CN107200716B - 苯并噁嗪类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种苯并噁嗪类化合物，结构如式(I)所示，或其药学上可接受的盐，式(I)中各取代基的定义详见说明书。此外，本发明还公开了该化合物或其药学上可接受的盐的制备方法和应用。本发明的苯并噁嗪类化合物具有MEK抑制功能，并且对非磷酸化MEK具有抑制作用，同时，毒性低，可用作抗肿瘤和抗病毒药物。

Description

苯并噁嗪类化合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，具体地说涉及一种苯并噁嗪类化合物及其制备方法与应用。该类化合物具有MEK抑制功能，有一定的抗肿瘤作用和抗病毒作用，因而可被用于肿瘤疾病和病毒性疾病的治疗。

背景技术

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路家族是细胞内信号级联的一个中心构建块，哺乳动物至少有四种不同的通路，Raf/MEK/ERK通路是首先发现的丝裂原活化蛋白激酶通路，也是研究较深的信号转导通路之一。它主要由三个级联核心蛋白激酶Raf、MEK(Mitogen-activated and Extracellular signal-regulated Kinase)和ERK组成，三个激酶依次先后顺序激活，将信号传递给各种不同的胞内靶标，从而调控各种细胞过程，例如转录、翻译、增殖、分化及凋亡。[Shaul YD,Seger R.Biochimica et Biophysica Acta,2007,1773:1213-1226.],[Li Y,Zhang LQ,He FC.International Journal of Virology,2006,13(1):19-22.],[Wortzel I,Segar R.Genes&Cancer,2011,2(3):195-209.],[Frémin C,Meloche S.Journal of Hematology&Oncology,2010,3(8):1-11.]

Raf/MEK/ERK通路是细胞内关键的信号转导通路，也是在多种人类肿瘤中经常发生异常活化的信号转导通路之一，其中常见的癌症有黑素瘤、甲状腺癌、结肠癌、骨髓癌、转移性胆道癌、卵巢癌、非小细胞肺癌和前列腺癌等。因此抑制这一通路已经成为抗肿瘤药物的研究热点之一，例如2005年FDA批准Raf抑制剂索拉菲尼上市，用于治疗晚期肾癌等实体瘤，2013年FDA批准MEK抑制剂曲美替尼上市，用于治疗不可切除的或转移黑色素瘤，除了上市药物外，还有一些激酶抑制剂当前正处于抗肿瘤临床研究的不同阶段。[Wortzel I,Segar R.Genes&Cancer,2011,2(3):195-209.],[Isshiki Y,Kohchi Y,Iikura H,etal.Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2011,21:1795-1801.],[Dong Q,DouganDR,Cong XC,et al.Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2011,21:1315-1319.],[Pinto R,Herioid S,Cakarova L,et al.Antiviral Research,2011,92:45-56.],[Bekaii-Saab T,Phelps MA,Li XB,et al.Journal of Clinical Oncology,2011,29(17):2357-2363.],[Bromberg-White JL,Anderson NJ,Duesbery NS.Briefings inFunctional Genomics,2012,11(4):300-310.],[Droebner K,Pleschka S,Ludwig S,etal.Antiviral Research,2011,92:195-203.]

此外，越来越多的研究证实，Raf/MEK/ERK通路的活化对病毒的有效复制是必须的，例如肝炎病毒、牛痘病毒、II型单纯疱疹病毒、猿猴病毒40、HIV-1病毒、猴疱疹病毒、柯萨奇病毒、卡波济氏肉瘤病毒、流感病毒等均依赖这条通路进行复制。因此，选择性阻断这条通路可以阻止多种病毒的复制与繁殖。例如MEK1抑制剂U0126可以强烈抑制目前监测的所有甲、乙型流感病毒。[Akinleye A,Furqan M,Mukhi N,et al.Journal of Hematology&Oncology,2013,6(27):1-11.],[Giambartolomei S,Covone F,Levreo M,etal.Oncogene,2001,20:2606-2610.],[

L,Berting A,Malkowsk B,et al.Oncogene,2003,22:2604-2610.],[

JC,Andrade AA,Silva PNG,et al.the Journal ofBiological Chemistry,2001,276(42):38353-38360.],[Smith CC,Nelson J,AurelianL,et al.Journal of Virology,2000,74(22):10417-10429.],[Walia NS,Krishnan HH,Naranatt PP,et al.Journal of Virology,2005,79(16):10308-10329.],[Pleschka S,Wolff T,Ehrhardt C,et al.Nature Cell Biology,2001,3:301-305.]

MEK激酶具有独特的结构和功能特点，从MEK激酶在通路中的位置来看，MEK是目前已知的唯一能活化ERK的激酶，ERK也是MEK的唯一已知的底物，因此MEK具有高度的底物专一性，同时也处于这条通路的节点位置，因此选择MEK作为分子靶标的MEK抑制剂可提高对通路的选择性。从MEK的结构来看，其含有一个不同于ATP结合口袋的变构口袋，这一口袋在MEK1和MEK2中是高度保守的，在其它激酶相似区域的序列同源性则很低，这使得抑制剂对激酶的选择性提高，当抑制剂结合到这一口袋时，诱导酶的构象处于一种非活化的状态，使酶被活化或激活下游底物的能力降低，从而抑制酶的活性。目前绝大部分MEK抑制剂均作用于该口袋，属于非ATP竞争性抑制剂。从耐药性角度看，ERK通路中的蛋白是由人类基因编码的，发生突变的可能性很小，因此抑制该通路可以避免针对病毒本身的抗病毒药物所带来的耐药性问题，也可以避免疫苗的缺陷。因此，本领域希望开发新的MEK抑制剂，作为新型抗肿瘤药物和抗病毒药物，且具有毒性低、不易产生耐药性、激酶选择性高以及通路的选择性好等特点。[Smith CK,Carr D,Mayhood TW,et al.Protein Express and Purification,2007,52:446-456.],[Ohren JF,Che HF,Pavlovsky A,et al.Nature Structural&Molecular Biology,2004,11(12):1192-1197.],[Ludwig S,Planz O,Pleschka S,etal.Trends in Molecular Medicine,2003,9(2):46-52.]

