CN107287320A - Gapdh基因的lamp检测用引物组合及试剂盒 - Google Patents
Gapdh基因的lamp检测用引物组合及试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107287320A CN107287320A CN201710567594.8A CN201710567594A CN107287320A CN 107287320 A CN107287320 A CN 107287320A CN 201710567594 A CN201710567594 A CN 201710567594A CN 107287320 A CN107287320 A CN 107287320A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- primer
- sequence
- seq
- lamp
- gapdh
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000013461 design Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 4
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 claims description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 2
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 abstract description 10
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 22
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- -1 Bst Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050009160 DNA polymerase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000721047 Danaus plexippus Species 0.000 description 1
- 101150112014 Gapdh gene Proteins 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010339 medical test Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种GAPDH基因检测用引物组合及试剂盒，以SEQ ID No.1所示序列为靶序列，设计引物组合，所述引物组合包括F3、B3、FIP、BIP、LF、LB。该引物组合用于LAMP检测试剂盒中，结果表明引物组合未出现引物内部的非特异性扩增和引物与模板的非特异性结合扩增，成功建立了人源化样本LAMP法扩增的内参质控体系，对于将来LAMP法在临床的广泛应用奠定初步的基础。
Description
技术领域
本发明涉及一种GAPDH基因检测用引物组合及试剂盒，属于生物技术领域。
背景技术
GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)的英文缩写。该酶是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。该酶基因为管家(house keeping)基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作PCR、抽提total RNA，poly(A)+RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。
随着检验医学的发展，一些分子生物学技术，如PCR、链置换扩增等，在医学检验与诊断方面发挥了重要的作用。然而，由于分子生物学技术检测核酸对仪器、设备的要求较高，操作程序复杂，限制了其作为快速诊断方法的开展与推广，环介导等温扩增技术(loopmediated isothermal amplification,LAMP)解决了核酸诊断中设备昂贵、程序复杂等难题。
LAMP反应仅需一种具链置换活性的DNA聚合酶(如Bst、Gsp等)及针对靶基因6-8个区域设计的4-6条引物(F3/B3和FIP/BIP必需，LF/LB可选)便可在60℃～66℃的恒定温度下实现几十分钟内大于109倍的靶基因扩增，其检测的低限可达10拷贝/微升，凭借极高的扩增效率及较低的仪器要求，该技术已逐渐应用于病原体识别、生物标志物检测、性别鉴定等，值得注意的是：LAMP技术在床旁快速检测、野外检测及资源有限的基层实验室检测领域有旷阔的前景。
然而，近年来LAMP技术在实验室中的实际应用相对局限，进展相对缓慢，本课题组根据前期的研究发现，限制其广泛应用的重要原因有两个，具体为：(1)当前的lamp体系难以实现真正意义上的高通量的检测，有待于进一步完善；(2)虽然LAMP体系，检测过程中无需升降温，可以大大加快反应速度，实现高效、快速检测，然而与传统的实时PCR法相比，LAMP体系的稳定性较差，经常会出现因样本核酸提取失败或样本中含有过多的PCR抑制剂导致的扩增失败，从而导致假阴性结果的出现，因此，为了避免假阴性，提高检测结果可信度，需要引入内对照扩增体系，对样本处理和检测的过程进行有效监控。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，针对现有技术不足，提出一种GAPDH基因检测用引物组合及试剂盒。针对人源生物样本，以人GAPDH基因上的一段高度保守的靶序列，设计引物，建立了GAPDH-LAMP检测体系并进行优化，成功建立了人源化样本LAMP法扩增的内参质控体系，对于将来LAMP法在临床的广泛应用奠定初步的基础。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
