CN107156108A - 一种外周血干细胞保存液及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种外周血干细胞保存液，按照重量份数计包括以下组分：人血白蛋白3‑8份、海藻糖2‑4份、羟乙基淀粉1‑3份、营养素5‑15份、右旋糖酐1‑3份、二甲基亚砜1‑3份和适量水。利用本发明中的保存液来保存外周血干细胞，可使干细胞保持较好的稳定性，而且干细胞的存活率大大提高，均在98％以上。

Description

一种外周血干细胞保存液及制备方法

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种外周血干细胞保存液及其制备方法。

背景技术

干细胞治疗是将具有不断自我繁殖能力和多向化潜能的干细胞在体外培养后，再将其移植入患者受损或缺损组织中，从而实现对损伤组织的补充和修复。自体外周血造血干细胞移植是指对患有某些恶性血液病的患者进行化疗加粒细胞集落刺激因子动员使患者自身外周血干细胞达到一定值，再经过细胞分离机的采集，把采集出来的造血干细胞冷冻保存，然后对患者进行放、化疗处理，将冷冻保存的造血干细胞经复苏后迅速输给自己的移植方法，该方法具有采集简便，患者痛苦少，移植后造血和免疫功能重建块，并发症少等优点，目前已逐渐用于临床。目前外周血干细胞采集后，需要加入保存液进行冷冻保存，现有外周血干细胞保存液，营养成分单一，配比不当，导致外周血干细胞的细胞存活率低，细胞稳定性差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种配比适当，营养成分均衡，能提高细胞存活率，且能保持细胞稳定性的外周血干细胞保存液。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种外周血干细胞保存液，按照重量份数计包括以下组分：人血白蛋白3-8份、海藻糖2-4份、羟乙基淀粉1-3份、营养素5-15份、右旋糖酐1-3份、二甲基亚砜1-3份和适量水。

作为一种改进的技术方案，所述外周血干细胞保存液，按照重量份数计包括以下组分：白蛋白5-8份、海藻糖3-4份、羟乙基淀粉2-3份、营养素8-15份、右旋糖苷2-3份和二甲基亚砜2-3份和适量水。

作为一种改进的技术方案，所述二甲基亚砜的质量浓度为5％-10％。

作为一种改进的技术方案，所述外周血干细胞保存液，按照重量份数计还包括1-3份0.5-2wt％的透明质酸和1-3份链霉素。

作为一种改进的技术方案，所述营养素由维生素C、B族维生素、必需氨基酸、非必需氨基酸、氯化钠、氯化钾和葡萄糖酸钠按照0.1-0.5:0.1-0.3:0.3-0.7:0.2-0.5:0.3-0.5:0.3-0.7:0.2-0.7的质量比组成。

作为一种改进的技术方案，所述必需氨基酸为异亮氨酸、牛磺酸、精氨酸中任意一种或两种。

作为一种改进的技术方案，所述非必需氨基酸包括丙氨酸和/或酪氨酸。

本发明所要解决的另一个技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种外周血干细胞保存液的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

(1)按照比例依次将营养素、海藻糖和羟乙基淀粉溶于水中，混合均匀，得到的溶液在35-42℃条件下保温，备用；

(2)将步骤(1)中的溶液降温至25-30℃，加入透明质酸，混匀，得到的混合液在25-30℃条件下保温；

(3)向步骤(2)的混合液中加入右旋糖酐和人血白蛋白，混匀后再加入链霉素，混合均匀，过滤，得到过滤液；

(4)向步骤(3)的过滤液中加入质量浓度为5％-10％的二甲基亚砜，混匀，得到外周血干细胞保存液。

采用了上述技术方案后，本发明的有益效果是：

(1)由于营养素中含有维生素C、B族维生素、无机盐、必需氨基酸、非必需氨基酸多种营养组分，可维持细胞基本的生命代谢，平衡细胞的渗透压；二甲基亚砜、透明质酸、羟乙基淀粉、海藻糖、右旋糖苷和人血白蛋白的联合应用可实现对干细胞通透性保护作用，降低细胞冰点，大大降低对干细胞的损害，同时链霉素的加入可防止细胞复苏时滋生细菌，大大提高了干细胞复苏时的存活率，使干细胞最大限度保持细胞活性和稳定性，保存的干细胞其存活率高于97％；

(2)二甲基亚砜的用量少，浓度低，在发挥自身渗透性保护剂功能的同时，还降低了二甲基亚砜的毒性对细胞的危害，大大提高了临床安全性；

(3)保存液各组分明确，方便配置，适用于外周血干细胞的低温保存。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种外周血干细胞保存液，按照重量份数计包括以下组分：人血白蛋3份、海藻糖2份、羟乙基淀粉1份、营养素8份(维生素C、B族维生素、异亮氨酸、丙氨酸、氯化钠、氯化钾和葡萄糖酸钠按照0.2:0.1:0.3:0.2:0.3:0.3:0.2的质量比组成)、右旋糖酐1份、二甲基亚砜1份(质量浓度为5％)和适量水。

实施例2

一种外周血干细胞保存液，按照重量份数计包括以下组分：人血白蛋5份、海藻糖3份、羟乙基淀粉2份、营养素10份(维生素C、B族维生素、牛磺酸、酪氨酸、氯化钠、氯化钾和葡萄糖酸钠按照0.2:0.1:0.4:0.3:0.3:0.3:0.3的质量比组成)、右旋糖酐2份、二甲基亚砜2份(质量浓度为5％)、2份0.5wt％的透明质酸、1份链霉素和适量水。