发明内容

本发明人研发了一种苯并噁嗪类化合物，或其药学上可接受的盐，该化合物具有MEK抑制功能，不仅具有抗肿瘤、抗病毒的作用，而且毒性低，安全性高。

本发明目的是提供一种新的苯并噁嗪类化合物，或其药学上可接受的盐。

本发明的第二目的是提供这类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法。

本发明的第三个目的是提供含该类化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。

本发明的第四个目的是提供这类化合物或其药学上可接受的盐的应用。

具体地说，本发明提供了一种苯并噁嗪类化合物，结构如式(I)所示，或其药学上可接受的盐：

其中，R₁为未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷烃基、S(O)₂R₆、C(O)R₆、C(O)NR₇R₈或S(O)₂NR₇R₈；

R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地为氢或卤素；

R₆为未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷烃基或芳烃基；

R₇和R₈各自独立地为氢或C1-C6烷基；

A为氢或下式：

这里，Y为-NH-；

L为-S(O)₂-或-CO-；

Z为-NH-或-CH₂-；

R₉为氢、未取代的C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C6环烷烃基、芳烃基、或杂芳基；这里，所述取代的C1-C6烷基是指在该烷基碳链的任选位置上被任选一个或多个氰基、卤素、羟基或苯基所取代。

在本发明的实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物，其中，所述未取代的C1-C6烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、2-甲基丙基、叔丁基、正戊基、新戊基、或正己基等。

在本发明的实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物，其中，所述卤素选自氟、氯、溴或碘，优选地，为氟。

在本发明的实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物，其中，所述芳烃基为苯基或萘基，优选地为苯基。

在本发明的实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物，其中，所述杂芳基选自呋喃基、咪唑基、吲哚基、噁二唑基、噁嗪基、噁唑基、异噁唑基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二嗪基、噻二唑基、噻三唑基、噻唑基、异噻唑基、噻吩基、三嗪基、或三唑基。

在本发明的实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物，其中，所述药学上可接受的盐是指式(I)化合物的有机盐和无机盐；可以在最终分离和纯化化合物期间原位制成，或者可以通过如下制成：单独地将式(I)化合物与适当的有机或无机酸进行反应，然后分离所形成的盐；有机或无机酸可选自氢溴酸盐、氢氯酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、苯磺酸盐、丙二酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、六氟磷酸盐、甲苯磺酸盐、甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。

在本发明的一种实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁为未取代的C1-C6烷基，S(O)₂R₆,C(O)R₆,C(O)NR₇R₈或S(O)₂NR₇R₈；

R₂和R₄都是氢；R₆为未取代的C1-C6烷基或芳烃基。

在本发明的一种实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁为未取代的C1-C6烷基、S(O)₂R₆、C(O)R₆、C(O)NR₇R₈或S(O)₂NR₇R₈；

R₂、R₄和R₅都是氢；R₃为卤素。

在本发明的一种实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁为甲基、乙基、正丙基、正丁基、S(O)₂R₆、C(O)R₆、C(O)NR₇R₈或S(O)₂NR₇R₈；

这里，R₆为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；

R₇和R₈各自独立地为氢、甲基或乙基。

在本发明的一种实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐，其中，A为氢，R₂和R₄都是氢；R₃和R₅中一个为氢，而另一个为卤素(优选地为氟)。

在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐，如式(II)所示：

其中，R₁、R₃、R₄、R₅及A的定义如上面的式(I)化合物所描述。

在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐，如式(III)所示：

其中，R₁、R₃、R₄、R₅、Y、L、Z和R₉的定义如上面的式(I)化合物所描述。

在本发明的一种优选实施方案中，本发明提供的苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐，如式(IV)所示：

其中，R₁、R₃、Y、L、Z和R₉的定义如上面的式(I)化合物所描述。

在本发明的一种特别优选实施方案中，本发明提供了下列苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐：

或

其中，R₄和R₅都为氢，Y为-NH-，而R₁、R₃、L、Z和R₉的定义如下：

另一方面，本发明提供了上述苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，当式(I)化合物中A为氢时，其包括如下步骤：

(1)式(V)所示化合物与卤代物R₁X在碱性条件下反应，得到式(VI)所示化合物；

(2)式(VI)所示化合物与式(VII)所示化合物反应，得到式(I)所示化合物；

这里，卤代物R₁X、式(V)、式(VI)及式(VII)中涉及的R₁、R₂、R₃、R₄和R₅的定义如上面的式(I)化合物所描述；X为卤素，优选为氯、溴或碘。

本发明提供了上述苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，当式(I)化合物中A为-Y-L-Z-R₉时，

其包括如下步骤：

(1)式(V)所示化合物与卤代物R₁X在碱性条件下反应，得到式(VI)所示化合物；

(2)式(VI)所示化合物与式(VIII)所示化合物反应，得到式(IX)所示化合物；

(3)式(IX)所示化合物进行还原反应，得到式(X)所示化合物；

(4)式(X)所示化合物与式(XI)化合物反应，得到式(I)所示化合物；

这里，卤代物R₁X、式(V)、式(VI)、式(VIII)、式(IX)、式(X)和式(XI)中涉及的R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₉、Y、L和Z的定义如上面的式(I)化合物所描述；X为卤素，优选为氯、溴或碘；Q为离去基团，优选地为氯、溴、碘或：

在本发明的实施方案中，本发明提供的上述苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其中，步骤(1)式(V)所示化合物可以通过如下方式获得：