第一方面，本发明提供了一种用于人GAPDH基因检测的靶序列，所述序列如SEQ IDNo.1所示。
第二方面，本发明提供了一种根据前述靶序列设计的引物组合，所述引物组合包括F3、B3、FIP、BIP、LF、LB；所述引物F3的序列如SEQ ID No.2所示，引物B3的序列如SEQ IDNo.3所示，引物FIP的序列如SEQ ID No.4所示，引物BIP的序列如SEQ ID No.5所示，引物LF的序列如SEQ ID No.6所示，引物LB的序列如SEQ ID No.7所示。
第三方面，本发明提供了一种引物组合在检测GAPDH基因中的应用。
第四方面，本发明提供了一种用于人GAPDH基因检测的LAMP试剂盒，包括扩增反应体系，所述扩增反应体系的总体积为25μL，包括：2×反应缓冲液12.5μL，引物F3：1μL，引物B3：1μL，引物FIP：0.5μL，引物BIP：1μL，引物LF：1μL，引物LB：1μL，Bst DNA聚合酶1μL，钙黄绿素1μL，去离子水3.0μL，人基因组DNA模板2μL。
优选地，所述引物F3和引物B3的终浓度为0.2μmol/L，引物FIP和引物BIP的终浓度为1.6μmol/L，引物LF和引物LB的终浓度为0.8μmol/L。
优选地，所述Bst DNA聚合酶的浓度为8U。
第五方面，本发明提供了一种检测人GAPDH基因的方法，包括以下步骤：采用前述的LAMP试剂盒进行LAMP反应，反应结束后，通过反应液的颜色变化进行判定，反应液的颜色由原来的淡黄色变为绿色，即判定为反应阳性。
优选地，所述LAMP反应的条件为：反应温度65℃，反应时间60min。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
以人GAPDH基因上的一段高度保守的靶序列，设计引物，该引物组合用于LAMP检测试剂盒中，结果表明引物组合未出现引物内部的非特异性扩增和引物与模板的非特异性结合扩增，由此建立了GAPDH-LAMP检测体系并进行优化，成功建立了人源化样本LAMP法扩增的内参质控体系，对于将来LAMP法在临床的广泛应用奠定初步的基础。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1、为本发明实施例的检测结果示意图；其中，A1:临床野生型基因组DNA为模板，A2:108copies/ml的质粒样本，A3:107copies/ml的质粒样本，A4:106copies/ml的质粒样本，A5:105copies/ml的质粒样本，A6:104copies/ml的质粒样本，A7：103copies/ml的质粒样本，A8：阴性对照样本。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变化和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1 GAPDH-LAMP检测体系建立
(1)以人GAPDH基因上的一段高度保守的靶序列，设计引物，所述靶序列长185bp，具体为:
GAACCAGCACCGATCACCTCCCATCGGGCCAATCTCAGTCCCTTCCCCCCTACGTCGGGGCCCACACGCTCGGTGCGTGCCCAGTTGAACCAGGCGGCTGCGGAAAAAAAAAAGCGGGGAGAAAGTAGGGCCCGGCTACTAGCGGTTTTACGGGCGCACGTAGCTCAGGCCTCAAGACCTTGGGC(SEQ ID No.1)
所述引物序列如表1所示。
表1
(2)所采用的试剂盒包括扩增反应体系，该扩增反应体系的总体积为25μL，其包括2×反应缓冲液(RM)12.5μL，引物F3：1μL(终浓度0.2μmol/L)，引物B3：1μL(终浓度0.2μmol/L)，引物FIP：0.5μL(终浓度1.6μmol/L)，引物BIP：1μL(终浓度1.6μmol/L)，引物LF：1μL(终浓度0.8μmol/L)，引物LB：1μL(终浓度0.8μmol/L)，Bst DNA聚合酶1μL(8U)，钙黄绿素(FD)1μL，去离子水3.0μL，DNA模板2μL。
采用上述试剂盒进行LAMP反应，LAMP反应条件为：65℃，60min；所用的设备为普通PCR仪或恒温金属浴等能够稳定提供65℃恒温的设备；然后进行可视化判读来鉴定样本是否为阳性，结果判断具体为：反应结束后，反应液的颜色由原来的淡黄色变为绿色，即判定为反应阳性。
实施例2 GAPDH基因的LAMP检测
构建含靶序列(SEQ ID No.1)的TA克隆质粒，制备梯度浓度的双份样本，具体浓度为103copies/ml、104copies/ml、105copies/ml、106copies/ml、107copies/ml、108copies/ml，用实施例1所建立的GAPDH-LAMP反应体系进行检测，均能检出，结果如图1所示。其中，A1：人外周血基因组DNA为模板，A2：108copies/ml的质粒样本，A3：107copies/ml的质粒样本，A4：106copies/ml的质粒样本，A5：105copies/ml的质粒样本，A6：104copies/ml的质粒样本，A7：103copies/ml的质粒样本，A8：阴性对照样本。A1-A7样本的体系经60min扩增后，均变绿变浑浊，呈现阳性结果；A8为阴性对照，经60min扩增后，无任何变化，依然淡黄色澄清，呈现阴性结果。