上述保存液的制备方法：

(1)按照比例依次将营养素、海藻糖和羟乙基淀粉溶于水中，混合均匀，得到的溶液在37℃条件下保温，备用；

(2)将步骤(1)中的溶液降温至26℃，加入透明质酸，混匀，得到的混合液在26℃条件下保温；

(3)向步骤(2)的混合液中加入右旋糖酐和人血白蛋白，混匀后再加入链霉素，混合均匀，过滤，得到过滤液；

(4)向步骤(3)的过滤液中加入质量浓度为5％-10％的二甲基亚砜，混匀，得到外周血干细胞保存液。

实施例3

一种外周血干细胞保存液，按照重量份数计包括以下组分：人血白蛋6.5份、海藻糖3.5份、羟乙基淀粉2.5份、营养素12份(维生素C、B族维生素、牛磺酸和精氨酸1:1的比例、酪氨酸、氯化钠、氯化钾和葡萄糖酸钠按照0.3:0.2:0.5:0.4:0.3:0.4:0.5的质量比组成)、右旋糖酐2.5份、二甲基亚砜2.5份(质量浓度为7％)、2.5份1wt％的透明质酸、2份链霉素和适量水。

实施例4

一种外周血干细胞保存液，按照重量份数计包括以下组分：人血白蛋8份、海藻糖4份、羟乙基淀粉3份、营养素15份(维生素C、B族维生素、牛磺酸和异亮氨酸按照1:1的比例、酪氨酸和丙氨酸按照1:1的比例、氯化钠、氯化钾和葡萄糖酸钠按照0.4:0.3:0.5:0.4:0.5:0.5:0.7的质量比组成)、右旋糖酐3份、二甲基亚砜3份(质量浓度为9％)、3份1.8wt％的透明质酸、3份链霉素和适量水。

对比例1

一种外周血干细胞保存液，与实施例3的唯一区别在于保存液中不含有透明质酸。

对比例2

一种外周血干细胞保存液，与实施例3的唯一区别在于保存液中不含有牛磺酸、精氨酸和酪氨酸。

对比例3

一种外周血干细胞保存液，与实施例3唯一的区别在于保存液中不含有右旋糖酐。

应用例1实施例1-4中的保存液在外周血干细胞保存中的应用

对潍坊市人民医院200名血液科的住院患者进行外周血干细胞的采集，其中男性100名，女性100名，自体外周血干细胞的动员采集使用联合化疗加重组人集落刺激因子，用细胞分选机采集外周血干细胞，将实施例1-4的保存液和对比例1-3的保存液分别用于外周血干细胞的保存，采用台盼兰拒染实验来测定复苏后的活细胞数，结果见表1。

细胞活率＝解冻后活细胞数/冻存前活细胞数×100

表1

实施例	台盼兰拒染率(％)
		实施例1	95.7±0.5
实施例2	97.5±1.5
		实施例3	98.2±0.7
实施例4	97.2±1.3
		对比例1	82.3±0.7
对比例2	78.6±1.5
		对比例3	80.6±1.2

在显微镜下观察细胞的聚集情况，细胞稳定良好，无团聚现象，结果表明采用本发明实施例1-4的保存液与对比例1-3的保存液对比，实施例1-4的保存液来保存外周血干细胞，可使干细胞保持较好的稳定性，而且大大提高了干细胞活细胞数目，细胞存活率均在98％以上。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种外周血干细胞保存液，其特征在于按照重量份数计包括以下组分：人血白蛋白3-8份、海藻糖2-4份、羟乙基淀粉1-3份、营养素5-15份、右旋糖酐1-3份、二甲基亚砜1-3份和适量水。

2.根据权利要求1所述的一种外周血干细胞保存液，其特征在于:所述外周血干细胞保存液，按照重量份数计包括以下组分：白蛋白5-8份、海藻糖3-4份、羟乙基淀粉2-3份、营养素8-15份、右旋糖苷2-3份和二甲基亚砜2-3份和适量水。

3.根据权利要求1所述的一种外周血干细胞保存液，其特征在于:所述二甲基亚砜的质量浓度为5％-10％。

4.根据权利要求1所述的一种外周血干细胞保存液，其特征在于:所述外周血干细胞保存液，按照重量份数计还包括1-3份0.5-2wt％的透明质酸和1-3份链霉素。

5.根据权利要求1所述的一种外周血干细胞保存液，其特征在于:所述营养素由维生素C、B族维生素、必需氨基酸、非必需氨基酸、氯化钠、氯化钾和葡萄糖酸钠按照0.1-0.5:0.1-0.3:0.3-0.7:0.2-0.5:0.3-0.5:0.3-0.7:0.2--0.7的质量比组成。

6.根据权利要求5所述的一种外周血干细胞保存液，其特征在于:所述必需氨基酸为异亮氨酸、牛磺酸、精氨酸中任意一种或两种。

7.根据权利要求6所述的一种外周血干细胞保存液，其特征在于:所述非必需氨基酸包括丙氨酸和/或酪氨酸。

8.一种如权利要求1-7中任一权利要求所述的一种外周血干细胞保存液的制备方法，其特征在于所述制备方法包括下列步骤：

(1)按照比例依次将营养素、海藻糖和羟乙基淀粉溶于水中，混合均匀，得到的溶液在35-42℃条件下保温，备用；

(2)将步骤(1)中的溶液降温至25-30℃，加入透明质酸，混匀，得到的混合液在25-30℃条件下保温；

(3)向步骤(2)的混合液中加入右旋糖酐和人血白蛋白，混匀后再加入链霉素，混合均匀，过滤，得到过滤液；

(4)向步骤(3)的过滤液中加入质量浓度为5％-10％的二甲基亚砜，混匀，得到外周血干细胞保存液。