2,4-二羟基苯甲酰胺与氯甲酸乙酯在吡啶的作用下发生亲核取代反应，得到式V化合物。

需要说明的是，以上所描述的合成路径是为了阐明本发明化合物的制备，而制备绝不仅限于此，在本发明的教导下，其他合成方法同样可行。

第三方面，本发明提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括药理学上有效量的上述苯并噁嗪类化合物或其药学上可接受的盐，还可以包括和药学上可接受的载体。该药物组合物可以以片剂、胶囊、丸剂、粉末、颗粒剂、散剂、或糖浆剂的形式口服给药，或以注射剂的形式非胃肠给药。所述药物组合物的单位剂量为0.1mg至1g。上述药物组合物可通过常规制药方法制备。

第四方面，本发明提供了上述苯并噁嗪类化合物，或其药学上可接受的盐在制备MEK抑制剂药物中的应用，该应用包括但不限于作为抗病毒(包括但不限于抗EV71病毒)、或抗肿瘤药物。用药剂量为每次0.1mg-1g，次数为每周一次至每日三或四次。给药途径为口服、外用或非胃肠。

通过实验证实，本发明化合物具有抑制MEK活性的作用，具有良好的MEK抑制活性，可作为新结构类型的MEK抑制剂药物，不仅用于肿瘤和病毒性疾病的治疗，同时，毒性低。

附图说明

图1为本发明化合物31和33对RD细胞的生存率抑制曲线图。

图2为本发明化合物31、33、对照药物对EV71处理引起的细胞病变效应结果图及对照组结果图。

图3为本发明化合物31、33、对照药物及对照处理组的蛋白免疫印迹实验结果图。

具体实施方式

下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的保护范围。

缩略语：Ph表示苯基，Ar表示芳基氢，δ表示化学位移，单位ppm，J表示偶合常数，单位Hz，mp表示熔点，s表示单峰,d表示二重峰,t表示三重峰,q表示四重峰,m表示多重峰,brs表示宽单峰,dd表示双二重峰；

NMR的条件：Bruker avance III 400MHz型核磁共振仪。TMS为内标，氘代DMSO和氘代氯仿为溶剂；

质谱仪：Waters ACQ-SQD LC–MS型ESI质谱仪，Bruker Apex IV FTMS型高分辨ESI质谱仪；

本申请中起始原料均是已知可获得产品，或从试剂公司购买得到，或已有文献报道合成方法；

除了已有文献报道的中间体外，其余中间体均给出制备方法和表征数据；

本发明化合物的合成路线1：

反应条件：

(a)氯甲酸乙酯，吡啶，乙腈；

(b)R₁-Cl，NaH，DMF；

(c)溴苄或3-硝基溴苄，K₂CO₃，DMF；

(d)5％Pd/C，H₂；

(e)反应试剂：CH₃COCl,CH₃SO₂Cl,CH₃CH₂SO₂Cl或N-取代-2-氧代噁唑啉3-磺酰胺(即，上述合成路线1中化合物5)；碱性催化剂：吡啶或三乙胺；溶剂：CH₂Cl₂或乙腈。

本发明化合物的合成路线2：

反应条件：

(a)氯甲酸乙酯，吡啶，乙腈；

(b)R₁-Cl,NaH,DMF；

(c)NBS，过氧苯甲酸，CDCl₃，回流；

(d)K₂CO₃,DMF；

(e)5％Pd/C,H₂；

(f)反应试剂：CH₃SO₂Cl,CH₃SO₂Cl或N-取代-2-氧代噁唑啉3-磺酰胺；碱性催化剂：吡啶或三乙胺；溶剂：CH₂Cl₂或乙腈；

(g)浓氨水；

(h)MeI,NaH,DMF。

实施例1-19

实施例1-19化合物采用上面的合成路线1

实施例1 3-(3-甲磺酰胺基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物6)的合成

合成路线1步骤(a)

0℃，向2,4-二羟基苯甲酰胺(6.53mmol，1g)和吡啶(40.49mmol，3.26mL)的9mL乙腈悬浊液中滴加氯甲酸乙酯(7.183mmol，0.78g)的3mL乙腈溶液，分次滴加，保证体系温度不超过5℃。滴加完毕后，油浴加热搅拌，常压蒸馏，待不再有溶剂蒸馏出时，停止蒸馏，改为回流，温度降为90℃，反应2h。反应液冷却至室温，加20mL水，浓盐酸酸化，过滤，得7-羟基-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物1)，浅灰色固体0.94g，收率80.55％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.77(s,1H,OH),10.95(s,1H,NH),7.76(d,J＝8.5Hz,1H,Ar),6.81(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),6.65(s,1H,Ar)；MS(ESI)m/z：178.13(M–H⁺)。

合成路线1步骤(b)

0℃，向7-羟基-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(2.23mmol，0.4g)的10mL DMF溶液中加入NaH(80％,4.47mmol,0.1341g)，滴加N,N-二甲氨基甲酰氯(4.47mmol，0.41mL)，转至室温搅拌，反应3h。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次，有机相饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(梯度洗脱：二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝100/1)(v/v)，得7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物2a)，白色固体0.396g，收率70.97％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.03(s,1H,NH),7.93(d,J＝8.4Hz,1H,Ar),7.25(s,1H,Ar),7.19(d,J＝8.4Hz,1H,Ar),3.06(s,3H,NCH₃),2.94(s,3H,NCH₃)；MS(ESI)m/z:249.31(M–H⁺)。

合成路线1步骤(c)