综上所述，本发明具有如下的有益效果：
以人GAPDH基因上的一段高度保守的靶序列，设计引物，该引物组合用于LAMP检测试剂盒中，结果表明引物组合未出现引物内部的非特异性扩增和引物与模板的非特异性结合扩增，由此建立了GAPDH-LAMP检测体系并进行优化，成功建立了人源化样本LAMP法扩增的内参质控体系，对于将来LAMP法在临床的广泛应用奠定初步的基础。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。
SEQUENCE LISTING
<110> 曹国君
<120> GAPDH基因的LAMP检测用引物组合及试剂盒
<130> DAG29909
<160> 7
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 185
<212> DNA
<213> artificial sequence
<220>
<223> artificial sequence
<400> 1
gaaccagcac cgatcacctc ccatcgggcc aatctcagtc ccttcccccc tacgtcgggg 60
cccacacgct cggtgcgtgc ccagttgaac caggcggctg cggaaaaaaa aaagcgggga 120
gaaagtaggg cccggctact agcggtttta cgggcgcacg tagctcaggc ctcaagacct 180
tgggc 185
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> artificial sequence
<220>
<223> artificial sequence
<400> 2
gaaccagcac cgatcacc 18
<210> 3
<211> 17
<212> DNA
<213> artificial sequence
<220>
<223> artificial sequence
<400> 3
gcccaaggtc ttgaggc 17
<210> 4
<211> 38
<212> DNA
<213> artificial sequence
<220>
<223> artificial sequence
<400> 4
aactgggcac gcaccgagct cccatcgggc caatctca 38
<210> 5
<211> 35
<212> DNA
<213> artificial sequence
<220>
<223> artificial sequence
<400> 5
accaggcggc tgcggaaagc tacgtgcgcc cgtaa 35
<210> 6
<211> 17
<212> DNA
<213> artificial sequence
<220>
<223> artificial sequence
<400> 6
acgtaggggg gaaggga 17
<210> 7
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial sequence
<220>
<223> artificial sequence
<400> 7
aaaaaaagcg gggagaaagt agg 23
Claims (8)
1.一种用于人GAPDH基因检测的靶序列，其特征在于，所述序列如SEQ ID No.1所示。
2.一种根据权利要求1所示靶序列设计的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括F3、B3、FIP、BIP、LF、LB；所述引物F3的序列如SEQ ID No.2所示，引物B3的序列如SEQ IDNo.3所示，引物FIP的序列如SEQ ID No.4所示，引物BIP的序列如SEQ ID No.5所示，引物LF的序列如SEQ ID No.6所示，引物LB的序列如SEQ ID No.7所示。
3.一种根据权利要求2所述的引物组合在检测GAPDH基因中的应用。
4.一种用于人GAPDH基因检测的LAMP试剂盒，其特征在于，包括扩增反应体系，所述扩增反应体系的总体积为25μL，包括：2×反应缓冲液12.5μL，引物F3：1μL，引物B3：1μL，引物FIP：0.5μL，引物BIP：1μL，引物LF：1μL，引物LB：1μL，BstDNA聚合酶1μL，钙黄绿素1μL，去离子水3.0μL，人基因组DNA模板2μL。
5.根据权利要求4所述的用于人GAPDH基因检测的LAMP试剂盒，其特征在于，所述引物F3和引物B3的终浓度为0.2μmol/L，引物FIP和引物BIP的终浓度为1.6μmol/L，引物LF和引物LB的终浓度为0.8μmol/L。
6.根据权利要求4所述的用于人GAPDH基因检测的LAMP试剂盒，其特征在于，所述BstDNA聚合酶的浓度为8U。
7.一种检测人GAPDH基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：采用权利要求4所述的LAMP试剂盒进行LAMP反应，反应结束后，通过反应液的颜色变化进行判定，反应液的颜色由原来的淡黄色变为绿色，即判定为反应阳性。
