸巾，加水润湿，将老熟的松墨天牛幼虫至于此管内，并将装有松墨天牛老熟幼虫的试管放置于温度为25~28℃、湿度65~80%的恒温箱中黑暗培养，促使老熟幼虫化蛹并最终羽化成成虫。
3.根据权利要求1所述的一种人工养殖松墨天牛的方法，其特征在于：所述松墨天牛人工产房的配备：准备长宽分别为50~60CM、高为80~120CM的网纱笼作为天牛的产房，在笼内中央置一500ML三角瓶，注入清水，将新鲜的松树枝条插入三角瓶中水培作为营养枝条；在笼内四角各放置一根直径为5~10CM、长度为15~20CM且两端封口的新鲜的健康马尾松带皮木段作为产卵木；将上述松墨天牛产房置于温度为25~28℃、湿度为65~80%、光周期为光照：黑暗=12:12h的温室内。
4.根据权利要求1所述的一种人工养殖松墨天牛的方法，其特征在于：松墨天牛性成熟个体的人工配对饲养及诱导繁殖为：将松墨天牛成虫按照两雌一雄为一组，放入准备好的产房，让其随机交配、产卵；每个产房放入五到六组松墨天牛成虫；每隔两天更换一次营养枝条和产卵木，并在产卵木上做好时间标记。
5.根据权利要求1所述的一种人工养殖松墨天牛的方法，其特征在于：松墨天牛初生幼虫的分离获取为将产房中更换下来的产卵木置于相同条件的温室中继续培养12~15天后，用木刻刀小心地将树皮与木质部剥离，取出驻生于韧皮部的初生松墨天牛幼虫。
6.根据权利要求1所述的一种人工养殖松墨天牛的方法，其特征在于：松墨天牛幼虫转入人工饲料的后续培养为：将分离出松墨天牛幼虫的产卵木的树皮和木质部分别粉碎至四十目以下，制备成木质部粉末、树皮粉末，备用；分配配置成1~2龄的松墨天牛低龄幼虫饲料和3龄以后的松墨天牛高龄幼虫饲料；在分装好的低龄幼虫饲料的离心管内的饲料中央用消毒的镊子扎一个小孔，将分离得到的初生松墨天牛幼虫头向下放入小孔中，盖上离心管盖，置于与产房环境条件相同的人工气候箱中培养；定期观察松墨天牛幼虫的取食情况，两周后小心地将生长至3龄初期的松墨天牛幼虫取出，完成低龄阶段的饲养，后用于上述同样的方法将取出的松墨天牛幼虫转入中高龄幼虫饲料中进行后续培养，定期观察松墨天牛的取食情况和生长情况，直至松墨天牛的人工饲料中平整出蛹室化蛹，最后羽化出新一代的成虫。
7.根据权利要求6所述的一种人工养殖松墨天牛的方法，其特征在于：所述的1~2龄的松墨天牛低龄幼虫饲料包括以下重量份原料：木质部粉末45~55份，树皮粉末90~110份，玉米粉、大豆粉、麦麸、食用菌菌糠中的一种或几种60~70份，苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾中的一种或几种2~3份，干酵母、酵母粉、酵母提取物种的一种或几种20~30份，琼脂条25~35份，虾壳粉8~15份，蔗糖35~45份，単蒸水280~320份；所述的3龄以后的松墨天牛高龄幼虫饲料包括以下重量份原料：木质部粉末140~160份，玉米粉、大豆粉、麦麸、食用菌菌糠中的一种或几种60~70份，苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾中的一种或几种2~3份，干酵母、酵母粉、酵母提取物种的一种或几种20~30份，琼脂条25~35份，虾壳粉8~15份，蔗糖35~45份，单蒸水280~320份。
8.根据权利要求1所述的一种人工养殖松墨天牛的方法，其特征在于：松墨天牛蛹期及羽化管理为：将新羽化的成虫放入饲养盒内单笼饲养7~10天，转入产房交配、产卵，完成一轮饲养；通过松墨天牛成虫的分批投产，将松墨天牛的生长阶段交错开，达到同时保有各虫态和生长阶段的松墨天牛；不断循环以上过程，实现松墨天牛的实验室人工养殖。
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