室温，向7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(1.49mmol，0.373g)和K₂CO₃(2.98mmol，0.411g)的8mL DMF悬浊液中加入3-硝基溴苄(1.68mmol，0.363g)，反应9h。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次，有机相饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(梯度洗脱：石油醚，石油醚/乙酸乙酯＝3/1，二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝100/1，二氯甲烷/甲醇＝40/1)(v/v)，得3-(3-硝基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物3a)，白色固体0.5387g，粗收率57.41％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.28(s,1H,NH),8.14(d,J＝8.4Hz,1H,Ar),8.01(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),7.87(d,J＝7.6Hz,1H,Ar),7.63(t,J＝7.9Hz,1H,Ar),7.32(s,1H,Ar),7.24(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),5.18(s,2H,CH₂),3.06(s,3H,NCH₃),2.94(s,3H,NCH₃)；MS(ESI)m/z:386.32(M+H⁺),408.33(M+Na⁺)。

合成路线1步骤(d)

室温，向3-(3-硝基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(1.2mmol，0.462g)的70mL甲醇溶液中加入5％Pd/C(0.1eq，0.05g)，于氢化反应仪中搅拌，反应9h。过滤除去催化剂，减压浓缩，得3-(3-氨基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物4a)粗品，黄色粘稠状固体。未进行分离纯化，直接投下一步反应。MS(ESI)m/z:356.28(M+H⁺),378.43(M+Na⁺)。

合成路线1步骤(e)

室温，向3-(3-氨基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(1.29mmol，0.46g)的10mL二氯甲烷溶液中加入吡啶(1.42mmol，0.11mL)，滴加甲磺酰氯(1.42mmol，0.11mL)的2mL二氯甲烷溶液，室温搅拌，反应6h。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次，有机相合并，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(梯度洗脱：二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝200/1，二氯甲烷/甲醇＝100/1)(v/v)，得3-(3-甲磺酰胺基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物6)，白色固体0.2233g，两步收率61.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.70(s,1H,NH),8.01(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),7.03–7.38(m,6H,Ar),5.03(s,2H,CH₂),3.06(s,3H,SO₂CH₃),2.97(s,3H,NCH₃),2.94(s,3H,NCH₃)；HRMS(ESI)m/z:434.10192(M+H⁺),456.08390(M+Na⁺)。

实施例3 7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(3-氨磺酰胺基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物8)的合成

0℃，向氯磺酰异氰酸酯(15mmol，2.123g)中缓慢滴加甲酸(15mmol，0.6905g)，室温搅拌1h后，加入10mL二氯甲烷，0℃，将此混合液滴加入含有3-(3-氨基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物4a)(3mmol，1.066g)、吡啶(30mmol，2.4mL)和11mL二氯甲烷的瓶中，室温搅拌17h。加水淬灭反应，二氯甲烷萃取3次。柱层析分离(梯度洗脱：二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝100/1，二氯甲烷/甲醇＝40/1)(v/v)，得白色固体0.279g，收率26.83％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.42(s,1H,NH),8.01(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),7.34(d,J＝2.0Hz,1H,Ar),7.25(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H,Ar),7.21(d,J＝7.8Hz,1H,Ar),7.11(d,J＝8.2Hz,1H,Ar),7.08(s,1H,Ar),7.06(s,2H,NH₂),6.97(d,J＝7.7Hz,1H,Ar),5.02(s,2H,CH₂),3.06(s,3H,CH₃),2.94(s,3H,CH₃)；HRMS(ESI)m/z:435.09640(M+H⁺),457.07803(M+Na⁺)。

实施例4 3-(3-(N-甲基)氨磺酰胺基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物9)的合成

0℃，向氯磺酰异氰酸酯(10mmol，1.415g)的13mL无水二氯甲烷溶液中缓慢滴加2-溴乙醇(10mmol，0.71mL)的3mL无水二氯甲烷溶液，搅拌2h。0℃，将此混合液滴加入含有甲胺的THF溶液(2M，11mmol，5.5mL)、三乙胺(16mmol，2.22mL)和5mL二氯甲烷的两口瓶中，转至室温搅拌，反应18h。加入盐酸水溶液(1mol/L)淬灭反应，二氯甲烷萃取，水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得N-甲基-2-氧代噁唑烷-3-磺酰胺(化合物5a)，无色透明晶体，乙醇重结晶，得白色固体0.8551g，收率47.76％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.18(d,J＝4.4Hz,1H,NH),4.39(t,J＝7.8Hz,2H,OCH₂),3.94(t,J＝7.8Hz,2H,NCH₂),2.62(d,J＝4.8Hz,3H,CH₃)；MS(ESI)m/z:179.15(M-H⁺)。

合成路线1步骤(e)

向3-(3-氨基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物4a)(1.33mmol，0.4726g)的17mL乙腈溶液中滴加三乙胺(3.99mmol，0.56mL)和N-甲基-2-氧代噁唑烷-3-磺酰胺(化合物5a)(2.66mmol，0.48g)，80℃加热回流18h。加入乙酸乙酯稀释，盐酸水溶液(1mol/L)洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(梯度洗脱：二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝200/1，二氯甲烷/甲醇＝100/1)(v/v)，得7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(3-(N-甲基)氨磺酰胺基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物9)，土黄色固体0.2665g，收率44.68％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.60(s,1H,NHSO₂NHCH₃),8.01(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),7.34(d,J＝2.0Hz,1H,Ar),7.30-7.19(m,3H,Ar),7.10(d,2H,Ar,NHSO₂NHCH₃),7.00(d,J＝7.5Hz,1H,Ar),5.02(s,2H,CH₂),3.06(s,3H,NHCH₃),2.94(s,3H,CH₃),2.43(d,J＝5.0Hz,3H,CH₃)；HRMS(ESI)m/z:449.11206(M+H⁺)。

实施例2、5-19的化合物7、10、11、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26合成方法同化合物6、8或9，结果见表1：

表1 本发明实施例2，5-19

实施例20-58采用合成路线2

实施例20 7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-甲磺酰胺基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物29)的合成