8.根据权利要求7所述的检测人GAPDH基因的方法，其特征在于，所述LAMP反应的条件为：反应温度65℃，反应时间60min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710567594.8A CN107287320A (zh) | 2017-07-12 | 2017-07-12 | Gapdh基因的lamp检测用引物组合及试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710567594.8A CN107287320A (zh) | 2017-07-12 | 2017-07-12 | Gapdh基因的lamp检测用引物组合及试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107287320A true CN107287320A (zh) | 2017-10-24 |
Family
ID=60100745
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710567594.8A Pending CN107287320A (zh) | 2017-07-12 | 2017-07-12 | Gapdh基因的lamp检测用引物组合及试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107287320A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107988358A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-05-04 | 湖北工业大学 | 一种检测NPPA基因突变c.T413C的内参扩增引物组合物及其扩增体系 |
| CN110863051A (zh) * | 2019-12-13 | 2020-03-06 | 广州迈景基因医学科技有限公司 | 一种met基因扩增检测的引物、体系及试剂盒 |
| CN112266986A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-01-26 | 博奥生物集团有限公司 | 病毒核酸提取或保存试剂、引物探针组合、病毒扩增试剂、试剂盒及其应用 |
| US11788129B2 (en) | 2021-02-23 | 2023-10-17 | Industrial Technology Research Institute | Nucleic acid detection kit and nucleic acid detection method |
| TWI885227B (zh) | 2021-02-23 | 2025-06-01 | 財團法人工業技術研究院 | 核酸偵測套組及核酸偵測方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1473202A (zh) * | 2001-03-09 | 2004-02-04 | Ŧب������˾ | Rna序列扩增的方法和组合物 |
| CN1633500A (zh) * | 2002-02-20 | 2005-06-29 | 希森美康株式会社 | 用于持家基因mRNA检测的核酸扩增用引物和使用该引物的检查方法 |
| WO2014060604A2 (en) * | 2012-10-20 | 2014-04-24 | Selfdiagnostics OÜ | Method and its compositions for detection of nucleic acid target from biological samples and body fluids |
| EP3098326A1 (en) * | 2015-05-27 | 2016-11-30 | Institut Pasteur | Isothermal amplification assay for rapid and accurate detection of hemorrhagic fever viruses in clinical samples |
-
2017
- 2017-07-12 CN CN201710567594.8A patent/CN107287320A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1473202A (zh) * | 2001-03-09 | 2004-02-04 | Ŧب������˾ | Rna序列扩增的方法和组合物 |
| CN1633500A (zh) * | 2002-02-20 | 2005-06-29 | 希森美康株式会社 | 用于持家基因mRNA检测的核酸扩增用引物和使用该引物的检查方法 |
| WO2014060604A2 (en) * | 2012-10-20 | 2014-04-24 | Selfdiagnostics OÜ | Method and its compositions for detection of nucleic acid target from biological samples and body fluids |
| EP3098326A1 (en) * | 2015-05-27 | 2016-11-30 | Institut Pasteur | Isothermal amplification assay for rapid and accurate detection of hemorrhagic fever viruses in clinical samples |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| RIEDER,M.J.等: "GenBank: AY340484.1，Homo sapiens glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPD) gene, complete cds", 《GENBANK DATABASE》 * |