合成路线2步骤(c)

向2-氟-3-硝基甲苯(64.5mmol，10g)和N-溴代琥珀酰亚胺(77.4mmol，13.78g)的100mL CCl₄悬浊液中加入过氧化苯甲酰(6.45mmol，1.56g)，80℃加热回流12h。冷却至室温，过滤除去不溶物，减压浓缩。柱层析分离(梯度洗脱：石油醚，石油醚/乙酸乙酯＝30/1)(v/v)，收集纯品，得2-氟-3-硝基苄基溴，黄色油状液体6g，收率39.76％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.14(t,J＝7.7Hz,1H,Ar),7.97(t,J＝7.1Hz,1H,Ar),7.46(t,J＝8.0Hz,1H,Ar),4.81(s,2H,CH₂)。

合成路线2步骤(d)

室温，向7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物2a)(9.83mmol，2.46g)的20mL DMF溶液中加入K₂CO₃(19.66mmol，2.72g)和2-氟-3-硝基苄基溴(11.11mmol，2.6g)，室温搅拌5h。加水淬灭反应，减压过滤得黄色固体，红外干燥。柱层析分离(梯度洗脱：石油醚/乙酸乙酯＝5/1，二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝200/1)(v/v)，得7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-硝基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物27a)，白色固体2.87g，收率72.4％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.07(t,J＝7.0Hz,1H,Ar),8.00(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),7.88(t,J＝6.5Hz,1H,Ar),7.44-7.30(m,2H,Ar),7.24(dd,J₁＝8.6Hz,J₁＝2.1Hz,1H,Ar),5.17(s,2H,CH₂),3.07(s,3H,CH₃),2.94(s,3H,CH₃)；MS(ESI)m/z:404.35(M+H⁺),426.35(M+Na⁺)。

合成路线2步骤(e)

室温，将7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-硝基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物27a)(3.03mmol，1.223g)、5％Pd/C(0.17g)及70mL甲醇加入到氢化反应管中，于氢化反应仪中搅拌8h。从氢化反应仪中取出，加入乙酸乙酯并水浴加热至体系变澄清，过滤除去不溶物，液体减压浓缩。柱层析分离(梯度洗脱，二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝200/1，二氯甲烷/甲醇＝100/1)(v/v)，得7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-氨基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物28a)粗品，黄色固体0.9648g，粗收率85.23％。MS(ESI)m/z:374.37(M+H⁺),396.38(M+Na⁺)。

合成路线2步骤(f)

0℃，向7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-氨基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物28a)(0.94mmol，0.35g)的10mL二氯甲烷溶液中滴加吡啶(1.034mmol，0.08mL)和甲磺酰氯(1.034mmol，0.08mL)，转至室温搅拌35h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取3次，盐酸水溶液(1mmol/L)洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(梯度洗脱：二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝200/1，二氯甲烷/甲醇＝100/1，二氯甲烷/甲醇＝40/1)(v/v)，得7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-甲磺酰胺基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物29)，白色固体0.379g，收率93.03％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.62(s,1H,NH),8.00(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),7.30-7.34(m,2H,Ar),7.28-7.18(m,2H,Ar),7.10(t,J＝7.9Hz,1H,Ar),5.11(s,2H,CH₂),3.05(d,6H,CH₃NCH₃),2.94(s,3H,CH₃SO₂)；HRMS(ESI)m/z:452.09223(M+H⁺),474.07417(M+Na⁺),490.04811(M+K⁺)。

实施例21 7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-乙磺酰胺基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物30)的合成

0℃，向氯磺酰异氰酸酯(4.7mmol，0.6652g)中缓慢滴加甲酸(4.7mmol，0.22g)，室温搅拌1h后，加入5mL二氯甲烷，0℃，将此混合液滴加入含有3-(2-氟-3-氨基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物28a)(0.94mmol，0.35g)、吡啶(9.4mmol，0.75mL)和10mL二氯甲烷的瓶中，室温搅拌2.5h。加水淬灭反应，二氯甲烷萃取1次，有机相减压浓缩。浓缩混合物柱层析分离(梯度洗脱：二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝200/1，二氯甲烷/甲醇＝100/1，二氯甲烷/甲醇＝80/1，二氯甲烷/甲醇＝40/1)(v/v)，使用有机溶剂(二氯甲烷/甲醇＝40/1)(v/v)打浆以洗去未分离干净的吡啶，过滤得白色固体0.1157g，收率28.33％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.18(s,1H,NH),8.00(d,J＝8.6Hz,1H,H-5),7.39(t,J＝6.9Hz,1H,Ar),7.34(d,J＝1.9Hz,1H,H-8),7.24(dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝1.7Hz,1H,H-6),7.15-7.01(m,4H,NH₂,Ar),5.09(s,2H,CH₂),3.07(s,3H,CH₃),2.94(s,3H,CH₃)；HRMS(ESI)m/z:453.08747(M+H⁺),475.06942(M+Na⁺),491.04336(M+K⁺)。

实施例24 7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-(N-(2-氰基乙基))氨磺酰胺基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物33)的合成

0℃，向氯磺酰异氰酸酯(30mmol，4.25g)的26mL无水二氯甲烷溶液中缓慢滴加2-溴乙醇(30mmol，2.13mL)的5mL无水二氯甲烷溶液，搅拌2h。0℃，将此混合液滴加入含有3-氨基丙腈(33mmol，2.3133g)、三乙胺(48mmol，6.66mL)和15mL二氯甲烷的两口瓶中，转至室温搅拌，反应19h。加入盐酸水溶液(1mmol/L)淬灭反应，二氯甲烷萃取2次，水洗，无水硫酸钠干燥，得无色透明晶体，乙醇重结晶，得N-(2-氰基乙基)-2-氧代噁唑烷-3-磺酰胺(化合物5c)，白色固体2.719g，收率36.52％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.74(t,J＝5.5Hz,1H,NH),4.38(t,J＝7.8Hz,2H,OCH₂),3.96(t,J＝7.8Hz,2H,NCH₂),3.31(q,J＝6.2Hz,2H,CH₂CN),2.69(t,J＝6.4Hz,2H,NHCH₂)；MS(ESI)m/z:218.25(M-H⁺)。

合成路线2步骤(f)

向3-(2-氟-3-氨基苄基)-7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物28a)(1.21mmol，0.45g)的15mL乙腈溶液中滴加三乙胺(6.05mmol，0.83mL)和N-甲基-2-氧代噁唑烷-3-磺酰胺(化合物5c)(3.87mmol，0.848g)，80℃加热回流24h。加入乙酸乙酯稀释，盐酸水溶液(1mmol/L)洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(梯度洗脱：二氯甲烷，二氯甲烷/甲醇＝200/1，二氯甲烷/甲醇＝100/1)(v/v)，二氯甲烷打浆，过滤得7-(N,N-二甲氨基甲酰氧基)-3-(2-氟-3-(N-(2-氰基乙基))氨磺酰胺基苄基)-1,3-苯并噁嗪-2,4(3H)-二酮(化合物30)，白色固体0.292g，收率49.5％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.56(s,1H,PhNH),8.01(d,J＝8.6Hz,1H,Ar),7.81(t,J＝5.8Hz,1H,NHCH₂),7.34-7.38(m,2H,Ar),7.25(dd,J＝8.6,1.3Hz,1H,Ar),7.18(t,J＝7.0Hz,1H,Ar),7.08(t,J＝7.9Hz,1H,Ar),5.10(s,2H,CH₂Ph),3.17(q,J＝6.3Hz,2H,NHCH₂),3.07(s,3H,CH₃),2.95(s,3H,CH₃),2.66(t,J＝6.5Hz,2H,CH₂CN)；HRMS(ESI)m/z:506.11402(M+H⁺),528.09597(M+Na⁺),544.06991(M+K⁺)。

实施例22-23、25-58的化合物31、32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70，合成方法同化合物29、30、或33，结果见表2：

表2 本发明实施例22-23,25-58

实施例59、本发明化合物对非磷酸化MEK1的抑制作用

分子水平实验采用均相时间分辨荧光(HTRF)方法，实验共分为两步，分别是激酶反应步骤和检测反应步骤，激酶反应步骤是BRAF磷酸化MEK1的步骤，加入由激酶反应缓冲液50mM pH＝7.0HEPES buffer，10mM MgCl2，1mM DTT，0.5mM Orthovanadate，0.01％BSA稀释的化合物，0.27ng/μl active BRAF(09-122)(Carna)，30nM inactive MEK1GST tagged-(07-141-10)(Carna)，100μM ATP，室温反应2小时；第二步是检测反应步骤，加入Cisbio公司抗体MAb Anti-phospho MEK1/2-K(61P17KAE)和MAb Anti GST-XL665(61GSTXLA)，反应3小时后采用酶标仪FlexStation 3(Molecular Devices)检测信号，使用作图软件GraphPadPrism 5对数据进行处理。实验重复2次。以已知MEK抑制剂PD0325901作为阳性对照。部分化合物测试结果如下表3所示。

表3 本发明化合物对非磷酸化MEK1的抑制活性

实施例60、本发明化合物对横纹肌肉瘤细胞(RD细胞)的毒性评价

实验过程分为四步：(1)制备细胞悬液并混匀，于96孔板中加入100μL/孔，将接种好的细胞培养板放入培养箱中培养；(2)待每孔中的细胞密度长至60-70％时，加入不同浓度梯度的药物(pH 6.0 10％FBS培养基)，每个浓度的药物3个复孔，每孔100μL，5％CO₂、37℃孵育24小时；(3)吸走每孔中的培养基，加入100μL不含血清的DMEM培养基，每孔加入20μLMTT溶液(5mg/ml)，继续培养2h；(4)将培养液全部吸走，每孔加入150μL DMSO，振荡10分钟，酶标仪检测490nm下的吸光度值(OD值)。

采用改良寇式法计算CC₅₀：lgCC₅₀＝Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)

式中：

Xm：lg(最大剂量)；I：lg(最大剂量/相临剂量)；P：阳性反应率之和；Pm：最大阳性反应率；Pn：最小阳性反应率。

代表性化合物31和33的细胞毒性结果如下表4所示，CC₅₀曲线图见说明书附图1，因最大浓度(409.6μM)刚刚达到约50％的细胞死亡，说明两个化合物物的CC₅₀值≥400μM。

表4 本发明代表化合物对RD细胞的毒性结果

化合物编号	CC<sub>50</sub>/μM
		31	≥400
33	>400

结论：两个化合物的CC₅₀值均在400μM以上，说明化合物安全性较高。

实施例61、本发明化合物的抗病毒(EV71)活性评价

在测定了本发明化合物对RD细胞的毒性后，本发明人选择低于CC₅₀值的药物浓度梯度，检测本发明化合物的抗病毒效果。使用不加病毒、正常生长的细胞作为孔板对照(Mock)；使用加入病毒、不含药物的细胞作为阴性对照；记录每孔的细胞病变结果，根据Reed-Muench两氏法计算药物抑制病毒的EC₅₀值。

操作过程分两步：(1)制备细胞悬液并混匀，于96孔板中加入100μL/孔，将接种好的细胞培养板放入培养箱中培养；(2)待每孔中的细胞密度长至80-90％时，吸走原培养液，加入含病毒(3MOI)的不同浓度梯度的药物(pH 6.0 2％FBS培养基)，共9个梯度(0.195-50μM)，8个复孔，每孔100μL，5％CO₂、37℃孵育至阴性对照孔达到+++及以上病变程度后，记录病变效果，见表5。

lgEC₅₀＝距离比例×稀释度对数之间的差+高于50％病变率的稀释度的对数

式中

距离比例＝(高于50％病变率的百分数-50％)/(高于50％病变率的百分数-低于50％病变率的百分数)