| 夏邦顺等主编: "《临床分子诊断学》", 31 July 2012, 中山大学出版社 * |
| 谭贵良等主编: "《现代分子生物学及组学技术在食品安全检测中的应用》", 30 June 2014, 中山大学出版社 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107988358A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-05-04 | 湖北工业大学 | 一种检测NPPA基因突变c.T413C的内参扩增引物组合物及其扩增体系 |
| CN110863051A (zh) * | 2019-12-13 | 2020-03-06 | 广州迈景基因医学科技有限公司 | 一种met基因扩增检测的引物、体系及试剂盒 |
| CN110863051B (zh) * | 2019-12-13 | 2020-10-23 | 广州迈景基因医学科技有限公司 | 一种met基因扩增检测的引物、体系及试剂盒 |
| CN112266986A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-01-26 | 博奥生物集团有限公司 | 病毒核酸提取或保存试剂、引物探针组合、病毒扩增试剂、试剂盒及其应用 |
| US11788129B2 (en) | 2021-02-23 | 2023-10-17 | Industrial Technology Research Institute | Nucleic acid detection kit and nucleic acid detection method |
| TWI885227B (zh) | 2021-02-23 | 2025-06-01 | 財團法人工業技術研究院 | 核酸偵測套組及核酸偵測方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101570795B (zh) | 基于环介导等温扩增技术的结核分歧杆菌基因诊断的引物及其在制备快速诊断试剂盒的应用 | |
| CN107287320A (zh) | Gapdh基因的lamp检测用引物组合及试剂盒 | |
| CN104120080B (zh) | 一种α-珠蛋白基因突变检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
| CN101712973B (zh) | 常温核酸扩增链替换反应试剂及常温核酸扩增方法 | |
| CN108913811A (zh) | 乙肝病毒核酸的快速扩增方法 | |
| CN115029459A (zh) | 一种基于CRISPR-Cas12a可视化检测多杀性巴氏杆菌的试剂盒及应用 | |
| CN108531630A (zh) | 检测b族链球菌的引物组、包含所述引物组的引物液和试剂盒及其应用 | |
| CN104561360A (zh) | Top2a基因异常检测探针、试剂盒以及方法 | |
| Zhang et al. | A highly sensitive and versatile fluorescent biosensor for pathogen nucleic acid detection based on toehold-mediated strand displacement initiated primer exchange reaction | |
| CN115992273A (zh) | 用于检测肺炎链球菌的核酸分子、试剂盒及检测方法 | |
| CN101008039A (zh) | 基于环介导等温扩增技术的eb病毒基因快速诊断试剂盒 | |
| CN107338284B (zh) | 人和小鼠pdx模型有关交叉污染检测试剂盒及检测方法 | |
| CN103276099A (zh) | 用于荧光定量pcr检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒 | |
| CN115109859B (zh) | 一种多模态复合功能幽门螺杆菌核酸检测试纸 | |
| CN106399536B (zh) | 体液循环dna定量检测方法及试剂盒 | |
| CN104561375A (zh) | 一种新布尼亚病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法 | |
| CN107338289A (zh) | 一种锁核酸修饰的lamp引物组合物及其应用 | |
| CN104087665A (zh) | 一种检测黄曲霉及烟曲霉的通用引物及实时荧光tHDA试剂盒 | |
| CN105176995B (zh) | 基于水解探针法的可同时检测地中海贫血‑α21.9缺失型和α2变异的试剂盒 | |
| CN117265157A (zh) | 用于可视化检测毕赤酵母残留DNA的pfAgo检测试剂盒及其用途 | |
| CN117431330A (zh) | 检测微黄色奈瑟氏菌的引物探针组及其试剂盒和应用 | |
| CN102181567A (zh) | 一种检测光滑假丝酵母菌的实时荧光定量pcr试剂盒 | |
| CN111378724B (zh) | 一种rna放大检测方法及检测试剂盒 | |
| CN113684279A (zh) | 一种诊断骨肉瘤的引物组、试剂盒及检测方法 | |
| CN104988237A (zh) | 一种肺炎支原体核酸快速检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20171024 |