表5 化合物31及33抑制病毒感染的EC₅₀结果

化合物编号	EC<sub>50</sub>/μM	EC<sub>50</sub>/μM	EC<sub>50</sub>平均值/μM	SD/μM
					31	0.96	1.08	1.02	0.085
33	3.39	4.44	3.92	0.742

上述结果表明，在100μL溶液中，两个药物能在微摩尔浓度下抑制50％病毒的复制，具有较大的安全治疗范围(CC₅₀/EC₅₀均大于100)。

实施例62、本发明化合物对细胞内ERK通路抑制效果评价

上述实验已经验证化合物31和33能够有效地抑制病毒的复制。本实验使用化合物31和33预处理细胞1h后，向细胞中加入3MOI的肠道病毒71型(EV71)，检测化合物31和33对ERK通路和病毒复制的影响。具体步骤如下：将横纹肌肉瘤细胞(RD)配制成细胞悬浮液，按2-3×10⁵个细胞/孔的密度接种于6孔板上，待单层细胞覆盖率达到80-90％的密度时，更换为含有不同浓度(6.25-25μM)化合物31和33的2％FBS培养基(pH 6.0)预处理1h，加入3MOI的EV71病毒溶液，待病毒感染24h后于倒置显微镜(OLYMPUS)观察细胞病变情况(参见图2)，收集细胞并裂解获取总蛋白，使用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白含量，使用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ERK通路的活化情况及病毒蛋白(VP1)的表达水平。

图2分别列出了阴性对照组(MOCK)、EV71对照组、化合物31(25μM)、化合物33(25μM)、对照药PD0325901(10μM；PD0325901使用的浓度比化合物31和33小，是因为PD0325901在酶水平的抑制活性较31和33好10倍，因此在细胞水平检测时，PD0325901的浓度选择比31和33小)及对照药U0126(30μM)与EV71共同作用实验组的细胞形态图。阴性对照组(MOCK)细胞生长状态良好；EV71对照组出现了明显的细胞死亡现象，细胞间隙变大，细胞变圆，说明EV71感染细胞导致细胞发生严重的病变效应；其余四个化合物可以明显组织EV71诱导的细胞病变效应，减少细胞死亡，从结果来看，PD0325901和U0126处理组的细胞发生了一定程度的病变，而化合物31和33处理组细胞病变效应很小。在阻止EV71诱导的细胞病变效应方面，本发明化合物31和33具有较对照药物更好的活性。

蛋白免疫印迹实验的结果见图3，其中，EV71VP1是EV71的结构蛋白，通过检测该蛋白的表达水平间接衡量化合物对病毒复制的抑制效果；p-MEK1/2是磷酸化的MEK1/2蛋白，t-MEK1/2是总MEK1/2蛋白，通过比较两者的表达水平，来衡量化合物抑制p-MEK1/2表达的程度；p-ERK1/2是磷酸化ERK1/2蛋白，t-ERK1/2是总ERK1/2蛋白，通过比较两者的表达水平，来衡量化合物对p-ERK1/2表达的程度及对该通路的抑制效果；β-actin蛋白作为整个实验的内标，12个孔的表达量基本一致，用以说明该实验不同组使用相同浓度的蛋白，从而真实地反应上述几种蛋白的表达效果及药物作用效果。

从实验结果可以看出，在6.25μM的化合物31和33可以强烈地抑制p-MEK1/2的表达，而t-MEK1/2与对照组相比则不变，说明化合物31和化合物33阻止了非磷酸化MEK转化为t-MEK1/2，而PD0325901和U0126的p-MEK1/2水平则较MOCK组更高，这与文献报道了一些抑制剂会诱导ERK依赖的反馈抑制现象相符；四个化合物均强烈抑制了p-ERK1/2的表达，表明四个化合物都可以阻断ERK1/2通路。

具体地，PD0325901和U0126除了对非磷酸化的MEK1/2有抑制作用外，对p-MEK1/2也有一定的抑制活性。虽然PD0325901和U0126抑制了非磷酸化MEK1/2，但细胞内存在的负反馈作用还是导致了p-MEK1/2的积累，正如图3中PD0325901和U0126对应处p-MEK1/2蛋白表达量较MOCK组高很多，但与化合物31和化合物33不同的是，PD0325901和U0126依然可以与p-MEK1/2蛋白结合(但不会减少p-MEK1/2的表达量)而抑制p-MEK1/2对其下游靶标ERK1/2的磷酸化，因此正如图3所示，PD0325901和U0126处对应的p-ERK1/2蛋白的表达仍然可以被抑制，因此依然可以阻断该通路。

与阴性对照组(MOCK)相比，EV71处理组的p-ERK1/2水平较高，这也与文献报道的EV71感染可以导致RD细胞内ERK1/2异常活化相符；对于病毒结构蛋白VP1，可以看到化合物31和33在25μM浓度下，强烈抑制了VP1的表达，且这两个化合物均表现出了剂量依赖的抑制效果，PD0325901也表现出了轻微的剂量依赖抑制效果，虽然PD0325901的活性较化合物31和33好，但其抑制病毒复制的效果不如化合物31和33，U0126的VP1表达量与EV71处理组相当，没有表现出抑制病毒复制的效果。

结论：以化合物31和33为代表的1,3-苯并噁嗪-2,4-二酮类化合物能够明显抑制病毒引起的ERK通路的活化(参见图3)，与阳性药PD0325901和U0126不同，化合物31和33不仅可以抑制p-MEK1/2的表达，同时也能有效地缓解ERK依赖的反馈抑制导致的p-MEK1/2表达量增高。总之，相比阳性药U0126和PD0325901，化合物31和33有更好的抗病毒效果，具有作为更安全抗病毒药物的潜力。

实施例63、本发明化合物对肿瘤细胞的抑制活性评价

采用

发光法检测细胞活力，实验过程分为以下几步：(1)使用细胞培养基配制1μM ATP溶液，进行一系列梯度稀释(稀释倍数为10)，于96孔板中加入100μL/孔，加入CellTiter Glo试剂(100μL/孔)，将微孔板放在振荡器上温和振荡混匀2分钟，室温孵育10分钟，检测并记录结果，绘制ATP标准曲线；(2)制备细胞悬液并混匀计数，于96黑孔板中加入100μL/孔，细胞密度为24个/孔，空白孔中加入不含细胞的培养基，实验孔加入待测化合物溶液(浓度为20μM)，室温孵育30分钟，37℃孵箱培养72h；(3)加入CellTiter Glo试剂(100μL/孔)诱导细胞裂解，将微孔板放在振荡器上温和振荡混匀2分钟，室温孵育10分钟，检测并记录结果，计算细胞生存率。表6部分化合物对8种不同细胞系的抑制活性结果(20μM)

注：PC3M1E8为人前列腺癌细胞高转移亚系,Hela为人宫颈癌细胞系，HEK293为人胚肾细胞系，A375为人黑色素瘤细胞系。

结论：5个化合物(9、30、31、32及33)对A375细胞系具有一定的抑制作用；2个化合物(10和58)对PC3M1E8细胞系具有一定的抑制作用；1个化合物(40)对Hela细胞系具有一定的抑制作用；这些化合物对HEK293细胞没有超过50％的抑制，证明对正常细胞毒性较小。本实验未调整实验体系的pH。

以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims (11)

1.一种苯并噁嗪类化合物，结构如式(I)所示，或其药学上可接受的盐：

其中，R₁为未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷烃基、S(O)₂R₆、C(O)R₆、C(O)NR₇R₈或S(O)₂NR₇R₈；

R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地为氢或卤素；

R₆为未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷烃基或芳烃基；这里，所述芳烃基为苯基或萘基；

R₇和R₈各自独立地为氢或C1-C6烷基；

A为氢或下式：

这里，Y为-NH-；

L为-S(O)₂-或-CO-；

Z为-NH-或-CH₂-；

R₉为氢、未取代的C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C6环烷烃基、芳烃基或杂芳基；这里，所述取代的C1-C6烷基是指在该烷基碳链的任选位置上被任选一个或多个氰基、卤素、羟基或苯基所取代；所述芳烃基为苯基或萘基；所述杂芳基选自呋喃基、咪唑基、吲哚基、噁二唑基、噁嗪基、噁唑基、异噁唑基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二嗪基、噻二唑基、噻三唑基、噻唑基、异噻唑基、噻吩基、三嗪基、或三唑基。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁为未取代的C1-C6烷基、S(O)₂R₆、C(O)R₆、C(O)NR₇R₈或S(O)₂NR₇R₈；

R₂和R₄都是氢；

R₆为未取代的C1-C6烷基或芳烃基；这里，所述芳烃基为苯基或萘基。

3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁为未取代的C1-C6烷基、S(O)₂R₆、C(O)R₆、C(O)NR₇R₈或S(O)₂NR₇R₈；

R₂、R₄和R₅都是氢；R₃为卤素。

4.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁为甲基、乙基、正丙基、正丁基、S(O)₂R₆、C(O)R₆、C(O)NR₇R₈或S(O)₂NR₇R₈；

这里，R₆为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；

R₇和R₈各自独立地为氢、甲基或乙基。

5.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，式(I)化合物为式(III)化合物：

其中，式(III)中R₁、R₃、R₄、R₅、Y、L、Z和R₉的定义如权利要求1中所述式(I)化合物所描述。

6.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，式(I)化合物为式(IV)化合物：

其中，式(IV)中R₁、R₃、Y、L、Z和R₉的定义如权利要求1中所述式(I)化合物所描述。

7.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，选自下列化合物中一种：

以及结构如式(III)的化合物：

R₄和R₅都为氢，Y为-NH-，而R₁、R₃、L、Z和R₉的定义如下：

8.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，当式(I)化合物中A为氢时，所述制备方法包括如下步骤：

(1)式(V)所示化合物与卤代物R₁X在碱性条件下反应，得到式(VI)所示化合物；

(2)式(VI)所示化合物与式(VII)所示化合物反应，得到式(I)所示化合物；

这里，卤代物R₁X、所述式(V)、式(VI)及式(VII)中涉及的R₁、R₂、R₃、R₄和R₅的定义如权利要求1中式(I)化合物所描述；X为氯、溴或碘；

当式(I)化合物中A为-Y-L-Z-R₉时，所述制备方法包括如下步骤：

(1)式(V)所示化合物与卤代物R₁X在碱性条件下反应，得到式(VI)所示化合物；

(2)式(VI)所示化合物与式(VIII)所示化合物反应，得到式(IX)所示化合物；

(3)式(IX)所示化合物进行还原反应，得到式(X)所示化合物；

(4)式(X)所示化合物与式(XI)化合物反应，得到式(I)所示化合物；

这里，卤代物R₁X、式(V)、式(VI)、式(VIII)、式(IX)、式(X)和式(XI)中涉及的R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₉、Y、L和Z的定义如权利要求1中式(I)化合物所描述；X为氯、溴或碘；Q为氯、溴、碘或

9.一种包含权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上接受的盐的药物组合物。

10.权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上接受的盐在制备MEK抑制剂药物中的应用。

11.权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上接受的盐在制备抗肿瘤或抗病毒药物中的应用。

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